安捷伦液相色谱柱选择小分子

安捷伦液相色谱柱常用系列及其价格

ZORBAX系列产品

ZORBAX Eclipse Plus ZORBAX StableBond ZORBAX Eclipse XDB Pursuit/

Pursuit XRs ZORBAX Extend-C18 ZORBAX Bonus-RP SB-AQ Polaris

适合小分子化合物分离的色谱柱

1）Poroshell 120 色谱柱

?高柱效、高分离度，柱反压相当于亚2 μm 柱的50%

?2 μm 筛板，对复杂基质的样品仍具有稳定的高性能能

?与400 bar和600 bar 的HPLC 以及UHPLC 兼容

?其键合相的扩展系列与ZORBAX 系列色谱柱的相对应，能可靠地进行方法转换

?具有良好选择性和峰形

?具有优异的重现性

安捷伦Poroshell 120 柱粒径为2.7 μm，由1.7 μm 直径的实心核和0.5 μm 厚的多孔外层构成。这种小粒径填料具有与亚2 微米柱类似的高柱效，但柱反压低40-50%。这种高柱效、高分离度色谱柱可以用于任何类型的液相色谱。多孔层和实心核限制了扩散距离，提高了分离速度，而窄粒径分布提高了柱效和分离度。该柱支持高压，可以采用多柱串联实现最高的分离度和柱效。Poroshell 300柱采用了同样的原理，非常适用于生物分子的快速、高分离度分离。

2）ZORBAX 超高压快速高分离度（RRHD）1.8 μm 柱

?耐高压（1200 bar）柱在1290 Infinity 液相色谱仪或其它超高压快速液相色谱仪获得最佳结果

?1.8 μm 填料为大多数分离提供了最高分离度

?现提供12 种ZORBAX 键合相，包括提供出色峰形的Eclipse Plus C18、低pH 下稳定的ZORBAXStableBond C18、以及Bonus-RP、Eclipse PAH、Eclipse Plus Phenyl-Hexyl 和Extend-C18

?同时提供HILIC Plus 柱

?与具有相同键合相的ZORBAX 3.5 μm 和5 μm 柱具有相同的选择性，且与任何液相色谱仪兼容ZORBAX 超高压快速高分离度（RRHD）柱是ZORBAX 1.8 μm 填料系列色谱柱的扩展。新的RRHD 柱采用改良的填充工艺，在安捷伦1290 Infinity LC 或其它UHPLC 仪器上使用时，在1200 bar 压力下仍能保持稳定。RRHD 1.8 μm 柱有几种规格，50、100

C 和低浓度缓冲液（范围10-20 mM）条件下可获得最高的柱稳定性。300SB-C18 可以在高达90 °C 条件下使用。如果pH 6-8，可选择Eclipse Plus C18 柱

** 在pH 8 以下时温度限为60 °C ，pH 8-11.5 时温度限为40 °C

3）ZORBAX Eclipse XDB

?有四种选择性可用于方法开发优化

?对碱性、酸性和中性化合物都有极佳的峰形

?在宽pH 范围（pH 2-9）内的高性能

?填料粒径范围从1.8 μm 到7 μm

?超密键合和双封端使寿命延长

Agilent ZORBAX Eclipse XDB 色谱柱（C18、C8、苯基和氰基）提供四种键合固定相，用于方法开发优化。这些色谱柱可在宽pH 范围（pH 2-9）内提供良好的峰形，用一系列色谱柱可灵活开发其他方法。Eclipse XDB 色谱柱可以在低pH（2-3）条件下用于方法开发，且同样的色谱柱还可以在中等pH（6-8）范围内进行方法开发。在中等pH 范围内，残留硅醇基活性更大，且更容易造成拖尾的相互作用。为了克服这些相互作用，Eclipse XDB 色谱柱通过专利工艺进行超密键合和双封端，以覆盖尽可能多的活性硅醇基。最终碱性化合物在pH 2-9 范围内具有出色的峰形。可提供粒径为1.8、3.5、5 和7 μm 的Eclipse XDB 色谱

指标只代表一般意义上的典型值

*Eclipse XDB 色谱柱在较宽的pH 范围内有良好的稳定性。所有硅胶基色谱柱在pH 6-9 条

4）ZORBAX 80A StableBond

?低pH 范围（最低到pH 1）分离时具有最长的柱寿命和最好的重现性

?专利的稳定色谱柱固定相允许其在高温、低pH 条件下使用而不发生降解

?六种不同的键合相提供了广泛的选择性——SB-C18、SB-C8、SB-CN、SB-Phenyl、SB-C3 和SB-Aq

?高纯度（B 型）硅胶保证了良好的峰形安捷伦ZORBAX StableBond 色谱柱使用专利的、独特的、单官能团硅烷，其具有较大的二异丁基(SB-C18) 或二异丙基（SB-C8、SB-C3、SB-Phenyl、SB-CN 和SB-Aq）侧链基团，空间位阻关键的硅氧烷键合到硅胶表面，以避免在低pH 条件下水解破坏。为了在酸性流动相条件下提供良好的稳定性并使寿命最长，重现性最佳，StableBond 填料不封端。高纯度、低酸度的硅胶为酸性、碱性和中性化合物提供了出色的峰形，因此使得StableBond 色谱柱成为低pH 方法开发的首选。

