氨基酸的纸层析
氨基酸的纸层析
引言：
纸层析是一种简单而有效的分离和检测化合物的方法，它通过利用化合物在固定相（通常是纸张）上的迁移速度差异来实现分离。氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究蛋白质的组成和性质具有重要意义。因此，氨基酸的纸层析成为了研究氨基酸的常用方法之一。
一、纸层析的原理
纸层析是一种液相分离技术，其原理基于化合物在固定相和流动相之间的分配行为。固定相通常是由纸张组成的，而流动相则是溶液。当试样溶液被加到纸上时，流动相开始向上渗透，溶解试样中的化合物。然后，随着流动相继续上升，化合物会在纸上产生不同的迁移速度，从而实现分离。
二、氨基酸的纸层析方法
氨基酸的纸层析方法通常涉及以下几个步骤：
1. 准备纸层析纸：选择适合的纸张作为固定相，常用的有滤纸和纸胶片。纸张应具有较好的吸水性和化学稳定性。
2. 制备流动相：根据需要选择合适的溶剂和缓冲液，以便溶解样品和调节pH值。
3. 样品制备：将待测氨基酸样品溶解在适当的溶剂中，并进行必要的稀释和调节pH值。
4. 上样：用毛细管或吸管将样品涂抹在纸上，通常在距离纸底端2-3厘米处。
5. 纸层析：将纸张立起放入含有流动相的容器中，使纸底端浸入溶液中，然后盖上盖子避免溶剂挥发。让溶剂上升至合适的高度，以保证分离的有效性。
6. 可视化：取出纸张，干燥后，利用适当的显色剂或检测剂将化合物可视化。常用的显色剂有尼尼醛试剂和二硝基苯胺。
7. 定量分析：通过比较样品斑点的Rf值（迁移率）和标准氨基酸的Rf值，可以对氨基酸进行定性和定量分析。
三、氨基酸纸层析的应用
氨基酸的纸层析在生物化学和生物医学领域中得到了广泛的应用。以下是一些常见的应用：
1. 氨基酸分析：通过纸层析可以快速、简便地对复杂的氨基酸混合物进行分析，包括氨基酸的组成和相对含量。
2. 蛋白质组成分析：蛋白质是由氨基酸组成的，通过纸层析可以分析蛋白质中各种氨基酸的相对含量，进而了解蛋白质的组成和结构。
3. 蛋白质纯化：纸层析可以用于蛋白质的初步纯化，通过分离出目标氨基酸，从而减少后续纯化步骤的复杂性。
4. 氨基酸代谢研究：通过纸层析可以分析体内外氨基酸的代谢产物，从而了解氨基酸的代谢途径和机制。
结论：
氨基酸的纸层析是一种简单而有效的分离和检测方法，广泛应用于氨基酸和蛋白质的分析和研究。通过纸层析，可以对氨基酸进行定性和定量分析，了解氨基酸的组成和性质。随着技术的进步，纸层析方法在氨基酸研究领域中的应用也将不断扩展和深化。
实验四-氨基酸的纸层析法
姓名：郭沈杰年级专业：2012级生物科学同组者：蔡萍萍 学号：12050011012 实验四氨基酸的纸层析法 一、实验目的 了解并掌握氨基酸纸层析法的原理和方法。 二、实验原理 以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时，水为固定相，它与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。 将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。 在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（R f值） R f=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离 混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。 氨基酸无色，利用茚三酮反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。
本实验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有精氨酸、苯丙氨酸。 三、实验仪器 1、新华滤纸 2、层析缸 3、细线 4、点样管 5、橡皮筋 6、电吹风 7、喷雾器 8、铅笔 9、直尺 四、实验试剂 1、精氨酸、苯丙氨酸、混合氨基酸（精氨酸、苯丙氨酸） 2、展层剂：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸馏水=13：3：3：1（v:v） 3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml无水丙酮，贮于棕色瓶中 五、实验步骤 1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系一根细线，在另一端2~3cm处用铅笔画一横线，在上面相同间隔画3圆点（原圈直径约5mm）。 2、取毛细管3支，分别吸取精氨酸、苯丙氨酸、氨基酸混合液少许，在原圈处点样，样点
纸层析法分离氨基酸
纸层析法分离氨基酸 一、目的 1．掌握纸层析的基本技术 2．学习用纸层析法分离、鉴定氨基酸 二、原理 纸层析是以滤纸作为支持物的分配层析法：利用不同物质在同一推动剂中具有不同的分配系数、经层析而达到分离的目的。在一定条件下，一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数，若以K表示分配系数： 层析溶剂(亦称展层剂或推动剂)是选用特定的有机溶剂和水组成的。滤纸纤维素与水有较强的亲和力(葡萄糖基的-OH基能与H2O通过氢键相互作用)，能吸附很多水分(可达22%滤纸重，其中约有6%的水与纤维素结合成复合物)，这部分被吸附的水因扩散作用降低而形成固定相。反之，展层剂中的有机溶剂与滤纸的亲和力很弱，可在滤纸的毛细管中自由流动而形成流动相。层析时，点有样品的滤纸一端浸入展层剂中，有机溶剂连续不断地通过点有样品的原点处，使其的溶质依据自身的分配系数在这两相间不断进行分配，即随着有机溶剂不断向前移动，溶质被携带到新的无溶质区并继续在两相间发生可逆的重新分配，结果使溶质离开原点不断向前移动。由于溶质中各组分的分配系数不同，导致前行中出现移动速率差异，因而通过一定时间的层析，样品中的不同组分即可实现分离。 层析中某物质的移动速率以R f值表示： 各种化合物在恒定条件下，层析时都有其一定的R f值，借此可达到定性、鉴别的目的。 应当注意的是，溶质的结构与极性、溶剂系统的物质组成与比例、pH值、滤纸质地以及层析温度和时间等因素都会影响R f值。
