特色染色及酶组织化学染色

特色染色及酶组织化学染色

随着生物学研究的深入，越来越多的科学家开始注重细胞和组织的染色研究。在这个领域，特色染色和酶组织化学染色是两种常用的技术手段，它们可以帮助研究者更加深入地了解生物体内的结构和功能。

一、特色染色

特色染色是一种特殊的染色技术，它可以通过染色剂的选择和染色条件的控制，使不同的细胞和组织部位呈现出不同的颜色。这种染色技术主要用于显微镜下观察和分析细胞和组织的形态、结构和功能。

常用的特色染色剂包括伊红、酸性染料、碱性染料等。其中，伊红是一种负离子染料，可以与细胞和组织中的蛋白质结合，使其呈现出红色或棕色。酸性染料主要是指酸性染料橙G、酸性染料fuchsin 等，它们可以与细胞和组织中的酸性成分结合，如细胞核、染色体、核仁等，使其呈现出红色或橙色。碱性染料主要是指碘化物、嗜碱性染料甲基绿等，它们可以与细胞和组织中的碱性成分结合，如细胞质、胶原蛋白等，使其呈现出绿色或蓝色。

特色染色技术的优点是可以直观地观察和比较不同细胞和组织

部位的形态和结构，同时可以通过不同染色剂的选择，进一步探究其功能和代谢过程。但是，特色染色也存在一些局限性，比如染色结果受到染色剂和染色条件的影响较大，需要进行反复试验和优化，同时染色结果也比较主观，需要经过专业人员的判断和分析。

二、酶组织化学染色

酶组织化学染色是一种利用酶学原理进行染色的技术，它可以通过检测组织和细胞内酶的活性和分布情况，来研究其代谢和功能。这种染色技术主要用于研究酶的种类、含量和分布情况，比如研究肝细胞中的酒精脱氢酶、肌肉细胞中的肌酸激酶等。

常用的酶组织化学染色剂包括过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。这些酶在染色前需要与特定底物结合，形成染色产物，然后通过显微镜观察染色产物的颜色和分布情况，来分析酶的活性和分布情况。

酶组织化学染色技术的优点是可以直接观察和分析酶的活性和

分布情况，具有较高的灵敏度和特异性，同时可以通过染色产物的颜色和分布情况，来判断酶的种类和含量。但是，酶组织化学染色技术也存在一些局限性，比如染色结果受到染色剂和染色条件的影响较大，需要进行反复试验和优化，同时染色结果也比较主观，需要经过专业人员的判断和分析。

结语

特色染色和酶组织化学染色是两种常用的生物学染色技术，它们可以帮助研究者更加深入地了解生物体内的结构和功能。但是，这些技术也存在一些局限性，需要进行反复试验和优化，同时染色结果也比较主观，需要经过专业人员的判断和分析。因此，在进行生物学染色研究时，需要综合考虑技术的优缺点，选择合适的技术手段，以获得更加准确和可靠的研究结果。

苏木素染色原理

苏木素(Hematoxylin)和伊红( Eosin)染色，简称HE 染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用机器广泛。苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE 染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。对于确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质与特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察HE 染色组织切片的基础上进行的。在HE 染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。苏木素伊红染色试剂盒中，苏木素染色液采用进口的高纯度苏木精、硫酸铝钾、甘油等组成，不含氧.化.汞、甲醇等有害物质，对细胞核染色效果好。其特点：长期保存，不易产生沉淀和金属; 应用范围广，可以用于人、动物、畜牧、水产等领域，可以用于组织石蜡切片、冰冻切片和组织细胞的染色等；苏木素染色液可以重复使用。 染色原理： 1、细胞核染色的原理： 苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA 双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷

的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。 2、细胞浆染色的原理： 伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH 值密切相关。当染液的pH 值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。 3、分化作用： 染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE 染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。经苏木素染色后，必须用1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。 4、返蓝作用： 分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后

