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高效液相色谱测定16种多环芳烃

湖南省环境监测中心站

分析方法验证报告

方法名称：高效液相色谱法测定土壤中16种多环芳烃

研究人员：黄东勤

二○○七年六月十日

高效液相色谱法测定土壤中16种多环芳烃

1.前言

多环芳烃（简称PAHs）主要是有机物在高温下不完全燃烧而产生，广泛存在于土壤、水等自然环境和各种食品中。其中萘、芘等16种PAHs因具有致畸、致癌和致突变作用而被视为最严重的有机污染物类型之一。国家环保总局推荐用高效液相色谱法（HPLC）测定饮用水、地下水、湖水、河水及工业废水中的PAHs，但对土壤中PAHs 的测定方法未作介绍。由于土壤样品基体复杂，PAHs的浓度很低且稳定性差，因此需要对样品进行预处理以富集待测组分，提高检测的灵敏度并降低检测限。

目前国内对PAHs土壤样品的处理多用索氏提取法或微波萃取法，本文研究用加速溶剂萃取土壤中的16种PAHs，提出最佳技术参数，并对实际土壤样品进行测定。

2.方法原理及适用范围

2.1原理

2.1．1萃取：加速溶剂萃取仪是一台可从各种固体或半固体样品中萃取有机组分的自动系统。该方法通过提高溶剂温度加速传统的萃取处理。在萃取池中加压以使萃取过程中萃取池中填充的溶剂始终处于液体状态。加热后，提取物从样品池中冲到收集瓶中以备分析使用。

2.1．2过柱淋洗：用加速溶剂提取获得的土壤提取液为黄褐色粘稠液体，基体复杂，在用HPLC测定前必须净化。本研究选用硅胶柱进

行净化，以溶剂正己烷：二氯甲烷= 3：2进行洗脱。

2.1．3氮吹：氮吹进行溶剂转化。

2．1．4色谱分离原理：HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。

2.2 适用范围

本方法测定16种多环芳烃,适用于土壤等复杂基体物质。对于饮用水、地下水和地表水以及生活污水和工业污水。第一步前处理条件有待实验，其余过程均可适用。

2.2.1仪器适用范围：0.08-100 mg /L。每小时能测定1个样品。

3.试剂和材料

乙睛、二氯甲烷、正己烷、丙酮、甲醇均为色谱纯；16种多环芳烃混合标准液：美国Supelco公司；实验用水为二次蒸馏水，0.45μm 膜过滤；商用硅胶柱（1g，6mL）；水系过滤头；1mL一次性注射器。

4.仪器设备

4.1高效液相色谱仪：LC-10AVP型，日本岛津公司。

4.2加速溶剂提取仪：戴安ASE200。

4.3氮吹仪：哈西Caliper Turbovap II。

4.4超声波发生器。

5. 试样与标准样品的制备

5.1 试样的制备

5.1．1萃取：

取保存于干净棕色瓶内，避光风干后过100目筛的24ｇ样品装入33ｍL加速溶剂提取仪萃取池中，提取温度100℃，压强1500psi，1∶1二氯甲烷和丙酮静态提取5min。提取液保存于收集瓶中以备用。

5.1．2 过柱淋洗

量取10mL提取液，然后过无水硫酸钠，用硅胶柱净化。之后再用3：2正己烷和二氯甲烷淋洗液淋洗，淋洗速度为1ml/min。收集淋洗液。

5.1．3 氮吹：

高纯氮气吹扫浓缩，用甲醇定容至1mL。用1 mL注射器取定容样品液过0.45μm膜后待测。

5.2 标准溶液的制备

采用美国Supelco公司制备的16种多环芳烃混合标准液；其原标准溶液浓度分别如下：

以甲醇作介质，采用逐级稀释法，分别得到0.0008倍、0.004倍、0.02倍、0.1倍的原标准浓度溶液。此4种溶液作为标准溶

液保存于棕色瓶中。

6. 仪器分析条件

6.1 色谱条件

柱温为20℃；流动相为水/乙睛；流速为1.0mL/min；进样量为10uL；紫外检测器的波长为254nm；荧光检测器发射波长为280 nm，激发波长为389 nm；梯度洗脱条件见下表。

表梯度洗脱条件

时间/min水/%乙睛/%

04060

14060

200100

420100

504060

604060

6.2色谱分离图

下图显示了在最佳梯度洗脱条件下，标准溶液中16种PAHs的分离情况。从图中可以看出，各色谱峰对称性好，无拖尾现象，便于分辨。柱平衡时间较短，完全分离16种PAHs的色谱周期为42 min，适宜进行常规分析。

0.01

0.015

0.02

324064

562448A U

t / min

8160.005

1213

156

1-萘；2-苊烯；3-苊；4-芴；5-菲；6-蒽；7-荧蒽；8-芘；9-苯并(a)蒽；10-苯并菲；11-苯并(b) 荧蒽；12-苯并(k) 荧蒽；13-苯并(a) 芘；14-二苯并(a,h) 荧蒽;15-苯并(g,h,i)苝;16-茚并(1,2,3)芘图 16种PAHs 色谱图