三、仪器试剂和材料 1．仪器、材料 干燥箱水浴锅层析缸培养皿毛细管镊子层析滤纸2．试剂 （1）6mol／L HCl （2）若干种氨基酸标准液(l mg/mL)，混合样液 （3）展层剂：正丁醇：80％甲酸：水＝15：3：2 (V/V) （4）0.5％茚三酮溶液 四、操作步骤 将层析滤纸平铺在桌面上，用直尺和铅笔在距滤纸底边2 cm处轻划一条平行于底边的直线作为基线，沿基线以一定的间隔做标记以指示各标准氨基酸样和混合样品的加样位点。 用毛细管吸取少量氨基酸样品分别点于标记的加样位点上(记录各标准样和混合样位置)。点样时毛细管口应与滤纸轻轻接触，样点直径一般控制在0.3~0.5 cm。用吹风机稍加吹干后再点下一次，重复3次，每次的样品点应完全重合。 加样完毕后将滤纸卷成圆筒状，使基线吻合，两边不搭接，用针和线将纸两边缝合。 用培养皿配制展层剂(20 ml/份)、加入适量0.5％茚三酮溶液后充分搅匀。 将点好样品的滤纸竖直放入展层剂中(基线朝下但不能浸没)，移入层析缸内，以上行法进行展层。 当溶剂前沿上升至距滤纸上端1 cm时，取出滤纸，立即用铅笔记下溶剂前沿的位置，剪断缝线后将滤纸放入烘箱，于80℃下烘干显色5 min后取出。 五、结果处理 用铅笔描出各显色斑点的形状，并用直尺度量每一显色斑点中心与原点之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，①计算各标准氨基酸样品色斑的R f值，②与标准氨基酸的R f值对照，确定混合样品中含有哪些氨基酸。 六、注意事项 1．点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面(即展层时样品可能达到的部分)。 2．点样斑点不能太大，防止层析后氨基酸斑点过度扩散和重叠，且点样后吹风温度不宜过高，以免样品变性(斑点发黄)。 3．展层开始时切勿使样品点浸入溶剂中。 4．展层剂要临用前配制，以免发生酯化，影响层析结果。 5．如果样品中溶质种类较多，且某些溶质在某一溶剂系统中的R f值十分接近时，单向层析分离效果不佳，则可采用双向层析，即将样品点在一方形滤纸的角上，先用一种溶剂系统展层。滤纸取出干燥后，再将滤纸转90度角，用另一溶剂系统展层。所得图谱分别与这两种溶剂系统中作的标准物质层析图谱对比，即可对混合物样品中各成分进行鉴定。 七、思考题 l．为什么点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面？ 2．该实验中有哪些因素可能会影响到氨基酸的层析效果？
氨基酸的纸层析法
氨基酸的纸层析法 一、实验目的 学习氨基酸纸层析法的基本原理。 掌握氨基酸纸层析的操作技术。 二、实验原理 纸层析法（paper chromatography）是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，利用样品在两种互不相容的溶剂中分配系数的不同达到分离的目的。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。 分配系数（K）=溶质在流动相中的浓度C L/溶质在固定相中的浓度C S 比移值（Rf）=从原点至层析点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离 三、实验仪器与试剂 1、实验仪器 试剂瓶、天平、通风橱、容量瓶、量筒、层析滤纸、直尺与铅笔、毛细管、 层析缸、电热吹风机、烘箱、培养皿（喷雾器） 2 、实验试剂： 10%异丙醇：量取50ml异丙醇，于500ml的容量瓶中定容。 0.01mol/L的氨基酸标准溶液： 赖氨酸标准溶液：称取赖氨酸标准品0.146g混合溶于100ml 10%异丙醇中。谷氨酸标准溶液：称取谷氨酸标准品0.147g混合溶于100ml 10%异丙醇中。脯氨酸标准溶液：称取脯氨酸标准品0.115g混合溶于100ml 10%异丙醇中。
苯丙氨酸标准溶液：称取苯丙氨酸标准品0.165g混合溶于100ml 10%异丙醇 中。 混合氨基酸标准溶液：量取赖氨酸标准溶液，谷氨酸标准溶液，脯氨酸标准溶 液，苯丙氨酸标准溶液各20ml，混匀。 层析溶剂：正丁醇：乙酸：蒸馏水=4:1:5(350ml/缸，现用现配) 0.25%茚三酮显色液：称取0.25g茚三酮，溶于100ml丙酮中。 四、试验步骤 1、滤纸的准备 取15×15cm的层析滤纸条一张，在底端2 cm处用铅笔与直尺画一横线，在此线上每隔2.5cm做一标记，记作五种氨基酸的点样位置。 2、点样 取毛细管在每个点样处精确点样，其直径约2-3nm为宜，点2-3次为佳。（大约为毛细管管长的1/4-1/3）必须在每一滴样品干后再滴第二滴，在操作过程中应戴上乳胶手套，以避免污染滤纸。 3 、层析 向层析缸缸底的培养皿中倒入层析溶剂，液层约厚1.5cm。将点好样的滤纸放入层析缸中，注意点样端朝下，盖好盖子，并用回形针将其固定。当溶剂上升至离滤纸顶端约2cm时（大约1h），立即取出并用铅笔与直尺画一条直线标出溶剂前沿的位置，再用吹风机将其吹干。 4 、显色 将层析滤纸放在盛有0.25%的茚三酮显色液的培养皿中浸润（或用喷雾器），不要超过前沿。放在60-65℃的烘箱中烘10min，即能显出各种氨基酸的色斑。 五、结果与分析
氨基酸纸层析的原理
