血红蛋白吸收曲线

实验二血红蛋白及衍生物吸收光谱测定

[原理]血红蛋白（Hb）与O2结合生成氧合血红蛋白（HbO2），与CO结合生成一氧化碳血红蛋白（HbCO），与K3[Fe（CN）6]反应生成高铁血红蛋白（MHb）。

由于这些物质的组成成分不同，其分子结构也不同，所吸收的光波也有差异，每种物质显示出特有的吸收光谱。利用分光光度计测定不同波长的光线通过溶液的吸光度，以波长为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制吸收光谱曲线。

项目吸收峰数吸收光谱（nm）

HbO2 2 541 577

HbCO 2 540 569

MHb（pH6.4） 2 631 500

[器材]

1.722型分光光度计

[试剂]

1.去纤维蛋白血

2.辛醇

3.10%K3[Fe（CN）6]

[操作]

1.样品的制备

HbO2：取去纤维蛋白血3滴，加蒸馏水5ml

HbCO：取去纤维蛋白血3滴，加蒸馏水5ml，再加辛醇1滴，摇匀，用滴管通煤气于液面下2~3分钟，使液体呈樱桃红色（注意用后立即关闭煤气）。MHb：取去纤维蛋白血3滴，加蒸馏水5ml，加新鲜配制的10% K3[Fe（CN）

]1滴，充分混匀，使液体呈暗褐色。

6

2.测定：分别取上述溶液3ml盛于比色杯内，另一个比色杯盛蒸馏水作空白，在波长470~650nm范围内，每隔20nm测吸光度一次，在接近吸收高峰时，则每隔2nm测一次波长，每次必须重新校正零点，再测吸光度。以入射光波长为横坐标，各相应的吸光度为纵坐标，分别绘出各物质的吸收光谱曲线。

为什么一氧化碳与血红蛋白结合的能力比氧强

为什么一氧化碳与血红蛋白结合的能力比氧强? 一氧化碳血红蛋白是血红蛋白与一氧化碳（CO）的结合物。 与氧合血红蛋白相同，Fe原子为2价，与CO、卟啉的4个N、血球朊航的组氨酸残基共价结合成八面体结构。 血红蛋白与CO的亲和力比对O2的亲和力大，所以血液中如侵入CO时，血红蛋白即使已与O2结合，也会由CO把O2置换掉而使血红蛋白失去运输氧的能力。 此即所谓一氧化碳中毒. 一氧化碳与血红蛋白结合，阻碍了血红蛋白与氧的结合。不利于氧分子在体内的循环。 氧气和二氧化碳都能和血液里红血球中的血红蛋白形成不稳定的化合物，而这种化合物又能把氧气或二氧化碳释放出来。如果血红蛋白遇到一氧化碳，但生成的是一种较为稳定的化合物，这样，就降低了血红蛋白输送氧气到组织中去的能力，从而使人或动物窒息、中毒。 一氧化碳中毒是由于一氧化碳与血红蛋白结合引起的，一氧化碳与血红蛋白结合的能力是氧的： 210倍 一氧化碳为什么会使人中毒? 人的生命活动离不开氧气.人的肺脏里约有七亿五千万个肺泡.如果把这些肺泡的表面积全部展开来,大约有130平方米.在这样广阔的面积上,紧密地交织着无数的毛细血管.人通过呼吸把氧气吸到肺里,再通过肺泡交给血液,跟血液里的血红蛋白结合,又经过血液循环输送到身体各处.如果空气里混进了一氧化碳,并且被人吸到肺里,人就不能正常地吸收和利用氧气了.因为一氧化碳跟血红蛋白的结合力,要比氧跟血红蛋白的结合力强270倍.如果空气中有1‰的一氧化碳,血液中一半左右的血红蛋白就会和一氧化碳结合,失去携带氧气到各部位去的能力,这时候,人就会感到昏昏沉沉,四肢发软,轻者恶心呕吐,头晕眼花;重者心跳加快,昏迷不醒,面色粉红,手脚发凉,如不马上抢救,就有死亡的危险.这就是一氧化碳中毒.

