电生理实验常见问题解答

电生理实验常见问题解答（2）『转载』

whole－cell recording的液接电位的补偿问题

我们一般都是在电极入水后补偿液接电位。但在下电极的过程中有时基线还在波动，有时还很大。按理说当形成giga－cell后，就不能在调节pipe－offset了。但是，当形成巨阻封接后，电极内液和浴液之间的接触就隔断了，然后吸破形成whole cell。这个时候液接电位就消失了。但你入水时已经补了这个液接电位。也就是说形成whole cell后多补了液接电位大小的电压。你记录的电位是实际电位加上液接电位的值。很多人电极内液都是用的葡萄糖酸钾，用axon的液接电位计算公式算的葡萄糖酸钾版的电极内液和外液的液接电位都是10mv以上。这个时候误差就大了。这就产生个问题：这个液接电位怎么补？什么时候补？不补的话你钳制电压应该钳多少，电流钳下记录的膜电位与实际膜电位差多少？请大家说说各自的液接电位补偿的做法和理由。

这是一个不错的问题。

首先，让我们来看一看offset这个电压是怎么来的。他的来源很广泛，一部分是恒定值，比如放大器的输入offset；一部分是变化值，比如液接电位，它依赖于离子成分；一部分由附加环路产生，包括玻璃电极、试验浴槽或者是氯化银电极；还有一部分是膜片钳放大器产生的。我们调节offset，是把这个电压在放大器里加到command电压上了，从而使得在command电压为零的时候电流也为零。

液接电位在入水的时候有，一旦形成巨欧姆封接或者吸破后就不存在了，所以这一部分电位差值有必要考虑进去。

我一般的做法是入水之后补offset，一旦开始封接（>30M）就不再进行补偿，直至形成巨欧姆封接。在这个过程中，液接电位已经加到command电压里头去了，所以在吸破后测量其膜电位（电流钳）的时候，要将液接电位减去，比如测出来是-50mV，减去液接电位（以+10mV 为例），就变成了-60mV。在电压钳模式下的钳制电位也是一样要补上一个液接电位差值的，比如command电压是-60mV，实际输出是-70mV。不知我理解得对不对。

关于这个问题，axon的说明书里有比较详尽的补偿方法。

我用的灌流槽就中间一个小室，而且体积蛮大的。液体从小室下面进来，到达一定高度后从周围小孔出去。理论上来讲里边的液体应该可以得到充分交换，但不知为何小室内液体的ph要高于流入的和最后流出的acsf。而且液面比较高，控制不好的话脑片会浮起来。不过我设定的流速并不慢，我用的是蠕动泵灌流，流速在4ml/min左右。还有就是温度控制的不稳定，不知你用的那种全浸式灌流槽如何来控制这些问题。因为我觉得这两个问题直接影响了我能否记录到脑片的自发放电。我这两天做了几次，都能记录到自发放电，但持续时间不长，最长的也就2小时左右，短的只有半小时。不知你以前记录的时候一般能维持多少时间，怎样才能使脑片的活性维持较长的时间？

我自己没有做过成年鼠的脑片。不过我觉得是先分离海马再冰冻。但是如果没有冻过，脑组织很软，可能不太好分离。我想可能要先将脑组织冻1－2min在分离比较好些。这样一是组织有些硬度，比较好剥离海马；二是降低组织温度，减少神经元损伤。剥离时最好在冰板上进行，中间要加些4度ascsf保持组织湿润。

有人在做成年鼠脑片前是用冰冻的氧饱和的ACSF心脏灌流的。这样可以降低脑组织内部温度，你在剥离海马时神经元的损伤就小一些，从而提高海马神经元的存活率。

液面和你的记录槽齐平就可以了，太高会溢出可能漏到显微镜系统里；太低交换不好。脑片

可以用白金丝做的U型框粘上尼龙丝来压（陈军的那本书里有介绍怎么做），你也可以将尼龙网粘在白金框，或者银丝也可。你粘尼龙丝时候隔2－3mm粘一根，这个距离够你下电极了，不会说到做的时候还要调整尼龙网的位置。

至于为什么从孵育槽到记录槽要等1h才能记录到自发放电，我也不太清楚。不过我觉得应该要不了那么长时间。是不是你的记录槽液体交换慢了点，适当快点，混合气早点充——再试试看。

从你现在的情况看，切片估计不是问题了。不知孵育中可能的问题你注意没有：首先还是要给acsf预先给予混合气进行饱和；其次，在孵育时注意在尼龙网下不要形成气泡——可能造成脑片底部与液体接触不良；脑片在网上要平摊开，脑片之间最好不要覆盖和折叠。

我觉得由于你们这种记录槽液体是从底部流入，可能会造成脑片飘，记录不稳。6mm的高度有些高了，我们的记录槽大约3mm高，太高对显微镜成像效果会有影响。还有，你们的记录槽液体是自下向上流，那么脑片深处得到的氧饱和acsf就好一些，越往上交换过的acsf

就多一些。而且你们的槽子这么深，积累的废液也相对多些。或者这么说，同样的流速，6mm 深的记录槽液体和气体交换的时间要长于3mm的记录槽，这可能会影响到脑片在记录槽中的活性。而你要是加快流速的话，又会加剧脑片的飘荡，影响记录的稳定。所以，我觉得你的记录槽需要改进。要不降低高度试试，要不用我上次说的那个记录槽。不过用我说的记录槽，你的加温系统不知能不能上上去。

应该每个海马的锥体神经元都可以记录到0.1 mM glutamine 诱导的电流的，不知你是想记***AR介导的电流，还是AMPAR/KA介导的电流，如果是前者，应该用无Mg2+溶液和1~3 微摩尔的gly才可以记录到。另外，你配好的glutamine溶液要注意pH的变化，可能会偏酸，而H+对glutamine电流是抑制的。

model cell实际就是模拟patch记录的三个阶段: 1、电极入水。电路上就是一个10M的电阻；2、巨阻形成。电路上是1个10GM的电阻；3、whole cell形成。电路是一个500M的电阻和一个电容构成的回路。三种状况均可在seal test窗口中看到。seal test和你给step 刺激一样，都是在model cell上加个电压，窗口显示了记到的电流大小。同理你也可以在电压钳下给step，利用欧姆定律自己根据给的电压和记到的电流算电阻。这个值可能不会那么标准就等于三种状态下的电阻，这与仪器自身的噪声及性能有关，但不会有太大的偏差。如果偏差很大，比如应该为10M只记到5M，可能里面有问题。这时你就要排除是model cell 的问题还是放大器的问题。测model cel电阻排除一下model cell的问题。如果model cell 没问题，对照说明书用它校正一下放大器。

最大的可能就是封接系统漏气。将电极固定在holder上，电极尖端烧闭。三通管与带电极的holder整体浸入水中，从三通管给气体，看三通管、三通管与软管连接处、软管与holder 连接处等易于漏气的地方是否有气泡冒出。如有，用胶将其封闭，或者换新管。

还有一种可能就是电极堵了，不过电极堵的话电极电阻会有较大的增加，很好辨认。

电极内液是在入水之前灌充的，一旦钳制以后，可能就不能更换了，因为一旦更换，就不可避免引起振动，这是膜片钳实验的禁忌之一，很容易引起细胞的死亡。另外，关于渗透时间的问题，我曾经特意作过time-course，通常电极内液完全渗透到细胞内，使电极内和细胞内达到平衡大约在5min左右，有时候因为负压大小或其他的原因，可能大于或小于5min，虽然没有作过氨基酸，但是时间也是差不多的。

1、如果你考虑与鼠龄有关，建议你查查有关大鼠发育的文献，看看你所做核团是在生后多少天发育成熟。也可以参考做该核团的文献，看看别人用多大的老鼠。（我个人认为觉得20d应该没有问题）

2、渗透压不知是你计算的还是实际测量的。有人提出渗透压略高一些还有利于细胞的长时间存活，甚至有人孵育时用高渗的蔗糖脑脊液，记录时用正常脑脊液。你可以参考别人的文献，适当调整一下方子。这个要靠你自己摸索，各个实验室不一样。

3、孵育时氧饱和越充分越好。我们一般都事先给孵育槽里充氧2h左右。因为混合气里co2比例一定，而且需要它稳定acsf的ph值，这和在体不一样，应该不存在通气过量的问题。这种银丝是直接装在holder里的，axon放大器原配的holder配了两个密封圈，用以密封holder内气路。需要注意的是，你要看看与前置放大器相连的一端的那个密封圈是否与holder的边缘齐平，这是保证接触良好的前提。银丝是可以直接从这一头取出来，镀好了再放进去的。注意插进去之后要在银丝的末端打个弯，这样银丝就可以扣在密封圈上，并和用来插入前置放大器的金属紧密接触。不需要焊，否则密闭性能就会下降。