指标只代表一般意义上的典型值*StableBond 柱最适合在低pH 条件下使用。所有硅胶基色谱柱在pH 6-8 条件下，采用< 40 °C 的柱温和较低的缓冲液浓度（0.01-0.02 M）操作，可获得最高的柱稳定性。在中等pH 范围内，建议使用Eclipse Plus、Eclipse XDB 和Bonus-RP 色谱柱

5）ZORBAX Rx

?推荐为低pH 条件下Eclipse Plus C18、Eclipse XDB-C18 和StableBond SB-C18 选择性替代柱；较高温度的应用，推荐使用StableBond

?碳载量比SB-C18 柱高（12% 与10%）

?高稳定性和良好峰形，适用于低pH 应用（最高pH 8）

?经二甲基十八烷基硅烷化，未封端

指标只代表一般意义上的典型值

pH 为6-9 时，所有硅胶基色谱柱在< 40 °C 和低浓度缓冲液（范围0.01-0.02M）条件下可获得最高的柱稳定性

6)ZORBAX 80A Extend-c18

?在高pH（高达pH 11.5）条件下，柱效高且寿命长

?独特的双配位键合和双封端提供了高pH 稳定性

?比聚合物基色谱柱具有更高的柱效和更好的峰形

?改善了碱性化合物的保留、分离度及峰形

?LC/MS 分离多肽的高灵敏度

安捷伦ZORBAX Extend-C18 色谱柱使用创新性的双配位C18-C18 键合技术，使得在高pH 条件下使用硅胶基色谱柱开发高分离度分离成为可能。在高pH 条件下，未带电的碱性化合物将不与下面的硅胶相互作用。实现了具有出色峰形的高效分离，并且改善了分离度。高pH 分离对于在高pH 溶液中更稳定或更易溶解的化合物的分离也是最佳选择。适用于高pH 条件的流动相缓冲液包括三乙胺、呲咯烷、氨基乙酸、硼酸盐和氢氧化铵。氢氧化铵在pH 10.5 时，对于多肽和小分子LC/MS 分析是非常好的流动相改性剂，与含三氟乙酸的低pH 的流动相相比具有更高的灵敏度。Extend-C18 色谱柱在pH 2-11.5 范围内是稳定的，且对于所有类型化合物都具有良好的峰形。Extend-C18 色谱柱在低pH 条件下还可以提供其他选择

*温度上限在pH 8 以下时为60 °C，pH 8-11.5 时为40 °C

**所有硅胶基质色谱柱在pH 6 以上，采用40 °C 以下的柱温和低浓度缓冲液（0.01-0.02

7）ZORBAX Bonus-R P

?在低pH 和中等pH 条件下，对于难分离的碱性化合物具有出色的峰形

?独特的反相选择性

?使用嵌入极性基团和空间位阻的创新性键合技术

?在100% 水相流动相中可用安捷伦ZORBAX Bonus-RP 色谱柱包含在长烷基链中嵌入的极性酰胺基团。此创新性键合减少了碱性化合物和硅胶基质之间的相互作用，改善了最难分离的碱性化合物的峰形。通过三封端进一步改善了峰形，并延长了色谱柱寿命。此外，二异丙基侧基提供了空间位阻以防止酸性水解，延长了在低pH 条件下的寿命。Bonus-RP 色谱

8）Pursuit 液相柱

在药物开发和药物代谢初期，Pursuit 柱是分析先导化合物和生物样品的理想选择。先进的键合化学与超纯硅胶的独特结合，使色谱柱具有卓越性能。无论是在pH 1.5 或10 的条件下，上述这些因素共同作用，可提高极性化合物的分离速度，并在第一次分离时即可得到优异的分离度和对称峰形。另外，也不再需要离子对试剂（如TFA），从而能最大限度地发挥单通道和平行多通道LC/MS 系统的性能优势。Pursuit 柱执行最严格的质量控制，能够为原料药和获批药物提供可靠、毫无问题的分析。生产工艺中每一步的严格控制和验证确保了色谱柱的重现性。您的实验室通过使用Pursuit 柱，即能获得极为优良的结果。诸如Pursuit PFP（适用于高极性化合物）和Pursuit PAH（适用于环境分析）等特殊选择性柱能为您

最具挑战性的应用提供更出色的选择性。

Pursuit

Pursuit 色谱柱采用200? 的大孔径硅胶，适用于LC/MS 和高通量应用。高配位基密度可提供快40% 的分离速度，且不损失分离度。这些都是通过大孔径硅胶优化传质而实现。Pursuit XRs

Pursuit XRs 具备了在分析研发、质量控制和制备应用方面的性能。Pursuit XRs 色谱柱具有的高配位基密度、100? 孔径、高比表面积硅胶，提高了生产率。因为该色谱柱在保持优异分离度的同时，提供了最大的负载能力、出色的稳定性和方便的可扩展性。

Pursuit XRs Ultra

为使任何仪器都能够在速度和分离度上达到极限，我们设计了采用优化的 2.8 μm 粒径填料和先进的填充工艺。现在，您可以在保持高分离度的同时缩短运行时间。较低的背压允许使用高流速，并且2.8 μm 的超纯硅胶颗粒的柱效比3 μm 色谱柱高10-15%。

指标只代表一般意义上的典型值

9）Polaris 液相柱

在药物开发等领域，随着目标化合物的极性不断增加，拥有一支在水相条件下具有良好性能的反相柱就显得极为重要了。保留固然重要，但也不能发生棘手的次级相互作用。同样，也要避免固定相塌陷和保留时间漂移。解决此问题的最佳色谱柱就是我们的Polaris 系列极性改性柱。从我们基础硅胶的抗塌陷孔结构，到可润湿性的键合相，Polaris 柱适用于高水相条件。该柱具有高密键合、使用超纯硅胶和硅醇基等特点，可获得比其它极性改性柱更好的峰形。

