制备液相色谱的步骤你可知道？

制备液相色谱的步骤你可知道？

液相色谱(Liquid chromatography，LC)是一种常见的分析化学技术，广泛应用于化学、药物、环境和食品等领域。

液相色谱的原理是通过溶液或悬浮液在固定填料(固定相)上流动，样品中不同成分在填料上的相互作用力不同，从而分离出目标化合物。

制备液相色谱的步骤如下：

1.选择填料：选择合适的填料对分离目标化合物至关重要。填料可以是具有特定的化学性质和物理性质的固体材料，如硅胶、膜结构材料或涂膜材料。

2.准备流动相：流动相是指通过填料的溶液或悬浮液。流动相的种类和组成根据目标化合物的性质和分离要求来确定。常见的流动相包括水、有机溶剂和缓冲液等。

3.建立色谱条件：根据目标化合物的性质，确定色谱的参数，如流速、温度、pH值和检测波长等。这些参数将直接影响到分离和检测的结果。

4.填充填料：将选定的填料装入色谱柱中。填充填料时，需要保持填料的均匀和紧密，以确保样品能够均匀地通过填料。

5.样品处理：样品处理是为了使样品能够适应液相色谱分离的要求。这可能包括样品溶解、稀释、过滤和预处理等步骤。

6.开始分离：将处理好的样品注入色谱柱中，并以设定的条件进行分离。在分离过程中，样品中的不同成分将根据其与填料的相互作用力不同而被分离出来。

7.结果分析：通过检测器检测分离的样品成分，并将信号传输到数据处理系统进行数据分析和解释。

需要注意的是，制备液相色谱需要严格控制各个步骤的操作条件和实验参数。同时，也需要根据实际实验室的设备和需求来选择合适的液相色谱系统和柱子。

总结起来，制备液相色谱的过程包括选择合适的填料、准备流动相、建立色谱条件、填充填料、样品处理、开始分离和结果分析等步骤。这些步骤的合理操作能够确保准确而有效地分离和分析目标化合物。

液相色谱操作步骤

桌面密码：jf 流动相都要经过0.22um的滤膜过滤并超声脱气处理。B瓶装有机相，D瓶装水相装上流动相，从上到下顺序依次打开开关，最底下的检测器不能打开。 打开电脑主机，点击软件online。 打开排气阀，点击PUMP图标，点击Set PUMP选项，流速从1，2到3，单击OK。 单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。 单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭Purge valve。 单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。 12、单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。 第一步：设置参, Set up pump,流速：0.8ml/min，流动相的比例。在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more>>”键, ,选中”Same as left”---使柱温箱的温度左右一致。保留时间为30-45min。点击屏幕上的on，点击瓶子图标-solvent bottle-filling-A和C是空瓶子，参数都是0.3和1；B和D第一列按瓶子中实际量填写，后一列总容量都是1.→点击OK。 波长：Instrument→set up→DAD signals→选项C:210 8 360 100 第二步：排气泡 松开液相色谱仪上的黑色阀门，先排水相的气泡，D设置为100%，B设置为0%，流速从1,2,3ml/min依次增加（切换速率要快），注意流动相管子中的气泡，驱逐气泡。待气泡排出之后，将D切换到B，流速不变，排除气泡。流速设置为降到0，然后关闭黑色阀门，B改为95，D改为5，流速从0，0.2,0.4,0.6增加0.8，压强上下浮动2bar时，改变流速。 第三步：，走空白再进样 RUN SCAN→SAMPLE INFO→填好后（日期，数据所在文件夹，样品名。）—RUN METHPD抬起阀门，进样，关闭阀门。 第四步：冲柱子 优先选择90%乙腈和10%的超纯水冲柱子，没有水的话可选择100%乙腈冲柱子，最好不要用纯乙腈冲柱子。