氨基酸纸层析的原理 氨基酸纸层析的原理 1. 什么是氨基酸纸层析？ 氨基酸纸层析是一种常用于分离和检测氨基酸的方法。它基于氨基酸在纸上的运动速度差异，通过比较运动距离的迁移时间，可以间接测量氨基酸的含量。 2. 纸层析的基本原理 纸层析是一种液相分离技术，它利用了物质在移动相（纸上的溶液）和静止相（纸张）之间相互分配的差异来分离混合物。 3. 纸层析的实验步骤 •准备纸层析板：将纸层析板切成适当大小，通常是长方形。准备纸层析液：根据需要选择适当的纸层析液，通常是由溶剂，缓冲剂和染料组成的。 •预处理纸层析板：将纸层析板放在纸层析液中浸泡一段时间，使其充分吸取液体。然后取出纸层析板，自由流动余液。 •样品的制备：将待检测的氨基酸样品按要求制备成溶液。 •在纸层析板上涂样：用毛细管或微量移液枪在纸层析板上涂抹待测溶液的样品。通常在纸的一端，离开底端约 cm处进行涂样。
•开始纸层析：将涂有样品的纸层析板放在装有纸层析液的容器中，使其底端可以浸泡在液体中，但不超过液位。然后将容器盖好， 放置一段适当的时间以便过程进行。 •观察结果：当液体上升到纸上时，各组分将随液体移动，根据不同组分的迁移速度和迁移距离，可以判断不同组分在样品中的相 对含量和分离情况。 4. 氨基酸纸层析的原理 氨基酸纸层析的原理是基于氨基酸在纸层析液和纸张之间的分配 差异。在纸层析过程中，氨基酸会与纸层析液中的溶剂和纸张中的纤 维进行相互作用，并在二者之间分配。由于不同氨基酸的化学性质和 分子结构的差异，它们与纸层析液和纸张之间的分配程度也不同。 根据氨基酸与纸层析液和纸张之间相互作用程度的差异，氨基酸 会以不同的迁移速度在纸上移动。一般来说，亲水性较大的氨基酸会 更容易与纸层析液中的溶剂分配，从而以更快的速度迁移。而亲水性 较小的氨基酸则会相对较慢地在纸上迁移。 通过在纸层析过程中观察不同氨基酸的迁移距离和迁移时间，我 们可以间接测量氨基酸的含量。通过与标准溶液进行比对，并结合定 量方法，可以准确地确定样品中氨基酸的浓度。 5. 结论 氨基酸纸层析是一种简单且常用的方法，用于分离和检测氨基酸。其基本原理是依靠氨基酸在纸层析液和纸张之间的分配差异。通过观
氨基酸的分离鉴定——纸层析
氨基酸的分离鉴定——纸层析 氨基酸是构成蛋白质的基本单元，其在生物体内的作用极为重要。因此对氨基酸的分离和鉴定具有重要的研究意义。 纸层析是一种常用于分离和鉴定氨基酸的方法。其原理是利用氨基酸在纸层析板上的运动速度不同，根据氨基酸之间的相互作用，分离出各种氨基酸。 实验步骤： 1. 纸层析板的制备 将一张高分子量纸，如Whatman No.1滤纸，剪成所需要的大小，并用铅笔在纸上画出氨基酸移行的标线。 2. 氨基酸样品的制备 将所需的氨基酸样品溶解在适量的水中，浓度应为0.2-2%。 3. 样品的上样 将氨基酸溶液利用微量注射器沿着标线往上移行。 在上样后，将纸层析板放在带有盖子的玻璃罩中，罩中放置一些饱和度为70%的异丙醇-水溶液，保持相对湿度为70%，使其充分展开。 5. 鉴定氨基酸 将经过分离的氨基酸溶液阴性反应的氨基酸用二乙酰胺-丙酮混合溶液鉴定。将0.2ml 二乙酰胺-丙酮混合溶液加入几滴氨基酸样品中，加热60℃-80℃，5分钟。加入0.1ml氯仿，振荡混合，分离出上清液，上清液加入干燥瓶中，用喷雾器喷洒Ninhydrin试剂，加热于热水中1分钟，在冷水中快速降温附着氨基酸的部位呈现紫色。 注：二乙酰胺-丙酮混合溶液的组成为45%二乙酰胺，45％丙酮和10%水。 6. 结果的解释 根据氨基酸在纸层析板上的运动速度和比色反应的颜色，确定样品中的氨基酸种类及含量。 优点： 纸层析方法简便易行，无需昂贵的仪器设备，适用于小样品分析，能分离不同种类的氨基酸，并且结果清晰，操作简单。
限制： 纸层析分离结果受到氢键作用和酸碱度等因素的影响，需要控制好上样的数量和浓度。此外，纸层析无法分离胶原氨基酸和类似结构的氨基酸，且鉴定结果在颜色和色谱图谱方 面有些模糊。
氨基酸的分离鉴定--纸层析法
. 实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法 一、目的： 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 二、原理： 层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。 层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。 层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。 纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。纸层析属于分配层析法。分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。 纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。 在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。达到平衡时，这种物质在两种溶剂中的浓度之比为一个常数，即所谓的分配常数，用ａ表示）不同，使不同的氨基酸分布在滤纸的不同位置上而得到分离。 一种物质在两种溶剂中的浓度之比是一个常数，也就是分配系数（?）。 分配系数不同： 物质在溶剂I中的浓度 ???= ——————————— 1 / 4 . 中的浓度物质在溶剂IIRf值基本上是常数。某一种物质在特定的溶剂系统、纸、展层方式、温度、pH等条件下的Rf 值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、纸层析纸的质量（新华一号）和层析温度等因素有关。物质被分离后在纸层析图谱上的位置Rf：值（比移）来表示原点到层析点中心的距离 Rf = —————————————
