肌肉特殊染色

肌肉冰冻切片经常使用组织学及酶组织化学染色技术之阿布丰王创作

（—）苏木精和伊红染色（Hematoxylin and Eosin, HE）

1．苏木精溶液染色10分钟

2．流水冲刷10分钟

2．伊红溶液染色3分钟

4．流水冲刷1分钟

5．梯度酒精脱水,透明树胶封固

骨骼肌HE染色（肌膜核蓝色,肌纤维粉红色,结缔组织淡红色）

（二）改良Gomori三色染色方法（Modified Gomori Trichrome, MGT）

1．Harris苏木精10分钟

2．水冲刷 10分钟

3．Gomori氏溶液30分钟～60分钟

4．0．2%醋酸浸洗1分钟

5．酒精脱水,二甲苯透明,树胶封固.

骨骼肌MGT染色（核紫红,肌纤维暗绿色,胶原亮绿

色 ,线粒体红色）

（三）PAS反应法

(Periodic Acid Schiffs reaction, PAS) 1．固定于Carnoiy氏固定液10分钟

2．流水冲刷2分钟

3．0．5%过碘酸5分钟

4．蒸溜水洗1～2分钟

5．Schiff氏溶液15～30分钟

6．流水洗5～10分钟

7．Harris苏木精溶液2分钟

8．流水洗5分钟

9．脱水、透明、封固（合成树胶）

骨骼肌PAS染色结果：糖原红色,肌内肌原纤维用清

晰可见ⅡA纤维染色反应强,ⅡB、ⅡC、Ⅰ型纤维呈

中间型.

（四）苏丹黑B染色

1.苏丹黑溶液20分钟（加盖防气化）

2．流水洗

1．过滤的苏木精染1分钟

4．流水洗2分钟

5．甘油明胶封固

结果：脂类物质染成黑色,.

（五）四氮唑还原酶(NADH—tetrarolium redutase, NADH—TR )

1.孵育于下列基质内30分钟,37℃

0.05M（或0.2M）Tric缓冲液（PH7.4） 30ml 硝基四氮唑（BNT）30mg

NADH 24mg

2.蒸馏水洗.

3. 甘油明胶封固.

骨骼肌NADH－TR染色(Ⅰ型肌纤维紫兰色,Ⅱ型肌纤维淡灰色).

（六）琥铂酸脱氢酶（Succinate dehydrogenase,SDH）

染色步伐

1．孵育于下列基质30分钟,37℃（琥泊酸钠100 mg 硝基四氮唑兰 10 mg 吩嗪二甲脂硫酸盐0.3 mg 0.1M Tris缓冲液30ml 调PH7.2 ）

2．顺序在60%、90%、60%丙酮顺序脱水及蒸馏水清洗

3．甘油明胶封固.

骨骼肌SDH染色（Ⅰ型纤维色深,ⅡA、ⅡC中间

型,ⅡB染色浅）

（七）细胞色素氧化酶染色（COX）

1．下述基质内孵育1～4小时 37℃

DAB（3, -3,-二氨基联苯二氨盐酸盐）30mg

0．1M醋酸缓冲

液 14. 0ml

1%氯化

锰

1.5ml

0．1%新鲜过氧化

氢 0.15m l

2．蒸馏水冲刷

3． 1%硫酸铜冲刷5分钟

4．蒸馏水冲刷

5．甘油封固

肌纤维呈褐红色,代表线粒体反应,细胞色素氧化酶缺陷时则无色.

（八）腺苷三磷酸酶(Adenosine Triphosphatase, ATPase)

1.制备下述溶液：

A）碱性溶液： 0.1M 巴比妥钠 1份体积

0.18M CaCl2 1份体

积

蒸馏水 3份体积

调PH 9.7-11.0

B）主要孵育液及上清液：

0.1M 巴比妥钠 2份体积

0.18M CaCl2 1份体积

蒸馏水 7份体积上述溶液分成二份即B（-）与B（+）,B（-）为上清液,B（+）液为孵育液,即将B液20ml+ATP-Na:50mg调PH9.7.

C）酸性反应液：

0.2M-巴比妥醋酸缓冲液

0.2M-巴比妥醋酸盐溶液 5份体积

0.1M HCL 10份体积

蒸馏水 8份体积

调PH 4.2-4.6

2．碱性PH染色片置于A液15分钟

3．10分钟后将酸性PH染色片置C液内5分钟

4．取出

5．全部切片置于B（+）溶液内45分钟6．制备下述溶液

1% CaCl2 2g/200ml

2%CoCl2 1g/50ml

0.01M- 巴比妥钠溶液 1000ml 7． 1% Cacl2溶液内洗三次10分钟. 8． 2%Cocl2 溶液内3分钟

9．流水洗2分钟

10．0.01M-巴比妥钠溶液内洗8次11．1%黄色硫化铵30秒

12．流水洗15分钟 0

13．脱水、50%—100%酒精

14．二甲苯透明两次

15．封固

（九）AMP染色(单磷酸腺苷脱氢酶) adenosine monophosphate deaminase 1）反应液

蒸馏水 14ml

AMP 6mg

NBT 15mg

3MKCl 1ml(搅拌同时慢慢加入)

0.1N NaOH 调整PH6.1

DTT 8mg

2)室温1小时反应

3）150mKCl-1.5mM citrate(PH6.0) 2次洗净

4）自然干燥

5）甘油胶封片固定

（十）Acid Phosphataso染色（酸性磷酸酶）

1）反应液①萘酚AS-BI （naphtol AS-BI） 1ml

巴比妥醋酸钠缓冲液(veronal acetate) 5ml

蒸馏水 14ml

②4%NaNo2(sodium nitrite)

0.8ml

副品红碱液(pararosaniline) 0.8ml 室温放置2分

②加入①中混合PH4.7-5.0用1N NaOH

调整过滤

2）37℃孵化60分

3）水洗

4）2%甲基绿(methyl green)（滤过）数秒

酒精脱水,二甲苯透明.

