沙门菌检查法

沙门菌检查法

1 简述

沙门菌属是肠杆菌科的重要致病菌，按Bergey系统细菌学手册第一卷（1984），沙门菌分5个亚属。2003年出版的第八版的临床微生物手册将沙门菌属分成两个菌种即肠炎沙门菌和乍得沙门菌，其中肠炎沙门菌分6个亚种，包括常见的伤寒、甲型副伤寒、乙型副伤寒、丙型副伤寒、，鼠伤寒，猪霍乱等沙门菌杂内，迄今已发现2501个血清型。O抗原抗血清A-E群包含了沙门菌分离株的95%，所以常用沙门菌A-F O多价血清进行沙门菌初筛试验。药品中的沙门菌，是以鉴定沙门菌属为准，即对没10g（或10ml）药品中是否检出沙门菌作出检验报告。

由于沙门菌血清型繁多，各血清型的生化及血清学特性虽密切相关，却不尽相同，采用一种增菌培养基和两种分离培养基，不可能涵盖所有沙门菌的最适增菌及分离条件。

此外，由于药品在生产过程中，常受到加热、干燥等加工步骤的影响，药品中污染的沙门菌可受到损伤或呈休眠状态，故须在增菌培养前先进行预增菌。然后再进行增菌及分离、三糖铁琼脂初步鉴别、生化试验、血清学试验等步骤。

2 仪器、设备及用具（见大肠埃希菌2）。

3 试液指示液（参见大肠埃希菌3）

3.1 无菌脲试液[附录2.5]。

3.2 酚磺酞指示液[附录

4.4]。

3.3 亮绿试液[附录2.9]。

3.4 氰化钾试液[附录2.14]。

3.5溴甲酚紫指示液[附录

4.5]。

3.6 革兰染色液[附录2.4，2.10，2.16]。

3.7 沙门菌属A-F“O”多价血清（即O多价1）生物制品研究所供应。

4 培养基

4.1 营养琼脂培养基[附录

5.2]。

4.2 营养肉汤培养基[附录

5.1]。

4.3 半固体营养琼脂培养基[附录

5.3]。

4.4 曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）[附录

5.8]。

4.5 麦康凯琼脂培养基（MacC）[附录

5.9]。

4.6 四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）[附录

5.11]。

4.7 三糖铁琼脂培养基（TSI）[附录

5.10]。

4.8 胆盐硫乳琼脂培养基（DHL）[附录

5.13]。

4.9 沙门菌属志贺菌属琼脂培养基（SS）[附录

5.12]。

4.10 蛋白胨水培养基[附录

5.18]。

4.11 脲（尿素）琼脂培养基[附录

5.23]。

4.12 氰化钾培养基[附录

5.24]。

4.13 赖氨酸脱羧酶培养基[附录

5.25]。

5 对照用菌液

取乙型副伤寒沙门菌[CMCC（B）50094]是营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基内，36℃±1℃培养18～24h后，用0.9%

无菌氯化钠溶液稀释至1:106（浓度相当于50～100cfu/0.1ml），作阳性对照用菌液。其菌液浓度可用平板菌落计数法测得。即取0.1ml 加入平皿内，倾注营养琼脂，混匀，或以0.1ml均匀涂布于事先准备好的营养琼脂平板上，经培养后点计求得。

6 操作方法

6.1 准备工作：（见细菌、霉菌和酵母菌计数6）。

6.2 供试液的制备：（见细菌、霉菌和酵母菌计数7）。

含抑菌成分供试品供试液的制备：（见大肠埃希菌6.2）。

6.3 阳性对照实验、阴性对照实验（见大肠埃希菌

7.1）。

6.4 增菌培养

6.4.1 预增菌取营养肉汤培养基2份，每份200ml，1份加入10g 或者10ml供试品使匀，另1份加入稀释剂10ml作阴性对照，36℃±1℃培养18～24h，观察。摇动阴性对照瓶后应清亮透明，无菌生长。

6.4.2 增菌培养轻微摇动供试品增菌培养瓶，吸取1ml接种于1管含10ml四硫磺酸钠亮绿培养基的试管中，培养18～24h。

6.5 分离培养轻微摇动供试品增菌培养，以接种环沾取1～2环培养液划线于胆盐硫乳琼脂（DHL）或沙门菌志贺菌琼脂（SS）平板及曙红亚甲蓝（EMB）琼脂或麦康凯琼脂平板各1个，倒置培养24～48h。检查平板上有无疑似沙门菌菌落。沙门菌在上述平板上的菌落形态特征见表1。

表1 沙门菌的菌落特征

平板菌落形态

胆盐硫乳琼脂（DHL）无色至浅橙色，半透明，菌落中心带

黑色或全部黑色或无黑色

沙门菌属志贺菌属琼脂（SS）无色至淡红色，半透明或不透明，菌

落中心有时带黑褐色

曙红亚甲蓝琼脂（EMB）无色至浅橙色，透明或半透明，光滑

湿润的圆形菌落

麦康凯琼脂（MacC）无色至浅橙色，透明或半透明，菌落

中心有时为暗色

由于沙门菌不发酵乳糖和蔗糖，不产酸，菌落不着色，一般为无色半

透明，多数沙门菌因产生H2S，菌落中心呈现黑色甚至全黑色，在DHL 琼脂平板上较为明显。在SS琼脂平板上，H2S特征有时不明显，沙门菌属亚属Ⅲ因多数菌株发酵乳糖，故在上述平板上的乳糖发酵菌落呈

现粉红或紫色，但由于产生H2S，在有H2S指示系统的平板上仍出现黑色中心。在上述培养基上，有些非沙门菌属细菌，也可呈现类似沙

门菌菌落形态，须进一步鉴别。由于药物的影响或非典型菌株的存在，沙门菌菌落可呈现非典型形态，如色泽变深，菌落粗糙等，应注意辨别。

6.6 初步鉴别试验

从每个供试品的分离平板上挑取2～3个疑似菌落（菌落形态特征与表1所列的形态特征相符或疑似）分别接种于三糖铁琼脂斜面，接种

时应以接种针轻轻接触单个菌落中心部位，沾取培养物划线于三糖铁

琼脂斜面并穿刺到底层或先穿刺底层再划线斜面，培养18～24h，观察结果。

疑似沙门菌在三糖铁琼脂斜面上的反应为：①斜面红色（产碱），底层黑色（产H2S）并显示黄色（产酸）；②斜面红色，底层黄色；③斜面黄色，底层黑色，并显示黄色。多数沙门菌在三糖铁琼脂上产生气体，使底层琼脂出现气泡或使琼脂断裂，但也有不产生气体的菌种。对在三糖铁琼脂斜面黄色并同时底层无黑色，或斜面及底层均为红色者可以排除沙门菌。