高效液相色谱HPLC操作步骤及问题集锦

等浓度洗脱： 开机步骤： 1.配有机相，体积≥200ml（空瓶子先装满肥皂水超声10min，再用自来水冲洗10次，蒸馏水洗4次），砂滤（用有机膜，光面向上，瓶中液体快到瓶口时放气防止倒吸），室温超声10min。开电源总开关，开计算机，开柱温箱开关，开SPD-15C开关，LC-15C开关。 2.开purge阀，把A管从纯甲醇中取出，靠壁几秒后放入有机相中，purge，绿灯闪后关purge 阀，把废液瓶放地上。 3.打开软件，系统设置：确认添加LC-15C(A)，确认柱温箱为（室温较低35℃，室温较高30℃） 简单设置：LC时间：60min 波长：215nm 模式：等浓度洗脱 总流速：0.6ml/min——下载（有机相较少时改流速为0.5ml/min）点泵开关走基线60min，拔六通阀处塞子和橡胶帽。 （若压力线与基线相差过大，则点击显示设置，修改强度范围，再点击检测器零点，快走平时调回原来的强度范围） 4.基线走完，不关泵开关，点击单次运行，改文件名和存储位置。 5.纯甲醇洗针三次，每次＞60ul；取待测样品，用0.22um滤膜过滤至2ml EP管中，每针进样量≥40ul。若管中出现气泡，则拉活塞使气泡变大，用纸捏住针头，推活塞把气泡打入纸中再进样。 6.进样时，先将针插入六通阀中快而匀速的将活塞推到底，再掰下阀，则仪器自动开始走线。关机步骤： 方法一： 1.测样结束，点击停止，关泵开关，待压力降为0，开purge阀，将A管从有机相中取出，靠壁几秒后放回纯甲醇中，purge，绿灯闪后关purge阀。 2.简单设置：总流速：1.0ml/min——下载 点泵开关，洗脱柱子30min 3.在开始洗柱子时，用纯甲醇洗针三次，每次＞60ul；用针吸取纯甲醇洗六通阀，每次≥60ul，将针插入六通阀，推进活塞后掰下阀，间隔0.5min，把阀掰上，再洗下一针，重复洗三次，等待洗脱柱子完成。（纯甲醇当天用不完的应丢弃） 4.黑线走平，即表明洗脱柱子结束，关泵开关，收针，塞回塞子和橡胶帽，关软件，关LC-15C

液相色谱仪样品制备指南

液相色谱仪样品制备指南 液相色谱仪样品制备是进行溶液分析的重要环节，它直接影响到分析结果的准确性和可靠性。为了帮助读者正确制备液相色谱仪样品，本文将介绍液相色谱仪样品制备的步骤和注意事项。 一、准备工作 液相色谱仪样品制备之前，首先需要准备好以下材料和设备： 1. 需要分析的样品：确保样品足够新鲜，并按照实验目的选择适当的提取方法。 2. 试剂和溶剂：根据样品的特性和分析要求，选择合适的试剂和溶剂。同时，确保试剂和溶剂的纯度达到操作要求。 3. 仪器设备：液相色谱仪、样品瓶、注射器、移液器等。 二、样品溶解和提取 1. 准确称取样品：按照实验方案中的要求，准确称取所需样品。注意避免粉末溶解时产生悬浮物或沉淀。 2. 样品准备溶液：将准确称取的样品加入适量的溶剂中，并进行适当的振荡或超声处理，使样品彻底溶解。 3. 样品提取：对于部分样品，特定组分需提取后才能进行液相色谱仪分析。在提取过程中，注意选择合适的提取剂和条件，并进行适当的摇床或振荡。

三、样品预处理和处理 1. 过滤处理：为了保证样品中无颗粒和杂质的存在，可以采用滤膜或滤器进行过滤处理。注意选择合适的滤膜孔径和材料。 2. 溶液稀释：对于样品浓度过高的情况，需要进行稀释处理，以便使浓度处于液相色谱仪分析的线性范围内。 3. 样品pH调节：某些分析要求在特定的pH值下进行。在液相色谱仪样品制备的过程中，根据实验要求使用酸或碱调节样品的pH值。 四、样品处理注意事项 1. 杂质污染：避免使用污染过的玻璃容器；避免与金属接触，以免引入金属离子。 2. 样品保存：如果无法即时进行液相色谱仪分析，应将样品储存于低温冰箱或适当的条件下，以防止样品的稳定性和易变性。 3. 防止样品氧化：某些样品在空气中容易被氧化，影响分析结果。在处理过程中应尽量避免与空气接触，可以使用惰性气体进行保护。 四、结论 液相色谱仪样品制备是确保分析结果准确可靠的关键环节。通过合理的样品预处理和处理，能有效减少分析误差和干扰源。在制备过程中需要严格按照操作流程进行，确保样品的纯净性和稳定性，以提高液相色谱仪分析的准确性和灵敏度。