5）加拿年夜胶封片固定

特殊染色

结缔组织染色法 Mallory三色染色法：胶原和网状纤维蓝色，软骨、淀粉样变物质淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒红色，髓鞘和红细胞橘红色。 2.Masson三色染色法：胶原纤维绿色，肌纤维红色，红细胞橘红色。鉴别胶原纤维和肌纤维最宜采用的方法。 3.三联染色法：胶原纤维红色，网状纤维黑色，弹性纤维绿色，肌肉和红细胞淡黄色。 二.胶原纤维染色 1.Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法：胶原纤维鲜红色，肌纤维、细胞质和红细胞黄色，胞核蓝褐色。与胶原纤维染色相比的缺点是：易褪色和对比度差。 2.天狼星红（Sirius Red）苦味酸染色法：胶原纤维红色，细胞核绿色，其他黄色。在偏光显微镜下可见4种胶原纤维。 三.网状纤维染色：包括：Gomori和James。 Gomori银氨染色法：网状纤维黑色，胶原纤维红色。鉴别诊断中的应用：1）癌和肉瘤的鉴别。2)恶性淋巴瘤和组织细胞肉瘤。3）血管内皮细胞瘤和外皮细胞瘤。4）黏液纤维瘤和黏液肉瘤。 四.弹性纤维染色：效果最好的固定液是：甲醛生理盐水。Gomori醛复红染色法：弹力纤维深紫色，黏液紫色（肥大细胞颗粒、胰腺B 细胞颗粒、垂体B细胞均能同时着色），背景不同程度的黄色。1）配制后需在室温静置1-2日。2）是碱性品红加入三聚乙醛和盐酸配制而成。3）醛复红所谓的成熟是颜色为深紫色。3)可使胃主细胞着

色。5）应放置在冰箱内保存。 五.显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法：维多利亚蓝+丽春红S：弹性纤维蓝绿色，胶原纤维红色，背景淡黄色。 六.横纹肌组织染色：Mallory磷钨酸苏木精染色法(PTAH)：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、横纹肌等均蓝色；胶原、网状纤维、骨基质及骨黄色或玫瑰红色。1）要在室温下成熟。2）可使用高锰酸钾促使PATH成熟。3）乙醇分化时要保存一定的红色。4）染色后用无水乙醇快速脱水，冷风稍干燥后封固。 七.糖类染色：过碘酸的作用是氧化。过碘酸-Schiff（PAS）染色法：糖原及其他PAS反应阳性物质红色，细胞核蓝色。注意事项：1）糖原固定必须及时。2）组织要取小块固定。3）Schiff液配好后，需放在棕色瓶内，冰箱保存。4）Schiff液使用时由冰箱取出需适应室温在进行染色。 八.黏液物质（黏多糖）染色：Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）染色法：中性黏液物质（黏多糖）红色，酸性蓝色，混合性紫红色。中性黏多糖阳性的细胞有甲状腺滤泡上皮细胞、胃黏膜表面上皮细胞、结肠黏膜上皮细胞。 九.黑色素染色： 1.Masson-Fontana黑色素银浸染色法：黑色素及嗜银细胞颗粒黑色，胶原纤维红色，背景浅黄色。 2.Lillie亚铁染色法：黑色素暗绿色，背景浅绿或不着色，肌纤维和背景黄色。

病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)

结缔组织染色法 1.1 Mallory三色染色法 蓝色：胶原和网状纤维 淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质 红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒 橘红色：髓鞘、红细胞 图表 A 1.1.Mallory染色，显示胶原纤维，A组排列规则1.2.Masson三色染色法 绿色：胶原纤维 红色：肌纤维 橘红色：红细胞 图表 B 1.2 Mssson三色法 图表 C 1.2.Masson三色染色胃癌组织中血管平滑肌 1.3.显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法 红色：胶原纤维 黑色：网状纤维 绿色：弹性纤维 淡黄色：肌肉、红细胞 图表 D 4.Weigert间苯二酚法 二、胶原纤维染色法 2.2.Van Gieson〔V.G〕苦味酸-酸性品红法

鲜红色：胶原纤维 黄色：肌纤维、细胞质、红细胞 蓝褐色：胞核 图表 E 2.胶原纤维，Van Gieson(V.G.)苦味酸-酸性品红法 图 心肌堵塞 myocardial infarction ：心肌堵塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。 2.1 天狼星红〔Sirius red 〕苦味酸染色法(参照上图) 红色：胶原纤维 绿色：细胞核 黄色：其他 三、网状纤维染色 3.1 Gordon-Sweets 银氨染色法 〔梅花开枝图，金色伴树枝〕 黑色：网状纤维 红色：胞核〔核固红复染〕 黄棕色：胶原纤维 淡红色：细胞质〔红液复染〕 图表 F 3.Gordon-Sweets 氢氧化银氨液浸染法 3.2 Gomori 氏银氨液配制法 图表 GGomori 氏银氨液配制法 四、弹性纤维染色 Gomori 醛复红染色法 *甲醛生理盐水液固定的染色效果最正确 图表 H4.GOMORI 醛复红染色法 五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法 蓝绿色：弹性纤维 红色：胶原纤维 黄色：背景 图表 I 4.Weigert 间苯二酚法 六、肌肉组织染色 △ 横纹肌组织染色 Mallory 磷钨酸木精染色法〔PTAH 〕 蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌 黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨 微紫色：粗弹性纤维〔有时〕 天狼星红苦味酸染色法：〔偏光显微镜〕 Ⅰ型：强双折光性，呈黄色或红色纤维 Ⅱ型：弱双折光，呈多种色彩疏网状分布 Ⅲ型：弱双折光，呈绿色的细纤维 Ⅳ型：弱双折光的基膜，呈淡黄色

