生物化学实验 氨基酸的纸层析法

实验氨基酸的纸层析法

一、目的

了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。

二、原理

以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。

将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（Rf值）

Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离

用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。

本试验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。

三、实验仪器

1、新华滤纸

2、层析缸

3、细线

4、点样管

5、橡皮筋

6、电吹风

7、喷雾器

四、实验试剂

1、混合氨基酸溶液（甘氨酸，苯丙氨酸），甘氨酸溶液，苯丙氨酸溶液

2、展层剂：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸馏水=13：3：3：1（v:v）

3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml无水丙酮，贮于棕色瓶中

五、试验步骤

1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系一根细线，在另一端2~3cm处用铅笔画一横线，中间画一圆点（原点）。

2、取毛细管一支(回收)，吸取氨基酸混合液，在原点处点样，样点直径不

宜超过5mm,每点一次用吹风机吹干，点2~3次为佳。

3、点样后将滤纸放入层析缸中展层，注意点样线要高于层析液面，滤纸不要贴在层析缸璧上，当展层至另一端1~2cm处时，停止展层（大约2~3小时）。

4、取出滤纸，用铅笔记下溶剂前沿，然后用热风吹干（或烘箱60℃）烘干。

5、均匀喷上茚三酮—无水丙酮液，注意使溶液不倒流，不间断。

6、用吹风机吹干，观察层析点，确定其几何中心。

7、量取数值，计算各自的Rf值，与表中标准氨基酸Rf值比较，确定样品氨基酸种类。（书上图谱横着看）

六、实验结果

1.标准氨基酸单向上行层析法

定性、定量测定：

将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。

甘氨酸层析点中心到原点的距离：0.4cm

苯丙氨酸层析点中心到原点的距离：3.2cm

原点到溶剂前沿的距离:10.8cm

在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（Rf值）

Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离

Rf(甘氨酸)= 0.4cm/10.8cm =0.037

Rf(苯丙氨酸)= 3.2cm/10.8cm =0.296

实验图像：

七、实验分析

由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。

注意事项：

1. 在原点处点样，样点直径不宜超过5mm,每点一次用吹风机吹干，点2~3次为佳。防止扩散面积过大，使展层效果不佳或直接影响实验结果。否则分离不好，并且样品用量大，会造成“拖尾巴”的现象, 防止氨基酸斑点重叠。

2. 注意点样线要高于层析液面。防止点样氨基酸溶解于层析液中。滤纸不要贴在层析缸璧上。防止滤纸左右两端展层速度过快，影响实验结果。

3. 均匀喷上茚三酮—无水丙酮液，注意使溶液不倒流，不间断。

4．取滤纸前，要将手洗净，这是因为手上的汗渍会污染滤纸。并尽可能少接触滤纸。在整个操作过程中，手只能接触滤纸边缘，否则手指上的氨基酸会造成滤纸上众多斑点.要将滤纸平放在洁净的滤纸上，不可放在试验台上，以防止污染。

5.展层结束后，切勿忘记用铅笔描出溶剂前沿。

6.在点样时，不要将毛细管插错了试剂瓶。

7.展层剂接触滤纸时一定要均匀、保持前沿线与滤纸平行。

8.风温度不宜过高，否则斑点变黄。

9.影响Rf值的因素有：

①物质本身的化学结构；

②展层所用溶剂系统；

③展层剂pH值；

④展层时的温度；

⑤展层所用滤纸；

⑥展层的方向(横向，上行或下行)。

实验四-氨基酸的纸层析法

姓名：郭沈杰年级专业：2012级生物科学同组者：蔡萍萍 学号：12050011012 实验四氨基酸的纸层析法 一、实验目的 了解并掌握氨基酸纸层析法的原理和方法。 二、实验原理 以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时，水为固定相，它与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。 将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。 在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（R f值） R f=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离 混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。 氨基酸无色，利用茚三酮反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。

本实验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有精氨酸、苯丙氨酸。 三、实验仪器 1、新华滤纸 2、层析缸 3、细线 4、点样管 5、橡皮筋 6、电吹风 7、喷雾器 8、铅笔 9、直尺 四、实验试剂 1、精氨酸、苯丙氨酸、混合氨基酸（精氨酸、苯丙氨酸） 2、展层剂：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸馏水=13：3：3：1（v:v） 3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml无水丙酮，贮于棕色瓶中 五、实验步骤 1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系一根细线，在另一端2~3cm处用铅笔画一横线，在上面相同间隔画3圆点（原圈直径约5mm）。 2、取毛细管3支，分别吸取精氨酸、苯丙氨酸、氨基酸混合液少许，在原圈处点样，样点

氨基酸的分离鉴定纸层析法

氨基酸的分离鉴定纸层析法 引言： 氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于生物体的正常生理功能至关重要。因此，准确地分离鉴定氨基酸成分对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。纸层析法是一种简单而有效的分离和鉴定氨基酸的方法。本文将介绍氨基酸的分离鉴定纸层析法并探讨其应用。 一、纸层析法的原理 纸层析法是利用气相平衡原理进行物质分离的一种方法，其原理是根据物质在纸上各组分的相对亲疏性，通过运动距离的差异来分离物质。在氨基酸的分离鉴定中，纸层析法通过将待测氨基酸溶液滴于纸上，然后将纸立起来，将纸的下端浸入相应的溶剂中，使得溶剂上升，通过毛细作用将氨基酸上提，最终实现氨基酸的分离和鉴定。 二、纸层析法的步骤 1. 准备工作：制备纸层析板和显色剂。 2. 样品处理：将待测氨基酸溶解于适量的溶剂中，使其浓度适宜，然后滴于纸层析板上。 3. 运行纸层析：将纸层析板立起，纸的下端浸入相应的溶剂中，待溶剂上升到一定高度后，取出纸层析板。 4. 显色：将纸层析板放置于显色剂中，通过氨基酸与显色剂的反应，使得氨基酸在纸上显色。