1、如果外液中存在细菌的话，一方面可能影响封接成功率，另一方面，细菌可能会分泌一些毒素，从而影响细胞活性。

2、对于玻璃电极来说，影响封接成功率的主要有两个因素，一个是电极尖端口径，这主要表现在电极阻抗上，一般说来，达到3-6兆的都可以，但如果细胞比较小的话，那么阻抗要高些（这样口径小些）才更有利于封接。另一个因素就是电极的形状，使用两步拉制仪的优点即在于此（其实，最好的是水平拉制仪，可以根据需要进行多步拉制，得到各种需要的形状）。

细胞一吸就破是因为消化的太过了，可以试试减少酶量和缩短消化时间。

活性好的细胞镜下看起来很光滑，形态规整，核隐约可以看见，颜色蓝蓝的做完一个细胞后当然要换电极，因为此电极已被污染啦。

分析曲线可以找资料看看嘛。

细胞内记录最重要的是要将玻璃微电极尖端插入细胞内，并且能够不把细胞弄破，能够维持较长一段时间。要做到这一点，关键在于能拉制出合格的玻璃微电极，根据我们的经验，在海马脑片上要进细胞的话电极在冲灌3MKCl后阻抗应该不低于60兆欧，这是因为海马中的细胞决大多数为体积较大的锥体细胞，容易进入。而在如纹状体等核团中，大多数细胞是体积较小的中间神经元，只有尖端直径较小的玻璃微电极才能进入，阻抗应不小于120兆欧。在微电极进细胞的一瞬间会在计算机屏幕上观测到基线的明显的突然降低，这时需要立即通过放大器向细胞内注入超极化电流使细胞内发生超极化，并维持一段时间使细胞稳定不至于因损伤而大量放电死亡。随后再将超极化电流逐渐减小至零，这时在放大器上显示的膜电位才是细胞真正的静息膜电位。需要注意的是为了使玻璃微电极尖端的分布电容减小到最低程度，在拉制冲灌好后最好将电极尖端表面涂上生物油以绝缘。

如果电流overload，第一件要做的事情就是把银丝电极芯氯化一下，很多时候都是它引起的。此外你的接地的导线如果不该弄湿的地方弄湿了也会出现过载的情况。

我们现在配acsf的试剂都是用的国产的分析纯。我觉得这个不是最关键的，但是个要保证的基本问题。也就是说，你拿试剂时最好买近两年的，这就可以保证脑片活性了。我觉得还是切片和孵育要掌握好。再就是你可以查查是否有人做过和你类似的文章，直接email和作

者联系。

我们那个灌流槽使用时没有什么太多注意的。灌流时保持液面和槽的高度平齐就可；加温就要靠你自己解决；使用时可以在两个缓冲室里放两团棉花，减少液面波动。实验后注意清洗，尤其是联系记录槽和缓冲室的小管。

我们一般配好acsf后就开始预通气，气量一般出气管出来成串就可，不用太大。分装的灌流和孵育的都要给。分氧压表上1小格左右。灌流液温度最好能保持恒定，波动不要太大。

不知道是否能够封接上？如果最终封接不好，达不到Ｇ封接，估计是电极前端沾有污染物，入水后因为污染物，使得电阻抗比较大，给正压后，使得污染物对电极尖端的的阻挡减少，所以阻抗降低．接触后阻抗当然会增加了．

不知道是不是近几天的试验都是这样？因为具体的情况我不完全了解，如果是的话，那我还是坚持我的观点，是因为有污染物的问题，如果没有处在电极尖端中央，没有将电极尖完全堵住的情况下，也是可能出现像你叙述的情况的，即使是封接上了也是暂时的，不牢固的，我也遇到过这样的情况。妨碍封接的污染物可能来自以下几个方面：

1.灌流液中的杂质

2.电极内液中的杂质

3.细胞分离的不是很理想，状态不好，消化过了或是不足都可能导致细胞表面附有许多杂质颗粒，从而影响封接。

1、记录室与进液室、记录室与出液室之间的两个直径1.5mm的小管，能否允许脑脊液自由经过，比如说，在灌流平稳后，记录室、进液室、出液室的液面是否高度保持一致？

2、您应该使用浸没式浴槽吧，进液口、出液口与底部的高度有多少mm？

那两个小管就是连通记录室与进出液缓冲室用的，根据连通器的原理，三者液面可以保持一致。液面的高度就是槽子的厚度，3mm左右。

我们也曾遇到类似情况，后经调整U形框位置得到了解决。个人认为是脑片没有固定好的缘故，这样脑片随灌流液面的波动而波动。也可能是U形框上尼龙丝距离太疏。建议你重做后试试看。

第一和第二拉的数值不是温度值。

没有固定的值，决定因素很多：

1。你试验所要求的电极的阻值；

2。电极拉制仪的加热丝的阻值；

3。拉制的环境温度也有点影响；

我们实验室的数值就有点波动，要通过多次预试才能找到你所需的数值！！

本人也曾经作过patch clamp的实验，根据经验，一般来说急性分离的细胞比培养的细胞好用（本人体会仅作参考）。原因如下1：急性分离的细胞比培养细胞获得方便。因为培养尤其要注意无菌操作，这就涉及到很多烦琐细小的工作（如刷洗瓶子，高压消毒等等）；急性分离对这一项的要求相对要低一些。2：急性分离的细胞比培养的细胞质量要好一些，更容易封接和破膜。3：急性分离的细胞一般维持8个小时左右，所以分离细胞和作实验一般一天可以完成。当然培养的细胞也有一定的好处。急性分离细胞适用于多种组织，结合本实验

室的工作，可以用于分离背根神经节、三叉神经节、海马神经元、肺血管平滑肌细胞、心肌细胞、耳蜗毛细胞等等。

在显微镜目镜上安装一个标尺，就可根据标尺刻度读出尖端直径。

从外地拉制电极应注意：1，电极应小心妥当保存，保证尖端在运输途中不致碰断。2，建议一次拉制不宜过多，拉好的电极尽早用完，最好密闭保存，以免灰尘污染。

如果封接破膜技术操作没有变化，那细胞状态就是主要原因啦。你觉得分离的时候什么条件都没有变化，但细胞形态，状态却会有很大差别，是实验中没有注意的因素从中作用，所以应综合考虑各个方面的因素，最好将各个条件都固定下来，这样也许会得到比较稳定的细胞。另外将电极尖端适当拉大，有助于破膜。

无心电极一般用做悬浮式微电极实验，电极要刺入细胞，阻抗值较高，达十几MΩ，只有用有心电极通过内部毛细管的虹吸作用才能使电极尖端不会有气泡。做膜片钳一般都用无心电极，单通道充灌电极液阻抗为8MΩ左右，全细胞为2-4MΩ，一般只要用手指轻弹电极中部就可以把气泡弹出来了。

探头就是装电极的地方，入水指的是电极由空气中进入到含脑片的ACSF灌流液中，此时可以记录到入水后电极与液体形成的电阻，一般即通常所说的拉制的电极尖端的电阻，脑片的话一般在几个M欧。封接就是说电极尖端与脑片接触后，通过给予一定的负压，使脑片上的细胞与电极尖端结合紧密，此时可看到的电阻为封接电阻，在吉欧以上。破膜指的是封接后给予负压使细胞破膜形成全细胞记录的方式。overload我自已做的一般是因为电极拉的尖端太粗，电阻太小，一般放大器右上角会亮红灯。

细胞外记录（extracellular recording）是把引导电极安放在神经组织的表面或附近引导神经组织的电活动。由于活动部位的神经元产生去极化，未活动的部位处于正常极化状态，在容积导体中的两部位间电位不同，电流从一点流向另外一点。放置于细胞表面的电极就会记录出两者之间所产生的电位差。细胞外微电极记录的方便之处是电极不插入细胞。除了玻璃微电极外，金属微电极也是作细胞外记录的合适电极。细胞外所记录的电位比细胞内记录的小很多、这是由于信号受低电阻的细胞外液通路分流所致。在外周神经用细胞外记录，在发生兴奋的局部与临近部位间形成局部电流。因而可以记录到一个正-负-正的三相波。胞外电极记录的电位大小和波形会有多种变化。因此，对胞外记录电位的分析重点放在放电频率和潜伏期，而不去比较放电的幅度。

对电位分析的目的在于认清电位是从一个神经元的哪个部位产生的，便于判断实验结果的意义。如以电刺激视神经、在外侧膝状体的记录为例，可看到：突触前轴突的电位，是一个全或无的一个单向上升波。由突触后轴突所产生的也是单向上升波。但与突触前轴突电位有区别：（1）潜伏期较长，约为1.2-2.2ms；（2）对单一刺激常可引起多个电位；（3）上升波呈双凹形，形成M波。胞体电位为长时程负锋电位，其潜伏期与突触后轴突的电位相同；细胞外记录的树突电位为慢双向的全或无电位。起始为正波，它的潜伏期与突触后的相等，波形的慢变化反映冲动在树突的传导速度。比较由细胞各部位所记录电位的持续时间，轴突的最短约＜1ms，胞体较长为1.5-3ms，树突的最长为15～2Oms。总之，细胞外记录方法较易，但对其结果的解释较为复杂。