7. 数据的分析与计算：

7.1通过分析标准溶液。系统以采集到的标准溶液的峰面积和其浓度，一定条件下，由于浓度与峰面积成正比例，可以计算出标准曲线。利用标准曲线，采用外标法可以计算出所进样品的浓度。 7.2方法的线性范围检验

配制浓度为0.08,0.4,2,10 mg/L 的工作标准溶液，作工作曲线如下图。浓度范围在0.08-10 mg/L 具有很好的线性关系，其相关系数均可以达到0.999以上，可以满足16种PAHs 同时测试。

标准曲线）相关系数多环芳烃名称标准曲线）相关系数多环芳烃

名称

萘y = 12716x + 124.610.9999苯并[a]蒽y = 87962x + 294.20.9999苊烯y = 9105.2x + 127.291苯并菲y = 67117x + 704.980.9996苊y = 5209.8x + 90.5150.9995苯并[b]荧蒽y = 100218x + 220.221芴y = 59296x + 243.891苯并[k]荧蒽y = 75388x + 262.310.9999菲y = 156697x + 773.420.9998苯并[a] 芘y = 74483x + 91.710.9998蒽y = 324068x + 1546.80.9998二苯并[a.b]蒽y = 19734x - 178.720.9999荧蒽y = 38828x + 1388.50.9994苯并[ghi]苝y = 32681x - 648.440.9995

芘y = 37539x + 163.840.9997茚并[1,2,3-cd]y = 94634x - 1216.0.9999

8. 方法的检出限

根据色谱的最小检测限指检测器恰能产生与噪声相区别的响应信号时所需进入色谱柱的物质的最小量，一般为恰能辩别的响应信号，最小为噪声的两倍。最小检测限指最小检测量单位体积所对应的浓度。

16种PAHS的方法检测限分别是：

9. 精密度和准确度

9.1 以石英砂作空白，6次空白加标回收率如下：

9.2 精密度和加标回收实验

6个平行土壤样品的平均浓度、标准差，根据加标样品计算的回收率见下表：

9.3不同标准物质间的比对

作为对比，取国家标样进行测定

国家标样测定值及结果分析

标样编号芴(mg/L)菲(mg/L)荧蒽(mg/L)标样保证值(mg/L)306.8±4.4308.8±4.6347.5±2.9 GSB07-1046-1999

测得值306.4308.6355.3

由上表可见,实际测定值与标样的值之间的误差较小。

大气中多环芳烃的检测和治理

大气中多环芳烃的检测和治理摘要：本文介绍了多环芳烃的大气污染来源，多环芳烃的检测技术和控制污染排放治理污染的技术，主要介绍了多环芳烃的生物监测技术和生物治理技术。一、多环芳烃的简介多环芳烃（polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs）是一类由两个或两个以上苯环结构组成的稠环类有机化合物。多环芳烃是广泛存在于环境中的一类污染物，在大气、水、土壤、动植物和食物等很多介质中都能检出。由于多环芳烃的暴露会引起肺癌等在内的疾病风险，对人体健康威胁比较大，且多环芳烃能够长距离传输，所以多环芳烃的研究一直是国内外环境领域研究的热点。美国环保局公布的129中优先控制的污染物中，有16种多环芳烃的异构体名列其中。图一为几种多环芳烃的结构。表1为12种PAHs的基本性质及检测限

环境中多环芳烃的来源包括自然源和人为源，自然源主要包括天然火灾、火山等自然活动。人为源包括工业过程，如燃煤行业，炼铝炼焦行业的排放、居民生活中的生物质、机动车等交通排放源。和自然源相比，人为源仍是多环芳烃排放的主要贡献者。表2为主要人为源产生BaP(苯并[a]芘)的估计量表2 主要人为源产生BaP的估计量多环芳烃在大气中的分布：全世界每年排放在大气中的多环芳烃约为几十万吨，主要以吸附在颗粒物和气相的形式存在，四环以下的PAHs如菲、蒽、荧蒽、芘等主要集中在气相部分，五环以上的则大部分集中在颗粒物上或散步在大气飘尘中，在大气飘尘中，几乎所有的PAHs都附在粒径小于7um的可吸入颗粒物上，直接威胁人类的健康。二、大气中多环芳烃的检测： 1、标准检测方法：目前最为常见的气溶胶PAHs分析技术有高效液相色谱-紫外检测（HPLC-UV）、高效液相色谱-荧光检测（HPLC-FLD）、气相色谱-氢火焰离子化检测（GC-FID）和气相色谱质谱联用（GC-MS）.气相色谱具有高选择性、高分辨率和高灵敏度的特性，而且由于多环芳烃的热稳定性，用质谱作为检测器时，能够得到大的分子离子峰和很少的碎片离子，所以用GC-MS测定时能够得到很高的灵敏度，与GC-FID相比，GC-MS在定性方面峰更准确。相对于气相色谱，液相色谱能更好地测定低挥发性的多环芳烃，并能够有效分离多环芳烃的同分异构体。紫外-可见分光光度法（UV-Vis）、红外光谱法(IR)单独用于检测PAH组分的报道极少。目前UV通常作为HPLC的检测器，或再结合荧光分析法。 2、生物技术检测多环芳烃：