液相色谱仪操作及原理

液相色谱仪操作及原理 液相色谱仪（Liquid Chromatography，LC）是一种常用的分析技术，用于分离和测定混合物中的化合物。它的操作原理基于样品在流经填充物时与填充物相互作用，并以不同的速度移动。以下是液相色谱仪的操作步骤及其原理： 操作步骤： 1. 准备样品：将待测样品准备成溶液，并以适当的方法预处理，如稀释、萃取等。 2. 准备填充物：选择合适的填充物，并将其装填进色谱柱中。填充物的选择根据分离物质的性质和需求。 3. 装载样品：将样品溶液使用注射器加载到色谱柱中，通常通过自动进样器进行。 4. 运行液相色谱仪：启动液相色谱仪，使流动相从色谱柱中流经。流动相可以是不同溶剂或缓冲溶液的混合物。流动相的选择也取决于待测物质的性质。 5. 检测和记录数据：样品分离过程中，通过检测器（如紫外可见光灯、荧光检测器、质量分析仪等）检测分离出的各组分，记录并分析检测结果。 操作原理： 液相色谱仪的操作原理基于样品与填充物的相互作用以及溶剂的选择。填充物通常是一种多孔性材料，具有大量的表面积，

可与样品中的分离物质发生化学或物理相互作用。 在运行液相色谱仪时，样品中的化合物在与填充物相互作用的同时，也与流动相相互作用。由于不同分离物质与填充物和流动相之间的相互作用不同，它们在色谱柱中的停留时间也不同。较强的相互作用会导致较长的停留时间，而较弱的相互作用会导致较短的停留时间。 通过控制流动相的组成和流动速度，可以使待测物质在色谱柱中以不同的速率移动，从而实现样品中各成分的分离。检测器可以检测到每个组分的浓度，进而得到分离出的组分的浓度和峰面积等信息。根据这些信息，可以定量分析样品中各组分的含量或确定未知化合物的结构。 需要注意的是，在实际操作中，操作条件和仪器设置可能会因分析需要而有所不同。因此，在使用液相色谱仪进行操作时，应根据具体实验要求和仪器特性进行适当调整和操作。

液相色谱操作步骤

液相色谱操作步骤 液相色谱是一种常用的色谱分析技术，广泛应用于化学、生物、医药 等领域。下面是液相色谱的基本操作步骤，以1200字以上进行详细介绍。 液相色谱（HPLC）是一种高效液相色谱，它是利用液相在固定相上运 动来进行分离和分析化合物的方法。它有很多种工作方式，例如正向相色谱、反相色谱、离子交换色谱等。在进行液相色谱分析时，通常需要进行 以下几个步骤：准备工作、系统适应、样品处理、进样、柱温控制、梯度 洗脱和数据处理。 第一步：准备工作 在进行液相色谱分析前，需要进行一系列准备工作。首先，要准备好 所需要的试剂和溶剂，包括固相柱和流动相的配制。其次，检查色谱仪是 否正常运行，确保所有的设备和仪器都处于正常工作状态。然后，准备样品，将样品溶解在适当的溶剂中，使其可以被液相进行分离。最后，准备 标准品，以便用于定量分析。 第二步：系统适应 在进行液相色谱分析之前，需要进行系统适应。这一步骤的目的是让 色谱系统在流动相的运行下稳定工作，使得峰形和背景噪声可以达到稳定 状态。通常，需要运行一段时间的流动相，一般为30分钟至1小时，以 便使系统内部压力和流动速度达到稳定状态。 第三步：样品处理

