细胞实验方案(修改版)

生科3班1组自主实验方案

外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备，染色体组型分析

一、实验目的

1、了解动物细胞培养、传代培养的方法以及培养过程中的无菌操作。掌握人体外周血淋巴细胞培养与染色体标本制备。

2、掌握细胞染色体的制备方法，掌握人类染色体G－带的显示方法及人类染色体

G－带在染色体识别中的意义。

3、熟悉人类染色体的镜下检查和核型分析方法。初步掌握人类染色体G带的特征

及其识别。

二、实验原理

所谓外周血培养即是将外周血接种在适当的培培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐溶液（一般是

0.075mol/L的KCl）处理，使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气干法制片，可获得较好的染色体。人类外周血细胞本来是终末分化细胞，一般没有分裂能力，但经PHA（植物血球凝集素）或ConA等药物刺激后，转变成可分裂的转化细胞。

染色体显带是将染色体标本经过一定程序处理，并用特定染料染色，使染色体沿其长轴显现明暗或深浅相间的横行带纹――染色体带，这种技术，称为染色体显带技术。通过显带，人们可以准确地识别每一条染色体及染色体上的各个区段，并可发现染色体上较细微的结构变化。

在所有的显带技术中，G显带（G banding）是最常见的显带技术，它是将染色体标本用碱、胰蛋白酶或其它盐溶液处理后，再用Giemsa染液染色，在普通显微镜下，可见深浅相间的带纹，称G带（G band）。G显带方法简便，带纹清晰，染色体标本可以长期保存，因此被广泛用于染色体病的诊断和研究。

正常人类染色体的数目为46条(23对)，1960年的Denver会议和1963年的London会议制定了统一的人类染色体命名体制：按照染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数，将常染色体（22对）按大小用阿拉伯数字标记，顺次排列为1～22号，性染色体用X和Y标记；并按染色体大小和着丝粒位置，把人类染色体分为七个组，用大写字母A～G表示。

染色体经显带处理后，每条染色体都显示出其特定的带纹特征（见下表）。根据这些特征，可以准确地识别每条染色体，检出染色体数目或结构畸变。

三、实验试剂与器材

试剂：

培养基：RPMI1640,含有双抗（青、链霉素）和小牛血清；小牛血清；植物血球凝集素（PHA）；秋水仙素：50ug/ml；磷酸缓冲液：1/15mol/L,ph=6.8；低渗溶液：0.075mol/L氯化钾；Carnoy固定液：甲醇：冰乙酸（3：1）；胰蛋白酶溶液；Giemsa（姬萨姆）染液；75%的酒精、

器材：

光学显微镜，离心机，恒温水浴箱，恒温箱，离心管，量简，烧杯，培养瓶，载玻片，

玻片架，注射器，碘酒和酒精棉球，酒精灯，天平，普通冰箱，立式染缸、染色架、镊子，直头小吸管、橡皮吸头、吸水纸若干，香柏油，擦镜纸，剪子，胶水。正常人类染色体G 带核型图，核型报告纸

四、实验方法

（一）培养液配制

实验室配好

（二）采血与培养：

抽取男生和女生外周静脉血2ml。常规消毒后，立即将针头插入灭菌小瓶内，送入超净工作台，在火焰旁将血液滴入2个盛有5ml培养液的培养瓶内，每瓶0.3ml，加入100ulPHA,盖上橡皮塞，轻轻摇动以混匀。贴好标签，将培养瓶放在37℃恒温箱内静置培养72h。（每天摇动培养瓶一次）

（三）秋水仙素处理:

向经恒温培养68-72小时(细胞生长到繁殖期即可)的外周血淋巴细胞培养液中加入22ul 秋水仙素，使其终浓度为0.6ug/ml,轻轻将液体摇匀，继续恒温培养3-6小时。

（四）标本的制备:

1、收集细胞：终止培养后，将培养物混匀，倒人离心管内，离心沉淀8分钟(1000r/min)，弃去上清液。

2、低渗处理：先加入1ml 0.075mol/l的kcl溶液，轻轻吹打，使细胞重悬。然后补加6ml kcl溶液，37摄氏度低渗20分钟。

3、预固定：低渗处理完毕后，直接加入新配的Carnoy固定液1 m1进行预固定，混匀后，离心8分钟(1000r/min)，去除上清液。

4、固定：沿离心管壁缓慢加入固定液6m1，轻轻吹打混匀，置室温20分钟，离心去除

上清液。

5、重复固定一次。

6、尽量吸净上清液，视管底剩下的细胞多少加入适量固定液(0.3～0.6m1)，轻轻吹打成细胞悬液。

7、滴片：沉淀物中加入0.2-0.5ml固定液，用吸管吹打使其成为细胞悬液，用镊子取预先冰冻的干净载玻片，迅速滴上2-3滴细胞悬液，立即用嘴向同一方向吹气，使细胞分散均匀，干燥

