浙江大学生物生物化学与分子生物学

浙江大学2009年考研专业课试卷生物化学

试题和往年的题型完全不一样，多了不定项选择题，而且选择超多，达到10个，都是些很细小的东西。大题有：

1、G蛋白及其作用过程图

2、柠檬酸循环及其意义

3、糖酵解和糖异生不可逆的原因

4、血红蛋白为什么比肌红蛋白更适合运输氧

浙江大学2008年考研专业课试卷生物化学

1、什么是膜蛋白？举例说明膜蛋白的主要特征和生物学功能。(10)

2、如何理解在酶催化作用的高效性和专一性理论中论述的“来自酶与底物相互作用的结合赋予了催化反应的高效性和特

异性”，举例说明。(10)

3、什么是G蛋白？描述生物通过G蛋白受体进行信号传导的机理，并举例说明。(10)

4、脂肪酸具哪些特征适合能量储存？分析阐明胖熊如何利用脂肪冬眠，骆驼如何利用驼峰储存脂肪作为水的来源。(10)

5、什么是糖酵解和糖异生？由于糖酵解和糖异生都是不可逆的过程，因此二个途径可以同时进行。如果两个途径同时以

相同的速率进行，会导致什么结果？细胞是通过什么机制对这两个过程进行调控的。(10)

6、人消耗了大量的蔗糖之后，多余的葡萄糖和果糖是如何转化成脂肪酸的。(10)

7、水在生命过程中主要功能有哪些？与其他普通溶剂比较，水的什么性质决定水是生命不可缺少的物质，为什么？(10)

8、写出20中氨基酸的3字母和1字母的缩写，根据R基团的极性，电荷及苯环可以分成哪五类？哪些是人体必需的氨

基酸和非必需氨基酸？(20)

9、氨基酸的序列决定了蛋白质的分子构造和功能，请阐明至少两种分析和决定氨基酸序列的方法及其原理，并

比较说明这两种方法的优缺点。(20)

10、有8种酶参与三羧酸循环：柠檬酸合酶，顺乌头酸酶，异柠檬酸脱氢酶，а-酮戊二酸脱氢酶，琥珀酸脱氢酶，

延胡索酸酶和苹果酸脱氢酶，（1）写出每一种酶催化反应的平衡化学方程式。

（2）说出每一种酶催化反应需要的辅助因子。（3）写出从乙酰辅酶A到CO2代谢过程的一个平衡净反应方程式。(20) 11、作为生物化学实验室的新手，进入实验室后，首先你需要几周的时间刷瓶子和试管等，然后逐渐开始学习配制各种缓冲液和试剂。接下来你要开始一个蛋白质纯化实验。实验目的是分离一种参与柠檬酸循环的酶——即位于线粒体间质的柠檬酸盐合成酶。请根据上述要求设计这个实验（包括实验的材料，主要的实验设备仪器和药品，蛋白质分离纯化的技术及原理，描述具体的实验步骤，最后对实验可能获得的结果进行分析）。(20)

浙江大学2007年考研专业课试卷生物化学

1.什么是蛋白质？分类并举例描述蛋白质的功能，描述你最熟悉的5种蛋白质分离纯化方法的工作原理。

2.蛋白质分子变性与核酸分子变性的本质区别是什么？引起蛋白质和核酸变性的主要因素有哪些，

原理是什么？它们变性后进行复性的方法分别有哪些？（20分）

3.什么是酶？酶的国际分类法将酶分为几类？举例说明每一类酶催化反应的原理？（20分）

4.细胞呼吸分为几个阶段？简单描述这几个阶段的代谢特征。（20分）

5.真核生物mRNA分子构造通常都具有5’帽（5’cap）和3’端的多聚腺苷酸尾[3’poly(A) tail]，

简单描述它们的结构特征和可能的生物学功能。（20分）

6.什么是生物膜？生物膜的主要分子组成、结构特征及生物学功能是什么？

简单描述生物膜是如何被动及主动的进行溶质分子的运输的。（20分）

7.细胞内收到损伤的RNA及蛋白质能跟很快被编码的DNA信息取代而得以修复，然而DNA的损伤却不能被自身的信息所取代，DNA的损伤是依靠细胞内多重系统进行修复，请描述目前已知的可导致DNA损伤的物理化学因素以及细胞内的多重DNA修复系统，并结合相关知识，以癌症为例讨论“DNA 的修复决定人的生死”的含义。（30分）

浙江大学2006年考研专业课试卷生物化学

1水是生命不可缺少的物质，从生物化学的角度描述水在生命体中的重要作用。

2描述生物膜的结构特征及其生物学功能。

3简单描述生物体内的三种DNA重组方式。

4简单描述生物体内的四种DNA修复系统。

5简单描述蛋白质合成的五个阶段。

6简单描述柠檬酸循环的八个步骤：

7非共价键在生物大分子中扮演了十分重要的作用，有哪四种非共价键？

并举例说明它们在维持蛋白质、核酸结构中所起到的作用。

8在自然界中构成蛋白质的氨基酸有20种，根据他们的R基的化学特征可以分成哪几大类？

每一类的特征是什么？请写出每一类中包括的氨基酸全称、三字母和单字母的缩写。

9传统的氨基酸测序原理是Edman化学降解法，近年来又发展了电喷射串联质谱法测定氨基酸序列，

分别描述它们的原理和特点。

10什么是抗原和抗体？什么是单克隆抗体和多克隆抗体？基于抗体－抗原相互作用的生化分析方法有酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫印记测定(Western Blot)及抗体芯片等，描述其中一种的作用原理。

11描述使用双向电泳进行蛋白质分离的原理，利用这项分离技术设计一个研究实验，

写出实验目的、方法及步骤，并列出所需要的其它仪器、药品、研究工具等。

浙江大学2005年考研专业课试卷生物化学

1、简单描述蛋白质的超二级结构和结构域的概念。

2、简单描述蛋白质及核酸的变性。

3、在功能上RNA可以分为几种？描述生物体内蛋白质合成过程及各种RNA在这个过程中作用是什么？

4、描述生物膜的机构特征及其生物学功能。

5、简单描述柠檬酸循环的反应机制。

6、DNA聚合酶、RNA聚合酶、逆转录酶是生物体内重要的核酸合成酶，通过触媒反应机理，

描述它们的相同点和不同点。

7、什么是抗原和抗体？什么是单克隆抗体和多克隆抗体？基于抗体－抗原相互作用的生化分析方法有

酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫印记测定(Western Blot)及抗体芯片等，描述其中一种的作用原理。8、国际分类法，酶分为哪六大类？酶作为生物催化剂的特点是什么？

写出3－5种你所熟悉的酶并简单描述它们的活性。

9、作为生物化学实验室的新手，进入实验室后，首先你需要几周的时间刷瓶子和试管等，然后逐渐开始学习配制各种缓冲液和试剂。接下来你要开始一个蛋白质纯化实验。实验目的是分离一种参与柠檬酸循环的酶——即位于线粒体间质的柠檬酸盐合成酶。请根据一下的步骤回答相应的问题。

实验步骤1：取20kg新鲜牛的心脏，置于冰上，使用含有0.2M蔗糖、pH7.2的缓冲液，匀浆（均质化）。问题1:为什么要用心脏组织？并且为什么选用如此大量的组织？

问题2：在整个过程中为什么必须使组织始终保持在低温？为什么需要维持pH在7.2左右？

问题3:下一步通过什么实验能够获得较纯的组织细胞中的线粒体组分？

问题4:纯化的线粒体通过渗透压裂解后，样品中含有线粒体膜和线粒体内含物。如何使得蛋白质从样品

中沉淀下来？解释相应的原理。

实验步骤2:沉淀经溶解和透析后进行分子量排阻层析分离。通过280nm紫外吸收收集各分离的组分。问题5:为什么使用280nm进行测定？第一个和最后一个组分所含蛋白质的分子特征是什么？

实验步骤3:将上一步收集的组分进行离子交换层析分离。

问题6: 实验步骤3的蛋白质分离的原理是什么?