高效液相色谱法测定甲硝唑的含量

实验二高效液相色谱法测定甲硝唑的含量一、实验目的 1.熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能。 2.了解反相色谱法的原理、优点和应用。 3.了解流动相的选择依据及配制方法。 4.掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基本方法。二、实验原理高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。本实验以甲硝唑为测定对象，以反相HPLC来分离检测未知样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。三、实验内容（一）实验仪器与材料 1.实验仪器：高效液相色谱仪、精密天平、50mL烧杯、玻璃棒、称量纸、10mL容量瓶、50mL 容量瓶、注射器、洗瓶。 2.实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、HCl（0.1mol/L）、乙腈、三氟乙酸、超纯水。（二）实验内容 1、色谱操作条件的制定：色谱柱：C18柱（250×4.6mm,5μm）；流动相：乙腈：0.02%三氟乙酸水溶液（20：80）流速：1mL/min 检测波长：277nm 柱温：35℃ 进样量：20μL 2、标准溶液配制精密称取在105℃条件下干燥至恒重的甲硝唑对照品10mg，置于50mL容量瓶中，用0.1mol/L的HCl溶液溶解并定容至刻度，即得浓度为0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备用。 3、标准曲线的建立（1）精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3mL、0.5 mL、0.7 mL、0.9 mL、1.1 mL置于10 mL的容量瓶中，然后用0.1mol/L的HCl溶液定容至刻度，得到浓度梯度为6μg/mL、10μg/mL、14μg/mL、18μg/mL和22μg/mL的标准溶液，分别过0.22μm的微孔滤膜过滤，滤

高效液相色谱法的标准操作规程

高效液相色谱法的标准操作规程 1 定义及概述： 1.1 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。 1.2 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。 1.3 高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理组成。检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外—可见检测器。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。 2 高效液相色谱仪的使用要求： 2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程”的规定作定期检定，应符合规定。 2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无渗漏连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。 2.3 具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。

高效液相色谱法测定氨基酸

脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案 1、仪器与试药 1.1 仪器 1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国） 1.2 药品与试剂 16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。批号：2013、2013、2013. 乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。2、方法与结果 2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。

时间 (min) 流速 (ml/min) % A % B 曲线起始 1.0 100 0 * 0.5 1.0 98 2 6 15.0 1.0 93 7 6 19.0 1.0 90 10 6 32.0 1.0 65 35 6 33.0 1.0 65 35 6 34.0 1.0 0 100 6 37.0 1.0 0 100 6 38.0 1.0 100 0 6 42.0 1.0 100 0 6 2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。名称浓度（mg/ml）名称浓度（mg/ml）名称浓度（mg/ml）门冬氨酸 4.80 苏氨酸 1.20 异亮氨酸 1.10 丝氨酸 2.60 丙氨酸 2.50 亮氨酸 2.70 谷氨酸 6.20 脯氨酸 2.00 苯丙氨酸 1.20 甘氨酸 2.40 缬氨酸 1.60 色氨酸0.40 组氨酸0.90 甲硫氨酸 1.00 精氨酸 1.20 赖氨酸 3.45 取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。衍生剂配制将水浴锅设置55℃，加热，待温度稳定, 取AccQFluor衍生剂2A，轻轻弹击,确保AccQFluor 衍生剂2A粉末全落在瓶底，吸取AccQFluor衍生稀释剂2B 1ml并放掉，清洗移液器管，再吸取AccQFluor 衍生稀释剂2B 1ml，加入AccQFluor衍生剂2A的瓶中，振荡10秒钟，在恒温水浴锅中溶解，保持10分钟。于干燥器中室温保存一周,于干燥器中4℃保存二周。 2.3测定方法分别取20ul对照品溶液和供试品溶液加入衍生专用管底部，加入60uLAccQFluor硼酸

多环芳烃测定方法

多环芳烃在上海近郊大气颗粒物的污染特征、来源及其健康风险评估样品的预处理：（1）样品滤膜剪成碎片，添加内标选择氘代混表（Naphthalene-d8、Acenaphthene-d10、Phenanthrene-d10、Chrysene-d12、Pyrene-d12-USA）（2）提取——快速萃取仪（ASE-150, Dionex ,USA），萃取溶剂为二氯甲烷、正己烷（3:1）（3）净化——活性硅胶层析柱（4）浓缩——氮吹样品的分析： GCMS 2010 Plus，Shimadzu，Japan GC条件（1）毛细管柱——Rtx-5MS（30m*0.25mm*0.25um）（2）不分流进样，进样2uL （3）进样口温度270℃，色谱柱初始温度为90℃（保持1min），8℃/min升温速率升到180℃，最后以15℃/min升温速率升至280℃（保持15min）（4）载气流速1mL/min，氩气 MS条件（1）电子电离源（EI，70eV），SIM模式（2）离子源温度为260℃，接口温度为200℃ （3）选择离子m/z

