微粒子酶促化学发光原理

微粒子酶促化学发光原理

微粒子酶促化学发光（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的生物分析技术，它基于酶促反应和化学发光原理，用于检测特定分子（如蛋白质、抗体、抗原等）的存在和浓度。

ELISA的原理包括以下几个关键步骤：

1. 固相吸附：首先，在试验板上涂覆含有特定抗原或抗体的微孔板，使其吸附在固相表面上。

2. 样品处理：将待测样品加入到微孔板中，使其中的目标分子与固相上的抗体或抗原发生特异性的结合。

3. 二次抗体结合：洗涤微孔板，以去除非特异性结合物。然后，添加与待测分子特异性结合的酶标记的二次抗体，使其与样品中的目标分子结合。

4. 酶促反应：再次洗涤微孔板，以去除未结合的二次抗体。然后，加入酶底物，它与酶标记的二次抗体结合，并形成可测量的产物。

5. 化学发光：酶底物与酶催化产生的产物具有发光性质，通过加入相应的底物来引发化学发光反应。

6. 检测和分析：使用荧光计或发光仪测量样品中的发光信号，该信号的强度与待测分子的浓度成正比。通过与已知浓度的标准曲线比较，可以确定待测样品中待测分子的浓度。

微粒子酶促化学发光技术具有高灵敏度、高选择性和广泛的应用范围。它在医学诊断、生物学研究和药物开发等领域发挥着重要作用。

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UnicelDXI800化学发光仪SOP培训资料

U n i c e l D X I800化学发光仪S O P

UniCel DxI 800 Access 全自动微粒子化学发光仪操作规程 1 目的 此规程用于Beckman Coulter UniCel DXI 800全自动微粒子化学发光仪的操作与维护工作。 2 适用范围 适用于Beckman Coulter UniCel DXI 800 全自动微粒子化学发光仪。 3 方法与原理 3.1以碱性磷酸酶标记抗原，抗体； 3.2以磁性微粒子（d<7μ）为载体； 3.3发光底物为AMPPD（Dioxetane-phosphate） 3.4免疫学反应模式：夹心法和竞争法 4 检测项目 4.1生殖激素 β-HCG ， Prolactin ，FSH ， LH ，Progesterone Estradiol ， Unconjugated Estriol ， AFP-ONTD Testosterone ，DHEA-S 4.2甲状腺激素 T3 ，T4 ，TU ，HYPERsnesitive hTSH ，FT4 ，FT3 Anti-TPO ，Thyroglobulin ， Anti-Thyroglobulin 4.3贫血 VitB12，Folate ，RBC Folate ，Ferritin 4.4心血管系统 CK-MB ，Digoxin ，Mylglobin ，Accu Troponin I 4.5肾上腺/垂体 Cortisol ，Urine Cortisol ，Human Growth Hormone PTH ，ACTH*

4.6肿瘤标志物 AFP ，CEA ，PSA，Hybritech PSA，Hybritech free PSA CA19-9 ，CA125 ，CA15-3 4.7感染性疾病 Chlamydia Ag ，Urine Chlamydia Ag ，Chlamydia Ag Confirmatory Toxo IgG，Toxo IgM ，Rubella IgG，Rubella IgM ，CMV IgG* ，CMV IgM* 4.8糖尿病 Ultra Sensitive Insulin 4.9过敏性疾病 Total IgE 4.10治疗药物监测 Theophylline ，Digoxin 4.11骨代谢 Ostase ，μDpd* 4.12血液病毒 HIV ? ** ，HBsAg ， HBsAg Confirmatory ， HBsAb ，HCV Ab ** HAV IgM ， HAV Ab， HBc Ab， HBc IgM ， HBeAg* ，HBe Ab * 4.13产前筛查 AFP ，β-HCG , uE3 4.14 表1化学发光免疫分析仪项目速查表