实验步骤4:为了获得能够测序（氨基酸）的高纯度的蛋白质并且进一步特征分析，需要使用双向电泳进行纯化。

问题7：描述双向电泳的纯化原理。

浙江大学2004年考研专业课试卷生物化学

一、名词解释：（50）

1 埃德曼降解

2 抗体

3 诱导契合学说

4 热力学第二定律

5 补救途径

6 荷尔蒙

7 竞争性抑制

8 细胞膜

9 DNA聚合酶10 基因表达

二、问答题：

1 根据国际分类法将酶分成哪几大类，分别叙述它们的酶反应特征？（15）

2 对生物体转录和复制的特征进行说明比较？（15）

3 叙述基因文库和cDNA文库的制作步骤并进行它们的特征比较？（20）

4 用图表示说明生物体内三羧酸循环ATP产生的途径和它们的调控机理？（20）

5 比较说明SDS-PAGE（SDS-聚丙烯酰胺电泳）和琼脂糖凝胶电泳的物质

分离原理和特点？（30）

浙江大学2003年考研专业课试卷生物化学

一是非题(1/20)

1 氧化磷酸化作用是ATP的生成基于与相偶联的磷酸化作用.( )

2 酶的化学本质是蛋白质.( )

3 多肽链结构中,一个氨基酸残基就是一个肽单位.( )

4 FMN和FAD的组成中有核黄素.( )

5 在细菌的复制中起主要作用的是DNA聚合酶I( )

6 DNA变性后其粘度增大( )

7乙醛酸循环在所有的高等植物中都存在.( )

8 EMP途径本身只产生还原剂,而不产生高能中间产物.( )

9 酶促反应的能量效应是降低反应的活化能.( )

10 与胆固醇的化学结构最相近的维生素是维生素B12.( )

11 CoQ只能作为电子传递的中间载体.( )

12 DNA双螺旋结构的稳定性主要来自碱基对之间的氢键( )

13 组成蛋白质的所有氨基酸中,由于含有的α-碳原子属于不对称碳原子,因此都具有旋光性.( )

14 mRNA的3`端polyA结构是由DNA的非编码区转录的.( )

15 糖酵解的限速酶为丙酮酸激酶.( )

16 乙酰辅酶A是进入TCA循环还是生成酮体,主要由草酰乙酸浓度调控.( )

17 E.coli RNA 聚合酶的σ亚基与转录的终止识别有关.( )

18 氧化还原电对中,电子从电势较低的电对流向电势较高的电对,这是自由能降低的现象( )

19 葡萄糖和果糖都具有还原性.( )

20 如果加入足够量的底物,即使有竞争性抑制剂存在,酶催化的最大反应速度Vmax是可以达到的( ) 二写出下列物质的结构式(2/10)

1 Ser

2 U

3 草酰乙酸

4 ATP

5 D-glucose

三写出下列酶催化的生化反应式( 不要求写结构式)(3/30)

1 磷酸果糖激酶

2 磷酸甘油变位酶

3 丙酮酸脱氢酶系

4 顺乌头酸酶

5 异柠檬酸裂解酶

6 脂酰辅酶A脱氢酶

7 谷丙转氨酶

8 鸟氨酸转氨甲酰酶

9 DNA合成酶10 氨酰tRNA合成酶

四综合题(15/90)

1 简述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳基本原理,你使用该技术分离和检测过何种物质?主要操作步骤有哪些?

2 质粒是基因工程中最常用的载体,为获得某质粒(如pUC18)DNA,请设计一简单的实验过程(步骤).

3 谈谈你所了解的生物化学近年来的新进展.

4 DNA双螺旋模型是哪年由谁提出的?简述其基本内容.为什么说该模型的提出是分子生物学发展史上的里程碑,具有划时代的贡献?

5 何谓变性,那些因素可以引起蛋白质的变性?何谓别构(变构)?举一例说明.

6 试述三羧酸循环是如何沟通糖类,脂类和蛋白质三大有机物的代谢的?

浙江大学2002年考研专业课试卷生物化学

一是非题(1/20)

1 所谓肽单位就是指组成蛋白质的氨基酸残基

2 在竞争性抑制剂存在的情况下,即使加入足够量的底物,酶仍不能达到其催化的最大反应速度

3 一级结构决定空间结构,所以蛋白质合成中新生肽链的折叠无须其他蛋白质的帮助.

4 Sanger反应(二硝基氟苯法)用以鉴定多肽链羧基末端氨基酸,

而Edman反应(苯异硫氰酸酯法)则用以鉴定多肽链氨基末端氨基酸.

5 与胆固醇的化学结构最相近的维生素是维生素B12.

6 在某些生物中,RNA也可以是遗传信息的基本携带者

7 生长激素释放抑制因子是一个14肽

8 维生素B1的辅酶形式是TPP

9 地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种

10 肾上腺素和胰高血糖素都通过cAMP很快地对机体组织发挥作用

11 呼吸链电子载体是按照其标准势能逐步下降而氧化还原电势逐步增加的方向排列的

12 CO对氧化磷酸化的影响主要是抑制ATP的形成过程,但不抑制电子传递过程

13 花生四烯酸广泛存在与植物中,它是哺乳动物的必需脂肪酸

14 即使在饥饿状态下,肝脏也不利用酮体作为燃料分子,而大脑组织在血糖供应不足时利用酮体作为燃

料分子供能

15 不同生物对氨基氮的排泄方式不同,如鱼类以氨的形式直接将氨基氮排出体外;

鸟类以尿酸形式,植物和动物以尿素形式将氨基氮排出体外

16 紫外辐射引起的DNA损伤可通过光复活作用修复. 光复活酶虽然在生物界分布很广,

从低等单细胞生物直到鸟类都有,但高等哺乳类中却没有

17 逆转录酶存在与所有RNA病毒中,在RNA病毒复制中起作用

18 遗传密码字典在生物界并非完全通用,像原生动物纤毛虫就有例外

19 糖基化是真核生物蛋白质修饰的一种重要方式,内质网和高尔基体两种亚细胞器都能对蛋白质进行糖

基化修饰

20 真核生物中同一转录单位可以通过不同的拼接而产生不同的蛋白质合成模板mRNA

二用化学结构式完成下列酶促反应(4/20)

1异柠檬酸裂解酶 2 丙酮酸羧化酶 3 磷酸戊糖异构酶

4 烯脂酰辅酶A水化酶

5 丙氨酰tRNA合成酶

三综合题(10/60)

1 什么是蛋白质的二级结构?稳定二级结构的主要作用力是什么?

多肽链中存在的脯氨酸对α螺旋的形成有何影响,为什么?哪种蛋白质完全由α螺旋构成?

2 电泳是分离生物大分子的主要方法之一,简述其原理;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳能测定蛋白质的分子量,原理是什么? 分子量不同的蛋白质在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率与分子量有什么关系？

3 何谓酶促反应动力学?底物浓度,温度和PH值对酶促反应速度各有什么影响?试分析之.

如果希望反应初速度达到其最大速度的90%,底物浓度应为多大?

4 何谓核酸变性?引起核酸变性的因素有哪些?何谓DNA的熔解温度(Tm)?其大小与哪些因素有关?

5 从结构和功能两大方面比较E.coli DNA 聚合酶III和RNA聚合酶

6 Jacob 和Monod在上个世纪60年代初提出乳糖操纵子模型,开创了基因表达调节研究的新领域, 具有划时代意义.请你试述乳糖操纵子理论.

浙江大学2001年考研专业课试卷生物化学

一是非题(1/30)

1 酶反应的专一性取决于其辅助因子的结构

2 肽酰转移酶在蛋白质合成中催化肽键的生成和酯键的水解

3 E.coli 连接酶摧化两条游离单链DNA分子形成磷酸二酯键

4 通过柠檬酸途径将乙酰辅酶A转移至胞液中,同时可使NADH上的氢传递给NADP+生成NADPH

5 亮氨酸的疏水性比缬氨酸强

6 必需氨基酸是指合成蛋白质必不可少的一些氨基酸

7 脯氨酸是α螺旋破坏者

8 维系蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键

9 在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先解链

10 真核细胞中DNA只存在于细胞核中

11 DNA双螺旋的两条链方向一定是相反的

12 酶影响其催化反应的平衡

13 酶促反应的米氏常数与催化的底物无关

14 维生素E是一种天然的抗氧化剂

15 维生素B1的辅酶形式是TPP

16 ATP是体内能量的储存形式

17 糖酵解过程无需氧气的参与

18 胆固醇是生物膜的主要成分,可调节生物膜的流动性

19 蛋白质的生理价值主要取决于必需氨基酸的种类,数量和比例

20 磷酸吡哆醛只作为转氨酶的辅酶起作用

21 DNA复制时,后滞链需多个引物

22 绝缘子和增强子一样都属于顺式作用元件

23 PCR是包括变性,复性和延伸三个步骤的循环反应

24 Sanger曾两获诺贝尔奖

25 核糖体上有三个与tRNA有关的位点:A位点,P位点,E位点

26 生长激素释放抑制因子是一个14肽

27 脂肪酸合成酶催化的反应是脂肪酸-β氧化反应的逆反应

28 镰刀型贫血症患者血红蛋白与正常人的血红蛋白在氨基酸组成上只有2个残基有差别

29 地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种

30 中国科学家在今年完成了人类基因组1%的测序任务

二写出下列物质的分子结构式1/6

1 Thr

2 D-核糖

3 A

4 GSH

5 尼克酰胺

6 丙酮酸

三名词解释(4/24)

1 反密码子

2 操纵基因

3 多肽核酸( peptide nucleic acid )

4 折叠酶

5 共价调节

6 Humen Genome Project

四综合题（10/40)

1 试表述Glu经脱氨基,有氧氧化等途径彻底分解成NH3 , CO2, 和H2O 时的代谢路线,

要求用箭头表示所经过的主要中间产物.计算1摩尔Glu共可产生多少摩尔的NH3,CO2,ATP?