将样品进行预处理是为了减小干扰物对分析结果的影响，同时也可以提高柱的寿命。样品处理的具体方法会因为不同的实验目的而有所不同。常见的样品处理方法包括：过滤、萃取、稀释、酶解等。 第四步：进样 进样是将样品注射到色谱柱中的过程。进样的方法包括手工进样、自动进样等。在手工进样中，需要用微量注射器将样品吸取一定体积后注射到进样口中。而在自动进样中，样品可以通过自动进样器进行进样。进样的体积应根据实际需要进行调整，以保证分析结果的准确性。 第五步：柱温控制 在液相色谱中，柱温对分离分析结果有很大的影响。柱温可以影响色谱分离柱的性能，包括分离度、峰形和保留时间等。一般来说，保持柱温恒定可以提高色谱的重现性。柱温可以通过加热器和温控系统进行控制。 第六步：梯度洗脱 梯度洗脱是液相色谱中常用的一种方法，用于分离复杂样品。梯度洗脱是指在流动相中逐渐改变组成，以实现不同组分之间的分离。梯度洗脱可以通过改变流动相的组成或改变流速来实现。具体的梯度洗脱程序需要根据样品的性质进行优化。 第七步：数据处理 在液相色谱分析完成后，需要对得到的数据进行处理。数据处理包括对峰的面积进行积分、对峰进行定量计算等。常见的数据处理软件有Chromatography Data System (CDS)等。数据处理的结果可以用于定量分析和结果的判断。

高效液相色谱仪的操作步骤

高效液相色谱仪的操作步骤 高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术。它利用液体流动相和固定相之间的相 互作用，将样品中的混合物分离出来，并通过检测器进行定量分析。 本文将介绍高效液相色谱仪的具体操作步骤。 1. 准备工作 在进行高效液相色谱仪的操作之前，首先需要进行一些准备工作。 检查色谱柱是否安装正确，确保色谱柱是干净的，并检查流动相的配 制是否准确。 2. 样品制备 根据需要分析的物质，准备好待测样品。样品制备可以包括溶解样品、过滤样品等步骤，以确保样品的纯净度和稳定性。 3. 仪器开机 将高效液相色谱仪接通电源，打开仪器的电源开关。等待仪器初始化，并确保仪器各个部分正常工作。 4. 设置参数 在仪器上设置分析所需的参数。包括选择适当的检测器类型和检测 波长、设置流量、温度等。 5. 启动系统

启动高效液相色谱仪系统，等待系统稳定。通常需要一段时间使得 流动相在管路中充分平衡，并确保流量稳定。 6. 校正 进行色谱柱的校正。校正过程包括流量校正、波长校正等。通过校 正可以保证仪器输出结果的准确性和可靠性。 7. 注射样品 将样品通过注射器引入色谱柱中，控制样品的注射量，通常在微升 至毫升的量级。确保样品的注射量稳定和准确。 8. 分离分析 开始运行高效液相色谱仪系统，进行样品的分离与分析。在此期间，流动相通过色谱柱，将样品中的化合物根据它们与固定相之间的相互 作用进行分离。 9. 监测结果 通过检测器对分离后的化合物进行监测。根据检测器的信号，可以 得到每个化合物的峰面积、保留时间等数据。 10. 数据处理 将监测到的信号输入到数据处理软件中，进行结果的计算和分析。 通常可以得到各个化合物的峰高、峰面积等数据，从而实现对样品的 定量分析。 11. 关机