化学发光

化学发光免疫测定（CLIA）技术 化学发光免疫测定（Chemiluminesent Immunoassay,CLIA）是免疫测定技术继酶免技术（EIA）、放免技术（RIA）、荧光免疫技术（FIA）和时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）之后发展的一项新兴测定技术。要谈化学发光免疫测定技术就必须先谈化学发光。 化学发光技术是近二、三十年来发展起来的一种测定方式，其利用化学反应释放的自由能激发中间体(常用碱性磷酸酶－金刚烷胺），使其从激发态回到基态，当中间体从激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而进行定量分析。化学发光具有荧光的特异性，同时不需要激发光，就避免了荧光分析中激发光杂散光的影响有很高的灵敏度，并且不象放射分析那样存在强烈的环境污染和健康危害，是一种非常优秀的定量分析方法。 虽然化学发光具备很高的特异性和很小的干扰，但化学分析本身的不特异性，制约了整个方法的使用。因此，如同RIA、FIA等一样利用免疫反应的特异性和化学发光本身的信号特异性形成了目前所说的化学发光免疫测定（CLIA）技术。 CLIA是一种高度敏感的微量测定技术，凡具有抗原性的物质（包括半抗原）都可以用CLIA测定。其起步于80年代初，快速发展于90年代，在国外CLIA的应用处于蓬勃发展的阶段,其具备以下特点 ①高度敏感，极限达10-17－10-19M/L，远高于RIA、EIA，与TRFIA相当但比TRFIA便宜。 ②特异性强，重复性好C.V.＜5％。 ③测定范围宽，可达7个数量级。 ④试剂稳定性好，无污染有效期6－12月。 ⑤操作简单，易于自动化。 在对环保很重视的国家，CLIA成了取代RIA的首选方法。 电化学发光分析技术特点 最先进的分析原理 专利的电化学发光分析技术（ECL）。ECL是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应。包括了两个过程。发光底物二价的三联吡啶钌及反应参与物三丙胺在电极表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个H成为强还原剂，将氧化型的三价钌还原成激发态的二价钌，随即释放光子恢复为基态的发光底物。 最好的发光标记物-三联吡啶钌 分子量小，结构简单。可以标记于抗原，抗体，核酸等各种分子量，分子结构的物质。从而具有最齐全的检测菜单。三联吡啶钌为水溶性，且高度稳定的小分子物质。保证电化学发光反应的高效和稳定，而且避免了本底噪声干扰。 最先进的包被技术 采用罗氏公司专利的链霉亲和素-生物素包被技术。链霉亲和素-生物素是最牢固和特异的结合。保证了牢固的包被效果和特异的检测结果。 特殊的磁性微粒子载体以及磁性分离技术 由聚苯乙烯包被的磁性微粒子为载体，直径仅为2.8um。同类型产品最小； 提供类均相的反应环境，增加反应面积，提高反应速度； 保证最终检测结果的高灵敏度； 利用磁性分离技术，实现全自动化分析； 与其它几种标记免疫测定技术相比，电化学发光具有以下的优点：

全球9家巨头——免疫分析仪检测原理及必看的检测技术！

全球9家巨头——免疫分析仪检测原理及必看的检测技术！ 各种现代化免疫分析仪都使用一种或两种新的免疫分析技术,如:酶联免疫分析技术、生物素一亲和素技术、化学发光分析技术、荧光偏振技术、时间分辨荧光免疫测定技术、电化学发光技术等,使免疫检验手段更先进、方法更可靠、结果更准确、可与放射免疫分析技术相媲美。下面就国内外常见的几种自动化免疫分析仪及其分析原理作一介绍。 一. 美国雅培公司的AXSYM全自动快速免疫分析系统 该系统综合使用了微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA)、荧光偏振免疫分析技术(F凹的,可测定激素、肿瘤标志物、肝炎、病毒标志物、娃娱、维生素和各种治疗药物浓度等。 (一)微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA)原理。 以双抗体夹心法为例,介绍如下:已包被了抗体的塑料微珠试剂中,加入待测标本后,经温育,再加入碱性磷酸酶标记的抗体、形成抗体一抗原一酶标记抗体复合物。然后将其转移到玻璃纤维柱上,用缓冲液洗涤,没有结合的抗原、酶标抗体被洗掉,结合抗原抗体的塑料微珠则被保留在纤维柱滤膜的上方。这时再加入底物,4-甲基伞型酣磷酸盐(4-Mup)。酶标抗体上的碱性磷酸酶将4Mup分解,脱磷酸后形成甲基伞型酣(4Mu),它在365nm激发光的照射下,发出448nm的荧光,经过荧光读数仪的记录、放大,计算出所测物质的含量。 (二)荧光偏振免疫分析技术(FPIA〉 这是一种均相荧光免疫分析法,主要用于测定小分子量物质,如药物浓度测定。原理是:标记在小分子抗原上的荧光素经485m的激发偏振光照射后,吸收光能,越入激发状态,激发状态的荧光素不稳定,很快以发出光子的形式释放能量而还原。发射出的光子经过偏振仪形成525一550nm的偏振光,这一偏振光的强度与荧光素受激发时分子转动的速度呈反比,游离的荧光素标记抗原,分子小,转动速度快,激发后发射的光子散向四面八方,因此通向偏振仪的光信号很弱,而与抗体大分子结合的荧

