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水溶性SECGFC色谱柱硅胶基质

38水溶性SEC （GFC ）色谱柱：硅胶基质基质 : 硅胶适用pH 范围 : pH3.0-7.5可使用100%甲醇或乙腈F6989000F6989103F6989104F6700131PROTEIN KW-802.5PROTEIN KW-803PROTEIN KW-8045577H 2O H 2O H 2O H 2O 规格 (mm)内径×长8.0 × 3008.0 × 3008.0 × 3006.0 × 50粒径(μm)4001,0001,500? 孔径(?)≥ 21,000≥ 21,000≥ 16,000（保护柱）储存溶剂塔板数(TP/column)产品名称订货号No.7Note book No.23News C N No.6News C N No.31News C N KW-800? 硅胶基质填料水溶性SEC(GFC)色谱柱? 适用于蛋白质和酶的分析? 对应USP L20、L33、L59LW-803? 采用了适合分析数十万分子量蛋白质的特制孔径? 实现了抗体医药和各种蛋白质的高性能分离? 填料批次上的高结果再现性? 对应USP L20、L33、L59KW400? 小粒径填料增强了色谱柱性能? 灵敏度是KW-800系列的3～4倍? KW405-4F 适用于分子量大于一百万的大分子样品? 对应USP L20、L33、L59特　长标准柱PROTEIN KW-G 6B (PROTEIN KW-G)基质 : 硅胶适用pH 范围 : pH3.0-7.5可使用100%甲醇或乙腈

F6989201F6989202F6989203F6989204F6700132KW402.5-4F KW403-4F KW404-4F KW405-4F KW400G-4A 33555H 2O H 2O H 2O H 2O H 2O 规格 (mm)内径×长4.6 × 3004.6 × 3004.6 × 3004.6 × 3004.6 × 10粒径(μm)4008001,5002,000? 孔径(?)≥ 35,000≥ 35,000≥ 25,000≥ 25,000（保护柱）储存溶剂塔板数(TP/column)产品名称订货号高效半微柱基质 : 硅胶适用pH 范围 : pH3.0-7.5可使用100%甲醇或乙腈F6989303F6700133PROTEIN LW-803PROTEIN LW-G 6B 33H 2O H 2O 规格 (mm)内径×长8.0 × 3006.0 × 50粒径(μm)1,000? 孔径(?)≥ 12,000（保护柱）储存溶剂塔板数(TP/column)产品名称订货号标准柱1) 理论塔板数使用乙二醇测定2) 理论塔板数使用BSA 测定3) 理论塔板数使用尿苷测定1）2）3）

水溶性SEC （GFC ）色谱柱 : 硅胶基质

蛋白质（流动相 : 磷酸缓冲液）普鲁兰（流动相 : 超纯水）

F6505020F6505021F6505022F6709556PROTEIN KW-2002.5PROTEIN KW-2003PROTEIN KW-20045577KW-802.5KW-803KW-804（保护柱）规格 (mm)

内径×长8.0 × 3008.0 × 3008.0 × 3006.0 × 50粒径(μm)≥ 17,000≥ 17,000≥ 14,000（保护柱）对应标准柱

塔板数(TP/column)产品名称订货号制备柱 * 定制产品

PROTEIN KW-G 8B (PROTEIN KW-LG)4) 理论塔板数使用乙二醇测定

※请在选择色谱柱时作为标准参考*( ) : 估算值※请在选择色谱柱时作为标准参考KW-802.5KW-803, LW-803KW-804KW402.5KW403KW404KW405产品名称线性分析范围排阻限分子量5,000 ? 100,00010,000 ? 700,00030,000 ? *(4,000,000)5,000 ? 70,00010,000 ? 500,00030,000 ? *(4,000,000)200,000 ? *(20,000,000)150,000*(1,000,000)*(4,000,000)150,000600,000*(4,000,000)*(20,000,000)KW-802.5KW-803KW-804KW402.5KW403KW404KW405产品名称线性分析范围排阻限分子量2,000 ? 50,0005,000 ? 100,00020,000 ? 300,0002,000 ? 40,0003,000 ? 50,00020,000 ? 300,000100,000 ? 700,00060,000170,000500,00060,00080,000400,0001,300,000线性分析范围和排阻限分子量

4）

111315171921M o l e c u l a r w e i g h t (P r o t e i n )104105106SB-803 HQ GF-510 HQ KW-8031020030 min 1234567805101520253035 min