（五）染色：

1、将载玻片反扣在染色板上，使板和片之间有一缝隙，将稀释后的Giemsa染液滴在片隙中，染色20分钟，自来水冲洗，吹干。

2、镜下观察染色体分带及染色情况。

（六）染色体核型分析

1、在显微镜下找出染色体分散良好，长度适中，姐妹染色单体清楚地中期分裂相进行显拍摄

2、将显微镜拍摄的放大照片上的一个细胞的全部染色体一条一条的剪下来

3、根据染色体的长短和形态特征进行同源染色体的配对。

4、测量出每条染色体的长度，计算相对长度、着丝粒指数、臂指数，记录数据。

5、根据数量数据校正排列结果，调整。

6、将染色体按1-23号的顺序一对一对的排列，断臂向上，长臂向下，性染色体单独排列，贴成完整的染色体核型图。

五、实验结果

这里就是女生的效果明显，男生的不明显。原因多多分析

细胞毒性实验方案

细胞毒性实验设计方案 1.准备材料：DMEM(高糖)胰酶双抗(青霉素/链霉素） DAPIMTT(5mg/mL)DMSOPBS4%多聚甲醛指甲油6孔培养板96孔培养板超薄载玻片培养瓶(25mL)一包0.45μm滤膜 灭菌：50mL，10mL，5mL离心管两种枪头 2.实验方案 本实验所用的材料为载药的通过二硫键桥连透明质酸的夹心二氧化硅（SiO 2 -SS-HA/DOX），在高谷胱甘肽条件下，二硫键断裂，透明质酸脱离，同时夹心二氧化硅中药物得以释放。本实验的目的为测定透明质酸修饰的夹心二氧化 硅（SiO 2-SS-HA/DOX）的细胞毒性。实验组为SiO 2 -SS-HA/DOX、SiO 2 -SS-HA、DOX， 空白对照组为纯细胞,分别采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型和L929成纤维 细胞为正常细胞模型。 采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型，实验组为SiO 2 -SS-HA/DOX、 SiO 2 -SS-HA、DOX，空白对照组为纯细胞。培养基中含有10%(v/v)FBS和1%(w/v) 双抗(青霉素/链霉素)。配制不同浓度的SiO 2-SS-HA/DOX、SiO 2 、HA、DOX药物载 体培养基溶液。 (1).以HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型: 培养基的配置：双抗1%血清12%DMEM87% 具体操作步骤： 细胞的复活： ①将冻存于液氮中的细胞取出，迅速放入37℃温水中，使细胞快速溶解。 ②将悬浮的细胞移至离心管中，加5mL无血清培养基，1000rmp,5min离心去上清，再加5mL有血清培养基，转移至培养瓶中。（每次转移时，将之前的离心管洗涤，并用移液枪来回吸，使液体混合均匀。） ③将培养瓶放入培养箱中培养。 细胞的传代： 将0.25%的胰酶分装至小离心管中，每个管中2mL，冻存于-20℃，每次使用一管，避免反复冻融。

细胞爬片实验方案

准备：盖玻片、4%多聚甲醇、50%的甘油PBS 4%多聚甲醛溶液: 多聚甲酵40g O.lmol/L 磷酸缓冲液至1000 mL 方法:称収40g 多聚甲醛,置于三角烧瓶中,加入500-800 mL 0.1 mol/L 磷酸缓冲液, 加热持续搜拌( 或磁力搅拌) 使粉末完令溶解, 通常需滴加少许NaOH才能使溶液清亮,最后补足0.1 mol/L 的PBS至1000 mL,充分混匀。 0.1 M (pH 7.4) PBS 1 mol/L Na2HP04 77.4ml 1 mol/L NaH2P04 22.6ml 蒸馏水 加至1000 1 爬片的准备 爬片可用一般的盖玻片也可用专用爬片, 根据自己的需要剪裁成合适的大小, 以备置于6孔板、1 2孔板或24孔板; 将剪裁好的爬片, 泡酸过夜, 捞出后流水洗净, 烤干浸泡于75%酒精中备用 2 细胞爬片 用胰酶消化好细胞, 充分吹打, 使之成细胞悬液, 计数, 根据需要调整细胞到适当 密度。取无菌的细胞培养板, 先加少量培养基(以使玻片与培养板紧密接触) 。将 玻片小心从洒精中取出, 在酒精灯火焰外焰轻轻划过, 使玻片表面酒精燃烧从而起到灭菌的效果。待冷却后, 将玻片轻轻放入培养板中, 然后将单细胞悬液一逐滴的滴到上而。然后置于37°C 5%C02 的细胞培养箱屮培养。培养一定时间后培养液换为含材料的培养液继续共培养( 2ml, 100卩g ml-1 in DMEM ) 6h 后，用PBS 冲洗两遍去除未被吞噬的纳米颗粒，然后取出爬片。对于贴壁能力 较弱的细胞, 爬片前应将玻片置于细胞培养板中, 用PLL 包被至少Ih 。

3 细胞固定 爬片置于37 ° C PBS中洗三次,每次10到20秒钟,然后在4%多聚甲醛中室温固定15 分钟, 然后再用37° C PBS 将多聚甲醛冲干净, 清洗过程要注意手法轻柔, 否则细胞会从玻片上脱落。固定后的细胞爬片置于滤纸上晾干, 然后用50% 的甘油PBS溶液封片,备用。 4 共聚焦显微镜 激发690nm, 荧光在400nm 左右

