电生理实验常见问题解答
电生理实验常见问题解答（1）『转载』
2010-10-09 14:53
请问目前分析细胞外放电的信号处理软件较好的是什么？
价格昂贵的有国外的PCLAMP系列软件和POWERLAB；价格便宜的较好用的有国产的PCLAB 和MEDLAB。如果感兴趣输入GOOGLE，一搜即知。axon guide是很经典的哦，大家可以到公司主页上下载本书主要针对PATCH，是AXON公司的产品配套广告说明书，但是也包含了不少基本电生理知识，集中阅读一下第1、2章节有帮助。可以下载看看，网站如下，https://www.docsj.com/doc/6611498100.html,
请教：干扰的大小如何检测？
检测干扰大小和你记录电信号一样，可以从相关软件读出来，也可以从示波器上读出。建议丁香妹妹找一些基础电生理书籍熟悉一下，不要着急，先入门为重。
请问微电极的电阻如何测量?怎样才能保证电极尖端已被电极内液完全充满?
给予电极一个电流/电压，可以从示波器上读出来，也可以从相应的放大器上显示出来。建议购买带有芯的玻璃电极，这样可以简单地从尾部灌入内液后，轻轻用手指敲打电极即可；如果是无芯电极，就需要先用注射器将电极尖端充满，而后在从尾部灌入内液。
问题是有时尖端太细,从尾部注入内液后,很难保证尖端全被充满.
注射器接皮管——皮管接电极尾部——电极尖端深入电极液中——抽吸注射器——电极尖端充满液体——再从电极尾部管电极内液——解决问题了。
我在记录细胞外放电时,干扰太大,诸如50hz的交流电干扰,请问如何尽可能地排除这些干扰信号?
交流电干扰应该不难处理，只需要中间接一个直流电转换器即可。
我想用Patch做平滑肌的BK通道,请教Pleace前辈,在酶解法分离细胞时,使用DMEM会因为含钙高而影响结果吗?文献多数都用无钙液，如果使用前我用PBS洗三次是否可以？
你最好用无钙液，即使后来用PBS洗三次也不可以。因为之前的无钙液操作不仅可以保护细胞，而且可以使之处于低兴奋状态。
屏蔽和接地是电生理基本要求。如果你记录的信号足够大的话，可以不用屏蔽。但生物电信号一般都很弱，这就是为什么要屏蔽和接地。也是为什么很多时候晚上做实验干涉小——因为晚上用大功率电器的人相对少些，空间的电磁干扰相对小些，地线相对也干净一些。屏蔽笼即法拉第笼，一般是一层铜网，一层铁网。铜网屏蔽电，铁网屏蔽磁。屏蔽笼和系统的信号共地。关于地线，根据你的系统所记录的信号的强弱要求可以不同，信号越弱，要求越高。一般细胞外记录甚至更粗的记录要求相对不高。要是做到单通道水平，就不是凑合能解决问题的。就是这样，电生理的地线也应该和公共地线区分开来。一般比较正规的电生理实验室的地线应该单独埋设。地线埋设的要求其实很简单，尽量减小对地电阻。但实施起来就有很多方法了。我听说的一个方法是：从实验室下到地的主线用大概10cm
的铜缆。地上要挖个深1.5—1.8m、1.5*1.5m宽的坑。铜缆用铜铆钉（尽量减少材质造成的电阻差异）焊在一块1.5m*1.5m*4cm的铜板上。铜板放入坑中。板上埋2.5kg食盐、2.5kg 木炭。再将坑添上。主线到各个信号地分支点用铜棒焊接。铜棒上钻孔接地线。仪器电源不直接接到公共电源上，而是通过稳压隔离电源后接到另设的电源上。仪器电源的地线和系统的信号地分开接地。信号地接到单独埋设的地线上。仪器电源的地线也就是三相插头的顶端那个插头很多时候不接。
震动太大：可能原因有防震台防震效果不好，充气不足，或是实验室附近有什么强振动源；记录槽设计是否合理；液体流速是否太快？
记录系统是否稳定：微电极放大器电容补偿是否调好，是否需要校正？记录系统干扰和噪
声情况如何？
细胞状态的问题：状态不好；或是与细胞的放电类型有关，有时电极刺激了某些类型的细胞，细胞产生放电，适应后放电消失。
温度控制！改变温度对场电位的影响非常大（切身体会）。
系统稳定性！微操是否会漂移，试验过程中是否需要锁定微操位置
基线调节不应该调holding电压，应该调offset，也就是液接电位；
建议你首先计算一下你所用的电极内液的液接电位（clampex中有计算方法），看看到底与0差多少；另外，保证软件和硬件中都没有加holding电压；如果这些都没问题，判断是否硬件问题，每条接口线是否都连接正确并接触良好？判断是否软件设置中的错误，reset全部设置到出厂状态，然后重新设置！
对单通道的了解不是很多，仅提供一点参考意见：
1、单通和whole-cell主要在于噪音水平的差异。单通要求较高，噪音水平最好小于1-2pA，这是由于单通的信号非常小，比如Na，也就在1-2pA左右，而K，最大的也不过10pA，如果抗干扰性差的话，信号很容易被噪声掩盖（所以gain要打大些）。Ca的信号我没有记到过，不过应该也不会大于10pA。
2、操作基本相同。我用的是Axon200B，外部连线没有改动，但用的是patch(beta=1)，据说在这种模式下，放大器内部的线路连接和whole-cell (beta=1)不同。protocol的设置，主要有两方面不太相同，一是电极内外液（给药方式不同），二是钳制电位（针对你给的step电压刺激）。如果是电压门控性离子通道的话，好像inside 和outside的钳制电位方向不一样，而且电流方向也不同，具体的您最好还是查查文献。
3、clampfit 9.0是可以直接分析单通道的，如果是8.0的版本的话，我不太清楚。
学习膜片钳教材推荐（13本）
1.王绍, 徐涛. 电生理学方法.
2.韩济生主编. 神经科学原理. 第二版. 北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1999.
3.张均田主编. 现代药理学实验方法. 北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1997.
4.陈军. 膜片钳实验技术. 北京: 科学出版社, 2001.
5.刘振伟. 脑片膜片钳技术及其研究概况.
6.张均田主编. 神经药理学研究进展. 北京：人民卫生出版社，2002.
7.康华光主编。膜片钳技术及其应用，科学出版社，2002
8.Sakmann B and Neher E. Single-Channel Recording. New York: Plenum Press. 1983.
9.Sherman-Gold R. The Axon Guide. Axon Instruments Inc. 1993.
10.Chad J and Wheal H. Molecular Neurobiology: a practical approach. New York: Oxford niversity Press, 1991.
11.Hille B. Ionic Channels of Excitable Membrane. Massachusetts: Sinauer Associates Inc.1992.
12.Methods in Enzymology. 1992; 207
13.Areles Molleman,Patch Clamping : An Introductory Guide to Patch Clamp Electrophysiology. 2002.Wiley Canada.
一点小更正：
8.Sakmann B and Neher E. Single-Channel Recording. New York: Plenum Press. 1983
最新为1995年第二版，FTP中有pdf电子书。
11.Hille B. Ionic Channels of Excitable Membrane. Massachusetts: Sinauer Associates Inc.1992.
最新为2001年第三版。
medicinegiant推荐的很精彩。
我觉得基线不能回零的原因有三个：1，可能是你的电极的银丝该重新镀了，如果你用的电极是镀有Agcl. 2，可能是你的电极夹持器内有了水，里面潮湿，所以导致基线漂移。3，可能是由于你的地线没有接好或是地线也需要重新镀Agcl了
实现高阻封接的注意事项:
1.分离细胞时,酶消化应该适度使膜表面洁净;
2.浴液必须严格过滤,除去杂志和灰尘污染;
3.电极材料宜选用硬质玻璃,使之具有低噪声的性能,其直径尽可能的小而且要经过热抛光;
4.涂敷硅酮树脂改善介电特性;
5.电极进入液面时,可稍加10cm水柱的正压,封接时应施加20-30cm水柱的负压,在几秒钟内使Rseal上升到数十个G欧;
6.正压解除后,每个电极只能使用一次;
7.若电极内含有钙离子,应使用HEPES缓冲液;
8.使用低渗透(10%)的电极内液比较容易形成高阻封接.
电容补偿对微电极放大器的记录的影响可能有这两种情况：一是欠补偿，会导致记录到信号失真或畸变；二是过补偿，会引起微放的自激，使记录系统不稳定。MEZ－8201我用过。它的探头上有个cal接头。将cal与探头的地接头相连。8201面板上有校正电压选择。输出校正电压后，可以在显示屏上看到记录的校正电压。如果补偿正确应该是方波，如果是欠补偿，方波的直角被滤掉；如果是过补偿，则看到的是双向三角波。这时你调节面板上的电容补偿旋钮，使看到的波形尽量接近方波。8201的说明书上有详细的说明，可以照着来。
用无钙液的目的就是记录不出钙激活的钾电流，类似于whole-cell potassium记录中Ia 的记法（用全部钾电流减去Id部分），再正常外液钾电流减去无钙液钾电流。
我觉得还是你的电容补偿没有调好。你可以先在cal与地之间串个大电阻，10M左右，相当于电极电阻大小（8201附件里应该有这么大的电阻，用于校正用）。这时调节电容补偿。等这样调好后在测电极阻抗。因为电极本身除了电阻外还有电容，还要加上电极与浴液之间的电容。所以你首先要将放大器内部的电容补偿调好后（排除电极电容以及其他杂散电容的影响），再进行测量就比较准确了。仪器窗口显示的电压是你所记录的电压。但你现在记录的是细胞外的电压，也就是细胞膜上通道开放引起的膜外的电流变化。而不是膜内外之间稳定的电势差。因此记录的电位有波动是正常的。你可以将看到的电压波动和记录下来的电压比较一下。看两者之间相差多大。窗口的电压值应该不会与记录的相差太大。
BK通道电流很大，做单通道电流，电极的拉制，不一定要涂sylgard，入水电阻5Mo左右比较的合适，封接达到10G以上并难做到，而且并不一定要到10G，只要封接稳定，噪声低于1PA，就可以记到单通道电流。
HEKA的Pulse-pulsefit,不太好做单通道分析，建议使用Pclamp9，或 minianalysis功能强大。
胰岛β细胞的patch clamp很难作的，主要是分离单细胞的质量很难保证。
电导、电流-电压图与直方图能用clampfit得出来，但用他不太方便，作图功能不是太强，建议使用sigmaplot
灌流装置很简单，用灌流瓶重力灌流就可，灌流瓶通过一般的一次性输液器与培养皿相连，连接管入水的部分用细的硅胶管。流出道用同样口径的细管，然后将流出管与负压吸引装置相连，或者用蠕动泵。如果要让DRG在盖波片上贴壁，你怎么灌流？怎么保证细胞的活性？如果你担心在培养皿不好贴壁，大可放心。不过培养皿一定要干净，最好一次性的。
当然可以让DRG在玻片上贴壁，但玻片应放在加有细胞外液的皿里，方便灌流。这样做的好处是你可以一片一片取出来做，时间可以久一些。
因为我是新手，我们实验室也才建，所以遇到一些问题只好向你们请教。我做大大致步骤是：
1．配置人工脑脊液（ACSF）：
成分：NaCl 124mmol/L KCl 5mmol/L KH2PO4 1.2mmol/L MgSO4 1.3mmol/L CaCl2 2mmol/L NaHCO3 26mmol/L Glu 10mmol/L用超纯水配置。
2. 取大鼠，迅速断头，剪开头皮，拨开颅骨，取出大脑和小脑并置于含95%O2和5%CO2
饱和的冰冷的ACSF中。马上在浸有ACSF的滤纸上将小脑略加修剪，同琼脂一起用502胶水粘在切片槽的固定位置。槽中放有冰冷的ACSF（小于4℃），并不断通入含95%O2和5%CO2混合气体。用振动切片机切出小脑矢状脑片（400um），切好的脑片置于25℃下含95%O2和5%CO2饱和气体的ACSF中孵育2小时。
3.电极内充液：将含2%膀胺天蓝的0.5mol/L的醋酸钠溶液充入微电极尖端，电阻大约在2兆。银丝上镀有氯化银，但可能不太多了。
4. 将孵育好的脑片移入灌流槽小室（设定温度在32℃左右），并用含95%O2和5%CO2混合气体的ACSF以4ml/min的流速持续灌流。记录时，将记录微电极用微推进器推进，插入脑片，观察放电，并****声音。
我做出来一次，连续记录到了放电，而且放大器上的电压数值基本稳定在74mv左右。但近好几次都没记录到，所以纳闷到底哪里出了问题。麻烦你帮我看看，给我点指导。我也问了几个人，他们都说是脑片活性的问题，但我觉得我做的已经很小心了。多谢！