细胞外记录电极不穿过细胞膜，可保持细胞功能完好，能反映许多单位的节律性或非节律性活动和诱发电位，同时也能记录一个单位的活动，通常以细胞放电频率、放电型式和变化类型为特征。

我们使用的微电极拉制仪为美国Sutter公司生产的P－97型，该型拉制仪为国内外应用比较广泛的产品之一，为Flaming/Brown型水平拉制仪，这种类型拉制仪的优点是拉制参数固定后拉制的微电极一致性好；缺点是参数不易调节，一般要经过较长时间的试验才可得到满足要求的微电极。

P－97微电极拉制仪的几个重要参数：

1.Ramp Test 当更换了新的毛坯管或者铂金片后都要进行Ramp Test，目的是得到在当前铂金片的加热下毛坯管在何时达到机内预置的柔软程度（即在预置拉力下的Velocity），结果用Heat表示，这是进行进一步拉制的基础。

2.Heat 表示加热电流强度的一个无单位数，调节范围为0－999。此参数通常和Ramp Test 值相关，在使用槽式（Trough）铂金片时为Ramp+15，而使用盒式（Box）铂金片时直接用Ramp值即可。Heat越高，拉制出的微电极越长而尖端口径越小。调节时一般每次改变5个单位。

3.Pull 拉力，调节范围为0－255。需要注意的是，当毛坯管在拉制仪上固定好之后一直有一个很小的基础拉力作用在毛坯管两端，这个拉力不能调节，Pull是在基础拉力的基础上施加的。与Heat类似，Pull越大微电极越长而尖端口径越小。调节时每次改变10个单位。

4.Velocity（trip point）速度，调节范围为0－255。随着铂金片的加热，毛坯管在基础拉力下逐渐分开，分开的速度一直在拉制仪的监控下，一旦速度达到Velocity的设定值即停止加热，冷却（参数Time和Delay控制这个步骤，见下），然后施加Pull所设置的拉力将毛坯管拉断。Velocity的范围一般在10－150之间。

5.Time 调节范围为0－255。控制高压空气的冷却时间，当Velocity大于0时每个单位代表0.5ms，Velocity＝0时每个单位代表10ms。当毛坯管的分开速度达到Velocity所设置的值时，立刻开始用高压空气向铂金片吹风以冷却毛坯管，Time即高压空气的作用时间。在使用Time模式时，拉力在达到Velocity 40ms后开始施加，与Time的设定无关。

6.Delay 调节范围为0－255。如果Time设置为最大值后仍然不能有效冷却毛坯管（使用厚壁毛坯管时经常遇到这种情况，表现为微电极尖端纤维化，即尖端飘），就要将Time改成Delay。在Delay模式中，冷却空气作用时间是固定的300ms，而Delay规定达到Velocity 后到施加Pull的时间。当Velocity大于0时每个单位代表0.5ms，Velocity＝0时每个单位代表10ms。

P－97型拉制仪的拉制原理为：微电极毛坯管在铂金片的加热下逐渐软化而被基础拉力拉开，当毛坯管两端分开速度达到一定值的时候，停止加热，冷却极短的时间后施加一定的拉力将毛坯管拉断，如果毛坯管仍然未能拉断则重复以上步骤，最终拉断成为两个微电极。根据所需的微电极不同需要设置不同的拉制参数和选用不同的玻璃毛坯管。

以上这些步骤的目的是精密控制施加拉力时毛坯管的温度（玻璃的柔软程度）以及加热部位的粗细（余下多少玻璃）。要拉制出形状、尖端都满意的微电极，需要仔细调节以上参数。细胞外玻璃微电极的拉制采用美国World Precision Instruments公司生产的M1B120F－4硼硅酸盐（borosilicate）微电极毛坯管（外径1.2mm，内径0.68mm，内有帮助充灌的玻璃丝，属于厚壁毛坯管）。细胞外记录使用的微电极在充灌2M NaCl时阻抗一般在1－10MΩ左右，较易拉制。因毛坯管管壁较厚，我们采用两步拉制法。第一步在基础拉力下先将毛坯管的中间部分拉细，以避免形成很长的微电极（易断且不易充灌），第二步再拉断毛坯管。拉制参数如下：

Heat Pull Velocity Time

1 530 20 20 140

2 512 20 30 140

可拉制出阻抗为5－8MΩ的微电极，且形状令人满意。

Cs+ Methanesulfonate（甲磺酸铯）可以从SIGMA购买到。

Cesium methanesulfonate

分子量228 sigma编号C1426 5g 47美元

可配制电极内液150ml。

CS作用主要是阻断钾通道电流。methanesulfonate或其他葡萄糖酸根、硫酸根替代氯离子的目的是避免氯离子影响。

１、因为脑脊液内含有NaHCO3，所以必须通入5%CO2，在脑脊液内形成

HCO3-/H2CO3缓冲体系，维持PH值稳定。

2、刚配制的脑脊液PH值约为7.8，充混合气后PH为7.4。一般而言，不需要

调节PH值，如PH值不对，应考虑所用的试剂是否过期，可以更换试剂。

1、95％氧气＋5％二氧化碳混合气的作用是什么？

2、为什么不能用纯氧代替？

3、给脑积液充混合气后，pH值如何变化？是不是应该在充氧后再调节pH值？

答：1.氧气是脑组织必须的，二氧化碳是维持acsf的ph稳定。之所以用这一浓度比，主要是模拟在体环境，另外在这个浓度比下，细胞的活力可以达到最大。

2.如果用纯氧，那acsf的ph将不能保持稳定。

3.刚配完的acsf，其ph大概在7.8左右，通入混合气后，一般ph会降低，并维持在7.35~7.45之间。一般不需要调节ph，因为液体本身形成了缓冲对。如果通气后液体ph不能维持在7.4左右，那要适当调节NaHCO3的浓度。一般范围在18~26mmol/L之间。如果气体质量不行，那液体的ph也很难维持在7.4左右，我们就遇到了这样的问题，发现ph总是偏高。

1.人工脑脊液的缓冲系是由碳酸氢盐形成的，所以二氧化碳的作用就是维持其pH稳定在7.4。

2.一般配置好人工脑脊液后都先用混合气或二氧化碳气饱和，再以氢氧化钠调pH到7.4，以混合气维持。

3.国内很多地方配置的混合气并不合格，二氧化碳的浓度常达不到5%。因为二氧化碳装罐是液体，而氧气是气态，二者混合不太容易，所以常见到的情况是，混合气用一段时间后就很难把pH控制在7.4，往往偏碱。

4.另外一种办法是以纯的食用二氧化碳和纯氧分别通入人工脑脊液中。只是二氧化碳的通气量要很小，稍微大些就偏酸，过小就偏碱，需多次练习才能较好控制。

1.细胞对pH的要求有一个原则：宁酸勿碱。如果你没有办法把pH调得很精确的话那么就把pH调得略酸一些。

2.我一般孵脑片的温度控制在25摄氏度左右（有的文献要求控制在32摄氏度），与在室温下（20摄氏度）调的pH相差大约0.02，这一点差别是没有多大影响的。

3.pH在7.2-7.4之间对细胞还是很适合的。

4.调pH要精确的话，要控制好混合气的通气量，并持续观察15分钟以上在7.3-7.4之间而没有明显波动，这样才可认为气量合适，pH稳定。否则很难控制得很准。然后记住所通气

量的大小，以后每天尽量保持一致。

我参经也遇到过类似的情况，我认为原因有：1、封接不好，可能是由于细胞表面太脏，或者电极与细胞接触面之间有杂质；2、电极飘动，可能是由于微操纵器滑丝或者漏油；3、防震台颤动，防震台减震效果不好的话，也会有你所述的情况发生；4、灌流液流速太快

细胞外记录排噪方法：

1、屏蔽台内不能有任何接有电源的用电器！

2、将屏蔽台四周及顶端的屏蔽网用导线联起来再接到信号采集系统的地线上。接好后检测是否接好可用万用表测两两间的电阻，如果电阻为零表示接好了。在推进微电极的时候一只手接触屏蔽网，以保持信号的连续性。这样的话我记录的细胞外放电干扰信号大约

30—40uv。

我没能进一步降低，有哪位高手做的更低的请教教我

3、微电极电阻的测量（我用的是金属微电极，玻璃的也适用）：可将微电极输出端用鳄鱼夹正极接好，微电极尖端和鳄鱼夹负极至于生理盐水中（也可在体记录时当微电极已经插入脑组织后进行测量，即都是构成一个回路就行了）放大器开关至于校正档，记录信号参数设为滤波频率关、时间常数置交流低增益，其他按说明书设置，根据波形幅度换算微电极内阻。