细胞毒性实验方案

细胞毒性实验方案 Document number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT

细胞毒性实验设计方案 1.准备材料：DMEM(高糖)胰酶双抗(青霉素/链霉素） DAPIMTT(5mg/mL)DMSOPBS4%多聚甲醛指甲油6孔培养板96孔培养板超薄载玻片培养瓶(25mL)一包μm滤膜 灭菌：50mL，10mL，5mL离心管两种枪头 2.实验方案 本实验所用的材料为载药的通过二硫键桥连透明质酸的夹心二氧化硅（SiO2-SS-HA/DOX），在高谷胱甘肽条件下，二硫键断裂，透明质酸脱离，同时夹心二氧化硅中药物得以释放。本实验的目的为测定透明质酸修饰的夹心二氧化硅（SiO2-SS-HA/DOX）的细胞毒性。实验组为SiO2-SS-HA/DOX、SiO2-SS-HA、DOX，空白对照组为纯细胞,分别采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型和L929成纤维细胞为正常细胞模型。 采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型，实验组为SiO2-SS-HA/DOX、SiO2-SS-HA、DOX，空白对照组为纯细胞。培养基中含有10%(v/v)FBS和1%(w/v)双抗(青霉素/链霉素)。配制不同浓度的SiO2-SS-HA/DOX、SiO2、HA、DOX药物载体培养基溶液。 (1).以HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型: 培养基的配置：双抗1%血清12%DMEM87% 具体操作步骤： 细胞的复活： ①将冻存于液氮中的细胞取出，迅速放入37℃温水中，使细胞快速溶解。 ②将悬浮的细胞移至离心管中，加5mL无血清培养基，1000rmp,5min离心去上清，再加5mL有血清培养基，转移至培养瓶中。（每次转移时，将之前的离心管洗涤，并用移液枪来回吸，使液体混合均匀。） ③将培养瓶放入培养箱中培养。 细胞的传代：

细胞实验方案(修改版)

生科3班1组自主实验方案 外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备，染色体组型分析 一、实验目的 1、了解动物细胞培养、传代培养的方法以及培养过程中的无菌操作。掌握人体外周血淋巴细胞培养与染色体标本制备。 2、掌握细胞染色体的制备方法，掌握人类染色体G－带的显示方法及人类染色体 G－带在染色体识别中的意义。 3、熟悉人类染色体的镜下检查和核型分析方法。初步掌握人类染色体G带的特征 及其识别。 二、实验原理 所谓外周血培养即是将外周血接种在适当的培培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐溶液（一般是 0.075mol/L的KCl）处理，使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气干法制片，可获得较好的染色体。人类外周血细胞本来是终末分化细胞，一般没有分裂能力，但经PHA（植物血球凝集素）或ConA等药物刺激后，转变成可分裂的转化细胞。 染色体显带是将染色体标本经过一定程序处理，并用特定染料染色，使染色体沿其长轴显现明暗或深浅相间的横行带纹――染色体带，这种技术，称为染色体显带技术。通过显带，人们可以准确地识别每一条染色体及染色体上的各个区段，并可发现染色体上较细微的结构变化。 在所有的显带技术中，G显带（G banding）是最常见的显带技术，它是将染色体标本用碱、胰蛋白酶或其它盐溶液处理后，再用Giemsa染液染色，在普通显微镜下，可见深浅相间的带纹，称G带（G band）。G显带方法简便，带纹清晰，染色体标本可以长期保存，因此被广泛用于染色体病的诊断和研究。 正常人类染色体的数目为46条(23对)，1960年的Denver会议和1963年的London会议制定了统一的人类染色体命名体制：按照染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数，将常染色体（22对）按大小用阿拉伯数字标记，顺次排列为1～22号，性染色体用X和Y标记；并按染色体大小和着丝粒位置，把人类染色体分为七个组，用大写字母A～G表示。 染色体经显带处理后，每条染色体都显示出其特定的带纹特征（见下表）。根据这些特征，可以准确地识别每条染色体，检出染色体数目或结构畸变。

关于细胞分化的实验方案

实验方案： 1.细胞培养 取2010年10月OVX手术大鼠股骨胫骨，Hank’s溶液冲洗骨髓腔，细胞悬液于细胞培养瓶中培养。7d后第一次换液，之后2-3d换液，待细胞生长至80%-90%密度传代P1。 继续培养传代P2代时铺12孔板，每孔细胞量：1.5×104个，共5块板，分别为5个时间点：3d、7d、10d、14d、21d。DMEM培养24h后，更换条件培养基，每2-3天换液。 2.AKP检测：3d、7d、10d （1）AKP染色 ①吸去孔板培养液，轻轻用PBS洗三次 ②细胞在4%多聚甲醛中固定10-15分钟 ③PBS简单冲洗后，用CAKP染色试剂盒染色，步骤按照说明书 （2）ALP半定量 ①去孔板培养液，轻轻用PBS洗三次 ②用细胞裂解液裂解细胞，4℃下裂解半小时，0.1%Triton X-100细胞裂解液 ③4℃下超声破碎15s后，于4℃下5000g离心3-4分钟，取上清 ④ALP检测试剂盒检测ALP表达水平，步骤按照说明书 3.成骨相关基因表达检测：3d、7d、10d、14d、21d 5个时间点细胞分别用Trizol裂解，提取RNA后反转为cDNA，PCR检测Runx2、OC、BMP-2、ColI基因表达，并可用qPCR定量比较基因不同时期表达量变化。 4.矿化结节检测：21d如需必要 ①移去培养液，PBS简单冲洗 ②将细胞于4℃下，用95%的冰冻乙醇固定10min ③移去乙醇，用PBS冲洗后，37℃下用Alizarinred (0.1%Tris-HCI，pH8.3) 染液染色3min ④用蒸馏水冲洗数次，再用PBS洗15min，最后拍照。 5.细胞计数，每个时间点进行细胞计数，检测细胞生长状态。 6.每日观察细胞形态，后期必要时及时终止实验。