将疑似沙门菌的三糖铁琼脂或营养琼脂斜面培养物作生化试验，血清凝集试验及革兰染色，镜检。沙门菌应为革兰性杆菌。

6.7 生化试验

6.7.1 靛基质试验用接种环沾取少许培养物，接种到蛋白胨水培养基中，照大肠埃希菌靛基质试验项下操作、判断结果。沙门菌应为阴性反应。

6.7.2 脲酶试验用接种环沾取少许培养物，划线接种于脲琼脂斜面，培养24h，观察结果。斜面变为红色为阳性反应，沙门菌属为阴性反应。

6.7.3 氰化钾试验竟培养物先接种至营养肉汤培养基中培养20～24h，用接种环沾取培养液1环，接种至氰化钾培养基内，另取一环培养液接种于不含氰化钾的同样培养基内作对照管，接种后即以橡胶塞塞紧，培养24～48h，观察结果。对照管内有菌生长（浑浊），而试验管也有菌生长为阳性反应；对照管有菌生长（浑浊）而试验管无

菌生长（清亮）为阴性反应。沙门菌应为阴性反应。

本试验应十分注意密封管口，夏天分装培养基宜在冰浴中进行，防止氯化钾分解，产生氢氰酸逸出，致使培养基内氰化钾浓度降低，不能抑制细菌生长，造成假阳性。

氰化钾为剧毒品、操作时须谨慎，切勿用口吸液。用后的培养基，每管加数粒硫酸亚铁和20%氢氧化钾0.5ml，去毒，然后再灭菌，洗涤。

6.7.4 赖氨酸脱羧酶试验用接种环沾取少许培养物，接种在赖氨酸脱羧酶培养基中，同时接种一支不含赖氨酸的同样培养基作为对照管，培养24～48h观察结果。对照管黄色（产酸），试验管呈紫色为阳性反应（赖氨酸脱羧酶产碱）；试验管黄色为阴性反应。沙门菌应为阳性反应。

6.7.5 动力试验用接种针沾取培养物，穿刺接种于半固体营养琼脂管中，培养24h，观察结果。有动力的细菌能在穿刺线以外的培养基内扩散生长使培养基呈浑浊现象；无动力的细菌仅能沿穿刺线生长，不向外扩散，培养基仍呈清晰透明状；无动力表现的培养物，应在室温保留2～3天后，再行观察。沙门菌除鸡雏沙门菌及无动力的变种外，均具有周身鞭毛，能运动，动力试验阳性。

沙门菌生化反应的初步鉴别见表2

表2 沙门菌与有关细菌在三糖铁琼脂及初步生化试验的鉴别

序

三糖铁琼脂靛

基

脲

酶

氰

化

赖氨

酸脱判定菌属斜面产层产气硫化

号氢质钾羧酶

1.1 －＋＋/

－＋/

－

－－－＋沙门菌属

1.2 ＋/

－

＋＋＋－－－＋沙门菌属Ⅲ

2 －＋＋/

－＋＋－－＋缓慢爱德华菌

属

3 ＋/

－＋＋/

－

＋/

－

－

/

＋

－

/

＋

＋

/

－

－弗劳地柠檬酸

杆菌

4.1 －＋＋S ＋－＋＋－奇异变形杆菌4.2 －＋＋/

－S

＋＋＋＋－普通变形杆菌

5 ＋/

－＋＋/

－

－＋

/

－

－－＋/

－

大肠埃希杆菌

6 －＋－－－

/

＋

－－－志贺菌属

7.1 ＋＋＋－－＋

/

＋－阴沟肠杆菌

－

7.2 ＋＋＋－－＋

/

－＋＋肺炎克雷伯菌、

产气肠杆菌

8 －＋＋S/

－－＋＋

/

－

＋－普罗菲登斯菌

属、摩根菌属

9 －＋＋/

－－－－

/

＋

＋＋蜂房哈夫尼亚

菌、粘质沙雷菌

注：＋产酸（黄色），阳性，阳性率>90%；－产碱（红色），阴性，阴性率>90%；＋／－多数阳性、少数阴性；＋S产生少量气体（本表依据何晓青卫生防疫细菌检验参考第八版美国临床微生物手册）；反应序号１.１不产H2S可结合血清学凝集试验，或加做部分生化试验，判定为沙门菌；反应序号１除典型反应外，脲酶、氰化钾试验、赖氨酸脱羧酶试验三项中有一项异常；反应序号２仅靛基质阳性。其他情况可排除沙门菌。

6.8 血清学凝集试验

6.8.1 准备1片洁净的灭菌载玻片，在近中央的一端，以直径3mm接种环沾取沙门菌属Ｏ多价1血清2～3环制成与玻片横径相垂直的条形涂抹，长约1.5cm，宽约0.5cm。另一端用生理盐水代替血清同法操作，作为阴性对照。

6.8.2 用接种环分别挑取三糖铁琼脂斜面或营养琼脂斜面的新鲜培养物少许，在血清和盐水中混匀。菌量要适当，勿过浓。

6.8.3 将玻片前后倾斜数次，以暗色背景衬底，在良好的照明条件下进行观察，阴性对照不出现凝集现象都是阳性反应。阳性反应通常在3min内发生。有时因血清效价低、反应迟缓时，应将玻片置培养皿内，并放一个湿棉球在旁边，盖上皿盖，经约20min，再观察结果。如果仍然没有出现凝聚，应取斜面培养物，置含少量生理盐水的试管中，制成浓菌悬液，在100℃水浴中保温30min，以除去可能存在的Vi抗原，待冷，再做凝集试验，如出现凝集，仍判为阳性反应；如不出现凝集现象，则为阴性反应。

6.8.4 如对照试验出现凝集现象为非特异反应，须对该菌株培养物进行处理后再作凝集试验。

7 结果判定

7.1 供试品培养物为革兰阴性杆菌，三糖铁琼脂反应及生化反应符合沙门菌属反应。多价1血清凝集试验阳性反应（含待检培养物经100℃30min处理后凝集试验为阳性反应），报告10g或10ml供试品检出沙门菌。

7.2 供试品培养物三糖铁琼脂反应或生化反应不符合沙门菌属反应。多价1血清凝集试验为阴性反应（含待检培养物经100℃30min处理后凝集试验为阴性反应），报告10g或10ml供试品未检出沙门菌。

7.3 供试品培养物出现下列情况，应继续鉴定或保留菌种，送交有关单位进一不鉴定后，再作报告。

7.3.1 供试品培养物的生化反应符合沙门菌属反应多价1血清凝集试验阴性反应。

7.3.2 供试品培养物的生化反应不符合沙门菌属反应多价1血清凝集反应呈阳性反应。

7.4 对已检出沙门菌的供试品分离的菌种，有条件者，应进一步作菌型鉴定。根据检出菌的特性，推断可能菌型，增加生化试验项目及沙门菌单因子血清“O”及“H”进行鉴定。

8 注意事项

8.1 试验用培养基，需经过质量鉴定，用已知典型反应菌株（如乙型副伤寒沙门菌[CMCC（B）50094]进行测试，其灵敏度及特征性反应应符合要求。培养基需在规定条件保存，在规定时间内使用。分离平板在使用应置36℃温箱内倒置孵育1～2h，使其表面温暖湿润，利于分离。