液相色谱操作步骤

液相色谱操作步骤 1.样品制备：将待测化合物溶解在合适的溶剂中，通常是一种与流动 相相溶的溶剂。如果样品是固体，可以首先用溶剂溶解，然后使用过滤器 去除悬浊物。 2.准备流动相：根据需要选择合适的流动相，并将其制备好。流动相 通常是由溶剂和缓冲剂或某种添加剂组成的混合物。流动相的准备应符合 色谱方法的要求。 3.色谱柱选择：根据待测化合物的性质选择合适的色谱柱。色谱柱的 选择涉及到固定相的类型、大小和形状等因素。常见的色谱柱类型包括 RP（反相）、NP（正相）、离子交换柱等。 4.色谱柱装载：将准备好的色谱柱连接到色谱仪，并使用适当的固定 相条件进行装填。确保色谱柱的装填均匀，并且柱床紧密、无气泡。 5.系统平衡：开启色谱仪，让流动相在色谱柱中流动，直至达到稳定 状态。这个过程被称为系统平衡，通常需要几十分钟到几小时的时间。 6.样品注射：将制备好的样品以适当的体积注射到色谱仪中。样品注 射器通常用来控制样品的体积和速度。 7.梯度洗脱条件：根据色谱方法的要求，逐渐改变流动相的组成和浓度，以实现对化合物的分离和纯化。这个过程称为洗脱。梯度洗脱条件的 选择需根据化合物的极性和流动相的性质来确定。 8. 检测器检测：在某种波长下使用检测器对流出的化合物进行检测。常见的检测器有紫外-可见（UV-Vis）检测器、荧光检测器、电化学检测 器等。

9.数据处理和结果分析：根据检测器输出的信号，使用数据处理软件对色谱图形进行处理和分析。可以根据峰面积、保留时间和质量浓度等参数确定化合物的含量。 10.仪器维护和清洗：使用完毕后，及时对色谱仪进行维护和清洗。具体的清洗步骤应按照仪器和色谱柱的说明进行。 总之，液相色谱是一种复杂的分离和分析技术，操作步骤繁琐，但准确掌握每个步骤的要领可以保证结果准确、重复性好。因此，在进行HPLC实验前，需要充分了解分析样品的特性以及所使用仪器的操作要点和安全注意事项。

液相色谱仪基本操作规程

上海伍丰液相色谱仪基本操作规程 一、操作前的准备 1、流动相的制备用液相色谱专用的试剂配置流动相，水应 为新鲜制备的高纯去离子水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水。凡规定PH值的流动相，应使用精密PH计进行调节。配 制流动相所用的试剂必须使用相应的、0.45um（或0.22um）的滤膜过滤，使用前脱气。应配制足量的流动相备用。 2、样品的配制标准品和样品需用规定的溶剂配制成标准样 品和待测样品。在定量测定时，标准样品和待测样品均应分别配制2份。在待测样品注入液相色谱以前，一般要经过相应的 0.45um（或0.22um）的针式过滤器进行过滤。必要时待测样品 要进行预净化，以免对液相色谱系统产生污染和堵塞，影响色谱分离及其结果。 3、检查上次使用纪录和仪器的状态检查色谱柱是否适用于 本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相是否互溶，流动相的PH值与该色谱柱是否使用，仪器是否完好，仪器的各个开关位置是否处于关断的位置。 二、操作 1、泵操作

现将过滤脱气过的纯有机溶剂置入溶剂瓶中，替换原来保存仪 器的溶剂。 打开泵电源，自检完毕后打开放空阀，按设定键，找到冲洗项，按“↓”或“↑”选择“是”，按两次启动键进行快速冲洗（在 快速冲洗时一定要确保放空阀打开）；。 快速冲洗完毕，关闭放空阀。按“设定”键，找到设定流速项，按“↑”“↓”调节所需的流速值，再按“启动”键确定。 按一次“启动”键，将泵开启； 再按一次“启动/停止”键，将泵关闭。 2、检测器操作 打开检测器电源，等待检测器自检完毕。 按“设定”键，找到“波长”项，按“↑”“↓”调整所需的 波长 找到“灵敏度”项，按“↑”“↓”调整所需的灵敏度。 3、进样器操作 用相应溶剂清洗进样针，然后用所进样品润洗进样针后进行进 样。做样完毕后将进样器用相应溶剂清洗干净。 4、数据处理 将采集的谱图打开，记录下标样与样品的峰面积，套入计算公 式进行计算所测样品的结果。 三、保养

