离子交换色谱-

离子交换色谱- 紫外检测法测定乳制品中三聚氰胺

何强1, 孔祥虹1, 李建华1, 乐爱山1, 赵洁2

( 1. 陕西出入境检验检疫局, 西安710068; 2. 西安理工大学理学院, 西安710054)

摘要: 建立离子交换色谱- 紫外检测法测定乳制品中三聚氰胺。样品直接用水和乙腈提取, 分析时用LC - SCX离子交换色谱柱分离, 浓度为0.05 mol/ L磷酸二氢钾溶液( pH值为3.0) - 乙腈( 70 ∶30) 为流动相, 流速1.0 mL/min, 在紫外波长240 nm下检测。三聚氰胺在0.5 ~ 100.0 mg/ L的范围内, 质量浓度与色谱峰面积呈良好的线性关系( r=0.9999) , 最低检出限为1.0 mg/ kg, 加标回收率在93.8 % ~102.5 %范围内, 相对标准偏差(RSD) 小于3.5 %。该方法简便、快速、准确, 能够满足检测要求。

关键词:三聚氰胺; 乳制品; 离子交换色谱

Determination of melamine in dairy products with ion exchange chromatography and UV detection

HE Qiang1, KONG Xiang- hong1, LI Jian- hua1, YUE Ai- shan1, ZHAO Jie2

(1. Shaanxi Entry - Exit Inspection and Quarantine Bureau, Xi' an 710068, China; 2. College of Science, Xi' an Universityof Technology, Xi' an 710054, China)

Abstract: A method was developed for the determination of melamine in dairy products with ion exchange chromatography. Samples were extracted with water and acetonitrile. Chromatographic analysis was performed on a LC - SCX column eluted with 0.05 mol/ L KH2PO4(pH=3.0) - acetonitrile (70∶30) at a flow rate of 1.0 mL/min and UV detection at 240 nm. The present method showed good linear relationship(r = 0.9999) for melamin at the range of 0.5 ~ 100.0 mg/ L, the detection limit were 1.0 mg/ kg, the recoveries ranged from 93.8 % to102.5 % with relative tandard deviations (RSD) less than 3.5 %. The ethod is simple, fast, accurate for the melamine analysis.

Key words: melamine; dairy products; ion exchange chromatography

正文：

最近美国FDA调查确认宠物食品受三聚氰胺污染是造成许多宠物非正常死亡的原因, 从而要求出口到美国的含蛋白产品必须检测三聚氰胺, 已经对我国的食品出口企业产生了较大的负面影响。三聚氰胺(melamine)简称三胺, 学名三氨三嗪, 别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺, 分子式为C3N6H6, 是一种重要的氮杂环有机化工原料, 具有一定的肾毒性。因为其分子中

含有大量氮元素, 而用全氮法检测蛋白质含量时不能够区分这种“伪蛋白氮”, 所以一些不法

厂家, 往产品中添加三聚氰胺粉以提高蛋白质含量。乳制品是人类最常用的富含蛋白食品之一, 检测“伪蛋白”三聚氰胺, 对保证乳制品的质量安全、维护人们的身体健康和促进对外贸易具有重要意义。

文献报道的三聚氰胺的检测方法有HPLC 法、HPLC - MS / MS法、GC - MS法[2- 7], 但乳制品中的三聚氰胺的检测尚未见有文献报道。本研究建立了测定乳制品中三聚氰胺的离子交换色谱法, 该方法简便、快速, 实用性强, 回收率良好, 检测结果稳定可靠。

1.实验

1.1 仪器和试剂

Agilent 1200型高效液相色谱系统: 配四元泵、DAD检测器、自动进样器及色谱数据处理工作站( 美国Agilent公司) ; 乙腈( 色谱纯) ; 磷酸、磷酸二氢钾( 分析纯) ; 水为超纯水( PURELAB PULS超纯水器制备) ;SUPELCOSILTM LC - SCX离子交换色谱柱( 25 cm ×4.6 mm, 5 μm) 。

三聚氰胺标准品( 纯度99.5 %) 。

标准储备液及工作液的配制: 将三聚氰胺标准品用乙腈配制成100 mg/mL的储备液, 于4 ℃条件下保存。使用时用水稀释, 配制成不同浓度的混合标准工作溶液。

1.2 色谱条件

流动相: 浓度为0.05 mol / L磷酸二氢钾溶液( 磷酸调pH值至3.0) - 乙腈( 70∶30) ; 流速: 1.0 mL/min;色谱柱温度为30 ℃; 检测器: 二极管阵列检测器; 检测波长为240 nm; 进样量为10 μL。应用上述条件, 取1.0 mg/ L的三聚氰胺标准品溶液进样, 色谱图如图1