8.2 在对供试品进行测试的同时，需做阳性菌对照及阴性对照。阴性对照应无菌生长，阳性对照应显示阳性结果，否则检验结果无效。特别是用接种环沾取菌液进行接种或分离时，避免动作过大，形成气溶胶，污染操作环境。

8.3 为保证试验方法发可靠性，对分离平板上的疑似菌落，应多选取几个菌落同时进行试验。挑取菌落时，不要在分离平板菌落密集部位挑取可疑菌落，而应在菌落分布稀疏部位挑选。

8.4 生化试验及血清学试验的被鉴定培养物必须是纯培养物，否则，不可能得到正确结果。如遇血清学凝集试验阳性而生化试验不符合

时，应首先检查培养物的纯度。对已污染的培养物，不应丢弃，因为污染菌可能掩盖沙门菌，故应对被污染的培养物重新分离，仔细选取单个菌落再进行试验。

8.5 所有生化反应均需按照规定的试验要求进行，如观察三糖铁琼脂斜面反应的时间，应在24±2h，时间过短过长，都可能出现错误的结果判断。又如氰化钾试验，试管口应密塞，否则氰化钾浓度降低，致使抑菌作用下降。

8.6 血清凝集试验的影响因素甚多，除与电解质、pH、温度有关外，须特别注意抗原与抗体用量的比例恰当，只有当二者浓度适当时，凝集反应方明显可见。由于本法试验用多价血清，其凝集力相对较弱，试验用菌液量切勿过大。测试前，应用已知阳性菌测试以掌握适宜菌液浓度。

8.7 沙门菌为肠道重要致病菌，操作时应特别注意防止分离待检菌及阳性对照菌对操作环境及试验的污染。所有用过的增菌、分离、生化试验培养基、血清学凝集试验及染色镜检后的玻片等，均需经灭菌后方能洗涤。

沙门菌属的检测方法及鉴别

沙门菌属的检测方法及鉴别 【摘要】沙门菌属是一群通常寄居在人或动物肠道中，形态、培养、生化反应和抗原结构相似的革兰阴性杆菌。广泛分布于自然界，可从人和世界各地所有动物中分离得到。沙门菌属 是肠杆菌科中最复杂的菌属。 【关键词】沙门菌属；检验 1生物学特性 1.1形态染色 革兰阴性直杆菌，较细长，大小为宽0．6～2．0μm，长l．0～4．0μm。多具有周身鞭毛， 能运动，有时也会出现无鞭毛的突变型。无芽孢，无荚膜，有菌毛。 1.2培养和生化反应 兼性厌氧，最适生长温度35～37℃，最适生长pH为6．8～7．8。对营养要求不高，在普通营养琼脂上生长的菌落为圆形、光滑、湿润、半透明、边缘整齐的S型菌落。在肠道选择性 培养基上菌落为小至中等，透明或半透明，乳糖不发酵，与志贺菌的菌落相似，有些能产生 硫化氢的菌株，在ss琼脂上形成中心黑色的菌落。对葡萄糖、麦芽糖和甘露醇发酵，不发酵 乳糖和蔗糖。 2细菌学检验 2.1标本采集与注意事项 根据疾病的类型、病情和病程的不同分别采集不同的标本。分离培养原则上于发病第1周采血，第2周取粪便或尿液，全程均可做骨髓培养。副伤寒病程短，采样时间可相对提前。血 清学诊断应在病程的不同时期分别采集2—3份标本。①血液和骨髓液：肠热症患者，在病 程第1周内采取静脉血液；第1～3周内亦可采集骨髓液。②粪便或直肠拭子：伤寒患者， 在病程2周后；胃肠炎患者在急性期、早期采集新鲜粪便，并且最好在药物治疗前，取粪便 黏液、脓血或可疑部分。带菌者用直肠拭予采集直肠表面黏膜。③尿液和其他体液：应无菌 导尿或采集中段尿、胆汁、脑脊液、胸腔积液、腹水等，3 000转／分钟离心30分钟，取沉 淀做培养用。④呕吐物或食物：固体的呕吐物或食物，先用无菌剪刀剪碎，放人加细砂的乳 钵中进一步磨碎，再加入l0倍量的无菌生理盐水混匀，备接种用。液体标本可直接用于培养。 2.2检验方法 2.2.1直接检测 ①显微镜检查：为革兰阴性杆菌。同时排除肠球菌。②检测抗原：采用SPA协同凝集试验、胶乳凝集试验、对流免疫电泳和ELISA等方法，来快速早期诊断粪便、血液或尿液中的沙门 菌等可溶性抗原。③检测核酸：采用分子生物学技术，基因探针可检出标本中的伤寒沙门菌 量为l 000个，而PCR法对标本中含10个伤寒沙门菌就可检出。 2.2.2分离培养 分离培养可根据具体条件选用合适的培养基。 ①血液和骨髓液：静脉血5 ml或骨髓液0．5 ml分别注入50 ml的胆汁葡萄糖肉汤或胰化酪蛋白大豆肉汤中，35～37％培养，每日观察，阳性者多在2～4天内出现。②粪便或肛拭： 最好做床边接种，如不能立即培养，则用卡一布运送培养基或甘油盐水保存液送检。一部分

沙门氏菌的检验方法

沙门氏菌的检验方法 沙门氏菌是一种主要引起食物中毒的致病菌，其检验方法主要包括培养分离、生化检测和分子生物学方法等。下面是关于沙门氏菌检验方法的相关参考内容。 1. 培养分离 沙门氏菌可以通过在选择性培养基上进行培养分离来检测。常用的选择性培养基包括XLD培养基、SS培养基和BS培养基等。将待检样品接种于选择性培养基上，并采用适当的温度和培养时间进行培养。沙门氏菌在培养基上形成红色或无色的菌落，可以通过形态特征进行初步判断。 2. 生化检测 生化检测是通过检测沙门氏菌代谢产物或酶活性来进行的。常用的生化检测方法包括气体产生试验、亚甲蓝试验和尿嘧啶酸试验等。气体产生试验通过观察沙门氏菌在培养基中是否产生氢气或硫化氢气体来判断其存在。亚甲蓝试验则是通过观察沙门氏菌对亚甲蓝的还原作用来进行检测。尿嘧啶酸试验则是通过检测沙门氏菌产生的尿嘧啶酸来进行。 3. 血清学检测 血清学检测是通过检测人体血清中对沙门氏菌特异性抗体的存在来进行的。常用的血清学检测方法包括凝集试验、间接荧光抗体试验和酶联免疫吸附试验等。在这些方法中，沙门氏菌抗原与患者血清中的抗体结合，形成可见的凝集物或荧光产物，从而判断是否感染沙门氏菌。