Polaris 系列产品对C18 和C8 固定相进行了不同的极性改性。

Polaris C18-A当您需要使用极性改性柱分离时，Polaris C18-A 是最佳起始柱。C18-A 的极性改性有助于避免低有机相条件下峰形不好和保留问题。

Polaris C8-A

Polaris C8-A 提供了与标准C8 固定相不同的选择性，疏水性比Polaris C18-A 低，使其更适用分析极性样品，总分析时间更短。

Polaris C18-Ether

Polaris C18-Ether 提供了与Polaris C18-A 和标准C18 固定相不同的选择性，通常能增加极性化合物的保留，避免死体积。

Polaris C8-Ether

10）Agilent TC-C8(2) 和HC-C18(2)

对于考虑成本节约的用户，如果您需要常规液相色谱柱并且不需要单独测试ZORBAX、Pursuit 或Polaris 色谱柱，安捷伦TC(2)/HC(2) 色谱柱是一个替代选择。

TC-C18(2)安捷伦的TC-C18(2) 适合分析各种样品，包括天然产物萃取物样品、中药和环境样品、或者需要分析极性和非极性化合物的混合物，包括强碱性化合物。

?较低的碳载量——12%

?非常适合于极性化合物和从低比例有机相开始的梯度分离，或宽的有机相比例范围

?很适合于溶解在水中的样品，或者几乎是100% 的水样品

?可以采用绝大多数常见流动相，包括甲酸、乙酸、三氟乙酸（TFA）和磷酸，其中乙腈和甲醇作为有机改性剂

?在pH 2-8 范围内有优异的性能

HC-C18(2)

安捷伦的HC-C18(2) 是具有更高碳载量的C18 色谱柱，保留作用更强。是替代其它高碳载量色谱柱的理想产品，而且能获得碱性化合物的优异峰形。

?更高的碳载量（17%）为中等极性和非极性化合物提供更高的保留

?尤为适用于非极性化合物和从中等含量有机相的起始分离（有机相至少大于10%）

?是工业样品或溶于有机溶剂/大比例有机溶剂中样品的良好选择

11）PlRP-S 液相柱

?耐用的弹性填料提供重现性结果，寿命更长

?热稳定和化学稳定性高

?遵循USP L21 标准

?用于生命科学、化学、临床研究、能源、环境、食品和农业、材料科学和制药行业

?100A-4000A 的孔径可用于分离小分子到大分子复合物及多核苷酸

PLRP-S 系列色谱柱包括各种孔径和填料尺寸，它们都具有相同的化学特性和基本吸附特性。这些填料本质上是疏水的，因此没有键合相，烷基配体需要进行反相分离。因此，能得到无硅醇基、无重金属离子的高重现性原料。该色谱柱拥有多种产品系列，适用于纳流/微量分离，包括自下而上和自上而下的蛋白质组学、分析型分离以及制备纯化。此外，Process

12）ZoRBaX 离子交换柱——SaX 和ScX

?ZORBAX SAX 和300SCX 色谱柱采用耐用的Zorbax 硅胶

?在pH 2-7 范围内稳定

?提供高柱效和快速分离

?与有机流动相改性剂兼容

安捷伦ZORBAX 强离子交换色谱柱现提供强阴离子交换（SAX）和强阴离子交换（300SCX）色谱柱类型。每种色谱柱均填充了键合的5 μm 球形硅胶填料，具有最高的柱效。ZORBAX SAX 填料带有永久键合的季铵基。采用一种三官能团有机硅烷化试剂生产这种填料，以增加它在含水流动相中的稳定性。这种色谱柱是分离水溶性化合物的理想选择，例如芳香族和脂肪族羧酸，以及磺酸类。

ZORBAX SCX 填料孔径为300，并且其硅胶颗粒上化学键合了芳族磺酸基团。这种色谱柱

指标只代表一般意义上的典型值

液相色谱柱的选择

液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障及排除液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合 -CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用： 一、反相色谱柱的选择 1．柱子的PH值使用范围 反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH 2-9或Zorbax的PH 2-11. 5的柱子。 2．填料的端基封尾（或称封口） 把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。 3．戴安公司Acclaim柱子介绍—极性封尾C16固定相柱 戴安公司有28种类型的柱子，Acclaim反相柱填料高纯，金属含量极低，完全封尾。PH 2-9范围内兼容，低流失，高柱效。尤其是2003年推出的Acclaim极性封尾C16柱，是最先商品化的磺酰氨-O链接键的色谱柱，具极低的硅羟基活性，能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。对酸

安捷伦高效液相色谱仪的规范操作

安捷伦高效液相色谱仪的规范操作 1. 目的：明确安捷伦高效液相色谱仪的规范操作，确保数据的准确性。 2. 范围：适用于安捷伦高效液相色谱仪。 3. 职责：检验人员对此负责。 4.操作规程： 系统组成 本系统由1个溶剂二元输送泵（分主/A泵和副/B泵）、手动进样阀、柱温箱、检测器、化学工作站和电脑等组成。 准备 4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的μm滤膜过滤，超声脱气20min。 4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。 4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的μm滤膜过滤。 4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常 将待测样品按要求前处理，准备HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等。 开机： 4.3.1 打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。4.3.2 打开1200 LC 各模块电源。 4.3.3 待各模块自检完成后，双击[Instrument 1 Online]图标，化学工作站自动与1200LC 通讯，进入的工作站画面如下所示。 4.3.4 从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部工具栏]，[ 显示状态工具栏]，[系统视图],[样品视图]，使其命令前有[√]标志，来调用所需的界面。 4.3.5 把流动相放入溶剂瓶中。