所示。

1.3 样品前处理

1.3.1 样品制备纯牛奶、酸牛奶等液体样品: 直接称取混合均匀的样品5.0 g( 精确至0.01 g) 。酸乳、果乳等较稠的样品: 称取混合均匀的样品5.0 g( 精确至0.01 g) , 加入5 mL水, 涡旋混匀。奶粉等固体样品: 称取充分混匀的样品5.0 g( 精确至0.01 g) , 加入10 mL水, 涡旋混匀。

1.3.2 提取

向1.3.1制备好的样品中加入35 mL乙腈, 振摇提取5 min , 用水定容至50.00 mL, 4000 r / min 离心5 min, 上清液过0.45 μm的滤膜, 进样检测。

纯牛奶、酸牛奶、酸乳、果乳、奶粉等5种乳制品的HPLC 色谱图如图2( a) 所示, 添加三聚氰胺均为10.0 mg/ kg时的HPLC色谱图如图2(b)所示。

2 结果与讨论

2.1 线性范围、检出限及回收率

配制三聚氰胺质量浓度为0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0,20.0, 50.0, 100.0 mg/ L 的系列标准品溶液, 按照1.2中的色谱条件进样检测, 并以标准品质量浓度(X) 为横坐标, 峰面积(Y) 为纵坐标作图, 同时用最小二乘法进行线性回归, 得标准曲线回归方程为Y = 40.152 X -5.2576( r = 0.9999) , 在0.5 ~ 100.0 mg/ L范围内, 标准品质量浓度与峰面积值具有良好的线性关系。将标准品溶液稀释进样, 以信噪比为10( S / N =10) 计算, 三聚氰胺的最低检出质量浓度为0.1 mg/ L,按1.3中样品处理方法, 乳制品中三聚氰胺最低检出限为1.0 mg/ kg。

对15份纯牛奶样品进行加标回收试验, 分2.0, 10.0, 50.0 mg/ kg三个加标水平, 结果如表1所示。由表1可以看出, 回收率均在93.8 % ~102.5 %之间,RSD小于3.5 %, 重现性良好。

表1 方法回收率及精密度测定结果( n=5)

加标量/ (mg/ kg) 2.0 10.0 50.0

回收率/% 94.1～100.4 93.8～102.1 96.9～102.5

平均回收率/% 97.3 98.6 99.8

RSD/% 3.25 3.49 1.89

2.2 样品检测

利用本文建立的方法对购自乳制品零售市场的5类共10种乳制品进行了检测, 该方法对这些样品均具有良好的适用性, 色谱无干扰, 回收率均大于96.3 %, 检测结果如表2所示, 在所检样品中三聚氰胺均未检出。

2.3 讨论

2.3.1 色谱条件的选择

利用常用的C18色谱柱检测三聚氰胺时, 所需流动相组成复杂, 而且分离效果不佳, 色谱峰形不理想,基线不平稳, 本实验选用强阳离子交换树脂柱进行分离, 分离效果良好, 基线平稳, 色谱峰形尖锐( 图2) 。

表2 样品检测结果样品

样品纯牛奶酸牛奶酸乳草莓味果乳纯羊奶粉

样品数量 2 3 2 1 2

检测结果/ (mg/ kg) 未检出未检出未检出未检出未检出

回收率/% ≥97.8 ≥96.3 98.4 97.2 ≥96.3

在流动相选择时, 考察了离子浓度、pH值及乙腈比例对色谱分离的影响。三聚氰胺对流动相中磷酸二氢钾溶液浓度变化比较敏感, 其他条件不变, 磷酸二氢钾溶液浓度由0.05 mol/ L变为0.02 mol/ L时, 则三聚氰胺在色谱上不能出峰, 磷酸二氢钾溶液浓度为0.1 mol/ L时, 三聚氰胺保留时间为6 min左右, 出峰时间过早, 与乳制品中干扰峰不能有效分离。流动相的

pH值对三聚氰胺的出峰时间和分离效果影响明显,pH值为3.0时, 色谱保留时间和分离度均较为理想( 图2) , pH值升高至6.0, 则三聚氰胺在色谱柱上基本无保留, 出峰时间在3.5 min左右, 与干扰峰重叠。三聚氰胺对流动相中乙腈比例变化不敏感, 乙腈比例由15 %变化至40 %, 三聚氰胺保留时间均保持在10 min左右, 但干扰峰对乙腈比例变化较敏感, 利用这一特点, 可使三聚氰胺与干扰峰有效分离, 在乙腈为30 %时分离良好。

2.3.2 提取条件的选择

提取时考察了三氯乙酸水溶液、乙酸铅水溶液、乙腈的沉淀蛋白效果, 发现三氯乙酸水溶液、乙酸铅水溶液均需在浓度较大的条件下才能够有效的沉淀乳制品中蛋白质, 但三氯乙酸、乙酸铅的浓度过大会影响色谱柱的使用寿命, 甚至会造成色谱系统的堵塞, 而乙腈的沉淀蛋白的效果良好, 三聚氰胺的回收率在93 %以上, 提取液与流动相的组成基本相同, 有利于保护色谱系统, 所以选用乙腈作为提取溶剂。提取时, 样品先用水充分分散、混匀, 然后再沉淀