4. 分子生物学方法 分子生物学方法是通过检测沙门氏菌特异性基因序列来进行的。常用的分子生物学方法包括聚合酶链式反应（PCR）、核酸杂交和基因测序等。PCR方法可以通过特异性引物扩增沙门氏 菌基因的特定片段，从而进行检测。核酸杂交可以通过与沙门氏菌特异性探针结合，形成杂交信号来进行检测。基因测序则可以直接检测沙门氏菌菌株中的特定基因序列，确定其身份。 总结： 沙门氏菌的检验方法主要包括培养分离、生化检测、血清学检测和分子生物学方法等。这些方法通过不同的途径检测沙门氏菌的存在，可以提供准确鉴定和检测结果。在实际应用中，结合多种方法的综合应用可以提高检测结果的准确性和可靠性。

沙门氏菌国标检测方法

沙门氏菌国标检测方法 一、样本采集 在采集样本时，应确保采集的样本具有代表性，且无菌操作。通常采集食品、动物粪便、环境样本等。对于食品，应采集不同种类，如肉类、禽类、奶制品等。对于动物粪便，应采集新鲜样本，避免受到污染。环境样本应采集可能存在沙门氏菌的表面或水样。 二、增菌培养 增菌培养是沙门氏菌检测的重要步骤，目的是增加细菌的数量，使其更容易分离和检测。常用的增菌培养基有肉汤培养基和缓冲葡萄糖胨水培养基等。将采集的样本接种到培养基中，在37℃下培养18-24小时。 三、分离培养 将增菌培养后的培养物划线接种于选择性培养基（如SS 琼脂、麦康凯琼脂等）上，在37℃下培养18-24小时。选择性培养基可以抑制其他细菌的生长，有利于沙门氏菌的分离。

四、初步鉴定 对分离培养得到的单个菌落进行初步鉴定，包括菌落形态、染色特性、镜下形态等观察。同时进行革兰氏染色和氧化酶试验，以初步判断是否为沙门氏菌。 五、生化试验 生化试验是确定分离菌株是否为沙门氏菌的关键步骤。常用的生化试验包括赖氨酸脱羧酶试验、尿素试验、靛基质试验等。根据试验结果，对分离菌株进行初步分类。 六、血清学分型 为了确定分离菌株的具体血清型，需要进行血清学分型。通过与已知抗血清进行反应，确定细菌的特异性抗原，从而确定其血清型。血清学分型对于追踪沙门氏菌的来源和传播途径具有重要意义。 七、报告结果 根据以上各步骤的检查结果，综合分析并得出最终结果。对于疑似沙门氏菌的样本，应进行复核和确认。最终结

果应以书面形式报告给相关单位或个人，报告应包括样本来源、检测方法、检测结果等内容。同时，应对检测结果进行解释和说明，提供相应的建议和措施。

沙门氏菌检测血清学分型(选做)

《畜产品检测技术》电子教材 沙门氏菌检测血清学分型（选做） 一、血清学分型操作步骤 （一）O 抗原的鉴定 用A～F多价O 血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对照。在生理盐水中自凝者为粗糙型菌株，不能分型。 1.被A～F多价O 血清凝集者，依次用O4；O3、O10；O7；O8；O9；O2和O11因子血清做凝集试验。根据试验结果，判定O 群。被O3、O10血清凝集的菌株，再用O10、O15、O34、O19单因子血清做凝集试验，判定E1、E4各亚群，每一个O 抗原成分的最后确定均应根据O 单因子血清的检查结果，没有O单因子血清的要用两个O 复合因子血清进行核对。 2.不被A～F多价O 血清凝集者，先用9种多价O 血清检查，如有其中一种血清凝集，则用这种血清所包括的O 群血清逐一检查，以确定O 群。每种多价O 血清所包括的O 因子如下: O 多价1 A，B，C，D，E，F群(并包括6，14群) O 多价2 13，16，17，18，21群 O 多价3 28，30，35，38，39群 O 多价4 40，41，42，43群 O 多价5 44，45，47，48群 O 多价6 50，51，52，53群 O 多价7 55，56，57，58群 O 多价8 59，60，61，62群 O 多价9 63，65，66，67群 （二）H 抗原的鉴定 1.属于A～F各O 群的常见菌型，依次用表1所述H 因子血清检查第1相和第2相的H 抗原。

表1A-F群常见菌型 H抗原表 2.不常见的菌型，先用8种多价H 血清检查，如有其中一种或两种血清凝集，则再用这一种或两种血清所包括的各种H 因子血清逐一检查，以第1相和第2项的H 抗原。8种多价H 血清所包括的H 因子如下: H 多价1 a，b，c，d，i H 多价2 eh，enx，enz15，fg，gms，gpu，gp，gq，mt，gz51 H 多价3 k，r，y，z，z10，lv，lw，lz13，lz28，lz40 H 多价4 1，2；1，5；1，6；1，7；z6 H 多价5 z4z23，z4z24，z4z32，z29，z35，z36，z38 H 多价6 z39，z41，z42，z44 H 多价7 z52，z53，z54，z55 H 多价8 z56，z57，z60，z61，z62 每一个H 抗原成分的最后确定均应根据H 单因子血清的检查结果，没有H 单因子血清的要用两个H 复合因子血清进行核对。 检出第1相H 抗原而未检出第2相H 抗原的或检出第2相H 抗原而未检出第1相H 抗原的，可在琼脂斜面上移种1代～2代后再检查。如仍只检出一个相的H 抗原，要用位相变异的方法检查其另一个相。单相菌不必做位相变异检查。 3.位相变异试验方法如下: (1)简易平板法：将0.35%～0.4%半固体琼脂平板烘干表面水分，挑取因子