4.3.6 打开冲洗阀。 4.3.7 点击[泵]图标，点击[设置泵…]选项，进入泵编辑画面。 4.3.8 设流速：5ml/min，点击[确定]。 4.3.9 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[启动]，点击[确定] ，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。 4.3.10 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[关闭]，点击[确定]关泵，关闭冲洗阀。 4.3.11 点击[泵]图标，点击[设置泵…选项]，设流速：min。 4.3.12 点击泵下面的瓶图标，如下图所示（以单元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积，点击[确定]。 数据采集方法编辑 4.4.1开始编辑完整方法：从[方法]菜单中选择[编辑完整方法…] 项，如下图所示选中除[数据分析]外的三项，点击[确定]，进入下一画面。 4.4.2方法信息 4.4.2.1在[方法注释]中加入方法的信息（如：测试方法）。 4.4.2.2 点击[确定]，进入下一画面。 4.4.3 泵参数设定 4.4.3.1 在[流速]处输入流量,如1ml/min，在[溶剂B]处输入,(A=100-B) ,也可[插入]一行[时间表] ,编辑梯度。在[压力限]处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。 4.4.3.2 点击[确定]，进入下一画面。 4.4.4 柱温箱参数设定 4.4.4.1 在[温度]下面的空白方框内输入所需温度,如：40度。并选中它,点击[更多>>] 键,如图所示,选中[与左侧相同]，使柱温箱的温度左右一致。 4.4.4.2 点击[确定]，进入下一画面。 4.4.5 检测器参数设定：检测波长：一般选择最大吸收处的波长。样品带宽：一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区 域。参比带宽：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省

怎样选择色谱柱

怎样选择色谱柱 现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但 是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。 1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica），以及其他具有极性官能团，如胺基团 (NH2,APS)和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品 中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。 正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷（Hexane）,氯仿（Chloroform）,二氯甲烷（Methylene Chloride）等。 2、反相色谱 反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。 反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。 样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有 更强的保留。 常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（Phenyl）等。 二、聚合物填料

聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在PH值为1～ 14均可使用。 相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白 质等样品的分离非常有效。 现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。 三、其他无机填料 其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的 用途。如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基 键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基 键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由 于HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC， 氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在PH高达12的流动相中使用。 但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用， 新型氧化锆填料也可用于HPLC，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱，应 用PH范围1～14，温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究，加之面临的实验难 度，其重要用途与优势尚在进行中。

高效液相色谱流动相选择

高效液相色谱流动相选择 流动相 流动相的性质要求：一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。 流动相选择 1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。 3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。 选择流动相时应考虑以下几个方面： ①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。④粘度要低(应<2cp)。高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。⑤对样品的溶解度要适宜。如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。⑥样品易于回收。应选用挥发性溶剂。 流动相的pH值 采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在;对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液;分析弱碱样品

常用高效液相色谱柱SOP

常用高效液相色谱柱SOP 1 目的： 色谱柱的使用和保养：液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。 建立高效液相色谱柱日常维护与保养规程，保证能正常使用。 2 适用范围： 本规程适用高效液相色谱柱的维护与保养。 3 责任人： 液相色谱柱使用者。 4 液相色谱柱的安装： 4.1 液相色谱柱的结构： 4.1.1 液相色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝（封头）与柱填料等组成。 柱管：多用不锈钢制成，若果使用时柱压不高于70 kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。用于柱填料的装填。空柱各组件均为不锈钢材质，能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。 压帽：即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽，中部有小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定筛板。 密封环：位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四氟乙烯制成，用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封。 4.1.2柱填料： 液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。 正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3-10 μm的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合-CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。

反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。 常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3-10 μm之间。 4.2色谱柱的安装： 4.2.1拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。 4.2.2拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。 4.2.3 按柱管上标示的流动相流向，将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接(如条件允许，建议在柱前使用保护柱)；柱的出口与检测器连接。连接管是外径为1.57 mm、内径为0.1-0.3 mm的不锈钢管。连接管的两端均有空心螺钉及密封用压环。在接管时一定要设法降低柱外死体积。连接管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底，然后顺时针拧紧空心螺钉，直到拧不动为止。 5 液相色谱柱的使用： 色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。 5.1样品的前处理： 5.1.1最好使用流动相溶解样品。 5.1.2使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 5.1.3使用0.45 μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。 5.2 流动相的配制： 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点： 5.2.1流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。

液相色谱柱的选择和介绍

液相色谱分离速度提高及选择性优化
安捷伦液相色谱柱介绍与选择
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How to fast your LC separation Agilent LC colmns 2008.10.23 Dalian