0510******** min 20253035403035min 404550min 111222333444555SB-803 HQ GF-510 HQ KW-803Elution time (min)M o l e c u l a r w e i g h t (P r o t e i n ) 1021031041051061076810579111213Elution volume (mL)1112223102 2.52.01.5 3.0 4.03.5 4.5103104105106107Elution volume (mL)M o l e c u l a r w e i g h t (P r o t e i n )K W 404-4F K W 402.5-4F K W 403-4F K W 405-4F 6810579111213Elution volume (mL)M o l e c u l a r w e i g h t (P r o t e i n )102103104105106107K W -804K W -802.5K W -80340样品 : 100 μL System suitability solution (prepared according to JP method)1. 高分子蛋白质 (High molecular weight proteins)2. 甘精胰岛素 (Insulin glargine)样品 : 40μL Whole lipoproteins from serum of a healthy person 1.0mg/mL 1. VLDL 2. LDL 3. HDL Column : Shodex OHpak SB-803 HQ Shodex Asahipak GF-510 HQ Shodex PROTEIN KW-803 Eluent : 0.2M Phosphate buffer (pH6.9)Flow rate : 0.5mL/min Detector : UV (280nm)Column temp. : 30?C Column : Shodex PROTEIN KW-803Eluent : 50mM Sodium phosphate buffer (pH7.0) + 0.3M NaCl Flow rate : 1.0mL/min Detector : UV (280nm)Column temp. : Room temp.Column : Shodex PROTEIN KW-800 series Eluent : 50mM Sodium phosphate buffer (pH7.0) + 0.3M NaCl Flow rate : 1.0mL/min Detector : UV (280nm)Column temp. : 30?C Column : Shodex PROTEIN KW-802.5 x 2Eluent : CH 3COOH/CH 3CN/H 2O=20/30/50 (pH to 3.0 adjusted with 25% NH 3 aq.) Flow rate : 0.5mL/min Detector : UV (276nm)Column temp. : 25?C Column : Shodex PROTEIN KW-G + KW-804 Eluent : 10-fold diluted x 10 PBS* with H 2O Flow rate : 1.0mL/min Detector : UV (280nm) Column temp. : 30?C Column : Shodex PROTEIN LW-803Eluent : 50mM Sodium phosphate buffer (pH7.0) + 0.3M NaCl Flow rate : 1.0mL/min Detector : UV (280nm)Column temp. : Room temp.Column : Shodex KW400-4F series Eluent : 50mM Sodium phosphate buffer (pH7.0) + 0.3M NaCl Flow rate : 0.33mL/min Detector : UV (280nm) (small cell volume) Column temp. : 30?C 人血清中的蛋白质（标准样品）分析使用不同GFC 柱分离标准蛋白质的比较＜样品配制＞?健康人的血清按照1.210g/mL比例使用溴化钾处理后，24小时超离心。?上清液透析后，使用PBS*置换。?使用Lowry法测定蛋白质浓度，用PBS*稀释至1.0mg/mL。Rs ≥ 3.0x10 PBS* : 80g NaCl + 29g Na 2HPO 4?12H 2O + 2g KCl + 2g KH 2PO 4 in 1000mL of H 2O KW-800系列分析蛋白质时的标准曲线LW-803分析蛋白质时的标准曲线KW400系列分析蛋白质时的标准曲线对用于水性系统的SEC柱,如SB-803 HQ GF-510 HQ和KW-803的标准蛋白质分离进行了比较。结果显示,以硅胶为填料的KW-803最为合适。样品 : 0.1% each 1. 纤维蛋白原 50μL (Fibrinogen)2. α2-巨球蛋白 50μL (α2 -Macroglobulin)3. IgG 50μL 4. 转铁蛋白 50μL (Transferrin)5. 纤溶酶原 50μL (Plasminogen)6. 清蛋白 100μL (Albumin)7. 抗胰蛋白酶 100μL (Antitrypsin)8. 血红蛋白 100μL (Hemoglobin)样品 : 1. 甲状腺球蛋白(牛) (Thyroglobulin (bovine))2. γ-球蛋白(牛) (γ-Globulin (bovine))3. 卵清蛋白(鸡) (Ovalbumin (chicken))4. 肌球素(马) (Myoglobin (horse))5. 氰钴胺 (Cyanocobalamin)根据日本药典标准分析甘精胰岛素的不纯物质（高分子蛋白质）血清中的脂蛋白分析东京医科齿科大学大学院保健卫生学研究科前端分析检查学领域大川龍之介老师提供

A KW402.5-4F 123N=17,000N=8,2004

51234

B KW-802.5051020304015

min 50 min

0510 min 1

234

5051015 min

Papain digestion (24hr)Papain digestion (12hr)Papain digestion (4hr)Papain digestion (90min)Papain digestion (30min)

Papain digestion (0min)Without Papain 12

3456

78011112

3333

1234512345

51015 min 051015 min 分离度(单体/二聚体)

41水溶性SEC （GFC ）色谱柱 : 硅胶基质

外源凝集素的分析Column : Shodex KW402.5-4F Eluent : 50mM Sodium phosphate buffer (pH7.0) + 0.3M NaCl Flow rate : 0.33mL/min Detector : UV (220nm) (small cell volume)