2 以血红蛋白为例说明蛋白质四级结构的含义,比较血红蛋白与肌红蛋白结构和功能的异同

3 请对中心法则加以阐述

4 凝胶过滤是分离蛋白质混合物最有效的方法之一,说明其工作原理并简述用该法分离蛋白质的实验操作步骤.

浙江大学2000年考研专业课试卷分子生物学

一、名词解释(12)

1、PCR

2、Southern bolt

3、外显子

4、G蛋白

5、基因组

6、反式作用子

二、问答题：

1、简述DNA结构(15)

2、何为分子克隆?扼要说明分子克隆技术操作要点和常用的工具酶(15)。

3、何为基因突变?扼要说明基因突变的类型及其后果(15)。

4、RNA聚合酶的作用特点。以真核细胞mRNA为例说明转录产物的加工过程(15)。

5、简述基因的表达与调控机理(18)。

6、阐述目前国际上的植物基因组研究的现状和发展趋势(10）。

浙江大学2004年考研专业课试卷分子生物学

1 阐述PCR技术原理(15)

2 描述一种研究基因表达的方法(15)

3 阐述蛋白质生物合成途径(25)

4 阐述一条真核细胞信号转导途径(从信号接受到调控基因表达) (25)

5 阐述一条反向遗传克隆功能基因的途径(20)

6 A,B和C三个基因都决定矮牵牛花的花色,当基因型为A-B-C-时表型为红色,其余为白色.AaBbCc的个体与三种纯系(系1系2和系3)杂交.分别的红色:白花1:3,1:

7 和1:1的分离比.问:系1和系2杂交,F1基因型和表型如何,F2的基因型和表型如何

系3和系2杂交,F1基因型和表型如何,F2的基因型和表型如何(要写出分离比) (25)

7 什么是染色体重排和基因重排它们在发育中有和作用它们在进化中有和作用(25)

浙江大学2005年考研专业课试卷分子生物学

一、名词解释：（20）突变顺式作用元件（cis acting element ）操纵子转座子RNA剪辑载体（vector）

二、描述cDNA文库构建原理与方法（25）

三、描述蛋白质生物合成过程（20）

四、阐述真核生物基因表达调控的基本过程（20）

五、阐述DNA半保留复制过程（15）

六、一个父亲是色盲而本人色觉正常的女子，与一个色觉正常的男子结婚，但这个男子的父亲是色盲，问这对夫妇的子女表现色觉正常和色盲的可能性各有多少？（10）

七、果蝇的某一性状其正反交结果不同，你如何判断该性状是伴性遗传？是母性影响？还是细胞质遗传？（10）

八、下面是位于同一条染色体上的三个基因的隐性基因连锁图，并注明了重组频率。

如果并发率是60%，在αβγ/+ + + ×αβγ/αβγ杂交的1000个子代中预期表型频率是多少？（10）九、谋杀案调查中，警察怀疑受害人为父母报告失踪的5个人中的一个。对受害者身上提取的组织样品（X）及5对父母（A-—E）样品进行DNA指纹分析，利用探针检测两条染色体上高度多态性的DNA标记（locus1和locus2），结果如图所示，请指出受害人的最可能父母，并说明理由。（10）

十、请简要说明人工产生突变的各种方法，并举实例说明突变在分子遗传学研究中的重要作用。（10）

浙江大学2006年考研专业课试卷分子生物学

一、名词解释：(25)

1、RFLP

2、SSR

3、EST

4、STS

5、CAP

6、AFLP

7、SNP

8、FISH 9、Genome 10、RNA in situ hybridization 11、单克隆抗体12、基因芯片

二、描述cDNA文库构建原理与方法（25）

三、阐述基因突变的概念及引起突变的可能途径(25)

四、阐述一条反向遗传克隆功能基因的途径(25)

浙江大学2008年考研专业课试卷分子生物学

一、名词解释（18）：原癌基因冈崎片段基因治疗（Gene therapy） C值矛盾（C value paradox）奢侈基因 YAC

二、简介双脱氧链终止法进行DNA测序的原理和方法。（10）

三、简介DNA聚合酶Ⅰ和Klenow 大片段的结构和功能。（10）

四、什么是NCBI？其中包含的主要资源信息是什么？（10）

五、在基因的真核表达中，一个基因的表达框应包含哪些成分？举例说明组成型和诱导型启动子。（16）

六、述2006年诺贝尔生理学奖的获得者的主要贡献和这一成果的主要应用领域（16）

七、什么是转录因子？如果你找到了一个转录因子，设计一个实验证明该转录因子与某一顺式作用元件间的互作关系（20）

八、因ab是果蝇中的X连锁基因，两者相距7个单位，现有一 a+b/ab+雌蝇与野生型a+b+雄蝇杂交：

（1）后代中雄蝇的表型是a+b+或ab的几率是多少？

（2）后代中雌蝇的表型是a+b+的几率是多少？（10）

九、基因A，B，C，D，E，F，G具有相同的表型，现对其进行测试，结果如下，“+”代表能互补，“-“表示不能互补。

A B C D E F G 试问Ａ，Ｂ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ

G ＋－＋＋＋＋－（１）位于几条染色体上？

F －＋＋－＋－（２）有几条变异位于同一条染色体上？（10）

E ＋＋－＋－

D －＋＋－

C ＋＋－

B ＋－

A －

十、绵羊的角呼吁从性基因控制，即为在雄性时为显性，而在雌性中时为隐形。

现在在300只雌性绵羊样本中有75只有角。问：

（1）雌性中预期有多少（%）是杂合的？

（2）雄性中预期有角的占多少（%）？（10）

十一、利用Y染色体或线粒体DNA的特异性片段作标记，追踪人类民族或家族亲缘关系的原理是什么，各有何优点？（10）十二、什么是模式生物？常用的模式生物有哪些？你能说说它们的染色体数目吗？（10）

浙江大学2009年考研专业课试卷生物化学

试题和往年的题型完全不一样，多了不定项选择题，而且选择超多，达到10个，都是些很细小的东西。大题有：

1、G蛋白及其作用过程图

2、柠檬酸循环及其意义

3、糖酵解和糖异生不可逆的原因

4、血红蛋白为什么比肌红蛋白更适合运输氧

浙江大学生物化学丙实验报告1

实验报告 课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 蔗糖酶的提取 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法； 2、巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。 二、实验内容和原理 1、实验内容： 蔗糖酶的提取、分离纯化 2、实验原理： ①酵母细胞破碎 细胞破碎的常用方法 液体剪切法固体剪切法压力和研磨 物理法、化学渗透法、酶溶 本实验采用研磨的方法。通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取出来。 ②蔗糖酶的初步分离纯化 蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。 本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集样品。 由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯 操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。 三、实验材料与试剂