液相色谱方法开发中如何选择色谱柱 液相色谱方法开发中如何选择色谱柱？
1.根据样品特性选择分离模式 2 色谱柱的适应性和选择性 2.色谱柱的适应性和选择性 3.色谱柱规格的选择
我要一根ODS柱
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HPLC模式选择
溶于有机溶剂
硅胶的正相色谱 溶于正己烷 用不同键合相的正相色谱
溶于甲醇或甲醇/水 或乙腈或乙腈/水
用不同键合相的反相色谱 用不同键合相的反相色谱
分子量<2,000
溶于四氢呋喃
低分子凝胶渗透色谱 用不同键合相的反相色谱
溶于水
非离子化
抑制电离反相键合相色谱 离子对键合相的反相色谱
样品
离子化 硅胶基质的反相色谱 离子交换色谱 溶于有机溶剂 凝胶渗透色谱 凝胶过滤色谱 溶于水 大孔填料的离子交换色谱 用大孔填料的反相色谱
分子量>2,000
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分离模式的选择实例-三聚氰胺分析
三聚氰胺是强极性，弱碱性化合物（pKa=8），微溶于水。
模式一：离子对键合相的反相色谱 对应国标方法GB/T 22388-2008第一法（反相离子对方法） 流动相：离子对试剂（辛烷磺酸钠）溶液：乙腈 ＝ 92:8 色谱柱：ZORBAX SB-C8 4.6x250mm,5um 模式二：硅胶基质的反相色谱（HILIC） 对应安捷伦开发的HILIC模式方法 流动相： 10mM乙酸铵：ACN=11：89 色谱柱：Zorbax Rx-Sil, Rx-Sil 2.1 2 1×150mm, 150mm 5um
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模式三：离子交换色谱 对应安捷伦开发的离子交换方法 流动相：50mM 甲酸铵(pH3.0):乙腈=15:85 色谱柱： ZORBAX 300SCX 4 4.6 6×150mm, 150mm 5um
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高效液相色谱柱的选择

液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障的排除 液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：一、反相色谱柱的选择 1．柱子的PH值使用范围 反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2~8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH 2-9或Zorbax的PH 2-11. 5的柱子。 2．填料的端基封尾（或称封口） 把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。 3．戴安公司Acclaim柱子介绍—极性封尾C16固定相柱 戴安公司有28种类型的柱子，Acclaim反相柱填料高纯，金属含量极低，完全封尾。PH 2-9范围内兼容，低流失，高柱效。尤其是2003年推出的Acclaim极性封尾C16柱，是最先商品化的磺酰氨-O链接键的色谱柱，具极低的硅羟基活性，能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形，与现有的一流色谱柱相比有更好的立体选择性。（下图是Acclaim极性封尾C16柱和市售极性封尾一流色谱柱分离酸性化合物谱图的比较） 二、液相色谱柱的使用 色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。 1、样品的前处理 a、最好使用流动相溶解样品。 b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。 2、流动相的配制 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点： a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长期留在柱中)。 b、流动相与样品不产生化学反应 c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。 d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。 e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。 f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，

常用液相色谱柱选择

常用色谱柱简介 气相色谱毛细柱 （键合，聚二甲基硅氧烷） HP-1，DB-1，P-1，CP-SIL5CB， Ultra-1,007-1,RTx-1,AT-1 类似固定相：SE-30，SP-2100，OV-1，OV-101,使用 温度：-60℃-320℃ 应用范围：烷烃，芳烃，多环芳烃，醇，酚，酮，酯，醛，胺，卤代烃，吡啶，糖衍生物，氨基酸衍 生物，维生素衍生物，镇痛药，农药，溶剂，胆固SPB-50型中等极性柱 醇，香料，咖啡，食品添加剂等。 (键合, 50%二苯基,50%二甲基聚硅氧烷) 对照品牌：HP-50，HP-17，DB-17，RTx-50，AT-50 SPB-5型弱极性柱 类似固定相：OV-17, SP-2250,使用温度：30℃-310℃（键合，5%苯基，95%甲基聚硅氧烷） 应用范围：烷烃，低沸点芳烃，多环芳烃，醇，甘 对照品牌：HP-5，DB-5，BP-5，CP-SIL 8CB， 油三酸酯，喹啉，卤素化合物，香料，农药，酯，Ultra-2, ,RTx-5,AT-5 镇痛药，除草剂等。 类似固定相：SE-54，SE-52，OV-73 使用温度： -60℃-320℃ PTE-5，PTE-5QTM型弱极性柱 应用范围：烷基苯，多环芳烃，醇，酚，酮，脂肪(MS专用柱,键合,5%苯基,95%甲基聚硅氧烷) 酸酯，苯二甲酸酯，硝基芳烃，芳胺，烷基胺，联 对照品牌：HP-5 MS，DB-5 MS, DB-5.625，XTI-5， 苯胺，卤代烃，多氯联苯，，糖类衍生物，维生素衍BPX625，半挥发污染物分析柱（US EPA方法525， 生物，有机酸，镇痛药，农药，抗组胺药，溶剂，625.5，625） 生物碱，防腐剂，香料等。 类似固定相：SE-54,SE-52 使用温度：-60℃-320℃ 应用范围：多氯联苯，胺，有机磷，有机氯农药，SUPELCOWAX 10型极性柱 含氯除草剂，酚，苯胺，香料等。 (键合,聚乙二醇二万) 对照品牌：HP-Wax，DB-Wax，BP-20，CP-Wax 52CB，SPB-1701型中等极性柱 HP-INNO Wax,AT-Wax (键合, 14%氰丙基,86%二甲基聚硅氧烷) 类似固定相：PEG-20M, CARBOWAX-20M,使用温