南黄海中部表层沉积物中多环芳烃分布特征及来源分析样品的预处理：（1）沉积物样品冷冻干燥，研磨，添加内标（蒽-d10）（2）提取——索式提取72h，提取溶剂为二氯甲烷，索提时加入一定量的活化铜片去除硫（3）净化——层析柱（去活氧化铝、去活硅胶、无水硫酸钠），二氯甲烷-正己烷洗脱（4）浓缩——温度不高于20℃条件下溶剂自然挥发近干样品的分析： HPGC6890/5973MSD GC条件（1）色谱柱——HP-5MS（60m*0.25mm*0.25um）（2）不分流进样（3）进样口温度290℃，色谱柱以20℃/min升至100℃，再以3℃/min至310℃，恒温18min （4）载气流速1mL/min，氩气 MS条件（1）电子电离源（EI，70eV），SCAN模式

16种常见多环芳烃的物理性质

16种常见多环芳烃的物理性质 -CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN

萘英文名称NAP Naphthalene分子量 128.18 物理性质；密度1.162 熔点80.5℃,沸点217.9℃,凝固点,80.5℃,闪点78.89℃,折射率1.58212（100℃）恒压燃烧热：40264.1J/g(标准大气压，298.15K）恒压燃烧热：40205J/g(标准大气压，298.15K）。不溶于水，溶于乙醇和乙醚等。易挥发，易升华溶于乙醇后，将其滴入水中，会出现白色浑浊。化学性质（1）萘的氧化温和氧化剂得醌，强烈氧化剂得酸酐。萘环比侧链更易氧化，所以不能用侧链氧化法制萘甲酸。电子云密度高的环易被氧化。（2）萘的还原（3）萘的加成（4）萘的亲电取代反应萘的a-位比b-位更易发生亲电取代反应。a-位取代两个共振式都有完整的苯环。b-位取代只有一个共振式有完整的苯环。在萘环上主要发生亲电取代，同苯环一样，但活性比苯环强从中间对称的两个C旁边的C开始标，其中1，4，5，8号碳活性完全一样（称为阿尔法碳），2，3，6，7号碳性质完全一样（称为贝塔碳）。一般情况下，阿尔法碳活性大于贝塔碳，取代基在阿尔法位上，这是由动力学控制，温度较高时，阿尔法碳[1]上取代基会转移到贝塔碳上。但在萘的弗瑞德-克来福特酰基化反应，不加热却生成了阿尔法位和贝塔位的混合物。如用硝基甲烷为溶剂，则主要生成贝塔酰化产物。苊烯ANY Acenaphthylene 分子量：152.200 性质：黄色棱柱状或板状结晶。熔点92-93℃，沸点265-275℃（部分分解），156-160℃（3.73千帕），相对密度0.8988（16/2℃），易溶于乙醇、甲醇、丙醇、乙醚、石油醚、苯，不溶于水。能在强酸中聚合。苊ANA Acenaphthene 英文别名：1,8-Ethylenenaphthalene 分子量：154.21性状描述：白色或略带黄色斜方针状结晶。物理参数：密度:1.0242(99/4°C) 熔点:96.2°C 沸点:279°C 闪点:125°C 折射率:1.6048(95°C) 芴FLU Fluorene分子量：166.22 性状描述：白色叶状至小片状结晶物理参数：密度:1.202 g/mL 熔点:116-117°C 沸点:295°C 闪点:151°C

高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯

高效液相色谱（HPLC ）法测定邻苯二甲酸酯一、实验目的： 1. 了解高效液相色谱仪原理； 2. 学习高效液相色谱仪的基本操作方法； 3. 利用高效液相色谱仪测定邻苯二甲酸酯、邻苯二乙酸酯、邻苯二丁酸酯的峰图和含量。二、实验原理： ① 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC ）是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。高效液相色谱法有“四高一广”的特点：高压、高速、高效、高灵敏度和应用范围广。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。反之，则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R ）的计算公式为： R ＝ 2[t (R2)-t (R1)] /1.7*(W 1＋W 2) //式中 t (R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间；t (R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间； W 1 及W 2为此相邻两峰的半峰宽。除另外有规定外，分离度应大于1.5。 ② 本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE ，常被用作塑料增塑剂。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。同时也有一定的致癌作用。如果要检测不同条件对谱图分离的影响，可按表1配制几种物质的混合溶液，在不同条件下进行HPLC 分离检测。三.仪器与试剂 1、仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪，50ul 微量注射器。 2、试剂甲醇（色谱专用），高纯水，样品。出峰次序样品组成 1 邻苯二甲酸二甲酯（DMP ） 2 邻苯二甲酸二乙酯(DEP) 3 邻苯二甲酸二丁酯(DBP)