1、实验材料 市售干酵母粉10g/组(3～4人） 2、实验试剂 石英砂，95%乙醇(-20℃），20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液。 四、实验器材与仪器 电子天平（称量干酵母粉）；研砵（每组一套）；50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）；高速冷冻离心机；恒温水浴箱（50℃）；量筒（50ml）、微量移液枪（1000ul)及枪头或移液管（1ml)、玻棒、滴管等;1.5ml离心管（留样品Ⅰ、Ⅱ用）及离心管架；制冰机；－20℃冰箱。 五、操作方法和实验步骤 1、酵母细胞破粹（干磨法） ①称量：称取市售干酵母粉10g+约3-5 g石英砂放入研钵 ②研磨(干磨)：至尽可能成细粉末状（约15min） ③加液+研磨：量取总体积40 ml的20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液，分2次加研磨10min， 使呈糊状液体； ④离心：将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后(托盘天平上)，离心10min （条件：4℃、12000r/min） ⑤收集+测量：收集上清液并量出体积V1（样品I），另留1ml上清液（样品I ）放置－20℃冰箱保存用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析 2、热处理 ①水浴热处理：将上步抽提液（样品I），迅速放入50℃恒温水浴，保温30min， 并每隔5min用玻璃棒温和搅拌提取液。 ②冰浴冷却：保温后迅速用冰浴冷却5min ③离心：将热处理后的样品I转移至两支50ml离心管中，平衡后，离心10min。 （条件：4℃，12000r/min） ④收集+测量：收集上清液并量出体积V2（样品Ⅱ），另留1ml上清液（样品Ⅱ）放置－20℃冰箱保存（用于蔗糖酶蛋白含量测定、测定蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。 3、有机溶剂（乙醇）沉淀 ①冰浴：将热处理后的上清液加入相同体积的－20℃的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀，

浙江大学生物化学丙实验报告3,4

,. 实验报告 课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 蔗糖酶蛋白含量的测定、蔗糖酶活力测定及其分离纯化效果的评价 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛、袁平、朱耀仁、蔡玉林 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、蔗糖酶蛋白含量的测定——Folin-酚法 ①学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法； ②掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量； ③掌握分光光度计的使用方法。 2、蔗糖酶活力测定——3.5－二硝基水杨酸法 ①掌握酶活力测定的基本原理和方法； ②学习酶的比活力的计算。 二、实验内容和原理 1、Folin-酚测定法 Folin-酚试剂是由甲、乙两种试剂组成的。甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜和酒石酸钾钠组成，在碱性条件下蛋白质中的肽键与酒石酸钾钠铜盐起作用，生成紫红色络合物；乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成，在碱性条件下，铜-蛋白质络合物以及蛋白质中的酪氨酸残基（酚基）和色氨酸还原磷钼酸-磷钨酸试剂（乙试剂）产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物），其色泽深浅与蛋白质含量成正比。可用500nm 波长比色测定，适于测定蛋白质含量0.05～0.5g/L 。 优点： 简单、迅速、灵敏度高；反应较稳定。 缺点： 该反应受多种因素的干扰。 2、蔗糖酶活力测定 蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），是一种水解酶。它能催化非还原性双糖（蔗糖）的1,2－糖苷键裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖（还原糖）。因此，每水解1mol 蔗糖，就能生成2mol 还原糖。还原糖的测定有多种方法，例如：纳尔逊－索模吉试剂比色法，斐林试剂法等。 专业： 农业资源与环境 姓名： 李佳怡 学号： 3130100246 日期： 2015.5. 26 地点： 生物实验中心310 装 订 线

浙江大学物理化学实验思考题答案

一、恒温槽的性能测试 1.影响恒温槽灵敏度的主要因素有哪些？如和提高恒温槽的灵敏度？ 答：影响灵敏度的主要因素包括：1)继电器的灵敏度；2)加热套功率；3)使用介质的比热；4)控制温度与室温温差；5)搅拌是否均匀等。 要提高灵敏度：1)继电器动作灵敏；2)加热套功率在保证足够提供因温差导致的热损失的前提下，功率适当较小；3)使用比热较大的介质，如水；4)控制温度与室温要有一定温差；5)搅拌均匀等。 2.从能量守恒的角度讨论，应该如何选择加热器的功率大小？ 答：从能量守恒角度考虑，控制加热器功率使得加热器提供的能量恰好和恒温槽因为与室温之间的温差导致的热损失相当时，恒温槽的温度即恒定不变。但因偶然因素，如室内风速、风向变动等，导致恒温槽热损失并不能恒定。因此应该控制加热器功率接近并略大于恒温槽热损失速率。 3.你认为可以用那些测温元件测量恒温槽温度波动？ 答：1)通过读取温度值，确定温度波动，如采用高精度水银温度计、铂电阻温度计等；2)采用温差测量仪表测量温度波动值，如贝克曼温度计等；3)热敏元件，如铂、半导体等，配以适当的电子仪表，将温度波动转变为电信号测量温度波动，如精密电子温差测量仪等。 4.如果所需恒定的温度低于室温，如何装备恒温槽？ 答：恒温槽中加装制冷装置，即可控制恒温槽的温度低于室温。 5.恒温槽能够控制的温度范围？ 答：普通恒温槽(只有加热功能)的控制温度应高于室温、低于介质的沸点，并留有一定的差值；具有制冷功能的恒温槽控制温度可以低于室温，但不能低于使用介质的凝固点。 其它相关问题： 1.在恒温槽中使用过大的加热电压会使得波动曲线：( B ) A.波动周期短，温度波动大； B.波动周期长，温度波动大； C.波动周期短，温度波动小； D.波动周期长，温度波动小。 2.恒温槽中的水银接点温度计(导电表)的作用是：( B )

浙江大学生物化学(乙)第1次

您的本次作业分数为：100分单选题2.生成酮体和胆固醇都需要的酶是（）。 A HMG-CoA 合成酶 B HMG-CoA还原酶 C HMG-CoA裂解酶 D 乙酰乙酰硫激酶 E 转硫酶正确答案:A 单选题 3.乳糖操纵子的调节水平在（）。 A 复制 B 转录 C 转录后 D 翻译 E 翻译后正确答案:B 单选题 4.变构效应物对酶结合的部位是（）。 A 活性中心与底物结合的部位 B 活性中心的催化基团 C 酶的-SH基 D 活性中心以外的特殊部位 E 活性中心以外的任何部位正确答案:D 单选题 5.1分子葡萄糖经糖酵解分解为2分子乳酸时，其底物水平磷酸化次数为（）。 A 1 B 2 C 3 D 4 E 5 正确答案:D 单选题 6.酶的辅基具有下述性质（）。 A 是一种结合蛋白 B 与酶蛋白结合比较疏松 C 由活性中心的若干氨基酸残基组成 D 决定酶的专一性 E 与酶蛋白亲和力较大，一般不能用透析等物理方法彼此分开正确答案:E 单选题 7.体内转运一碳单位的载体是（）。 A 生物素 B 磷酸吡哆醛

C 四氢叶酸 D 二氢叶酸 E CoA 正确答案:C 单选题 8.原核生物转录的终止因子是（）。 A α B ρ C β D σ E Γ 正确答案:B 单选题 10.下列哪一物质含有高能键？（） A 6-磷酸葡萄糖 B 1,6-二磷酸果糖 C 1,3-二磷酸甘油酸 D 烯醇式丙酮酸 E 乳酸正确答案:C 单选题 12.肝脏不能氧化利用酮体是由于缺乏（）。 A HMGCoA合成酶 B HMGCoA裂解酶 C HMGCoA还原酶 D 琥珀酰CoA转硫酶 E 乙酰乙酰CoA硫解酶正确答案:D 单选题 14.下列关于遗传密码的基本特点，哪一点是错误的？（） A 密码无标点 B 一种氨基酸只有一种遗传密码 C 有终止密码和起始密码 D 密码专一性主要由头两个碱基决定 E 病毒、原核细胞或真核细胞都利用同一套遗传密码正确答案:B 单选题 16.三羧酸循环的第一个产物是（）。 A 乙酰CoA B 草酰乙酸 C 柠檬酸 D 苹果酸