5. 结果鉴定：根据显色的位置、颜色和强度等特征，对氨基酸进行鉴定和定量分析。 三、纸层析法的应用 1. 氨基酸组成分析：纸层析法可用于分析蛋白质中氨基酸的组成，从而揭示蛋白质的结构和功能。 2. 质量控制：纸层析法可用于对食品、药品等中氨基酸含量的快速检测，保证产品质量和安全性。 3. 生物体内氨基酸代谢研究：纸层析法可用于研究生物体内氨基酸的代谢途径和代谢产物。 四、纸层析法的优缺点 纸层析法作为一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法，具有以下优点： 1. 简单易行：操作简单，不需要复杂的仪器设备，成本低廉。 2. 分离效果好：对于氨基酸的分离效果较好，可以得到较为准确的结果。 3. 易于观察：通过显色剂的反应，可以直观地观察到氨基酸在纸上的分离和鉴定结果。 然而，纸层析法也存在一些缺点： 1. 分离效果有限：对于某些结构相似的氨基酸，纸层析法的分离效果不佳，难以实现准确鉴定。 2. 定量精度较差：纸层析法的定量精度相对较差，适用于定性分析和快速筛查。

氨基酸纸层析法

氨基酸纸层析法 氨基酸纸层析法（paper chromatography of amino acids）是一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法。本文将详细介绍氨基酸纸层析法的原理、步骤、实验条件和数据处理方法等内容，以帮助读者更好地了解并应用这一实验技术。 一、氨基酸纸层析法的原理 氨基酸纸层析法是利用氨基酸在纸上的分布系数和溶剂的渗透速度差异进行分离的方法。其原理是在一根滤纸条上画上水平的线，将待测的氨基酸溶液直接点于纸条上，待溶液中的氨基酸离子在滤纸上沿渗透液前进，不同氨基酸在滤纸上的迁移速度不同，从而实现氨基酸的分离和测定。 二、氨基酸纸层析法的步骤 1. 实验前准备 （1）准备氨基酸样品，将其溶解在适当的溶剂中，并使用pH 计调节至适当的酸碱度。 （2）准备滤纸条，按照实验需要确定滤纸的宽度和长度。（3）准备层析槽，将槽中的溶剂预先与上盖采光纸取代，避免有光照射到。 2. 进行层析实验 （1）在滤纸条上绘制水平基线，并将标记的点分开，便于后续氨基酸的测定。 （2）将氨基酸溶液直接点于滤纸条上，点的位置要尽量靠近基线，以避免扩散的影响。 （3）将纸条的一端浸入含有适当溶剂的层析槽中，保持溶剂

的面平稳。 （4）待溶液中的氨基酸在滤纸上渗透，不同氨基酸迁移的距离不同，最终在纸条上形成清晰的色斑。 （5）将纸条取出，用热风干燥，然后在紫外灯下进行观察和记录。 3. 数据处理 将滤纸上的色斑分别用铅笔勾画出来，并测量它们与基线之间的距离。然后，根据距离之间的比例关系来计算氨基酸在纸上的迁移速度，并与标准曲线进行比较，从而得出待测氨基酸的浓度。 三、氨基酸纸层析法的实验条件 1. 溶剂体系 常用的溶剂体系有正丙醇/ 乙酸/水 = 4:1:5、正丙醇/氨水/水 = 70:2:25等，需要根据实验需要确定溶剂的组成和比例。 2. 滤纸条的准备 常用的滤纸有菱形滤纸和圆形滤纸，需要根据所需分离的氨基酸种类和数量决定滤纸的大小。 3. 实验条件 实验应在干燥、通风的环境中进行，避免光照和温度过高。 四、氨基酸纸层析法的数据处理方法 通过纸层析法获取的数据可以用于定性和定量分析。定性分析是根据溶液中色斑的形状和颜色来判断其是否为特定氨基酸。

氨基酸的纸层析法

氨基酸的纸层析法 一、实验目的 学习氨基酸纸层析法的基本原理。 掌握氨基酸纸层析的操作技术。 二、实验原理 纸层析法（paper chromatography）是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，利用样品在两种互不相容的溶剂中分配系数的不同达到分离的目的。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。 分配系数（K）=溶质在流动相中的浓度C L/溶质在固定相中的浓度C S 比移值（Rf）=从原点至层析点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离 三、实验仪器与试剂 1、实验仪器 试剂瓶、天平、通风橱、容量瓶、量筒、层析滤纸、直尺与铅笔、毛细管、 层析缸、电热吹风机、烘箱、培养皿（喷雾器） 2 、实验试剂： 10%异丙醇：量取50ml异丙醇，于500ml的容量瓶中定容。 0.01mol/L的氨基酸标准溶液： 赖氨酸标准溶液：称取赖氨酸标准品0.146g混合溶于100ml 10%异丙醇中。谷氨酸标准溶液：称取谷氨酸标准品0.147g混合溶于100ml 10%异丙醇中。脯氨酸标准溶液：称取脯氨酸标准品0.115g混合溶于100ml 10%异丙醇中。