1、用的大鼠鼠龄多大？如果是幼鼠，取脑没有什么问题。取脑时间越短越好。如果是成年鼠，最好用冰的acsf心脏灌流后再取脑。不过成年鼠我也没做过。
2、取脑后在冰冻的氧饱和acsf内冻10min后再上台切片。
3、电极尖端还可以再细点，阻抗到5－10M（尖端越细，记录的电位越接近单个细胞的电位变化。），配膀胺天蓝时记得用滤纸过滤后再使用。银丝重新镀一层氯化银。
电生理抗干扰并不难：其一，仪器连接要有章法。导线不能肆意穿插。其二，最好有共同的地线。其三，动物接地要良好最后，电极拉制要过关。
成年鼠和幼年鼠不一样的地方是：
1、成年鼠颅骨比较硬，手术困难程度大些；
1，在做大鼠的立体定位时，在准确无误的上好耳棒的前提下，根据立体定位图谱，（Paxinos & Waston, 1986），最好还是采用耳间线定位法。尽量不要采用前囟（Bregma）法。特别是要定位比较深层的脑核团组织。前囟（Bregma）法不可靠！
2，乌拉坦麻醉行人工呼吸，乌拉坦应该不会对血流动力学产生显著性影响。这里关键还是乌拉坦的剂量要合适。建议你还是使用戊巴比妥钠，比较好。因为乌拉坦的安全剂量较窄。
3，验证中枢位点，通用方法是，电泳。这也就是为什么玻璃微电极要灌充膀胺天蓝的原因。
如果是成年鼠的话，要进行4度蔗糖人工脑脊液心脏灌流。加入蔗糖是为了维持细胞渗透压并功能。灌流时注意肝脏颜色，变白即可。去脑后冰冻2分钟确实时间太短。我个人觉得至少得7～8分钟。如果时间太短，脑片内层细胞温度来不及降低，一方面细胞代谢高，另一方面切片时硬度不够，也易损害细胞。相反，如果冰冻太久，形成冰晶，也易引起细胞死亡。
关于取脑时间：一般要求在1min以内。我个人认为1min15sec不致于造成太大影响。如果取脑时间稍常的话，可以在打开部分颅骨后先在冰水ACSF中让大脑冷却几秒钟再继续。我一般打开颅骨后的取脑过程是在冰水ACSF进行的。不知你是不是也是这样？
灌流速度确实会影响脑片活性。一般灌流速度在2~4ml/min. 速度太慢，会导致细胞缺血缺氧，加快死亡。如果你的实验是这个原因，应该有个时间上的关系，即随时间推移，成功率降低，或记录到放电时间缩短。建议你再检查一下配置的ACSF的PH和渗透压。
电极溶液的离子组成必须和细胞膜所暴露的体内或培养液的离子组成相似。因此当细胞外溶液作为浴液时主要由NaCl组成，全细胞或细胞外面向外分离膜片记录中细胞内液作为电极灌注溶液主要含有钾离子。典型的ECS（细胞外液）和ICS（细胞内液）组成可以在表中化学组成细胞外液（mM）细胞内液（mM）
Na+ 126 5
K+ 6 147
Mg2+ 2.5 1.2
Ca2+ 1.2 0
Cl- 125 150
GTP 0 0.1
ATP 0 5
HEPES 10 20
Glucose 11 11
Sucrose 67 0
可以看到。在试验中我们有许多类型的离子组成可以运用，但PH值和渗透压对成功的封接是非常关键的。理论上，ECS的PH和渗透压应该和待测物来源环境一致，即培养细胞时的培养液，PH是由缓冲液来调节，在膜片钳试验中有以下几种常用的缓冲溶液：CO2缓冲溶液，是由气体CO2和HCO3-平衡组成的。CO2缓冲溶液的许多特性被认为是对于脊椎动物待测物的生理环境最为相似的缓冲液。但CO2缓冲液必须需要一个装置使溶液始终暴露于CO2而不是空气。其他缓冲液如磷酸盐或HEPES虽然被广泛运用但有报道一些间接作用。实验的经验将决定最终使用那种缓冲溶液。当一个细胞是从HEPES缓冲介质中生长来的，那么
我们很难反对使用HEPES缓冲溶液，但对于新鲜的分离的细胞或组织切片使用CO2缓冲溶液比HEPES缓冲溶液要安全。电极中的缓冲溶液是个难题，因为其中的气体成分是难于控制的，因为溶液暴露于空气，因此这时不能使用CO2缓冲溶液。并且ICS通常需要运用化学手段如EGTA排除钙离子，钙离子使溶液的PH很低，并且需要高浓度的HEPES或其他缓冲溶液，同时放大了一些干扰作用。大多数脊椎动物的的ECS的PH值大约是7.4。在试验过程中保持PH恒定是非常重要的，因为PH的很小的变化也会影响离子通道的作用。ICS 稍稍偏酸一些大约在7.2~7.3。
1. 判断地线是否接好的一个简单方法就是在开机记录状态下，观察，当取下实验用仪器，比如，放大器或刺激器上所连接的地线后，你所记录的电信号是否会发生变化，也就是说，你要仔细观察地线的”有”和”无”是否对生物电信号的记录产生明显的影响。如果有影响，说明你所连接的地线产生了作用。请注意，接地时要一点接地，而不要多点接地，造
???大地环路。至于，到底需不需要在实验室外面挖坑，埋特殊而专门的地线。众说纷纭。
其实，只要你的生物记录仪器的辨差率足够大的话。并且，你的仪器连接有章法。那些专门的特殊的埋地式的地线以及屏蔽网都可以省去。
2. 在你的实验室，必备的仪器都有了，然而，你可能忽略了一件不起眼的设备。也许你忘记写了。那就是外接扬声器，也就是我们平常所说的音频****器。一个好的有经验的电生理工作者，他的敏锐之处不是在眼睛上的看，而是在耳朵里的听。可以说，神经信号的有无一听即知。如果你没接扬声器的话，我建议你接上一个听听。这对你的提高很有帮助。
3. 有没有稳压器，意义不大。当然，如果你不放心的话，你可以接上一个。我想这主要是出于保护仪器的目的。
4. 对于你设置的高低频滤过参数。不同的实验室，不同的参数。但是，大同小异。你的参数也是这样。我的建议是，你在调节微调旋钮时（如果你的仪器允许这样做的话），边听，边看。很容易找到适合你实验的最佳参数。
5. 我一直都是认为电生理的记录关键是在电极的拉制上，不管是胞内记录，还是胞外记录。都要有一个???适的电极。当你在遇到记录不到生物信号的时候，多想一想你的记录电极
是不是有问题。当然，这是有一个前提的，即你的生物信号放大系统工作正常。对于你的实验，我感觉电极阻抗不合适。建议你提高电极阻抗，再试试。
6. 神经元的放电，有自发（spontaneous response）和诱发（induced-response）两大类。而对于神经元放电频率的内在特性（ISI-Inter Spike interval）的研究,目前正是一个热点。查查Pubmed，你就会很有收获的。
电生理实验中，记录电极所选用的材料通常有铂金丝，Ag或AgCl丝，镍铬合金，不锈钢。这主要考虑材料的电阻和传导性。铜丝一般情况下较少使用，但不是不可使用。比如，制备记录肌电的同心圆电极时就可采用在针管内插入漆包线的方法。但是对于玻璃微电极内的引导电极丝，一般都是选用Ag-AgCl丝。
玻璃微电极是我们通常选用的细胞外记录的电极。当然，也是胞内记录和膜片钳记录的专用电极。通常情况下，我们要考虑电极阻抗。为什么呢，因为在电生理实验中，没有一定的输入阻抗，是记录不到合适神经元的细胞放电的。那么这里我们要清楚是什么因素决定电极阻抗的大小。简单的讲，对于玻璃微电极而言，电极尖端（tip）的口径大小起了决定性作用。尖端越细，阻抗越高。正如你所言，电极阻抗小，相应的细胞信号的采集幅度
也会变小，当然也包括噪声也会变小。但是你有没有考虑过一个情况，在玻璃微电极阻抗较小的情况下，由于尖端口径较大，你的电极灌充液在不断的渗漏（leak）。这对细胞外记录是很危险的。对于你的胞外记录实验，电极尖端要在1 微米左右。简单的讲，电极阻抗较低能够收集到来自更大范围的更多的生物电信号。然而，一点需要考虑，你是在做单细胞放电记录。如果阻抗过低的话，势必会带来一个问题，多单位怎么处理?? 换句话讲，没有一定的电极阻抗，你是记录不到非常漂亮的单个神经元的细胞放电的（请注意，我这里使用的是单个神经元的概念）。而对于场电位的记录，通常不需要高阻抗的电极。在胞外单细胞记录中，你可以采用窗式幅度鉴别仪来处理（Function single unit recording method）多单位的情况。然而这不是一个好的办法去记录single unit。只是一个信号处理上我们通常采用的办法。因此，较为可行的记录办法是适当提高玻璃电极阻抗，从而让记录电极只记录单个神经元的放电。
对于离子通道的进一步研究是离子通道有两个或更多的构型状态，这些构型状态是相对稳定的。每种稳定的构型代表了不同的功能状态。例如，每种离子通道至少有一种开放的构型状态和一种或两种关闭的构型状态。离子通道在不同构型状态下的转换被称为门控。
相对于门控机制中离子通道的暂时的结构的变化，我们对于门控的分子机制还知之甚少。虽然我们可以运用图形来方便地描述离子通道从开放到关闭的过程，但这个方法或许只对特定的通道是准确的。更为常见的是，离子通道的门控包括通道构型的普遍的变化。例如，我们从高分辨率的显微镜和图象分析器得到的证据表明间隙结合离子通道的开放和关闭包括组成离子通道的六个亚基的固有的缠绕和倾斜。相似的证据表明骨骼肌细胞的Ach通道的激活是由组成离子通道孔道的五个亚基的协调的缠绕和弯曲完成的。在从关闭状态到开放状态的转换过程中出现的分子重排，由于形成了较宽的孔道并且更多的极性氨基酸到达离子通道的水溶性孔道的表面。离子通道门控有三种主要的生理模式：离子通道的一个区域的局部的构型变化；离子通道全长的构型的普遍变化；通道入口处的阻塞粒子的进入到排出之间的转化。
因为神经细胞的主要功能是产生短暂的电信号。三种主要的调节机制用于控制通道保持开放和激活的时间。一些通道受化学配体的调控。配体可以和通道直接结合，可以在细胞外的位点这时配体是递质，也可以在细胞内的位点这时是细胞质的特定成分如钙离子和核苷酸。另外配体通过对蛋白的磷酸化对离子通道进行共价修饰能激活细胞信号的瀑布式传递。另外一些离子通道受膜电位变化的调控。最后一些离子通道受细胞膜的机械牵拉作用的调控。在这些调控因素的影响下，离子通道进入下面三种功能状态：关闭和静息状态，开放（激活），或关闭和不可激活状态。
门控的快速作用对于瞬间到瞬间的信号传导是必要的，但门控会受到细胞代谢水平的长效变化的影响。例如在电压门控的钾通道对于细胞内的ATP水平很敏感，同时还有一些通道的门控特性随细胞内的氧化还原水平的不同而变化。
对于刺激引起通道从关闭状态向开放状态转换，这个过程是需要能量的。在电压门控的离子通道中能量来源于通道蛋白带电部分的穿过膜电场的运动，这部分称为电压感受器。电压感受器是有净电荷的因为感受器中有碱性氨基酸（正电荷）或酸性氨基酸（负电荷）。带电的电压感受器的穿越电场的运动为通道开放状态和关闭状态的转换提供了能量。在递质门控的通道中门控的能量来源于递质和通道的受体结合时所产生的能量。对于机械门控的离子通道能量来源于细胞膜的拉伸，认为这种拉伸可以通过细胞骨架或直接通过脂质双分子层的张力的变化传递到通道。
门控通道的信号也控制着通道开放状态和关闭状态的转换的速度。对于电压门控的通道，转换速度主要依赖于膜电位。虽然转换的时间从几微秒到几分钟不等但大多数需要几微秒。因此一旦通道开放将维持几微秒然后关闭，关闭维持几微秒后通道有重新开放。一旦转换
开始将自发的依次进行，因此此时再给予突然的电压上升的刺激，将会看到通过细胞膜离子通道的电流的全或无的梯形的变化。
递质门控通道和电压门控通道经过不同的过程进入离子通道不可激活状态。配体门控通道进入离子通道的不可激活状态是由于它们对配体的长期的暴露。这个过程被称为脱敏作用。离子通道的脱敏的基本机制还没有完全清楚。在一些通道中的脱敏作用是因为配体和通道相互作用的本质特征，而在另一些通道中则是由于蛋白激酶激活的通道分子的磷酸化引起的。
许多但不是全部的电压门控的离子通道能够在激活后进入不可激活状态。这个过程被称为失活。电压门控的钾通道和钠通道的失活被认为是通道内部构型发生改变，这种变化是由和激活控制区域分离的离子通道的亚单位或相应区域控制的。（在细胞内运用蛋白水解酶来终止电压门控的钠通道失活而不影响通道的激活的能力。）比较而言，电压激活的钙通道的失活需要钙离子的流入。细胞内钙离子浓度增加会使钙通道失活，直接方式是通过和通道内的控制位点结合，或运用间接方式通过激活细胞内的相应的酶这些酶对通道蛋白磷酸化而使通道失活。
外来因素如药物和毒素，也能影响离子通道的门控位点。大多数这些物质都是关闭通道的；只有很少的一些开放通道。一些成分和通道的结合位点和细胞内的门控配体的正常的结合位点是一样的，因此阻止激活剂的行使相应的功能。外来因素和通道的结合是不牢固的并且是可逆的，如箭毒封锁骨骼肌细胞膜上的烟酸Ach门控通道。外来因素和通道的结合也有可能是牢固的并且是不可逆的，如蛇毒的а-bungaro毒素封锁骨骼肌细胞膜上的烟酸Ach门控通道。有些外来物质是无竞争机制的，它们影响正常的门控机制却没有和配体的结合位点直接作用。例如药物安定和GABA门控的氯离子通道的调控位点结合使得通道对GABA反应的开放时间延后。这种间接影响不仅出现在配体门控的通道中，在电压门控和机械门控的通道中也存在。
离子通道的基因家族分类
大多数神经，肌肉细胞中的离子通道可以被分成几种基因家族。每个基因家族的成员都有相似的氨基酸序列和跨膜结构。每个基因家族认为都是由普通的原始基因通过基因复制和变异发展而来的。