浙大生化(丙)课堂期中试卷

生物化学（丙）期中试卷 一．判断题 1.1分子的NADH+H+经呼吸链氧化可产生 2.5分子ATP。 2.蛋白质变性的本质是蛋白质分子的高级结构被破坏，一级结构则保持完整。 3.琥珀酸脱氢酶和NADH脱氢酶的辅助因子都是FAD。 4.磺胺药可使乙酰胆碱酯酶的Km上升，Vmax不变。 5.ATP的主要功能是为机体提供能量和提供活性磷酸基团。 6.糖异生是指由丙酮酸、琥珀酸CoA、6-磷酸果糖、苹果酸等物质转变为葡萄糖的过程。 7.蛋白质三级结构的稳定力包括氢键、盐键、疏水相互作用、范德华力、二硫键、配位键 等次级键。 8.同源蛋白质的种属差异性说明一级结构的局部改变并不会影响蛋白质的功能。 9.同工酶是指功能相同，但结构和性质不同的一类酶。 10.限制性内切酶是指在一特殊序列处将DNA的两条链同时切断的一类酶。 11.ATP是磷酸果糖激酶I的底物，因此对该酶的活性起别构激活作用。 12.反馈抑制作用是指反应的产物对催化反应的酶的抑制作用。 13.硫辛酸、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和辅酶A都可以作为酰基的载体起传递作用。 14.酶催化高效性的机理是通过酸碱催化、温度效应、共价催化等因素降低了反应的活化能。 15.蛋白质的基本化学键是肽键、核酸的基本化学键是3’,5’-磷酸二酯键。 二．单选题 1.根据酶催化反应的性质，延胡索酸酶属于： (1)水解酶类(2)合成酶类(3)裂合酶类(4)转移酶类 2.当[S]=2Km时，V的值是： (1)2Vmax(2)2/3Vmax(3)1/3Vmax(4)1/2Vmax 3.下列酶催化的反应无CO2参与的是： (1)6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 (2)苹果酸酶 (3)3-磷酸甘油醛脱氢酶 (4)磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 4.1分子的F1，6-2P被彻底氧化分解为CO2和H2O可产生的高能化合物分子数为（通过 α-磷酸甘油穿梭）： (1)32(2)30(3)34(4)28 5.在2,4-二硝基苯存在下一分子FADH2通过呼吸链可产生的ATP分子数是： (1)1(2)0(3)1.5(4)2.5 6.DNA的双螺旋结构中，主要的稳定力是： (1)氢键 (2)疏水相互作用 (3)范德华力 (4)离子键 7.下列代谢途径既不发生在细胞液也不发生在线粒体中的是： (1)EMP途径(2)TCA途径(3)HMP途径(4)乙醛酸循环 8.蛋白质的特征吸收波长是：(1)260nm(2)280nm(3)340nm(4)500nm 9.下列代谢途径中能为机体提供NADPH+H+的代谢途径是： (1)糖酵解途径(2)乙醛酸循环途径(3)磷酸戊糖途径(4)呼吸链 10.在酶的活化和去活化中，磷酸化和去磷酸化常发生在那个氨基酸残基：

浙江大学考研生物化学真题及答案

一是非题1/30 1 酶反应的专一性取决于其辅助因子的结构 2 肽酰转移酶在蛋白质合成中催化肽键的生成和酯键的水解 3 E.coli 连接酶摧化两条游离单链DNA分子形成磷酸二酯键 4 通过柠檬酸途径将乙酰辅酶A转移至胞液中,同时可使NADH上的氢传递给NADP+生成NADPH 5 亮氨酸的疏水性比缬氨酸强 6 必需氨基酸是指合成蛋白质必不可少的一些氨基酸 7 脯氨酸是α螺旋破坏者 8 维系蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键 9 在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先解链 10 真核细胞中DNA只存在于细胞核中 11 DNA双螺旋的两条链方向一定是相反的 12 酶影响其催化反应的平衡 13 酶促反应的米氏常数与催化的底物无关 14 维生素E是一种天然的抗氧化剂 15 维生素B1的辅酶形式是TPP 16 ATP是体内能量的储存形式 17 糖酵解过程无需氧气的参与 18 胆固醇是生物膜的主要成分,可调节生物膜的流动性 19 蛋白质的生理价值主要取决于必需氨基酸的种类,数量和比例 20 磷酸吡哆醛只作为转氨酶的辅酶起作用 21 DNA复制时,后滞链需多个引物 22 绝缘子和增强子一样都属于顺式作用元件 23 PCR是包括变性,复性和延伸三个步骤的循环反应 24 Sanger曾两获诺贝尔奖 25 核糖体上有三个与tRNA有关的位点:A位点,P位点,E位点 26 生长激素释放抑制因子是一个14肽 27 脂肪酸合成酶催化的反应是脂肪酸-β氧化反应的逆反应 28 镰刀型贫血症患者血红蛋白与正常人的血红蛋白在氨基酸组成上只有2个残基有差别 29 地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种 30 中国科学家在今年完成了人类基因组1%的测序任务 二写出下列物质的分子结构式1/6 1 Thr 2 D-核糖 3 A 4 GSH 5 尼克酰胺 6 丙酮酸 三名词解释4/24 1 反密码子 2 操纵基因 3 多肽核酸( peptide nucleic acid ) 4 折叠酶 5 共价调节 6 Humen Genome Project 四综合题10/40 1 试表述Glu经脱氨基,有氧氧化等途径彻底分解成NH3 , CO2, 和H2O 时的代谢路线,要求用箭头表示所经过的主要中间产物.计算1摩尔Glu共可产生多少摩尔的NH3,CO2,ATP? 2 以血红蛋白为例说明蛋白质四级结构的含义,比较血红蛋白与肌红蛋白结构和功能的异同 3 请对中心法则加以阐述 4 凝胶过滤是分离蛋白质混合物最有效的方法之一,请说明其工作原理并简述用该法分离蛋白质的实验操作步骤

最新浙大生物化学试题

浙江大学2001年攻读硕士学位研究生入学考试题 考试科目:生物化学,编号555 注意:答题必须写在答题纸上,写在试卷或草稿纸上均无效 一是非题1/30 1 酶反应的专一性取决于其辅助因子的结构 2 肽酰转移酶在蛋白质合成中催化肽键的生成和酯键的水解 3 E.coli 连接酶摧化两条游离单链DNA分子形成磷酸二酯键 4 通过柠檬酸途径将乙酰辅酶A转移至胞液中,同时可使NADH上的氢传递给NADP 生成NADPH 5 亮氨酸的疏水性比缬氨酸强 6 必需氨基酸是指合成蛋白质必不可少的一些氨基酸 7 脯氨酸是α螺旋破坏者 8 维系蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键 9 在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先解链 10 真核细胞中DNA只存在于细胞核中 11 DNA双螺旋的两条链方向一定是相反的 12 酶影响其催化反应的平衡 13 酶促反应的米氏常数与催化的底物无关 14 维生素E是一种天然的抗氧化剂 15 维生素B1的辅酶形式是TPP 16 ATP是体内能量的储存形式 17 糖酵解过程无需氧气的参与 18 胆固醇是生物膜的主要成分,可调节生物膜的流动性 19 蛋白质的生理价值主要取决于必需氨基酸的种类,数量和比例 20 磷酸吡哆醛只作为转氨酶的辅酶起作用 21 DNA复制时,后滞链需多个引物 22 绝缘子和增强子一样都属于顺式作用元件 23 PCR是包括变性,复性和延伸三个步骤的循环反应 24 Sanger曾两获诺贝尔奖 25 核糖体上有三个与tRNA有关的位点:A位点,P位点,E位点 26 生长激素释放抑制因子是一个14肽 27 脂肪酸合成酶催化的反应是脂肪酸-β氧化反应的逆反应 28 镰刀型贫血症患者血红蛋白与正常人的血红蛋白在氨基酸组成上只有2个残基有差别 29 地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种 30 中国科学家在今年完成了人类基因组1%的测序任务 二写出下列物质的分子结构式1/6 1 Thr 2 D-核糖 3 A 4 GSH 5 尼克酰胺 6 丙酮酸 三名词解释4/24 1 反密码子 2 操纵基因 3 多肽核酸( peptide nucleic acid ) 4 折叠酶 5 共价调节 6 Humen Genome Project 四综合题10/40 1 试表述Glu经脱氨基,有氧氧化等途径彻底分解成NH3 , CO2, 和H2O 时的代谢路线,要求用箭头表示所经过的主要中间产物.计算1摩尔Glu共可产生多少摩尔的NH3,CO2,ATP? 2 以血红蛋白为例说明蛋白质四级结构的含义,比较血红蛋白与肌红蛋白结构和功能的异

浙江大学物理光学实验报告

本科实验报告 课程名称：姓名：系：专业：学号：指导教师： 物理光学实验郭天翱 光电信息工程学系信息工程（光电系） 3100101228 蒋凌颖 2012年1 月7日 实验报告 实验名称：夫琅和弗衍射光强分布记录实验类型：_________ 课程名称：__物理光学实验_指导老师：_蒋凌颖__成绩： 一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）七、讨论、心得 一、实验目的和要求 1．掌握单缝和多缝的夫琅和费衍射光路的布置和光强分布特点。 2．掌握一种测量单缝宽度的方法。 3．了解光强分布自动记录的方法。 二、实验内容 一束单色平面光波垂直入射到单狭缝平面上，在其后透镜焦平面上得到单狭缝的夫琅禾费衍射花样，其光强分布为： i?i0( 装 式中 sin? ? ) 2 （1） 订 ?? 线 ??sin?? （2） ?为单缝宽度，?为入射光波长，?为考察点相应的衍射角。i0为衍射场中心点（??0处）的光强。如图一所示。 由（1）式可见，随着?的增大，i有一系列极大值和极小值。极小值条件 asin??n?(n?1,n?2) （3） 是： 如果测得某一级极值的位置，即可求得单缝的宽度。 如果将上述单缝换成若干宽度相等，等距平行排列的单缝组合——多缝，则透镜焦面上得到的多缝夫琅禾费衍射花样，其光强分布： n? sin?2 )2 i?i0()( ?