沙门菌检验方法

沙门菌检验方法 沙门菌属广泛分布于自然界，通常寄居于人或动物肠道内是肠杆菌科的重要致病菌属，可使 人和动物致病。它由6个亚属组成，即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅲ；已发现的沙门菌有2000多个菌型。沙门菌是一大群形态、培养特性、生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。 1 材料和试剂 1.1设备和材料天平，均质器或乳钵，温箱（36℃±1℃，42℃），显微镜，灭菌广口瓶 （500ml，250ml），灭菌吸管（10ml）灭菌平皿（90mm×15mm），灭菌小试管（内径3mm，长5cm），灭菌毛细管，橡皮乳头，载玻片，酒精灯，灭菌金属匙或玻璃棒，接种棒和镍铬丝，试架和试管篓。 1.2培养基和试剂（1）所用培养基和配制：缓冲蛋白胨水（BP）：氯化镁孔雀绿（MM）增 菌液；四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液；亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液；亚硫酸铋琼脂（BS）；胆盐硫乳（DHL）琼脂；HE琼脂；WS琼脂；SS琼脂三糖铁（TSI）琼脂；蛋白胨水、靛基质 试剂；尿素琼脂（pH7.2）；氰化钾（KCN）培养基；氨基酸脱羧酶试验培养基；糖发酵管；“2.3.25；ONPG培养基；半固体琼脂；丙二酸盐培养基“2.3.20”。（2）沙门菌因子血清：按 照26种用于初步分型；57种用于进一步分型；163种用于详细分型进行选用。 2 检验步骤 2.1前增菌和增菌冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。称取检样25g加入盛 有225ml缓冲蛋白胨水的500ml广口瓶内。固体食品可先以匀质器于8000r/min打碎1min， 或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化，在36℃±1℃培养4h（干蛋 品培养18～24h），移取10ml转种于100ml氯化镁孔绿肉汤增菌液内，42℃下培养18～24h。同时另取10ml，转种于100ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，36℃±1℃下培养18～24h。 2.2分离培养取增菌液1环，画线接种于一个亚硫酸饿琼脂平板和一个DHL琼脂平板（或HE、WS、SS）或40～48h（BS），观察各平板上生长的菌落，沙门菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和沙门菌Ⅲ在各平板上的菌落特征。 2.3生化反应（1）从选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种TSI琼脂。在TSI 琼脂内，肠杆菌科属种的反应结果。在TSI琼脂内只有斜面产酸又同时硫化氢阴性的菌株可 以排除，其他的反应结果均有沙门菌的可能，但同时也均有不是沙门菌的可能。（2）在接 种TSI琼脂抽时，再接种蛋白胨水（作靛基质试验用）、尿素琼脂（pH7.2）、KCN培养基和 赖氨酸脱羧酶试验培养基及对照培养基各1管，在36℃±1℃培养18～24h，必要时可延长至48h，按判定结果。 3 结果判定依据及报告方式 3.1结果判定依据主要依靠生化反应和血清学鉴定两个方面。准确的生化反应常可作出初步 鉴定，必要时应配合形态及染色检查，以排除肠球菌和其他肠道菌。血清学鉴定主要依据沙 门菌O血清决定群，再用H因子血清第1相和第2相试验结果综合判定其所属血清型。将生 化与血清学试验结果综合分析判定可获准确结果。此外，亦可用噬菌体进行鉴定。 3.2报告方式（1）分离培养后，若未发现可疑菌，可报告“未发离出沙门菌”。（2）若生化 反应符合沙门菌，用沙门菌属诊断血清作玻片凝集，结果阳性，可初步报告为“分离出××沙门菌”（3）进一步做多种生化反应和用因子血清作抗原式的分析后，可作出最终诊断性的报告 为“培养出生地×型沙门菌”。（4）作噬菌体分型鉴定后，可报告为“检出噬菌体××型沙门菌”。

沙门氏菌的检验方法与注意事项

沙门氏菌的检验方法与注意事项 在日常微生物检验中，沙门氏菌比较常见，是一种致病性细菌，国家规定在 每25g的食品样本中不能检测出沙门氏菌，所以在检验沙门氏菌时，对试剂与培 养基有很高的要求，下面本文针对沙门氏菌的检验方式和注意事项作出简单介绍！ 一、沙门氏菌检测的原因和意义 根据相关统计显示，我们国家因细菌性食物中毒的人中，有70%-80%左右的 人是通过沙门氏菌造成的。人体倘若含有过多的大量沙门氏菌的动物性食物，就 会造成细菌性感染，以此在毒素的影响下产生食物中毒，造成伤寒、胃肠炎及副 伤寒。而且沙门氏菌的传播途径较多，肉、蛋和其他食物，从加工至销售的整个 过程当中都极易引发感染情况，所以准确、有效检验沙门氏菌有重大意义。 二、沙门氏菌的检验 （一）前增菌(无选择性) BPW（缓冲蛋白胨水）属于一种比较常见的增菌培养基，不包括任何抑制物质，有助于修复受损的沙门氏菌。促使受损的沙门氏菌细胞复苏至相对平稳的生 理状态。 （二）选择性增菌 TTB（四硫磺酸钠煌绿增菌液）内含有硫代硫酸钠，结合四硫磺酸钠，能够 对肠道共生菌进行有效抑制，而包含四硫磺酸钠还原酶的细菌，可以在这一培养

基当中生长繁殖；煌绿及胆盐能够控制大肠群菌、革兰氏阳性菌的繁殖，而伤寒 沙门氏菌依旧可以生长。SC（亚硒酸盐胱氨酸增菌液）能够对其他和伤寒沙门氏 菌进行选择性增菌，其含有的亚硒酸结合蛋白胨内的含硫氨基酸，促使亚硒酸与 硫的复合物生产，对细菌硫的代谢产生干扰，进而减少肠球菌、变形杆菌、大肠 埃希氏菌的繁殖生长。 （三）分离培养基(选择性) ①BS（亚硫酸铋琼脂）内含亚硫酸铋指示剂，可对大肠菌群、革兰氏阳性菌 进行抑制，但不会对沙门氏菌的繁殖产生影响；其他沙门氏菌、伤寒杆菌可以借 助葡萄糖，还原亚硫酸铋，使其形成硫酸铋，使黑色菌落附近有黑棕色的环，对 光可看到金属光泽。BS的压力和温度不可过高，避免选择性下降，需在使用前配制，放置阴暗处储存，48小时后丧失选择性，储存不合理会造成色浅，表示效果 开始减弱，联合TTB、SC使用能够提高检出率。 ②HE琼脂内的溴麝香草酚兰、胆盐、去氧胆酸钠等，可对革兰氏阳性菌繁殖 进行抑制；将檬酸铁铵与硫代硫酸钠运来检验H2S的形成，导致菌落中心为黑色；酸性复红及溴麝香草酚兰属于pH指示剂，发酵糖产酸的菌落表现橙黄色，不发 酵糖菌落表现蓝绿色。HE不可以高压灭菌，开水煮应在1分钟之内，通过水浴方 式冷却，可以储存24小时。 ③通常在对沙门氏菌进行快速筛选、分离时，采用沙门氏菌显色培养基。其 原理主要是通过沙门氏菌显色基团和特异性酶的独特反应，游离出色原，进而将 沙门氏菌于培养基上表现出相应的颜色，而其他肠道杆菌颜色则不一样。 三、沙门氏菌检验的注意事项 （一）前增菌和二次增菌必不可少 食物内含有的沙门氏菌通常不多，且会同时存在很多菌种，前增菌能够恢复 受损菌，而增菌能够对部分杂菌的繁殖进行有效抑制，因此通过前增菌及增菌实 施筛选、培养操作，能够提高后续培养分离的检出率。 （二）注意典型或可疑沙门氏菌菌落

沙门氏菌菌检测方法

沙门氏菌菌检测方法 沙门氏菌（Salmonella）是一类常见的食源性致病菌，可以引起人类各种疾病，如食物中毒、胃肠炎等。因此，对食品中的沙门氏菌进行检测是非常重要的。下面我将详细介绍几种常用的沙门氏菌检测方法。 1. 培养法 培养法是最常用的沙门氏菌检测方法之一。该方法需要将样品（如食品、水）在适当的培养基上进行培养，并观察是否有沙门氏菌的生长。具体步骤如下：（1）将样品接种于含有选择性成分的培养基上； （2）将接种的培养基培养在适当的温度下，通常为37摄氏度； （3）观察培养基上是否有典型的沙门氏菌的形成，一般表现为黑色斑点；（4）进行进一步的确认试验，如生化试验和血清学试验。 2. PCR法 PCR法是一种快速、准确且高度灵敏的沙门氏菌检测方法。PCR法通过扩增样品中沙门氏菌的特定基因片段来检测其存在。具体步骤如下： （1）提取样品中的DNA； （2）使用特定引物扩增沙门氏菌的基因片段； （3）通过电泳将扩增产物分离，并观察是否有目标片段的出现。 3. ELISA法 ELISA法是一种常用的快速筛查大量样品的沙门氏菌检测方法。该方法利用特异