苯丙氨酸标准溶液：称取苯丙氨酸标准品0.165g混合溶于100ml 10%异丙醇 中。 混合氨基酸标准溶液：量取赖氨酸标准溶液，谷氨酸标准溶液，脯氨酸标准溶 液，苯丙氨酸标准溶液各20ml，混匀。 层析溶剂：正丁醇：乙酸：蒸馏水=4:1:5(350ml/缸，现用现配) 0.25%茚三酮显色液：称取0.25g茚三酮，溶于100ml丙酮中。 四、试验步骤 1、滤纸的准备 取15×15cm的层析滤纸条一张，在底端2 cm处用铅笔与直尺画一横线，在此线上每隔2.5cm做一标记，记作五种氨基酸的点样位置。 2、点样 取毛细管在每个点样处精确点样，其直径约2-3nm为宜，点2-3次为佳。（大约为毛细管管长的1/4-1/3）必须在每一滴样品干后再滴第二滴，在操作过程中应戴上乳胶手套，以避免污染滤纸。 3 、层析 向层析缸缸底的培养皿中倒入层析溶剂，液层约厚1.5cm。将点好样的滤纸放入层析缸中，注意点样端朝下，盖好盖子，并用回形针将其固定。当溶剂上升至离滤纸顶端约2cm时（大约1h），立即取出并用铅笔与直尺画一条直线标出溶剂前沿的位置，再用吹风机将其吹干。 4 、显色 将层析滤纸放在盛有0.25%的茚三酮显色液的培养皿中浸润（或用喷雾器），不要超过前沿。放在60-65℃的烘箱中烘10min，即能显出各种氨基酸的色斑。 五、结果与分析

氨基酸的纸层析

氨基酸的纸层析 引言： 纸层析是一种简单而有效的分离和检测化合物的方法，它通过利用化合物在固定相（通常是纸张）上的迁移速度差异来实现分离。氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究蛋白质的组成和性质具有重要意义。因此，氨基酸的纸层析成为了研究氨基酸的常用方法之一。 一、纸层析的原理 纸层析是一种液相分离技术，其原理基于化合物在固定相和流动相之间的分配行为。固定相通常是由纸张组成的，而流动相则是溶液。当试样溶液被加到纸上时，流动相开始向上渗透，溶解试样中的化合物。然后，随着流动相继续上升，化合物会在纸上产生不同的迁移速度，从而实现分离。 二、氨基酸的纸层析方法 氨基酸的纸层析方法通常涉及以下几个步骤： 1. 准备纸层析纸：选择适合的纸张作为固定相，常用的有滤纸和纸胶片。纸张应具有较好的吸水性和化学稳定性。 2. 制备流动相：根据需要选择合适的溶剂和缓冲液，以便溶解样品和调节pH值。

3. 样品制备：将待测氨基酸样品溶解在适当的溶剂中，并进行必要的稀释和调节pH值。 4. 上样：用毛细管或吸管将样品涂抹在纸上，通常在距离纸底端2-3厘米处。 5. 纸层析：将纸张立起放入含有流动相的容器中，使纸底端浸入溶液中，然后盖上盖子避免溶剂挥发。让溶剂上升至合适的高度，以保证分离的有效性。 6. 可视化：取出纸张，干燥后，利用适当的显色剂或检测剂将化合物可视化。常用的显色剂有尼尼醛试剂和二硝基苯胺。 7. 定量分析：通过比较样品斑点的Rf值（迁移率）和标准氨基酸的Rf值，可以对氨基酸进行定性和定量分析。 三、氨基酸纸层析的应用 氨基酸的纸层析在生物化学和生物医学领域中得到了广泛的应用。以下是一些常见的应用： 1. 氨基酸分析：通过纸层析可以快速、简便地对复杂的氨基酸混合物进行分析，包括氨基酸的组成和相对含量。 2. 蛋白质组成分析：蛋白质是由氨基酸组成的，通过纸层析可以分析蛋白质中各种氨基酸的相对含量，进而了解蛋白质的组成和结构。

1、氨基酸的分离鉴定--纸层析法

实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法 一、目的： 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 二、原理： 层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动 相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。 层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般 化学方法难以分离的各种化合物。如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。 层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换 层析等。 纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性 鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一 中分离分析工具。纸层析属于分配层析法。分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个 互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的 羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使 这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。当有机相沿纸流动经 过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而 进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。当有机相不断流动时，溶 质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因 而可以彼此分开。 纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。 在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。达到平衡时，这种物质在 两种溶剂中的浓度之比为一个常数，即所谓的分配常数，用ａ表示）不同，使不同的氨基酸分布在 滤纸的不同位置上而得到分离。 一种物质在两种溶剂中的浓度之比是一个常数，也就是分配系数（）。