病理技术卫生考试常考固定液与特殊染色总结

单纯固定液 甲醛：能固定类脂和脂类，但必须冷冻切。也可固定高尔基体、线粒。是糖的保护剂。体除去甲醛色素的方法：Verocay法，乙醇配氨水；Schride法。 重铬酸钾Zenker，Helly，Maximov，Regaud。 苦味酸：易燃易爆，强酸，糖类；可以软化皮肤，易于切片。不宜用火棉胶包埋。70%乙醇中加浓氨水去除固定产生的黄色。 三氯醋酸：SUSa液的主要成分，使蛋白沉淀，良好的脱钙剂。 升汞：针状结晶，组织收缩明显。不能固定类脂和糖类。可固定蛋白，固定后需用碘液脱汞 乙醇：固定兼有脱水作用，糖原的固定，纤维蛋白和弹性纤维固定。浓度80-95%。 醋酸：固定染色体，清楚的显示细胞核，但组织膨胀明显，尤其对于胶原纤维和纤维蛋白。 铬酸避光保存。不能固定脂肪。固定后流水冲洗大于24h。 饿酸 延长固定时间，脆性增加，对染色不力。1%高锰酸钾脱碘，固定后流水冲洗12-24h。 丙酮：酶组织化学。丙酮对组织块的收缩作用强于乙醇，对糖原无固定作用。 异丙醇：是乙醇良好的替代品，组织收缩小，硬化作用较弱；不能再用于火棉胶的包埋。 叔丁醇：脱水后可不经透明，直接浸蜡。电镜标本中常用作中间脱水剂。 环氧己烷：不引起组织收缩和硬化，常用于植物标本制作，价格贵。 四氢呋喃：既是脱水剂，又可以作为封片溶媒。 环己酮：代替乙醇作脱水剂和随后的浸蜡和包埋。 混合固定液 B-5固定液：固定淋巴组织，配方无水醋酸钠-升汞-甲醛，染色前脱汞处理； Muller液：媒染和硬化神经组织，需常更换液体，固定作用缓慢。 Bouin液：结缔组织 比较差。不适宜长期固定（12-24h）。固定后组织被染成黄色需用70%-80%乙醇洗涤。

免疫组化染色技术

[分享] 免疫组织化学染色技术 法医学院官大威 第一节常规组织学染色技术概述 宏观微观超微结构基因水平 组织形态学研究技术的种类： 一、病理大体组织标本的染色方法 在标本制作中，为了某种特殊目的，突出显示标本的重要部分，借助组织切片的特殊染色方法对标本进行染色，将病变器官及不同组织成分用染料染成不同的颜色，以便于区分大体标本的不同成分和病变特点，如： 目的：主要用于心、肝、肾脂肪变性，动脉粥样硬化大体标本的染色 试剂：苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ 结果：病变处脂肪组织呈橙黄色 目的：显示早期心肌梗死的区域 试剂：0.1% NBT(硝基四唑蓝) / 0.2 mol / L PBS(pH 7.6) 方法：将2-3 mm 厚新鲜心肌大片放入试剂中，37 °C 孵育20 min。 结果：正常心肌呈蓝色，早期心肌梗死区、纤维结缔组织、瘢痕组织呈浅蓝色或不显色。注意：新鲜标本，尸检心肌不超过6小时。 二、光学显微镜下的组织学染色方法 .常规HE染色（hematoxylin and eosin staining） .组织学特殊染色 1. Mallory 三染色、Masson三染色 2. 神经纤维的镀银染色 3. 其他的特殊染色，包括钙、铁、铅、铜、黑色素和脂褐素、细胞DNA和RNA的染色等 上述的各种染色方法只能在细胞水平上显示组织结构的形态改变。 三、超微结构的观察 .光线波长的限制，光学显微镜的分辨率极限为0.2μm 有效放大倍数最高不超过2000倍。 电镜的分辨率最佳可达0.14nm，放大倍率最高可达100万倍。

第二节免疫组织化学染色技术Immunohistochemical technique 由于该技术主要是用于研究和观察细胞中的某些结构或分子物质和组织细胞间的成分，因此现又称为免疫细胞化学技术。 根据标记物的不同，免疫细胞化学技术可分为： 1. 免疫荧光细胞化学技术 2. 免疫酶细胞化学技术 3. 免疫铁蛋白技术 4. 免疫金-银细胞化学技术 5. 免疫电子显微镜技术 一、免疫组织化学染色方法的原理 .抗原（antigen） 1. 定义：是一类在适合条件下能激发机体免疫系统发生免疫应答，并能与免疫应答产生的效应物质（抗体和效应细胞）在体内或体外发生特异性结合反应的物质。抗原具有两种性能： （1）免疫原性（immunogenicity）指抗原分子具有诱导机体产生免疫应答的特性。 （2）反应原性（reactogenicity）指抗原分子与抗体或效应T 细胞等免疫应答产物发生特异性反应的特性。 2. 抗原的分类------完全抗原、半抗原 免疫学分类 胸腺依赖抗原与非依赖抗原 外源性抗原：微生物、花粉等 内源性抗原：隐蔽的自身抗原、肿瘤相关抗原等 临床分类同种异型抗原：人类白细胞抗原、血型抗原 异嗜性抗原：人与其他动物、植物等之间存在的共同抗原 .抗体（antibody） 1. 定义：机体受到抗原刺激后，通过体液免疫应答，B淋巴细胞活化、增殖，分化为浆细胞，由浆细胞合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白，称为抗体。 大部分抗体电泳后位于γ区带，1972年国际免疫学联合会正式将化学结构相同或相似的一类球蛋白分子统一命名为免疫球蛋白(immunoglobin，Ig)。 2. 抗体的种类:五类，即IgA、IgD、IgE、IgG、IgM 免疫组织化学染色技术中，使用的抗体主要是IgG，个别情况下使用IgG的亚型，多为IgG1。