雅培化学发光仪器介绍

雅培(Abbott) AxSYM 雅培(Abbott)公司Axsym全自动微粒子酶免疫化学发光仪是集微粒子酶免分析技术(MEIA)、离子捕获免疫分析技术（ICIA）、荧光偏振免疫分析仪技术（FPLA）三种先进技术于一体的先进仪器，不同方法的结合使用，扩大了检测范围，并可根据不同被检测物的特点设计不同的反应步骤，具有灵敏度高、线性范围宽、检测速度快及检测项目齐全等特点。 Axsym(雅培化学发光仪)简易维修手册 https://www.docsj.com/doc/9f19184286.html,/p-6661637955883.html 全自动化学发光免疫分析仪（雅培Axsym）操作 https://www.docsj.com/doc/9f19184286.html,/p-7803709690226.html

全自动化学发光免疫分析仪（雅培Axsym）操作

美国雅培i2000化学发光法

发光免疫分析法是将发光反应与免疫反应相结合而产生的一种免疫分析法。我科引进美国雅培i-2000全自动化学发光免疫分析仪，同时可检测25项，每小时200个测试，提高工作效率和检测的准确度与灵敏度，减少人为操作误差。该仪器采用智能化分步冲洗，使用磷酸盐缓冲液和表面活性剂，彻底消除试验携带问题，提高了测试结果的可信度。通过压力检测的凝块检测技术可确保样本的前处理质量。 化学发光免疫分析（CLIA）检测原理：是一种以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物直接标记抗体或抗原的一类免疫分析法。常用的发光剂为丫啶酯类。这类标记物在化学结构上有产生发光的特殊基团，在发光免疫分析过程中直接参与发光反应。这类物质没有本底发光，在反应中能用于检测低浓度或微量浓度的样品。干扰作用也较少且标记和偶联后稳定、理化性质和免疫特性不改变。是一类发光效率很高的发光剂。可与抗体（或抗原）结合，生成具有化学发光活性强，免疫反应特异性高的标记抗体。检测技术中检测小分子抗原使用竞争法；检测大分子抗原用夹心法。 诊断试剂盒：已开发的诊断试剂盒主要有病毒标志物类、内分泌激素类、肿瘤标志物类、心肌标志物类、治疗性药物浓度、骨代谢指标和贫血类等方面的指标。首先开展的项目是乙肝两对半。随后将开展甲功5项和性激素5项。 检测项目优势：i2000全自动免疫发光分析仪中肝炎检测项目优势明显，属于全球金标准测试。其中的HbsAg和HbsAb为全定量检测，其余三项为半定量检测。甲状腺检测项目中促甲状腺素（TSH）具有最优灵敏度。 CLIA在临床中的应用价值：CLIA自动化仪器分析，其操作的智能化程度高，敏感度高、特异性强，精密度和准确性均可高于RIA，特别是检测灵活性高，快速简便，检测试剂稳定并易于进行室内与室间质量控制，目前已趋于替代RIA而成为免疫检测广泛采用的分析技术。

电化学发光免疫检测原理

电化学发光免疫检测原理 电化学发光免疫测定的基本原理 (Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI) 是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术，是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。它的标记物的发光原理与一般的化学发光(CL)不同，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定，而且还可用于DNA,RNA探针检测。 2+其检测原理(以TSH检测为例):第一步:结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)] + N3羟基琥珀酰胺酯(NHS)的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟。 第二步:将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中，再次孵育9分钟，使生物素通过与亲和素 的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体，形成双抗体夹心法。

2+下一步，蠕动泵将形成的 [Ru(bpy)],抗体,抗原,抗体,磁珠复合体吸入流动测量室，此3 时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时，游离的TSH抗体(与生物素结合的和2+与[Ru(bpy)]结合的抗体)也被吸出测量室。 3 紧接着，蠕动泵加入含三丙胺(TPA)的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程。发光2+剂 [Ru(bpy)]和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应，使二价的32++?[Ru(bpy)]被氧化成三价，后者是一种强氧化剂;另一方面，TPA 被氧化成阳离子自由基TPA，3+?后者很不稳定，可自发失去一个质子(H)，形成自由基TPA，这是一种很强的还原剂，可将3+2+一个电子给三价的[Ru(bpy)]，使其形成激发态的[Ru(bpy)]，而TPA自身被氧化成二丙胺332+和丙醛。激发态的[Ru(bpy)]通过荧光机制衰减，发射出一个波长620nm的光子，重新生成32+基态的[Ru(bpy)]。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光32+强度，光强度与[Ru(bpy)]的浓度呈线性关系,故可测出待测抗原的含量。 3