QG-JC-139.D1 测定聚合物中多环芳烃的协调方法检验方法细则

测定聚合物中多环芳烃的协调方法检验方法细则 1. 概述本检测方法细则根据本实验室仪器的实际配置情况及现有的检测能力进行编写，参照德国ZEK 01.4-08《测定聚合物中多环芳烃的协调方法》中规定的测定方法，适用于本实验室使用气相色谱-质谱联用仪测定聚合物中多环芳烃的含量。 2. 适用范围本检测方法细则适用于聚合物中多环芳烃含量的测定。 3. 检验依据 ZEK 01.4-08《测定聚合物中多环芳烃的协调方法》。 4. 实验原理在超声波作用下，用甲苯萃取出试样中的多环芳烃，必要时萃取液需经硅胶固相萃取柱净化，用气相色谱-质谱仪（GC-MS）测定，内标法定量。 5. 试剂及材料 5.1 甲苯：色谱纯； 5.2 石油醚； 5.3 18种多环芳烃混标或单标：标准品； 5.4 内标物：萘-d8、蒽-d10和十二氘代苝（Perylene-d12）标准品； 5.5 硅胶固相萃取柱； 5.6 0.25μm有机滤膜。 6 仪器 6.1 气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）； 6.2 分析天平：精确至0.1mg； 6.3 旋转蒸发仪； 6.4 氮吹仪。 7. 样品制备取代表性样品，用合适的工具破碎成粒径不超过2-3mm的颗粒，混匀。 8. 实验步骤 8.1提取称量：用分析天平称取约0.5g(精确至0.0001g)试样，放入带旋塞的玻璃瓶中。萃取：往玻璃瓶中加入20mL含内标的甲苯溶液，在60℃水浴的超声波中萃取1h，冷却至室温后进行短暂的振荡，此萃取液可直接用于测试，必要时需对萃取液进行净化。 8.2净化对于某些塑料或橡胶产品，尤其是在上述超声条件下可大量溶解于甲苯的样

品，还需要用硅胶固相萃取柱对萃取液进行净化。净化方法如下：将萃取液用旋转蒸发仪浓缩至约1mL ，并转移至固相萃取柱中。用20mL 淋洗液冲洗，冲洗液也转移到硅胶柱中。洗脱液中再加入50mL 石油醚，收集的石油醚洗脱液中加入1mL 甲苯，并用氮吹仪浓缩至1mL ，最后用甲苯稀释定容至20mL ，供GC-MS 分析测试。 8.3分析测试用浓度为0.005 mg/L 的多环芳烃标准溶液进行校准，对于阳性样品，采用校正曲线进行定量，校准曲线配制如下：以含D8、D10和D12三种内标的甲苯作溶剂，配制浓度为0.005mg/L 、0.025mg/L 、0.075mg/L 、0.15mg/L 、0.30mg/L 和0.5mg/L 的系列标准工作溶液，根据仪器检测结果，绘制校正曲线，曲线有效期1周。标准工作溶液和待测样液中每种多环芳烃的响应值均应在仪器检测范围内。 9. GC-MS 分析条件仪器名称：GC-MS ，型号：安捷伦7890A/5975C ；色谱柱：毛细管柱，DB-5ms ，30m×0.25mm×0.25μm ；载气：氦气，纯度≥99.999%；载气流速：1mL/min ；进样口温度：280℃；进样量：1μL ；进样方式：不分流；质谱接口温度：280℃；离子源：EI 源，离子源温度：300℃，四级杆温度：150℃；柱温程序：。质量扫描方式：总离子流色谱图（TIC ）定性，质量扫描范围：m/z=50u ～350u ，选择离子（SIM ）定量。18种多环芳烃的参考保留时间、定性定量参数及内标分组表见表1。 5℃/min 50℃（1min ） 25℃/min 200℃ 8℃/min 250℃ 310℃（2min ）

16种多环芳烃的结构式

SIGMA-ALDRICH 16种多环芳烃中文名英文名结构式分子式分子量CAS号价格(元) 萘 Naphthalene (NAP)C10H8 128.17 91-20-3 148.59元/0.25g 484.59元/1g analytical standard (Fluka) 553.41元 5000 μg/L Analytical standard (Supelco) 苊烯Acenaphthyle ne （ANY）C12H8 152.19 208-96- 8 544.05元 5000 μg/mL i n methanol, analytical standard (Supelco) 苊Acenaphthene ? C12H10 154.21 83-32-9276.12元 200 μg/mL i n methanol, analytical standard (Supelco) 芴Fluorene （FLU）C13H10 166.22 86-73-7 544.05元 5000 μg/mL in methanol,analytical standard (Supelco) 菲Phenanthren e （PHE）C14H10 178.23 85-01-8 544.05元 5000 μg/mLin methanol,analytical standard (Supelco) 蒽 Anthracene (ANT)C14H10 178.23 120-12- 7 221.13元/0.25g analytical standard (Cerilliant) 荧蒽Fluoranthen e C16H10 202.25206-44 -0 544.05元 5000 μg/mLin methanol,analytical standard (Supelco)