液相色谱质谱操作步骤

液相色谱质谱操作步骤 开机 1.将废气管放入窗外； 2.将氮气罐拧开（氮气总压不能低于2MPa）,氮气时候足够，注意氮气 分压表压力可能在左右； 3.打开电脑，进行自检； 4.打开液相自动进样器，自检后绿灯亮即可完成自检； 5.打开泵电源 6.接着打开质谱，自检3分钟，听见两次声响后自检成功； 7.打开masslynx软件后，抽真空4小时左右，直到真空值为e-5次方， 即可利用； 调谐 1.抽好真空后，准备调谐； 2.成立个人“Project”：在Masslynx 界面点File-Project wizard点yes， 输入名称，选择成立新的Project； 3.进行质谱调谐。在TQ Detector软件中单击API加氮气，然后调源温 度（参考80），去溶剂温度（参考300），点击软件右下角I图标加电压。等到温度升到设定值后，在Fluidics中设定参数，调谐前，FLOW STATE 先选择waste对管路进行清洗（单击purge the Fluidics system）；清洗完毕后，FLOW STATE当选择infusion，在Analyser中设定参数：若是选择单MS则参数为15，15，1，Entrance 50，Collision 2，Exit50，并在软件右边选择母离子扫描，点击start进行调谐，改变cone的电压值，使选择的峰信号达到最高，即达到最优值；若果选择MS-MS扫描，要先打开氩气，参数为13，13，，Entrance

-2，Collision-2，Exit 2，点击start进行调谐，点status infusion出现信号，选择子离子扫描，固定corn的电压值，改变collision，使目标峰达到最高即达到最优值。达到最优值后进行收集，改变DATA 和MASSES参数打开一个色谱图，点小闹钟，在出现的色谱图上点鼠标左键水平向右拖动鼠标，可取得收集母离子或子离子信息。要进行下次收集时先关闭上次收集。保留好调谐方式到个人的Project中； 4.调谐完毕后用溶剂清洗管路，在Fluidics中设定FLOW STATE择waste，点击purge the Fluidics system，设流速放空洗液。洗完后先关电压（右下角圆环），降温，温度下降到设定值后关闭氮气； 方式编辑及测定 1.别离点击inlet method和mass method编液相和质谱的方式。编好后别离将该文件存到Project中；（注意：液相时间应与质谱时间一致） 2.编辑样品序列：先成立个人“project”，在最初的界面instrument中输入样品名，瓶号，进样量，然后别离调出液相方式与质谱方式； 3.在操作平台中打开mass console，在Acquity uplc sysytem当选择control 下拉菜单中start up system选择A（纯有机相），B(纯水相)流动相进行系统清洗（一般清洗4个循环，流速8ml/min大约10分钟）； 4.做样前，一般设定min流速平衡色谱柱及系统，先用建好的液相方式平衡柱子，在点Inlet method，界面当选LC-Load Method ，观察Delta值小于50方可开始测试样品（若利用缓冲盐则应小于10）。选中序列中要进的样，点击start出现start list，（选from—to—）肯定后开始走样。可点击谱图进行观测，点时钟进行不时观测；