性抗体与沙门氏菌抗原结合，并通过酶催化反应来检测沙门氏菌的存在。具体步骤如下： （1）将样品涂覆在固相酶标板上； （2）添加特异性抗体与沙门氏菌抗原结合； （3）洗涤去除非特异性结合的成分； （4）添加辣根过氧化物酶标记的二抗，并形成酶标复合物； （5）通过酶催化反应产生显色物质，观察是否有颜色的出现。 4. 质谱法 质谱法是一种高分辨率、高灵敏度的沙门氏菌检测方法。该方法通过检测样品中沙门氏菌的特定代谢产物来判断其存在与否。具体步骤如下： （1）提取样品中的代谢产物； （2）使用质谱仪进行检测，并与数据库中的标准进行比对； （3）根据比对结果判断样品中是否有沙门氏菌的存在。 除了上述常用的沙门氏菌检测方法外，还有一些新兴的检测技术，如纳米技术、免疫传感器等。这些方法具有高灵敏度、高特异性和快速的特点，可以用于食品、环境等多种领域的沙门氏菌检测。

微生物沙门菌检测方法

微生物沙门菌检测方法 沙门菌是一种常见的致病微生物，它可以引起人类和动物中肠胃道的感染，导致腹泻、发热和腹痛等症状。对于食品和饮水中的沙门菌的检测，是确保公共卫生安全的重要环节。 目前，常用的沙门菌检测方法主要包括传统文化方法、分子生物学方法和免疫学方法。 传统文化方法是最早也是最常用的沙门菌检测方法之一。它通过培养食品和饮水样品中的沙门菌，然后观察和记录生长的细菌数量和特征。其优点在于能够得到沙门菌细菌的数量和类型信息，但缺点是需要较长的培养时间，通常需要24-48小时。而且，这种方法需要依赖实验室设备和有经验的操作人员，对于某些特定环境，比如生产现场或野外环境，不太适用。 分子生物学方法可以更快速和准确地检测沙门菌。常见的分子生物学方法包括聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光PCR、循环等温扩增（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）等。这些方法通过扩增沙门菌基因组DNA 或RNA的特定片段来检测其存在。相较于传统文化方法，分子生物学方法的优势在于它们具有更高的敏感性和特异性，并且能够快速得到结果，通常在数小时内。此外，分子生物学方法还能区分不同的沙门菌亚型和血清型，对疫情追踪和溯源具有重要意义。

免疫学方法是利用抗体与沙门菌细菌或其代谢产物特异性结合的原理进行检测。常见的免疫学方法包括酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）和免疫层析试纸（immunochromatographic strip）等。这些方法具有简单、快速和便携的特点，可以在实验室外或现场使用。但与传统文化方法和分子生物学方法相比，免疫学方法的灵敏度和特异性较低，可能存在一定的交叉反应和误检率。 根据不同的检测需求和实际应用场景，可以综合使用以上不同的沙门菌检测方法。例如，在食品生产和餐饮行业中，可以首先进行免疫学方法的快速筛查，然后再使用分子生物学方法进行核实。对于疫情追踪和溯源，可以结合传统文化方法和分子生物学方法，以便更全面地了解沙门菌的数量和类型。 总结起来，沙门菌的检测方法包括传统文化方法、分子生物学方法和免疫学方法。不同方法具有优缺点，可以根据实际情况进行选择和组合使用。随着技术的不断进步，相信未来会有更加高效和准确的沙门菌检测方法的出现，进一步提高食品安全和公共卫生的水平。

实验四 沙门氏菌属(Salmonella)的检验

实验四沙门氏菌属（Salmonella）的检验 1 目的 1.1 理解沙门氏菌属生化反应及其原理 1.2 掌握沙门氏菌属血清因子使用方法 1.3 掌握沙门氏菌属的系统检验方法 2 原理 沙门菌属是一大群寄生于人类和动物肠道，其生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。种类繁多，少数只对人致病。其他对动物致病，偶尔可传染给人。主要引起人类伤寒，副伤寒以及食物中毒或败血症。在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌食物中毒常占首位或第二位。 食品中沙门氏菌的检验方法有五个基本步骤：1 前增菌；2 选择性增菌；3 选择性平板分离沙门氏菌；4 生化试验，鉴定到属；5 血清学分型鉴定。目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础，25g食品为标准分析单位。本实验以蛋品为检测样品，以已知的沙门氏菌和大肠埃希氏菌为对照。 3 材料 3.1 菌种 沙门氏菌（Salmonella sp.） 大肠埃希氏菌（E.col.） 3.2 检样 冻肉、蛋品、乳品等。 3.3 培养基 缓冲蛋白胨水（BP）、氯化镁孔雀绿（MM）增菌液、四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、SS琼脂、EMB琼脂、亚硫酸铋琼脂（B S）、三糖铁琼脂（TSI）、蛋白胨水、尿素培养基、赖氨酸脱羧酶试验培养基、鸟氨酸脱羧酶试验培养基、丙二酸钠培养基、氰化钾（KCN）培养基、ONPG培养基、缓冲葡萄糖蛋白胨水、DHL琼脂、HE琼脂。 3.4 试剂 吲哚试剂、V-P试剂、甲基红试剂、氧化酶试剂，沙门菌A—F多价诊断血清，革兰氏染色液等。 3.5 器具 天平（称取检样用）、均质器或乳钵、显微镜、广口瓶、三角烧瓶、吸管、平皿、

沙门菌的检查方法及鉴定

沙门菌的检查方法及鉴定 沙门菌是一类致病性细菌，可以引起沙门氏菌病。你所提到的沙门菌的检查方法及鉴定可以从以下几个方面进行说明： 1.标本采集和处理： 对于沙门菌的检查，首先需要采集相关的临床样本，常见的有粪便、血液、尿液、食物、水等。采集样本时要采用无菌技术，并且要避免污染和混杂。 2.沙门菌的常规培养： 将样本置于适当的富营养培养基上进行培养，常用的富营养培养基有MacConkey琼脂培养基、XLD琼脂培养基等，这些培养基对于沙门菌的生长提供了必要的条件。常规培养通常在37摄氏度下进行，培养时间一般为24小时。 3.大肠杆菌群的初步筛选： 沙门菌属于大肠杆菌群，因此在初步筛选时可以通过革兰染色法进行鉴定。革兰染色后，沙门菌呈现革兰阴性杆菌的形态。 4.生化试验： 生化试验是沙门菌鉴定的重要手段，通过不同菌株对不同营养源的利用及产物生成情况的检测，可以进一步缩小筛选范围。常见的生化试验包括： a.培养基试验：通过在不同培养基上生长情况的观察和分析，来判断菌株是否为沙门菌。