标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量

标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量 一、标准曲线 一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。 二、蛋白质含量测定方法 1、凯氏定氮法 2、双缩脲法 3、Folin-酚试剂法 4、紫外吸收法 5、考马斯亮蓝法 三、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作 （一）、试剂： 1、考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。 2、标准蛋白质溶液： 纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。 （二）、器材： 1、722S型分光光度计使用及原理（）。 2、移液管使用（）。 （三）、标准曲线制作： 1、 2、以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、

40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。 1）、利用标准曲线查出回归方程。 2）、用公式计算回归方程。 3）、或用origin作图，测出回归线性方程。即A595nm=a×X( )+6 一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。 4）、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。 （四）、蛋白质含量的测定： 样品即所测蛋白质含量样品（含量应处理在所测范围内），依照操作步骤1操作，测出样品的A595nm，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。 一般被测样品的A595nm值在0.1—0.05之间，所以上述样品如果A595nm值太大，可以稀释后再测A595nm值，然后再计算。 （五）、注意事项： 1、玻璃仪器要洗涤干净。 2、取量要准确。 3、玻璃仪器要干燥，避免温度变化。 4、对照：用被测物质以外的物质作空白对照。

血红蛋白

血红蛋白是血细胞的重要组成部分，它负责将氧气从肺部输送到身体的其它组织。血红蛋白在任一时刻所含的氧气量被称为血氧饱和度(即SpO2)。 血氧饱和度是反映人体呼吸功能及氧含量是否正常的重要生理参数，它是显示我们人体各组织是否健康的一个重要生理参数。严重缺氧会直接导窒息、休克、死亡等悲剧的发生。 在肺部，氧气附着在受红细胞约束的蛋白质上，称为血色素（符号Hb），血液中的血色素有两种形态：氧合血红蛋白(HbO2)和还原血红蛋白(Hb)，则 血氧饱和度SpO2=(HbO2x100)/(HbO2+Hb)x100% 血氧仪的测试原理是：氧合血红蛋白和还原血红蛋白在可见光和接近红外线的频谱范围内具有不同的吸收特性，还原血红蛋白吸收较多的红色频率光线，吸收较少的红外频率光线；而氧合血红蛋白吸收较少的红色频率光线，吸收较多的红外频率光线。这个区别是SpO2测量系统的最基本依据。 为测量人体对红光和红外光线的吸收。红色和红外线发光二极管位置相互靠得尽可能近，发射的光线可透过人体内的单组织点。先由响应红色和红外光线的单个光电二极管接收光线，然后由互阻放大器产生正比于接收光强的电压。红色和红外LED通常采用时间复用的方式，因此相互间不会干扰。环境光线经估计将从每个红色和红外光线中扣除。测量点包括手指、脚趾和耳垂。 脉搏血氧仪提供了以无创方式测量血氧饱和度或动脉血红蛋白饱和度的方法。脉搏血氧仪的工作原理基于动脉搏动期间光吸收量的变化。分别位于可见红光光谱(660纳米)和红外光谱(940纳米)的两个光源交替照射被测试区(一般为指尖或耳垂)。在这些脉动期间所吸收的光量与血液中的氧含量有关。微处理器计算所吸收的这两种光谱的比率，并将结果与存在存储器里的饱和度数值表进行比较，从而得出血氧饱和度。 典型的血氧仪传感器有一对LED，它们通过病人身体的半透明部位(通常是指尖或耳垂)正对着一个光电二极管。其中一个LED是红光的，波长为660nm；另一个是红外线的，波长是940nm。血氧的百分比是根据测量这两个具有不同吸收率的波长的光通过身体后计算出的。