电生理基本技术

电生理基本技术 一电刺激。 二生物放大器正确选择，植物性神经冲动幅度多为50-100μV。不同组织，应采用不同的参数。如 ECG：振幅0.1-2mV，灵敏度0.5-1mV，时间常数0.1-1.0s，高频滤波1KHz 植物性神经冲动：振幅50-150μV，灵敏度25-100μV，时间常数0.01-0.1s，高频滤波3- 5KHz 中枢神经元单位放电振幅100-300μV, 灵敏度50-100μV，时间常数0.01-0.1s，高频滤波5-10KHz 三玻璃微电极 常用尖端0.5-5μm，向细胞内插入时，需小于0.5μm（细胞直径的1/10~1/100），且尖端的倾斜度应相当缓和，一般微电极可分为金属微电极和玻璃微电极两类。 金属微电极，现多用镀铂钨丝电极（platinum-plated tungsten electrode），在钨丝上镀铂，可极大改善电极的电学特性，噪声可大大降低，加之机械强度大，适合长期体外记录(paré D， Gaudreau H. Projection cells and interneurons of the lateral and basolateral amygdala: distinct firing patterns and differential relation to the thera and delta rhythms in conscious cats. J Neursci, 1996,16(10):3334-3350 现要也常用镀银碳纤维电极。玻璃微电极记录易受机械位移的影响，加之尖端的电解质会漏出或堵塞，不适合半小时以上的长时间记录，玻璃微电极可分单管和多管微电极。 毛坯管在国外多用Pyrex管，国内多用GG-17和95料玻管。细胞外记录多采用外径1.5-2mm 玻璃，细胞内记录则采用外径1mm细玻管，内外径之比约为2:3或5:6，长6-8cm。拉制前必须经过清洁处理。 清洁液：用等量的(250ml)王水(可反复应用)。一般毛坯管捆成把放入清洁液中1-2h，取出自来水冲洗20-30min，再放入无水酒精中洗涤，再放入盛满蒸馏水烧杯中加热煮沸10min，倒去蒸馏水，再换新蒸馏水反复3次，再放入烤箱中烤干，备用，切不可用市售的洗涤剂，以防降低电极充灌液的表面张力而影响冲灌。 充灌液常用3mol/L KCl，为避免Cl-扩散，也可用2mol/L醋酸钾或柠檬酸钾充灌，也有人用0.5-1mol/L NaCl(低浓度)充灌可降低噪音。细胞外记录时，最后再用3-4mol/L NaCl +2%旁胺天蓝溶液定位。在膜片钳中还常加钙螯合剂，如EGTA。 阻抗与不同组织相关。 四电生理实验中噪声和干扰的形成和排除。 (一)来源。 1干扰信号与生物电生理信号的鉴别。准确区分生物电信号与干扰的伪迹是电生理实验的先决条件。 2来源。主要有三个方面 其一。物理性干扰。1)静电和电磁的干扰实验室附近高压电，室内日光灯可产生50Hz的静电干扰，尤其是交流电，尤其是50Hz频率干扰最大(电子设备为50Hz)。其特点是幅度大，波形规则。 2)噪声干扰电子元件本身产生杂乱无章电压和电流称噪声，一般与放大器内部元件的质量与性能有关。 其二。接地不良。1)地线电阻应小。2)仪器故障。产生漏电电流，在地线上形成电位差，产生干扰。3)地线行走过程中打圈，形成线圈，易接受电场和磁场的干扰。4)各仪器设备应采

多通道电生理记录系统

多通道电生理记录系统功能和特点如下所示： 功能：电生理信号采集器，同时支持动作电信和场电位信号采集。 特点主要有： 1、全新数模转换芯片，大大减低环境噪音。 2、支持实验动物最多4*32通道的数据记录。 3、放大、滤波和虚地功能自行调节，采集通道自行定义，操作更简单。 4、同时支持动作电位和场电位信号采集，噪音更低，信号更稳定。 5、支持最大32通道数字/模拟信号输入，拓展性更强。 6、独特设计Headstage,体积大大缩小，支持小鼠自由运动实验。 7、体积小巧，携带方便，适合更多实验场合。 Multichannel electrophysiological recording system function and features: Function:It is a electrophysiological signal collector,which supports both action potential and resting potential signal acquisition. Features: 1.New digital-to-analog conversion chip greatly reduces environmental noise. 2.It supports data records of up to4*32channels of experimental animals. 3.The function of amplification,filtering can be self-adjusted.The acquisition channel is self-defined.And the operation is simpler. 4.It supports action potential and resting potential signal acquisition at the same time.It has lower noise and the signal is more stable. 5.It supports up to32channels of digital/analog signal input and more expandable. 6.Unique design of Headstage is greatly reduced in size,which supports mouse free movement experiment. 7.zIt is small size,easy to carry and suitable for more experiments.

电生理学发展简史

电生理学发展简史（一） 生物电活动是机体一种基本的生命现象，它产生的基础是细胞膜上离子通道活动的总和效应。从生物电现象的发现到如今对离子通道功能与结构如此深入的了解，电生理学走过了200 多年的历程。 一、生物电现象的发现 最初的实验研究是从18 世纪后叶开始的。当时没有任何测量电流的仪器，只是发现利用电容器（如雷顿瓶）的放电，或雷电发生时竖起一根长导线，引导大气中的电，都可以刺激蛙的神经肌肉标本，引起肌肉收缩，所以当时就用蛙的神经肌肉标本作为电流存在的标志。1791 年意大利解剖学教授Galvani L 发现，如果将蛙腿的肌肉置于铁板上，再用铜钩钩住蛙的脊髓，当铜钩与铁板接触时肌肉就会发生收缩。他把这个现象的发生归因于机体的“动物电”（animal electricity ）。他认为神经与肌肉带有相反的电荷，肌肉带正电，神经带负电，金属导体的作用是把神经与肌肉之间的电路接通。同时代的意大利物理学家Volta A 不同意Galvani 的见解，他认为实验中发现的电现象，不是动物机体产生的动物电，而是由于实验中连接肌肉和神经的金属不同所致，是不同金属接触时产生的电流刺激了肌肉标本，如果用同一种金属作导体，收缩就不会发生。事实上，Volta 和Galvani 的观点都有其正确的一面。Volta 后来因此而发明了伏特电池；Galvani 则继续进行了一个出色的实验。在无金属参与的情况下，他将一个肌肉标本横断，又将另一个神经肌肉标本的神经干搭在横断肌肉上，并使之跨越肌肉的完好面和损伤面，结果该神经支配的肌肉产生收缩，证实了动物电的存在。这成为第一次观察到生物电存在的电生理实验。但是直接测量到生物电的实验是在电流计发明之后。 1825 年意大利物理学家Nobili 发明电流计。 1837 年意大利物理学教授Matteucci C 用电流计在肌肉的横断面与未损伤部位之间，测量到电流流动，电流是从未损伤部位流向横断面的，所以横断面呈负电位。这是第一次直接测量到生物体内存在生物电的实验。 1843 年瑞士生理学家Du Bios-Reymond 用电流计观察到神经的损伤电位，也是损伤部位呈负性。1849 年，他又发现神经在活动期间出现负波动，即使用电流计从细胞外记录到的动作电位。 1850 年von Helmholtz H 测定了神经传导速度，证明蛙神经的传导速度仅20 ~ 30m/s 。此前人们认为既然电的传导速度等于光速，因而神经的传导速度可能也是光速。 二、早期对生物电发生机制的认识 1. Bernstein 的膜学说对于这种生物电现象的解释，当时提出了不同的学说。Du Bios-Reymond 认为，组织内带负电，外表带正电，是正常状态下存在的，即所谓“现存学说”（preexistence theory ）；而他的学生Hermann （Du Bios-Reymond ）则认为，组织内的负电是被切割时组织损伤变质造成的，即所谓“变质学说”（alteration theory ）。1890 年，著名的化学家Ostwald W 提出了膜的通透性理论，即如果在电解质弥散的途径上有一层半透膜，它只允许一种离子通过，而带有相反电荷的另一种离子不能通过，就会通过静电作用限制透过膜的离子不能进一步弥散，如此，在膜两侧就会形成电位差，它的大小可按Nernst 公式计算。1902 年Du Bios-Reymond 的另一名学生Bernstein J 接受了Ostwald 通透性理论，在现存学说的基础上提出了“膜学说”（membrane theory ）。他根据细胞内液比细胞外液含较多的K +，而细胞损伤处电位较完好处为低的事实，推测静息时细胞内电位低于细胞外，并假定静息时细胞膜只对K +有通透性，由于胞内带正电荷的K +顺浓度差扩散到膜外，相应的负电荷仍留在膜内，使细胞膜呈现外正内负的极化状态，形成静息电位。按照Bernstein 的设想，细胞的静息电位就等于K +的平衡电位。动作电位则是由于膜在一瞬间失去了对K +的选择性通透，变得对所有离子通透性一过性地升高，导致膜两侧电位差瞬间消失。1904 年，他又设计了一个精巧的实验，证实肌肉切断后断面的负电位在0.3 s 后即出现，并持续缓慢地减小而不是