2 （4） sin 式中 ?? sin??2???dsin? ? ?? （5） ?为单缝宽度，d为相邻单缝间的间距，n为被照明的单缝数，?为考察点相应的衍射角；i0为衍射中心点（??0处）的光强。 n? )2 (sin?2() 2称?为单缝衍射因子，为多缝干涉因子。前者决定了衍射花 sin （干涉）极大的条件是dsin??m?(m?0,?1,?2......)。 dsin??(m? m )?(m?0,?1,?2......;m?1,2,.......,n?1)n 样主极大的相对强度，后者决定了主极大的位置。 （干涉）极小的条件是 当某一考虑点的衍射角满足干涉主极大条件而同时又满足单缝衍射极小值条件，该点的光强度实际为0/，主极大并不出现，称该机主极大缺级。显然当d/??m/n为整数时，相应的m 级主极大为缺级。 不难理解，在每个相邻干涉主极大之间有n-1个干涉极小；两个相邻干涉极小之间有一个干涉次级大，而两个相邻干涉主级之间共有n-2个次级大。 三、主要仪器设备 激光器、扩束镜、准直镜、衍射屏、会聚镜、光电接收扫描器、自动平衡记录仪。 四、操作方法和实验步骤 1．调整实验系统 （1）按上图所示安排系统。 （2）开启激光器电源，调整光学元件等高同轴，光斑均匀，亮度合适。（3）选择衍射板中的任一图形，使产生衍射花样，在白屏上清晰显示。 （4）将ccd的输出视频电缆接入电脑主机视频输出端，将白屏更换为焦距为100mm的透镜。 （5）调整透镜位置，使衍射光强能完全进入ccd。 （6）开启电脑电源，点击“光强分布测定仪分析系统”便进入本软件的主界面，进入系统的主界面后，点击“视频卡”下的“连接视频卡”项，打开一个实时采集窗口，调整透镜与ccd的距离，使电脑显示屏能清晰显示衍射图样，并调整起偏/检偏器件组，使光强达到适当的强度，将采集的图像保存为bmp、jpg两种格式的图片。 2．测量单缝夫琅和费衍射的光强分布（1）选定一条单狭缝作为衍射元件（2）运用光强分布智能分析软件在屏幕上显示衍射图像，并绘制出光强分布曲线。 （3）对实验曲线进行测量，计算狭缝的宽度。 3．观察衍射图样 将衍射板上的图形一次移入光路，观察光强分布的水平、垂直坐标图或三维图形。

浙江大学生物化学丙实验报告1

专业：农业资源与环境 姓名：李佳怡 ____________ 学号：_J6 _______________ 日期： __________________ 地点：生物实验中心310课程名称：生物化学实验（丙） 实验名称：蔗糖酶的提取 一、实验目的和要求（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 七、实验结果与分析（必填） .指导老师：方祥年 成绩:_ _同组学生姓名：金宇尊、鲍其琛 二、实验内容和原理（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 六、实验数据记录和处理 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、 学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法; 2、 巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。 二、实验内容和原理 订 1、实验内容: 线 蔗糖酶的提取、分离纯化 2、实验原理: ① 酵母细胞破碎 液体剪切法―超声波法.机械搅拌法.高压匀浆法 固体剪切法一压力和研磨 非机械法——> 物理法.化学渗透法.酶溶 本实验采用研磨的方法。通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取岀 来。 ② 蔗糖酶的初步分离纯化 蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。 本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集 样品。 由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯 操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。 实验报告 细 胞 破碎 的 常 用 方 法

三、实验材料与试剂 1、实验材料 市售干酵母粉10g/组（3?4人） 2、实验试剂 石英砂，95%乙醇（-20*0,20mmol/L Tris-HCl 缓冲液。 四、实验器材与仪器 电子天平（称量干酵母粉）：研碎（每组一套）：50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）：高速冷冻离心机：恒温水浴箱（50°C）；量筒（50ml）、微量移液枪（lOOOu 1）及枪头或移液管（1ml）、玻棒、滴管等;离心管（留样品I、II用）及离心管架：制冰机：一20°C冰箱。 五、操作方法和实验步骤 1、酵母细胞破粹（干磨法） ①称量：称取市售干酵母粉10計约3-5 g石英砂放入研钵 ②研磨（干磨）：至尽可能成细粉末状（约15min） ③加液+研磨：呈:取总体积40 ml的20mmol几Tris-HCl缓冲液，分2次加研磨lOmin, 使呈糊状液体； ④离心：将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后（托盘天平上），离心lOmin （条件:4°C、12000r/min） ⑤收集+测量：收集上淸液并量出体积VI （样品I）,另留1ml上淸液（样品I ）放置一20°C冰箱保存 用于蔗糖酶蛋白含量测眾、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析 2、热处理 ①水浴热处理：将上步抽提液（样品I）,迅速放入50°C恒温水浴，保温30min, 并每隔5min用玻璃棒温和搅拌提取液。 ②冰浴冷却：保温后迅速用冰浴冷却5min ③离心：将热处理后的样品I转移至两支50ml离心管中，平衡后，离心10min a （条件：4°C, 12000r/min） ④收集+测量：收集上淸液并量出体积V2 （样品II）,另留1ml上淸液（样品II ）放宜一20°C冰箱保存（用于蔗糖酶蛋白含量测左、测左蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。 3、有机溶剂（乙醇）沉淀 ①冰浴：将热处理后的上淸液加入相同体枳的一20°C的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀，

浙江大学考博生物化学03-13年试卷

2003年秋 一、名词 变性与复性构型和构象Km 氧化磷酸化脂肪酸ß-氧化核糖体中心法则辅酶与辅基人类基因组计划和后基因组计划分子伴侣 二、论述 1 生物大分子中结构与功能的关系（10） 2 糖酵解过程（10） 3 选择一种分离方法，叙述其原理和操作过程（15） 4 生物化学的最新前沿进展（15） 2004年春 一、名词 ATP 构型和构象Km 分解与合成代谢核糖体中心法则Sanger 反应变性与复性启动子基因表达 二、论述 1．生物中大分子物质构成的基本结构（10） 2葡萄糖转化二氧化碳和水过程中相应步骤和酶（10） 3凝胶电泳的原理及应用（15） 4．生物化学的最新前沿进展（15） 2004年秋 论述 1.蛋白质模体和结构域（15） 2.生物膜结构特征和生物学功能（15） 3.生物体在同化和进化中能量的转化形式与关系（15） 4. DNA复制和转录的原理（15） 5.真核生物基因的表达和表达的调节（20） 6.比较离子交换、分子排阻、和亲和层析的分离原理（20） 2005年春 论述 1蛋白质模体和结构域（15） 2生物膜结构特征和生物学功能（15） 3生物体在同化和进化中能量的转化形式与关系（15） 4 DNA复制和转录的原理（15） 5真核生物基因的表达和表达的调节（20） 6比较离子交换、分子排阻、和亲和层析的分离原理（20） 2006年 论述 1．生物化学研究的内容与目标 2．生物膜及其功能 3．蛋白膜质体与结构域 4．水对生物体的重要作用 5．DNA复制和转录的原理