细胞毒性实验方案【可编辑范本】

细胞毒性实验设计方案 1.准备材料: DＭＥM（高糖)胰酶双抗（青霉素/链霉素)DAPI MTT（5m ｇ/ｍＬ) DＭSＯ PBS 4％多聚甲醛指甲油6孔培养板 9６孔培养板超薄载玻片培养瓶(25ｍL）一包0。４5μｍ滤膜 灭菌: 50mＬ,1０mL,5mL离心管两种枪头 2．实验方案 本实验所用的材料为载药的通过二硫键桥连透明质酸的夹心二氧化硅(SiＯ2 －ＳＳ－HＡ/DOX)，在高谷胱甘肽条件下,二硫键断裂，透明质酸脱离,同时夹心二氧化硅中药物得以释放.本实验的目的为测定透明质酸修饰的夹心二氧化硅 （SiO 2—SS-HA／DOX）的细胞毒性。实验组为SｉO 2 -ＳS—HA/DＯX、SｉO ２ —SS －HA、DOX，空白对照组为纯细胞，分别采用HeｐＧ2人肝癌细胞为肿瘤细胞模 型和L９2９成纤维细胞为正常细胞模型。 采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型，实验组为SiＯ ２ —SS-ＨA/ＤOX、S ｉＯ 2 —ＳS—HA、DOX,空白对照组为纯细胞。培养基中含有1０% （v／v) FBＳ 和１% (w/ｖ) 双抗(青霉素/链霉素)。配制不同浓度的ＳiO 2 —ＳＳ—HA/DOＸ、 ＳiＯ 2 、HA、DOX药物载体培养基溶液。 （１）。以HｅpＧ2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型: 培养基的配置:双抗 1％血清１2% ＤMEＭ87% 具体操作步骤: 细胞的复活: ①将冻存于液氮中的细胞取出,迅速放入37℃温水中,使细胞快速溶解。 ②将悬浮的细胞移至离心管中，加5ｍL无血清培养基,1000rmp,5ｍｉn离心去上清，再加5mL有血清培养基,转移至培养瓶中。（每次转移时,将之前的离心管洗涤,并用移液枪来回吸，使液体混合均匀。) ③将培养瓶放入培养箱中培养。 细胞的传代: 将0．25%的胰酶分装至小离心管中,每个管中2mＬ,冻存于-２0℃,每次使用一管,避免反复冻融。 ①将培养瓶从培养箱中取出，盖子旋紧,喷7５%的酒精放入超净台． ②将培养液倒入废液缸,残留培养基用吸管吸干净，操作完成后,培养瓶口用

细胞学实验设计

细胞生物学实验设计方案—— 不同温度对细胞活性的影响 实验目的： 1、验证细胞培养过程中温度对细胞活性的影响 2、学会使用MTT法检测细胞活性。 实验原理： 四唑盐比色实验（MTT法）是一种检测细胞存活和生长的方法。实验所用显色试剂四唑盐（MTT）是一种能接受氢原子的染料。MTT可作为哺乳类动物细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有活细胞存在时，线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成紫蓝色的晶状甲瓒(Formazan)，将结晶的甲瓒溶解释放，再用酶联免疫检测仪测定吸光度OD值，OD值的高低可间接反映活细胞的数量及其活性。活细胞多则吸光度大，反之则吸光度小，从而反映出细胞的存活及增殖情况。由此可通过检测在不同温度细胞的活性变化，从而验证细胞培养过程中温度对细胞活性的影响。 实验器材： 1、实验仪器：96孔培养板(单层生长的细胞选用平底型培养板，悬浮生长的细胞选用圆底型培养板)、移液器、吸管、离心管、血球计数板、孵箱、显微镜、振荡混合仪、酶联免疫检测仪、离心机 2、实验试剂：MTT溶液（称取250mg MTT，放入小烧杯中，加50ml 0．01mol ／L，pH7．4的PBS，在电磁力搅拌机上搅拌30min，用0.22um的微孔滤器除菌，分装，4℃保存。两周内有效。）、含l0％胎牛血清RPM1640培养液、0.25％胰蛋白酶消化液、二甲基亚砜(DMSO) 实验步骤： 1、接种细胞：用0.25％胰蛋白酶消化单层培养细胞，再用含10％胎牛血清的RPMl604培养液配成单个细胞悬液，以每孔100－1000个细胞接种于2个96孔培养板中，每孔体积200ul。 2、培养细胞：将培养板1移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO2及湿度条件下，培养3—5天。将培养板2移入CO2孵箱中，在25℃、5％CO2及湿度条件下，培养3—5天。将培养板1移入CO2孵箱中，在42℃、5％CO2及湿度条件下，培养3—5天。 3、呈色：培养第2—5天后，每孔加入MTT溶液(5mg／m1)20ul，对应温度下继续孵育4h，终止培养，小心吸去孔内培养上清液；对悬浮生长的细胞，

[细胞毒性实验]细胞毒性实验原理[修改版]