编码配体门控的离子通道的基因能被乙酰胆碱，GABA以及甘胺酸激活属于同一家族。这个家族中的离子通道是由五个密切的亲缘关系的亚单位组成。每个亚单位有四个跨膜的α螺旋（M1-M4）。配体门控的离子通道基因家族的成员的不同在于离子的选择性另外还有它们各自的配体的特性。编码谷胺酸激活的通道的基因可以独立成为一个家族和其他的配体门控的通道区分开。
间隙结合的通道的基因编码属于一个独立的家族。每个间隙结合点通道都是由12个相同的亚单位组成，每个亚单位有四个跨膜部分。这种在电突触部位的特殊的通道跨越了两个细胞的细胞质。
编码电压门控型离子通道的基因都属于第三个家族。这类通道被去机化电压激活并且对钠离子，钾离子，钙离子有选择性。所有的电压门控的通道都有一个相似的结构。它们都有由六个跨膜部分（S1-S6）组成的基本结构basic motif的四次重复。S5和S6相互连接形成环状结构，通过了细胞膜的细胞外侧面，P-区域组成了离子通道的选择性滤孔。电压门控的钠和钙通道中每个单独的亚单位都有四个这种的重复结构。钾通道是由四个分离的亚单位组成，每个亚单位有一个重复结构。
编码电压门控钾通道的主要的基因家族和另两类编码选择性钾通道的基因家族几乎没有关联，因为这两种基因家族有着特殊的结构和属性。一类基因家族是由编码内向整流的钾通
道的基因组成，基因在超极化时被激活。每个通道亚单位只有两个跨膜部分，并且和形成通道孔道的P-区域相连接。第二类编码选择性钾通道的基因家族的亚单位有两个形成孔道结构的重复。这些通道也对静息时钾离子的传导力有贡献。
分子生物学研究的快速发展快速引发了对其他的一些离子通道基因家族的证实。这些家族包括氯离子通道，氯离子通道对于确定神经和肌肉细胞静息电位以及确定一类由ATP激活的配体门控型离子通道（这类通道在特定的突触上有神经递质的作用）都是很重要的。对这些离子通道的基因测序将揭示更多的通道家族。
由于通道是由许多亚单位组成，因此亚单位在结合时不同的变化就会使离子通道显示不同的功能特性，通道的种类也非常多。在神经元中已知就有超过12种类型的离子通道，并且每种离子通道还有几种密切的亲缘关系的构型（同分异构体），它们的差别在于通道开放和关闭的速度以及对不同激活信号的敏感性。离子通道的多样化是两种或多种有密切的亲缘关系基因的表达和mRNA从同一个基因转录后选择性地剪接或对mRNA的加工这些因素共同造成的。和酶的同分异构体一样，离子通道类型的变化在特殊的发育阶段，在大脑中的不同的细胞类型中，甚至是同一细胞的不同的区域都有着不同的表现。离子通道结构和功能的微妙的变化使得离子通道功能高度专一。
近年对于线虫Caenorhabditis elegans整个基因组测序工作强调了多细胞有机生物的离子通道的复杂性。这个基因组包括编码电压门控钙通道的五个基因，编码选择性钾通道的60多个基因，编码配体门控型通道的90个基因，以及编码选择性氯通道的六个基因。在这个基因组中没有编码电压门控型钠通道的基因。
不同细胞上的丰富的离子通道类型使得对于发展作用于神经系统选择性区域上的离子通道的激活和阻塞的药物成为可能。这种药物理论上应该具有最大的治疗效果和最小的副作用。
因为你是刚开始做，建议你严格按步骤做，同时尽量将你的实验条件也严格化，这样有利于你在实验中寻找导致问题的关键所在。
1、水尽量用好些的，双蒸水甚至三蒸水，有去离子水更好——以排除水中的离子杂质对脑片活性的影响。
2、在称量药品时尽量精确，药品用分析纯，有条件用国外的更好。
3、有条件的话PH值和渗透压都要测一下。渗透压有专门的渗透压仪检测，可以看看别的实验室有没有，借用一下。
4、灌流的acsf配好后就持续给混合气，不要到记录时才给。灌流的速度可以参考相关文献，有的文献有报道。使用别人已经比较成熟的记录槽。
5、记录系统方面，如果你的放大器是使用多年的，按说明书将放大器调试、校正到最佳状态。但如果最近有人用这个放大器做过类似实验，而且记录很好，可以暂不调试。当然这个最好在熟悉该仪器的技术人员指导下进行。
6、微电极不仅要测电阻，而且要在显微镜下量直径，直径要保证在1微米左右。内液要过滤，充灌要完全。如果你使用的是新电极，要先清洗后再使用。如果你的记录系统没有问题，而且脑片活性很好，即使1－2M的电极，也能记到电位，不过记到的是single unit 还是field potential就不好说了。
建议你根据文献和别人的经验，与你的步骤一步一步推敲。你能够保证某个实验条件严格，就可以排除这个条件可能造成的干扰，而把矛盾的焦点对准最可能的地方。
记住，你现在是在做一项已经成熟的技术，就尽量按成熟的技术来，不要随便改变其中的步骤或参数。等条件摸索好了，你就可以按你的设想进行你的实验。
首先，你使用的ACSF必须事先通气（20-30分钟）使之饱和，然后才可以进行灌流；气体流量不好说，一般性语言描述为有一到三处连续不断的气泡冒出来即可，对脑片的供氧能
力主要还取决于灌流速度。
给药方式，在脑片上用循环给药一般说来都是比较慢的；如果你想快一点，可以在入水管上接一个三通，一边是正常溶液，一边是加过药的溶液，估计一下从三通到chamber的管子体积，根据流速计算一下药物流到chamber去的时间，wash也同样。
你是做的细胞外的话，加药还有种方法。就是用多管微电极。一般有三管、五管和七管。中心管用做记录，充灌电极内液。其他管里充灌药物，通过电泳使其作用到记录的细胞附近。有这种毛坯卖。不过这种方法也有缺点，容易使记录不稳定。
现在有专门的加药系统，可以多种药物快速微量给药。下面这个是华工仪博代理的加药系统：https://www.docsj.com/doc/6611498100.html,/prodb.htm如果经费允许，可以考虑。单细胞记录有用Y管加药的方法。Y管的分叉一头给药，一头给持续的负压。药物从Y管的直管进入培养皿。注意要先给负压，再给药，使Y管充满药物，再将Y管扎入细胞附近。
我不记得你是否说过你们的记录时温度是多少。但要记录自发放电的话，一定要保证记录槽的温度在32度以上。不管是在体还是离体，记录自发都是对温度有要求的。在体要在37左右，离体在30到32以上，才可能记录到自发放电。昨天一个耶鲁大学的教授来我们这里也提到温度对自发放电影响的问题。
1、因为记录前已经孵育了1－2h，你的记录槽的温度又是在32度，如果细胞没有问题，应该几分钟后脑片适应了局部环境就可以记录到放电。
2、脑片境界变模糊——我也觉得是脑片活性不行了。在我做的海马脑片上，好的脑片低倍镜下可以看到分层清楚，细胞带有折射，皮质可以看到黑色点状的细胞。CA3的细胞比较大，耐受力差些，过半个小时到1h很明显看到CA3细胞带均匀透亮。这时高倍下看CA3
细胞大都肿胀。你的这个情况可能和记录槽有关——我觉得。流速、氧饱和上次都说过了。还有就是浸没液面不要太低，刚刚盖住脑片是不够的。如果你的acsf有问题，在孵育时状态就不行了，不会到记录槽时才出问题。
3、每次实验完器皿的清洗也很重要。不知你们的灌流是怎么做的。我们给记录槽灌流用的蠕动泵上的硅胶管每次都要用蒸馏水和75酒精各灌洗一遍。孵育和灌流用的烧杯由于在室温下放置较长时间，也很容易长细菌，糖盐很容易在杯底沉积。每次实验完一定要洗干净。否则下次实验你再准的acsf经过这样的烧杯和灌流管渗透压和ph值也会变的。
4、如果你现在想验证脑片状态怎么样，自发记不到的话你可以试试诱发。给刺激看看有没有反应，有的话看看反应持续时间和反应表现。建议你查查文献，看看你记录的细胞的电生理特性是怎样的。
我也觉得和灌流槽有关，因为我测了一下ph，发现烧杯内氧饱和的acsf和最后流出的acsf 的ph基本上很接近，且接近7.4，惟独灌流槽小室内液体ph要偏高点。我用的是全浸式脑片灌流槽，所以我怀疑小室内液体得不到充分交换，甚至有的一点也不交换。不知你那边用的是什么样的灌流槽？我老板说实在不行就换灌流槽。如果记录细胞外自发放电，你觉得用全浸式的好还是用半浸式的好？
我们用的是自制的全浸式记录槽，用的挺好。附件是它的示意图，供你参考。但灌流槽ph 值偏高也有可能和你的流速有关：如果流速过慢也会造成交换不好。
记录细胞外单位放电中，为了保证记录的电位是单个细胞的活动，要尽量将电极拉细。电极尖端越细，记录的放电越有可能是单个细胞的活动。看放电是不是单个细胞的活动，可以看示波器上的放电的幅度是否接近一致。放电幅度长长短短的那就是记录到多个神经元的活动。有时你仔细观察，还可以发现长短放电各有各的规律。同时****也可以发现放电
的声音不一致。如果放电幅度基本一致，频率有变化。这有可能是单个细胞的活动。因为你记录的脑片中的神经元，它接受多个突触的信息，因此它的放电可能不一定十分规律。whole－cell recording的液接电位的补偿问题
我们一般都是在电极入水后补偿液接电位。但在下电极的过程中有时基线还在波动，有时还很大。按理说当形成giga－cell后，就不能在调节pipe－offset了。但是，当形成巨阻封接后，电极内液和浴液之间的接触就隔断了，然后吸破形成whole cell。这个时候液接电位就消失了。但你入水时已经补了这个液接电位。也就是说形成whole cell后多补了液接电位大小的电压。你记录的电位是实际电位加上液接电位的值。很多人电极内液都是用的葡萄糖酸钾，用axon的液接电位计算公式算的葡萄糖酸钾版的电极内液和外液的液接电位都是10mv以上。这个时候误差就大了。这就产生个问题：这个液接电位怎么补？什么时候补？不补的话你钳制电压应该钳多少，电流钳下记录的膜电位与实际膜电位差多少？请大家说说各自的液接电位补偿的做法和理由。
这是一个不错的问题。
首先，让我们来看一看offset这个电压是怎么来的。他的来源很广泛，一部分是恒定值，比如放大器的输入offset；一部分是变化值，比如液接电位，它依赖于离子成分；一部分由附加环路产生，包括玻璃电极、试验浴槽或者是氯化银电极；还有一部分是膜片钳放大器产生的。我们调节offset，是把这个电压在放大器里加到command电压上了，从而使得在command电压为零的时候电流也为零。
液接电位在入水的时候有，一旦形成巨欧姆封接或者吸破后就不存在了，所以这一部分电位差值有必要考虑进去。
我一般的做法是入水之后补offset，一旦开始封接（>30M）就不再进行补偿，直至形成巨欧姆封接。在这个过程中，液接电位已经加到command电压里头去了，所以在吸破后测量其膜电位（电流钳）的时候，要将液接电位减去，比如测出来是-50mV，减去液接电位（以+10mV为例），就变成了-60mV。在电压钳模式下的钳制电位也是一样要补上一个液接电位差值的，比如command电压是-60mV，实际输出是-70mV。不知我理解得对不对。
关于这个问题，axon的说明书里有比较详尽的补偿方法。
我用的灌流槽就中间一个小室，而且体积蛮大的。液体从小室下面进来，到达一定高度后从周围小孔出去。理论上来讲里边的液体应该可以得到充分交换，但不知为何小室内液体的ph要高于流入的和最后流出的acsf。而且液面比较高，控制不好的话脑片会浮起来。不过我设定的流速并不慢，我用的是蠕动泵灌流，流速在4ml/min左右。还有就是温度控制的不稳定，不知你用的那种全浸式灌流槽如何来控制这些问题。因为我觉得这两个问题直接影响了我能否记录到脑片的自发放电。我这两天做了几次，都能记录到自发放电，但持续时间不长，最长的也就2小时左右，短的只有半小时。不知你以前记录的时候一般能维持多少时间，怎样才能使脑片的活性维持较长的时间？
我自己没有做过成年鼠的脑片。不过我觉得是先分离海马再冰冻。但是如果没有冻过，脑组织很软，可能不太好分离。我想可能要先将脑组织冻1－2min在分离比较好些。这样一是组织有些硬度，比较好剥离海马；二是降低组织温度，减少神经元损伤。剥离时最好在冰板上进行，中间要加些4度ascsf 保持组织湿润。
有人在做成年鼠脑片前是用冰冻的氧饱和的ACSF心脏灌流的。这样可以降低脑组织内部温度，你在剥离海马时神经元的损伤就小一些，从而提高海马神经元的存活率。
液面和你的记录槽齐平就可以了，太高会溢出可能漏到显微镜系统里；太低交换不好。脑片可以用白金丝做的U型框粘上尼龙丝来压（陈军的那本书里有介绍怎么做），你也可以将尼龙网粘在白金框，或者银丝也可。你粘尼龙丝时候隔2－3mm粘一根，这个距离够你下电极了，不会说到做的时候还要调整尼龙网的位置。
至于为什么从孵育槽到记录槽要等1h才能记录到自发放电，我也不太清楚。不过我觉得应该要不了那么长时间。是不是你的记录槽液体交换慢了点，适当快点，混合气早点充——再试试看。
从你现在的情况看，切片估计不是问题了。不知孵育中可能的问题你注意没有：首先还是要给acsf预先给予混合气进行饱和；其次，在孵育时注意在尼龙网下不要形成气泡——可能造成脑片底部与液体接触不良；脑片在网上要平摊开，脑片之间最好不要覆盖和折叠。