高效液相色谱法测定有机化合物的含量

实验四高效液相色谱法测定有机化合物的含量 [目的要求] 1、了解仪器各部分的构造及功能。 2、掌握样品、流动相的处理，仪器维护等基本知识。 3、学会简单样品的分析操作过程。 [基本原理] 高效液相色谱仪液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的主色谱分离技术，在基本理论方面与气相色谱没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质差别。与气相色谱相比，高效液相色谱对样品的适用性强，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，可以弥补气相色谱法的不足。液相色谱根据固定向的性质可分为吸附色谱、键合相色谱、离子交换色谱和大小排阻色谱。其中反相键合相色谱应用最广，键合相色谱法是将类似于气相色谱中固定液的液体通过化学反应键合到硅胶表面，从而形成固定相。若采用极性键合相、非极性流动相，则称为正相色谱；采用非极性键合相，极性流动相，则称为反相色谱。这种分离的保留值大小，主要决定于组分分子与键合固定液分子间作用力的大小。反相键合相色谱采用醇-水或腈-水体系作为流动相，纯水廉价易得，紫外吸收小，在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广泛的反相键合相是十八烷基键合相，即让十八烷基（C18H37―）键合到硅胶表面，这也就是我们通常所说的碳十八柱。 [仪器试剂] 高效液相色谱仪（包括储液器、高压泵、自动进样器、色谱柱、柱温箱、检测器、工作站）、过滤装置待测样品（浓度约100 ppm）、甲醇、二次水 [实验步骤] 1、仪器使用前的准备工作（1）样品与流动相的处理配好的溶液需要用0.45 μm的一次性过滤膜过滤。纯有机相或含一定比便例有机相的就要用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的就要用水系滤膜。水、甲醇等过滤后即可使用；水放置一天以上需重新过滤或换新鲜的水。含稳定剂的流动相需经过特殊处理，或使用色谱纯的流动相。（2）更换泵头里清洗瓶中的清洗液流动相不同，清洗液也不同，如果流动相为甲醇-水体系，可以用50%的甲醇；如果流动相含有电解质，通常用95%去离子水甚至高纯水。如果仪器经常使用建议每周更换两次，如果仪器很少使用则每次使用前必须更换。（3）更换托盘里洗针瓶中的洗液洗液一般为：50%的甲醇。

16种常见多环芳烃的物理性质

萘英文名称NAP Naphthalene分子量128.18 物理性质；密度1.162 熔点80.5℃,沸点217.9℃,凝固点,80.5℃,闪点78.89℃,折射率1.58212（100℃）恒压燃烧热：40264.1J/g(标准大气压，298.15K）恒压燃烧热：40205J/g(标准大气压，298.15K）。不溶于水，溶于乙醇和乙醚等。易挥发，易升华溶于乙醇后，将其滴入水中，会出现白色浑浊。化学性质（1）萘的氧化温和氧化剂得醌，强烈氧化剂得酸酐。萘环比侧链更易氧化，所以不能用侧链氧化法制萘甲酸。电子云密度高的环易被氧化。（2）萘的还原（3）萘的加成（4）萘的亲电取代反应萘的a-位比b-位更易发生亲电取代反应。a-位取代两个共振式都有完整的苯环。b-位取代只有一个共振式有完整的苯环。在萘环上主要发生亲电取代，同苯环一样，但活性比苯环强从中间对称的两个C旁边的C开始标，其中1，4，5，8号碳活性完全一样（称为阿尔法碳），2，3，6，7号碳性质完全一样（称为贝塔碳）。一般情况下，阿尔法碳活性大于贝塔碳，取代基在阿尔法位上，这是由动力学控制，温度较高时，阿尔法碳[1]上取代基会转移到贝塔碳上。但在萘的弗瑞德-克来福特酰基化反应，不加热却生成了阿尔法位和贝塔位的混合物。如用硝基甲烷为溶剂，则主要生成贝塔酰化产物。苊烯ANY Acenaphthylene 分子量：152.200 性质：黄色棱柱状或板状结晶。熔点92-93℃，沸点265-275℃（部分分解），156-160℃（3.73千帕），相对密度0.8988（16/2℃），易溶于乙醇、甲醇、丙醇、乙醚、石油醚、苯，不溶于水。能在强酸中聚合。苊ANA Acenaphthene 英文别名：1,8-Ethylenenaphthalene 分子量：154.21性状描述：白色或略带黄色斜方针状结晶。物理参数：密度:1.0242(99/4°C) 熔点:96.2°C 沸点:279°C 闪点:125°C 折射率:1.6048(95°C) 芴FLU Fluorene分子量：166.22 性状描述：白色叶状至小片状结晶物理参数：密度:1.202 g/mL 熔点:116-117°C 沸点:295°C 闪点:151°C 菲PHE Phenanthrene 分子量：178.23性状描述：类白色粉状结晶体。物理参数密度:1.179 g/mL(25°C) 熔点:101°C 沸点:340°C 折射率:1.59427 蒽ANT Anthracene 分子量178.22物理性状带有淡蓝色荧光的白色片状晶体或浅黄色针状结晶。(纯品为白色带紫色荧光) 相对密度 1.25（27℃）;1.283(25℃),熔点217,沸点342,闪点196.1,121.1(闭式)(以上均为℃),蒸汽压[1] 0.13kPa/145℃不溶于水、难溶于