血检四项化学发光法调查

血检四项化学发光法调查 目前血检四项（HBsAg、HCV、HIV、TP）的检测方法主要有酶联免疫（ELISA）、核酸扩增（PCR）、胶体金标记、以及化学发光（CLIA）。现就CLIA在血检项目中的应用情况做一调查分析。 一．化学发光免疫分析法简介。 化学发光免疫分析法(Chemiluminescence imnunoassay，CLIA)是建立在放射免疫分析技术(radioimmunoassay，RIA)理论的基础上，以标记发光剂为示踪物信号建立起来的一种非放射标记免疫分析法。 CLIA是利用化学反应中释放大量自由能，产生激发态中间体，当其回到稳定的基态时发射出光子（hν），用发光信号测量仪对所发出的光量子进行定量测量。鲁米诺(1umino1)、异鲁米诺(isolumino1)及其衍生物、吖啶酯(acIidinim ester)衍生物、辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)是目前CLIA中使用最多的四类标记物。 表1 化学发光法类型 注：* 严格意义上属于荧光免疫。 二．国内外化学发光法的仪器和试剂情况。 国外化学发光法检测仪器的生产厂家以贝克曼、雅培、罗氏、拜耳这四家的市场占有率

较高。其中罗氏拥有唯一的电化学发光技术，雅培则独占微粒子酶联免疫（EMIA）。不同厂家的仪器有各自的优势检测项目，主流的仪器型号如下： 表2 国外主要化学发光免疫分析仪厂家 国内也逐渐有厂家研制化学发光试剂，配合国外引进的仪器（多为半自动）共同销售，也有自发研制的化学发光仪（泰格科信）。针对血检四项（HBsAg、HCV、HIV、TP），除北京科美生物（科美东雅）外，所有厂家试剂均只有HBsAg试剂。 表3 国内主要厂家仪器和试剂情况 国外厂家的试剂大多随仪器配送，并没有在SFDA单独注册。目前SFDA注册的血检四项化学发光法试剂列表如下。就检测项目来看，除梅毒外，其余三项均可使用化学发光法；就现有资料，国内外只有北京科美东雅配有梅毒检测试剂。 表4 SFDA注册的血检四项试剂 三．化学发光法的优势及劣势。 上世纪70 年代末，Halmann 和Vela首先把化学发光(CL)与酶免疫反应结合起来，建立了化学发光酶免疫分析法(CLIA)。目前，它已成为生命科学研究中的一个重要的分析手段，

常见化学发光免疫分析技术比较

常见化学发光免疫分析技术比较 1、化学发光免疫分析 化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，CLIA)， 英音：[,kemi,lju:mi'nes?ns] [,imju:n?u?'sei] 是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 CLIA是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 1.1、化学发光免疫分析原理 化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hv) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。 1.2、化学发光免疫分析类型 化学发光免疫分析法以标记方法的不同而分为两种: (1)化学发光标记免疫分析法;

(2)酶标记、以化学发光底物作信号试剂的化学发光酶免疫分析法 1.2.1 化学发光标记免疫分析 化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) , 是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物-acridiniumester (AE) , 是有效的发光标记物，其通过起动发光试剂(NaOH-H2O2 ) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成, 为快速的闪烁发光。吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法, 大分子抗原则采用夹心法, 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。 1.2.2 化学发光酶免疫分析 从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析(chemiluminescent enzyme immunoassay，CLEIA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂, 操作步骤与酶免分析完全相同: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物, 在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(AL P) , 它们有各自的发光底物。 12.2.1 HRP 标记的CLEIA 常用的底物为鲁米诺(3-氨基邻苯二甲酰肼,luminol) , 或其衍生物如异鲁米诺(4-氨基邻苯二甲酰肼) , 是一类重要的发光试剂。其结构如图4 所示。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行, 在过氧化物酶及活性氧[过氧化阴离子(O2-) , 单线态氧(1O2) , 羟自由基(OH·) , 过氧化氢(H2O2) ]存在下,生成激发态中间体, 当其回到基态时发光, 其波长为425nm。