我觉得由于你们这种记录槽液体是从底部流入，可能会造成脑片飘，记录不稳。6mm的高度有些高了，我们的记录槽大约3mm高，太高对显微镜成像效果会有影响。还有，你们的记录槽液体是自下向上流，那么脑片深处得到的氧饱和acsf就好一些，越往上交换过的acsf就多一些。而且你们的槽子这么深，积累的废液也相对多些。或者这么说，同样的流速，6mm深的记录槽液体和气体交换的时间要长于3mm 的记录槽，这可能会影响到脑片在记录槽中的活性。而你要是加快流速的话，又会加剧脑片的飘荡，影响记录的稳定。所以，我觉得你的记录槽需要改进。要不降低高度试试，要不用我上次说的那个记录槽。不过用我说的记录槽，你的加温系统不知能不能上上去。
应该每个海马的锥体神经元都可以记录到0.1 mM glutamine 诱导的电流的，不知你是想记***AR介导的电流，还是AMPAR/KA介导的电流，如果是前者，应该用无Mg2+溶液和1~3 微摩尔的gly才可以记录到。另外，你配好的glutamine溶液要注意pH的变化，可能会偏酸，而H+对glutamine电流是抑制的。
model cell实际就是模拟patch记录的三个阶段: 1、电极入水。电路上就是一个10M的电阻；2、巨阻形成。电路上是1个10GM的电阻；3、whole cell形成。电路是一个500M的电阻和一个电容构成的回路。三种状况均可在seal test窗口中看到。seal test和你给step 刺激一样，都是在model cell上加个电压，窗口显示了记到的电流大小。同理你也可以在电压钳下给step，利用欧姆定律自己根据给的电压和记到的电流算电阻。这个值可能不会那么标准就等于三种状态下的电阻，这与仪器自身的噪声及性能有关，但不会有太大的偏差。如果偏差很大，比如应该为10M只记到5M，可能里面有问题。这时你就要排除是model cell的问题还是放大器的问题。测model cel电阻排除一下model cell的问题。如果model cell没问题，对照说明书用它校正一下放大器。
最大的可能就是封接系统漏气。将电极固定在holder上，电极尖端烧闭。三通管与带电极的holder整体浸入水中，从三通管给气体，看三通管、三通管与软管连接处、软管与holder连接处等易于漏气的地方是否有气泡冒出。如有，用胶将其封闭，或者换新管。
还有一种可能就是电极堵了，不过电极堵的话电极电阻会有较大的增加，很好辨认。
电极内液是在入水之前灌充的，一旦钳制以后，可能就不能更换了，因为一旦更换，就不可避免引起振动，这是膜片钳实验的禁忌之一，很容易引起细胞的死亡。另外，关于渗透时间的问题，我曾经特意作过time-course，通常电极内液完全渗透到细胞内，使电极内和细胞内达到平衡大约在5min左右，有时候因为负压大小或其他的原因，可能大于或小于5min，虽然没有作过氨基酸，但是时间也是差不多的。
1、如果你考虑与鼠龄有关，建议你查查有关大鼠发育的文献，看看你所做核团是在生后多少天发育成熟。也可以参考做该核团的文献，看看别人用多大的老鼠。（我个人认为觉得20d应该没有问题）
2、渗透压不知是你计算的还是实际测量的。有人提出渗透压略高一些还有利于细胞的长时间存活，甚至有人孵育时用高渗的蔗糖脑脊液，记录时用正常脑脊液。你可以参考别人的文献，适当调整一下方子。这个要靠你自己摸索，各个实验室不一样。
3、孵育时氧饱和越充分越好。我们一般都事先给孵育槽里充氧2h左右。因为混合气里co2比例一定，
而且需要它稳定acsf的ph值，这和在体不一样，应该不存在通气过量的问题。
这种银丝是直接装在holder里的，axon放大器原配的holder配了两个密封圈，用以密封holder内气路。需要注意的是，你要看看与前置放大器相连的一端的那个密封圈是否与holder的边缘齐平，这是保证接触良好的前提。银丝是可以直接从这一头取出来，镀好了再放进去的。注意插进去之后要在银丝的末端打个弯，这样银丝就可以扣在密封圈上，并和用来插入前置放大器的金属紧密接触。不需要焊，否则密闭性能就会下降。
1、如果外液中存在细菌的话，一方面可能影响封接成功率，另一方面，细菌可能会分泌一些毒素，从而影响细胞活性。
2、对于玻璃电极来说，影响封接成功率的主要有两个因素，一个是电极尖端口径，这主要表现在电极阻抗上，一般说来，达到3-6兆的都可以，但如果细胞比较小的话，那么阻抗要高些（这样口径小些）才更有利于封接。另一个因素就是电极的形状，使用两步拉制仪的优点即在于此（其实，最好的是水平拉制仪，可以根据需要进行多步拉制，得到各种需要的形状）。
细胞一吸就破是因为消化的太过了，可以试试减少酶量和缩短消化时间。
活性好的细胞镜下看起来很光滑，形态规整，核隐约可以看见，颜色蓝蓝的做完一个细胞后当然要换电极，因为此电极已被污染啦。
分析曲线可以找资料看看嘛。
细胞内记录最重要的是要将玻璃微电极尖端插入细胞内，并且能够不把细胞弄破，能够维持较长一段时间。要做到这一点，关键在于能拉制出合格的玻璃微电极，根据我们的经验，在海马脑片上要进细胞的话电极在冲灌3MKCl后阻抗应该不低于60兆欧，这是因为海马中的细胞决大多数为体积较大的锥体细胞，容易进入。而在如纹状体等核团中，大多数细胞是体积较小的中间神经元，只有尖端直径较小的玻璃微电极才能进入，阻抗应不小于120兆欧。在微电极进细胞的一瞬间会在计算机屏幕上观测到基线的明显的突然降低，这时需要立即通过放大器向细胞内注入超极化电流使细胞内发生超极化，并维持一段时间使细胞稳定不至于因损伤而大量放电死亡。随后再将超极化电流逐渐减小至零，这时在放大器上显示的膜电位才是细胞真正的静息膜电位。需要注意的是为了使玻璃微电极尖端的分布电容减小到最低程度，在拉制冲灌好后最好将电极尖端表面涂上生物油以绝缘。
如果电流overload，第一件要做的事情就是把银丝电极芯氯化一下，很多时候都是它引起的。此外你的接地的导线如果不该弄湿的地方弄湿了也会出现过载的情况。
我们现在配acsf的试剂都是用的国产的分析纯。我觉得这个不是最关键的，但是个要保证的基本问题。也就是说，你拿试剂时最好买近两年的，这就可以保证脑片活性了。我觉得还是切片和孵育要掌握好。再就是你可以查查是否有人做过和你类似的文章，直接email和作者联系。
我们那个灌流槽使用时没有什么太多注意的。灌流时保持液面和槽的高度平齐就可；加温就要靠你自己解决；使用时可以在两个缓冲室里放两团棉花，减少液面波动。实验后注意清洗，尤其是联系记录槽和缓冲室的小管。
我们一般配好acsf后就开始预通气，气量一般出气管出来成串就可，不用太大。分装的灌流和孵育的都要给。分氧压表上1小格左右。灌流液温度最好能保持恒定，波动不要太大。
不知道是否能够封接上？如果最终封接不好，达不到Ｇ封接，估计是电极前端沾有污染物，入水后因为污染物，使得电阻抗比较大，给正压后，使得污染物对电极尖端的的阻挡减少，所以阻抗降低．接触后
阻抗当然会增加了．
不知道是不是近几天的试验都是这样？因为具体的情况我不完全了解，如果是的话，那我还是坚持我的观点，是因为有污染物的问题，如果没有处在电极尖端中央，没有将电极尖完全堵住的情况下，也是可能出现像你叙述的情况的，即使是封接上了也是暂时的，不牢固的，我也遇到过这样的情况。妨碍封接的污染物可能来自以下几个方面：
1.灌流液中的杂质
2.电极内液中的杂质
3.细胞分离的不是很理想，状态不好，消化过了或是不足都可能导致细胞表面附有许多杂质颗粒，从而影响封接。
1、记录室与进液室、记录室与出液室之间的两个直径1.5mm的小管，能否允许脑脊液自由经过，比如说，在灌流平稳后，记录室、进液室、出液室的液面是否高度保持一致？
2、您应该使用浸没式浴槽吧，进液口、出液口与底部的高度有多少mm？
那两个小管就是连通记录室与进出液缓冲室用的，根据连通器的原理，三者液面可以保持一致。液面的高度就是槽子的厚度，3mm左右。
我们也曾遇到类似情况，后经调整U形框位置得到了解决。个人认为是脑片没有固定好的缘故，这样脑片随灌流液面的波动而波动。也可能是U形框上尼龙丝距离太疏。建议你重做后试试看。
第一和第二拉的数值不是温度值。
没有固定的值，决定因素很多：
1。你试验所要求的电极的阻值；
2。电极拉制仪的加热丝的阻值；
3。拉制的环境温度也有点影响；
我们实验室的数值就有点波动，要通过多次预试才能找到你所需的数值！！
本人也曾经作过patch clamp的实验，根据经验，一般来说急性分离的细胞比培养的细胞好用（本人体会仅作参考）。原因如下1：急性分离的细胞比培养细胞获得方便。因为培养尤其要注意无菌操作，这就涉及到很多烦琐细小的工作（如刷洗瓶子，高压消毒等等）；急性分离对这一项的要求相对要低一些。2：急性分离的细胞比培养的细胞质量要好一些，更容易封接和破膜。3：急性分离的细胞一般维持8个小时左右，所以分离细胞和作实验一般一天可以完成。当然培养的细胞也有一定的好处。急性分离细胞适用于多种组织，结合本实验室的工作，可以用于分离背根神经节、三叉神经节、海马神经元、肺血管平滑肌细胞、心肌细胞、耳蜗毛细胞等等。
在显微镜目镜上安装一个标尺，就可根据标尺刻度读出尖端直径。
从外地拉制电极应注意：1，电极应小心妥当保存，保证尖端在运输途中不致碰断。2，建议一次拉制不宜过多，拉好的电极尽早用完，最好密闭保存，以免灰尘污染。
如果封接破膜技术操作没有变化，那细胞状态就是主要原因啦。你觉得分离的时候什么条件都没有变化，但细胞形态，状态却会有很大差别，是实验中没有注意的因素从中作用，所以应综合考虑各个方面的因素，最好将各个条件都固定下来，这样也许会得到比较稳定的细胞。另外将电极尖端适当拉大，有助于破膜。
无心电极一般用做悬浮式微电极实验，电极要刺入细胞，阻抗值较高，达十几MΩ，只有用有心电极通过内部毛细管的虹吸作用才能使电极尖端不会有气泡。做膜片钳一般都用无心电极，单通道充灌电极液阻抗为8MΩ左右，全细胞为2-4MΩ，一般只要用手指轻弹电极中部就可以把气泡弹出来了。
探头就是装电极的地方，入水指的是电极由空气中进入到含脑片的ACSF灌流液中，此时可以记录到入水后电极与液体形成的电阻，一般即通常所说的拉制的电极尖端的电阻，脑片的话一般在几个M欧。封接就是说电极尖端与脑片接触后，通过给予一定的负压，使脑片上的细胞与电极尖端结合紧密，此时可看到的电阻为封接电阻，在吉欧以上。破膜指的是封接后给予负压使细胞破膜形成全细胞记录的方式。overload我自已做的一般是因为电极拉的尖端太粗，电阻太小，一般放大器右上角会亮红灯。
细胞外记录（extracellular recording）是把引导电极安放在神经组织的表面或附近引导神经组织的电活动。由于活动部位的神经元产生去极化，未活动的部位处于正常极化状态，在容积导体中的两部位间电位不同，电流从一点流向另外一点。放置于细胞表面的电极就会记录出两者之间所产生的电位差。细胞外微电极记录的方便之处是电极不插入细胞。除了玻璃微电极外，金属微电极也是作细胞外记录的合适电极。细胞外所记录的电位比细胞内记录的小很多、这是由于信号受低电阻的细胞外液通路分流所致。在外周神经用细胞外记录，在发生兴奋的局部与临近部位间形成局部电流。因而可以记录到一个正-负-正的三相波。胞外电极记录的电位大小和波形会有多种变化。因此，对胞外记录电位的分析重点放在放电频率和潜伏期，而不去比较放电的幅度。
对电位分析的目的在于认清电位是从一个神经元的哪个部位产生的，便于判断实验结果的意义。如以电刺激视神经、在外侧膝状体的记录为例，可看到：突触前轴突的电位，是一个全或无的一个单向上升波。由突触后轴突所产生的也是单向上升波。但与突触前轴突电位有区别：（1）潜伏期较长，约为1.2-2.2ms；（2）对单一刺激常可引起多个电位；（3）上升波呈双凹形，形成M波。胞体电位为长时程负锋电位，其潜伏期与突触后轴突的电位相同；细胞外记录的树突电位为慢双向的全或无电位。起始为正波，它的潜伏期与突触后的相等，波形的慢变化反映冲动在树突的传导速度。比较由细胞各部位所记录电位的持续时间，轴突的最短约＜1ms，胞体较长为1.5-3ms，树突的最长为15～2Oms。总之，细胞外记录方法较易，但对其结果的解释较为复杂。
细胞外记录电极不穿过细胞膜，可保持细胞功能完好，能反映许多单位的节律性或非节律性活动和诱发电位，同时也能记录一个单位的活动，通常以细胞放电频率、放电型式和变化类型为特征。
我们使用的微电极拉制仪为美国Sutter公司生产的P－97型，该型拉制仪为国内外应用比较广泛的产品之一，为Flaming/Brown型水平拉制仪，这种类型拉制仪的优点是拉制参数固定后拉制的微电极一致性好；缺点是参数不易调节，一般要经过较长时间的试验才可得到满足要求的微电极。
P－97微电极拉制仪的几个重要参数：
1.Ramp Test 当更换了新的毛坯管或者铂金片后都要进行Ramp Test，目的是得到在当前铂金片的加热下毛坯管在何时达到机内预置的柔软程度（即在预置拉力下的Velocity），结果用Heat表示，这是进行进一步拉制的基础。
2.Heat 表示加热电流强度的一个无单位数，调节范围为0－999。此参数通常和Ramp Test值相关，在使用槽式（Trough）铂金片时为Ramp+15，而使用盒式（Box）铂金片时直接用Ramp值即可。Heat 越高，拉制出的微电极越长而尖端口径越小。调节时一般每次改变5个单位。