纸层析法分离氨基酸
纸层析法分离氨基酸 一、实验目的： 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 二、实验原理： 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。层析溶剂由有机溶剂和水组成。物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用R f =原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离，在一定的条件下某 种物质的R f 值是常数。R f 值的大小与物质的结构、性质溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素 有关。 三、实验仪器、试剂和材料： 1、仪器：层析缸、毛细管、喷雾器、培养皿、层析滤纸（新华一号）。 2、试剂和材料： 扩展剂：正丁醇:88%甲酸:水=15:3:2 显色剂：0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。 氨基酸溶液：0.5%的赖氨酸、色氨酸、颉氨酸、丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液（各组分浓度均为0.5%）。 四、实验步骤： 1、将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。（放置20－30秒，盖上盖子） 2、取层析滤纸（长22cm，宽14cm）一张。在纸的一端距边缘2~3cm处用铅笔画一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号。 3、点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在不同的位置上;干后再点一次。每点在纸上扩散的直径最大不超过3毫米。 4、扩展：用线将滤纸缝成筒状（订书机），纸的两边不能接触。将盛有一定量扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，将滤纸直立于培养皿中。（滤纸不要贴住层析缸壁）（点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1cm）。当溶剂展层至距离滤纸上沿约1cm时，取出滤纸。用铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。 5、显色：用喷雾器均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液；然后置烘箱中烘烤5分钟（100o C）或用热风吹干即可显出各层析斑点。 6、计算各种氨基酸的Rf值并对Rf值按大小排序，是否与各氨基酸实际Rf值大小排序一致. 作业： 1、本实验操作过程中应注意哪些问题？ 2、影响R f值的主要因素是什么？
氨基酸的纸层析
氨基酸的纸层析 一、实验目的 1、了解纸层析法的使用原理。 2、掌握用纸层析法分离蛋白质的操作步骤。 二、实验原理 1、纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的分配层析方法，滤纸上的纤维具有羟基，是亲水基团， 滤纸吸附水作为固定相，其上流经的有机溶剂即展层剂作为流动相。当展层剂流经固定相时，固定相上的样品由于亲水、疏水能力不同，在两相之间不断分配，疏水能力强的多溶于流动相，随流动相移动距离较远，亲水能力强的移动距离则较近。 2、所有的氨基酸的α碳上均连接一个氢原子和两个亲水基团羧基（—COOH）与氨基（—NH2）， 唯一的不同则在于R基团。因此R基团在氨基酸的亲水疏水能力对比中起到了决定性的作用。本实验采用脯氨酸、甘氨酸，苯丙氨酸，组氨酸，其亲水疏水能力迥异，能在滤纸上明显分开。 分配系数K=溶质在固定相中的浓度/溶质在流动相中的浓度 3、Rf值表示原点中心至显色斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离比。在一定条件 下，Rf值为定值，其影响的因素有物质本身的性质，溶剂的性质，PH值，温度，滤纸的性质等等，本实验不予探究。在测量原点中心至显色斑点中心的距离时，由于斑点的形状不规范（近似圆形），所以，一般取斑点的重心，测量出重心与起点的距离即可。 4、显色原理：茚三酮在弱碱性溶液中与α—氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氧，脱羧反应， 最后茚三酮与反应产物——氨和还原茚三酮发生作用生成紫色物质。
三、试剂 1.酸性层析液：正丁醇：88%甲酸：水=15：3：2
氨基酸的纸层析
氨基酸的纸层析 引言： 纸层析是一种简单而有效的分离和检测化合物的方法，它通过利用化合物在固定相（通常是纸张）上的迁移速度差异来实现分离。氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究蛋白质的组成和性质具有重要意义。因此，氨基酸的纸层析成为了研究氨基酸的常用方法之一。 一、纸层析的原理 纸层析是一种液相分离技术，其原理基于化合物在固定相和流动相之间的分配行为。固定相通常是由纸张组成的，而流动相则是溶液。当试样溶液被加到纸上时，流动相开始向上渗透，溶解试样中的化合物。然后，随着流动相继续上升，化合物会在纸上产生不同的迁移速度，从而实现分离。 二、氨基酸的纸层析方法 氨基酸的纸层析方法通常涉及以下几个步骤： 1. 准备纸层析纸：选择适合的纸张作为固定相，常用的有滤纸和纸胶片。纸张应具有较好的吸水性和化学稳定性。 2. 制备流动相：根据需要选择合适的溶剂和缓冲液，以便溶解样品和调节pH值。