化学发光方法学比较分析

免疫学技术的迅速发展对精度的要求越来越高，一般的酶免检测技术已逐渐无法适应这种形势的需要。现今发展的主流已不再是用放射性同位素标记的测定方法(避免污染环境及对人体损害)，而是转向于能在任何地方操作的快速均相和固相测定，最终趋向于能够枪测到皮克或10负18摩尔级的、非同位素的、自动或半自动的实验室测定技术，发光免疫分析技术顺应了这一潮流，开创了免疫诊断的新纪元。 发光免疫分析是一种灵敏度高、特异性强、检测快速及无放射危害的分析技术。70年代末以来得到了迅速发展，目前在国际上已经实现商品化和产业化的发光免疫分析产品，基本上可以分为：化学发光、时间分辨荧光(也称时间延迟光致发光)、电化学发光(也称场致发光和电致发光)几种。 1、化学发光 化学发光是指在化学反应过程中发出可见光的现象。通常是指有些化合物不经紫外光或可见光照射，通过吸收化学能(主要为氧化还原反应)，从基态激发至激发态。退激时通过跃迁(或将激发能转移至受体分子上)，释放能量产生光子，以光形式放出能量从而导致的发光现象。其主要特点为消耗发光剂。同时量子效率相对较低。 1.1 按化学反应类型分类：可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类。其中酶促化学发光主要包括辣根过氧化物酶(HRP)系统、碱性磷酸酶 (ALP)系统、黄嘌呤氧化酶系统等。酶促发光的共同特点为发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗，而反应体系中发光剂充分过

最，因此发光信号强而稳定，且发光时间较长。因此可采用速率法测量，故检测方式简单、成本较低。酶促反应的主要缺点为工作曲线可能随时间漂移，而且低端斜率容易呈非线性下移。而非酶促化学发光包括吖啶酯系统、草酸酯系统、三价铁一鲁米诺系统等。非酶促发光的共同特点为发光过程中标记物被消耗，同时作为标记物的发光剂是发光反应的瓶颈，即含量总是相对不足，因此发光信号持续时间较短；如果直接在免疫反应杯中启动发光反应，由于发光剂被很快消耗，故只能进行一次性测量。所以重复性较差。为降低检测成本并实现重复测量，目前普遍采用原位进样加流动池的时间积分测量方式。因此仪器成本及维护费用较高，而且反复使用的流动池可能导致交叉污染；并目冲洗或进样中产生的气泡也会干扰测定；同时繁琐冗长的冲洗过程也会成为提高检测效率的瓶颈。另外，使用磁性或非磁性微粒时，强烈的散射吸收作用也会降低灵敏度。 1.2 按发光持续时间分类：可分为闪光和辉光两类，闪光型发光时间在数秒内，如吖啶酯系统。其检测方式一般采用原位进样和时间积分法测量，即在检测器部位加装进样器，并保证加入发光剂和检测2个过程同步进行；同时以整个发光信号峰的面积为发光强度。而辉光型发光时间在数分钟至数十分钟以上，如HRP一鲁米诺系统、ALP—AMPPD 系统、黄嘌呤氧化酶-鲁米诺系统等。其信号检测无需原位进样，一般以速率法测量，即在发光信号相对稳定的区域任意点测量单位时间的发光强度。 测量化学发光反应的光强度，求得某些化学物质和生物物质的

化学发光微粒子免疫分化法 夹心法

化学发光微粒子免疫分化法夹心法 一、引言 化学发光微粒子免疫分化法夹心法（CLIA）是一种高灵敏度的免疫分析技术，以其独特的优势在生物医学研究、临床诊断等领域得到广泛应用。该技术利用微粒子作为固相载体，通过特定的免疫反应来检测目标物质，具有高精度、高灵敏度、低背景噪声等优点。本文将对CLI A的原理、实验流程、应用领域、优缺点分析及未来展望进行详细阐述。 二、技术原理 化学发光微粒子免疫分化法夹心法的核心是利用化学发光反应来检测免疫复合物。该方法将抗原或抗体结合到微粒子表面，形成固相复合物。当目标抗体或抗原与固相复合物特异性结合后，会形成夹心状的免疫复合物。此时，加入化学发光底物，触发化学发光反应，产生光信号。光信号的强度与目标抗体或抗原的浓度呈正相关，通过光电倍增管等检测设备进行信号的捕捉和测量，可实现对目标抗体或抗原的定量分析。 三、实验流程 1.准备微粒子：选择适当的抗原或抗体与微粒子结合，形成固相复合物。 2.样本处理：将待测样本进行适当的预处理，以提取和纯化目标抗体或抗原。 3.免疫反应：将固相复合物与样本中的目标抗体或抗原进行反应，形成夹心状的免疫复合物。 4.洗涤：去除未结合的物质，减少背景噪声。 5.化学发光反应：加入化学发光底物，触发化学发光反应，产生光信号。 6.检测与定量分析：通过光电倍增管等检测设备捕捉光信号，并测量其强度，根据标准曲线进行定量分析。