心腔内电生理检查

心腔内电生理检查 【适应证】 1．评价窦房结功能 (1)不明原因晕厥患者，了解窦房结功能是否障碍及因果关系。 (2)窦性心动过缓患者，了解窦房结功能障碍程度。 (3)窦性心动过缓患者是否存在其他类型心律失常。 2．评价房室结功能 (1)不明原因晕厥怀疑房室传导障碍所致。 (2)房室传导障碍疑为其他原因所致，如窒上性早搏致隐匿房室传导。 (3)二度房室传导阻滞，了解阻滞部位。 3．窄QRS心动过速心动过速症状明显和（或）药物治疗效果不理想，了解心动过速机制以便消融等其他治疗。 4．宽QRS心动过速 (1)常规心电图不能明确心动过速性质，而这对治疗很重要。 (2)常规心电图已经能明确性质，电生理为了选择射频治疗。 5．预激综合征 (1)接受射频消融或外科手术前定位。 (2)不明原因晕厥或心脏猝死幸存。 (3)高危职业、不明原因心悸等症状。 (4)因其他原因拟心脏手术。 6．频发室性早搏、非持续性宣性心动过速 (1)有结构性心脏病、左窒射血分数减低等。 (2)症状明显考虑射频消融治疗。 7．零明原因晕厥和猝死幸存者首先除外急性心腮梗死早期（48h内）患者。检查寞房结、房室结功能；了解是否能诱发室性和室上性心律失常。 8．评价不明原因心悸 (1)临床发现心悸发作时脉率明显加快但无心电图记录者。 (2)晕厥前心悸考虑为心源性者。 9．指导抗心律失常药物应用 10．在凡科患者的应用 (1)类似于上述成人情况。 (2)不能与窦性心动过速鉴别的窄QRS心动过速。 (3)先天性完全性房室传导阻滞伴宽QRS逸搏心律。 (4)可能发生心源性猝死的高危患者，如复杂先天性心脏病术后或有严重室性心律失常的患者。 11.一般不适合心内电生理检查的情况 (1)心电图能明确症状与房室传导阻滞关系者。 (2)无症状一过性房室传导阻滞如二度I型者。 (3)无症状室内传导阻滞。 (4)临床上明确的长QT综合征。 (5)已知晕厥和猝死原因，电生理检查不能指导治疗者。 (6)急性心肌梗死早期（48h内）心搏骤停幸存者。 (7)心悸原因明确为心外原因者（如甲状腺功能亢进）。

电生理实验常见问题解答

电生理实验常见问题解答（1）『』 2010-10-09 14:53 请问目前分析细胞外放电的信号处理软件较好的是什么？ 价格昂贵的有国外的PCLAMP系列软件和POWERLAB；价格便宜的较好用的有国产的PCLAB 和MEDLAB。如果感兴趣输入GOOGLE，一搜即知。axon guide是很经典的哦，大家可以到公司主页上下载本书主要针对PATCH，是AXON公司的产品配套广告说明书，但是也包含了不少基本电生理知识，集中阅读一下第1、2章节有帮助。可以下载看看，如下，.axon.请教：干扰的大小如何检测？ 检测干扰大小和你记录电信号一样，可以从相关软件读出来，也可以从示波器上读出。建议丁香妹妹找一些基础电生理书籍熟悉一下，不要着急，先入门为重。 请问微电极的电阻如何测量?怎样才能保证电极尖端已被电极液完全充满? 给予电极一个电流/电压，可以从示波器上读出来，也可以从相应的放大器上显示出来。建议购买带有芯的玻璃电极，这样可以简单地从尾部灌入液后，轻轻用手指敲打电极即可；如果是无芯电极，就需要先用注射器将电极尖端充满，而后在从尾部灌入液。 问题是有时尖端太细,从尾部注入液后,很难保证尖端全被充满. 注射器接皮管——皮管接电极尾部——电极尖端深入电极液中——抽吸注射器——电极尖端充满液体——再从电极尾部管电极液——解决问题了。 我在记录细胞外放电时,干扰太大,诸如50hz的交流电干扰,请问如何尽可能地排除这些干扰信号? 交流电干扰应该不难处理，只需要中间接一个直流电转换器即可。 我想用Patch做平滑肌的BK通道,请教Pleace前辈,在酶解法分离细胞时,使用DMEM会因为含钙高而影响结果吗?文献多数都用无钙液，如果使用前我用PBS洗三次是否可以？ 你最好用无钙液，即使后来用PBS洗三次也不可以。因为之前的无钙液操作不仅可以保护细胞，而且可以使之处于低兴奋状态。 屏蔽和接地是电生理基本要求。如果你记录的信号足够大的话，可以不用屏蔽。但生物电信号一般都很弱，这就是为什么要屏蔽和接地。也是为什么很多时候晚上做实验干涉小——因为晚上用大功率电器的人相对少些，空间的电磁干扰相对小些，地线相对也干净一些。屏蔽笼即法拉第笼，一般是一层铜网，一层铁网。铜网屏蔽电，铁网屏蔽磁。屏蔽笼和系统的信号共地。关于地线，根据你的系统所记录的信号的强弱要求可以不同，信号越弱，要求越高。一般细胞外记录甚至更粗的记录要求相对不高。要是做到单通道水平，就不是凑合能解决问题的。就是这样，电生理的地线也应该和公共地线区分开来。一般比较正规的电生理实验室的地线应该单独埋设。地线埋设的要求其实很简单，尽量减小对地电阻。但实施起来就有很多方法了。我听说的一个方法是：从实验室下到地的主线用大概10cm 的铜缆。地上要挖个深1.5—1.8m、1.5*1.5m宽的坑。铜缆用铜铆钉（尽量减少材质造成的电阻差异）焊在一块1.5m*1.5m*4cm的铜板上。铜板放入坑中。板上埋2.5kg食盐、2.5kg 木炭。再将坑添上。主线到各个信号地分支点用铜棒焊接。铜棒上钻孔接地线。仪器电源不直接接到公共电源上，而是通过稳压隔离电源后接到另设的电源上。仪器电源的地线和系统的信号地分开接地。信号地接到单独埋设的地线上。仪器电源的地线也就是三相插头的顶端那个插头很多时候不接。 震动太大：可能原因有防震台防震效果不好，充气不足，或是实验室附近有什么强振动源；记录槽设计是否合理；液体流速是否太快？ 记录系统是否稳定：微电极放大器电容补偿是否调好，是否需要校正？记录系统干扰和噪声情况如何？

电生理检查地适应症及禁忌症

实用文档 心内电生理检查 适应症 心脏电生理检查适用于： 1．确定房室传导阻滞的精确部位。 2．鉴别异位激动的起源（如室上性激动与室性激动的鉴别）。3．对预激综合征进行精确分型。 4．检查窦房结功能。 5．明确某些异位性心动过速的折返机制。 6．对某些复杂的心律失常揭示发病的特殊机制及某些特殊电生理现象（如隐匿性传导、空隙现象等）。 7．晕厥原因不明。 8．心律失常考虑介入性治疗或植入起搏器。 9．抗心律失常药物筛选或药理学研究。 禁忌证 1.严重心功能不全。 2.长QT间期且伴室性心动过速。 3.全身感染、局部化脓、细菌性心内膜炎。 4.出血性疾病和严重出血倾向。 5.严重肝肾功能障碍、电解质紊乱、恶病质。 6.不具备心电生理检查条件。 实用文档

用品及准备 电生理检查室的基本要求和设备 1.严格无菌的导管室。 2.有电视监视器的X线机。 3.多导电生理记录仪。 4.多极电极导管。 5.心脏监护仪和电复律设备。 6.必要的急救药品和设备。 1．导管电极 （1）心内导管电极：在盲端导管的远侧装有白金电极环，宽2mm，电极间距离为10mm。记录希氏束图的通常用三极电导管，每个电极在导管内有一导线从导管尾端通出连接记录导线，导管直径以7F较为合适。如欲在心房、心室内同时进行刺激或记录，应另准备二极或四极导管，前者只作刺激或记录用，后者一对电极作记录用。 （2）食管导管电极：为一特制的Z极电极导管，经鼻腔送入食管，在距鼻孔35cm左右（32-37cm）即达左心房水平，如再向下送4-5cm，则电极达左室后壁水平。以上为可进行心房或心室调搏的位置。 2．放大器 实用文档 前极必须用浮地式隔离放大器。

电生理实验室电极植入手术基本流程

动物头部电极植入手术操作流程 一、大鼠麻醉选择与使用： 1、麻醉剂选择：戊巴比妥钠 40～60mg/kg,体重小于300g时，可考虑55mg/kg或酌 情减少用量（2-3%浓度）；或乌拉坦1～1.5g/kg（20-25%浓度） 2、根据体重换算出麻药用量，注意所配药品浓度，根据需要的mg数，决定注射的ml. 3、给药途径：腹腔注射 4、操作流程：右手轻轻捉住大鼠尾巴，将大鼠放置在鼠笼上方或操作台上，待其安静后，可用左手的姆指和食指捏住耳后枕颈部皮肤即可提起，掌心向上将鼠体置于掌心中，用无名指和小指将鼠尾压住。腹腔注射位置：两大腿根部水平线，中线旁1-2cm.腹腔平面向上倾斜45°，插入时有落空感，回抽无血，匀速注入。 5、电极植入中麻醉维持：如手术时间过长，动物麻醉效果减轻时，可用乙醚适当吸入麻醉。 二、电极制作 实验中所用电极应预先准备，根据实验目的和要求，选择不同电极。 1、皮层电极，可选用小不锈钢螺钉（眼镜/手表用螺钉） 2、深部电极，采用绝缘金属丝制作 三、手术流程 1、术前准备： （1）手术器件准备： 大、小手术剪各1把，弯头止血钳4-6把（用于暴露手术视野），手术刀柄及刀片，直止血钳1-2把（用于手术中夹持止血），持针器1把（用于皮肤缝合），手术针（弯针），缝线若干，小螺丝刀1把（用于固定螺钉电极），有齿镊1把，小手术镊1-2把，钻头1-2个（大小根据实验需要确定），手术盘（手术中放置手术器件）1个，器件盒1个（用于手术器件消毒保存） 上述手术器件需要进行消毒灭菌处理（高温高压消毒或75%酒精浸泡30分钟。（2）其它实验所需物品 玻璃器皿（盛水,用于丢弃毛发），消毒棉棒，明胶海绵（止血用，需要事先剪成小