蛋白, 可以提高三聚氰胺的回收率, 但在蛋白质沉淀前样品中的水最好不要超过15 mL, 否则沉淀蛋白的效果不佳。

3 结论

本研究首次建立了乳制品中三聚氰胺的检测方法, 该方法简便、快捷、稳定、可靠, 对乳制品中的三聚氰胺检测具有广泛的适用性, 对于鉴别乳制品中的“伪蛋白”, 监控“以次充优”现象, 控制乳制品的质量安全, 保障人们的饮食安全具有积极的社会意义。

参考文献

[1] U.S. Food and Drug Administration: Interim melamine and analoguessafety / risk assessment [EB/OL]. ( 2007- 05- 25) . http:/ /https://www.docsj.com/doc/9f16200559.html,.

[2] WENDY C A, SHERRI B T, CHRISTINE M K, et al. Determinationof Melamine Residues in Catfish Tissue by Triple QuadrupoleLC- MS- MS with HILIC Chromatography[J]. Laboratory InformationBulletin, 2007, 23 : 4396.

[3] YOKLEY R A, MAYER L C, REZAAIYAN R. Analytical Methodfor the Determination of Cyromazine and Melamine Residues in SoilUsing LC- UV and GC- MSD[J]. J Agric Food Chem, 2000, 48: 3352- 3358.

[4] SANDHO J V, IBANEZ M, GRIMALT S, et al. Residue Determinationof Cyromazine and Its Metabolite Melamine in Chard Samples byIon - pair Liquid Chromatography Coupled to Electrospray TandemMass Spectrometry [J]. Analytica Chimica Acta, 2005, 530 (2): 237 -243.

[5] ONO S, FUNATO T, INOUE Y, et al. Determination of MelamineDerivatives, Melame, Meleme, Ammeline and Ammelide by High -performance Cation- exchange Chromatography [J]. Journal of ChromatographyA, 1998, 815 (2): 197 - 204.

[6] ISHIWATA H, INOUE T, YAMAZAKI T, et al. Liquid ChromatographicDetermination of Melamine in Beverages [J]. J Assoc Off AnalChem, 1987, 70 (3): 457 - 460.[7] TAKIKO S, HAJIMU I, KUNITOSHI Y, et al. Determination ofMelamine and Three Hydrolytic Products by Liquid Chromatography[J]. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology, 1990,

44 (4): 567 - 571.

离子交换色谱

离子交换色谱 一、实验原理： 离子交换层析 (Ion Exchange Chromatography 简称为 IEC) 是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂 ; 而带有负电荷的称之阳离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的pH条件下，其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质，结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。 离子交换层析是用离子交换剂作固定相，利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的层析方法。 即溶液中的离子同离子交换剂上功能基团交换反应的过程。 带电荷量少，亲和力小的先被洗脱下来，带电荷量多，亲和力大的后被洗脱下来。 二、实验设计 离子交换剂；缓冲液；洗脱剂 具体操作： 1、离子交换介质的选择： 考虑目的分子的大小，目的分子会影响其接近介质上的带电功能集团；功能集团的强弱，目的分子稳定，选择强交换介质。 对于大多数纯化步骤来说，建议开始的时候使用强离子交换柱，可在摸索方法的过程中有一个宽的pH范围。对于一个已知等电点的蛋白质，可根据其等电点来选择。如果选用阴离子交换剂，使用缓冲液的pH值应高于该蛋白质等电点，因为此时蛋白质在该缓冲液中携带净负电荷，可与阴离子交换剂结合。如果选用阳离子交换剂，缓冲液的pH值应低于该蛋白质的等电点，因为此时蛋白质在该缓冲液中携带净正电荷，可与阳离子交换剂结合。对于一个未知等电点的蛋白质，可以先选择一个阴离子交换剂，再选择一个中性的pH缓冲液，将蛋白质样品透 析至pH7.0，然后过阳离子交换柱，根据过柱后的结果确定下一个使用的缓冲液的pHo 如果目的蛋白再穿过液中，说明目的蛋白在此 pH条件下带正电荷，可将缓冲液升高一个pH,将蛋白质样品透析纸8.0，然后再过阴离子交换柱，根据过柱后的结果确定下一个使用的缓冲液的 pH。以此类推，直至目的蛋白能够结合在阴离子交换柱上为止，也可用阳离子交换剂作类似的选择，不过要注意，pH 的改变应向减小的方向进行。 功能集团的强弱 一般情况下，在分离等电点pH为6-9的目的分子，尤其是当目的分子不稳定时，需要较温和的色谱条件才会选用弱交换介质。 流动相(缓冲液)的选择： 离子交换色谱的流动相必须是有一定离子强度的并且对 pH有一定缓冲作用的溶