3.Pull 拉力，调节范围为0－255。需要注意的是，当毛坯管在拉制仪上固定好之后一直有一个很小的基础拉力作用在毛坯管两端，这个拉力不能调节，Pull是在基础拉力的基础上施加的。与Heat类似，Pull越大微电极越长而尖端口径越小。调节时每次改变10个单位。
4.Velocity（trip point）速度，调节范围为0－255。随着铂金片的加热，毛坯管在基础拉力下逐渐分开，分开的速度一直在拉制仪的监控下，一旦速度达到Velocity的设定值即停止加热，冷却（参数Time 和Delay控制这个步骤，见下），然后施加Pull所设置的拉力将毛坯管拉断。Velocity的范围一般在10
－150之间。
5.Time 调节范围为0－255。控制高压空气的冷却时间，当Velocity大于0时每个单位代表0.5ms，Velocity＝0时每个单位代表10ms。当毛坯管的分开速度达到Velocity所设置的值时，立刻开始用高压空气向铂金片吹风以冷却毛坯管，Time即高压空气的作用时间。在使用Time模式时，拉力在达到Velocity 40ms后开始施加，与Time的设定无关。
6.Delay 调节范围为0－255。如果Time设置为最大值后仍然不能有效冷却毛坯管（使用厚壁毛坯管时经常遇到这种情况，表现为微电极尖端纤维化，即尖端飘），就要将Time改成Delay。在Delay模式中，冷却空气作用时间是固定的300ms，而Delay规定达到Velocity后到施加Pull的时间。当Velocity大于0时每个单位代表0.5ms，Velocity＝0时每个单位代表10ms。
P－97型拉制仪的拉制原理为：微电极毛坯管在铂金片的加热下逐渐软化而被基础拉力拉开，当毛坯管两端分开速度达到一定值的时候，停止加热，冷却极短的时间后施加一定的拉力将毛坯管拉断，如果毛坯管仍然未能拉断则重复以上步骤，最终拉断成为两个微电极。根据所需的微电极不同需要设置不同的拉制参数和选用不同的玻璃毛坯管。
以上这些步骤的目的是精密控制施加拉力时毛坯管的温度（玻璃的柔软程度）以及加热部位的粗细（余下多少玻璃）。要拉制出形状、尖端都满意的微电极，需要仔细调节以上参数。
细胞外玻璃微电极的拉制采用美国World Precision Instruments公司生产的M1B120F－4硼硅酸盐（borosilicate）微电极毛坯管（外径1.2mm，内径0.68mm，内有帮助充灌的玻璃丝，属于厚壁毛坯管）。细胞外记录使用的微电极在充灌2M NaCl时阻抗一般在1－10MΩ左右，较易拉制。因毛坯管管壁较厚，我们采用两步拉制法。第一步在基础拉力下先将毛坯管的中间部分拉细，以避免形成很长的微电极（易断且不易充灌），第二步再拉断毛坯管。拉制参数如下：
Heat Pull Velocity Time
153********
25122030140
可拉制出阻抗为5－8MΩ的微电极，且形状令人满意。
Cs+ Methanesulfonate（甲磺酸铯）可以从SIGMA购买到。
Cesium methanesulfonate
分子量228sigma编号C14265g47美元
可配制电极内液150ml。
CS作用主要是阻断钾通道电流。methanesulfonate或其他葡萄糖酸根、硫酸根替代氯离子的目的是避免氯离子影响。
１、因为脑脊液内含有NaHCO3，所以必须通入5%CO2，在脑脊液内形成
HCO3-/H2CO3缓冲体系，维持PH值稳定。
2、刚配制的脑脊液PH值约为7.8，充混合气后PH为7.4。一般而言，不需要
调节PH值，如PH值不对，应考虑所用的试剂是否过期，可以更换试剂。
1、95％氧气＋5％二氧化碳混合气的作用是什么？
2、为什么不能用纯氧代替？
3、给脑积液充混合气后，pH值如何变化？是不是应该在充氧后再调节pH值？
答：1.氧气是脑组织必须的，二氧化碳是维持acsf的ph稳定。之所以用这一浓度比，主要是模拟在体环境，另外在这个浓度比下，细胞的活力可以达到最大。
2.如果用纯氧，那acsf的ph将不能保持稳定。
3.刚配完的acsf，其ph大概在7.8左右，通入混合气后，一般ph会降低，并维持在7.35~7.45之间。一般不需要调节ph，因为液体本身形成了缓冲对。如果通气后液体ph不能维持在7.4左右，那要适当调节NaHCO3的浓度。一般范围在18~26mmol/L之间。如果气体质量不行，那液体的ph也很难维持在7.4左右，我们就遇到了这样的问题，发现ph总是偏高。
1.人工脑脊液的缓冲系是由碳酸氢盐形成的，所以二氧化碳的作用就是维持其pH稳定在7.4。
2.一般配置好人工脑脊液后都先用混合气或二氧化碳气饱和，再以氢氧化钠调pH到7.4，以混合气维持。
3.国内很多地方配置的混合气并不合格，二氧化碳的浓度常达不到5%。因为二氧化碳装罐是液体，而氧气是气态，二者混合不太容易，所以常见到的情况是，混合气用一段时间后就很难把pH控制在7.4，往往偏碱。
4.另外一种办法是以纯的食用二氧化碳和纯氧分别通入人工脑脊液中。只是二氧化碳的通气量要很小，稍微大些就偏酸，过小就偏碱，需多次练习才能较好控制。
1.细胞对pH的要求有一个原则：宁酸勿碱。如果你没有办法把pH调得很精确的话那么就把pH调得略酸一些。
2.我一般孵脑片的温度控制在25摄氏度左右（有的文献要求控制在32摄氏度），与在室温下（20摄氏度）调的pH相差大约0.02，这一点差别是没有多大影响的。
3.pH在7.2-7.4之间对细胞还是很适合的。
4.调pH要精确的话，要控制好混合气的通气量，并持续观察15分钟以上在7.3-7.4之间而没有明显波动，这样才可认为气量合适，pH稳定。否则很难控制得很准。然后记住所通气量的大小，以后每天尽量保持一致。
我参经也遇到过类似的情况，我认为原因有：1、封接不好，可能是由于细胞表面太脏，或者电极与细胞接触面之间有杂质；2、电极飘动，可能是由于微操纵器滑丝或者漏油；3、防震台颤动，防震台减震效果不好的话，也会有你所述的情况发生；4、灌流液流速太快
细胞外记录排噪方法：
1、屏蔽台内不能有任何接有电源的用电器！
2、将屏蔽台四周及顶端的屏蔽网用导线联起来再接到信号采集系统的地线上。接好后检测是否接好可用万用表测两两间的电阻，如果电阻为零表示接好了。在推进微电极的时候一只手接触屏蔽网，以保持信号的连续性。这样的话我记录的细胞外放电干扰信号大约30—40uv。
我没能进一步降低，有哪位高手做的更低的请教教我
3、微电极电阻的测量（我用的是金属微电极，玻璃的也适用）：可将微电极输出端用鳄鱼夹正极接好，微电极尖端和鳄鱼夹负极至于生理盐水中（也可在体记录时当微电极已经插入脑组织后进行测量，即都是构成一个回路就行了）放大器开关至于校正档，记录信号参数设为滤波频率关、时间常数置交流低增益，其他按说明书设置，根据波形幅度换算微电极内阻。
电生理基本技术
电生理基本技术 一电刺激。 二生物放大器正确选择，植物性神经冲动幅度多为50-100μV。不同组织，应采用不同的参数。如 ECG：振幅0.1-2mV，灵敏度0.5-1mV，时间常数0.1-1.0s，高频滤波1KHz 植物性神经冲动：振幅50-150μV，灵敏度25-100μV，时间常数0.01-0.1s，高频滤波3- 5KHz 中枢神经元单位放电振幅100-300μV, 灵敏度50-100μV，时间常数0.01-0.1s，高频滤波5-10KHz 三玻璃微电极 常用尖端0.5-5μm，向细胞内插入时，需小于0.5μm（细胞直径的1/10~1/100），且尖端的倾斜度应相当缓和，一般微电极可分为金属微电极和玻璃微电极两类。 金属微电极，现多用镀铂钨丝电极（platinum-plated tungsten electrode），在钨丝上镀铂，可极大改善电极的电学特性，噪声可大大降低，加之机械强度大，适合长期体外记录(paré D， Gaudreau H. Projection cells and interneurons of the lateral and basolateral amygdala: distinct firing patterns and differential relation to the thera and delta rhythms in conscious cats. J Neursci, 1996,16(10):3334-3350 现要也常用镀银碳纤维电极。玻璃微电极记录易受机械位移的影响，加之尖端的电解质会漏出或堵塞，不适合半小时以上的长时间记录，玻璃微电极可分单管和多管微电极。 毛坯管在国外多用Pyrex管，国内多用GG-17和95料玻管。细胞外记录多采用外径1.5-2mm 玻璃，细胞内记录则采用外径1mm细玻管，内外径之比约为2:3或5:6，长6-8cm。拉制前必须经过清洁处理。 清洁液：用等量的(250ml)王水(可反复应用)。一般毛坯管捆成把放入清洁液中1-2h，取出自来水冲洗20-30min，再放入无水酒精中洗涤，再放入盛满蒸馏水烧杯中加热煮沸10min，倒去蒸馏水，再换新蒸馏水反复3次，再放入烤箱中烤干，备用，切不可用市售的洗涤剂，以防降低电极充灌液的表面张力而影响冲灌。 充灌液常用3mol/L KCl，为避免Cl-扩散，也可用2mol/L醋酸钾或柠檬酸钾充灌，也有人用0.5-1mol/L NaCl(低浓度)充灌可降低噪音。细胞外记录时，最后再用3-4mol/L NaCl +2%旁胺天蓝溶液定位。在膜片钳中还常加钙螯合剂，如EGTA。 阻抗与不同组织相关。 四电生理实验中噪声和干扰的形成和排除。 (一)来源。 1干扰信号与生物电生理信号的鉴别。准确区分生物电信号与干扰的伪迹是电生理实验的先决条件。 2来源。主要有三个方面 其一。物理性干扰。1)静电和电磁的干扰实验室附近高压电，室内日光灯可产生50Hz的静电干扰，尤其是交流电，尤其是50Hz频率干扰最大(电子设备为50Hz)。其特点是幅度大，波形规则。 2)噪声干扰电子元件本身产生杂乱无章电压和电流称噪声，一般与放大器内部元件的质量与性能有关。 其二。接地不良。1)地线电阻应小。2)仪器故障。产生漏电电流，在地线上形成电位差，产生干扰。3)地线行走过程中打圈，形成线圈，易接受电场和磁场的干扰。4)各仪器设备应采
多通道电生理记录系统
多通道电生理记录系统功能和特点如下所示： 功能：电生理信号采集器，同时支持动作电信和场电位信号采集。 特点主要有： 1、全新数模转换芯片，大大减低环境噪音。 2、支持实验动物最多4*32通道的数据记录。 3、放大、滤波和虚地功能自行调节，采集通道自行定义，操作更简单。 4、同时支持动作电位和场电位信号采集，噪音更低，信号更稳定。 5、支持最大32通道数字/模拟信号输入，拓展性更强。 6、独特设计Headstage,体积大大缩小，支持小鼠自由运动实验。 7、体积小巧，携带方便，适合更多实验场合。 Multichannel electrophysiological recording system function and features: Function:It is a electrophysiological signal collector,which supports both action potential and resting potential signal acquisition. Features: 1.New digital-to-analog conversion chip greatly reduces environmental noise. 2.It supports data records of up to4*32channels of experimental animals. 3.The function of amplification,filtering can be self-adjusted.The acquisition channel is self-defined.And the operation is simpler. 4.It supports action potential and resting potential signal acquisition at the same time.It has lower noise and the signal is more stable. 5.It supports up to32channels of digital/analog signal input and more expandable. 6.Unique design of Headstage is greatly reduced in size,which supports mouse free movement experiment. 7.zIt is small size,easy to carry and suitable for more experiments.