数字神经电生理系统配置及功能

数字神经电生理系统配置及功能 硬件部分： 功能模块及配件 模块功能： ,NET平台、多语言界面(中/英/俄/法/德)、自定个性化操作/回放界面、支持网络数据库、即时查看报告设定条件查找数据、灵活设置多样的采集模板、分析模板(可达到自动采集和自动分析) 基于MS Word的专业报告输出、可设置个性化报告模板适于各种应用 基本EEG采集、存储(支持网络数据库)、检索、分析、回放；多种参数2维(可实时)和3维地形图 实时棘尖波/癫痫活动监测、回放棘尖波/癫痫活动搜索及分析、频谱/趋势图/aEEG及分析； 相关分析/相干分析/小波分析/独立成分分析 导联设置可满足“10-20”和“10-10”系统可包含非EEG导联； 模块功能： 支持实时视频图像与EEG同步采集，可轻松实现双视频

睡眠采集/分析功能 具有EEG、眼动、下颌肌电、心电、腿动、血氧、二氧化碳浓度等采集功能 可完成睡眠分期、心率分析、腿部运动分析、血氧分析、睡眠现象搜索等 各种参数趋势图 模块功能： 闪光视觉诱发电位(FVEP)、模式翻转视觉诱发电位(PVEP) 脑干听觉诱发电位(ABR)、中/长潜伏期听觉诱发电位(MLAEP/LLAEP)、前庭诱发肌源性电位(VEMP) 体感诱发电位(SSEP)、脊髓诱发(TSEP)、三叉体感诱发(SCEP) 认知电位(P300)、失匹配阴性波(MMN)、伴随负反应(CNV)；

模块功能： 神经传导 运动神经传导；感觉神经传导；微移；复合传导；F波；H反射、H反射(成对刺激)；重复电刺激；瞬目反射 交感皮肤反应；运动单位数目估算(MUNE);震颤分析；骶骨反射；球海绵体反射； T反射（*）；经颅磁刺激（*）；*项需另外购买相应的刺激器 定量肌电图 自发肌电：静息、纤颤、束颤、正锐波、肌强直放电、椎体束外刚性、震颤 干扰相分析(IPA)：翻转幅度-翻转频率图/表、频谱分析图/表 运动单位分析(MUP)：自动MUP采集和手动MUP采集、幅度分布/时限分布/相位分布/时限-幅度分布图表单纤维肌电图(SFEMG)、 巨肌电图 模块功能： 治疗多动症、矫正成瘾等 多用于科研 模块功能： R-R interval； R-R Valsalva； cardio-vascular refiex test 模块功能（此模块必须与脑电图模块和常规诱发电位模块同时配置）： 多达21通道的(与脑电图同步)P300、CNV、MMN以及和 长潜伏期听觉诱发电位 视觉诱发电位 诱发电位地形图

电生理实验常见问题解答

电生理实验常见问题解答（1）『转载』 2010-10-09 14:53 请问目前分析细胞外放电的信号处理软件较好的是什么？ 价格昂贵的有国外的PCLAMP系列软件和POWERLAB；价格便宜的较好用的有国产的PCLAB 和MEDLAB。如果感兴趣输入GOOGLE，一搜即知。axon guide是很经典的哦，大家可以到公司主页上下载本书主要针对PATCH，是AXON公司的产品配套广告说明书，但是也包含了不少基本电生理知识，集中阅读一下第1、2章节有帮助。可以下载看看，网站如下，https://www.docsj.com/doc/bb14927015.html, 请教：干扰的大小如何检测？ 检测干扰大小和你记录电信号一样，可以从相关软件读出来，也可以从示波器上读出。建议丁香妹妹找一些基础电生理书籍熟悉一下，不要着急，先入门为重。 请问微电极的电阻如何测量?怎样才能保证电极尖端已被电极内液完全充满? 给予电极一个电流/电压，可以从示波器上读出来，也可以从相应的放大器上显示出来。建议购买带有芯的玻璃电极，这样可以简单地从尾部灌入内液后，轻轻用手指敲打电极即可；如果是无芯电极，就需要先用注射器将电极尖端充满，而后在从尾部灌入内液。 问题是有时尖端太细,从尾部注入内液后,很难保证尖端全被充满. 注射器接皮管——皮管接电极尾部——电极尖端深入电极液中——抽吸注射器——电极尖端充满液体——再从电极尾部管电极内液——解决问题了。 我在记录细胞外放电时,干扰太大,诸如50hz的交流电干扰,请问如何尽可能地排除这些干扰信号? 交流电干扰应该不难处理，只需要中间接一个直流电转换器即可。 我想用Patch做平滑肌的BK通道,请教Pleace前辈,在酶解法分离细胞时,使用DMEM会因为含钙高而影响结果吗?文献多数都用无钙液，如果使用前我用PBS洗三次是否可以？ 你最好用无钙液，即使后来用PBS洗三次也不可以。因为之前的无钙液操作不仅可以保护细胞，而且可以使之处于低兴奋状态。 屏蔽和接地是电生理基本要求。如果你记录的信号足够大的话，可以不用屏蔽。但生物电信号一般都很弱，这就是为什么要屏蔽和接地。也是为什么很多时候晚上做实验干涉小——因为晚上用大功率电器的人相对少些，空间的电磁干扰相对小些，地线相对也干净一些。屏蔽笼即法拉第笼，一般是一层铜网，一层铁网。铜网屏蔽电，铁网屏蔽磁。屏蔽笼和系统的信号共地。关于地线，根据你的系统所记录的信号的强弱要求可以不同，信号越弱，要求越高。一般细胞外记录甚至更粗的记录要求相对不高。要是做到单通道水平，就不是凑合能解决问题的。就是这样，电生理的地线也应该和公共地线区分开来。一般比较正规的电生理实验室的地线应该单独埋设。地线埋设的要求其实很简单，尽量减小对地电阻。但实施起来就有很多方法了。我听说的一个方法是：从实验室下到地的主线用大概10cm 的铜缆。地上要挖个深1.5—1.8m、1.5*1.5m宽的坑。铜缆用铜铆钉（尽量减少材质造成的电阻差异）焊在一块1.5m*1.5m*4cm的铜板上。铜板放入坑中。板上埋2.5kg食盐、2.5kg 木炭。再将坑添上。主线到各个信号地分支点用铜棒焊接。铜棒上钻孔接地线。仪器电源不直接接到公共电源上，而是通过稳压隔离电源后接到另设的电源上。仪器电源的地线和系统的信号地分开接地。信号地接到单独埋设的地线上。仪器电源的地线也就是三相插头的顶端那个插头很多时候不接。 震动太大：可能原因有防震台防震效果不好，充气不足，或是实验室附近有什么强振动源；记录槽设计是否合理；液体流速是否太快？ 记录系统是否稳定：微电极放大器电容补偿是否调好，是否需要校正？记录系统干扰和噪

心电电生理网络管理系统解决方案

心电电生理信息管理系统解决方案（院内、院外） 沈阳市威灵医用电子有限公司

目录 一、公司简介---------------------------------------------------------------3 二、项目背景---------------------------------------------------------------5 三、建设心电信息管理系统的意义------------------------------------5 四、院内解决方案 1、院方需求---------------------------------------------------------7 2、解决方案---------------------------------------------------------9 3、实施步骤--------------------------------------------------------30 五、区域电生理联网系统 1、概述--------------------------------------------------------------32 2、解决方案--------------------------------------------------------33 3、实施步骤--------------------------------------------------------38 六、整体项目实施周期表----------------------------------------------39 七、售后服务及承诺-----------------------------------------------------40

电生理基础知识

病人需常规穿刺锁骨下静脉，股静脉，必要时穿动脉，常规放置心内电生理电极导管，最长的为高位右房（HR），HIS束，冠状窦CS，和右室心尖（RV）和射频导管熟称“大头”常规投照体位位左前斜位（LAO）右前斜位（RAO）前后位（AP）和后前位（PA）