第七节离子交换色谱

第七节离子交换色谱 离子交换色谱(ion-exchange chromatography，IEC)是发展最早的色谱技术之一。20世纪30年代人工合成离子交换树脂的出现对于离子交换技术的发展具有重要意义，基于苯乙烯-二乙烯苯的离子交换树脂至今仍是最广泛使用的一类离子交换树脂。但它并不十分适合对生物大分子如蛋白质、核酸、多糖等的分离，因为:①树脂交联度太大而颗粒内网孔较小，蛋白质分子无法进颗粒内部，只能吸附在表面，造成有效交换容量很小；②树脂表面电荷密度过大，使蛋白质在其上吸附得过于牢固，必须用较极端的条件才能洗脱，而这样的条件往往易造成蛋白质变性；③树脂的骨架具疏水性，一旦与蛋白质之间发生疏水相互作用，也容易造成蛋白质变性失活。 20世纪50年代中期，Sober和Peterson合成了羧甲基(CM-）纤维素和二乙氨乙基（DEAE-）纤维素，这是两种亲水性和大孔型离子交换剂。其亲水性减少了离子交换剂与蛋白质之间静电作用以外的作用力，而大孔型结构使蛋白质能进人网孔内部从而大大提高了有效交 换容量，而纤维素上较少的离子基团有利于蛋白质的洗脱，因此这两种离子交换剂得到了极为广泛的应用。此后，多种色谱介质特别是颗粒型介质被开发和合成，包括交联葡聚糖凝胶、交联琼脂糖、聚丙烯酞胺以及一些人工合成的亲水性聚合物等，以这些介质为骨架结合上带电基团衍生而成的离子交换剂也层出不穷，极大地推动了离子交换技术在生化分离中的发展和应用。 一、离子交换色谱相关理论 (一)基本原理 离子交换色谱分离生物分子的基础是待分离物质在特定条件下与离子交换

剂带相反电荷因而能够与之竞争结合，而不同的分子在此条件下带电荷的种类、数量及电荷的分布不同，表现出与离子交换剂在结合强度上的差异，在离子交换色谱时按结合力由弱到强的顺序被洗脱下来而得以分离。离子交换色谱的原理和一般步骤如图6.7-1所示。 图6.7-1 离子交换色谱原理 梯度缓冲液中的离子；极限缓冲液中的离子； 待分离的目标分子；▲需除去的杂质 1- 上样阶段，此时离子交换剂与平衡离子结合；2- 吸附阶段，混合样品中的分子与离子交换剂结合；3- 开始解吸阶段，杂质分子与离子交换剂之间结合较弱而先被洗脱，目标分子仍处于吸附状态；4- 完全解吸阶段，目标分子被洗脱；5- 再生阶段，用起始缓冲液重新平 衡色谱柱，以备下次使用 蛋白质、多肽、核酸、聚核苷酸、多糖和其他带电生物分子正是如此通过离子交换剂得到了分离纯化，即带负电荷的溶质可被阴离子交换剂交换，带正电荷的溶质可被阳离子交换剂交换。 (二)基本理论 1 . 离子交换作用 离子交换剂由不溶性高分子基质、荷电功能基团和与功能基团电性相反的反离子组成，在水溶液中，与功能基团带相反电荷的离子(包括缓冲液中的离子、

离子交换与离子交换色谱

仲恺农业工程学院Array论文题目：离子交换与离子交换色谱 论文作者：陈维权万辉 作者学号：201111014228 201111014229 所在院系：化学化工学院 专业班级：应用化学112班 指导老师：刘展眉