6．氨基酸以R基分几类，写出其三字母、单字母的缩写 7．比较亲和层析、离子交换、分子排阻的原理 8．举例说明四种非共价键在蛋白质、核酸分子中的作用 9．构型与构象10. 生物体能量转化及其关系 未知年份 论述题 1.双向电泳的原理及步骤 2.单克隆抗体与多克隆抗体的定义 3.生物化学的定义与研究内容 4.蛋白质中二、三结构域的定义 5. DNA 的复制过程 2007年 一、名词解释 氧化磷酸化、折叠、第二信使、沉默子、反义RNA、胴体、一碳单位、别构酶、冈崎片段、基因文库 二、论述题 1.乙酰COA在脂肪氧化中的作用 2. RNA的分离纯化与鉴定 3.乳糖操纵子 4.真核生物基因表达的调控因子及其作用 5.肝糖原的激素影响及分子原理 6.生物重大研究进展与动物科学对其的指导意义 2008 年 论述 1.生物膜的组成及其功能 2.脂类的功能 3.蛋白质合成过程中和DNA复制过程中的化学防错 4.血红蛋白和BPG的结构和功能 5. ATP和NAD+的结构和功能 6.名词解释：糖酵解、乙醛酸循环、卡尔文循环、TCA循环 7.设计动力学试验，验证反应实质 2010年生物化学真题回忆版： 20种氨基酸的分类，简写 实验题2个关于分子实验和蛋白质实验的 电泳的原理和分类层析 化学渗透学说 蛋白组学和研究进展 c3植物和c4植物的区别 G蛋白介导的信号转导机制 生化题都是大题，回忆出大概内容，题目记不住了。 祝大家考博成功！

浙江大学生物化学丙实验报告5

实验报告 课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称：蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析及蛋白质相对分子质量测定 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、学习SDS －聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)的基本原理和操作方法 2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析 3、学习测定蛋白质相对分子质量(Mr)的方法 二、实验内容和原理 （1）实验内容 1、SDS －PAGE 凝胶制作； 2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 电泳分离； 3、洗脱测定并计算相对分子质量。 （2）实验原理 1、电泳 是带电颗粒在电场作用下，作定向运动即向着与其电荷相反的电极移动的现象。 2、电泳法分离、检测蛋白质混合样品 主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所产生的电泳迁移率的差别。 3、区带电泳 是样品物质在一惰性支持物上进行电泳,因电泳后，样品不同组分形成带状区间，故称区带电泳。 4、聚丙烯酰胺凝胶（PAG) 由丙烯酰胺和交联试剂N,N ’-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在有催化剂（如过硫酸铵或核黄素）和增速剂（如N,N,N ’,N ’-四甲基乙二胺，TEMED ）的情况下聚合而成的。

5、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) 是在恒定的、非解离的缓冲系统中来分离蛋白质，这主要是由蛋白质样品所带的电荷和分子质量的差异性进行分离；在电泳过程中仍保持蛋白质的天然构象、亚基之间的相互作用及其生物活性。 6、聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为 ⑴连续系统凝胶缓冲液的pH值及凝胶浓度不变。该电泳系统具有电荷效应、分子筛效应； ⑵不连续系统凝胶缓冲离子成分、pH值、凝胶浓度、电位梯度不连续，由浓缩胶和分离胶组成。由于浓缩胶的堆积（浓缩）作用，可使样品（即使是稀释样品）在浓缩胶和分离胶的界面上先浓缩成一窄带，然后在一定浓度（或一定浓度梯度）的凝胶上进行分离。该电泳系统具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。 7、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 以PAG为支持物的电泳，由于各种蛋白质所带静电荷、分子量大小和形状不同而有不同的迁移率。为消除静电荷对迁移率的影响，在整个电泳体系中加入一定量的阴离子去污剂“十二烷基硫酸钠（简称SDS）”和“强还原剂（巯基乙醇）”后，蛋白质样品就会与SDS结合形成带负电荷复合物，而SDS作为一种变性剂和助溶剂，它能破坏蛋白质分子内和分子间的非共价键，并结合到蛋白质分子上，使分子去折叠，破坏蛋白质分子内的二级和三级结构，使蛋白质变性而改变原有的空间构象。另外，SDS－蛋白质复合物在强还原剂（巯基乙醇）存在下，可打开蛋白质分子内或肽链间的二硫键，并能避免重新氧化，这样分离出的谱带即为蛋白质亚基。蛋白质亚基的电泳的迁移率主要取决于亚基的相对分子质量大小，而电荷的因素可以忽略。 8、蛋白质亚基相对分子质量的测方法 在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的SDS时，蛋白质－SDS复合物在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒。不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为1.8nm，而长轴则随蛋白质的分子量成正比变化。这样的蛋白质-SDS复合物在凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只主要取决于它的椭圆棒的长度即蛋白质的相对分子质量的大小，而其他因素对电泳迁移率的影响几乎可以忽略不计。由于蛋白质的相对分子质量不同，所形成复合物的相对分子质量不同，在电泳中反映出不同的迁移率。当蛋白质或亚基的相对分子质量在15,000～200,000之间时，电泳迁移率与相对分子质量的

浙江大学生物化学丙实验报告.

. 实验报告 课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 质粒DNA 的微量制备及电泳检测 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、学习并掌握质粒DNA 的提取原理和方法； 2、了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作； 3、学习并掌握对电泳检测结果的初步分析。 二、实验内容和原理 1、实验内容 ①质粒DNA 的提取 ②DNA 的琼脂糖凝胶电泳鉴定 2、实验原理 ①质粒： 质粒是一种染色体（核质体）外的寄生性的自主复制子，存在于细菌等细胞中，为双链闭环的DNA 分子，大小在1-200kb 之间，具有自主复制和转录功能, 能表达例如抗性、菌毒素等细胞非必需的遗传信息，但其复制和转录必须要利用依赖宿主细胞（细菌）基因组DNA 编码的一些酶和蛋白质。质粒能够自发的或人为的在细胞间转移，因此是基因工程技术中将外源基因导入受体细胞的重要载体。 ②从细菌细胞中抽提质粒DNA 的步骤： a 细菌培养使质粒大量扩增； b 收集和裂解细胞,并去掉细菌碎片和核质体DNA ； c 进一步除去蛋白、脂类、RNA 等杂质，分离和纯化质粒DNA 。 ③碱裂解法来分离纯化质粒DNA ： 在EDTA 存在下，经过SDS 处理使细胞膜裂解，从而使菌体充分裂解，利用在碱性条件下（NaOH ）， 使核质体DNA 与质粒DNA 的变性；加入乙酸钾，在中性条件下，核质体DNA 与质粒DNA 又存在复性的差异，质粒DNA 很快得以复性，而细菌核质体DNA 分子难以复性，核质体DNA 会缠绕附着在细胞膜碎片上专业： 农业资源与环境 姓名： 李佳怡 学号： 3130100246 日期： 2015.6.9 地点： 生物实验中心310 装 订 线

液体饱和蒸汽压 浙江大学物化实验

实验报告 课程名称： 大学化学实验p 实验类型： 中级化学实验 实验项目名称： 饱和蒸汽压的测定 同组学生姓名： 无 指导老师 厉刚 一、 实验目的和要求 1. 加深理解饱和蒸汽压，活度和渗透系数等概念。 2. 学习测定液体的饱和蒸汽压的方法，了解蒸汽压数据的应用。 3. 理解蒸汽压降低，沸点升高等溶液性质及稀溶液的依数性。 4. 熟悉温度计的露茎校正方法。 5. 了解数字真空仪，熟悉福廷式测压仪的使用及校正方法，初步掌握真空试验技术。 二、 实验内容和原理 通常温度下(距离临界温度较远时)，纯液体与其蒸气达平衡时的蒸气压称为该温度下液体的饱和蒸气压，简称为蒸气压。蒸发1mol 液体所吸收的热量称为该温度下液体的摩尔气化热。液体的蒸气压随温度而变化，温度升高时，蒸气压增大；温度降低时，蒸气压降低，这主要与分子的动能有关。当蒸气压等于外界压力时，液体便沸腾，此时的温度称为沸点，外压不同时，液体沸点将相应改变，当外压为1atm （101.325kPa ）时，液体的沸点称为该液体的正常沸点。 液体的饱和蒸气压与温度的关系用克劳修斯-克拉贝龙方程式表示： 2 m vap d ln d RT H T p ?= (1) 式中，R 为摩尔气体常数；T 为热力学温度；Δvap H m 为在温度T 时纯液体的摩尔气化热。 假定Δvap H m 与温度无关，或因温度范围较小，Δvap H m 可以近似作为常数，积分上式，得： C T R H p +??- =1 ln m vap (2) 其中C 为积分常数。由此式可以看出，以ln p 对1/T 作图，应为一直线，直线的斜率为 R H m vap ?-，由斜 率可求算液体的Δvap H m 。 继而Δvap S m= （Δvap H m ）/T 测定通常有静态法和动态法，静态法：把待测物质放在一个封闭体系中，在不同的温度下，蒸气压与外压相等时直接测定外压；或在不同外压下测定液体的沸点。动态法：常用的有饱和气流法，即通过一定体积 专业： 理科1010 姓名： 陈世杰 学号： 3100102092 日期： 2012.03.19 地点：化学实验中心328