b.酸碱试验：通过观察剧烈酸化或碱化现象，来检测杨氏氏培养碱解 试验。 c.碳源利用试验：通过检测菌株对不同碳源的利用情况，如糖耐试验、麦芽糖利用试验等。 d.氨基酸利用试验：通过检测菌株对不同氨基酸的利用情况，如亮氨 酸加芥黄悬液试验等。 e.钠乙酸淀粉试验：沙门菌在生长过程中分泌出来的α-淀粉酶能将 淀粉分解成葡萄糖，通过观察菌株对淀粉的降解能力，来鉴定菌株是否为 沙门菌。 5.血清学试验： 血清学试验是沙门菌鉴定的关键步骤，通过检测菌株在特定的抗血清 中的凝集反应来进行。根据不同的菌株反应特性，可以进一步鉴定沙门菌 的种属和亚属。 6.分子生物学方法： 随着分子生物学技术的发展，PCR、基因测序和基因芯片等分子生物 学方法在沙门菌的鉴定中得到广泛应用。这些方法主要通过检测和分析沙 门菌的特异基因序列，可以快速准确地进行鉴定。 总之，沙门菌的检查方法及鉴定可以通过标本采集和处理、常规培养、革兰染色、生化试验、血清学试验和分子生物学方法等多个方面进行。不 同的方法可以相互印证，提高鉴定的准确性和可靠性。

沙门菌检查法

沙门菌检查法 1 简述 沙门菌属是肠杆菌科的重要致病菌，按Bergey系统细菌学手册第一卷（1984），沙门菌分5个亚属。2003年出版的第八版的临床微生物手册将沙门菌属分成两个菌种即肠炎沙门菌和乍得沙门菌，其中肠炎沙门菌分6个亚种，包括常见的伤寒、甲型副伤寒、乙型副伤寒、丙型副伤寒、，鼠伤寒，猪霍乱等沙门菌杂内，迄今已发现2501个血清型。O抗原抗血清A-E群包含了沙门菌分离株的95%，所以常用沙门菌A-F O多价血清进行沙门菌初筛试验。药品中的沙门菌，是以鉴定沙门菌属为准，即对没10g（或10ml）药品中是否检出沙门菌作出检验报告。 由于沙门菌血清型繁多，各血清型的生化及血清学特性虽密切相关，却不尽相同，采用一种增菌培养基和两种分离培养基，不可能涵盖所有沙门菌的最适增菌及分离条件。 此外，由于药品在生产过程中，常受到加热、干燥等加工步骤的影响，药品中污染的沙门菌可受到损伤或呈休眠状态，故须在增菌培养前先进行预增菌。然后再进行增菌及分离、三糖铁琼脂初步鉴别、生化试验、血清学试验等步骤。 2 仪器、设备及用具（见大肠埃希菌2）。 3 试液指示液（参见大肠埃希菌3） 3.1 无菌脲试液[附录2.5]。 3.2 酚磺酞指示液[附录 4.4]。

3.3 亮绿试液[附录2.9]。 3.4 氰化钾试液[附录2.14]。 3.5溴甲酚紫指示液[附录 4.5]。 3.6 革兰染色液[附录2.4，2.10，2.16]。 3.7 沙门菌属A-F“O”多价血清（即O多价1）生物制品研究所供应。 4 培养基 4.1 营养琼脂培养基[附录 5.2]。 4.2 营养肉汤培养基[附录 5.1]。 4.3 半固体营养琼脂培养基[附录 5.3]。 4.4 曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）[附录 5.8]。 4.5 麦康凯琼脂培养基（MacC）[附录 5.9]。 4.6 四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）[附录 5.11]。 4.7 三糖铁琼脂培养基（TSI）[附录 5.10]。 4.8 胆盐硫乳琼脂培养基（DHL）[附录 5.13]。 4.9 沙门菌属志贺菌属琼脂培养基（SS）[附录 5.12]。 4.10 蛋白胨水培养基[附录 5.18]。 4.11 脲（尿素）琼脂培养基[附录 5.23]。 4.12 氰化钾培养基[附录 5.24]。 4.13 赖氨酸脱羧酶培养基[附录 5.25]。 5 对照用菌液 取乙型副伤寒沙门菌[CMCC（B）50094]是营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基内，36℃±1℃培养18～24h后，用0.9%

沙门氏菌检测标准、方法及实验关键点

．检验沙门氏菌的原因和意义： 据统计我国细菌性食物中毒中70%～80%是由沙门 氏菌引起的，人一旦摄入含有大量沙门氏菌(105～ (106 个/g)的动物性产品，就会引起细菌性感染， 进而在毒素作用下发生食物中毒导致胃肠炎、伤寒和副伤寒且沙门氏菌的传播媒介众多，肉、蛋以及食品从加工到出售的过程中都十分容易发生污染。 因此对沙门氏菌的检验事关重大。 二、检测及鉴定： 沙门氏菌的检测要在二级生物安全实验室及二级生物安全柜(在负压情况下防止致病微生物气溶胶飘离实验室对实验人员及环境造成污染)中进行。 沙门氏菌典型菌落形态：

生化鉴定显示： API20E 生化鉴定是根据快速酶促反应及代谢产物的检测技术发展的一种细菌编码鉴定法，广泛应用于临床、食品中革兰氏阴性杆菌的快速鉴定。 限值要求： 参考CAC、ICMSF、欧盟、澳大利亚和新西兰、美国、加拿大、香港、台湾等国际组织、国家和地区 的即食食品中沙门氏菌限量标准及规定， 《GB29921-2013食品中致病菌限量》按照二级采 样方案对所有11类食品设置沙门氏菌限量规定， 具体为n=5，c=0，m=0（即在被检的5份样品中，不允许任一样品检出沙门氏菌）。 三、沙门氏菌传统检测方法

的关键控制点 1、样品处理 尽可能缩短解冻时间，使竟争菌群生长最少，并减小对沙门氏菌的损伤致病菌取样一定要均匀并具有代表性（蛋黄蛋清混匀取样）。 2、培养基及培养方面 （1）没有一种培养基可疑准确无误的筛选出沙门氏菌，必须选择多种选择性培养基同时筛选，只能说显色培养基综合选择性更强。 （2）试剂和培养基的配置一定要严格按照说明书配置，是否需要高压灭菌，添加剂用量及培养基保存条件。 （3）有1%沙门氏菌乳糖发酵阳性，为了避免漏检乳糖阳性菌必须选择不依赖乳糖的培养基，目前BS 培养基认为是最适合的。 （4）BS培养基是分离沙门氏菌的高效培养基，特别适用于伤寒类的沙门氏菌，不是所有的选择性培养基都能有效分离出伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌，BS是分离伤寒类沙门氏菌的首选培养基。