离子交换与离子交换色谱 摘要 本文对离子交换与离子交换色谱技术进行了综述。简要介绍了离子交换剂的作用原理；重点系统的论述了有机离子交换技术和无机离子交换技术的研究进展。并展望了有机离子交换技术和无机离子交换技术的发展方向。 关键词 离子交换色谱离子交换剂有机离子交换无机离子交换 Abstract This article by ion-exchange chromatography and ion exchange technologies for review. Brief description of the action principle of ion exchanger; key system deals with organic and inorganic ion-exchange technology of ion-exchange technology advances. And the prospect of organic ion exchange technology and development trend of inorganic ion-exchange technology. Keywords Ion Exchange Color spectrum Ion exchanger Organic ion exchange Inorganic ion exchanger 引言 随着科学技术的发展，现代分析化学的分析对象越来越复杂，待检测组分含量越来越复杂，待检测组分含量越来越低，在地球和宇宙科学、环境科学、生命科学、材料科学以及医学和考古学中，经常要求检测μg∕g,nm∕g,pg∕g甚至更低含量的组分。目前虽然有许多灵敏度和选择性很高的仪器分析方法，但在分析实践中，常常由于存在基体效应以及其他各种干扰而难以得到准确的结果，因此在分离富集仍然是分析方法中不可缺少的重要环节。 回顾化学的发展历史便可以发现：化学的发展离不开分离富集。元素周期表中的各个元素的发现，经典的化学分离和提纯方法都曾经起着重要作用。从二十世纪开始，各种天然放射性元素的逐个发现，人工放射性元素的获得，原子核裂变现象的最终确认，几乎都离不开各种化学分离技术。今年来生命科学的许多重要成就，也都与分离科学有着紧密联系。在大多数分析实验中，对复杂物料的分析或痕量、超痕量分析一般均采用样品制备-分解-分离富集-测定-数据处理的分析流程，也就是说，分离富集是分析流程中必不可少，而且往往是相当困难而又关键的环节。从分析仪器的研制和发展趋势看，分离富集技术与测量技术紧密结合是仪器分析的必然趋势。目前最有成效的是气相色谱仪、高效液相色谱仪、离子色谱仪以及测汞仪等，它们都是集分离-

离子色谱法

一、离子色谱（IC）基本原理 离子色谱是高效液相色谱（HPLC）的一种，其分离原理也是通过流动相和固定相之间的相互作用，使流动相中的不同组分在两相中重新分配，使各组分在分离柱中的滞留时间有所区别，从而达到分离的目的。 二、离子色谱仪的结构 离子色谱仪一般由四部分组成，即输送系统、分离系统、检测系统、和数据处理系统。输送系统由淋洗液槽、输液泵、进样阀等组成；分离系统主要是指色谱柱；检测系统（如果是电导检测器）由抑制柱和电导检测器组成。 离子色谱的检测器主要有两种：一种是电化学检测器，一种是光化学检测器。电化学检测器包括电导、直流安培、脉冲安培、和积分安培；光化学检测器包括紫外－可见和荧光。电导检测器是IC的主要检测器，主要分为抑制型和非抑制型（也称为单柱型）两种。抑制器能够显著提高电导检测器的灵敏度和选择性，其发展经历了四个阶段，从最早的树脂填充的抑制器到纤维膜抑制器，平板微膜抑制器和先进的只加水的高抑制容量的电解和微膜结合的自动连续工作的抑制器。 三、离子色谱基本理论 离子色谱主要有三种分离方式：离子交换离子排斥和反相离子对。这三种分离方式的柱填料树脂骨架基本上都是苯乙烯/二乙烯苯的共聚物，但是树脂的离子交换容量各不相同，以下就主要介绍离子交换色谱的分离机理。 在离子色谱中应用最广的柱填料是由苯乙烯-二乙烯基苯共聚物制得的离子交换树脂。这类树脂的基球是用一定比例的苯乙烯和二乙烯基苯在过氧化苯酰等引发剂存在下，通过悬浮物聚合制成共聚物小珠粒。其中二乙烯基苯是交联剂，使共聚物称为体型高分子。

典型的离子交换剂由三个重要部分组成：不溶性的基质，它可以是有机的，也可以是无机的；固定的离子部位，它或者附着在基质上，或者就是基质的整体部分；与这些固定部位相结合的等量的带相反电荷离子。附着上去的集团常被称作官能团。结合上去的离子被称作对离子，当对离子与溶液中含有相同电荷的离子接触时，能够发生交换。正是后者这一性质，才给这些材料起了“离子交换剂”这个名字。 离子交换法的分离基理是离子交换，用于亲水性阴、阳离子的分离。阳离子分离柱使用薄壳型树脂，树脂基核为苯乙烯/二乙烯基苯的共聚物，核的表面是磺化层，磺酸基以共价键与树脂基核共聚物相连；阴离子分离柱使用的填料也是苯乙烯/二乙烯基苯的共聚物，核外是磺化层，它提供了一个与外界阴离子交换层以离子离子键结合的表面，磺化层外是流动均匀的单层季铵化阴离子胶乳微粒，这些胶乳微粒提供了树脂分离阴离子的能力，其分离基理基于流动相和固定相（树脂）阳离子位置之间的离子交换。 淋洗液中阴离子和样品中的阴离子争夺树脂上的交换位置，淋洗液中含有一定量的与树脂的离子电荷相反的平衡离子。在标准的阴离子色谱中，这种平衡离子是CO 32-和HCO 3-；在标准的阴离子色谱中，这种平衡离子是H +。离子交换进行的过程中，由于流动相可以连续地提供与固定相表面电荷相反的平衡离子，这种平衡离子与树脂以离子对的形式处于平衡状态，保持体系的离子电荷平衡。随着样品离子与连续离子（即淋洗离子）的交换，当样品离子与树脂上的离子成对时，样品离子由于库仑力的作用会有一个短暂的停留。不同的样品离子与树脂固定相电荷之间的库仑力（即亲和力）不同，因此，样品离子在分离柱中从上向下移动的速度也不同。样品阴离子A -与树脂的离子交换平衡可以用下式表示： 阴离子交换 A - ＋（淋洗离子）－＋NR 4-R ＝ A -+NR 4-R ＋ （淋洗离子） 对于样品中的阳离子，树脂交换平衡如下（H +为淋洗离子）： 阳离子交换 C + ＋ H +－O 3S-R ＝ C +－O 3S-R ＋ H + 在阴离子交换平衡中，如果淋洗离子是HCO 3-，可以用下式表示阴离子交换平衡： [][][][]4 33 4NH CO H A HCO NR A K + ---+-= K 是选择性系数。K 值越大，说明样品离子的保留时间越常。选择性系数是电荷、离子半径、系统淋洗液种类和树脂种类的函数。 离子半径 样品离子的价数越高，对离子交换树脂的亲和力越大。因此，在一般的情况下，保留时间随离子电荷数的增加而增加。也就是说，淋洗三价离子需要采用高离子强度的淋洗液，二价离子可以用较低浓度的淋洗液，而低于一价离子，所需淋洗液浓度更低。 离子半径