血红蛋白含量测定

血红蛋白含量测定 发表时间：2011-04-27T15:02:00.683Z 来源：《中外健康文摘》2011年第2期供稿作者：马骅1 刘海虹2 [导读] 血红蛋白测定方法很多，如比色法、比重法、血氧法、血铁法等，国际血液学标准化委员会推荐氰化高铁血红蛋白为首选测定法。马骅1 刘海虹2 (1黑龙江省临床检验中心 150008)(2中国造血干细胞捐献者资料库黑龙江省管理中心 150008) 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2011)2-0049-02 【关键词】血红蛋白生理检测 血红蛋白是由珠蛋白和亚铁血红素组成的结合蛋白质。每个血红蛋白分子有4条多肽链，每条折叠的多肽链中，包裹1个亚铁血红素。亚铁血红素由原卟啉和1个铁原子组成。血红蛋白分子量为64 458D。 (一)血红蛋白生理 每分子血红蛋白中的4个亚铁血红素含有4个Fe2+原子，可结合4个氧分子。因此，64 458 g血红蛋白，含铁4×55.84，可结合4×22.14 L氧，即每克血红蛋白含铁3.47 mg(即铁占0.347％)，可结合氧1.38 ml。 血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白(HbO2)外，尚能与某些物质作用形成多种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽和吸收光谱，在临床上，可用以诊断某些变性血红蛋白血症或做血红蛋白的定量测定。 (二)氰化高铁血红蛋白测定法 血红蛋白测定方法很多，如比色法、比重法、血氧法、血铁法等，国际血液学标准化委员会推荐氰化高铁血红蛋白为首选测定法。现就氰化高铁血红蛋白(HiCN)法介绍如下： 1.原理血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，新生或的高铁血红蛋白再与氰结合成稳定的棕红色的氰化高铁血红蛋白(HiCN)，在规定的波长和液层厚度条件下，具有一定的吸光系数，根据吸光度，可求得血红蛋白浓度。 2.方法取HiCN转化液5ml，加末梢血20μl，混匀后静置5分钟，用光径1.0 cm，波长540 nm的分光光度计测定吸光度OD(以水或稀释液调“0”)，求得每升血液中血红蛋白含量。 (三)血红蛋白测定的质量控制 血红蛋白测定的质量控制除了所用量器必须事先校准外(允许误差，5 ml吸管为2.5％，血红蛋白吸管为1％)，还要进行下面几项质量控制。 1.多仪器的线性校正取50 g／L、100 g／L、150 g／L、200 g／L的HiCN标准参考液，在λ540 nm测出其A值(以HiCN转化液为空白)，标准状态下其值应分别为0.135、0.271、0.407、0.543，如测定值与理论值不符合。 日常工作中测得的A值×367.7×K=Hbg／L或者将一血红蛋白含量较高的样品，分别稀释成1／4、1／2、3／4和原液四个梯度进行线性校正，仪器在200 g／L范围内应有良好线性，重复性试验 CV应≤2％。 2.比色皿的光径和透光度标准比色皿的光径和透光度应符合下述标准：光径1 cm的比色皿误差应<0.005 cm。 3.质控物的应用用来校准仪器和控制实验准确度的制品称为参考品；用于控制实验精密度的制品称为质控品(物)。 4.质控要求手工操作OCV≤3％，RCV≤6％，EQA DI≤2。 (四)红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义 通常情况下，单位容积血液中红细胞数量与血红蛋白量大致呈平行的相对应关系。健康成人的红细胞数与血红蛋白量的比例约为100：3，故两者测定的意义大致相同。但在某些情况下，特别是在红细胞内血红蛋白浓度发生改变的贫血时，两者的减少程度往往不一致。如小细胞低色素性贫血时，血红蛋白的降低程度较红细胞明显，大细胞性贫血时，红细胞数量减少程度比血红蛋白下降程度明显，因此同时对患者的红细胞和血红蛋白量进行比较，对诊断就更有意义。 1.红细胞及血红蛋白增多是指单位容积血液中红细胞数及血红蛋白量高于正常参考值高限。一般来讲，经多次检查，成年男性红细胞>6.0×1012／L，血红蛋白>170 g／L；成年女性红细胞>5.5×1012／L，血红蛋白>160 g／L时即认为红细胞血红蛋白增多。一般分为相对增多和绝对增多两类： (1)相对增多：指因血浆容量减少，造成红细胞数量相对增加。见于严重呕吐、腹泻、大量出汗、大面积烧伤、慢性肾上腺皮质功能减退、尿崩症、甲状腺功能亢进症危象、糖尿病酮症酸中毒等疾病。 (2)绝对增多：临床上称为红细胞增多症，是一种由多种原因引起红细胞增多的症候群。按发病原因可分为继发性和原发性两类。 ①继发性红细胞增多症：是一种非造血系统疾病，发病的主要原因是因为血液中促红细胞生成素增多。 ②原发性红细胞增多症：即真性红细胞增多症，是一种原因未明的以红细胞增多为主的骨髓增殖性疾病，目前认为是多功能造血干细胞受累所致。其特点是红细胞持续性显著增多，甚至可达(7～10)×1012／L，血红蛋白180～240g/L，全身总血容量也增加，白细胞和血小板也有不同程度增多。本病属慢性病和良性增生，但具有潜在恶性趋向，部分可转变为白血病。 2.红细胞及血红蛋白减少指单位容积循环血液中红细胞数、血红蛋白量都低于正常参考值低限，通常称为贫血。临床上根据血红蛋白减低的程度将贫血分为4级：①轻度：血红蛋白<参考值低限至90g/L；②中度，90～60g/L；③重度：60～30g/L；④极重度：<30g/L。参考文献 [1]刘兰廷,黄如衡.高铁血红蛋白简易测定法[J];军事医学科学院院刊;1986年03期. [2]陈耀强,王婧,万家义,谢均.血红蛋白的分子结构及与其载氧功能相关的药物研究进展[J];绵阳师范学院学报;2004年05期. [3]沈高山,谷怀民,闫天秀,魏华江.亚硝酸钠和氧合血红蛋白反应的拉曼光谱[J];中国激光;2008年09期. [4]李清文,高宏,黄昊,王义明,冯军,罗国安.血红蛋白与NO分子间相互作用的电化学表征[J].高等学校化学学报;2001年08期.