各种染色法

苏木精—伊红染色法（HE染色法） 石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。 着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。 活体染色 活体染色是指一个获得动物或植物的细胞活组织被染色。至于体外活体染色是指也获得动物或植物分离出来的一部分细胞活一部分组织被一种活体染色剂染色而不影响细胞活组织的生命。活体染色与体外活体染色的主要区别：活体染色是在有机体内部，因此不在空气中而是在还原的环境中进行的，至于体外活体染色是在空气中，在氧化的环境中进行的。所以一种真正的活体染色

剂就是在一种生物的活细胞的某种构造上面的染料，但对于细胞、对于组织和对于生命本身不发生任何有害的作用。 活体染料多为碱性染料，如中性红、健那绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等，它们解离后带正电，其中有的染料与胞内某些结构有专一性接合。例如，中性红染液泡系，健那绿染线粒体。 DNA-Feulgen染色方法 是DNA定量测定的主要染色方法之一。其具体反应原理是，标本经稀盐酸水解后，DNA分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛基。Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。也就是说, DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。 2HCl+Na2S2O5→2NaCl+SO2+H2SO3 DNA是主要的遗传物质，集中于染色体上。孚尔根染色法的反应原理主要与席夫试剂的化学性质有关，此试剂的基本成分是碱性品红，偏亚硫酸氢钠(NaHSO3)和盐酸.碱性品红的主要成分是三氨基三苯甲烷氯化物。 碱性品红原为桃红色，当与亚硫酸作用时被氧化，使醌型变为苯型，由桃红色变为无色透明的N-亚磺酸亚硫酸副品红碱，当它与醛基作用时，其分子式又恢复为醌型结构，呈现紫红色

特色染色及酶组织化学染色

特色染色及酶组织化学染色 随着生物学研究的深入，越来越多的科学家开始注重细胞和组织的染色研究。在这个领域，特色染色和酶组织化学染色是两种常用的技术手段，它们可以帮助研究者更加深入地了解生物体内的结构和功能。 一、特色染色 特色染色是一种特殊的染色技术，它可以通过染色剂的选择和染色条件的控制，使不同的细胞和组织部位呈现出不同的颜色。这种染色技术主要用于显微镜下观察和分析细胞和组织的形态、结构和功能。 常用的特色染色剂包括伊红、酸性染料、碱性染料等。其中，伊红是一种负离子染料，可以与细胞和组织中的蛋白质结合，使其呈现出红色或棕色。酸性染料主要是指酸性染料橙G、酸性染料fuchsin 等，它们可以与细胞和组织中的酸性成分结合，如细胞核、染色体、核仁等，使其呈现出红色或橙色。碱性染料主要是指碘化物、嗜碱性染料甲基绿等，它们可以与细胞和组织中的碱性成分结合，如细胞质、胶原蛋白等，使其呈现出绿色或蓝色。 特色染色技术的优点是可以直观地观察和比较不同细胞和组织 部位的形态和结构，同时可以通过不同染色剂的选择，进一步探究其功能和代谢过程。但是，特色染色也存在一些局限性，比如染色结果受到染色剂和染色条件的影响较大，需要进行反复试验和优化，同时染色结果也比较主观，需要经过专业人员的判断和分析。 二、酶组织化学染色

酶组织化学染色是一种利用酶学原理进行染色的技术，它可以通过检测组织和细胞内酶的活性和分布情况，来研究其代谢和功能。这种染色技术主要用于研究酶的种类、含量和分布情况，比如研究肝细胞中的酒精脱氢酶、肌肉细胞中的肌酸激酶等。 常用的酶组织化学染色剂包括过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。这些酶在染色前需要与特定底物结合，形成染色产物，然后通过显微镜观察染色产物的颜色和分布情况，来分析酶的活性和分布情况。 酶组织化学染色技术的优点是可以直接观察和分析酶的活性和 分布情况，具有较高的灵敏度和特异性，同时可以通过染色产物的颜色和分布情况，来判断酶的种类和含量。但是，酶组织化学染色技术也存在一些局限性，比如染色结果受到染色剂和染色条件的影响较大，需要进行反复试验和优化，同时染色结果也比较主观，需要经过专业人员的判断和分析。 结语 特色染色和酶组织化学染色是两种常用的生物学染色技术，它们可以帮助研究者更加深入地了解生物体内的结构和功能。但是，这些技术也存在一些局限性，需要进行反复试验和优化，同时染色结果也比较主观，需要经过专业人员的判断和分析。因此，在进行生物学染色研究时，需要综合考虑技术的优缺点，选择合适的技术手段，以获得更加准确和可靠的研究结果。