离子交换色谱-

离子交换色谱- 紫外检测法测定乳制品中三聚氰胺 何强1, 孔祥虹1, 李建华1, 乐爱山1, 赵洁2 ( 1. 陕西出入境检验检疫局, 西安710068; 2. 西安理工大学理学院, 西安710054) 摘要: 建立离子交换色谱- 紫外检测法测定乳制品中三聚氰胺。样品直接用水和乙腈提取, 分析时用LC - SCX离子交换色谱柱分离, 浓度为0.05 mol/ L磷酸二氢钾溶液( pH值为3.0) - 乙腈( 70 ∶30) 为流动相, 流速1.0 mL/min, 在紫外波长240 nm下检测。三聚氰胺在0.5 ~ 100.0 mg/ L的范围内, 质量浓度与色谱峰面积呈良好的线性关系( r=0.9999) , 最低检出限为1.0 mg/ kg, 加标回收率在93.8 % ~102.5 %范围内, 相对标准偏差(RSD) 小于3.5 %。该方法简便、快速、准确, 能够满足检测要求。 关键词:三聚氰胺; 乳制品; 离子交换色谱 Determination of melamine in dairy products with ion exchange chromatography and UV detection HE Qiang1, KONG Xiang- hong1, LI Jian- hua1, YUE Ai- shan1, ZHAO Jie2 (1. Shaanxi Entry - Exit Inspection and Quarantine Bureau, Xi' an 710068, China; 2. College of Science, Xi' an Universityof Technology, Xi' an 710054, China) Abstract: A method was developed for the determination of melamine in dairy products with ion exchange chromatography. Samples were extracted with water and acetonitrile. Chromatographic analysis was performed on a LC - SCX column eluted with 0.05 mol/ L KH2PO4(pH=3.0) - acetonitrile (70∶30) at a flow rate of 1.0 mL/min and UV detection at 240 nm. The present method showed good linear relationship(r = 0.9999) for melamin at the range of 0.5 ~ 100.0 mg/ L, the detection limit were 1.0 mg/ kg, the recoveries ranged from 93.8 % to102.5 % with relative tandard deviations (RSD) less than 3.5 %. The ethod is simple, fast, accurate for the melamine analysis. Key words: melamine; dairy products; ion exchange chromatography 正文： 最近美国FDA调查确认宠物食品受三聚氰胺污染是造成许多宠物非正常死亡的原因, 从而要求出口到美国的含蛋白产品必须检测三聚氰胺, 已经对我国的食品出口企业产生了较大的负面影响。三聚氰胺(melamine)简称三胺, 学名三氨三嗪, 别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺, 分子式为C3N6H6, 是一种重要的氮杂环有机化工原料, 具有一定的肾毒性。因为其分子中 含有大量氮元素, 而用全氮法检测蛋白质含量时不能够区分这种“伪蛋白氮”, 所以一些不法