3. 样品制备：将待测氨基酸样品溶解在适当的溶剂中，并进行必要的稀释和调节pH值。 4. 上样：用毛细管或吸管将样品涂抹在纸上，通常在距离纸底端2-3厘米处。 5. 纸层析：将纸张立起放入含有流动相的容器中，使纸底端浸入溶液中，然后盖上盖子避免溶剂挥发。让溶剂上升至合适的高度，以保证分离的有效性。 6. 可视化：取出纸张，干燥后，利用适当的显色剂或检测剂将化合物可视化。常用的显色剂有尼尼醛试剂和二硝基苯胺。 7. 定量分析：通过比较样品斑点的Rf值（迁移率）和标准氨基酸的Rf值，可以对氨基酸进行定性和定量分析。 三、氨基酸纸层析的应用 氨基酸的纸层析在生物化学和生物医学领域中得到了广泛的应用。以下是一些常见的应用： 1. 氨基酸分析：通过纸层析可以快速、简便地对复杂的氨基酸混合物进行分析，包括氨基酸的组成和相对含量。 2. 蛋白质组成分析：蛋白质是由氨基酸组成的，通过纸层析可以分析蛋白质中各种氨基酸的相对含量，进而了解蛋白质的组成和结构。
1、氨基酸的分离鉴定--纸层析法
实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法 一、目的： 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 二、原理： 层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动 相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。 层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般 化学方法难以分离的各种化合物。如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。 层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换 层析等。 纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性 鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一 中分离分析工具。纸层析属于分配层析法。分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个 互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的 羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使 这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。当有机相沿纸流动经 过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而 进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。当有机相不断流动时，溶 质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因 而可以彼此分开。 纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。 在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。达到平衡时，这种物质在 两种溶剂中的浓度之比为一个常数，即所谓的分配常数，用ａ表示）不同，使不同的氨基酸分布在 滤纸的不同位置上而得到分离。 一种物质在两种溶剂中的浓度之比是一个常数，也就是分配系数（）。
氨基酸的测定--纸层析法
【实验目的】 1. 学习氨基酸纸层析法的基本原理 2. 掌握氨基酸纸层析的操作技术 【实验原理】 层析分离技术是利用被分离的混合物中各组分物理化学的性质（分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分以不同程度分布在两相（流动相和固定相）中，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速度移动，从而达到分离。 纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rat e of flow, Rf）来表示。所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值： 物质的移动速率以 R f 值表示： Rf=原点至层析点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离=X/ Y 在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。 【器材与试剂】 （一）器材 1. 层析缸 2. 点样毛细管 3. 小烧杯 4. 培养皿 5. 量筒 6. 喷雾器 7. 吹风机（或烘箱）8. 层析滤纸（新华一号）9. 直尺及铅笔 (二) 试剂 1. 扩展剂(水饱和的正丁醇和乙酸混合液) 2. 氨基酸溶液 3. 显色剂:茚三酮溶液 【实验步骤】 1.准备滤纸:在纸的一端距边缘2～3㎝处用铅笔划一条直线，间隔2㎝作一记号。 2.点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在标记的位置上，点样时，毛细管口应与滤纸轻轻接触，样点直径一般控制在 0.3cm 之内。用吹风机稍加吹干后再点下一次,重复2～3次。 3.扩展：层析缸中加入30ml扩展剂，将缝成筒状的滤纸直立其中,采用上行法进行展层。当溶剂前沿上升到距纸上端 1 cm 时，取出滤纸，立即用铅笔记下溶剂前沿的位置，用吹风机吹干滤纸上的溶剂。用铅笔描出溶剂前沿界线，吹干。 4.显色：滤纸表面均匀喷上茚三酮溶液，切勿喷得过多致使斑点扩散。然后将滤纸用热风吹干或置烘箱中（100℃）烘烤5min。 5.结果:用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原点之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的 R f 值，与标准氨基酸的 R f 值对照，确定混合物中含有哪些氨基酸。 计算：各种氨基酸的Rf值。 注意事项：