16种多环芳烃的结构式教学文案

16种多环芳烃的结构式

精品资料仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢2 SIGMA-ALDRICH 16种多环芳烃中文名英文名结构式分子式分子量 CAS 号价格(元) 萘 Naphthalen e (NAP) C10H8 128.17 91-20-3 148.59元/0.25g 484.59元/1g analytical standard (Fluka) 553.41元 5000 μg/L Analytical standard (Supelco) 苊烯 Acenaphthy lene （ANY ） C12H8 152.19 208-96-8 544.05元 5000 μg/mL i n methanol, analytical standard (Supelco) 苊 Acenaphthene ? C12H10 154.2 1 83-32-9 276.12元 200 μg/mL i n methanol, analytical standard (Supelco) 芴 Fluorene （FLU ） C13H10 166.22 86-73-7 544.05元 5000 μg/mL in methanol,analytical standard (Supelco) 菲 Phenanthre ne （PHE ） C14H10 178.23 85-01-8 544.05元 5000 μg/mLin methanol,analytical standard (Supelco) 蒽 Anthracene (ANT) C14H10 178.23 120-12-7 221.13元/0.25g analytical standard (Cerilliant) 荧蒽 Fluoranthen e C16H10 202.2 5 206- 44-0 544.05元 5000 μg/mLin methanol,analytical standard (Supelco) 苯并（a ）芘 Benzo(a)py rene (BaP) C20H12 252.3 50-32-8 1,838.07元/1g 662.22元/0.1g analytical standard (Cerilliant) 544.05元 5000 μg/mLin methanol,analy tical standard (Supelco)

高效液相色谱测定法标准操作规程

标准操作规程 STANDARD OPERATION PROCEDURE 1 目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。 2 适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。 3 责任：QC人员对本SOP实施负责。 4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 4.1. 对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μ m。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。 4.1.1. 色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在2? 8 之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2 或大于8 的流动相。

多环芳烃检测,多环芳烃检测报告

多环芳烃检测,多环芳烃检测报告 1,多环芳烃: 是指具有两个或两个以上苯的一类有机化合物。多环芳烃是分子中含有两个以上苯环的碳氢化合物，包括萘、蒽、菲、芘等150 余种化合物。 2,来源与接触机会:食品中含有一定朝气多环芳烃，其主要来源为，在食品的加工过程中，特别在烟熏、火烤或烘焦过程中滴在为上的油脂也能热聚产生苯并[a]芘，有人认为这是烤制食品中苯并[a]芘的主要来源。贮存过程中窗口或包装纸，含有不纯的油脂浸出溶剂提取的油脂中含有一定量的多环芳烃;在沥表路上凉晒粮食被沥青污染。大气、水和土壤等环境中的多环芳烃可以使粮食、水果和蔬菜受到污染。 3,自然环境中多环芳烃的含量极微.主要来源于森林火灾和火山爆发.在为人类的生产和生活环境中,煤矿、木柴、烟叶以及汽油、柴油、重油等各种石油馏份燃烧，烹调幅烟，以及废弃物等均可造成环境中多环芳烃的污染。此外，煤的汽化和液化过程、石油的裂解过程均可产生多环芳烃。四环以下分子量较的多环芳烃多以蒸气态存在，而分子量较大的则被吸附在颗粒物表面，尤其是在小于5μM 的颗粒上，可以进入肺的深部。空气中的颗粒可以在空气中悬浮几天到几周，从而形成远距离转移。已知城市的气溶胶和烟尘中还含有硝基和羟基硝基多环芳烃，具有具直接的突变作用，不需要以过代谢活化，其，其致突变性比无硝基的多环芳烃更强。 4,预防和防治措施: 燃料必须燃烧充分，可减少多环芳烃的生成量。室内加强通风换气，降低室内的多环芳烃含量。生产性无机粉法主要引起以肺组织纤维化为主的全身性疾病，尘肺和粉尘沉着症等疾病。有机粉尘可以引起支气管哮喘、棉尘症、职业性过悔性肺炎、非特异性阻塞性肺病等。有些粉尘例如金属尘(镍、铬、砷、)和石棉等可以引起肺部。粉尘作用于呼吸道黏膜，初为毛细血管扩张和在量分泌黏液等机能亢进等表现，这是保护性反应，随后形成肥大性改变，终可由于营养不足形成萎缩性改变。经常接触粉尘还可以引起皮肤、

高效液相色谱测定法标准操作规程

标准操作规程 1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。 2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。 3责任：QC人员对本SOP实施负责。 4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。 4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分

离物质的性质来选择合适的色谱柱。温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2?8之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。 4.1.2.检测器最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与被测物质的量有关，还与其结构有关；蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用检测器，对所有物质均有响应。结构相似的物质在蒸发光散射检测器的响应值几乎仅与被测物质的量有关。紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器和示差折光检测器的响应值与被测物质的量在一定围呈线性关系，但蒸发光散射检测器的响应值与被测物质的量通常呈指数关系，一般需经对数转换。不同的检测器，对流动相的要求不同。紫外-可见分光检测器所用流动相应符合紫外-可见分光光度法（通则0401）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器不得使用含不挥发性盐的流动相。 4.1.3.流动相反相色谱系统的流动相常用甲醇-水系统和乙腈-水系统，用紫外末端波长检测时，宜选用乙腈-水系统。流动相中应尽可能不用缓冲盐，如需用时，应尽可能使用低浓度缓冲盐。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时，流动相中有机溶剂一般不低于5％，否则易导致柱效下降、色谱系统不稳定。正相色谱系统的流动相常用两种或两种以上的有机溶剂，如二氯甲烷和正己烷等。品种正文项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可适当改变，以达到系统适用性试验的要求。调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X小于等于33%时，允许改变围为0.7X?1.3X；当X大于33%时，允许改变围为X—10%?X+10% 。