7.结果解读：根据测量结果，解读目标抗体或抗原的浓度。 四、应用领域 化学发光微粒子免疫分化法夹心法在多个领域具有广泛的应用价值。以下列举几个主要的应用领域： 1.临床诊断：CLI A技术可用于各种病毒、细菌、细胞因子等生物标志物的检测，为感染性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病等的诊断提供有力支持。例如，艾滋病病毒（HIV）抗体、甲型肝炎病毒（HAV）抗体、癌胚抗原（CEA）等临床指标的检测。 2.药物研发：CLI A可用于药物筛选和药物代谢研究，监测药物在生物体内的浓度和代谢情况，为新药研发提供重要数据支持。例如，在心血管药物研究中，CLI A可用于检测药物在人体内的浓度和分布情况。 3.食品安全：CLI A可用于食品中残留农药、兽药、毒素等的检测，保障食品安全和消费者健康。例如，在肉类和乳制品中残留抗生素的检测。 4.环境监测：CLI A可用于环境监测中各种有害物质的检测，如重金属、有机污染物等，为环境污染治理提供依据。例如，在饮用水和土壤中重金属离子的检测。 5.生物科学研究中蛋白质组学和细胞因子的检测：CLI A技术用于研究生物样本中蛋白质的表达水平及细胞因子的释放情况，有助于深入了解生物过程和疾病机制。例如，研究肿瘤细胞中蛋白质的表达差异和细胞因子的分泌情况。 6.新冠病毒检测：CLI A技术在新冠病毒检测中发挥着重要作用，用于检测新冠病毒抗体和抗原，有助于疾病的诊断和流行病学调查。 7.其他领域：CLI A技术还可应用于食品安全、环境监测、生物反恐等领域，例如检测食品中的毒素、生物武器成分等。 五、优缺点分析

axsym化学发光分析仪

T3测定 【目的】 指导T3含量的测定 【适用仪器】 AXSYM全自动免疫分析仪 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【方法原理】 微粒子酶免疫测定（MEIA）：双抗体夹心法，将包被了羊抗T3单克隆抗体的微粒子与待测标本温育后，加入碱性磷酸酶（AP）结合物，形成抗体-抗原-酶标记抗体复合物，将其转移到玻璃纤维柱上，用缓冲液洗涤，游离的抗原、抗体被洗掉，结合的抗原抗体的微粒子则被保留在纤维柱滤膜表面，加入底物4-甲基伞型酣磷酸盐(4-Mup)。酶标抗体上的碱性磷酸酶将4-Mup分解，脱磷酸后形成甲基伞型酣(4-Mu)，在365nm激发光的照射下，发出448nm的荧光，经过荧光读数仪的记录、放大，计算出所测物质的含量。 【主要试剂】 1．AXSYM T3试剂盒包括四部分：1 bottle为抗山羊T3微粒；2 bottle为TRIS缓冲液；3 bottle碱性磷酸酶结合物。 2．T3校准液：CAL A-F六点标准液或1，2两点校准液 3．T3质控液：低、中、高三种质控液 4．底物4-甲基伞型酣磷酸盐（MUP，Solution 1） 以上试剂均在2-8℃下保存，从冰箱里取出即可使用。但校准液和质控液使用时必须颠倒3~5次混匀，使用后立即放回冰箱。试剂盒和M UP不能冰冻保存，不使用时也应尽量放回冰箱保存。 【校准】

采用六点标准液定标或两点校准定标。定标通过后不用再次校准，但试剂批号更换和室内失控情况下，必须重新定标。 【质控】 室内质控应做低、中、高三个水平值。 【样本要求】 1．种类：用于血清、血浆。 2．采集：血清标本用无抗凝剂采血管（BD真空采血管，红头管）采集血液标本；血浆标本用肝素、EDTA、枸椽酸等抗凝管采集血液标本。不采用溶血严重标本。 3．保存与稳定性：血标本在2-8℃下可保存1天。超过24小时应分离血清或血浆保存，在-20℃下可保存12个月。外地标本应采用分离过的血清或血浆置于2-8℃冰浴送检。冰冻的标本应充分溶解，离心后测定。 【操作程序】 仪器基本操作、项目校准、样本测定详见AXSYM全自动免疫分析仪使用SOP 【结果确认】 复检要求：测定结果>8ng/ml，应进一步用手动稀释测定。与临床不符的结果，应重测。 【参考范围】 0.45~1.37ng/ml 【方法特性】 1．分析范围：0～8.0ng/ml 2．批内变异系数小于5%，批间系数均小于8.0%。FT3平均回收率为99.9%。 3．对胆红素50mg/dl，血红蛋白1000 mg/dl，总蛋白< 14g/dl等无明显干扰。 4．接受过鼠源性单抗体内诊断或治疗的患者由于体内产生人抗鼠抗体，可以明显干扰免疫测定。 【主要临床意义】