下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5 个，否则难以反应真实情况 3.5%co2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。 4.每孔加入20ulmtt溶液（5mg/ml，即0.5%mtt），继续培养4h。若药物与mtt 能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用pbs冲2-3遍后，再加入含mtt的培养液。 5.终止培养，小心吸去孔内培养液。 6.每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪od490nm处测量各孔的吸光值。 7.同时设置调零孔（培养基、mtt、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、mtt、二甲基亚砜） 悬浮细胞： 1）收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml，按次序将①补足的1640（无血清）培养基40ul ；②加actinomycin d（有毒性）10ul用培养液稀释 l?g/ml，需预试寻找最佳稀释度，1:10-1:20)；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）。每板设对 照（加100?(储存液100 1640）。 2）置37℃，5%co2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

3）每孔加入10 ul mtt溶液（5 mg/ml，即0.5%mtt），继续培养4 h。（悬浮细胞推荐使用wst-1，培养4 h后可跳过步骤4），直接酶联免疫检测仪od570nm （630nm校准）测量各孔的吸光值） 4）离心（1000转x10min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪od570nm（630nm 校准）测量各孔的吸光值。 5）同时设置调零孔（培养基、mtt、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、mtt、二甲基亚砜），每组设定3复孔。 （三）mtt的配制 mtt一般最好现用现配，过滤后4oc避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把mtt粉分装在ep管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当mtt变为灰绿色时就绝对不能再用了。 液器比移液管精确得多，但是如果操作不熟，cv会在8%左右。另外，吹散次数过多也会影响细胞活力。所以要熟练些、快些上板。 首先说说我的一点经验： 1.吹打时悬液总量不能太多，达到吸管吸液量的3到4倍，可能比较容易混匀。

细胞毒性实验方案

细胞毒性实验设计方案之杨若古兰创 作 1.筹办材料：DMEM(高糖)胰酶双抗(青霉素/链霉素）DAPI MTT(5mg/mL) DMSO PBS 4%多聚甲醛指甲油6孔培养板96孔培养板超薄载玻片培养瓶(25mL)一包0.45μm滤膜 灭菌： 50mL，10mL，5mL离心管两种枪头 本实验所用的材料为载药的通过二硫键桥连透明质酸的夹心二氧化硅（SiO2-SS-HA/DOX），在高谷胱甘肽条件下，二硫键断裂，透明质酸离开，同时夹心二氧化硅中药物得以释放.本实验的目的为测定透明质酸润色的夹心二氧化硅（SiO2-SS-HA/DOX）的细胞毒性.实验组为SiO2-SS-HA/DOX、SiO2-SS-HA、DOX，空白对照组为纯细胞,分别采取HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型和L929成纤维细胞为正常细胞模型. 采取HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型，实验组为SiO2-SS-HA/DOX、SiO2-SS-HA、DOX，空白对照组为纯细胞.培养基中含有10% (v/v) FBS和1% (w/v) 双抗(青霉素/链霉素).配制分歧浓度的SiO2-SS-HA/DOX、SiO2、HA、DOX 药物载体培养基溶液.

(1).以HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型: 培养基的配置：双抗 1% 血清12% DMEM 87% 具体操纵步调： 细胞的复活： ①将冻存于液氮中的细胞取出，敏捷放入37℃温水中，使细胞快速溶解. ②将悬浮的细胞移至离心管中，加5mL无血清培养基，1000rmp,5min离心去上清，再加5mL有血清培养基，转移至培养瓶中.（每次转移时，将之前的离心管洗濯，并用移液枪来回吸，使液体混合均匀.） ③将培养瓶放入培养箱中培养. 细胞的传代： 将0.25%的胰酶分装至小离心管中，每个管中2mL，冻存于-20℃，每次使用一管，防止反复冻融. ①将培养瓶从培养箱中取出，盖子旋紧，喷75%的酒精放入超净台. ②将培养液倒入废液缸，残留培养基用吸管吸干净，操纵完成后，培养瓶口用火烧. ③加入2mL胰酶将瓶底铺满，消化2-3min，于显微镜下观察细胞形状，呈圆形，即消化终了，加入2mL 12%

细胞实验方案

细胞实验方案 细胞实验是生物学研究中不可或缺的一部分，可以帮助科学家 们更好地理解生物的基本组成和功能。在进行细胞实验时，科学 家们需要设计合理的实验方案，以确保实验结果的准确性和可重 复性。本文将探讨细胞实验方案的一些重要考虑因素，并提供一 些建议，以帮助研究者设计优秀的细胞实验方案。 实验目的的明确是设计一个成功的细胞实验方案的关键要素之一。在开始设计方案之前，科学家们需要明确他们的研究目的是 什么。例如，是想研究某个基因在细胞中的表达及其功能，还是 想了解某种药物对细胞生长的影响等等。通过明确实验目的，研 究者们可以更好地选择适合的实验方法和技术，并制定相关的实 验步骤。 接下来，在实验设计中需要考虑的一个重要因素是细胞系的选择。不同类型的细胞系有着各自的特点和适用范围。在选择细胞 系时，研究者们应考虑实验目的和研究对象的特点，选择合适的 细胞系。例如，如果研究目标是细胞分裂过程中的某种信号通路，可能需要选择具有较高细胞分裂率的细胞系。此外，细胞系来源 的重要性也不容忽视。对于某些研究，来自人类体内的细胞可能 会更具代表性和应用价值。