常用高效液相色谱柱SOP

常用高效液相色谱柱S O P Prepared on 24 November 2020

常用高效液相色谱柱SOP 1 目的： 色谱柱的使用和保养：液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。 建立高效液相色谱柱日常维护与保养规程，保证能正常使用。 2 适用范围： 本规程适用高效液相色谱柱的维护与保养。 3 责任人： 液相色谱柱使用者。 4 液相色谱柱的安装： 液相色谱柱的结构： 4.1.1 液相色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝（封头）与柱填料等组成。 柱管：多用不锈钢制成，若果使用时柱压不高于70 kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。用于柱填料的装填。空柱各组件均为不锈钢材质，能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。 压帽：即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽，中部有小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定筛板。

密封环：位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四氟乙烯制成，用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封。 4.1.2柱填料： 液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。 正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3-10 μm的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合-CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。 反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。 常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3-10 μm之间。 色谱柱的安装： 4.2.1拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。 4.2.2拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。 4.2.3 按柱管上标示的流动相流向，将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接(如条件允许，建议在柱前使用保护柱)；柱的出口与检测器连接。连接管是外径为1.57 mm、内径为-0.3 mm的不锈钢管。连接管的两端均有空心螺钉及密封用压环。在接管时一定要设法降低柱外死体积。连接管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底，然后顺时针拧紧空心螺钉，直到拧不动为止。

安捷伦液相使用方法

高效液相色谱仪的使用方法2008-05-11 20:24仪器名称：高效液相色谱仪 仪器型号：Agilent 1100 生产厂家：Agilent 使用方法： (一)、开机： 1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。 2、打开1100 LC 各模块电源。 3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面如下所示。 4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。 5、把流动相放入溶剂瓶中。 6、打开Purge阀。 7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。 8 、设Flow：5ml/min，单击OK。 9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。 10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭 Purge valve。 11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。 12、单击泵下面的瓶图标，如图所示（以二元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。 （二）数据采集方法编辑： 1、开始编辑完整方法： 从“Method”菜单中选择“Edit entire method”项，如上图所示选中除“Data analysis ”外的三项，单击Ok，进入下一画面。 2、方法信息： 在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。 单击Ok 进入下一画面。 3、泵参数设定：（以二元泵为例） 在“Flow”处输入流量,如1ml/min，在“Solvent B”处输入70.0,(A=100-B) ,也可Insert 一行”Timetable”,编辑梯度。在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。单击Ok进入下一画面。 4、自动进样器参数设定: 选择合适的进样方式, 如图所示，进样体积1.0ul ,洗瓶位置为6号。“Standard Injection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“Injection with Needle Wash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Use injector program”---可以点击Edit 键进行进样程序编辑。

高效液相色谱柱的选择

现代高效液相色谱中，分离效果好坏的一个重要指标是色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，因此，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。 一、硅胶基质填料 1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。 2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。 常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。 二、聚合物填料聚合物填料多为聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等，其重要优点是在PH值为1—14均可使用。相对于硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物对蛋白质等样品的分离非常有效。现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。 三、其它无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的用途。如，石墨化碳黑正逐渐成为反向色谱柱填料。这种填料的分离不同于硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性。该柱填料一般比烷基键合相硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强。石墨化碳可用于分离某些几何异构体，由于在HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可以用于HPLC。氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可以在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物的作用也很强，应用范围受到一定限制，所以未能广泛应用。新型色谱氧化锆基质填料也可用于HPLC。商品化的只有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱，应用PH1-14，温度可达100℃。由于氧化锆填料是最近几年才开始研究，加之面临的实验难度，其重要用途与优势尚在进行之中。 怎样选择填料粒度目前，商品化的色谱填料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3和5um填料进行。填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，柱压越大，柱压的增加限制了粒度小于3um的填料应用。在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，但不是唯一的因素。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选用更小的粒度的填料是很有用的。3um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um 填料的柱效提高近30%；然而，3um的色谱柱的背压却是5um的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选用更短的色谱柱，即相同的塔板数或分离能力，但是柱长更短，以缩短分析时间。另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。 色谱柱维护 防止色谱柱堵塞

有关于气液相色谱柱常用知识小结2

https://www.docsj.com/doc/eb11451647.html,/html/200901/1146555.html 常用色谱柱简介 气相色谱毛细柱 （键合，聚二甲基硅氧烷） HP-1，DB-1，P-1，CP-SIL5CB， Ultra-1,007-1,RTx-1,AT-1 类似固定相：SE-30，SP-2100，OV-1，OV-101,使用 温度：-60℃-320℃ 应用范围：烷烃，芳烃，多环芳烃，醇，酚，酮，酯，醛，胺，卤代烃，吡啶，糖衍生物，氨基酸衍 生物，维生素衍生物，镇痛药，农药，溶剂，胆固SPB-50型中等极性柱 醇，香料，咖啡，食品添加剂等。 (键合, 50%二苯基,50%二甲基聚硅氧烷) 对照品牌：HP-50，HP-17， DB-17，RTx-50， AT-50 SPB-5型弱极性柱 类似固定相：OV-17, SP-2250,使用温度：30℃-310℃ （键合，5%苯基，95%甲基聚硅氧烷） 应用范围：烷烃，低沸点芳烃，多环芳烃，醇，甘 对照品牌：HP-5，DB-5，BP-5，CP-SIL 8CB， 油三酸酯，喹啉，卤素化合物，香料，农药，酯，Ultra-2, ,RTx-5,AT-5 镇痛药，除草剂等。 类似固定相：SE-54，SE-52，OV-73 使用温度： -60℃-320℃ PTE-5，PTE-5QTM型弱极性柱 应用范围：烷基苯，多环芳烃，醇，酚，酮，脂肪(MS专用柱,键合,5%苯基,95%甲基聚硅氧烷) 酸酯，苯二甲酸酯，硝基芳烃，芳胺，烷基胺，联 对照品牌：HP-5 MS， DB-5 MS, DB-5.625，XTI-5，苯胺，卤代烃，多氯联苯，，糖类衍生物，维生素衍BPX625，半挥发污染物分析柱（US EPA方法525， 生物，有机酸，镇痛药，农药，抗组胺药，溶剂，625.5，625） 生物碱，防腐剂，香料等。 类似固定相：SE-54,SE-52 使用温度：-60℃-320℃ 应用范围：多氯联苯，胺，有机磷，有机氯农药，SUPELCOWAX 10型极性柱 含氯除草剂，酚，苯胺，香料等。