病理切片的特殊染色方法

1.Van Gieson苦味酸和酸性品红法 【染色方法】 （1）中性甲醛固定组织，石蜡切片； （2）组织切片脱蜡至水； （3）用Van Gieson液染1～5分钟； （4）倾去染液，直接用95％乙醇分化和脱水； （5）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 【结果】胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞呈黄色。 2.Masson氏结缔组织三合染色法 【染色方法】 （1）石蜡切片厚6μm，脱蜡至水； （2）0.2％冰醋酸水溶液浸泡片刻； （3）Masson氏染色液中5分钟或更长时间； （4）0.2％冰醋酸水溶液浸泡片刻； （5）5％磷钨酸水溶液2～3分钟，再入0.2％冰醋酸水溶液浸洗（6）投入淡绿、冰醋酸水溶液浸染5分钟或更长时间； （7）再入0.2％冰醋酸水溶液浸洗片刻； （8）脱水、透明和封固。 【结果】胞浆和神经胶质纤维染红色，胶原纤维染绿色。 二、常用网状纤维染色方法 【染色方法】 （1）石蜡切片、脱蜡至水； （2）0.25％高锰酸钾液3分钟； （3）蒸馏水洗2次； （4）1％草酸漂白即可； （5）蒸馏水洗2次； （6）2.5％铁明矾水溶液媒染5～10分钟，蒸馏水洗多次； （7）二氨氢氧化银浸染1分钟，蒸馏水洗3次； （8）10％甲醛液还原2分钟，蒸馏水洗3次； （9）0.2％氯化金液调色1～2分钟，蒸馏水洗3次； （10）5％硫代硫酸钠固定5分钟； （11）蒸馏水洗，需要时复染； （12）水洗、脱水、透明和封固。 【结果】网状维呈黑色，其他组织呈复染的颜色。

显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法 【染色方法】 （1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水； （2）切片入70％乙醇中洗2分钟； （3）将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0.5～2小时； （4）直接入95％乙醇中分色数秒钟； （5）浸入蒸馏水洗2分钟； （6）用丽春红S液滴染切片5分钟； （7）直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次； （8）将切片在空气中或冷风干燥； （9）二甲苯透明，中性树胶封固。 【结果】弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。 四、脂肪染色 【染色方法】 （1）冰冻切片厚度8～15μm； （2）Harris苏木素，染约1分钟； （3）自来水洗后，用0.5％盐酸乙醇分化，再水洗直至胞核返蓝为止； （4）蒸馏水洗后移入70％乙醇内浸洗一下； （5）浸入苏丹III染液中约30分钟或更长时间（如果置于56℃温箱中可适当缩短时间）； （6）在70％乙醇分化数秒钟； （7）待切片在空气中稍凉干或用冷风机吹干； （8）及时用明胶甘油封片。 【结果】脂肪呈橘红色，脂肪酸不着色，胞核淡蓝色。 五、糖原染色 高碘酸－Schiff（Periodic acid Schiff，PAS）染色法 【染色方法】 （1）切片脱蜡至蒸馏水； （2）浸入高碘酸氧化液中10～20分钟； （3）蒸馏水洗2次； （4）Schiff液染色10～30分钟； （5）流水冲洗5分钟； （6）用苏木素染细胞核3～5分钟； （7）在盐酸酒精中分化，自来水洗至细胞核变蓝为止；

皮肤组织特殊染色法一览表

皮肤组织特殊染色法一览表 皮肤组织特殊染色一览表 显示内容染色方法染色结果 胶原纤维Masson染色法胶原纤维蓝色；细胞质、肌肉 和神经红色；细胞核黑色 弹性纤维①Verhoeff-Van gieson染 色法弹性纤维蓝黑或黑色；胶原纤维红色；细胞质和肌肉黄色 ②地衣红（Acid orcein)染 色法 弹性纤维深棕色 ③间苯二酚品红染色法弹性纤维紫色 网状纤维①硝酸银浸染法网状纤维、黑色素和神经黑 色；胶原纤维紫色；细胞质和 细胞核灰色 ②Wilder染色法网状纤维黑色；胶原纤维玫瑰 红色；其它组织红色 黑色素Fontana-Masson氨银法黑色素黑色；细胞核粉色 细菌Gram-Weigert染色法革兰氏阳性菌蓝色；革兰氏阴 性菌红色 真菌，Donovan小 体 六胺银法真菌、Donovan小体黑色 真菌、黏多糖PAS反应真菌、基底膜、含中性黏多糖 的黏蛋白、糖原、纤维素和网 状纤维呈玫瑰红色至紫红色 真菌，纤维素磷钨酸苏木精（PTAH）染 色法肌肉、纤维素、细胞核和细胞质蓝色；胶原纤维、网状纤维、基底膜呈红至棕红色 螺旋体Donovan小体Warthin-Starry染色法螺旋体如梅毒苍白螺旋体，Don ovan小体呈黑色 酸性黏多糖①Alcian blue染色法酸性黏多糖蓝色 ②甲苯胺蓝（Toluidine bl ue)染色法酸性黏多糖呈异染性紫色；肥大细胞颗粒红至紫红色 ③胶样铁法酸性黏多糖深蓝色'胶原纤维红 色；细胞质和肌肉黄色 肥大细胞颗粒，利什曼原虫Giemsa染色法肥大细胞、酸性黏多糖呈异染 性紫红色；利什曼原虫、嗜酸 性粒细胞颗粒呈红色 耐酸杆菌①Fite染色法耐酸杆菌如结核杆菌及麻风杆 菌呈红色 ②Ziehl-Neelsen染色法耐酸杆菌如结核杆菌及麻风杆 菌呈红色