浙大《生物化学(药)》在线作业

1. 下列哪一项不是影响酶活性的主要因素（）。 A. 温度 B. Ph C. 激活剂 D. 酶的用量 2. 变构效应物对酶结合的部位是： A. 活性中心与底物结合的部位 B. 活性中心的催化基团 C. 酶的-SH基 D. 活性中心以外的特殊部位 3. 下列各项不属于蛋白质功能的是（)。 A. 催化功能 B. 运输功能 C. 运动功能 D. 提供能量 4. 1分子葡萄糖经糖酵解分解为2分子乳酸时，其底物水平磷酸化次数为 A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 5. 乳糜微粒中含量最多的组分是 A. 脂肪酸 B. 甘油三酯 C. 磷脂酰胆碱 D. 蛋白质 6. 下列何种作用不可能改变酶活性 A. 延长酶作用时间 B. 加入酶必需的激活剂 C. 变构酶分子发生变构效应 D. 某些酶蛋白发生化学修饰 7. 在什么情况下，一种蛋白质在电泳时既不向正级移动，也不向负极移动，而停留在原点？ A. 发生蛋白质变性 B. 与其它物质结合形成复合物 C. 电极缓冲液的pH正好与该蛋白质的pI相同 D. 电极缓冲液的pH大于该蛋白质的pI 8. 1分子葡萄糖酵解时净生成多少分子ATP A. 1

C. 3 D. 4 9. 乳糖操纵子的调节水平在（）。 A. 复制 B. 转录 C. 转录后 D. 翻译 E. 翻译后 10. 有关多肽链主链肽键形成的正确描述是（)。 A. 由一个氨基酸的α—氨基与另一个氨基酸的α—羧基形成 B. 由一个氨基酸的α—氨基与自身的α—羧基形成 C. 由一个氨基酸的侧链氨基与自身的α—羧基形成 D. 由一个氨基酸的侧链氨基与另一个氨基酸的α—羧基形成 11. 在糖原合成中每加上一个葡萄糖残基需消耗高能键的数目是 A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 12. 嘧啶从头合成途径首先合成的核苷酸为（）。 A. UDP B. ADP C. TMP D. UMP 13. 糖酵解途径的关键酶之一是 A. 乳酸脱氢酶 B. 果糖二磷酸酶-1 C. 6-磷酸果糖激酶 D. 6-磷酸葡萄糖酶 14. 在蛋白质三级结构中可存在如下化学键，但不包括： A. 氢键 B. 二硫键 C. 离子键 D. 磷酸二酯键 15. 1分子丙酮酸彻底氧化净生ATP分子数 A. 2 B. 3

2019年浙江大学生物化学与分子生物学考研专业指导

2019年浙江大学生物化学与分子生物学考研专业指 导 一、招生人数 070 生命科学学院 生命科学学院招生规模74(其中学术学位74人，拟接收推免生44名左右，以最终确认录取人数为准）。 0710 生物学学术型 071010 生物化学与分子生物学 二、研究方向： 01蛋白质与酶工程 02生物化学与生物制药 03微生物生化与代谢工程 04动物生化与转基因工程 05植物生化与分子生物学 06海洋生化与分子生物学 三、考试科目： 初试科目：

①101政治 ②201英语一 ③727 细胞生物学 ④830生物化学与分子生物学（各50%） 复试内容：外语听、说能力、专业基础综合知识 欢迎理学、工学、农学、医学、药学等学科考生报考。生命科学学院100%招收学术学位研究生。 四、参考书目： 《生物化学》(下册) 王镜岩、朱圣庚、许长法高等教育出版社； 《生物化学》(上册) 王镜岩高等教育出版社； 《现代分子生物学》第二版，朱玉贤等主编，高等教育出版社； 《现代遗传学》赵寿元等主编，高等教育出版社。 《细胞生物学》翟中和高等教育出版社。 五、浙江大学生物化学与分子生物学近三年复试分数线

六、浙江大学生物化学与分子生物学考研经验： 1、零基础复习阶段（6月前) 本阶段根据考研科目，选择适当的参考教材，有目的地把教材过一遍，全面熟悉教材，适当扩展知识面，熟悉专业课各科的经典教材。这个期间非常痛苦，要尽量避免钻牛角尖，遇到实在不容易理解的内容，先跳过去，要把握全局。系统掌握本专业理论知识。对各门课程有个系统性的了解，弄清每本书的章节分布情况，内在逻辑结构，重点章节所在等。 2、基础复习阶段（6－8月) 本阶段要求考生熟读教材，攻克重难点，全面掌握每本教材的知识点，结合真题找出重点内容进行总结，并有相配套的专业课知识点笔记,进行深入复习，加强知识点的前后联系，建立整体框架结构，分清重难点，对重难点基本掌握。同时多练习相关参考书目课后习题、习题册，提高自己快速解答能力，熟悉历年真题，弄清考试形式、题型设置和难易程度等内容。要求吃透参考书内容，做到准确定位，事无巨细地对涉及到的各类知识点进行地毯式的复习，夯实基础，训练思维，掌握一些基本概念和基本模型。

浙江大学普通物理2019年试卷及解答7页

普通物理（A卷）1997年1月22日 一．一．填空题： 1．1．用劈尖干涉法可检测工件表 面缺陷，当波长为λ的单色平行光垂直 入射时，若观察到的干涉条纹如图所 示，每一条纹弯曲部分的顼点恰好与其 左边条纹的直线部分的连线相切，则工 件表面与条纹弯曲处对应的缺陷是____________形（指凸或凹）， 其相应的高度是________λ。 2．2．某元素的特征光谱中含有波长分别为λ1 =450nm和λ2 =750nm(1nm =10-9m)的光谱线。在光栅光谱中，这两种波长的谱线 有重叠现象，重叠处λ 2 的谱线的级数将是____________________。 3．3．一束光是自然光和线偏振光的混合光，让它垂直通过一偏振片。若以此入射光束为轴旋转偏振片，测得透射光强度最大值 是最小值的5倍，那么入射光束中自然光与线偏振光的光强比值为 __________________。 4．4．要使处于基态的氢原子受激后可辐射出可见光谱线，最少应供给氢原子的能量为__________________eV。 5．5．电子显微镜中的电子从静止开始通过电势差为U的静电场加速后，其德布罗意波长是0.4?，则U为约为_______________。 （不计相对论效应。电子静止质量m 0=9.1×10-31kg，普朗克常 空气

量h=6.63×10-34 J ·S ） 6． 6． 波长λ=5000?的光沿X 轴正向传播，若光的波长的不 确定量△λ=10-3 ?，则利用不确定关系式△x △p x ≧h 可得光子的x 坐标的不确定量至少为_______________。 7． 7． 一平行板电容器充电后，将其中一半空间充以各 向同性、均匀电介质，如图所示。则图中Ⅰ、Ⅱ两部份的电场强度_____________；两部份的电位移矢量_____________；两部份所对应的极板上的自由电荷面密度______________。（填相等、不相等） 8． 8． 一平面试验线圈的磁矩大小P m 为1×10-8A ·m 2，把它放 入待测磁场中的A 处，试验线圈如此之小，以致可以认为它所占据 的空间内场是均匀的。当此线圈的m P 与Z 轴平行时，所受磁力矩大小为M=5×10-9 N ·m ，方向沿X 轴方向；当此线圈的m P 与Y 轴平行 时，所受磁力矩为零。则空间A 点处的磁感应强度B 的大小为 _________，方向为_____________。 9． 9． 两根无限长直导线互相垂直地放着，相距 d=2.0×102 m ，其中一根导线与Z 轴重合，另一根导线与X 轴平行且在XOY 平面内。设两导线中皆通过I=10A 的电流，则在Y 轴上离两根导线等距的点P 处的磁感应强 度为B =___________________。（μ0 = 4π×10-7T ·m ·A -1） 10．10．如图所示，一半径为 r 的金属圆环，在初始时刻与一 半径为 a ( a>>r ) 的大金属圆环共面且同心。在大圆环中