氨基酸的测定--纸层析法

【实验目的】 1. 学习氨基酸纸层析法的基本原理 2. 掌握氨基酸纸层析的操作技术 【实验原理】 层析分离技术是利用被分离的混合物中各组分物理化学的性质（分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分以不同程度分布在两相（流动相和固定相）中，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速度移动，从而达到分离。 纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rat e of flow, Rf）来表示。所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值： 物质的移动速率以 R f 值表示： Rf=原点至层析点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离=X/ Y 在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。 【器材与试剂】 （一）器材 1. 层析缸 2. 点样毛细管 3. 小烧杯 4. 培养皿 5. 量筒 6. 喷雾器 7. 吹风机（或烘箱）8. 层析滤纸（新华一号）9. 直尺及铅笔 (二) 试剂 1. 扩展剂(水饱和的正丁醇和乙酸混合液) 2. 氨基酸溶液 3. 显色剂:茚三酮溶液 【实验步骤】 1.准备滤纸:在纸的一端距边缘2～3㎝处用铅笔划一条直线，间隔2㎝作一记号。 2.点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在标记的位置上，点样时，毛细管口应与滤纸轻轻接触，样点直径一般控制在 0.3cm 之内。用吹风机稍加吹干后再点下一次,重复2～3次。 3.扩展：层析缸中加入30ml扩展剂，将缝成筒状的滤纸直立其中,采用上行法进行展层。当溶剂前沿上升到距纸上端 1 cm 时，取出滤纸，立即用铅笔记下溶剂前沿的位置，用吹风机吹干滤纸上的溶剂。用铅笔描出溶剂前沿界线，吹干。 4.显色：滤纸表面均匀喷上茚三酮溶液，切勿喷得过多致使斑点扩散。然后将滤纸用热风吹干或置烘箱中（100℃）烘烤5min。 5.结果:用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原点之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的 R f 值，与标准氨基酸的 R f 值对照，确定混合物中含有哪些氨基酸。 计算：各种氨基酸的Rf值。 注意事项：

实验20纸层析法分析氨基酸_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物 生命科学)

实验二十纸层析法分析氨基酸 一、实验目的 1.掌握纸上层析的一般原理和操作方法。 2.了解氨基酸的特征性颜色反应。 3.学会分析未知样品的氨基酸成分。 二、实验原理 纸上层析法是分配层析法中的一种，常以滤纸为惰性支持物。纸上层析法是分离、鉴定和定量测定氨基酸、糖类、抗生素等有机物质的一项重要而简便的分析方法。所用设备简单、操作方便，使用样品少，分离效果好，为近代生物化学分析中重要技术之一。此法广泛地应用于科研和生产分析工作中。 纸上层析的原理，常以水和有机溶剂作为展层剂；水和有机溶剂互溶后形成两个相：一个是饱和了有机溶剂后的水相，一个是饱和了水后的有机溶剂相。由于滤纸纤维素上的羟基和水分子有较大的亲和力，而与有机溶剂的亲和力相对较弱，因此我们认为水相为固定相，有机溶剂相为移动相。由于物质的极性大小不同，在两相中分配比例有所差异。极性小的物质在有机相中分配较多，随有机相移动较快；而极性大的物质在水相中分配较多，移动相对较慢，从而将极性不同的物质分开。一般来说，在相同的条件下，每种物质都有其固定的Rf值。Rf值的定义为：Rf=(原点到层析斑点中心的距离)/（原点到溶剂前沿的距离）影响Rf值的因素有：①物质本身的化学结构；②展层所用溶剂系统；③展层剂pH值；④展层时的温度；⑤展层所用滤纸；⑥展层的方向(横向，上行或下行)。 用纸层析鉴定样品时，一般都与标准品相比较。若没有标准品，可选择文献记载的该物质层析条件，根据文献Rf值进行鉴定。 三、实验用品 1．材料氨基酸 2．器材层析缸、烘箱、冷热电吹风机、毛细管、针和线、培养皿。 3．试剂 (1)展层剂和平衡液 正丁醇：冰醋酸：水=4：1：5，充分摇匀，用分液漏斗取上层液作展层剂；下层液作平衡液。 (2)样品液 用水配成每ml含有苯丙氨酸、丙氨酸、组氨酸、脯氨酸各4 mg的4种氨基酸溶液，以及上述4种氨基酸的混合液(各4 mg／m1)。苯丙氨酸不易溶解于水，应稍微加热使之溶解。 (3)茚三酮 按展层剂O.25％的比例将茚三酮加入展层剂中，使其溶解。 四、实验操作

氨基酸的分离鉴定(纸层析法)

氨基酸的分离（纸层析法） 一、实验原理 1、层析法又称色谱法，是一种物理的分离方法。利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中，并使各组分以不同速度移动，从而得到有效的分离。 操作方式：纸层析、薄层层析、柱层析等 分离机理：分配层析、吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析等 2、纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，展层溶剂由有机溶剂和水组成。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，在滤纸上水就被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相。当有机溶剂（流动相）沿纸流动经过层析点时，层析法上溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。由于溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。由于溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。 分配系数=溶质在固定相中的浓度溶质在流动相中的浓度 物质被分离后在滤纸上的移动速率用R f值表示： R f=原点到层析点中心的距离原点到溶剂前沿的距离 只要条件（如温度、展层溶剂的组成）不变，R f值是常数，故可根据R f值作定性 依据。 氨基酸无色，利用茚三酮反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。 二、实验器材 标准氨基酸溶液、滤纸、层析缸、保鲜膜、剪刀、毛细管、电吹风。 三、实验试剂 1、酸相溶剂：V[正丁醇（A.R）]：V[88%甲酸]：V[水]=15：3：2 2、显色贮备液：V（0.4mol/L茚三酮-异丙醇）：V（甲酸）：V（水）=20：1：5 四、实验操作 1、点样 量取30mL层析溶剂、1mL显色贮备液于层析缸中，混匀密闭，静置。 戴好手套，在桌上铺好一层保鲜膜。取一张干净滤纸，将其剪彩为18cm*14cm。在纸的一端距边缘2cm处用铅笔轻轻划一条直线，在此直线上等距离分出几个点作为点样原点。 用毛细管将标准氨基酸和未知样品分别点在点样点上，每次点样后用电吹风冷风吹干再点下一次，点样点直径不超过5mm。 2、层析与显色