特殊染色

字号：大中小第一节结缔组织和肌纤维染色 Van Gieson苦味酸酸性复红法(VG法) 用途：VG法用于区分胶原纤维和肌纤维。 原理：酸性复红和苦味酸对这两种纤维都具有较强的亲合力，结果胶原纤维被酸性复红染成红色，肌肉被苦味酸染成黄色。此方法是一种优良的传统方法。 固定：10%福尔马林 切片：4-6微米 试剂： Weigert铁苏木精液： A液：苏木精1g，无水酒精100 ml。一般配制后需要数周或数月自然氧化，成熟后使用。B液：29%三氯化铁水溶液4 ml，蒸馏水95 ml，盐酸1 ml。 两液分别配制，临用时A、B液等量混合，过滤后使用。24h后失去染色能力。 Van Gieson液： 1%酸性复红水溶液10 ml 苦味酸饱和水溶液90 ml 临用时1:9混合过虑后使用。 Van Gieson苦味酸酸性复红法(VG法)步骤： 1．石蜡切片脱蜡至水。

2．Weigert苏木精液5-10 min。 3．充分水洗。 4．Van Gieson液1-5 min。 5．95%酒精迅速分化数秒。 6．无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。 结果：胶原纤维呈红色、肌肉、神经胶质、胞浆、红血球呈黄色、细胞核呈黑色或棕蓝色。体会与说明：由于酸性复红退色较快，染色结果不能长期保存，一般只能保存3～6个月。 二Masson三色法 试剂： Regaud 氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml。 将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用。 Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml。 0.2%冰醋酸水溶液：冰醋酸0.2 ml，蒸馏水100 ml。 1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml。 苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98 ml，冰醋酸2 ml。 1%光绿水溶液：光绿1g，蒸馏水100 ml。 Masson三色法步骤 1．石蜡切片脱蜡至水。 2．铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）。

肌肉特殊染色

肌肉冰冻切片常用组织学及酶组织化学染色技术（—）苏木精和伊红染色（Hematoxylin and Eosin, HE） 1．苏木精溶液染色10分钟 2．流水冲洗10分钟 2．伊红溶液染色3分钟 4．流水冲洗1分钟 5．梯度酒精脱水，透明树胶封固 骨骼肌HE染色（肌膜核蓝色，肌纤维粉红色，结缔组织淡红色） （二）改良Gomori三色染色方法（Modified Gomori Trichrome, MGT）1．Harris苏木精10分钟 2．水冲洗 10分钟 3．Gomori氏溶液30分钟～60分钟 4．0．2%醋酸浸洗1分钟 5．酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。 骨骼肌MGT染色（核紫红,肌纤维暗绿色,胶原亮绿色 ,线粒体红色） （三）PAS反应法(Periodic Acid Schiffs reaction, PAS) 1．固定于Carnoiy氏固定液10分钟 2．流水冲洗2分钟 3．0．5%过碘酸5分钟 4．蒸溜水洗1～2分钟 5．Schiff氏溶液15～30分钟 6．流水洗5～10分钟 7．Harris苏木精溶液2分钟 8．流水洗5分钟

9．脱水、透明、封固（合成树胶） 骨骼肌PAS染色结果：糖原红色，肌内肌原纤维用清晰可见ⅡA纤维染色反应强，ⅡB、ⅡC、Ⅰ型纤维呈中间型。 （四）苏丹黑B染色 1.苏丹黑溶液20分钟（加盖防气化） 2．流水洗 1．过滤的苏木精染1分钟 4．流水洗2分钟 5．甘油明胶封固 结果：脂类物质染成黑色，。 （五）四氮唑还原酶(NADH—tetrarolium redutase, NADH—TR ) 1.孵育于下列基质内30分钟，37℃ 0.05M（或0.2M）Tric缓冲液（PH7.4） 30ml 硝基四氮唑（BNT）30mg NADH 24mg 2.蒸馏水洗。 3. 甘油明胶封固。 骨骼肌NADH－TR染色(Ⅰ型肌纤维紫兰色，Ⅱ型肌纤维淡灰色)。 （六）琥铂酸脱氢酶（Succinate dehydrogenase，SDH） 染色步骤

特色染色及酶组织化学染色

特色染色及酶组织化学染色 随着生物学研究的深入，越来越多的科学家开始注重细胞和组织的染色研究。在这个领域，特色染色和酶组织化学染色是两种常用的技术手段，它们可以帮助研究者更加深入地了解生物体内的结构和功能。 一、特色染色 特色染色是一种特殊的染色技术，它可以通过染色剂的选择和染色条件的控制，使不同的细胞和组织部位呈现出不同的颜色。这种染色技术主要用于显微镜下观察和分析细胞和组织的形态、结构和功能。 常用的特色染色剂包括伊红、酸性染料、碱性染料等。其中，伊红是一种负离子染料，可以与细胞和组织中的蛋白质结合，使其呈现出红色或棕色。酸性染料主要是指酸性染料橙G、酸性染料fuchsin 等，它们可以与细胞和组织中的酸性成分结合，如细胞核、染色体、核仁等，使其呈现出红色或橙色。碱性染料主要是指碘化物、嗜碱性染料甲基绿等，它们可以与细胞和组织中的碱性成分结合，如细胞质、胶原蛋白等，使其呈现出绿色或蓝色。 特色染色技术的优点是可以直观地观察和比较不同细胞和组织 部位的形态和结构，同时可以通过不同染色剂的选择，进一步探究其功能和代谢过程。但是，特色染色也存在一些局限性，比如染色结果受到染色剂和染色条件的影响较大，需要进行反复试验和优化，同时染色结果也比较主观，需要经过专业人员的判断和分析。 二、酶组织化学染色