实验条件的控制也是一个重要的考虑因素。为了保证实验结果 的可靠性，研究者们需要控制实验条件的一致性。例如，温度、 湿度和培养基的配方等实验条件应保持相对稳定。另外，实验室 操作过程中的严谨性也是确保实验结果准确的重要因素。研究者 们应遵守实验操作规程，确保操作的标准化和规范化。 实验方法和技术的选择是设计细胞实验方案时需要认真考虑的 一点。现如今，存在多种多样的实验方法和技术可供选择。例如，RNA干扰技术可用于研究基因表达的沉默，蛋白质组学技术可用 于分析蛋白质的组成和功能等等。研究者们应根据实验目的和研 究对象的特点，选择适合的实验方法和技术。此外，合适的阳性 和阴性对照实验也是设计细胞实验时需要考虑的一点，以确保实 验结果的正确性。 在细胞实验方案中，实验数据的处理和分析是不可或缺的一步。在开始实验之前，科学家们应了解并掌握适用于实验数据处理和 分析的方法和工具。这些方法和工具可以帮助研究者们从实验数 据中提取有用的信息，并帮助他们对实验结果进行解释和判断。 此外，实验数据的记录也是一个重要的环节，研究者们应确保实 验数据的准确性和可追溯性。

细胞毒性试验方案

精品文档 细胞毒性实验设计方案 1.准备材料： DMEM(高糖) 胰酶双抗(青霉素/链霉素） DAPI MTT(5mg/mL) DMSO PBS 4%多聚甲醛指甲油 6孔培养板 96孔培养板超薄载玻片培养瓶(25mL) 一包0.45滤膜mμ灭菌： 50mL， 10mL，5mL离心管两种枪头 2.实验方案 本实验所用的材料为载药的通过二硫键桥连透明质酸的夹心二氧化硅 （SiO-SS-HA/DOX），在高谷胱甘肽条件下，二硫键断裂，透明质酸脱离，同时2夹心二氧化硅中药物得以释放。本实验的目的为测定透明质酸修饰的夹心二氧化硅（SiO-SS-HA/DOX）的细胞毒性。实验组为SiO-SS-HA/DOX、SiO-SS-HA、DOX， 222空白对照组为纯细胞,分别采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型和L929成纤维细胞为正常细胞模型。 采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型，实验组为SiO-SS-HA/DOX、2SiO-SS-HA、DOX，空白对照组为纯细胞。培养基中含有10% (v/v) FBS和1% (w/v) 2双抗(青霉素/链霉素)。配制不同浓度的SiO-SS-HA/DOX、SiO、HA、DOX药物载22体培养基溶液。 (1).以HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型: 培养基的配置：双抗 1% 血清12% DMEM 87% 具体操作步骤： 细胞的复活： ①将冻存于液氮中的细胞取出，迅速放入37℃温水中，使细胞快速溶解。 ②将悬浮的细胞移至离心管中，加5mL无血清培养基，1000rmp,5min离心去上清，再加5mL有血清培养基，转移至培养瓶中。（每次转移时，将之前的离心管洗涤，并用移液枪来回吸，使液体混合均匀。） ③将培养瓶放入培养箱中培养。 细胞的传代： 将0.25%的胰酶分装至小离心管中，每个管中2mL，冻存于-20℃，每次使用一管，避免反复冻融。 ①将培养瓶从培养箱中取出，盖子旋紧，喷75%的酒精放入超净台。 ②将培养液倒入废液缸，残留培养基用吸管吸干净，操作完成后，培养瓶口. 精品文档 用火烧。 ③加入2mL胰酶将瓶底铺满，消化2-3min，于显微镜下观察细胞形态，呈圆形，即消化完毕，加入2mL 12% DMEM终止消化，用枪吹打，使细胞悬浮。 ④将细胞悬浮液移入10mL离心管中，1000rmp,5min,离心。 ⑤迅速倒掉上清，加入6mLDMEM培养基，分装至两个培养瓶中，再各加入2mLDMEM，至5mL，于37℃，5%的CO培养箱中培养48h。2⑥下一次传代步骤同①-⑤。 细胞存活率测定方法（布板，加样）： ①同传代步骤①-④。 ②给每个离心管中加入定量的培养基，并用移液枪来回吸，使液体混合均匀，将所有含有细胞的培养基转移到一个50mL离心管中，最终使液体体积为30mL。

细胞工程实验方案设计

细胞工程实验方案 设计题目：小鼠肝脏上皮细胞系的建立设计者：班级生物1101 姓名刘鑫 20113085 指导教师：*** 日期： 2013年11月11日 西南科技大学 生命科学与工程学院

目录一、基本原理 （一）基本概念 （二）细胞冻存及复苏原理 二、操作器材、设备及灭菌处理 （一）准备室的设备 （二）配液室的设备 （三）培养室的设备 （四）细胞培养用液的配制器材与试剂 （五）灭菌操作 三、基本用液的配置 （一）水的制备 （二）PBS的制备与消毒 （三）胰蛋白酶溶液的配制与消毒 （四）血清的灭活 四、实验步骤 （一）传代前准备工作 （二）取材 （三）原代培养 （四）传代培养 （五）细胞纯化 （六）细胞系的建立 （七）细胞冻存 （八）冻存细胞的复苏 五、实验记录及基本注意事项 （一）基本注意事项 （二）实验记录