化学发光免疫分析方法

化学发光免疫分析方法 化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。其发光机理是：反应体系中的某些物质分子，如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁到激发态，当中间体由激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而实现定量分析。 化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物，因化学发光具有荧光的特异性，但与荧光产生需要激发光不同，化学发光由化学反应产生光强度，并不需要激发光，从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响。化学发光免疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。免疫分析系统是将化学发光物质或酶标记在抗原或抗体上，经过抗原与抗体特异性反应形成抗原－抗体免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫反应结束后，加入氧化剂或酶的发光底物，化学发光物质经氧化剂的氧化后，形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的。 一、化学发光免疫分析方法的类别 化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为3 大类，即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。 （一）化学发光免疫分析化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。 1. 鲁米诺类标记的化学发光免疫分析。 鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。在碱性溶液中，鲁米诺可被许多氧化剂氧化发光，其中H2O2最为常用。因发光反应速度较慢，需添加某些酶类或无机催化剂。酶类主要是辣根过氧化物酶（HRP），无机类包括O3、卤素及Fe3+、Cu2+、Co2+和它们的配合物。鲁米诺在碱性溶液下可在催化剂作用下，被H2O2等氧化剂氧化成3－氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基态时发出光子。鲁米诺的发

贝克曼库尔特DXI800化学发光仪标准操作程序

贝克曼库尔特DXI800化学发光仪标准操作程序 1目的 建立规范标准的贝克曼库尔特DXI800化学发光仪的使用和维护程序，保证仪器正常运行及检测结果的准确无误。 2仪器简介、工作原理 贝克曼库尔特DXI800化学发光仪是一种体外诊断设备，用于人体体液各种分析物浓度的定量、半定量或者定性测定。系统由两个主要的子系统组成：执行所有样品处理功能的仪器，以及提供人机界面的系统控制台。 工作原理：以金刚烷AMPPD为标记底物，采用微粒子酶促化学发光法检测。 3仪器运行环境 3.1仪器的使用环境要求 3.1.1安装环境 为了能够准确安全的操作设备，要确保安装空间，距离墙壁至少需要500mm的距离；避免直接面对阳光；要水平放置，倾斜度小于1/200；避免震动；适于2000米以下的地方使用；放置设备的房间温度应在18-32℃之间，温度波动不大于+2℃；相对湿度（RH）在20-80%之间，没有冷凝现象，根据具体情况选择是否安装空调； 3.1.2电气和噪音条件 与该设备10m内，要有一个电源连接器；该设备的电源开关板上得短路开关负荷等于或者小于30安培；强烈推荐UPS，确保本设备已经接地；交流电AC220V（+10%）50/60Hz （+3%），功率6kV A 3.1.3给排水 给水：设备距离去离子水出水孔在10m以内；去离子水导电度应不大于2us/cm（电阻率0.5MΩ·cm或更大），去离子水温在5-28℃之间；水压应在0.49x105到3.92x105Pa之间；平均用水量62L/h，最大用水量2.5L/min 排水：排水孔距离设备10m以内，并必须通向收集传染性废液的容器；排水孔的高度不能高于基底1.5m 3.1.4系统结构 ANL：1060mm（W）x1580mm（D）x1260mm（H）重量：600kg ISE：450mm（W）x1140mm（D）x1210mm（H）重量：320kg SMP：1090mm（W）x1500mm（D）x1600mm（H）重量：150kg 3.2 仪器使用环境