液相色谱柱的选择

液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障及排除 液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱，GPC 柱，聚合物填料柱等。本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用： 一、反相色谱柱的选择 1．柱子的PH值使用范围 反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH2-9或Zorbax的的柱子。 2．填料的端基封尾（或称封口） 把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。 3．戴安公司Acclaim柱子介绍—极性封尾C16固定相柱 戴安公司有28种类型的柱子，Acclaim反相柱填料高纯，金属含量极低，完全封尾。PH2-9范围内兼容，低流失，高柱效。尤其是2003年推出的Acclaim极性封尾C16柱，是最先商品化的磺酰氨-O链接键的色谱柱，具极低的硅羟基活性，能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。对酸性

高效液相色谱试题

高效液相色谱试题 部门姓名得分 一、选择题 1.在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色谱法属于（） A.分配色谱法 B排阻色谱法 C.离子交换色谱法 D.吸附色谱法 2.在高效液相色谱流程中，试样混合物在（）中被分离。 A. 检测器 B. 记录器 C.色谱柱 D. 进样器 3.液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜？（） A.0.5μm B.0.45μm C.0.6μm D.0.55μm 4. 在高固定液含量色谱柱的情况下，为了使柱效能提高，可选用 ( ) A.适当提高柱温 B.增加固定液含量 C.增大载体颗粒直径 D.增加柱 5. 在液相色谱中, 为了提高分离效率, 缩短分析时间, 应采用的装置是 ( ) A. 高压泵 B. 梯度淋洗 C. 贮液器 D. 加温 6. 下列用于高效液相色谱的检测器，（）检测器不能使用梯度洗脱。 A. 紫外检测器 B. 荧光检测器 C. 蒸发光散射检测器 D. 示差折光检测器 7. 在高效液相色谱中, 色谱柱的长度一般在( )范围内。 A.10-30cm B.20-50cm C.1-2cm D.2-5cm 8. 在液相色谱中, 为了获得较高柱效能, 常用的色谱柱是 ( ) A.直形填充柱 B.毛细管柱 C.Ｕ形柱 D.螺旋形柱 9. 纸色谱的分离原理, 与下列哪种方法相似？ ( ) A.毛细管扩散作用 B.萃取分离 C.液-液离子交换 D.液-固吸附 10.高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了（） A.恒温箱 B.进样装置 C.程序升温 D.梯度淋洗装置 二、填空题 1. 高效液相色谱仪一般由、、、 、五部分组成。 2. 流动相使用前必须先。

Agilent1200型高效液相色谱仪操作手册

Agilent 1200 LC （中文版 B01.01） 现场培训教材 安捷伦科技有限公司 生命科学与化学分析仪器部

一、培训目的： ●基本了解1200LC硬件操作。 ●掌握化学工作站的开机，关机，参数设定,学会数据采集,数据分析的基本操作。 二、培训准备： 1、仪器设备：Agilent 1200LC ●G1310A :(单元泵)；G1312A(二元泵)；G1311A(四元泵)。 ● G1313A（标准型自动进样器）。 ● G1316A（柱温箱）。 ● G1314A（VWD检测器）。 ● G1362A（示差检测器）。 ●色谱柱: Eclipse XDB-C18 150 x 4.6 mm, 5um column P/N 993967-902 2、溶剂准备： ●色谱级纯或优级纯乙腈或甲醇。 ●二次蒸馏水

基本操作步骤: (一)、开机： 1、打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。 2、打开 1200 LC 各模块电源。 3、待各模块自检完成后，双击“Instrument 1 Online”图标，化学工作站自动与1200LC 通讯，进入的工作站画面如下所示。 4、从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面, 点击“视图”菜单中的“显示顶部工具栏”，“显示状态工具栏”，“系统视图”,“样品视图”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。 5、把流动相放入溶剂瓶中。 6、打开冲洗阀。 7、点击“泵”图标，点击“设置泵…”选项，进入泵编辑画面。 8 、设流速：5ml/min，点击“确定”。 9、点击“泵”图标，点击“控制…”选项，选中“启动”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。 10、点击“泵”图标，点击“控制…”选项，选中“关闭”，点击“确定”关泵，关闭冲洗阀。 11、点击“泵”图标，点击“设置泵…选项”，设流速：1.0ml/min。 12、点击泵下面的瓶图标，如下图所示（以单元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积，点击“确定”。