小鼠肝脏上皮细胞系的建立 动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。这个实验方案就是选取小鼠肝脏上皮利用动物细胞培养技术建立细胞系。 一、基本原理 （一）基本概念 1、原代培养（primary culture） 直接从有机体中取出的细胞、组织或器官开始进行体外培养直到第一次传代为止。这种培养称之为原代培养。 2、传代培养（subculture） 细胞从一个培养皿以1：2或1：2以上的比率转移或移植到另一个器皿的培养，这种培养称之为传代培养。 （二）细胞冻存及复苏原理 在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。 细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的－5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。 二、操作器材、设备及灭菌处理 （一）准备室的设备： 双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品柜（放置消毒过的物品）、包装台。 （二）配液室的设备： 扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。 （三）培养室的设备：

细胞生物学实验--设计性实验方案--二组

设计性实验方案 课程名称细胞生物学 题目名称 DNA的原位显示 专业生物科学 学号 学生姓名 指导教师 时间 邯郸学院生命科学与工程学院

说明 一、实验设计的目的 实验设计是培养学生综合运用所学知识与技能，初步训练学生获得分析和解决实际问题的能力的实践性教学环节之一。通过实验设计培养学生运用所学知识设计课题的能力，为毕业论文的开展，以及今后从事生产、教学、科研等相关工作打下坚实基础。 二、实验设计的要求 1、以小组为单位，提出与专业、课程有关的课程设计题目。命题要求既有代表性，又有实际意义。 2、设计应包括以下几个部分构成： （1）研究的目的与意义。应说明此项研究在生产实践上或对某些技术进行改革带来的经济、生态与社会效益。有的课题过去曾进行过，但缺乏研究，现在可以在理论上做些探讨，说明其对科学发展的意义。 （2）国内外同类研究的概况综述。在广泛查阅有关文献后，对该类课题研究已取得的成就与尚存在的问题进行简要综述并提出自己对一些问题的看法。 （3）课题研究方案：包括研究内容、研究方法和技术路线。研究内容要重点突出；研究方法要具有科学性、先进性；技术路线有清晰。 （4）研究的预期结果和创新性。 3、格式要求 （1）表格内容，字号用小4号，中文字体用宋体，英文字体、数字用Times New Roman； （2）正文字数1500字以上。 4、内容要求 （1）立题依据充分（实验目的明确、意义定位准确，对拟解决的问题有合理预测，对国内外研究现状阐述全面）； （2）研究方案（包括实验的技术路线、实验的进程安排、具体操作过程、设立的实验指标和指标的检测手段）可操作性强； （3）实验结果的记录及分析方法可行性强； （4）对实验中可能发生的问题有正确预测并提出相应的解决方法； （5）经费预算合理； （6）附有5篇以上主要参考文献。 三、实验设计题目（自拟）

实验方案细胞表型检测

细胞表型检测 1 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 供试品 名称：人胎盘间充质干细胞、猴胎盘间充质干细胞的P4、P6、P8细胞1.1.2 主要试剂 B液自配天津昂赛细胞基因工程有限公司 D液自配天津昂赛细胞基因工程有限公司 血清新西兰胎牛血清(特级) 上海依科赛生物制品有限公司 IgG-FITC BD公司货号：555748 CD19-FITC BD公司货号：555412 CD34-FITC BD公司货号：555821 CD44- FITC BD公司货号： CD31- FITC BD公司货号： IgG-PE BD公司货号：555749 CD11b-PE BD公司货号：555483 CD45-PE BD公司货号：555388 CD73-PE BD公司货号：550257 CD90-PE BD公司货号：555596 CD105-PE Serotec公司货号：MCA1557PE HLA-DR-PE BD公司货号：555812 CD29-PE BD公司货号： 1.1.3 主要仪器 CO2培养箱 离心机 超净工作台 显微镜

1.1.4 主要耗材 50ml离心管、5ml/10ml移液管、1.5ml EP管。 1.1.5 实验设计依据 通过传代培养，我们可以得到相对纯的间充质干细胞，参考国际细胞治疗协会提出的间充质干细胞表型方面的标准，CD73、CD90和CD105阳性率不低于95％；CD45、CD34、CD11b、CD19 和HLA-DR阳性率不高于2％[1]。检测在传代过程中的细胞的表型是否会发生变化。我们设计检测P4代、P6和P8代细胞表型。1.2 实验方法 1.2.1细胞消化 1、将原培养液倒净,用移液管取D液10ml冲洗细胞，倒净,此操作重复洗2 次； 2、用移液管吸取加入B液2ml,盖上培养瓶盖子,摇晃使B液均匀覆盖瓶底,待细胞从培养壁脱落下来； 3、用移液管吸取加入C液0.5ml, 终止消化，再加D液10ml，吹打细胞制成细胞悬液，将细胞悬液收集至离心管中； 1.2.2 流式检测方法 1、收集细胞，1000rpm离心5min，用D液洗一次，过滤； 2、用适量D液将细胞重悬，100μl每管分装到1.5mlEP管中，每管细胞不少于用1×105，在每管中加入4μl要检测表型的抗体,室温避光放置30min；加入1mlD液混匀，离心弃上清，再用1mlD液混匀，离心弃上清，每管加入 350-500μl D液重悬，移入流式管待测即可； 3、用流式细胞仪检测荧光值,每管计数3000-10000个细胞； 4、分析数据。 1.3 C6操作步骤 （一）开机 1、启动控制计算机，进入软件，此时信号灯为红灯，显示还没有与C6连接。 2、检查四个液体容器，如有需要，则先充满液体或清空废液。