病理切片染色方法

病理切片染色方法 病理切片染色是病理学中常用的一种技术，通过对组织切片进行染色，可以观察和分析组织结构、细胞形态和病理变化，从而对疾病进行诊断和鉴定。本文将介绍常见的病理切片染色方法，包括常规染色、特殊染色和免疫组织化学染色。 一、常规染色 常规染色是最常用的病理切片染色方法之一，主要包括血液染色和组织染色。 1. 血液染色 血液染色常用的染色剂有偏碱性染料和酸性染料。偏碱性染料如伊红、结晶紫和新蓝等，可用于染色细胞核和嗜酸性颗粒；酸性染料如朗格汉斯染剂、伊红B和伊红O等，可用于染色细胞质和嗜碱性颗粒。 2. 组织染色 组织染色主要是为了观察细胞核、细胞质和细胞间质的结构，常用的染色剂有苏木精-伊红、伊红-酸性品红和伊红-伊红B等。 二、特殊染色 特殊染色是指用于特定目的的染色方法，常用于观察特定组织结构、细胞器和病理变化。

1. 酶组织化学染色 酶组织化学染色是利用酶的催化作用来观察组织和细胞中的特定物质。常见的酶包括过氧化物酶、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶等。 2. 共聚焦显微镜染色 共聚焦显微镜染色是一种高分辨率的显微镜技术，可以观察细胞内的亚细胞结构和分子分布。常用的染色剂有荧光染料如DAPI、荧光素和罗丹明B等。 三、免疫组织化学染色 免疫组织化学染色是利用抗体与抗原的特异性反应来观察组织和细胞中的蛋白质分布和表达情况。免疫组织化学染色常用的标记物有酶标记物和荧光标记物，常用的抗体有单克隆抗体和多克隆抗体。 四、染色结果的评价 染色结果的评价是病理切片染色中的重要步骤，可以通过显微镜观察染色结果的颜色、强度和分布情况，进而判断组织和细胞的状态和病变程度。 总结： 病理切片染色方法是病理学中常用的一种技术，通过染色可以观察和分析组织结构、细胞形态和病理变化，为疾病的诊断和鉴定提供重要依据。常规染色、特殊染色和免疫组织化学染色是常见的病理切片染色方法，每种方法都有其特定的应用范围和适用对象。在进

免疫组织化学常用染色方法和实验步骤

免疫组织化学常用染色方法和实验步骤 一、酶免疫组织化学 （一）间接酶免法 1.原理 染色时使用了两种抗体：第一抗体为针对靶抗原的特异性抗体，第二抗体是标记的针对第一抗体的抗体。将第一抗体滴加到标本上，与靶抗原结合。尔后滴加标记的第二抗体，与第一抗体结合，经显色定位出抗原存在的部位。第二抗体应来自于与第一抗体不同种的动物。此法敏感性高、信号强，标记一种二抗可检测多种抗原。但此法有可能出现非特异性背景着色。 2.操作步骤 （1）石蜡切片脱蜡至水，PBS洗3min×3次。 （2）封闭内源性过氧化物酶。PBS洗后，抗原修复。 （3）PBS再洗，若用DAB作底物，可以滴加50μl（一滴）1∶10稀释的非免疫性动物血清以减少非特异性背景染色，置湿盒10分钟后，直接接下一步，切忌冲洗，仅需要倾去多余的血清。 （4）滴加50μl第一抗体，置湿盒内1小时或4℃过夜。 （5）PBS洗，滴加稀释的酶标记的第二抗体，置湿盒内1小时。 （6）PBS洗，滴加新鲜配制的DAB溶液100μl，在显微镜下掌

握染色程度，约3～10分钟。 （7）自来水冲洗切片，苏木素复染2分钟。脱水、透明、封固。 （二）多聚螯合物酶法（EPOS法） 1.原理 EPOS（enhanc ed polymer one-step stainning）法是采用一种具有惰性的多聚化合物（葡聚糖）为骨架，将特异性抗体和HRP结合在一起，形成HRP-多聚化合物-特异性抗体巨大复合物，该复合物内不含第二抗体及亲和素。染色时，只需在组织切片上加入相应的酶标记特异性抗体EPOS试剂，孵育30～60分钟即可完成。无需再加酶标记第二抗体。EPOS法只需1次孵育，是目前最简便的方法，不足之处是现有商品化的酶标记特异性抗体的品种不全，此外，试剂价格昂贵。 2.操作步骤 （1）石蜡切片脱蜡至水，PBS洗3min×3次。 （2）蛋白酶消化或抗原修复（AR），PBS洗3min×3次。 （3）0.3%过氧化氢（H2O2）处理5分钟。 （4）蒸馏水洗，置于PBS中洗5分钟。 （5）加入相应的EPOS/HRP试剂，室温孵育30～60分钟。 （6）PBS洗3min×3次。