电生理学发展简史
电生理学发展简史（一） 生物电活动是机体一种基本的生命现象，它产生的基础是细胞膜上离子通道活动的总和效应。从生物电现象的发现到如今对离子通道功能与结构如此深入的了解，电生理学走过了200 多年的历程。 一、生物电现象的发现 最初的实验研究是从18 世纪后叶开始的。当时没有任何测量电流的仪器，只是发现利用电容器（如雷顿瓶）的放电，或雷电发生时竖起一根长导线，引导大气中的电，都可以刺激蛙的神经肌肉标本，引起肌肉收缩，所以当时就用蛙的神经肌肉标本作为电流存在的标志。1791 年意大利解剖学教授Galvani L 发现，如果将蛙腿的肌肉置于铁板上，再用铜钩钩住蛙的脊髓，当铜钩与铁板接触时肌肉就会发生收缩。他把这个现象的发生归因于机体的“动物电”（animal electricity ）。他认为神经与肌肉带有相反的电荷，肌肉带正电，神经带负电，金属导体的作用是把神经与肌肉之间的电路接通。同时代的意大利物理学家Volta A 不同意Galvani 的见解，他认为实验中发现的电现象，不是动物机体产生的动物电，而是由于实验中连接肌肉和神经的金属不同所致，是不同金属接触时产生的电流刺激了肌肉标本，如果用同一种金属作导体，收缩就不会发生。事实上，Volta 和Galvani 的观点都有其正确的一面。Volta 后来因此而发明了伏特电池；Galvani 则继续进行了一个出色的实验。在无金属参与的情况下，他将一个肌肉标本横断，又将另一个神经肌肉标本的神经干搭在横断肌肉上，并使之跨越肌肉的完好面和损伤面，结果该神经支配的肌肉产生收缩，证实了动物电的存在。这成为第一次观察到生物电存在的电生理实验。但是直接测量到生物电的实验是在电流计发明之后。 1825 年意大利物理学家Nobili 发明电流计。 1837 年意大利物理学教授Matteucci C 用电流计在肌肉的横断面与未损伤部位之间，测量到电流流动，电流是从未损伤部位流向横断面的，所以横断面呈负电位。这是第一次直接测量到生物体内存在生物电的实验。 1843 年瑞士生理学家Du Bios-Reymond 用电流计观察到神经的损伤电位，也是损伤部位呈负性。1849 年，他又发现神经在活动期间出现负波动，即使用电流计从细胞外记录到的动作电位。 1850 年von Helmholtz H 测定了神经传导速度，证明蛙神经的传导速度仅20 ~ 30m/s 。此前人们认为既然电的传导速度等于光速，因而神经的传导速度可能也是光速。 二、早期对生物电发生机制的认识 1. Bernstein 的膜学说对于这种生物电现象的解释，当时提出了不同的学说。Du Bios-Reymond 认为，组织内带负电，外表带正电，是正常状态下存在的，即所谓“现存学说”（preexistence theory ）；而他的学生Hermann （Du Bios-Reymond ）则认为，组织内的负电是被切割时组织损伤变质造成的，即所谓“变质学说”（alteration theory ）。1890 年，著名的化学家Ostwald W 提出了膜的通透性理论，即如果在电解质弥散的途径上有一层半透膜，它只允许一种离子通过，而带有相反电荷的另一种离子不能通过，就会通过静电作用限制透过膜的离子不能进一步弥散，如此，在膜两侧就会形成电位差，它的大小可按Nernst 公式计算。1902 年Du Bios-Reymond 的另一名学生Bernstein J 接受了Ostwald 通透性理论，在现存学说的基础上提出了“膜学说”（membrane theory ）。他根据细胞内液比细胞外液含较多的K +，而细胞损伤处电位较完好处为低的事实，推测静息时细胞内电位低于细胞外，并假定静息时细胞膜只对K +有通透性，由于胞内带正电荷的K +顺浓度差扩散到膜外，相应的负电荷仍留在膜内，使细胞膜呈现外正内负的极化状态，形成静息电位。按照Bernstein 的设想，细胞的静息电位就等于K +的平衡电位。动作电位则是由于膜在一瞬间失去了对K +的选择性通透，变得对所有离子通透性一过性地升高，导致膜两侧电位差瞬间消失。1904 年，他又设计了一个精巧的实验，证实肌肉切断后断面的负电位在0.3 s 后即出现，并持续缓慢地减小而不是
2017年浙江省丽水市中考思想品德试卷(解析版)
2017年浙江省丽水市市中考思想品德试卷 一、单项选择题说明：本卷有20小题，每小题1.5分，共30分． 1．2016年11月3日，在海南文昌航天发射场首发成功的我国新一代运载能力最强的火箭是（） A．天舟一号B．天宫二号C．长征五号D．神舟十一号 2．2017年2月10日，我国提出并被联合国社会发展委员会第55届会议写入决议的理念是（） A．构建人类命运共同体B．构建政治利益共同体 C．构建文化交流共同体D．构建经济发展共同体 3．2017年2月，丽水市出台了《礼让斑马线行为规范》“礼让、礼行、礼赞”深入人心，礼让斑马线成为一道动人的风景线。这体现了（） A．生命至上、与人为善B．遵纪守法、爱岗敬业 C．换位思考、公平竞争D．崇尚科学、艰苦奋斗 4．法安天下，德润人心。十二届全国人大常委会第二十四次会议表决通过了《网络安全法》．这说明（） ①法律是由国家制定或认可的②网络交往具有虚拟性和隐蔽性 ③网络安全管理有了法律依据④借助网络交往可以全面认识自我。 A．①②B．①③C．②④D．③④ 5．李某因倒卖个人信息30余万条，被法院判处有期徒刑7年。李某这一行为（） ①属于一般违法行为②侵犯了公民的隐私权 ③属于行政违法行为④具有严重的社会危害性。 A．①③B．①④C．②③D．②④ 6．对漫画《美味的背后》解读正确的是（） ①商家侵犯了消费者的知情权 ②国家应完善法律并加强监管 ③消费者协会须加大司法力度 ④消费者要增强判断和选择能力。
A．①②③B．①②④C．①③④D．②③④ 7．有人把义务教育的某一特征形容为“不花钱，可上学”。这一特征是指（）A．公益性B．强制性C．统一性D．全民性 8．王某通过微信“轻松筹“平台，为因燃气爆炸而受重伤的某家庭捐款300元。王某的捐款行为是（） ①乐善好施、无私奉献②法律要求的，必须做 ③为国分忧、勇担重任④法律鼓励的，积极做。 A．①②B．②③C．①④D．③④ 9．2017年1月，央视播放了部分乘客地铁逃票的监控录像，引起了同学们的热议﹣下列观点你认可的是（） ①逃票行为违反了诚实守信的道德准则 ②逃票行为反映出人们的科学文化素质不够高 ③央视播放监控录像的行为侵犯了个人肖像权 ④应在全社会倡导并践行社会主义核心价值观。 A．①②B．②③C．①④D．③④ 10．近三年来，丽水共完成援疆建设项目31个，投入资金2.33亿元，带动当地投资9.96亿元。这有利于（） ①促进区域经济协调发展，实现共同富裕 ②保障少数民族人民行使当家做主的权力 ③推动并实现民族平等、团结和共同繁荣 ④确立民族区域自治制度，维护人民利益。 A．①②B．①③C．②④D．③④ 二.非选择题C说明：本卷共有5小题，共50分 11．从2016年1月，教育部等九部门联合印发了《关于防治中小学生欺凌和暴
部编版七年级道德与法治下册第二单元做情绪情感的主第五课评出情感的韵味测试题(含答案)
评出情感的韵味测试题 （全卷共31小题，满分100分，时间90分钟） 一、单项选择题(请选出最符题意的一个答案，并将其字母填入括号内。每小题2分，共50分) 1．人们的情绪和情感是复杂的，而且是多种多样的。有关二者的区别正确的是( ) ①情绪是短暂的、不稳定的②情绪会随着情境的改变而变化 ③情感是我们在生活中不断强化、逐渐积累的，相对稳定 ④情感也会随着情境的改变而变化 A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④ 2. 小王从小就认真做好自己分内的事，在家帮助父母做力所能及的事，在学校帮助同学，关爱班 集体。这反映小王具备的情感是（） A. 正义感 B. 责任感 C. 信任感 D.安全感 3. 积极的情感推动人们去克服困难、达到目的；消极的情感，阻碍人们的活动，销蚀人们的活力， 甚至引起错误的行为。这说明了( ) A．情感是人的基本精神需求 B．情感影响我们对人对事的态度和我们的行动 C．情感与我们的想象力、创造力相关 D．情感是我们生命成长的体现 4．不同的情感会对人产生不同的影响。下列关于情感的作用表述正确的是( ) ①情感能让每个人战胜一切困难，实现一切目标 ②情感反映着我们对人和对事的态度、观念 ③情感影响我们的判断和选择，驱使我们做出行动 ④丰富、深刻的情感有助于我们更全面地观察事物，探索未知 A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④ 5. 情感是人的比较稳定、深刻的内心感受和体验。下列表述属于情感的是（） ①小李见义勇为，助人为乐 ②小宏树立服务社会、建设社区的责任感 ③小辉看到神舟十号发射成功，感到无比的骄傲和自豪 ④小娜考试时，紧张焦虑，脑海一片空白 A．①②③ B．②③④ C．①②④ D．①③④ 6. 在建国60周年的阅兵式上，展示了我军的精神风貌和武器装备的变化，感受到祖国的强大。当 看到这些场景时我们所产生的情感应当是（） A．自豪感B．同情感C．荣誉感D．理智感 7. 情感是与人的高级需要是否得到满足相联系的内心感受和体验。下列事物能给我们带来美好感 受的是（） ①受到老师的表扬②普者黑风景区③印度洋海啸④禽流感 A．①② B．③④ C．②④D．①③ 8.“人非草木，孰能无情”的“情”指的是（） A．情绪 B．情感C．情趣 D．情操9. 下面属于负面情感体验的是( ) ①羞耻感与愧疚感②挫败感与失落感③恐惧感与孤独感④认同感与归属感 A．①②③ B．②③④ C．①②④ D．①③④ 10．在生活中，一些人不幸患上重病，很多困难家庭难以支付大笔医疗费，很多有爱心的人纷纷伸出援助之手，通过微信“轻松筹”、“水滴筹”平台为病人捐款。这种爱心行为( ) ①履行了公民的道德义务②传递了无私奉献的正能量 ③履行了公民的法定义务④帮助他人，提升了自身价值 A．①②③ B．①②④ C．②③④ D．①③④ 11. 下列做法中，不利于培养和发展健康、高尚、正面情感的是 ( ) A．自觉用理智、道德和美引导我们的生活 B．积极主动地去感受、体验、追求真善美，远离假恶丑 C．培养文明的兴趣爱好和高雅的情趣 D．根据自己的兴趣爱好做事，我行我素 12. 下列有关情感的表述错误的是（） A. 情由心生,它是在人的社会交往、互动中自然引发的 B. 情感伴随着我们的生活经历不断积累、发展 C. 交往中带来的所有情感都能让我们身心愉悦 D. 我们可以通过阅读、与人交往、参与有意义的社会活动等方式获得美好的情感 13. “失败是成功之母”，以下关于挫败感认识正确的是（） A. 挫败感只会给我们带来负面影响 B. 挫折也是我们人生经历的一部分,要善于面对挫折 C. 挫败感无法消除,只能任其影响自己 D. 有了挫败感，就一定取得成功 14. 美好情感表达着我们的愿望，促进我们的精神发展。下列获得美好情感的方式正确的是 ( ) ①阅读名著②与社会不良青年交往 ③参与有意义的社会活动④欣赏艺术作品 A.①③④ B.①②③ C.①②④ D.②③④ 15. 小敏非常喜欢动物。每到周末,他都到动物园观察动物。通过对动物的观察,他感受很多。对于 他的感受,下列认识错误的是( ) A.他感受到生命世界的美妙与神奇 B.他对动物的尊重和爱护 C.让他身心愉悦,获得了美好的情感 D.感受到了人类的伟大,动物的卑微 16. 学会关心是一门艺术。下列关心他人的方法可取的是( ) ①关注对方的态度和反应②适时运用可能被接受的方式向对方表示关心 ③如果自己的关心没有被接受,就放弃④确认对方是否接受自己的关心 A.①②④ B.②③④ C.①②③ D.①③④ 17. 关于负面情感的说法，正确的有（） A. 负面情感不是好事，会给我们带来失败
电生理实验常见问题解答