酶组织化学染色是一种利用酶学原理进行染色的技术，它可以通过检测组织和细胞内酶的活性和分布情况，来研究其代谢和功能。这种染色技术主要用于研究酶的种类、含量和分布情况，比如研究肝细胞中的酒精脱氢酶、肌肉细胞中的肌酸激酶等。 常用的酶组织化学染色剂包括过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。这些酶在染色前需要与特定底物结合，形成染色产物，然后通过显微镜观察染色产物的颜色和分布情况，来分析酶的活性和分布情况。 酶组织化学染色技术的优点是可以直接观察和分析酶的活性和 分布情况，具有较高的灵敏度和特异性，同时可以通过染色产物的颜色和分布情况，来判断酶的种类和含量。但是，酶组织化学染色技术也存在一些局限性，比如染色结果受到染色剂和染色条件的影响较大，需要进行反复试验和优化，同时染色结果也比较主观，需要经过专业人员的判断和分析。 结语 特色染色和酶组织化学染色是两种常用的生物学染色技术，它们可以帮助研究者更加深入地了解生物体内的结构和功能。但是，这些技术也存在一些局限性，需要进行反复试验和优化，同时染色结果也比较主观，需要经过专业人员的判断和分析。因此，在进行生物学染色研究时，需要综合考虑技术的优缺点，选择合适的技术手段，以获得更加准确和可靠的研究结果。

病理切片的特殊染色方法

1. Van Gieson苦味酸和酸性品红法 【染色方法】 (1)中性甲醛固定组织，石蜡切片； (2)组织切片脱蜡至水； (3)用Van Gieson液染1〜5分钟； (4 )倾去染液，直接用95 %乙醇分化和脱水； (5)无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。【结果】胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞呈黄色。 2. Masson氏结缔组织三合染色法 【染色方法】 (1)石蜡切片厚6ym,脱蜡至水； (2)0.2 %冰醋酸水溶液浸泡片刻； (3)Masson氏染色液中5分钟或更长时间； (4)0.2 %冰醋酸水溶液浸泡片刻； (5) 5 %磷钨酸水溶液2〜3分钟，再入0.2 %冰醋酸水溶液浸洗 (6 )投入淡绿、冰醋酸水溶液浸染5分钟或更长时间； (7)再入0.2 %冰醋酸水溶液浸洗片刻； (8)脱水、透明和封固。 【结果】胞浆和神经胶质纤维染红色，胶原纤维染绿色。 【染色方法】 (1 )石蜡切片、脱蜡至水； (2)0.25 %高锰酸钾液3分钟； (3 )蒸馏水洗2次； (4) 1 %草酸漂白即可； (5 )蒸馏水洗2次； (6) 2.5 %铁明矶水溶液媒染5〜10分钟，蒸馏水洗多次； (7)二氨氢氧化银浸染1分钟，蒸馏水洗3次； (8)10 %甲醛液还原2分钟，蒸馏水洗3次； (9)0.2 %氯化金液调色1〜2分钟，蒸馏水洗3次； (10)5%硫代硫酸钠固定5分钟； (11 )蒸馏水洗，需要时复染； (12)水洗、脱水、透明和封固。 【结果】网状维呈黑色，其他组织呈复染的颜色。

显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法 【染色方法】 (1)中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水； (2)切片入70%乙醇中洗2分钟； (3)将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0.5〜2小时； (4)直接入95%乙醇中分色数秒钟； (5)浸入蒸馏水洗2分钟； (6)用丽春红S液滴染切片5分钟； (7)直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次； (8 )将切片在空气中或冷风干燥； (9)二甲苯透明，中性树胶封固。 【结果】弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。 四、脂肪染色 【染色方法】 (1)冰冻切片厚度8〜15^m； (2)Harris苏木素，染约1分钟； (3)自来水洗后，用0.5%盐酸乙醇分化，再水洗直至胞核返蓝为止； (4)蒸馏水洗后移入70%乙醇内浸洗一下； (5)浸入苏丹III染液中约30分钟或更长时间(如果置于56 °C温箱中可适当缩短时间)； (6)在70 %乙醇分化数秒钟； (7)待切片在空气中稍凉干或用冷风机吹干； (8 )及时用明胶甘油封片。 【结果】脂肪呈橘红色，脂肪酸不着色，胞核淡蓝色。 高碘酸一Schiff ( Periodic acid Schiff ，PAS)染色法 【染色方法】 (1)切片脱蜡至蒸馏水； (2)浸入高碘酸氧化液中10〜20分钟； (3 )蒸馏水洗2次； (4) Schiff液染色10〜30分钟； (5 )流水冲洗5分钟； (6)用苏木素染细胞核3〜5分钟；

常用特殊染色结果速记

常用特殊染色结果速记 注：为了方便广大病理技术人员熟悉和掌握常用病理技术特殊染色的结果，现将作者摘录整理的“常用特殊染色结果速记”呈现给大家，以便使用者在日常工作和学习中记忆。内容不一定全面，如有错误请以人民卫生出版社出版的《2016年全国卫生技术资格考试指导-病理学技术》一书为准。 结缔组织染色： 1.Mallory三色染色结果：胶原和网状纤维蓝色，软骨、黏液、淀粉样变物资呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒红色，髓鞘和红细胞橘红色。 2．Masson三色染色结果：胶原纤维绿色，肌纤维红色，红细胞橘红色。 胶原纤维染色：