沙门氏菌基本知识及检测方法

沙门氏菌基本知识及检测方法 沙门氏菌属Salmonella是肠杆菌科的一个大属,有2000多个血清型,我国发现的约有100个;沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中;1880年Eberth首先发现伤寒杆菌,1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌,由于Salmon发现本属细菌的时间较早,在研究中的贡献较大,遂定名为沙门氏菌属Salmonella ;本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性,能引起人和动物的败血症与胃肠炎,甚至流产,并能引起人类食物中毒,是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一; 根据沙门氏菌的致病范围,可将其分为三大类群;第一类群：专门对人致病;如伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌甲型、乙型、丙型;第二类群：能引起人类食物中毒——食物中毒沙门氏菌群,如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等;第三类群：专门对动物致病,很少感染人,如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌;致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌Salmonella cholerae,其次是鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium和肠炎沙门氏菌Salmonella enteritidis; 一、沙门氏菌属的生物学特征： 1.形态染色特性：G-无芽孢杆菌;大小通常为～μm ×～μm,菌端钝圆,散在,偶有短丝状,无荚膜,除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛,能运动,绝大多数菌株有菌毛;需氧或兼性厌氧菌,生长温度范围为10～42℃,最适生长 温度为37℃,适宜pH为～,对营养要求不高,在普通培养基中生长旺盛,胆盐可促进其生长; 2.培养特性：需氧或兼性厌氧菌；生长温度范围为10～42℃,最适生长温度为37℃；适宜pH为～；对营养要求不高,在普通培养基中生长旺盛；胆盐可促进其生长; §普通琼脂：圆形、光滑、无色半透明、边缘整齐或不太整齐的中等大小2 ～ 4mm 菌落;鸡白痢、鸡伤寒、猪副伤寒、甲型副伤寒沙门氏菌等只能长成细小菌落; §麦康凯琼脂和伊红美兰琼脂EMB：菌落无色半透明 §SS琼脂和DHL琼脂：无色半透明、中心黑色或几乎全部黑色多数菌株的菌落

沙门菌检测技术

沙门菌为常见的肠道病原菌之一，在自然界分布广泛，种类繁多，所致疾病统称沙门菌感染，其中由伤寒、副伤寒沙门菌引起的急性全身系统性传染病是我国《传染病防治法》中规定报告的乙类传染病，而由非伤寒沙门菌引起的食物中毒则占我国内陆地区细菌性食物中毒的首位。 及时准确地检验沙门菌，为诊断和控制由该菌引起的疾病提供依据。沙门菌检验程序主要包括：标本采集、标本的处理与接种、菌株分离与鉴定和PCR检测几个步骤。 标本采集 标本采集前，应准备好所需的培养基和器材，主要有：血液需氧培养瓶、血琼脂平板、XLD（木糖赖氨酸脱氧胆盐）琼脂平板、BS（亚硫酸铋）琼脂平板、SC（亚硒酸盐胱氨酸）增菌液、酒精灯、采样瓶、剪刀、镊子等。 沙门菌检验标本主要分为：食品样品、可疑食物中毒标本，沙门菌患者标本。 可疑食物中毒标本主要有：可疑食品、相关环境标本、疑似病人标本。 可疑食品的采集：在采集可疑食物中毒标本时，应重点采集剩余食物以及食品加工有关的炊事用具，操作人员的手、肛试等相关环境标本。采样时，用棉试子涂抹物品表面后，置于少量增菌培养基内，也可根据情况在接种现场接种分离平板。 沙门菌感染患者标本的采集：沙门菌感染患者应采集新鲜粪便标本或肛试子直接接种分离平板和增菌液。对伤寒、副伤寒患者，在病程的第1~2周，可采集静脉血液4~8ml，接种血液需氧培养瓶中。 每个标本需做好标识和记录，采集的食品样品4℃保存，已接种标本的增菌液和培养基，室温下保存，2小时内送达实验室。 标本的处理与接种 沙门菌标本的处理与接种常用培养基有：TTB（四硫磺酸钠）增菌液、SC(亚硒酸盐胱氨酸)增菌液、XLD琼脂平板、BS琼脂平板和麦康凯（MaC）琼脂平板。 可疑中毒食品标本的处理：对采集的标本通常按1:10的比例分别接种于100mlTTB和100ml增菌液中，每瓶增菌液加入标本约10g，同时还可将可疑中毒食品标本直接接种于分离平板。将接种后的TTB增菌液置42℃培养箱中培养18~24小时，将SC增菌液和分离平板置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。取培养后增菌液转种XLD琼脂平板和BS琼脂平板，将接种后的平板置37℃培养箱中培养24~48小时，待观察。 血液（骨髓）标本的处理：将已接种标本的血液培养瓶直接放置37℃培养箱中培养7天，在培养期间分别于培养的第1天、第2天和第7天取培养液一环接种血琼脂平板，将平板置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。培养至第7天时，如培养物仍无菌生长，则可判为阴性。 肛试子及其他环境标本的处理：将现场采集已接种标本的分离平板和增菌液直接放置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。取出18~24小时培养的增菌液转种XLD琼脂平板和麦康凯琼脂平板。将接种完毕的平板置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。 菌株分离与鉴定 主要实验试剂有：氧化酶（试剂）、三糖铁（TSI）、动力—靛基质—尿素半固体（MIU）和赖氨酸铁琼脂斜面、API20E、沙门菌诊断血清。 沙门菌菌株的鉴定主要试验有：菌体形态观察，菌落形态观察，氧化酶实验，初步生化鉴定（系统生化鉴定），血清学分型。 菌落形态观察：在XLD平板上沙门菌菌落呈粉红色、光滑、湿润、边缘整齐、产H2S 的菌株，可形成中心黑色或全部黑色的菌落。在BS琼脂平板上，沙门菌菌落呈黑色有金属光泽、棕色或灰色，培养基周围可呈现黑色或棕色，有些菌株可形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。在麦康凯琼脂平板上，沙门菌菌落为无色、透明或半透明、光滑湿润、边缘整齐、

沙门氏菌基本知识及检测方法

沙门氏菌基本知识及检测方法 沙门氏菌基本知识及检测方法 沙门氏菌属(Salmonella)是肠杆菌科的一个大属，有2000多个血清型，我国发现的约有100个。沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中。1880年Eberth首先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较大，遂定名为沙门氏菌属Salmonella 。本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性，能引起人和动物的败血症与胃肠炎，甚至流产，并能引起人类食物中毒，是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一。 根据沙门氏菌的致病范围，可将其分为三大类群。第一类群：专门对人致病。如伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌(甲型、乙型、丙型)。第二类群：能引起人类食物中毒――食物中毒沙门氏菌群，如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等。第三类群：专门对动物致病，很少感染人，如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌。致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerae)，其次是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)。 一、沙门氏菌属的生物学特征： 1.形态染色特性：G-无芽孢杆菌。大小通常为0.7～1.5μm × 2.0～5.0μm，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。需氧或兼性厌氧菌，生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃，适宜pH为6.8～7.8，对营养要求不高，在普通培养基中生长旺盛，胆盐可促进其生长。 2.培养特性：需氧或兼性厌氧菌；生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃；适宜pH为6.8～7.8；对营养要求不高，在普通