氨基酸的分离鉴定(纸层析法)
氨基酸的分离（纸层析法） 一、实验原理 1、层析法又称色谱法，是一种物理的分离方法。利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中，并使各组分以不同速度移动，从而得到有效的分离。 操作方式：纸层析、薄层层析、柱层析等 分离机理：分配层析、吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析等 2、纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，展层溶剂由有机溶剂和水组成。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，在滤纸上水就被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相。当有机溶剂（流动相）沿纸流动经过层析点时，层析法上溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。由于溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。由于溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。 分配系数=溶质在固定相中的浓度溶质在流动相中的浓度 物质被分离后在滤纸上的移动速率用R f值表示： R f=原点到层析点中心的距离原点到溶剂前沿的距离 只要条件（如温度、展层溶剂的组成）不变，R f值是常数，故可根据R f值作定性 依据。 氨基酸无色，利用茚三酮反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。 二、实验器材 标准氨基酸溶液、滤纸、层析缸、保鲜膜、剪刀、毛细管、电吹风。 三、实验试剂 1、酸相溶剂：V[正丁醇（A.R）]：V[88%甲酸]：V[水]=15：3：2 2、显色贮备液：V（0.4mol/L茚三酮-异丙醇）：V（甲酸）：V（水）=20：1：5 四、实验操作 1、点样 量取30mL层析溶剂、1mL显色贮备液于层析缸中，混匀密闭，静置。 戴好手套，在桌上铺好一层保鲜膜。取一张干净滤纸，将其剪彩为18cm*14cm。在纸的一端距边缘2cm处用铅笔轻轻划一条直线，在此直线上等距离分出几个点作为点样原点。 用毛细管将标准氨基酸和未知样品分别点在点样点上，每次点样后用电吹风冷风吹干再点下一次，点样点直径不超过5mm。 2、层析与显色
纸层析法分离氨基酸
纸层析法分离氨基酸 一、前言 1、分离氨基酸的主要方法： (1) 离子交换法，根据氨基酸是两性电解质这一特征,以及目的氨基酸与杂质氨基酸pK、pI值的差异,利用离子交换树脂对各种氨基酸吸附能力的不同对氨基酸进行分离纯化。离子交换法的分离步骤主要包括树脂的处理、装柱、平衡、加样、洗脱等步骤.离子交换法也有自身的局限性，由于离子交换法是利用氨基酸等电点的不同，所以当两个或者多个氨基酸的等电点相近时，便无法分离，另外，氨基酸在树脂当中扩散速度较快，就要求料液的流速也相对较慢，这样自然造成了分离的缓慢，离子交换本身的生产原理也决定了反应难以连续还进行，这给工厂自动化生产带来影响，难以大规模地推广。 (2)沉淀法，沉淀法是历史最悠久的分离纯化方法，目前仍在工业上发挥着重大的作用。氨基酸工业中常用沉淀法有等电点沉淀法，特殊试剂沉淀法和有机溶剂沉淀法。沉淀法原理是根据某些氨基酸可以与某些有机或者无机化合物结合而形成沉淀，可以利用这种性质向溶液中加入特定的沉淀剂，使目标氨基酸沉淀，与其他氨基酸分离，在分离后再将氨基酸与沉淀剂分离即可。
现在较为成熟的分离方法有精氨酸与苯甲醛在低温条件下，缩合成溶解度小的苯亚甲基精氨酸，从而析出沉淀，析出的沉淀用盐酸处理即可分离得到目标氨基酸精氨酸的盐酸盐；亮氨酸与邻-二甲苯-4-磺酸反应，可生成亮氨酸的磺酸盐。沉淀法的优点是方法简单，选择性强，但是缺点同样明显，沉淀剂回收困难，造成废液排放污染加剧。(3) 萃取法，萃取法主要包括反应萃取法、溶剂萃取法、反向微胶团萃取、液膜萃取法等。其中，反应萃取法是选择适当的萃取剂，使萃取剂解离出来的离子与氨基酸解离出来的离子发生反应，生成可以溶于有机相的物质，从而使氨基酸从水相进入有机相，进而分离氨基酸。溶剂萃取法，由于氨基酸是离子型化合物，氨基酸在物理萃取时难以高效提取的，因此常用化学发来萃取氨基酸。 (5)电透析，由于氨基酸拥有不同的等电点，故可以通过控制溶液的PH值，使氨基酸带有正负电荷，即当PH大于等电点时，带有负电荷，将氨基酸放置在电场中，会带上负电，并且移向正极，相反，PH值小于等电点时，则带上正电荷，氨基酸向负极移动。电透析主要有毛细电透析等方法，通过这种方法可以高效而精确地分离氨基酸。 2、纸层析法的优缺点： （1）优点：操作简单，便于掌握；显色均匀，便于定量和半定量分析。
氨基酸的鉴定(纸层析法)