离子交换色谱法标准操作程序

方法摘要： 离子交换色谱（Ion Exchange Chromatography，IEC）以离子交换树脂作为固定相，树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团。当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时，组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换。溶液pH低于C产品组分等电点PI时，组分带正电荷，可以跟固定相上的阳离子交换，吸附在固定相上，用盐浓度梯度洗脱时，组分按照表面正电荷从少到多的顺序被洗脱下来。紫外检测器检测280nm处的响应值，根据组分峰面积计算纯度。 范围： 适用于本公司生产出的C产品的中间产品、原液、成品及稳定性样品的电荷异质性分析。职责： 操作人员： ?严格按照此规程要求进行操作。 岗位主管： ?起草文件，并确保操作程序的准确性、技术内容的完整性及文件的及时更新； ?监督操作规程是否与实际过程一致，资源是否满足要求； ?培训，确保此操作规程的正确实施。 程序： 1术语解释 无 2试剂和材料 ?色谱柱：阳离子交换色谱柱，例如MabPac TM SCX-10，4.0×250mm，10μm（Thermo）?试剂：N-（2-乙酰胺基）-2-氨基乙磺酸（ACES，分析纯），氯化钠（NaCl，色谱纯），盐酸（HCl，分析纯），磷酸氢二钠（Na2HPO4，色谱纯），磷酸（H3PO4，色谱纯），纯 化水（自制） ?滤膜：孔径为0.45μm或以下 注：所用试剂可被同等或更高级别的试剂替代，但应证明适用；所有材料遵循厂家有效期。3仪器设备 ?液相色谱仪：例如Agilent 1260 ?天平，精确到mg ?pH计 ?溶剂过滤装置 ?离心机（转速10000 rpm以上）

?移液器（10-1000 μl） 4溶液配制 4.1流动相配制 4.1.1流动相A：20 mM ACES，pH 6.20 称取ACES 3.64 g，加入1000 ml 水搅拌至完全溶解，HCl调pH 6.20±0.02； 经0.45 μm滤膜过滤，室温保存，有效期3天，使用前超声脱气15min。 4.1.2流动相B：20 mM ACES，500 mM NaCl，pH 6.20 称取ACES 3.64 g，NaCl 29.22 g，加入1000 ml水搅拌至完全溶解，HCl调pH 6.20±0.02； 经0.45 μm滤膜过滤，室温保存，有效期3天，使用前超声脱气15min。 注：流动相调pH时，确认溶液温度在23~27℃。 4.1.3色谱柱保存液：20 mM Na2HPO4/H3PO4，pH 6.5 称量2.84 g Na2HPO4，加入1000 ml纯水搅拌溶解，用H3PO4调节pH值为6.50±0.02，使用0.45 μm滤膜过滤后，2-8℃低温保存，有效期1个月。 4.2 样品溶液配制 4.2.1参比品溶液配制 取规定的参比品，根据蛋白浓度标示量，用制剂缓冲液稀释至5.0 mg/ml，转移到样品 瓶。 例：参比品CDS20180209，蛋白标示量为22.0 mg/ml，稀释4.4倍（40 μl参比品+136μl 制剂缓冲液），稀释后浓度为5.0 mg/ml。 4.2.2供试品溶液配制 稀释方法同4.2.1。 对于浑浊的样品，需经0.22 μm的滤膜过滤，或者10000 rpm离心10min，取上清液至 样品瓶。 5检测方法 5.1色谱系统准备 5.1.1打开sealwash（清洗液：10%异丙醇-水溶液）；更换洗针瓶（清洗液：水）； 5.1.2以检测方法的流动相起始比例（流动相A：4%，流动相B：96%），1.0 ml/min的流速平 衡至基线平稳，至少20min。 5.1.3关键色谱参数和洗脱梯度

tosoh高性能离子交换色谱柱

No.109 TSKgel STAT系列色谱柱 —目录— 页码 1. 前言 1 2. 色谱柱的基本特点 1 2-1. 填料特点 1 2-2. 柱压 2 2-3. 标准蛋白质的分离 2 2-4. 核酸的分离 4 2-5. 样品载量 5 3. 阴离子交换色谱柱的应用实例 6 4. 阳离子交换色谱柱的应用实例10 5. 总结14