活细胞成像的染色方法 -回复

活细胞成像的染色方法-回复 【活细胞成像的染色方法】 细胞是生物学研究中的重要研究对象，了解细胞的结构和功能对于理解生命的本质和发展疾病的机制至关重要。活细胞成像技术是一种可以实时观察和跟踪活细胞行为的重要方法之一，它通过染色来突出显示细胞或细胞器的位置和结构，从而提供了对生物过程的直观描述。本文将介绍一些常用的活细胞染色方法，以帮助读者更好地了解和应用这些方法。 一、荧光染色 荧光染料通过与细胞或细胞器中的特定分子结合，生成荧光和非荧光区域的对比，从而实现染色效果。常用的荧光染料包括达氏染色法、荧光素、荧光蛋白等。其中，达氏染色法主要是通过用酸性染料达氏液染色，使得酸性物质质子化，然后与细胞中的碱性物质作用形成结合。而荧光素则是利用化学反应引发荧光产生。荧光蛋白则是利用特殊的基因工程技术将荧光蛋白基因导入到细胞内，使得细胞本身发出荧光。 二、细胞标记 细胞标记是通过将特定分子与标记物结合，然后观察其在细胞内的分布和运动。这种方法可以提供对特定细胞类型和细胞组织的直观描述。最常用的细胞标记方法是免疫细胞染色，其中特定抗体与目标分子结合，形成复合物。细胞可以通过观察抗体结合的位置，了解目标分子在细胞内的

位置和量。 三、融合标记 融合标记是通过将荧光蛋白或其他荧光标记的片段与目标蛋白相连，形成融合蛋白。这种方法可以直接观察融合蛋白在细胞内的分布和运动，无需使用抗体或其他染色试剂。其中最常用的融合标记技术是绿色荧光蛋白（GFP）和荧光素酶结合蛋白（Luciferase）标记法，它们可以在细胞内发出绿色或荧光信号。 四、荧光显微镜 在活细胞成像中，荧光显微镜是一种常用的工具。它使用特殊的光源和荧光滤光器来选择性地激发和收集特定的荧光信号。荧光显微镜分为激发荧光显微镜和共聚焦显微镜两种类型。激发荧光显微镜使用外部光源来激活样本中的荧光物质，而共聚焦显微镜通过激光束扫描一层样品，可获得更高分辨率和对比度的图像。 五、原子力显微镜 原子力显微镜（AFM）是一种可以直接观察活细胞表面结构和生物分子的高分辨率成像技术。它通过测量样品表面与探测器间相互作用的力，重建出样品的表面形貌图像。AFM 在单细胞和细胞器级别上提供了非常高的空间分辨率，广泛用于细胞形态学和纳米级别的细胞-细胞相互作用研究。

实验三 线粒体和液泡系的超活染色与观察

实验五线粒体和液泡系的超活染色与观察 实验目的 一、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。 二、学习一些细胞器的超活染色技术。 实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞舶死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学，，特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。 实验用品 一、器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀、载玻片、凹面载玻片、表 面皿、吸管、牙签、吸水纸。 二、试剂 1．Ringer溶液 氯化钠0.85g(变温动物用0.65g) 氯化钾0.25g 氯化钙0.03g 蒸馏水100ml 2. 10％、1／3 000中性红溶液 称取0.5g中性红溶于50 ml Ringer液，稍加热(30~40'C)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。 临用前，取已配制的1％中性红溶液l ml，加入29 ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。3．1％、1/5000詹纳斯绿B溶液 称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热(30～40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1％原液。取1％原液l ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。 三、材料 1. 小白鼠肝细胞。 2. 人口腔上皮细胞。

骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查

骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查 骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查是一种用于诊断血液疾病的特殊检查方法。该检查可以通过染色技术直接观察血液细胞中特定的染色体、酶或其他化学物质，进而判断疾病的类型和程度。下面我们将从步骤、原理及应用等多个方面进行细致的阐述。 一、步骤 1.取样 骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查需要从患者的骨髓中取得样本。通常采用穿刺取骨髓的方法，使用空心针将骨髓组织抽取出来。 2.制片 将采集到的骨髓组织用特定的方法制成薄片，然后将制片玻片放入预处理液中，去除组织中的脂肪和血液。 3.固定 用甲醛等化学物质将薄片固定在制片玻片上，以免组织失去结构。 4.染色 根据不同的需求，使用不同的染色方法染色。常用的染色方法有Gear （G）染色、Wright（W）染色、Giemsa（G）染色、PAS染色、酶组织化学染色等。 5.观察 染色完成后，使用显微镜观察染色后的组织和细胞，看到目标物质的颜色或形态变化，从而判断患者的疾病类型及程度。 二、原理 骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查的原理是通过染色技术观察不同的物质反应，从而帮助医生确定患者的诊断。例如，由于白血病细胞存在着特殊的染色体核型，因此通过染色技术可以直接观察到这些染色体。又如，用PAS染色技术可以看到细胞中的糖原，发现是否存在糖尿病等疾病。这些染色方法可以同时应用于细胞形态与细胞化学特性的研究。