Column temp. : 30?C 样品 : 乳清 (Whey), 5μL 样品 : 10μL

Humanized monoclonal IgG 1. Aggregates of IgG 2. Dimer of IgG 3. Monomer of IgG

4, 5, 6. Fragments of IgG from papain digestion 7. Citric acid

8. Papain

KW402.5-4F 与KW-802.5的比较酸奶中的乳清分析Column : Shodex KW402.5-4F Shodex PROTEIN KW-802.5Eluent : 50mM Sodium phosphate buffer (pH7.0) + 0.3M NaCl Flow rate : (A) 0.33mL/min, (B) 1.0mL/min Detector : UV (280nm) (small cell volume)Column temp. : 25?C Column : Shodex PROTEIN LW-803

Eluent : 0.1M Sodium phosphate buffer (pH7.0) + 0.3M NaCl

Flow rate : 1.0mL/min

Detector : UV (280nm)

Column temp. : 25?C

Column : Shodex KW402.5-4F + KW403-4F Eluent : 50mM Sodium phosphate buffer (pH7.0) + 0.3M NaCl Flow rate : 0.20mL/min Detector : UV (280nm) (small cell volume)Column temp. : 30?C PROTEIN LW-803使用了适合分析数十万分子量

蛋白质的孔径，和原先产品以及其他公司产品比较，

特别是分子量16万的γ－球蛋白分析效果变好。这

部分分离性能提升特别适用于进行抗体医药品IgG 的单体、二聚体的分离。

使用蛋白质分析用色谱柱PROTEIN LW-803追踪人单克隆IgG通过

木瓜蛋白酶消化过程。由木瓜蛋白酶分解IgG，除了分解成构成IgG的

经典片段Fc和Fab，可能还会出现期间的过渡分解中间体。LW-803

可以对主成分IgG及其分解产物以及中间体都能很好的分离，所以对

IgG的分解以及对分解产物片段的生成过程观察非常合适

＜木瓜蛋白酶的消化过程＞

1. 人单克隆IgG 3mg 使用溶剂 500μL 溶解 (6mg/mL)

2. 木瓜蛋白酶1mg 使用溶剂1mL溶解 (1mg/mL)

3. 1、2的溶液过0.2μm滤膜

4. 各溶液等量混合(IgG 3mg/mL、木瓜蛋白酶 0.5mg/mL)

5. 25℃保温

6. 经时进样、HPLC分析

Column : Shodex PROTEIN LW-803, Shodex PROTEIN KW-803, Silica-based SEC column from other manufacturer Eluent : 50mM Sodium phosphate buffer (pH7.0) + 0.3M NaCl

Flow rate : 1.0mL/min

Detector : UV (280nm)

Column temp. : Room temp.

LW-803和原先产品、其他公司色谱柱的分离比较

通过木瓜蛋白酶的消化监测人类单克隆IgG 的分解过程

样品 : 5μL 1. 甲状腺球蛋白 (Thyroglobulin) (MW : 670,000) 7mg/mL 2. γ-球蛋白 (γ-Globulin) (MW : 160,000) 6mg/mL 3. 卵白蛋白 (Ovalbumin) (MW : 44,300) 4.8mg/mL 4. 核糖核苷酸酶 A (Ribonuclease A) (MW : 13,700) 7mg/mL 5. 尿苷 (Uridine) (MW : 244) 0.1mg/mL 样品 : 5μL

人血清由来IgG (IgG from human serum) 10mg/mL 1. 凝聚体 (Aggregates)

2. 二聚体 (Dimer)

3. 单体 (Monomer) LW-803(原有产品)KW-803A公司的SEC 色谱柱LW-803(原有产品)KW-803A公司的SEC 色谱柱

LW-803

KW-803A 公司的SEC 色谱柱 1.61.9

2.2KW400系列是高效半微量色谱柱,其理论塔板数和检验灵敏度（峰高）分别比KW-800色谱柱高1.5倍和3-4倍。样品 : 10μL 1. 蓝色葡聚糖2000 0.2mg/mL (Blue dextran 2000)2. γ-球蛋白 (γ-Globulin) 0.8mg/mL

3. 卵清蛋白 (Ovalbumin) 0.8mg/mL

4. 肌球素 (Myogrobin) 0.56mg/mL

5. 尿核苷 (Uridine) 0.04mg/mL 样品 : 5μL 1. 大豆凝集素 0.6mg/mL (Lectin from Soybean)2. 花生凝集素 1.1mg/mL

(Lectin from Arachis hypogaea)3. 刀豆铵酸凝集素 0.9mg/mL

(Lectin from Canavalia ensiformis) (Con A)

4. 小扁豆凝集素 0.7mg/mL

(Lectin from Lens culinaris) (LCA)

5. 接骨木花凝集素 0.8mg/mL

(Lectin from Triticum vulgaris) (WGA)