1. 前言 离子交换色谱法是一项广泛应用于生物制药、生物化学和食品工业等领域的分析技术，其可以轻松地对生物大分子样品（例如蛋白质和核酸）进行分离和定量分析。离子交换色谱包括阴离子交换色谱和阳离子交换色谱，前者使用带季胺或叔胺基团的填料，后者使用带磺酸或羧酸基团的填料。可以根据目标蛋白质的化学性质、空间立体构造、等电点，或者根据与杂质组分间的不同分离选择性，选择最适填料装填的离子色谱柱。核酸一般采用阴离子交换色谱柱进行分离分析。东曹离子交换色谱柱包括TSKgel 5PW系列和TSKgel NPR系列产品，前者使用一种多孔性填料，可用于实验室规模的分离和纯化工作，后者使用非多孔性填料（粒径：2.5μm），适用于高速、高分辨率和微量分析。 无论是不同粒径的TSKgel PW系列高速分析、中高压制备填料，亦或是工业生产制备用TOYOPEARL系列的中低压层析填料，其填料基质的化学组成和骨架构造都是一致的，因此实验室规模下使用TSKgel 5PW系列色谱柱优化获得的分离条件可以很容易地规模放大到生产级别。 TSKgel NPR系列色谱柱使用非多孔性填料（粒径：2.5 μm），因此尤其适用于高分辨率和高通量的分析。此外，该类色谱柱对低浓度的肽和蛋白质样品分离、分析时，亦可获得良好的回收率。 最近推出的TSKgel STAT系列色谱柱，使用非多孔性填料，能够实现在较低柱压下获得与TSKgel NPR系列色谱柱相同或更好的保留及分辨率。本报告将详细介绍TSKgel STAT系列色谱柱的基本特点和部分应用实例。 2. 色谱柱的基本特点 2-1. 填料特点 TSKgel STAT系列色谱柱包括导入了季胺基团、非多孔、亲水性聚合物基质填料装填的TSKgel Q-STAT阴离子交换色谱柱和TSKgel DNA-STAT阴离子交换色谱柱，可以提供10、7和5μm 多种粒径选择；包括导入了磺酸基团、非多孔、亲水性聚合物基质填料装填的TSKgel SP-STAT强阳离子交换色谱柱，可以提供10和7μm的两种粒径选择；还包括导入了羧酸基团、非多孔、亲水性聚合物基质填料装填的TSKgel CM-STAT弱阳离子交换色谱柱。这些色谱柱的规格和特点详见表1。 TSKgel STAT系列色谱柱包括尺寸为3.0 mm I.D.×3.5 cm 的、设计用于进行1至2分钟内完成分析的高通量色谱柱（粒径10μm：高通量色谱分析柱）；包括尺寸为4.6 mm I.D.× 10 cm的、设计用于进行高分辨率分析的色谱柱（粒径7μm：高分辨率色谱柱）。由于该类色谱柱使用的填料基质的机械强度高，填料几乎不会因溶剂改变而发生收缩或膨胀，所以也可以使用添加了有机溶剂的洗脱条件。在洗脱液中适当添加有机溶剂，可以有效抑制高疏水性样品的吸附，从而加快洗脱速度。此外，也可以通过在洗脱液中适当添加有机溶剂，有效清洗和去除实际样品分析中吸附在色谱柱填料上的污染物质。 表1 . TSKgel STAT系列色谱柱填料特点

离子交换色谱柱使用说明

XB-SCX色谱柱使用说明 发布日期：2011-08-23 一. Ultimate? XB-SCX强阳离子交换柱说明： 基质：超高纯全多孔球形硅胶； 填料：硅胶基质上键合有苯基磺酸基（－C6H4－SO3－）； pH范围：使用范围为2.0~6.5； 最大使用压力：40Mpa（即6000psi）； 最高使用温度：80℃； 色谱柱内保存溶液：100％甲醇； 色谱柱两端筛板孔径均为2um，色谱柱可以反向冲洗。 二. Ultimate? XB-SCX色谱柱的使用特性： 1. 常用于分离在水溶液中呈阳离子态的化合物； 2. Ultimate? XB-SCX色谱柱能与水和有机溶剂兼容，可用甲醇、乙腈和水（包括缓冲盐溶液）作流动相进行分析； 3. 阳离子化合物的保留能力与流动相的pH、离子强度、流动相中有机相的比例以及温度有关。通常离子强度越大保留时间越短，流动相中有机相的比例越大保留时间越长； 4. 柠檬酸盐和磷酸盐等缓冲盐通常用于调整流动相的pH和离子强度以改善分离度。流动相的pH应该维持在pH 2.0~6.5； 5. 阳离子柱的平衡时间相对C18而言较长。 三. Ultimate? XB-SCX色谱柱的维护 1. 流动相抽滤过0.45um滤膜，样品针筒过滤； 2. 使用之前，先用过渡流动相以1.0ml/min过渡30min，然后用流动相走基线，基线平稳后进样；使用之后，先用100mmol/L的NaClO4 溶液（调节pH<4）以1.0ml/min反向冲洗色谱柱40min；然后用水反向冲洗30min，再用甲醇反向冲洗40min，最后保存在纯甲醇中；过渡流动相是指：有机相和水相比例与流动相相同，只是过渡流动相不含缓冲盐； 3. 建议： 1）用保护柱和预柱以延长色谱柱的使用寿命； 2）使用一段时间（约一周）后需用纯甲醇（或乙腈）以1.0ml/min反向冲洗色谱柱90min，冲洗过程中注意过渡，防止缓冲盐析出。 四. Ultimate? XB-SCX色谱柱的保存 1. 长期保存：保存在纯甲醇（或乙腈）中。用纯甲醇（或乙腈）保存之前需确保色谱柱内不含缓冲盐； 2. 短期保存（一、两天）：保存在与流动相的比例相同但不含缓冲盐的过渡流动相中。如果流动相中不含有机相或有机相过低，则保存在甲醇（或乙腈）：水＝75：25中。 XB-SAX色谱柱使用说明 发布日期：2011-08-23