电生理实验常见问题解答（1）『』 2010-10-09 14:53 请问目前分析细胞外放电的信号处理软件较好的是什么？ 价格昂贵的有国外的PCLAMP系列软件和POWERLAB；价格便宜的较好用的有国产的PCLAB 和MEDLAB。如果感兴趣输入GOOGLE，一搜即知。axon guide是很经典的哦，大家可以到公司主页上下载本书主要针对PATCH，是AXON公司的产品配套广告说明书，但是也包含了不少基本电生理知识，集中阅读一下第1、2章节有帮助。可以下载看看，如下，.axon.请教：干扰的大小如何检测？ 检测干扰大小和你记录电信号一样，可以从相关软件读出来，也可以从示波器上读出。建议丁香妹妹找一些基础电生理书籍熟悉一下，不要着急，先入门为重。 请问微电极的电阻如何测量?怎样才能保证电极尖端已被电极液完全充满? 给予电极一个电流/电压，可以从示波器上读出来，也可以从相应的放大器上显示出来。建议购买带有芯的玻璃电极，这样可以简单地从尾部灌入液后，轻轻用手指敲打电极即可；如果是无芯电极，就需要先用注射器将电极尖端充满，而后在从尾部灌入液。 问题是有时尖端太细,从尾部注入液后,很难保证尖端全被充满. 注射器接皮管——皮管接电极尾部——电极尖端深入电极液中——抽吸注射器——电极尖端充满液体——再从电极尾部管电极液——解决问题了。 我在记录细胞外放电时,干扰太大,诸如50hz的交流电干扰,请问如何尽可能地排除这些干扰信号? 交流电干扰应该不难处理，只需要中间接一个直流电转换器即可。 我想用Patch做平滑肌的BK通道,请教Pleace前辈,在酶解法分离细胞时,使用DMEM会因为含钙高而影响结果吗?文献多数都用无钙液，如果使用前我用PBS洗三次是否可以？ 你最好用无钙液，即使后来用PBS洗三次也不可以。因为之前的无钙液操作不仅可以保护细胞，而且可以使之处于低兴奋状态。 屏蔽和接地是电生理基本要求。如果你记录的信号足够大的话，可以不用屏蔽。但生物电信号一般都很弱，这就是为什么要屏蔽和接地。也是为什么很多时候晚上做实验干涉小——因为晚上用大功率电器的人相对少些，空间的电磁干扰相对小些，地线相对也干净一些。屏蔽笼即法拉第笼，一般是一层铜网，一层铁网。铜网屏蔽电，铁网屏蔽磁。屏蔽笼和系统的信号共地。关于地线，根据你的系统所记录的信号的强弱要求可以不同，信号越弱，要求越高。一般细胞外记录甚至更粗的记录要求相对不高。要是做到单通道水平，就不是凑合能解决问题的。就是这样，电生理的地线也应该和公共地线区分开来。一般比较正规的电生理实验室的地线应该单独埋设。地线埋设的要求其实很简单，尽量减小对地电阻。但实施起来就有很多方法了。我听说的一个方法是：从实验室下到地的主线用大概10cm 的铜缆。地上要挖个深1.5—1.8m、1.5*1.5m宽的坑。铜缆用铜铆钉（尽量减少材质造成的电阻差异）焊在一块1.5m*1.5m*4cm的铜板上。铜板放入坑中。板上埋2.5kg食盐、2.5kg 木炭。再将坑添上。主线到各个信号地分支点用铜棒焊接。铜棒上钻孔接地线。仪器电源不直接接到公共电源上，而是通过稳压隔离电源后接到另设的电源上。仪器电源的地线和系统的信号地分开接地。信号地接到单独埋设的地线上。仪器电源的地线也就是三相插头的顶端那个插头很多时候不接。 震动太大：可能原因有防震台防震效果不好，充气不足，或是实验室附近有什么强振动源；记录槽设计是否合理；液体流速是否太快？ 记录系统是否稳定：微电极放大器电容补偿是否调好，是否需要校正？记录系统干扰和噪声情况如何？
电生理检查地适应症及禁忌症
实用文档 心内电生理检查 适应症 心脏电生理检查适用于： 1．确定房室传导阻滞的精确部位。 2．鉴别异位激动的起源（如室上性激动与室性激动的鉴别）。3．对预激综合征进行精确分型。 4．检查窦房结功能。 5．明确某些异位性心动过速的折返机制。 6．对某些复杂的心律失常揭示发病的特殊机制及某些特殊电生理现象（如隐匿性传导、空隙现象等）。 7．晕厥原因不明。 8．心律失常考虑介入性治疗或植入起搏器。 9．抗心律失常药物筛选或药理学研究。 禁忌证 1.严重心功能不全。 2.长QT间期且伴室性心动过速。 3.全身感染、局部化脓、细菌性心内膜炎。 4.出血性疾病和严重出血倾向。 5.严重肝肾功能障碍、电解质紊乱、恶病质。 6.不具备心电生理检查条件。 实用文档
用品及准备 电生理检查室的基本要求和设备 1.严格无菌的导管室。 2.有电视监视器的X线机。 3.多导电生理记录仪。 4.多极电极导管。 5.心脏监护仪和电复律设备。 6.必要的急救药品和设备。 1．导管电极 （1）心内导管电极：在盲端导管的远侧装有白金电极环，宽2mm，电极间距离为10mm。记录希氏束图的通常用三极电导管，每个电极在导管内有一导线从导管尾端通出连接记录导线，导管直径以7F较为合适。如欲在心房、心室内同时进行刺激或记录，应另准备二极或四极导管，前者只作刺激或记录用，后者一对电极作记录用。 （2）食管导管电极：为一特制的Z极电极导管，经鼻腔送入食管，在距鼻孔35cm左右（32-37cm）即达左心房水平，如再向下送4-5cm，则电极达左室后壁水平。以上为可进行心房或心室调搏的位置。 2．放大器 实用文档 前极必须用浮地式隔离放大器。
电生理实验室电极植入手术基本流程
动物头部电极植入手术操作流程 一、大鼠麻醉选择与使用： 1、麻醉剂选择：戊巴比妥钠 40～60mg/kg,体重小于300g时，可考虑55mg/kg或酌 情减少用量（2-3%浓度）；或乌拉坦1～1.5g/kg（20-25%浓度） 2、根据体重换算出麻药用量，注意所配药品浓度，根据需要的mg数，决定注射的ml. 3、给药途径：腹腔注射 4、操作流程：右手轻轻捉住大鼠尾巴，将大鼠放置在鼠笼上方或操作台上，待其安静后，可用左手的姆指和食指捏住耳后枕颈部皮肤即可提起，掌心向上将鼠体置于掌心中，用无名指和小指将鼠尾压住。腹腔注射位置：两大腿根部水平线，中线旁1-2cm.腹腔平面向上倾斜45°，插入时有落空感，回抽无血，匀速注入。 5、电极植入中麻醉维持：如手术时间过长，动物麻醉效果减轻时，可用乙醚适当吸入麻醉。 二、电极制作 实验中所用电极应预先准备，根据实验目的和要求，选择不同电极。 1、皮层电极，可选用小不锈钢螺钉（眼镜/手表用螺钉） 2、深部电极，采用绝缘金属丝制作 三、手术流程 1、术前准备： （1）手术器件准备： 大、小手术剪各1把，弯头止血钳4-6把（用于暴露手术视野），手术刀柄及刀片，直止血钳1-2把（用于手术中夹持止血），持针器1把（用于皮肤缝合），手术针（弯针），缝线若干，小螺丝刀1把（用于固定螺钉电极），有齿镊1把，小手术镊1-2把，钻头1-2个（大小根据实验需要确定），手术盘（手术中放置手术器件）1个，器件盒1个（用于手术器件消毒保存） 上述手术器件需要进行消毒灭菌处理（高温高压消毒或75%酒精浸泡30分钟。（2）其它实验所需物品 玻璃器皿（盛水,用于丢弃毛发），消毒棉棒，明胶海绵（止血用，需要事先剪成小
数字神经电生理系统配置及功能
数字神经电生理系统配置及功能 硬件部分： 功能模块及配件 模块功能： ,NET平台、多语言界面(中/英/俄/法/德)、自定个性化操作/回放界面、支持网络数据库、即时查看报告设定条件查找数据、灵活设置多样的采集模板、分析模板(可达到自动采集和自动分析) 基于MS Word的专业报告输出、可设置个性化报告模板适于各种应用 基本EEG采集、存储(支持网络数据库)、检索、分析、回放；多种参数2维(可实时)和3维地形图 实时棘尖波/癫痫活动监测、回放棘尖波/癫痫活动搜索及分析、频谱/趋势图/aEEG及分析； 相关分析/相干分析/小波分析/独立成分分析 导联设置可满足“10-20”和“10-10”系统可包含非EEG导联； 模块功能： 支持实时视频图像与EEG同步采集，可轻松实现双视频
睡眠采集/分析功能 具有EEG、眼动、下颌肌电、心电、腿动、血氧、二氧化碳浓度等采集功能 可完成睡眠分期、心率分析、腿部运动分析、血氧分析、睡眠现象搜索等 各种参数趋势图 模块功能： 闪光视觉诱发电位(FVEP)、模式翻转视觉诱发电位(PVEP) 脑干听觉诱发电位(ABR)、中/长潜伏期听觉诱发电位(MLAEP/LLAEP)、前庭诱发肌源性电位(VEMP) 体感诱发电位(SSEP)、脊髓诱发(TSEP)、三叉体感诱发(SCEP) 认知电位(P300)、失匹配阴性波(MMN)、伴随负反应(CNV)；
模块功能： 神经传导 运动神经传导；感觉神经传导；微移；复合传导；F波；H反射、H反射(成对刺激)；重复电刺激；瞬目反射 交感皮肤反应；运动单位数目估算(MUNE);震颤分析；骶骨反射；球海绵体反射； T反射（*）；经颅磁刺激（*）；*项需另外购买相应的刺激器 定量肌电图 自发肌电：静息、纤颤、束颤、正锐波、肌强直放电、椎体束外刚性、震颤 干扰相分析(IPA)：翻转幅度-翻转频率图/表、频谱分析图/表 运动单位分析(MUP)：自动MUP采集和手动MUP采集、幅度分布/时限分布/相位分布/时限-幅度分布图表单纤维肌电图(SFEMG)、 巨肌电图 模块功能： 治疗多动症、矫正成瘾等 多用于科研 模块功能： R-R interval； R-R Valsalva； cardio-vascular refiex test 模块功能（此模块必须与脑电图模块和常规诱发电位模块同时配置）： 多达21通道的(与脑电图同步)P300、CNV、MMN以及和 长潜伏期听觉诱发电位 视觉诱发电位 诱发电位地形图
电生理实验常见问题解答
电生理实验常见问题解答（1）『转载』 2010-10-09 14:53 请问目前分析细胞外放电的信号处理软件较好的是什么？ 价格昂贵的有国外的PCLAMP系列软件和POWERLAB；价格便宜的较好用的有国产的PCLAB 和MEDLAB。如果感兴趣输入GOOGLE，一搜即知。axon guide是很经典的哦，大家可以到公司主页上下载本书主要针对PATCH，是AXON公司的产品配套广告说明书，但是也包含了不少基本电生理知识，集中阅读一下第1、2章节有帮助。可以下载看看，网站如下，https://www.docsj.com/doc/6611498100.html, 请教：干扰的大小如何检测？ 检测干扰大小和你记录电信号一样，可以从相关软件读出来，也可以从示波器上读出。建议丁香妹妹找一些基础电生理书籍熟悉一下，不要着急，先入门为重。 请问微电极的电阻如何测量?怎样才能保证电极尖端已被电极内液完全充满? 给予电极一个电流/电压，可以从示波器上读出来，也可以从相应的放大器上显示出来。建议购买带有芯的玻璃电极，这样可以简单地从尾部灌入内液后，轻轻用手指敲打电极即可；如果是无芯电极，就需要先用注射器将电极尖端充满，而后在从尾部灌入内液。 问题是有时尖端太细,从尾部注入内液后,很难保证尖端全被充满. 注射器接皮管——皮管接电极尾部——电极尖端深入电极液中——抽吸注射器——电极尖端充满液体——再从电极尾部管电极内液——解决问题了。 我在记录细胞外放电时,干扰太大,诸如50hz的交流电干扰,请问如何尽可能地排除这些干扰信号? 交流电干扰应该不难处理，只需要中间接一个直流电转换器即可。 我想用Patch做平滑肌的BK通道,请教Pleace前辈,在酶解法分离细胞时,使用DMEM会因为含钙高而影响结果吗?文献多数都用无钙液，如果使用前我用PBS洗三次是否可以？ 你最好用无钙液，即使后来用PBS洗三次也不可以。因为之前的无钙液操作不仅可以保护细胞，而且可以使之处于低兴奋状态。 屏蔽和接地是电生理基本要求。如果你记录的信号足够大的话，可以不用屏蔽。但生物电信号一般都很弱，这就是为什么要屏蔽和接地。也是为什么很多时候晚上做实验干涉小——因为晚上用大功率电器的人相对少些，空间的电磁干扰相对小些，地线相对也干净一些。屏蔽笼即法拉第笼，一般是一层铜网，一层铁网。铜网屏蔽电，铁网屏蔽磁。屏蔽笼和系统的信号共地。关于地线，根据你的系统所记录的信号的强弱要求可以不同，信号越弱，要求越高。一般细胞外记录甚至更粗的记录要求相对不高。要是做到单通道水平，就不是凑合能解决问题的。就是这样，电生理的地线也应该和公共地线区分开来。一般比较正规的电生理实验室的地线应该单独埋设。地线埋设的要求其实很简单，尽量减小对地电阻。但实施起来就有很多方法了。我听说的一个方法是：从实验室下到地的主线用大概10cm 的铜缆。地上要挖个深1.5—1.8m、1.5*1.5m宽的坑。铜缆用铜铆钉（尽量减少材质造成的电阻差异）焊在一块1.5m*1.5m*4cm的铜板上。铜板放入坑中。板上埋2.5kg食盐、2.5kg 木炭。再将坑添上。主线到各个信号地分支点用铜棒焊接。铜棒上钻孔接地线。仪器电源不直接接到公共电源上，而是通过稳压隔离电源后接到另设的电源上。仪器电源的地线和系统的信号地分开接地。信号地接到单独埋设的地线上。仪器电源的地线也就是三相插头的顶端那个插头很多时候不接。 震动太大：可能原因有防震台防震效果不好，充气不足，或是实验室附近有什么强振动源；记录槽设计是否合理；液体流速是否太快？ 记录系统是否稳定：微电极放大器电容补偿是否调好，是否需要校正？记录系统干扰和噪