三、应用 骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查广泛用于对各种血液疾病的 诊断，特别是在白血病、贫血、血小板疾病、骨髓增生异常综合症等 疾病的确诊和辅助诊断中得到了广泛应用。通过该检查方法的组织学 检查，可以检查人体中蛋白质、酶液、糖原、脂肪等物质，并进一步 辅助疾病的诊断和治疗。而且，该检查方法具有操作简便、灵敏度高、结果准确等优势，可以为医生提供诊断血液疾病的重要实验依据，为 患者提供更好的诊治服务。 总之，骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查是一种具有较高研究 价值和应用前景的检查方法。它为医生提供了一个直接观察细胞变化 的手段，并且在多种血液疾病的诊断、治疗方面起到了至关重要的作用。我们相信，在以后的医学发展中，这项技术将得到更加广泛的应 用和推广。

病理学的诊断方法

病理学的诊断方法 病理学是一门研究疾病的起因、发展、变化及其与机体的关系的学科。在临床医学中，病理学起着至关重要的作用，它通过观察和分析组织、细胞的形态及其功能异常来确定疾病的诊断和病程，对临床医生的治疗决策提供重要依据。本文将介绍一些常见的病理学诊断方法。 1. 组织学检查 组织学检查是病理学中最常用的诊断方法之一。它通过对病变组织的切片进行染色和观察，从而确定组织的异常变化。常用的染色方法包括血液常规染色、免疫组化染色和特殊染色等。血液常规染色可以用于观察细胞的形态学变化，如核的形态、染色质的分布等。免疫组化染色则可以通过检测特定抗原的表达来确定细胞的类型和分化程度。特殊染色则用于观察特定的细胞结构和功能，如铁染色用于检测铁沉积、酸性染色用于检测酸性物质等。 2. 细胞学检查 细胞学检查是通过对细胞进行采集、染色和观察来确定细胞的异常变化。细胞学检查常用于液体活检，如腹水、胸水等。通过对液体中的细胞进行染色和观察，可以确定细胞的类型和形态学特征，从而作出初步的诊断。细胞学检查在早期肿瘤诊断、白血病诊断等方面具有重要价值。

3. 分子病理学检查 分子病理学检查是近年来发展起来的一种诊断方法，它通过检测病变组织或细胞中的分子水平的异常变化来确定疾病的诊断和预后。分子病理学检查常用的方法包括基因突变检测、蛋白质表达水平检测和DNA甲基化检测等。这些检测方法可以帮助确定病变的发生机制、预测疾病的进展和预后，并为个体化治疗提供依据。 4. 免疫组织化学检查 免疫组织化学检查是通过检测组织中特定抗原的表达水平来确定疾病的诊断和分型。免疫组织化学检查常用于肿瘤的诊断和分期。通过检测肿瘤组织中特定抗原的表达水平，可以确定肿瘤的类型和分化程度，从而指导治疗方案的选择。 5. 酶组化检查 酶组化检查是通过检测组织中特定酶的活性来确定疾病的诊断和分型。酶组化检查常用于肝脏疾病的诊断，如肝炎、肝硬化等。通过检测肝脏组织中特定酶的活性水平，可以确定肝脏功能的异常程度，从而评估疾病的严重程度和预后。 总结起来，病理学的诊断方法包括组织学检查、细胞学检查、分子病理学检查、免疫组织化学检查和酶组化检查等。这些方法通过观察和分析组织、细胞的异常变化来确定疾病的诊断和病程，为临床医生的治疗决策提供重要依据。随着科学技术的不断发展，病理学

高中生物课程中常见染色剂染色原理及使用注意事项

高中生物课程中常见染色剂染色原理及使用注意事项 朱秋霖，马天兵 兰州二中，兰州 730000 摘要：目的：探究高中生物试验中常见染色剂的使用方法及常见问题与注意事项方法：通过 一些简单的实验验证与参考文献得出结论。结果：验证与总结出生物试验中常见染色剂的染 色原理及所遇到的染色问题的原因。 关键词：高中生物学实验染色剂显色原理注意事项 The common dye staining principle and precautions in the high school biology curriculum Zhu Qiulin，Ma Tianbing Lanzhou NO.2 middle secondary school class8 grade2，lanzhou 730000 Abstract:Objective: To explore the use of high school biology test stains and FAQs Note method: through some simple experiments verify references concluded.Results:Validation and summed up a common biological test stain dyeing principle and coloring problem encountered by reason. Keywords:high school biology experiment stain color rendering principle Precautions 1.常见染色剂 常见的高中生物染色显色反应，其实质是化学反应或者物理反应，按照其反 应本质，可分为下列几类[5]： 1.1 氧化还原反应类染色剂 通过氧化还原反应生成某些具有特殊颜色的物质，利用其与生物组织中某些 具有还原性的物质或代谢产物进行化学反应，宏观上产生颜色变化，通过颜色变 化,鉴别某些生物组织中的目标物质。 1.1.1 斐林试剂 由于生物组织中的葡萄糖，果糖和麦芽糖等含有具有还原性的醛基，因此称 其为还原性糖[1]。利用斐林试剂，与还原糖发生还原反应，生成砖红色沉淀。利