氨基酸的鉴定(纸层析法) 1、掌握纸层析法的基本原理 2、通过对氨基酸的分离，掌握纸层析的操作方法并学会分析未知样品中的氨基酸组分。实验原理： 1、层析法又称色谱法(Chromatography)，是一种物理的分离方法。利用混合物中各组分物理化学性质的差异(如吸附办、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等)，使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中，并使各组分以不同速度移动，从而得到有效的分离。操作方式: 纸层析、薄层层析、柱层析等。分离机理: 分配层析、吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析等。 2、纸层析法是用滤纸作为情性支持物的分配层析法，展层溶剂由有机溶剂和水组成。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，在滤纸上水就被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相。当有机溶剂(流动相) 沿纸流动经过层析点时，层析点上溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。由于溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。物质被分离后在纸层析图谱上的移动速率用Rf值来表示：
3、在一定条件下，物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。 4、本实验利用纸层析法分离氨基酸，利用茚三酮反应将氨基酸层析点显色来鉴定氨基酸的种类。试剂： 1、酸性展层剂正丁醇：88%甲酸:水=15:3:2
氨基酸纸上层析
氨基酸纸上层析 【实验目的】 学习并掌握氨基酸纸上层析的原理和方法。 【基本原理】 用滤纸为支持物进行层析的方法，称为纸层析法，是一种分配层析。纸层析所用的展层溶剂大多有水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱。因此。在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。当溶剂由下向上移动，称上行法；由下向上移动，称下行法。将样品点在滤纸上（此点称为原点），进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距离不等的层析点。 溶质在滤纸上的移动速率用R f值（比移值）表示： R f = 原点到层析点中心的距离 / 原点到溶剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的R f值是常数，R f值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。因此可根据R f值作为定性的依据。本实验利用纸层析法分离氨基酸。 氨基酸为无色，利用茚三酮反应，可将氨基酸层析点显色做定性定量分析。脯氨酸颜色比较特别，为黄色，其他呈紫红色。 此实验综合了氨基酸的分类、性质和结构等知识，运用了生化实验中重要操作技术——纸层析技术对氨基酸进行分离鉴定。 【实验试剂和器材】 （一）试剂 （1）0.01mol/L的盐酸溶液 （2）氨基酸标准溶液： 取苯丙氨酸，丙氨酸，赖氨酸，谷氨酸，酪氨酸，脯氨酸，用0.01mol/L的盐酸溶液分别按1mg/mL的浓度配制。 （3）氨基酸混合液：以上各种氨基酸按0.5mg/mL的浓度配制成混合液。 （4）展层剂： V（正丁醇）：V（80%甲酸）：V（水）= 15：3：2
氨基酸纸层析法注意事项
氨基酸纸层析法注意事项 氨基酸纸层析法是一种常用的氨基酸分析方法，它利用氨基酸在纸上的移动性差异来分离和检测不同的氨基酸成分。在进行氨基酸纸层析实验时，需要注意以下几个方面的问题。 实验前应做好充分的准备工作。将所需的实验器材和试剂准备齐全，包括纸层析板、氨基酸溶液、显色剂等。同时，实验室环境应保持整洁，避免杂质的干扰。 要注意选择合适的纸层析板。通常情况下，使用常见的纸层析板即可，但如果要分析具有特殊性质的氨基酸，如相对疏水性较强的氨基酸，可能需要选择具有更好分离能力的纸层析板。 在进行纸层析实验时，要注意溶液的制备和样品的处理。氨基酸溶液的浓度应适当，过浓或过稀都会影响实验结果。另外，样品的处理也很重要，应避免样品中有杂质或其他干扰物质。 实验过程中，要注意操作的细节。将纸层析板放入溶液中前，应先用纯溶剂湿润纸层析板，避免纸层析板吸收过多的溶液。在纸层析板上滴加样品时，要控制好滴液的量，避免溶液溢出或滴液过多导致分离效果不理想。 实验过程中要注意避光。有些显色剂对光敏感，暴露在阳光下或强光下会导致显色剂的分解或失效。因此，在进行显色步骤时，要避
免阳光直射或强光照射。 实验完成后，要进行结果的解读和分析。根据显色剂的显色情况，可以判断出不同氨基酸的存在与否。但需要注意的是，显色剂的颜色可能会受到其他因素的影响，如温度、pH值等，因此要进行对照实验和结果的进一步验证。 实验结束后要做好实验台和仪器的清洗工作。将使用过的实验器材和废液进行妥善处理，保持实验室的整洁和环保。 进行氨基酸纸层析实验时，需要注意实验前的准备工作，纸层析板的选择，溶液的制备和样品的处理，操作的细节，避免光敏感显色剂的光照，结果的解读和分析，以及实验后的清洗工作。只有严格遵守这些注意事项，才能得到准确可靠的实验结果。
氨基酸的纸层析实验报告