心电电生理网络管理系统解决方案
心电电生理信息管理系统解决方案（院内、院外） 沈阳市威灵医用电子有限公司
目录 一、公司简介---------------------------------------------------------------3 二、项目背景---------------------------------------------------------------5 三、建设心电信息管理系统的意义------------------------------------5 四、院内解决方案 1、院方需求---------------------------------------------------------7 2、解决方案---------------------------------------------------------9 3、实施步骤--------------------------------------------------------30 五、区域电生理联网系统 1、概述--------------------------------------------------------------32 2、解决方案--------------------------------------------------------33 3、实施步骤--------------------------------------------------------38 六、整体项目实施周期表----------------------------------------------39 七、售后服务及承诺-----------------------------------------------------40
云南省昆明市官渡区2019-2020学年高一上学期期末学业水平检测语文试题 Word版含答案
官渡区2019～2020学年上学期期末学业水平检测 高一语文 （本试卷共有四大题22小题，共8页；考试用时150分钟，满分150分） 注意事项： 1．答题前，考生务必用黑色碳素笔将自己的姓名、准考证号、考场号、座位号在答题卡上填写清楚，并认真核准条形码上的准考证号及姓名，在规定的位置贴好条形码。 2．考生必须把所有的答案填写在答题卡上，答在试卷上的答案无效。 3．选择题每小题选出答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案选项框涂黑。如需改动，用橡皮擦擦干净后，再选涂其它答案选项框，不要填涂和勾划无关选项。其他试题用黑色碳素笔作答，答案不要超出给定的答题框。 4．考生必须按规定的方法和要求答题，不按要求答题所造成的后果由本人自负。 5．考试结束后，将答题卡交回。 一、现代文阅读（36分） （一）论述类文本阅读（本题共3小题，9分） 阅读下面的文字，完成l～3题。 甲骨文是迄今为止中国发现的年代最早的成熟文字系统，是汉字的源头和中华优秀传统文化的根脉。被称为“绝学”的甲骨文与甲骨学，内容丰富，是重建中国上古史，透视三千年前殷商社会生活景致，寻绎中国思想之渊薮、中国精神之缘起、中国古代信仰之源头、中国传统文化特质与品格之由来、中国艺术美学之发轫的最真实的素材。 甲骨文是刻写在龟甲兽骨上的古典文献遗产，其时代属于商王朝后期。甲骨文出自3000多年前殷商王朝特殊人群之手，包括商王、贵妇、王室成员、卜官、贵族、各方巫师、地方要员等。这些人群以特有的占卜文例形式（通称甲骨卜辞）或记事文例形式（通称记事刻辞），在龟甲兽骨上写刻下贯以他们的思维方式、行为方式、信仰追求的日常生活事象，记下了真实存在的商王室谱系，记下了大量的神名、先王先妣名、贵显人物名、诸侯方国君长名、部落族长名、外交使者名与神话传说人物等，揭示出王位继承法与婚姻亲属制的特点，王事与臣属活动的政治景观，重大事件中的人物思想情感表现，商王与诸侯方国的关系，官僚机构与职官的职掌，社会生活中权贵与平民、奴仆的阶级结构，经济产业的管理者与手工业劳动者的等级关系，不同族群的宗教意识
神经外科术中神经电生理监测与麻醉专家共识(2014)
神经外科术中神经电生理监测与麻醉专家共识（2014） 中华医学会麻醉学分会 王天龙王国林（负责人）王保国王海云石学银许幸孙 立李恩有陈绍辉孟令梅徐世元郭曲练黄焕森梁伟民韩如泉（执笔人）裴凌 目录 一、躯体感觉诱发电位 二、运动诱发电位 三、脑干听觉诱发电位 四、肌电图 五、脑电图 六、附录 神经系统具有通过电化学活动传递信息的独特功能，意识状态改变时（例如昏迷、麻醉），可以通过监测电化学活动评估神经系统功能状态。然而，传统的生理监测（例如血压和血氧）仅能作为反映神经系统功能状态的间接参数。术中神经生理学监测虽然不能取代唤醒试验，但可以发现那些改变神经功能的手术操作或生理学内环境变化，监测处于
危险状态的神经系统功能，了解神经传递过程中电生理信号的变化，从而帮助手术医师及时、全面的判断麻醉状态下患者神经功能的完整性，提高手术操作者的术中决策力并最终降低手术致残率。除了手术因素，生理学管理和麻醉药物的选择也会影响神功能。我们应当重视所有团队成员（例如外科医师，麻醉医师和神经电生理监测医师）的努力。 目前，神经处外科手术中常见的电生理监测技术包括：躯体感觉诱发电位（somatosensory evoked potentials，SSEP），运动诱发电位（motor evoked lpotentials，MEP），脑干听觉发电位（auditory brainstem responses，ABRs），肌电图（electromyography，EMG）和脑电图（electroencelphalogram，EEG）等。 一、躯体感觉诱发电位 刺激外周神经引发的感觉冲动经脊髓上传至大脑，在整个传导路上的不同部位放置记录电极，所记录的神经传导信号经监测仪信号放大器放大后的波形就是SSEP。SSEP头皮记录电极的入置基于10-20国际脑电图电极放置系统进行定们（见附图7-1）。
电生理基础知识
病人需常规穿刺锁骨下静脉，股静脉，必要时穿动脉，常规放置心内电生理电极导管，最长的为高位右房（HR），HIS束，冠状窦CS，和右室心尖（RV）和射频导管熟称“大头”常规投照体位位左前斜位（LAO）右前斜位（RAO）前后位（AP）和后前位（PA）
LAO 下两个瓣环的大概位置注意CS 电极的形状
RAO下4个电极的位置 正位AP 注意一下脊柱的位置和电极弧度的变化 上两图为RAO、下为LAO 分别显示了环肺标测电极分别进入左上LSPV、右上RSPV、左下LIPV、右下RIPV肺静脉的情况
心律失常的射频消融已经从原来的二维观察过度到现在的三维重建，目前三维的的操作界面有两种，一种为圣犹达的Ensite 3000系统分NavX和Array ，NavX 系统为接触式标测，Array 为非接触式标测，就是熟称的“球囊”再有一种就是强生的“CARTO" 介绍一下Ensite 3000指导下的常见消融 这是该系统的电极贴片 Ensite系统采用的是贴片定位技术，分六块贴片，前后、左右、头颈后部，和左大腿内侧 中间的是一个计时模块，一旦激活计时模块，系统便倒计时18小时。 这是ensite系统的组成，想有些同道在导管室已经见过了，但还是给大家看一下
以房颤消融AF为例简要说明一下，第一步，导管进入心腔后由于AF需要穿房间隔，待穿刺后激活系统，系统可以显示导管在心腔内的位置，注意，图中一个长的是放在CS的冠状窦电极，一个是在心房4极电极 这是用导管在建立左心房模型，导管到过的位置就可以被记录下来，这样可以用导管在心腔内勾画一个模型，而且是立体的，图中是建的左房，因为房颤要打左房和肺静脉
总结分析水滴爱心筹与轻松筹、慢友帮爱心筹、WE救助业务
总结分析水滴爱心筹与轻松筹、慢友帮爱心筹、WE救助业务 现在大病筹款在网络上兴起，常见的水滴爱心筹、轻松筹、慢友帮爱心筹和WE救助等，但是这四者有什么不同呢?怎么去进行选择呢?下面将对这四者做一比较分析，希望能给大家带来帮助。 一、提现和手续费分析 水滴爱心筹：免费，求助全过程0手续费，10分钟就能完成申请，善款会直接打到收款人银行卡内; 轻松筹：收取2%的手续费用，剩余善款会打到收款人银行卡内; 慢友帮爱心筹：虽说不收取手续费用，但是在提现时微信会扣除1%的支付手续费。剩余善款会打到收款人银行卡内; WE救助：5万内不收费，筹款金额5万内由发起人申请提现，超过5万部分收取1%手续费，并由慈善组织介入管理，需要提供医疗发票才能给拨款，过程比较麻烦。 二、结束方式分析 水滴爱心筹：时间达到可以提现，并且都可以提前提现; WE救助：不可以提前提现。 三、筹款时间分析
水滴爱心筹：1-30天(随时可提现); 轻松筹和慢友帮爱心筹：3-30天; WE救助：时间是小于30天。 四、提交筹款审核后的筹款顾问反馈 水滴爱心筹：筹款人提交审核后，很快就有筹款顾问打过来电话(除大晚上哦)，帮助修改上传的资料和告知一些注意事项，随后就会快速上线。 轻松筹、慢友帮爱心筹和WE互助：你提交审核后，如果有问题直接拒绝掉，就一个“资料不全”给打发了。也不会有筹款顾问给你打电话告诉你怎么填写。 五、被质疑 水滴爱心筹：收到质疑，工作人员第一时间联系举报人核实情况，也会根据所举报情况联系筹款人，但在这期间不会影响筹款。 轻松筹和慢友帮爱心筹：收到举报后，处理时间不详。 WE救助：发起项目被举报后，会停止筹款。 六、筹款过程中
电生理实验
电生理实验 (一)神经干动作电位的测定 一．实验目的 （1）观察神经干动作电位的特点 （2）观察记录动作电位的幅度与刺激强度的关系、动作电位的潜伏期及演变过程。二．实验对象 蛙的坐骨神经-腓神经标本。 三．实验器材 蛙板、蛙钉、剪刀、镊子、玻璃分针、瓷盘、滴管、任氏液。神经标本屏蔽盒、生物信号采集处理系统、打印机等。 四．实验原理 细胞兴奋时，产生动作电位的部位的除极化过程，使该处细胞膜外的电位下降。因此，发生兴奋的部位相对于静止部位而言呈负电（细胞膜除外），即兴奋部位与邻近未兴奋部位之间存在电位差。这种电位差可以用电极以及生物信号采集系统进行记录和显示。 五．实验过程 （1）制备蛙的坐骨神经-腓神经标本。 （2）连接测试系统。 （3）调节生物信号采集处理系统的参数至合适的工作状态。 （4）进行动作电位观察。刺激强度由1V起逐步增大，直至观察到产生动作电位。记录此时的刺激强度。 （5）继续逐步增加刺激强度，观察记录动作电位的幅度与刺激强度之间的关系。 六．实验结果记录、分析 （1）刺激强度从1V起逐渐变大。 1V： 1.5V：
1.8V： 2V：
由于担心过大电压对神经干产生损伤，在增加到2V以后就没有再加大。 （2）随着刺激的增大，动作电位的幅值没有变化，一直稳定在1.810mV。这反映了动作电位的“全或无”特性。 七．注意事项 （1）神经标本分离出来以后，应在任氏液中浸泡片刻，以恢复并稳定其兴奋性。 （2）神经标本放入标本盒中后，应保持标本与电极之间的良好接触，并保持标本的湿润（否则标本将失去活性）。 （3）刺激应从低强度开始逐渐增加至适当强度，且不宜使用过强的刺激以及连续刺激标本，否则将会对标本产生不可逆转的损伤。 八．思考题 （1）用动作电位的“全或无”理论，解释实验中观察到的动作电位的幅度与刺激强度之间的关系。 实验中增大刺激强度时，动作电位的幅度并没有变化。因为动作电位存在“全或无”的特性；当动作电位传导到另一位置时，动作电位幅度因刺激强度的增大有所增大，这是因为实验所用的不是单一神经，而是多个神经组成的神经干，这与“全或无”是不矛盾的。（2）解释双相动作电位和单相动作电位的产生机制。 在神经干上放置一对记录电极a、b，静息时记录不到电位差。当在神经干一段进行刺激时，表现为负电位变化的动作电位由此极端向另一端传导。当其传导到a电极时，a、b 之间出现电位差，a负b正。此时可记录到上相波。当动作电位传至两电极之间是时，a、b 又处于等电位状态。动作电位进一步传导当到达b电极时，a、b之间又出现电位差，a正b 负，此时可记录到下相波。然后记录又回到零位。如此获得的呈双相变化的记录就称为双相动作电位。 但是，当a、b之间的或b处的神经干被阻断或损伤时，由于损伤电位的存在，在进 行刺激之前就能记录到电位。当在神经干另一端进行刺激时，a极的电位变化实际上是负电