多环芳烃类的测定

水质多环芳烃类的测定高效液相色谱法编制说明（征求意见稿）沈阳市环境监测中心站 2008年3月

水质多环芳烃类的测定高效液相色谱法编制说明一、任务来源 2007年2月国家质检总局公布了《关于下达2007年第一批国家标准制修订项目经费的通知》（国质检财函[2007]971 号），向沈阳市环境监测中心下达了编制《水质多环芳烃类的测定高效液相色谱法》的项目计划。根据环境保护部科技标准司的意见，由沈阳市环境监测中心承担《水质多环芳烃类的测定高效液相色谱法》的编制工作。二、编制目的和意义多环芳烃（简称PAHs或PNA）是一类非常重要的化学三致物（致癌、致畸、致突变），因其具有生物难降解性和累积性，所以广泛存在于水体、大气、土壤、生物体等环境中。多环芳烃引起的环境污染越来越引起人们的重视，它已成为世界许多国家的优先监测物。1976年EPA列出了16项PAHs为优先控制污染物。1990年我国提出的68种水体优先控制污染物中有7种属于PAHs。 PAHs主要是在煤、石油等矿物性燃料不完全燃烧时产生的，主要的污染源是焦化、石油炼制、冶炼、塑胶、制革、造纸等工业排放的三废物质以及船舶油污、机动车尾气、香烟烟雾等等。自1775年Pott医生发现扫烟囱工人患阴囊癌至今，许多人研究了PAHs的致癌性，其中已有不少被确定或被怀疑具有致癌、致畸或致突变作用。尤其是苯并[a]芘和荧蒽是强致癌物质，严重影响人体健康，所以日益受到人们的关注。人们对空气中多环芳烃的污染研究较多，实际上多环芳烃是水中普遍存在的污染物质，多环芳烃在不同水体中的分布取决于它们的污染源。我国原有的标准方法GB 13198-91规定了测定水体中六种特定多环芳烃的高效液相色谱法，但已不能满足当前环境监测和管理的需要。因此，修订GB 13198-91标准，将会进一步完善我国的有机污染物分析方法体系，努力使环境保护标准与环保目标相衔接。修订该标准由环境保护部科技标准司提出，由沈阳市环境监测中心站起草。全面开展对水质中多环芳烃类的测定，将为多环芳烃类污染调查和控制研究提供基础性数据，对于国家保护环境、保障人民健康都具有重大意义。三、编制原则和依据

高效液相色谱(HPLC)柱效测定

实验六高效液相色谱(HPLC)柱效测定 093858 张亚辉一. 实验目的 1、学习高效液相色谱仪的基本操作方法。 2、了解高效液相色谱仪原理和条件设定方法。 3、了解高效液相色谱法在日常分析中的应用。二. 实验原理高效液相色谱法是以液体作为流动相，借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱方法。在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。反之，则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R）的计算公式为： R＝ 2[t(R2)-t(R1)] /1.7*(W1＋W2) 式中 t(R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间； t(R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1及W2为此相邻两峰的半峰宽。除另外有规定外，分离度应大于1.5。本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE，常被用作塑料增塑剂。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。待测物性质见表1。表1色谱柱测试条件

如果要检测不同条件对谱图分离的影响，可按表1配制几种物质的混合溶液，在不同条件下进行HPLC分离检测。三.仪器与试剂 1、仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪，50ul微量注射器。 2、试剂甲醇（色谱专用），高纯水四. 实验步骤 1、色谱条件色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶（C8）柱温：室温流动相：初始为高纯水：20％，甲醇：80％检测器：DAD检测器; 检测波长：220nm；进样体积：20μl定量环，实际注射每次可控制在40μl。 2、待测溶液的配制首先用甲醇做溶剂配制储备液：邻苯二甲酸二甲酯（0.3880g/L），邻苯二甲酸二乙酯（0.2770g/L），邻苯二甲酸二丁酯（0.3776g/L）。然后各取1mL储备液用水和甲醇（20：80）稀释至10mL，作为待测溶液。 3、色谱测定 (1) 按操作规程开启电脑，开启脱气机、泵、检测器等的电源，启动Agilent 1100在线工作软件，设定操作条件。流量为1.000ml/min。 (2) 待仪器稳定后，开始进样。将进样阀柄置于“LOAD”位置，用微量注射器吸取混合物溶液40ul，注入仪器进样口，顺时针方向扳动进样阀至“INJECT”位置，此时显示屏显示进样标志。 (3) 记下各组分色谱峰的保留时间及峰面积及分离比。 (4) 实验完毕，清洗系统及色谱柱。依次用甲醇-水（60：40）、甲醇-水（70：30）……直到纯甲醇作流动相清洗，每次清洗至基线走稳，至少清洗15min。五.实验结果

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