LAO 下两个瓣环的大概位置注意CS 电极的形状

RAO下4个电极的位置 正位AP 注意一下脊柱的位置和电极弧度的变化 上两图为RAO、下为LAO 分别显示了环肺标测电极分别进入左上LSPV、右上RSPV、左下LIPV、右下RIPV肺静脉的情况

心律失常的射频消融已经从原来的二维观察过度到现在的三维重建，目前三维的的操作界面有两种，一种为圣犹达的Ensite 3000系统分NavX和Array ，NavX 系统为接触式标测，Array 为非接触式标测，就是熟称的“球囊”再有一种就是强生的“CARTO" 介绍一下Ensite 3000指导下的常见消融 这是该系统的电极贴片 Ensite系统采用的是贴片定位技术，分六块贴片，前后、左右、头颈后部，和左大腿内侧 中间的是一个计时模块，一旦激活计时模块，系统便倒计时18小时。 这是ensite系统的组成，想有些同道在导管室已经见过了，但还是给大家看一下

以房颤消融AF为例简要说明一下，第一步，导管进入心腔后由于AF需要穿房间隔，待穿刺后激活系统，系统可以显示导管在心腔内的位置，注意，图中一个长的是放在CS的冠状窦电极，一个是在心房4极电极 这是用导管在建立左心房模型，导管到过的位置就可以被记录下来，这样可以用导管在心腔内勾画一个模型，而且是立体的，图中是建的左房，因为房颤要打左房和肺静脉

电生理实验

电生理实验 (一)神经干动作电位的测定 一．实验目的 （1）观察神经干动作电位的特点 （2）观察记录动作电位的幅度与刺激强度的关系、动作电位的潜伏期及演变过程。二．实验对象 蛙的坐骨神经-腓神经标本。 三．实验器材 蛙板、蛙钉、剪刀、镊子、玻璃分针、瓷盘、滴管、任氏液。神经标本屏蔽盒、生物信号采集处理系统、打印机等。 四．实验原理 细胞兴奋时，产生动作电位的部位的除极化过程，使该处细胞膜外的电位下降。因此，发生兴奋的部位相对于静止部位而言呈负电（细胞膜除外），即兴奋部位与邻近未兴奋部位之间存在电位差。这种电位差可以用电极以及生物信号采集系统进行记录和显示。 五．实验过程 （1）制备蛙的坐骨神经-腓神经标本。 （2）连接测试系统。 （3）调节生物信号采集处理系统的参数至合适的工作状态。 （4）进行动作电位观察。刺激强度由1V起逐步增大，直至观察到产生动作电位。记录此时的刺激强度。 （5）继续逐步增加刺激强度，观察记录动作电位的幅度与刺激强度之间的关系。 六．实验结果记录、分析 （1）刺激强度从1V起逐渐变大。 1V： 1.5V：

1.8V： 2V：

由于担心过大电压对神经干产生损伤，在增加到2V以后就没有再加大。 （2）随着刺激的增大，动作电位的幅值没有变化，一直稳定在1.810mV。这反映了动作电位的“全或无”特性。 七．注意事项 （1）神经标本分离出来以后，应在任氏液中浸泡片刻，以恢复并稳定其兴奋性。 （2）神经标本放入标本盒中后，应保持标本与电极之间的良好接触，并保持标本的湿润（否则标本将失去活性）。 （3）刺激应从低强度开始逐渐增加至适当强度，且不宜使用过强的刺激以及连续刺激标本，否则将会对标本产生不可逆转的损伤。 八．思考题 （1）用动作电位的“全或无”理论，解释实验中观察到的动作电位的幅度与刺激强度之间的关系。 实验中增大刺激强度时，动作电位的幅度并没有变化。因为动作电位存在“全或无”的特性；当动作电位传导到另一位置时，动作电位幅度因刺激强度的增大有所增大，这是因为实验所用的不是单一神经，而是多个神经组成的神经干，这与“全或无”是不矛盾的。（2）解释双相动作电位和单相动作电位的产生机制。 在神经干上放置一对记录电极a、b，静息时记录不到电位差。当在神经干一段进行刺激时，表现为负电位变化的动作电位由此极端向另一端传导。当其传导到a电极时，a、b 之间出现电位差，a负b正。此时可记录到上相波。当动作电位传至两电极之间是时，a、b 又处于等电位状态。动作电位进一步传导当到达b电极时，a、b之间又出现电位差，a正b 负，此时可记录到下相波。然后记录又回到零位。如此获得的呈双相变化的记录就称为双相动作电位。 但是，当a、b之间的或b处的神经干被阻断或损伤时，由于损伤电位的存在，在进 行刺激之前就能记录到电位。当在神经干另一端进行刺激时，a极的电位变化实际上是负电

心电及电生理系统项目

心电及电生理系统项目 招 标 书

一、项目名称：心电及电生理网络系统项目 项目概述 心电电生理管理系统是医院电子病历系统的重要组成部分，该系统可以把全医院的动态心电图数据，运动心电图、肌电图、脑电图、TCD、肺功能、骨密度等心电电生理数据整合在同一平台。在医院的信息管理平台上，心电电生理检查完全实现在网上申请、收费、预约和登记，实时在线诊断，网上传输报告及远程会诊等，使全医院的各种电生理数据、报告实现数字化，网络化，无纸化集中管理。 根据信息化建设规划，结合临床应用，需要建设心电电生理网络系统，实现医院的心电电生理检查数据联网，实现数据共享，并且和医院电子病历和体检信息管理系统整合。在数字化平台下实现以下功能： 1、心电电生理报告的管理及整合 实现心电电生理检查的数字化，心电电生理检查报告和电子病历系统整合，实现在电子病历信息平台下能够调阅病人历次检查报告。 2、优化检查流程 对接医院内部现有的设备，包括心脏电生理科、呼吸内科、耳鼻喉科等的检查流程进行优化。系统能实现报告的集中管理、WEB共享，并且完善和医院现有信息系统的接口，使得数据融入到医院的整个系统中。 二、投标人资格要求： 1.具有独立法人资格和合法的经营资格，提供营业执照副本。 2.必须由法定代表人或其委托代理人参加投标，提供法定代表人或其委托代理 人的身份证，委托代理人参加投标的须提供法定代表人授权书. 3.提供具有履行合同所必需的设备和专业技术能力。 4.没有被列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严重违 法失信行为记录名单及其他不符合规定条件的供应商。 5.本项目不接受联合投标； 注：上述条款要求文档应须同时提供原件备查、复印件加盖公章。 三、评标方法：竞价采购 四、招标内容：

电生理实验常见问题解答

电生理实验常见问题解答

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电生理实验常见问题解答（1）『转载』 2010-10-09 14:53 请问目前分析细胞外放电的信号处理软件较好的是什么？ 价格昂贵的有国外的PCLAMP系列软件和POWERLAB；价格便宜的较好用的有国产的PCLAB 和MEDLAB。如果感兴趣输入GOOGLE，一搜即知。axon guide是很经典的哦，大家可以到公司主页上下载本书主要针对PATCH，是AXON公司的产品配套广告说明书，但是也包含了不少基本电生理知识，集中阅读一下第1、2章节有帮助。可以下载看看，网站如下，https://www.docsj.com/doc/bb14927015.html, 请教：干扰的大小如何检测？ 检测干扰大小和你记录电信号一样，可以从相关软件读出来，也可以从示波器上读出。建议丁香妹妹找一些基础电生理书籍熟悉一下，不要着急，先入门为重。 请问微电极的电阻如何测量?怎样才能保证电极尖端已被电极内液完全充满? 给予电极一个电流/电压，可以从示波器上读出来，也可以从相应的放大器上显示出来。建议购买带有芯的玻璃电极，这样可以简单地从尾部灌入内液后，轻轻用手指敲打电极即可；如果是无芯电极，就需要先用注射器将电极尖端充满，而后在从尾部灌入内液。 问题是有时尖端太细,从尾部注入内液后,很难保证尖端全被充满. 注射器接皮管——皮管接电极尾部——电极尖端深入电极液中——抽吸注射器——电极尖端充满液体——再从电极尾部管电极内液——解决问题了。 我在记录细胞外放电时,干扰太大,诸如50hz的交流电干扰,请问如何尽可能地排除这些干扰信号? 交流电干扰应该不难处理，只需要中间接一个直流电转换器即可。 我想用Patch做平滑肌的BK通道,请教Pleace前辈,在酶解法分离细胞时,使用DMEM会因为含钙高而影响结果吗?文献多数都用无钙液，如果使用前我用PBS洗三次是否可以？ 你最好用无钙液，即使后来用PBS洗三次也不可以。因为之前的无钙液操作不仅可以保护细胞，而且可以使之处于低兴奋状态。 屏蔽和接地是电生理基本要求。如果你记录的信号足够大的话，可以不用屏蔽。但生物电信号一般都很弱，这就是为什么要屏蔽和接地。也是为什么很多时候晚上做实验干涉小——因为晚上用大功率电器的人相对少些，空间的电磁干扰相对小些，地线相对也干净一些。屏蔽笼即法拉第笼，一般是一层铜网，一层铁网。铜网屏蔽电，铁网屏蔽磁。屏蔽笼和系统的信号共地。关于地线，根据你的系统所记录的信号的强弱要求可以不同，信号越弱，要求越高。一般细胞外记录甚至更粗的记录要求相对不高。要是做到单通道水平，就不是凑合能解决问题的。就是这样，电生理的地线也应该和公共地线区分开来。一般比较正规的电生理实验室的地线应该单独埋设。地线埋设的要求其实很简单，尽量减小对地电阻。但实施起来就有很多方法了。我听说的一个方法是：从实验室下到地的主线用大概10cm 的铜缆。地上要挖个深1.5—1.8m、1.5*1.5m宽的坑。铜缆用铜铆钉（尽量减少材质造成的电阻差异）焊在一块1.5m*1.5m*4cm的铜板上。铜板放入坑中。板上埋2.5kg食盐、2.5kg 木炭。再将坑添上。主线到各个信号地分支点用铜棒焊接。铜棒上钻孔接地线。仪器电源不直接接到公共电源上，而是通过稳压隔离电源后接到另设的电源上。仪器电源的地线和系统的信号地分开接地。信号地接到单独埋设的地线上。仪器电源的地线也就是三相插头的顶端那个插头很多时候不接。 震动太大：可能原因有防震台防震效果不好，充气不足，或是实验室附近有什么强振动源；记录槽设计是否合理；液体流速是否太快？ 记录系统是否稳定：微电极放大器电容补偿是否调好，是否需要校正？记录系统干扰和噪