实验二 氨基酸的纸上层析法

实验二氨基酸的纸上层析法 一、实验原理 纸上层析法是近代生物化学重要分析技术之一。自从此法建立后，近代生化研究有了飞跃的发展，此法的优点是设备和操作简单，使用样品很少，而分离效果很好。其原理是利用混合物在二种或二种以上的不同溶剂中的分配系数不同而使物质分离的方法。如用带水的材料（载体）作为液相（固定相），在滤纸上的一端滴上少量的混合物（例如：几种氨基酸）然后使一种与水不相混合的溶剂（移动相）从这一端流过，当溶剂一段距离后，由于混合物中各成分大水与该溶剂中的分配系数不同，它们在纸上移动的距离也就不同，因此各成分得以分开。各成分被代开后，在滤纸上的实际位置可借喷适当的显色剂使其显色，这样就可以获得层析图谱。 载体在分配层析中只起负担固定相的作用，它们是一些吸附力小、反应性弱的惰性物质，如淀粉、纤维素粉、滤纸等。固定相除水外，还有稀硫酸、甲醇、仲酰胺等强极性溶液。流动相则采用比固定相极性小或非极性的有机溶剂。纸层析是最广泛应用的一种分配层析。纸层析法以滤纸为载体，滤纸上吸附着水（约含20%—22%）是经常用的固定相，此类有机溶剂如醇、酚等为常用的流动相。把欲分离的物质加在纸的一端，使流动溶剂经此移动，这样就在两相间发生分配现象。由于物质分配系数的不同，就逐渐在纸上集中于不同的部位。在固定相中分配趋势较大的成份，随流动相移动的速度就慢；反之，在流动相分配趋势较小的成分，移动速度就快。物质在纸上移动的速度可以用Rf表示： 色斑中心至原点中心的距离 Rf = ────────────── 溶剂前缘至原点中心的距离 物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也恒定，因此，可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。 纸层析法按操作方法分成两类，即：垂直型和水平型。垂直型是将滤纸条悬起，使流动相向上或向下扩散；水平型是将圆形滤纸置于水平位，溶剂由中心向四周扩散。垂直型使用较广，按分配物质的多寡，将滤纸截成长条，在某一端距边缘2~4cm处点样，待干后，将点样端边缘与溶液接触，在密盖的玻璃缸内进行展开（见图4-0-1）上述方法只用一种溶剂系统进行一次展开，称为单向层析。如果样品成分较多，而且彼此的Rf 值相近，单向层析分离效果不佳，可用双向层析法，即在长方形或方形滤纸的一角点样，卷成圆筒形，先用第一种溶剂系统展开，展开完毕吹干后转90o，再放于另一种溶剂系统中，向另一方向进行第二次展开，如此各成分分离较为清晰。 纸层析目前的应用范围非常广，除用作氨基酸的分离外，对于核酸水解产物，激素、微生素、糖类和无机物质等的分离分析工作，都可以应用这个技术。 二、实验仪器 500ml烧杯 2 新华1号滤纸11╳10cm 3 毛细滴管 4 镊子 喷雾器 6 刻度尺7 烘箱8 电吹风9 表皿10 针线 三、实验试剂 缬氨酸、丝氨酸、赖氨酸：缬氨酸、丝氨酸、赖氨酸的混合物。 展开剂：正丁醇-乙酸-水15：3：2（V/V） 显色剂：0.1%茚三酮乙醇液 四、实验步骤 用镊子夹住滤纸，沿着11 cm的一边，在距离这边边缘1 cm处用铅笔划出一横线，在此线上标出四个点子，并编号（1~4），每个点子相距2 cm。

生物化学实验 氨基酸的纸层析法

实验氨基酸的纸层析法 一、目的 了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。 二、原理 以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。 将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（Rf值） Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离 用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。 本试验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。 三、实验仪器 1、新华滤纸 2、层析缸 3、细线 4、点样管 5、橡皮筋 6、电吹风 7、喷雾器 四、实验试剂 1、混合氨基酸溶液（甘氨酸，苯丙氨酸），甘氨酸溶液，苯丙氨酸溶液 2、展层剂：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸馏水=13：3：3：1（v:v） 3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml无水丙酮，贮于棕色瓶中 五、试验步骤 1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系一根细线，在另一端2~3cm处用铅笔画一横线，中间画一圆点（原点）。 2、取毛细管一支(回收)，吸取氨基酸混合液，在原点处点样，样点直径不