1.Van Gieson(V G)苦味酸-酸性品红染色结果：胶原纤维鲜红色，肌纤维、细胞质和红细胞黄色，细胞核蓝褐色。 2．天狼星红苦味酸染色结果：胶原纤维红色，细胞核绿色，其他黄色。 网状纤维染色： 1.Gordon-Sweets银氨染色结果：网状纤维黑色，细胞核红色（核固红复染），胶原纤维黄棕色，细胞质淡红（红液复染）。 弹性纤维染色： 1.弹性、胶原纤维的双重组合染色法：弹性纤维蓝绿色，胶原纤维红色，背景淡黄色。 2.Gomori醛品红染色法：弹性纤维呈紫红色，背景橘红色。 横纹肌组织染色： 1.Mallory磷坞酸苏木素（PTAH）染色结果：细胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌均为蓝色；胶原纤维、网状纤维软骨基质及骨呈黄色或玫瑰红色；粗弹性纤维有时为微紫色；有缺氧早期病变的心肌为紫蓝色或棕黄色。 早期心肌病变组织染色： 1.Nagar-Olsen染色结果：缺氧心肌、红细胞红色，正常心肌黄色或黄棕色，细胞核蓝色。 2.Poley显示缺氧心肌染色结果：缺氧心肌红色，细胞核紫色，其他组织呈绿色。 糖类染色： 1.过碘酸-Schiff（PAS）染色结果：糖原红色，细胞核蓝色。 黏液物质染色：

肌肉类型和区别

类型区别 运动系统的肌肉属于横纹肌，由于绝大部分附着于骨，故又名骨骼肌。骨骼肌细胞纵切面呈长条状；核多，椭圆形，位于肌膜下方；肌浆内肌原纤维沿细胞长轴平行排列，有明显横纹，染色较深的为暗带，较浅而发亮的为明带(HE染色)。肌纤维横切面呈不规则块状，肌原纤维断面呈细点状，核位于边缘(HE染色)。在特殊染色切片中，骨骼肌横纹尤其明显（PTAH染色,）。每条肌原纤维都有色浅的明带(I带)和色深的暗带(A带)交替排列，明带中央有一条色深的线为Z线、暗带中部有色浅的H带，H带中央有一条色深的线为M线。相邻两个Z线之间的一段肌原纤维称为肌节，包括1/2I带+A带+1/2I带，是骨骼肌收缩的基本结构单位。 平滑肌：广泛分布于血管壁和许多内脏器官，又称内脏肌。平滑肌的收缩较为缓慢和持久。平滑肌纤维呈长梭形，无横纹。细胞

核一个，呈长椭圆形或杆状，位于中央，收缩时核可扭曲呈螺旋形，核两端的肌浆较丰富。平滑肌纤维大小不一，一般长200μm，直径8μm；小血管壁平滑肌短至20μm，而妊娠子宫平滑肌可长达500μm。平滑肌纤维可单独存在，绝大部分是成束或成层分布的。和骨骼肌不同，不是每条肌纤维（即肌细胞）的两端都通过肌腱同骨骼相连。没有骨骼肌（和心肌）那样发达的肌管系统。肌细胞膜只有一些纵向排列的袋状凹入。平滑肌细胞约保持－55－60mV的静息电位，产生机制和骨骼肌类似。 心肌：心肌细胞又称心肌纤维，有横纹，受植物性神经支配，属于有横纹的不随意肌，具有兴奋收缩的能力；呈短圆柱形，有分支，其细胞核位于细胞中央，一般只有一个。各心肌纤维分支的末端可相互连接构成肌纤维网，其连接处称为润盘。润盘是心肌纤维之间的界限，同时也是心肌纤维网传递兴奋冲动的重要结构。心肌细胞的兴奋冲动可通过低电阻的润盘从一个细胞直接传给另一个细胞，使心肌细胞在机能上具有合体细胞的性质。心脏中还存在一些特殊分化的心面细胞，它们缺乏收缩性，但有较高的兴奋性和传导性，其中大多数细胞还具有产生自动节律性兴奋的能力，它们组成心脏的特殊传导系统，使具有机能合胞体性质的心房肌、心室肌能进行有序的同步的节律性的收缩，以实现心脏正常的泵血功能。心房肌纤维中含有一种特殊的嗜锇颗粒，命名为心房肽（或心钠素）。其分泌物有利尿、利钠、扩张血管和降低血压的作用。

病理切片的特殊染色方法

病理切片的特殊染色方法 1、Van Gieson苦味酸与酸性品红法 【染色方法】 (1)中性甲醛固定组织,石蜡切片; (2)组织切片脱蜡至水; (3)用Van Gieson液染1～5分钟; (4)倾去染液,直接用95％乙醇分化与脱水; (5)无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。 【结果】胶原纤维呈红色,肌纤维、胞质及红细胞呈黄色。2、Masson氏结缔组织三合染色法 【染色方法】 (1)石蜡切片厚6μm,脱蜡至水; (2)0、2％冰醋酸水溶液浸泡片刻; (3)Masson氏染色液中5分钟或更长时间; (4)0、2％冰醋酸水溶液浸泡片刻; (5)5％磷钨酸水溶液2～3分钟,再入0、2％冰醋酸水溶液浸洗 (6)投入淡绿、冰醋酸水溶液浸染5分钟或更长时间; (7)再入0、2％冰醋酸水溶液浸洗片刻; (8)脱水、透明与封固。 【结果】胞浆与神经胶质纤维染红色,胶原纤维染绿色。 【染色方法】 (1)石蜡切片、脱蜡至水; (2)0、25％高锰酸钾液3分钟; (3)蒸馏水洗2次; (4)1％草酸漂白即可; (5)蒸馏水洗2次; (6)2、5％铁明矾水溶液媒染5～10分钟,蒸馏水洗多次; (7)二氨氢氧化银浸染1分钟,蒸馏水洗3次; (8)10％甲醛液还原2分钟,蒸馏水洗3次;