肌肉特殊染色

肌肉冰冻切片常用组织学及酶组织化学染色技术（—）苏木精和伊红染色（Hematoxylin and Eosin, HE） 1．苏木精溶液染色10分钟 2．流水冲洗10分钟 2．伊红溶液染色3分钟 4．流水冲洗1分钟 5．梯度酒精脱水，透明树胶封固 骨骼肌HE染色（肌膜核蓝色，肌纤维粉红色，结缔组织淡红色） （二）改良Gomori三色染色方法（Modified Gomori Trichrome, MGT） 1．Harris苏木精10分钟 2．水冲洗 10分钟 3．Gomori氏溶液30分钟～60分钟 4．0．2%醋酸浸洗1分钟 5．酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。 骨骼肌MGT染色（核紫红,肌纤维暗绿色,胶原亮绿色 ,线粒体红色） （三）PAS反应法(Periodic Acid Schiffs reaction, PAS) 1．固定于Carnoiy氏固定液10分钟 2．流水冲洗2分钟 3．0．5%过碘酸5分钟 4．蒸溜水洗1～2分钟 5．Schiff氏溶液15～30分钟 6．流水洗5～10分钟 7．Harris苏木精溶液2分钟 8．流水洗5分钟 9．脱水、透明、封固（合成树胶）

骨骼肌PAS染色结果：糖原红色，肌内肌原纤维用清晰可见ⅡA纤维染色反应强，ⅡB、ⅡC、Ⅰ型纤维呈中间型。 （四）苏丹黑B染色 1.苏丹黑溶液20分钟（加盖防气化） 2．流水洗 1．过滤的苏木精染1分钟 4．流水洗2分钟 5．甘油明胶封固 结果：脂类物质染成黑色，。 （五）四氮唑还原酶(NADH—tetrarolium redutase, NADH—TR ) 1.孵育于下列基质内30分钟，37℃ 0.05M（或0.2M）Tric缓冲液（PH7.4） 30ml 硝基四氮唑（BNT）30mg NADH 24mg 2.蒸馏水洗。 3. 甘油明胶封固。 骨骼肌NADH－TR染色(Ⅰ型肌纤维紫兰色，Ⅱ型肌纤维淡灰色)。 （六）琥铂酸脱氢酶（Succinate dehydrogenase，SDH） 染色步骤 1．孵育于下列基质30分钟,37℃（琥泊酸钠100 mg 硝基四氮唑兰 10 mg 吩嗪二甲脂硫酸盐0.3 mg 0.1M Tris缓冲液30ml 调PH7.2 ） 2．顺序在60%、90%、60%丙酮顺序脱水及蒸馏水清洗 3．甘油明胶封固。

软骨细胞特殊染色技术的比较与应用

软骨细胞特殊染色技术的比较与应用 于斐;曾晖;于红燕;雷鸣;袁昊;肖德明 【摘要】Objective To compare the advantages and values of several special staining methods of chondrocytes . Methods Twelve 7-day old healthy C57BL/6J mice were killed to obtain the cartilage tissue of the knee joint in order to isolate the chondrycytes .Type II collagen was used to assess the chondrocytes .Then the chondrocyte climbing slices were prepared.The materials were fixed, and HE staining, Safranin O-fast green staining, SA-β-gal staining and immunohistochemical staining of Type II collagen were performed and compared .Results HE staining showed clear morphology of the chondrocytes .The cell nuclei were stained blue and the cytoplasm was pink .Safranin O-fast green staining showed that the nuclei were pink and the cytoplasm green .SA-β-gal staining showed that the aging cells were green while the young cells were colorless .Immunohistochemical staining of type II collagen showed the distribution of type II collagen and they were stained brown while the cell nuclei were blue .Conclusions HE staining and safranin O-fast green staining can provide more information than the other staining techniques .SA-β-gal staining is useful in the analysis of aging chondrocytes .Immunohistochemical of type II collagen can be used to study type II collagen .%目的：探讨多种特殊染色技术在软骨细胞中的染色规律及其应用价值。方法选取出生7d内的C57BL／6J小鼠12只，处死后取双侧膝关节软骨行软骨细胞原代培养，并行II型胶原免疫荧光鉴定，取5代以内的原代细