电生理标测系统生产厂家(最新)

三维电生理标测系统生产厂家： 目前的中国心脏三维标测系统市场，基本上被圣犹达、强生和四川锦江所垄断，前二者各占90%的份额，后者占9%的份额。生产厂家如下： 1 厂家：美国圣犹达医疗用品有限公司（St. Jude Medical, Inc） 型号：EnSite Velocity心脏三维标测系统 特点：EnSite Velocity心脏三维标测系统能清晰迅速地标测心脏的解剖结构，有助于临床心脏电生理医生诊断和治疗各类心律失常，主要在电生理导管室的射 频消融手术中使用。 2 厂家：美国强生 型号：CARTO 3为最新一代三维电生理标测系统 特点：CARTO 3的成像采用磁电双定位(ACL)的原理。磁场采用GPS技术为原理，是定位的基础，具有定位导管位置和对电场进行时时校正两个功能，此外还具有影像化建模技术（FAM）和）全流程优化（COC）的特点。 3产品名称：3Ding心脏三维标测系统 生产厂家：四川锦江电子科技有限公司 产品型号：3Ding 特点：3Ding心脏三维标测系统采用数字频率合成、数字解调、数字处理，形成精确、稳定、安全的三维电场定位；自适应电场三维定位，重定位精度≤1mm；开 放的平台，无须专用导管，较大的降低手术费用。3Ding心脏三维标测系统突 破性地将三维标测、完备的二维电生理标测及内置程控刺激仪结合在一个系统 中，信息同步共享、操作方便、功能完善、性能稳定。 4产品名称：LocaLisa System Intracardiac Navigation System 生产厂家：美国美敦力公司Medtronic 产品型号：LocaLisa 2012年上市 二维电生理标测系统生产厂家 目前，中国二维电生理设备市场主要有6大品牌，市场份额从高到低依次为锦江电子、GE、St.Jude、Bard、华南医电与宏桐。6大品牌在二维电生理设备市场基本处于被四川锦江垄断大部分市场的格局。

病理形态学实验室

病理形态学实验室： 用光学和电子显微镜技术进行大体、组织、细胞、亚细胞四个层面的病理形态诊断和研究工作。开展并提高与心血管病理相关的组织化学、细胞化学（包括免疫组织和细胞化学、放射性同位素示踪技术等）和形态计量技术在临床病理诊断和研究中的应用。病理室担负日常临床病理检验和诊断以及院内、外有关技术的自主及协作研究项目。 分子病理学实验室： 采用最新分子生物学技术对病理标本进行包括致病基因检测，基因诊断，特殊微生物检测，病因学分子诊断，移植细胞增殖、分化、转移、归巢等分子机制，病理环境下组织、器官结构与功能重塑与逆重塑的分子学机制，药理作用的分子学机制等研究。 生理学实验室： 研究心肌收缩功能(心力衰竭的发生机制)，血管舒缩功能(高血压、动脉粥样硬化等)，心、脑、肺损伤保护，药物作用和机制，转基因动物及移植细胞功能等 电生理学实验室： 采用细胞电生理、膜离子通道(膜片钳)和细胞内离子通道(共聚焦显微镜)等生物物理学手段进行心血管病的发生机制和致病基因功能研究。 具备完成这些工作的各种设备：高压相色谱、膜片钳3台、离体心脏研究装置（Langendorff），血管张力测定设备等，能进行心肌细

胞电生理及生物电指标测定、心肌细胞离子通道测定、心肌细胞分离、大白鼠及豚鼠脑海马细胞分离及离子通道、全细胞测定；进行离体心肌灌流的心肌保护研究以及心肺灌流及保护的研究；进行心肌张力及各种血管张力的实验研究；进行血浆芬太尼、异丙酚及儿茶酚胺等浓度测定、心肌及肺组织ATP测定，等等。 小动物呼吸机 滨州医学院教学(实验)教案 生理学实验器材介绍 一、实验概述： 1、实验要求： （1）进入实验室必须穿隔离衣 （2）不要随意开关实验设备（特别是电脑） （3）按要求分组，按要求领取实验器械 （4）严格按照实验步骤完成实验 （5）完成试验后，清洗器械并放入指定地点 （6）值日生打扫实验室，并检查门窗水电 2、实验内容： 理论课的重点和难点知识，如神经电生理现象，心血管活动的神经-体液调节，呼吸运动的调节，尿生成的调节，血液凝固的影响因素等等。 3、实验目的： 学会一些基本的实验方法，掌握基本的实验操作技能，复习和验证课堂上的理论知识，养成科学严谨的实验态度。 二、常用实验动物： （一）常用实验动物及习性 1、小鼠：成熟早、繁殖力强。 2、大鼠：精密的生物工具，常用于科研实验 3、家兔：性情温顺，解剖特点①耳大，表面分布清晰血管 ②支配主动脉弓的减压神经与迷走神经完全分开 4、豚鼠：温顺胆小；耳蜗发达、听觉灵敏但对温度的适应力差 5、两栖类：如蟾蜍—两个心房，只有一个心室 6、犬：内脏结构和比例与人相似，适于慢性实验 （二）常用实验动物的选择：

多道电阵列电生理记录系统性能指标

一、多道电阵列电生理记录系统性能指标 用于可控刺激多个神经元和记录多个神经元的电位活动，有可扩展的编程的软件系统。要求： 1.64道电极阵列芯片，培养神经元 2. 64道电极都可以由程序控制给电流刺激 3. 每道都可以测电极的阻抗； 4. 可以很大程度去除刺激伪迹； 4. 能长期在放置显微镜下在电极阵列芯片上培养神经元 所需的二氧化碳、培养液和维持温度灌流系统； 5. 高速USB接口，能由与它设备通过TTL通讯，接收其 它仪器的控制和控制其它仪器。 参数： 总电压增：益1200 (61dB) 输入参考噪声：< 2μVRMS (200Hz-3KHz) 低频死角：0.5Hz — 500Hz (adj.), 40dB/dec 高频死角：1KHz — 20KHz (adj.), 20dB/dec 采样频率：Up to 30KHz 温度控制：(5°C min.) to 45°C，±0.1°C 最大刺激电压：±2V 最大刺激电流：±250μA，电流顺从电压 同时刺激：64道 伪迹恢复时间：刺激电极< 2ms，记录电极< 400μs

二、全电动高时空与空间高分辨显微图像分析系统 用途与功能：光刺激神经元和记录神经元的活动，进行高分辨率的显微成像，研究神经元活动的时空性质。有成像和分析的软件系统，并可以具有可编程的扩展性。能与其它仪器用TTL信号进行通讯，接受其它仪器的控制进行记录。 主要技术指标： 1 光学系统：ICCS无限远校正光学系统，物镜/目镜独立双重(轴向、径向)色差校正，保证显微图象的真实性，45mm 国际标准物镜齐焦距离。 2 采用最新EC图像对比度增强技术。采用最新无限远光学系统，物镜目镜独立的双重（轴向、径向）色差校正。 3 全系统齐焦技术，保证每个物镜和每个图像出口与观察口都有一致的齐焦性能。 4 显微镜内置电动调焦驱动马达，最小步进：10 nm，调焦行程：10 mm，同轴、独立的粗微调焦手柄，调焦限位，电动的从聚焦位置移出/复位功能。 5 观察镜筒：双目镜筒，带摄影分光镜筒，倾角30°，视野23mm 6 照明装置：12V100W卤素灯，光量预调开关 7 物镜：物镜：针对倒置显微镜应用优化的高分辨率、高透过率荧光物镜。10X，数值孔径0.25，工作距离4.4 mm