【精品】DXI800

D X I800

型号：U niCeI TM DxI 800 产品类型：智能化大免疫化学发光系统 规格： 产地：美国 生产厂家：贝克曼库尔特 产品说明：D xI 800 智能化大免疫化学发光系统 产品特性 一、突破分系统简单组合的传统方式，采用分立一体化整系统的专利设计 ★分立的4个进样通道，加快进样速度，减少样品的机上滞留时间；任何一个进样通道出现故障，不影响其他通道提供了整系统操作的灵活性；根据需要可以任意指定某个通道用于特定检测的进样，以保证整系统的流程优化；可何一个进样通道进行配件更换或维修。 ★一体化的整系统检测方式，所有进样通道共用同一个检测系统和孵育器，所有进样通道共用一套冲洗/读数系统光量子探测器，所有进样通道可以共享一个定标和QC结果，避免了分系统组合带来的的结果差异 二、DxI 800 的智能化样品管理 ★保持样品稳定性：储存温度：4-10℃ ★减少样品挥发，挥发率＜1％/小时 ★降低样品架滞留和样品传送时间，优化检测组合的自动化模式 ★样品储备用于运行反射检测，重检或加检 ★每隔9-18秒自动对样品架进行预分杯 ★18分钟内可对120个样品完成预分杯 三、DxI 800 的智能化传送系统 ★采用专利的三类定点分检传送系统，通过空气压力提取和放置反应杯，减少了样品取放过程中的震荡，防止样品操作的准确度和安全性。特定的传感器可以自动确认指定位置上的反应杯类型，保证了分检的准确性 ★传送系统用穿梭机在三维的经纬方向上运行，避免了机械传送带来的常见故障 四、DxI 800的智能化流程管理 ★采用反应杯散装供应器专利技术，改良设计的反应杯便于机械臂自动进行排放，运行中任意完成供应补充，散装2200个反应杯，允许离机时间长达3小时。 ★独特的试剂储存库和分检系统，机上试剂储存库为五层立体式排放，可以通过系统软件任意更换库中储存的试剂个试剂盒，用完的试剂盒可自动丢弃。 五、DxI 800的智能化系统指示 DxI 800大免疫仪器自动化的监控采用多种系统指示灯模式，操作人员可以直接通过指示灯的状态改变，远距离对 六、DxI 800的智能型自动化 ★随机任意连续的样品和试剂装/卸模式 ★最简便灵活的消耗品补充 ★专利的多层覆膜穿刺式试剂盒 ★全面自动化的顺应性 ★自动化系统预备 适应于大免疫检测系统的智能化要求 适应于实验室仪器升级对检测系统化的要求

（仅供参考）化学发光常见问题集锦

（仅供参考）化学发光常见问题集锦 Beckman Coulter ACCESS 系列全自动微粒子化学发光 免疫分析系统 常见问题及答疑 目录 第一部分：化学发光基础知识第1--17问第二部分：仪器应用部分第18--76问第三部分：项目应用部分第77—109问 第一部分：化学发光基础知识 1 什么是化学发光，与放免、酶免比较有何不同？ 化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是将化学发光与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。 化学发光免疫分析比放射免疫，酶联免疫具有更高灵敏度，具备操作简便、快速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有害的试剂，试剂保存期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。 （1）与放免（RIA）产品比较 与放射免疫试剂（RIA）比较，化学发光避免了放射性核素的污染以及对操作人员的伤害，大大缩短了反应时间，同时兼具高灵敏度的优势。 （2）与酶免（ELISA）产品比较 灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具ELISA法简便的操作方法与较短的反应时间。 2 什么是标记免疫技术，它的三大要素是什么？ 将Ag或Ab用标记物(如荧光素、酶、放射性同位素、化学发光物质等)进行标记，在与标本中的相应Ab或Ag反应后，可以不必测定Ag-Ab复合物本身，而测定复合物中的标记物，通过标记物的放大作用，进一步提高了免疫技术的敏感性。 三要素：通常在检测系统中会使用到一种叫标记物（labeling）

的物质,常标记在抗体上通常会有一个分离（separation）的过程在最后读取信号前 需要去仔细关注一下分析的模式（format） 3 标记免疫技术主要有哪几种？ 主要经历了四种标记免疫技术的发展：荧光素(Fluorophores) –FIA 放射性同位素(Radioisotopes) – RIA 酶(Enzymes) – EIA 化学发光物质 - CLIA 4 ACCESS化学发光原理？ 分析方法及过程 ACCESS系统采用磁性微粒作为固相载体，以AMPPD作为发光剂，固相载体的应用扩大了测定的范围。以竞争法、夹心法等免疫测定方法为基础。试剂包装采用特殊的设计，每个试剂包有5个小室分别把不同的试剂分开，减少了交叉污染，保证了检测质量。 ⑴、抗原抗体结合：将包被单克隆抗体的顺磁性微粒和待测标本加入反应管中，标本中的抗原与微粒子表面的抗体结合，再加入碱性磷酸酶标记的抗体，经温育后形成固相包被抗体-抗原-酶标记抗体复合物。 ⑵、洗涤、分离：在电磁场中进行3次洗涤，很快将未结合的多余抗原和酶标记抗体洗去。 ⑶、加入底物AMPPD发光剂：AMPPD被结合在磁性粒子表面的碱性磷酸酶的催化下迅速去磷酸基因，生成不稳定的中介体AMPD。AMPD很快分解，从高能激发态回到低能量的稳定态，同时发射出光子，这种化学发光持续而稳定，可达数小时之久。通过光量子阅读系统记录发光强度，并从标准曲线上计算出待测抗原的浓度。 5 什么是钩状效应（hook effect），如何判断及解决？ 免疫测定的实质是抗原抗体反应，抗原抗体反应是按一定的分子比例结合，当二者比例适中时，形成的免疫反应最强烈，形成复合物或检测的信号与所测的抗原或抗体成比例关系，但当抗原或抗体其中