安捷伦液相色谱使用问题与解决方案 Agilent LC 问题与答案

安捷伦液相色谱使用问题与解决方案 Agilent LC 问题与答案 1 如何成为真正的液相高手 1。一定要珍惜仪器厂商提供的各种培训，因为他们的培训很有针对性，而且很专业。 2 。要多做，液相是一个比较复杂的系统，在做样的过程中，总会遇到各种问题，通过自己的大脑解决问题，慢慢积累就会穴道很多东西。其次要敢于动手，不要总担心会把仪器弄坏，拆仪器的时候细心一点就好了，记着各个部件的顺序，连接方式。动手次数多了，成功的机会就多了，也就更有信心了。 3。要看一些相关理论的书籍，要了解一些关于液相的分离原理，如何优化色谱系统和峰形，能够自己解决一些分离的问题。这样才是一个液相高手。 如果只是会很熟练的使用工作站和维修仪器，排除故障，我觉得这只是一个操作高手，而不是一个真正的液相高手。 2 新装82341 GPIB 板，如何与ChemStation 通讯? 在 LC ChemStation CD-ROM 中有安装说明，还包括驱动程序安装信息。请在Windows? Explorer 中查看子目录： \Manuals\Installation\LC Systems。您在此处可找到《安装手册》，其中包含有关如何安装 GPIB 板以及如何调用驱动程序的逐步操作说明。 3 为什么进样后在工作站在线图谱上看不到红色开始线？ ChemStation 软件有一个“在线图谱”窗口，在此窗口中可显示从所连接的检测器接收到的所有信号。当进样样品时，会在“在线图谱”窗口中显示一条竖直的红色“开始线”。这条红色线标志着启动该软件进行原始数据的收集。如果不显示这条红色线，则不会收集数据。如果不显示“开始线”，请检查检测器上的遥控电缆（如果是 1050 或 1090 系列液相色谱仪的话）。如果缺少遥控电缆，则需要进行安装。如果安装了模-数转换箱或板 (35900 ADC)，则需要从模-数转换设备到液相色谱仪拉一根遥控电缆。检查所有的 CAN 电缆，确保它们都连接到 1100 系列液相色谱仪上 4 完美的波长如何选择 做一个新的方法，关键是选择好的仪器条件，更关键的是波长正确。但是怎样的波长才算是完美的那，比如说我已经作了全扫描，那么怎么去选择波长哪？？？一般选择最大吸收波长为检测波长,当然也要结合自己的实际情况来中和一下如果要达到最大检测灵敏度，最大吸收波长是首位选择。如果你使用的是DAD，那么建议你将Sample WL设定为最大吸收波长，Bandwidth不能低于你设定的slit的值。默认推荐的Bandwidth为半峰宽。如果你在一次分析中有最大吸收波长不同的物质需要同时检测，可以使用检测器的Timetable进行波长的切换避免选用低波长，波长越长越容易做 5 柔性不锈钢毛细管线外面的彩色标记是什么意思？ 安捷伦柔性不锈钢管线外部的彩色标记表示管的内径 (ID)：红色表示内径为 0.12mm 或0.005 英寸。绿色表示内径为 0.17mm 或 0.007 英寸。蓝色表示内径为 0.25mm 或0.010 英寸。橙色表示内径为 0.50mm 或 0.020 英寸。 6 更换活塞密封圈后，建议采用什么磨合程序？ 注意这个程序适合于反相密封圈，但不适合于正相密封圈。还会损坏正相密封圈。安装新的密封圈后，进行最初的“磨合”期。在至少 350bar 的反压下泵入异丙醇 15-30 分钟。

Agilent_1200液相色谱仪现场培训教材(适用工作站版本B04.01

Agilent 1200 LC [Agilent Chemstation B.04.01 (中文)] 现场培训教材 安捷伦科技有限公司 生命科学与化学分析仪器部

一、 目录 二、 培训目的 (3) 三、 培训准备 (3) 1. 仪器准备 (3) 2. 溶剂准备 (3) 四、 方法建立 (3) 1. 开机准备 (3) 2. 数据采集方法编辑 (5) 9 G1310A(单元泵) (5) 9 G1312A，G1312B XL(二元泵)/G1311A(四元泵) (7) 9 G1313A(标准型自动进样器)，G1329A/B(自动控温自动进样器) (8) 9 G1367B/C/D(高性能自动进样器) (9) 9 G1328A(手动进样器) (11) 9 G1316A,G1316B XL(柱温箱) (11) 9 G1314A/B/D/E,G1314C XL(可变波长紫外检测器) (13) 9 G1315B/D ,G1315C XL(二极管阵列检测器)/ G1365B/D ,G1365C XL(多波长紫外检 测器) (15) 9 G1362A(示差检测器) (17) 9 G1321A(荧光检测器) (19) 9 G4218A(蒸发光散射检测器) (23) 3. 数据分析方法编辑 (25) 9 谱图优化 (25) 9 积分参数优化 (25) 9 校正 (27) 9 打印报告 (28) 9 光谱 (29) 5. 进样 (35) 9 单针进样 (35) 9 序列进样 (36)

五、 关机 (38) 1. 关闭检测器的灯 (38) 2. 冲洗系统 (38) 3. 封存色谱柱 (38) 4. 关闭电脑 (39) 5. 关闭模块 (39) 六、 RRLC(快速液相)注意事项 (39) 七、 Agilent 1200保养维护 (40) 八、 Agilent 1200常见问题解决方法 (42)