纸层析法分离鉴定氨基酸

纸层析法分离鉴定氨基酸 纸层析法是一种常用的分离和纯化化学物质的实验方法，被广泛应用于有机合成、生 物化学和食品科学等领域。本文将介绍纸层析法在氨基酸分析中的应用。 一、实验原理 氨基酸的分离和鉴定是生物化学实验中常用的手段。氨基酸分子中含有羧基和氨基， 可以通过纸层析法实现其分离。纸层析法是一种基于物质分子间不同的吸附性能而进行分 离的方法。在纸层析实验中，将试样涂在纸层析片（通常为滤纸）的一侧，并将其放入溶 剂（通常为水、丙酮、甲醇等）中，溶剂会沿纸层析片向上移动，分离出不同物质组分。 氨基酸分子的羧基和氨基分别具有不同的亲水性和疏水性，因此在纸层析分离中会表 现出不同的吸附行为。例如，疏水性较强的疏水基团会被生物样品或溶剂吸附，从而较慢 地从纸层析片上移动，这些氨基酸通常出现在较高位置；而亲水性较强的羧基团则会被水 吸附，因此移动速度较快，这些氨基酸通常出现在较低位置。 二、实验步骤 1、制备样品：取大约1mg的氨基酸标准品或被测样品，加入1mL的去离子水中，并轻轻搅拌，制成1mmol/L的溶液。 2、制备纸层析片：取一张长约50cm的滤纸，将其叠成4层，然后将中间部分剪成 30cm的长条，每条的宽度为1cm左右，用铅笔在底部标记出位置，离开1cm到1.5cm的距离。 3、涂样：在每个标记位置上滴加不同氨基酸溶液，每次加约5µL。所有样品均按照氨基酸的相对极性从小到大进行涂样，从左到右编号，以便于鉴定。 4、溶剂选择：选择一种适宜的溶剂，通常为水、丙酮、甲醇等。将滤纸上端放入溶 剂中，约1cm左右的位置即可。 5、开始实验：用三角架和夹子将滤纸张贴在玻璃板上，使其呈现较小的倾斜面。在 滤纸的底部悬挂一张白纸，以便于观察样品在纸层析上的位置变化。待溶剂无法再升高时，实验结束。 6、结果读取：按照行（从上到下）顺序，观察样品的移动距离。 三、实验结果及分析 纸层析法可以分离并识别出存在于试样中的氨基酸分子，在实验中，通过观察样品从 纸层析片底部开始向上移动的情况，可以确认每个氨基酸的相对位置和含量。根据与标准

纸层析法—氨基酸的分离与鉴定

纸层析法——氨基酸的分离与鉴定 一、 实验目的 1、 了解纸层析法的使用原理。 2、掌握用纸层析法分离蛋白质的操作步骤。 二、 实验原理 1、 纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的分配层析方法，滤纸上的纤维具有羟基，是亲水基团，滤纸吸附水作为固定相，其上流经的有机溶剂即展层剂作为流动相。当展层剂流经固定相时，固定相上的样品由于亲水、疏水能力不同，在两相之间不断分配，疏水能力强的多溶于流动相，随流动相移动距离较远，亲水能力强的移动距离则较近。 2、 所有的氨基酸的α碳上均连接一个氢原子和两个亲水基团羧基（—COOH ）与氨基（—NH 2），唯一的不同则在于R 基团。因此R 基团在氨基酸的亲水疏水能力对比中起到了决定性的作用。本实验采用丙氨酸，苯丙氨酸，天冬氨酸，其R 基团分别是—CH 3，—CH 2—C 6H 5，—CH 2—COOH ，其亲水疏水能力迥异，能在滤纸上明显分开。 3、 Rf 值表示原点中心至显色斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离比。在一定条件下，Rf 值为定值，其影响的因素有物质本身的性质，溶剂的性质，PH 值，温度，滤纸的性质等等，本实验不予探究。在测量原点中心至显色斑点中心的距离时，由于斑点的形状不规范（近似圆形），所以，一般取斑点的重心，测量出重心与起点的距离即可。 4、 显色原理：茚三酮在弱碱性溶液中与α—氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氧，脱羧反应，最后茚三酮与反应产物——氨和还原茚三酮发生作用生成紫色物质。 Y X R f ==原点到溶剂前沿的距离离原点到层析点中心的距

三、试剂 （一）提前配制试剂 8*10-3mol/L丙氨酸溶液：精确称取0.356g晶体，溶解后定容到500ml。 8*10-3mol/L苯丙氨酸溶液：精确称取0.661g晶体，溶解后定容到500ml。 8*10-3mol/L天冬氨酸溶液：精确称取0.532g晶体，溶解后定容到500ml。（将上述三种溶液装于小瓶中实验时，每两组共用一组试剂） 正丁醇 88%甲酸 蒸馏水 茚三酮晶体 注：实验时，以上试剂均为每两组同学共用一组试剂。 （二）当堂配制试剂 丙氨酸，苯丙氨酸，天冬氨酸的混合液:将上述溶液等体积混合即可 四、实验仪器 每组： 钟罩：1 试管：15mm*10cm *5 试管架：1 培养皿：95mm*1 移液管：10ml *1 洗耳球：1 小烧杯：25ml *2 （可以用其他小规格的烧杯如20,10,8ml的代替）100ml*1 滤纸：15cm*15cm *1 铅笔：1 直尺：1 毛细吸管：4 保鲜膜：1 细玻璃棒：1 公用： 电吹风：3 酒精灯：3 订书机：3 电子天平或分析天平：3 称量纸：若干烘箱：1