细胞实验方案

HALA细胞工程实验培养方案 背景知识：Hela Cells是细胞学与医学研究中使用的一种细胞，源自一位美国妇女海莉耶塔·拉克斯（Henrietta Lacks）的子宫颈癌细胞的细胞系。这名美国妇女在1951年死于该癌症。为了让拉克斯保持匿名，此细胞株原宣称是依“Helen Lane”命名。HeLa细胞系被视为“不死的”（即不同于其他一般的人类细胞，此细胞株不会衰老致死，并可以无限分裂下去），至今都被不间断的培养。此细胞系跟其他癌细胞相比，增殖异常迅速。海拉细胞系被George Gey分送给众研究单位（并未通知拉克斯本人也未得到她的许可），并用作癌症模式细胞研究。HeLa细胞系也被用作研究细胞信号传导。海拉细胞系是被人类乳突病毒第18型转化的，和正常子宫颈细胞有许多不同。已证实海拉细胞系难以控制。此细胞系有时会污染同一实验室的其他细胞培养物，干扰生物学的研究。污染程度难以估计，因为研究人员很少检定已确立细胞系的本质和纯度。据说有相当数目的体外细胞系其实就是HeLa细胞系，因为原先的细胞株已被快速增殖的HeLa细胞系污染物取代了。 实验原理： (1)细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。 (2)体外培养过程中，随着培养时间的延长，细胞的分裂繁殖，培养物越来越大长满培养空间并因接触抑制而生长缓慢，此时须将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器

细胞毒性实验方案

细胞毒性实验设计方案 1.准备材料： DMEM(高糖) 胰酶双抗(青霉素/链霉素） DAPI MTT(5mg/mL) DMSO PBS 4%多聚甲醛指甲油 6 孔培养板 96孔培养板超薄载玻片培养瓶(25mL) 一包 0.45μm滤膜 灭菌： 50mL，10mL，5mL离心管两种枪头 2.实验方案 本实验所用的材料为载药的通过二硫键桥连透明质酸的夹心二 氧化硅（SiO2-SS-HA/DOX），在高谷胱甘肽条件下，二硫键断裂，透 明质酸脱离，同时夹心二氧化硅中药物得以释放。本实验的目的为测 定透明质酸修饰的夹心二氧化硅（SiO2-SS-HA/DOX）的细胞毒性。实 验组为SiO2-SS-HA/DOX、SiO2-SS-HA、DOX，空白对照组为纯细胞, 分别采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型和L929成纤维细胞为正 常细胞模型。 采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型，实验组为 SiO2-SS-HA/DOX、SiO2-SS-HA、DOX，空白对照组为纯细胞。培养基 中含有10% (v/v) FBS和1% (w/v) 双抗(青霉素/链霉素)。配制不 同浓度的SiO2-SS-HA/DOX、SiO2、HA、DOX药物载体培养基溶液。 (1).以HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型: 培养基的配置：双抗 1% 血清12% DMEM 87% 具体操作步骤： 细胞的复活： ①将冻存于液氮中的细胞取出，迅速放入37℃温水中，使细胞快速溶解。 ②将悬浮的细胞移至离心管中，加5mL无血清培养基，1000rmp,5min离心

去上清，再加5mL有血清培养基，转移至培养瓶中。（每次转移时，将之前的离心管洗涤，并用移液枪来回吸，使液体混合均匀。） ③将培养瓶放入培养箱中培养。 细胞的传代： 将0.25%的胰酶分装至小离心管中，每个管中2mL，冻存于-20℃，每次使用一管，避免反复冻融。 ①将培养瓶从培养箱中取出，盖子旋紧，喷75%的酒精放入超净台。 ②将培养液倒入废液缸，残留培养基用吸管吸干净，操作完成后，培养瓶口用火烧。 ③加入2mL胰酶将瓶底铺满，消化2-3min，于显微镜下观察细胞形态，呈圆形，即消化完毕，加入2mL 12% DMEM终止消化，用枪吹打，使细胞悬浮。 ④将细胞悬浮液移入10mL离心管中，1000rmp,5min,离心。 ⑤迅速倒掉上清，加入6mLDMEM培养基，分装至两个培养瓶中，再各加入 培养箱中培养48h。 2mLDMEM，至5mL，于37℃，5%的CO 2 ⑥下一次传代步骤同①-⑤。 细胞存活率测定方法（布板，加样）： ①同传代步骤①-④。 ②给每个离心管中加入定量的培养基，并用移液枪来回吸，使液体混合均匀，将所有含有细胞的培养基转移到一个50mL离心管中，最终使液体体积为30mL。 ③96孔板中每个浓度设计5个复孔，每块板设一组空白调零孔，内加培养液，不含细胞与药物，一组空白对照组，只加培养基和细胞，不加药物。除过空白调零孔，每孔加入100μL含细胞的培养基。将孔板放入培养箱中，培养箱 ，温度保持在37℃，培养22小时。 保持一定的湿度，5% (v/v) CO 2 ④将0.03g谷胱甘肽加入到10mL培养基，充分溶解，浓度为0.003g/mL,取2微升的0.003g/mL谷胱甘肽溶液加入到10mL的培养基中，将这两个浓度含谷胱甘肽的培养基替换部分原来的培养基，作为对照，不需要加谷胱甘肽的孔 ，换上新鲜培养基，将孔板放入培养箱中，培养箱保持一定的湿度，5% (v/v) CO 2温度保持在37℃，培养2小时，具体的加样孔见图一。 ⑤将1.2mg的SiO -SS-HA/DOX样品溶到3mL的培养基中，分成两份，其中 2