(9)0、2％氯化金液调色1～2分钟,蒸馏水洗3次; (10)5％硫代硫酸钠固定5分钟; (11)蒸馏水洗,需要时复染; (12)水洗、脱水、透明与封固。 【结果】网状维呈黑色,其她组织呈复染得颜色。 显示弹性、胶原纤维得双重组合染色法 【染色方法】 (1)中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水; (2)切片入70％乙醇中洗2分钟; (3)将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0、5～2小时; (4)直接入95％乙醇中分色数秒钟; (5)浸入蒸馏水洗2分钟; (6)用丽春红S液滴染切片5分钟; (7)直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次; (8)将切片在空气中或冷风干燥; (9)二甲苯透明,中性树胶封固。 【结果】弹性纤维呈蓝绿色,胶原纤维呈红色,背景呈淡黄色。 【染色方法】 (1)冰冻切片厚度8～15μm; (2)Harris苏木素,染约1分钟; (3)自来水洗后,用0、5％盐酸乙醇分化,再水洗直至胞核返蓝为止; (4)蒸馏水洗后移入70％乙醇内浸洗一下; (5)浸入苏丹III染液中约30分钟或更长时间(如果置于56℃温箱中可适当缩短时间); (6)在70％乙醇分化数秒钟; (7)待切片在空气中稍凉干或用冷风机吹干; (8)及时用明胶甘油封片。 【结果】脂肪呈橘红色,脂肪酸不着色,胞核淡蓝色。 高碘酸－Schiff(Periodic acid Schiff,PAS)染色法 【染色方法】

ImageJ用于免疫组化与特殊染色

ImageJ用于免疫组化与特殊染色 Image J用于免疫组化与特殊染色 选一张肺部的Masson三色染色图，染色结果为：胶原纤维呈蓝色（如光绿液染色为绿色），胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。对Masson 染色的分析通常是计算胶原容积分数(Collagenvolume fraction，CVF)，即胶原阳性的蓝色面积与组织总面积的百分比。 1、打开Imagej 软件，点击File → Open 打开待分析Masson 染色图片 2、在工具栏中选择Image按钮→选择Type→再选择RGBStack 按钮，之后你的图片将会是以下这种显示情况

3、此时再将图片下方的调节滑轮拉到中间或是最右边，以获得最佳的对比度→再选择Image按钮→点击Adjust→点击Threshold按钮→出现的窗口如下： 4、此时只需要调节上下两个滑轮即可对图片的阳性染色面积进行标记

5、然后我们进入统计阶段→点击Analyze →然后Select Measurements按钮→出现窗口后再点击Area fraction按钮

6、点击Analyze按钮→点击measure，即可计算阳性面积百分比，图中8.289就是所要的数据 4Image J分析免疫荧光阳性染色面积 很抱歉，电脑中没有免疫荧光图片，基本上的操作步骤同上，只是在threshold这一步有点差别（借用一下上一个图片），如图所示：在threshold窗口中，将下方滑轮滑到最右边，上方滑轮可左右调节，调整最适合的视野，之后的计算步骤同上。 因为字数有限，所以只介绍了这几种，如果大家觉得有帮助的话，之后我会陆续整理出Image J应用于其他实验的具体操作步骤。希望对待大家有帮助。

Masson染色技术

胶原纤维染色（Masson三色染色法） 胶原纤维:是三种纤维中分布最广泛,含量最多的一种纤维。广泛分布于各脏器内。在皮肤、巩膜和肌腱最为丰富。胶原纤维染色主要用于和肌纤维的鉴别。应用意义： 定性定量胶原纤维在体内分布广泛。HE染色不能以不同颜色将其显示出来,而胶原纤维定性特染可作到这一点，故在多种疾病的病理诊断和研究用中具有实用价值. 如： 1．显示组织,器官的损伤或炎症的修复与纤维板化程度 2．判断心肌坏死后被除纤维结缔组织所取代的区域：HE染色时胶原纤维与心肌均为红色,胶原纤维染色则使胶原纤维呈红色,心肌纤维呈黄色. 3．鉴别心肌纤维化与心内膜弹纤维增生症。 4．区别胶原纤维透明变性与淀粉样变性。 5。对肿瘤方面提供诊断和诊断鉴别的依据。 胶原纤维染色结果：胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色,红细胞呈橘红色. 组织样品应为：4%多聚甲醛固定组织，石蜡切片. 天狼猩红:胶原纤维呈红色，细胞核呈绿色,其它成分呈黄色. V。G染色法：胶原纤维：鲜红色，肌纤维：黄色，红细胞:黄色。细胞核：蓝黑或灰色。 Nagar-Olsen染色 观察心肌缺氧早期改变，是早期心肌病变组织染色： 显色结果：缺氧心肌红细胞呈现红色，正常心肌呈黄色或棕黄色，细胞核呈蓝色。丽春红(Ponceau S）新法染色 首先采用维多利亚蓝将细胞核染成绿色，再用Ponceau S 丽春红复合物将胶原纤维染成红色，肌肉成黄色。 实验流程 一、实验试剂 1。 Regaud 氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml,甘油10ml,蒸馏水80ml.将苏木精加入蒸馏水内加温溶解，冷却后加入酒精和甘油，放数日后即可应用； 2。 Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g,蒸馏水99ml，冰醋酸1ml; 3。 0。2%冰醋酸水溶液：冰醋酸0。2 ml，蒸馏水100 ml； 4. 1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml； 5。苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98 ml，冰醋酸2 ml； 6。 1%光绿水溶液：光绿 1g,蒸馏水100 ml。