实验六氨基酸的纸层析法

实验六氨基酸的纸层析法 氨基酸是构成蛋白质的最基本的组成成分。在生物化学和分子生物学实验中，常常需 要对氨基酸进行分离和纯化。纸层析法是一种常用的氨基酸分离和鉴定的方法，它采用纸 张作为介质，利用氨基酸的性质在多次不同极性溶剂中的间歇性抽提来完成氨基酸的分离。下面将介绍具体操作步骤。 一、实验原理 氨基酸纸层析法是一种简单而有用的分离和鉴定氨基酸的方法。其原理是根据氨基酸 在不同相对极性的溶剂中的溶解度和色谱行为而进行分离。实验中用的纸张是具有适当极 性特性的滤纸，涂上0.001~0.002mol/L氯乙酸钠作为移动相。固定相是纸张本身，通常 取5×5 cm大小。标记物一般是用19种常见氨基酸中的一种或混合某些氨基酸，它们分 别在不同移动相中有不同的颜色分离性质。标记物的溶液可以直接在纸上点斑或者先把样 品在滤纸上打成碎粒，再加入稍许水均匀混合后点斑。 二、实验步骤 1. 实验器材和试剂 （1）氯乙酸钠； （2）19种氨基酸标准品； （3）滤纸。 2. 制备移动相 将0.001~0.002mol/L氯乙酸钠溶液制备好，备用。 3. 准备试样 将要分离的氨基酸标准品用适量的氯乙酸钠溶液稀释，制备出1~2mg/mL的样品，备用。 4. 载纸处理 在纸片中央绘制一条垂直线，以绘制者的名字为记。距离中央线约1cm处，打上精细 的刻度线，用微孔钳取少量标样液，在对侧依次在距中央线约1.5cm处打上纸层印。纸层 印就是取少量液体滴到滤纸上产生的斑点。约300ug/sample。 5. 开始层析

在棉花球上，涂上一层氯仿，并立即用焊接器将其挥发掉，然后再涂一遍。整个过程保持外壳密封状态。涂的氯仿量要足够，可以完全覆盖整个纸层印，但不能过多。否则，纸层印上的标样就会扩散到大范围，分辨率就失去了。 将试纸浸泡在移动相中。移动相上升时，会将固定相上的氨基酸迅速带动并在移动相中逐级输送。随着移动相液面逐渐提高，固定相的氨基酸成分逐渐被分离开来。 注意事项： （1）加样时，操作应小心、细致，尽可能用毫、微、纳级的物体。 （2）纸层印必须记录样品在平面上的位置和位置之间的距离。 （3）注明纯度高的样品的颜色。如果需要，在移动相中加一些色标。尽量使每个样本斑点保持足够精细，以使获得足够准确的数据。 三、实验结果分析 1. 显色分析 实验结束后，氨基酸分离在纸张上。将纸展开，并用溴酚蓝或其他显色处理剂进行染色。不同氨基酸在显色处理后会呈现出不同的颜色，可对样品进行鉴定和分析。 2. 结果证明 根据颜色和位置可以确定各个样品的分离情况，并据此证明试样中每种氨基酸的存在和纯度。实验可视为成功，当且仅当： （1）各种氨基酸能够分离出来； （2）探测到的氨基酸与标准品一致。 1. 氨基酸纸层析法需要仪器和试剂较少，但操作过程较为复杂，需要仔细操作。 2. 实验前需要准备好试样和移动相，保证实验顺利进行。 3. 实验中需要注意实验器材和试剂的洁净度，以免影响实验结果。 4. 按照操作步骤进行操作，注意安全。

氨基酸的纸层析实验报告

氨基酸的纸层析实验报告 一、实验目的 本实验旨在通过纸层析法分离和检测氨基酸的混合物，并掌握纸层析 法的操作技能和实验方法。 二、实验原理 纸层析法是一种常用的分离和检测小分子化合物的方法，其原理是利 用不同物质在固定相（纸张）上运动速度不同，从而使它们在水平方 向上分离。对于氨基酸来说，它们的极性不同，因此可以通过纸层析 法进行分离。具体方法为：先将混合物溶于适当溶剂中，然后将溶液 点于纸上，待其干燥后将纸张放入含有适当移动相（如丙酮-水）的槽中，在移动相作用下，各氨基酸沿着纸张上升，并在不同位置处停留 下来形成斑点。最后通过显色或紫外线照射等方法进行检测。 三、实验步骤 1.准备工作：取一张大小适中的滤纸，在距离底部1cm处画一个横线。 2.制备样品：取苯甲酰氨基丙酸（BAP）和甘氨酸（Gly）各10mg， 加入0.1mol/L HCl中，用超声波混合溶解。 3.点样：用微量移液管在距离底部1cm处分别点上制备好的样品。 4.干燥：将纸张放在通风处晾干。 5.装置槽：取一只玻璃槽，加入适量的丙酮-水移动相（比例为7:3），