液相色谱仪操作步骤

液相色谱仪操作步骤 1. 系统组成： 溶剂输送泵，手动进样阀，检测器，色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机，不间断电源等辅助设备。 2. 准备： 2.1. 准备所需流动相，用合适的0.45um滤膜过滤，超声脱气20min。22 根据待测样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向）和定量环。 23配制样品和标准溶液，用合适的0.45um滤膜过滤。 2.4. 检查仪器各部件的电源线、数据线、地线、和输液管道是否连接正 常。 3. 开机： 3.1. 接通电源，依次打开检测器、输液泵，待检测器自检结束，显示测量 状态时，打开电脑、打印机、电脑显示器等。 3.2. 更换流动相并排气泡 33将管路的不锈钢过滤头放入装有准备好的流动相的储液瓶中 3.4. 逆时针转动泵的排空阀（1/2圈左右），拧松排空阀 3.5. 按输送泵的【purge］键，绿灯指示灯亮，这时泵以5.0ml/min的流 速冲洗，一般冲洗2分钟左右，以管路中没有气泡为止，再按【stop］ 键，重新设定流速值。 4. 参数设定： 4.1. 流速设定：在输送泵显示初始屏幕时，按【flow ］键，用数字键输入 所需的流速（一般是1.0ml/min），按【Enter］键确认。 4.2. 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按【入］键，用数字键输入 所需的波长值，按【Enter］键确认。 4.3. 参数设定完后按【run］键运行。 4.4. 色谱工作站操作：打开在线工作站”---通道1”-- “0K”-数据采 集”---零点校正---查看基线，基线稳定后，关闭查看基线可以进样。 进样后采集---待样品出峰完毕---停止采集---预览---查看结果---打印。 （在离线查看：打开离线工作站”-打开”—双机打开样品-选定谱图 编号—确定”—“NO预览”—查看结果-打印。） 5. 进样： 5.1. 进样前按检测器【A/Z ］键调零，查看基线是不是在0mv,如果偏 差较多，按软件中的【零点校正］即可。 5.2. 用样品清洗注射器，并排除气泡，抽取适量，将手动进样阀杆拨到 【Load］位置，将样品溶液注入进样阀，将进样阀杆拨到【Inject］位 置，完成进样，在线工作站自动采集数据。 6. 分析结束后，系统冲洗： 若分析样品时，流动相系统中含有缓冲盐类物质，需要先用10%甲醇水溶液，1.0ml/min冲洗40分钟后，在更换纯甲醇试剂，1.0ml/min 冲洗40分钟后，按【stop］键停泵，然后关机。若流动相系统中无缓冲 盐类物质，则可直接用纯甲醇试剂冲洗系统， 1.0ml/min冲洗40 分钟后，按【stop］键停泵，然后关机。

液相色谱仪操作步骤

液相色谱仪操作步骤 液相色谱仪是一种分离分析技术，广泛用于各种样品的分离和纯化。液相色谱仪的操作需要注意一些步骤和细节，本文将详细介绍液相色谱仪的操作步骤和注意事项。 1. 准备试样 首先需要准备好待检测的样品，并将样品中的分离物质溶解到相应的溶液中。为了保证分离效果和高灵敏度，需要尽可能去除样品中的杂质和异常物质。 2. 准备移液管和样品注射器 在进行液相色谱分析之前，需要准备好准确可靠的移液管和样品注射器。移液管和样品注射器需要事先洗涤，以避免对后续分离过程的干扰。 3. 准备色谱柱 在安装色谱柱时，需要用气动压缩机清洗色谱柱和色谱柱的连接管道。确保色谱柱处于水平状态，并将色谱柱与色谱仪相连接。在安装色谱柱时需要特别注意色谱柱的品牌和型号，以便正确设置仪器参数。 4. 准备流动相 在准备流动相时，需要特别注意调整流速和流动相溶液的配比。根据实验要求，选择合适的流量和合适的流动相溶液浓度。 5. 预处理系统 在液相色谱仪的操作中，预处理系统是非常重要的一个环节。一定要确保预处理问题的正确性，例如加热系统，冷却系统和气体过滤系统等。 6. 进行实验 在进行实验之前，需要设置仪器参数，例如流速、采集时间、泵的流量、检测器灵敏度等等。根据实验设计，注入样品并进行分离。在过程中需要实时记录所有数据，以备后续分析和处理。 7. 分析结果 分析后，需要对封闭柱进行清洗和回收，并对数据进行分析和处理。通过对数据的分析和比较，可以得出结论并进行相应的校正和措施。 液相色谱仪的注意事项