氨基酸的纸层析实验报告 一、实验目的 本实验旨在通过纸层析法分离和检测氨基酸的混合物，并掌握纸层析 法的操作技能和实验方法。 二、实验原理 纸层析法是一种常用的分离和检测小分子化合物的方法，其原理是利 用不同物质在固定相（纸张）上运动速度不同，从而使它们在水平方 向上分离。对于氨基酸来说，它们的极性不同，因此可以通过纸层析 法进行分离。具体方法为：先将混合物溶于适当溶剂中，然后将溶液 点于纸上，待其干燥后将纸张放入含有适当移动相（如丙酮-水）的槽中，在移动相作用下，各氨基酸沿着纸张上升，并在不同位置处停留 下来形成斑点。最后通过显色或紫外线照射等方法进行检测。 三、实验步骤 1.准备工作：取一张大小适中的滤纸，在距离底部1cm处画一个横线。 2.制备样品：取苯甲酰氨基丙酸（BAP）和甘氨酸（Gly）各10mg， 加入0.1mol/L HCl中，用超声波混合溶解。 3.点样：用微量移液管在距离底部1cm处分别点上制备好的样品。 4.干燥：将纸张放在通风处晾干。 5.装置槽：取一只玻璃槽，加入适量的丙酮-水移动相（比例为7:3），
使其深度约为1cm。 6.上色：将晾干的纸张迅速放入槽中，待移动相上升至距离纸面1cm 时取出，迅速晾干并标记。 7.检测：将纸张置于紫外线灯下或进行显色处理，观察斑点位置和颜色。 四、实验结果 经过实验操作后，在紫外线灯下观察到两个斑点，分别位于距离底部 2cm和3cm左右。其中较靠近底部的斑点为苯甲酰氨基丙酸（BAP），较靠近顶部的斑点为甘氨酸（Gly）。 五、实验分析 通过本次实验可以看出，在适当条件下利用纸层析法可以有效地分离 和检测氨基酸混合物。其中，移动相的选择、样品的制备和点样的位 置等因素都会影响实验结果。此外，通过观察斑点位置和颜色可以初 步判断混合物中各种氨基酸的成分。 六、实验注意事项 1.操作时要注意安全，避免有毒有害物质接触皮肤或吸入。 2.制备样品时要保持干燥，避免水分对实验结果的影响。 3.点样时要注意位置和数量，避免斑点过多或重叠。 4.纸张晾干后不要弯曲或折叠，以免影响实验结果。 5.移动相的选择要根据具体实验需要进行调整。
实验六 氨基酸的纸层析法
氨基酸的纸层析法 一．目的 了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。 二、原理 以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。 将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。 在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（Rf值）Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。 本试验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。
三、实验仪器 1、新华滤纸 2、层析缸 3、细线 4、点样管 5、橡皮筋 6、电吹风 7、喷雾器 四、实验试剂 1、混合氨基酸（精氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸） 2、展层剂：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸馏水=13：3：3：1（v:v） 3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml无水丙酮，贮于棕色瓶中 五、实验步骤 1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系一根细线，在另一端2~3cm处用铅笔画一横线，中间画一圆点（原点）。 2、取毛细管一支(回收)，吸取氨基酸混合液，在原点处点样，样点直径不宜超过5mm,每点一次用吹风机吹干，点2~3次为佳。 3、点样后将滤纸放入层析缸中展层，注意点样线要高于层析液面，滤纸不要贴在层析缸璧上，当展层至另一端1~2cm处时，停止展层（大约2~3小时）。
实验六氨基酸地纸层析法
氨基酸的纸层析法 一．目的了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。 二、原理 以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。 将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两 相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。 在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（Rf值）Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90 度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。 本试验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。
三、实验仪器 1、新华滤纸 2、层析缸 3、细线 4、点样管 5、橡皮筋 6、电吹风 7、喷雾器 四、实验试剂 1、混合氨基酸（精氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸） 2、展层剂：正丁醇：12頰水：95临醇：蒸馏水=13: 3：3：1 （v:v） 3、0.5%茚三酮一无水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml无水丙酮，贮于棕色瓶中 五、实验步骤 1、取滤纸剪成20 X 10厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系 一根细线，在另一端2~3cm处用铅笔画一横线，中间画一圆点（原点）。 2、取毛细管一支（回收），吸取氨基酸混合液，在原点处点 样， 样点直径不宜超过5mm每点一次用吹风机吹干，点2~3次为佳。