使其深度约为1cm。 6.上色：将晾干的纸张迅速放入槽中，待移动相上升至距离纸面1cm 时取出，迅速晾干并标记。 7.检测：将纸张置于紫外线灯下或进行显色处理，观察斑点位置和颜色。 四、实验结果 经过实验操作后，在紫外线灯下观察到两个斑点，分别位于距离底部 2cm和3cm左右。其中较靠近底部的斑点为苯甲酰氨基丙酸（BAP），较靠近顶部的斑点为甘氨酸（Gly）。 五、实验分析 通过本次实验可以看出，在适当条件下利用纸层析法可以有效地分离 和检测氨基酸混合物。其中，移动相的选择、样品的制备和点样的位 置等因素都会影响实验结果。此外，通过观察斑点位置和颜色可以初 步判断混合物中各种氨基酸的成分。 六、实验注意事项 1.操作时要注意安全，避免有毒有害物质接触皮肤或吸入。 2.制备样品时要保持干燥，避免水分对实验结果的影响。 3.点样时要注意位置和数量，避免斑点过多或重叠。 4.纸张晾干后不要弯曲或折叠，以免影响实验结果。 5.移动相的选择要根据具体实验需要进行调整。

氨基酸纸层析法

实验二氨基酸纸层析法 一、实验目的 1、学习并了解分配层析的原理； 2、掌握纸层析法分离氨基酸的原理和步骤。 二、实验原理 纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法是用滤纸为支持物进行层析的方法，所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。将样品点在滤纸上(此点称为原点)，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。 溶质在滤纸上的移动速率用Rf值表示：Rf=原点到层析斑点的距离/原点到溶剂前沿的距离 在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。只要条件(如温度、展层溶剂的组成)不变，Rf值是常数，故可根据Rf值作定性判断。 样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的Rf值相同或相近，此时如只用一种溶剂展层，就不能将它们分开。为此，当用一种溶剂展层后，将滤纸转动90度，再用另一溶剂展层，从而达到分离目的，这种方法称为双向纸层析法。 氨基酸无色，可利用茚三酮显色反应，将氨基酸层析点显色作定性、定量用。 三、药品器材 1实验器材 混合氨基酸溶液（蛋清或血清水解后的氨基酸干粉）6mg/ml、滤纸、烧杯10ml(×1)、剪刀、层析缸（×2）、微量注射器10(×1)或毛细血管、电吹风（×1）、722型（或7220型）分光光度计2实验试剂 (1)溶剂系统 碱相溶剂：V[正丁醇（A.R.）]:V(12％氨水):V(95％乙醇)=13:3:3 酸性溶剂：V[正丁醇（A.R.）]:V(80％甲酸):V(水)=15:3:2 (2)显色贮备液:V(0.4mol/茚三酮-异丙醇):V(甲酸):V(水)=20:1:5。 (3)V(0.1％硫酸铜:V(75％乙醇)=2:38溶液，现配现用。 四、实验方法 滤纸准备：选用新华1号滤纸，裁成24cm×28cm的长方形，在距纸一端2cm处用铅 笔轻轻划一基线，在线上每隔3cm，画一小点样的原点。 点样：用毛细管吸取少量氨基酸样品点于原点(分批点完)，用吹风机稍加吹干后再点 下一次，重复3次，点子直径不能超过0.5cm。 展层：将点好样的滤纸，用白线缝好，制成圆筒，原点在下端，浸立在培养皿 内，不需平衡，立即展层。展层剂为酸性溶剂系统[V(正丁醇)：V(甲酸)：V(水)=15:3:2]，把展层剂混匀

纸层析法分离氨基酸

纸层析法分离氨基酸 一、前言 1、分离氨基酸的主要方法： (1) 离子交换法，根据氨基酸是两性电解质这一特征,以及目的氨基酸与杂质氨基酸pK、pI值的差异,利用离子交换树脂对各种氨基酸吸附能力的不同对氨基酸进行分离纯化。离子交换法的分离步骤主要包括树脂的处理、装柱、平衡、加样、洗脱等步骤. 离子交换法也有自身的局限性，由于离子交换法是利用氨基酸等电点的不同，所以当两个或者多个氨基酸的等电点相近时，便无法分离，另外，氨基酸在树脂当中扩散速度较快，就要求料液的流速也相对较慢，这样自然造成了分离的缓慢，离子交换本身的生产原理也决定了反应难以连续还进行，这给工厂自动化生产带来影响，难以大规模地推广。 (2) 沉淀法，沉淀法是历史最悠久的分离纯化方法，目前仍在工业上发挥着重大的作用。氨基酸工业中常用沉淀法有等电点沉淀法，特殊试剂沉淀法和有机溶剂沉淀法。沉淀法原理是根据某些氨基酸可以与某些有机或者无机化合物结合而形成沉淀，可以利用这种性质向溶液中加入特定的沉淀剂，使目标氨基酸沉淀，与其他氨基酸分离，在分离后再将氨基酸与沉淀剂分离即可。 现在较为成熟的分离方法有精氨酸与苯甲醛在低温条件下，缩合成溶解度小的苯亚甲基精氨酸，从而析出沉淀，析出的沉淀用盐酸处理即可分离得到目标氨基酸精氨酸的盐酸盐；亮氨酸与邻-二甲苯-4-磺酸反应，可生成亮氨酸的磺酸盐。沉淀法的优点是方法简单，选择性强，但是缺点同样明显，沉淀剂回收困难，造成废液排放污染加剧。 (3) 萃取法，萃取法主要包括反应萃取法、溶剂萃取法、反向微胶团萃取、液膜萃取法等。其中，反应萃取法是选择适当的萃取剂，使萃取剂解离出来的离子与氨基酸解离出来的离子发生反应，生成可以溶于有机相的物质，从而使氨基酸从