1. 在操作液相色谱仪之前要充分了解仪器的性能和操作规程，避免出现误操作等不 良后果。 2. 色谱柱必须严格按照使用说明书的要求来装配和操作，避免出现故障。 3. 在样品处理过程中，要保持实验环境清洁，并尽可能去除样品中的杂质和异常物质。 4. 在制备流动相时，必须准确配合所有的药剂量，并严格控制药剂量的稳定性和浓度。 5. 操作液相色谱仪时，要避免因操作不当带来的高压、漏液等危险事件。 6. 在样品注射之前确保移液管和样品注射器的清洁和准确性，避免对实验结果的干扰。 7. 制备样品时，保持实验环境干燥和交叉感染的壁垒，在处理过程中切勿流出样 品。 8. 操作液相色谱仪时，在实验数据得到结果之前，需要充分验证分离物质的结构和 性质，并进行相应的纯化和修饰。 总结：液相色谱仪是化学分析领域的重要仪器，它可以用于各种化合物的分离、检测 和定量分析，包括生化样品、环境样品和药物分析等。在不同的实验目的下，液相色谱仪 的操作步骤和注意事项会有所不同。 在生化领域中，液相色谱仪通常用于分离和检测蛋白质、核酸、多肽和其他生物分子。在生物样品的分析中，常常需要把样品溶解在缓冲液中，以保证分离分析的准确性和稳定性。生物样品中可能还会存在其他杂质，需要使用功能化柱进行纯化。液相色谱仪可以使 用不同类型和尺寸的柱来分离分子，如C18、C8、氨基酸、离子交换和大小排除柱。液相 色谱仪中的检测器可用于检测氨基酸、蛋白质和寡糖等生物分子。 在环境领域中，液相色谱仪通常用于检测水、土壤和空气中的污染物。在这些应用中，常用的检测器包括紫外检测器、荧光检测器和电化学检测器等。一些环境污染物可能需要 化学前处理，如提取、萃取和预测等，以保证分离分析的准确性和稳定性。 在药物领域中，液相色谱仪通常用于药物分析和质量控制，以保证药品符合严格的标 准和要求。在药物分析中，液相色谱仪通常用于分离和检测药物中的各种成分和杂质。药 物分析通常需要非常高的检测灵敏度和分离效果，为此，液相色谱仪常常使用高效液相色 谱和串联质谱技术等。 在液相色谱仪的日常维护中，需要注意清洗和保养仪器，以保证其最佳性能和稳定性。在清洗色谱柱时，需要用纯化水和其它液体对柱进行循环清洗，确保柱的表面干净无污染。

液相色谱法的建立

液相色谱法的建立 第一章结论 1，引言 2，开始前应知道 3，样品的预处理及检测 4，建立分离 5，完善HPLC方法 1，引言 HPLC方法建立的步骤： （1）有关样品的情况，明确分离目的 （2）是否需要特殊的HPLC步骤、样品预处理等？ （3）选择检测器和检测器设置 （4）选择液相色谱法；进行预实验；估计最佳分离条件 （5）优化分离条件 （6）检查出现的问题或所需的特殊步骤 （7）定性方法；定量校正 （8）论证方法使之进入常规实验室 2，开始前应知道 2.1 样品的性质 包括：所含化合物的数目；化合物的化学结构（官能团）；化合物的分子量；化合物的pKa值；化合物的UV光谱图；化合物在样品中的浓度范围；样品的溶解度等。

两种模式： （1）理论型：依据样品的“化学性质”选择最佳初始条件； （2）经验型：直接开始色谱分离，而对样品的性质不大注意。 2.2 分离的目的 （1）主要目的是定量分析？一种物质的检出？未知样品组分的确认？（2）是否有必要解析出样品的所有成分？ （3）如要求定量分析，准确度及精密度需多大？样品的主要成分的精密度通常能达到±1~2% （4）该方法应设计多少种不同的样品基质？ （5）一次将分析多少样品？当一次分析的样品数超过10个时，运行时间一般应控制在20min以内 （6）即将使用该方法的实验室中，有哪些HPLC设备？实验人员操作技能如何？色谱柱能否恒温？HPLC系统能否做梯度洗脱？ 3，样品的预处理及检测 （1）可直接进样的溶液 （2）需稀释、pH缓冲、加入内标或其它定容操作的样品。（当样品溶剂成分接近流动相时，一般不会产生基线波动等问题） （3）必须首先溶解或提取处理的固体 （4）样品需预处理以除去干扰物和/或保护色谱柱或仪器不受损害 检测器：首选可变波长紫外（UV）检测器。 4，建立分离方法 4.1 选择HPLC分离模式及起始条件