病理切片染色

病理切片染色 ★常规病理送检注意事项★ 1. 手术中切取的组织标本，应立即投入固定液中固定(手术室应备有标本瓶和固定液)。一般以10％中性福马林为固定液。固定液的量不得少于标本体积的5～10倍。标本瓶口宜大，便于标本固定后取出。标本与瓶壁、瓶底接触影响固定者，以脱脂棉衬垫；浮于液面者，以脱脂棉覆盖。如为传染性标本，应注意勿污染容器外面。 2. 标本容器上，应贴有患者姓名或送检单联号的标签。如同一患者同时取有数种组织，或同一组织由不同部位取出，应分装不同容器，并分别注明。不同患者的标本，不得放在同一容器内。 3．采取标本时，注意勿用有齿镊或钳夹取，勿挤压，以免发生人为的变形，影响诊断。标本送检前勿剖开，应保持原形全部送检。必须剖开时，最好邀请病理医师到场，否则应在病理检查申请单内详细描写标本剖开前后情况。送检的组织不可太小，以免影响诊断。 4．标本如为整个器官或其大部，或体积较大，可不固定，但应尽早

送病理科处理(外地或远途标本，可参照第三节的方法处理后送检)。 5．各种体液、穿刺液细胞学检查标本，应立即送检。若不能立即送检，应随即离心沉淀，将沉渣做成均匀的涂片2～3张，及时放入乙醚和95％乙醇等量混合液或95％乙醇中固定，然后连同固定液，或在涂片表面涂以甘油后送检。阴道排出物、鼻咽或其他分泌物、穿刺物涂片，应于涂片制成后即放入上述固定液中固定，然后送检。 6. 送检标本时，应逐项详细填写病理检查申请单，字迹要清楚。临床科有特殊要求时，应在申请单上注明或事先联系。 ★组织的脱水透明和浸蜡★ (一)工作中注意事项 1．标本未经充分固定，不得进入脱水处理的程序。 2. 在处理全过程中，每l标本均应附有编号。随时注意防止标本间相互混杂。细小标本应用拭镜纸包裹进行脱水，以免遗失。 3．标本多的单位，可根据标本的性质、大小、分类分批进行脱水，以便按组织的特点安排时间，保证质量，常规标本脱水和透明均应在室温

病理学技术考点总结

酶组织细胞化学技术 酶组织化学技术的基本原理及方法 1、金属沉淀反应，如硫代胆碱铜法，可证明胆碱酯酶和酯酶； 2、藕联偶氮色素法 3、色素形成与染色法 一碱性磷酸酶（AKP） AKP最适宜PH值为9.2-9.4，可被金属阳离子或某些氨基酸激活，多见于活跃的部位，如小动脉、肾小管上皮等。 ⏹AKP染色方法: 1、Gomri钙钴法：AKP为黑色 注意事项：此法对含铁血黄素和钙盐也可形成棕黑色沉淀，必要时应予以鉴别。并且用于透明的二甲苯为AR级别。 2、Gossrau偶氮吲哚酚法：酶活性部位呈暗褐色（坚牢蓝VB）、浅红色（坚牢蓝BB）、蓝色（坚牢紫B） 二酸性磷酸酶（ACP） ACP前列腺活性最强，在肝脏内毛细胆管旁活性最强。 ⏹ACP染色方法: 1、Berry硝酸铅法：ACP为棕黑色，特异性抑制酶是氟化钠。 2、Leder-Stutt改良萘酚AS-TR磷酸酯法：ACP为红色。 三三磷酸腺苷酶（ATP） ATP分为三类：膜性ATP、肌球蛋白ATP、线粒体ATP，以上三种酶不可用甲醛固定，用冷冻法。 ⏹ATP染色方法： 1、Wachstein-Meisel镁激活酶法：ATP为棕黑色。 2、Dubowitz-Brooke钙激活酶法：A TP为棕黑色。 注意事项：镁激活的ATP正常肝定位于毛细胆管；钙激活ATP区分于红肌纤维和白肌纤维有意义，对于区分神经性肌萎缩和肌源性肌萎缩有价值。

四胆碱酯酶（CHE） 广义胆碱酯酶分为胆碱酯酶和乙酰胆碱酯酶，胆碱酯酶的活性中心是丝氨酸，主要分布于血浆、胰腺和唾液腺；乙酰胆碱酯酶主要分布于神经肌肉接头等处。 CHE染色法 1、Snell-Garrett胆碱铜法：CHE呈黄色或棕黄色。 2、Karnovsky-Roots铁氰化铜法：CHE呈红棕色或深棕色。