常用的特殊染色技术试题

常用的特殊染色技术 [单项选择题] 1、关于Ponceau染色法显示胶原、细胞和肌肉着色的描述，错误的是（） A.胶原纤维呈红色 B.细胞核血细胞呈绿色 C.肌肉呈黄色 D.胶原纤维切片厚度6μm，Victoriablue染色液盛在染色缸内 E.Ponceau染色后，直接放在水中 参考答案：E 参考解析：Ponceau染色后，不能与水接触，直接用无水乙醇冲洗脱水。 [单项选择题] 2、使用Gomori醛复红染色法进行弹力纤维染色时，效果最好的固定液是（） A.甲醛生理盐水 B.多聚甲醛 C.乙醇 D.丙酮 E.中性甲醛 参考答案：A [单项选择题] 3、关于使用普鲁士蓝染色法观察含铁血黄素的描述，错误的是（） A.此染色法中，含铁血黄素呈蓝色 B.组织固定不能使用酸性固定液 C.普鲁士蓝反应显示二价铁 D.器皿应洁净，操作中避免与铁接触 E.陈旧标本染色效果不好，必要时可用0.25%高锰酸钾处理切片20～60分钟，再用草酸漂白 参考答案：C 参考解析：普鲁士蓝反应显示三价铁。 [单项选择题] 4、Wiesel法染嗜铬细胞的结果是（） A.嗜铬细胞质黄绿色，细胞核红色，其他蓝色 B.嗜铬细胞质红色，细胞核黄绿色，其他蓝色 C.嗜铬细胞质蓝色，细胞核红色，其他黄绿色

D.嗜铬细胞质红色，细胞核蓝色，其他无色 E.嗜铬细胞质黄绿色，细胞核蓝色，其他无色 参考答案：A [单项选择题] 5、可用于染肌肉横纹的苏木精液是（） A.Harris苏木精液 B.Mayer苏木精液 C.Weigert铁苏木精液 D.Mallory磷钨酸苏木精液 E.Verhoeff铁磺苏木精液 参考答案：D [单项选择题] 6、鉴别慢性胃炎肠上皮化生的类型首选的染色方法是（） A.高铁二胺阿尔辛蓝法 B.醛复红染色法 C.过碘酸希夫染色法 D.Schiff阿尔辛蓝地衣红染色法 E.丽春红阿尔辛黄法 参考答案：D [单项选择题] 7、阿尔辛蓝（Alcianblue）用于显示（） A.糖原 B.中性黏多糖 C.酸性黏多糖 D.混合性黏多糖 E.淀粉样物质 参考答案：C [单项选择题] 8、Lendrum等MSB染色法显示纤维蛋白结果正确的是（） A.纤维蛋白呈红色，陈旧性纤维蛋白呈黄色，细胞核呈蓝色，红细胞呈红色 B.纤维蛋白呈蓝紫色，陈旧性纤维蛋白呈紫色，细胞核呈绿色，红细胞呈红色 C.纤维蛋白呈红色，陈旧性纤维蛋白呈黄色，细胞核呈绿色，红细胞呈黄色 D.纤维蛋白呈红色，陈旧性纤维蛋白呈紫色，细胞核呈蓝色，红细胞呈黄色 E.纤维蛋白呈绿色，陈旧性纤维蛋白呈黄色，细胞核呈蓝色，红细胞呈红色参考答案：D

特殊染色（结缔组织染色）

特殊染色（结缔组织染色） 【资源】转贴---特染：结缔组织染色 wanliheng丁香园版主 .438 积分473 得票545 粉丝加关注. 2009-04-19 11:38 消息引用收藏分享 分享到哪里？复制网址新浪微博豆瓣社区腾讯微博开心网人人网只看楼主第一节结缔组织多色染色法 一、Mallory三色染色法 1. 试剂配制 （1）重铬酸钾液重铬酸钾 2.5g，醋酸5ml，蒸馏水95ml （2）苯胺蓝桔黄G液苯胺蓝0.5g，桔黄G2g，磷钨酸1g，蒸馏水100ml （3）酸性复红液酸性复红0.5g，蒸馏水100ml 2.染色步骤 （1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。 （2）重铬酸钾液10min。 （3）蒸馏水冲洗2min，蒸馏水2次。 （4）酸性复红液2min，蒸馏稍洗。 （5）苯胺蓝液20min，95%乙醇快速分化。 （6）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 3.结果 胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红色呈桔红色。 4.注意事项 （1）酸性复红液易溶解于水，肉眼观察切片上保留一定的红色。 （2）苯胺蓝液染色后，用95%乙醇分化时，须用显微镜观察掌握。

（3）对陈旧的固定标本，其染色效果较差，可增加染色时间。 （4）另张切片，可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。 二、Masson三色染色法 1.试剂配制 （1）Masson复合染色液酸性复红1g，丽春红2g，桔黄G2g，0.25%醋酸300ml。（2）亮绿染色液高绿SF0.1g，0.2%醋酸100ml。 2.染色步骤 中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。 （1）Masson复合染色液5min。 （2）0.2%醋酸水溶液稍洗。 （3）5%磷钨酸5-10min。 （4）0.2%醋酸水溶液浸洗2次。 （5）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2次。 （6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 3.结果 胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈桔红色。 4.注意事项 （1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。 （2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。 三、显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法（1993年） 1.试剂配制 （1）高锰酸钾硫酸液0.5%高锰酸钾水溶液中加入5ml的硫酸。 （2）维多利亚蓝染色液维多利亚蓝2g，糊精0.5g，间苯二酚4g，蒸馏水200ml。将上述物质混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5min。然后用另一容器取30%三氯化铁水溶液25ml，另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中继续煮沸3min，不断搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸放在60℃恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再 溶于400ml的70%乙醇液中。然后加浓盐酸4ml和苯酚5g放置