糖化血红蛋白检测的临床意义

镇康县中医医院检验科新开项目介绍 一、新开项目名称：1.血清果糖胺FMN（即糖化血清蛋白） 正常参考1.40-2.95mmol/L 2.糖化血红蛋白HbA1c（正常参考4-6%） 二、申请方式：糖三联（包括血清葡萄糖、果糖胺、糖化血红蛋白） 三、样本要求（早上空腹）：一管生化管（黄头或红头） 一管血常规管(紫头） 共采集两管血，如同时有其它检验项目可以共用。 四、临床参考建议 a.血糖测定只代表即刻的血糖水平，提示患者当时的身体状况，并不能作为评价疾病控制程度的指标。但血糖测试的结果可以调整日常胰岛素的用量。 b.糖化血红蛋白是指血液中和葡萄糖结合了的那一部分血红蛋白。反映的是在检测前2-3个月内的平均血糖水平。而与抽血时间，病人是否空腹，是否使用胰岛素等因素无关。是判定糖尿病长期控制的良好指标。但并不主张单独用HbA1c来诊断糖尿病。也不能代替日常的自我血糖监测 C.果糖胺是血浆中的蛋白质与葡萄糖非酶糖化过程中形成的高分子酮胺结构类似果糖胺的物质，由于血清蛋白半衰期较短，本试验可有效反映患者过去2-3周内血糖的水平。可以了解夜间低血糖情况及鉴别应激性高血糖。也有学者认为此项单独升高，是糖尿病的早期信使。

1.糖化血红蛋白的测定结果以百分率表示，指的是和葡萄糖结合的血红蛋白占全部血红蛋白的比例。非糖尿病患者的糖化血红蛋白的水平为4-6%；糖化血红蛋白的检测可以指导临床更好地制定糖尿病例患者的诊疗方案。如果某位患者每天仅在早餐前测定空腹血糖，发现这个值为7.2mmol/L处于可接受范围内;但再检测糖化血红蛋白却发现为11%，这意味着该患者在过去的3个月内平均血糖水平已接近15mmol/L。尽管早餐前血糖结果尚满意，但是一天其它时间的血糖水平却严重超标，需要对患者饮食，运动及药物治疗作出重新评估，并作出相应调整,此外患者还需较现在更为频繁地测定血糖。许多研究发现糖尿病患者如查能将糖化血红蛋白水平降低至8%以下，糖尿病的并发症将大大降低，如果糖化血红蛋白>9%，说明患者待续性高血糖，会发生糖尿病性肾病,动脉硬化,白内障等并发症，并有可能出现酮症酸中毒等急性合并症。因此，有关专家建议,如果糖尿病患者血糖控制已达标准，并且血糖控制状态较为了平稳，每年至少应该接受2次糖化血红蛋白检测；对于那些需要改变资料方案，或者血糖控制状态不稳定的患者，及正在进行胰岛素治疗的患者，应该每三个月进行一次糖化血红蛋白测定。患有血红蛋白异常性疾病的患者，糖化红蛋白的检测结果是不可靠的，应以空腹和/或餐后血糖为准。 2.果糖胺是血浆中的蛋白质与葡萄糖非酶糖化过程中形成的高分子酮胺结构类似果糖胺的物质，它的浓度与血糖水平成正相关，并相对保持稳定。它的测定却不受血糖的影响。由于血浆蛋白的半衰期为17～20天，故果糖胺可以反映糖尿病患者检测前2～3周内的平均血糖水平。从一定程度上弥补了糖化血红蛋白不能反映较短时期内血糖浓度变化的不足。是对血糖波动较大的脆性糖尿病及妊娠糖尿病，了解其平均血糖水平有实际意义。但果糖胺不受每次进食的影响，所以不能用来直接指导每日胰岛素及口服降糖药的用量。

牛血清蛋白标准曲线定制

00.20.40.60.8 2 4 6 8 10 12 14 牛血清蛋白的显色浓度μg/ml A 595处吸光度 A595nm处测得的吸光度 回归方程对应的吸光度 表一 考马斯亮兰G250染色法测定牛血清蛋白标准曲线家养表及样品595nm 处测得的OD 值 项目 试管 编号 1 2 3 4 5 6 7 样1 样2 100μg/mL 牛血清蛋白溶液 /ml 0.00 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 1.00 1.00 各管中血清蛋白显色浓度 μg/mL 0.00 3.33 5.00 6.67 8.33 10.0 11.67 13.33 考马斯亮兰试剂ml 各加 入5ml 后摇匀 3分钟后 开始测 定20分 钟测完 A595处测定各管OD 值 0.000 0.186 0.277 0.365 0.451 0.527 0.596 0.664 0.398 0.404 表二 考马斯亮兰G250染色定制牛血清蛋白标准曲线数据处理统计表 项目 试管 编号 1 2 3 4 5 6 7 牛血清蛋白标准显色浓度 μg/mL 0.00 3.33 5.00 6.67 8.33 10.0 11.67 13.33 A595处测定的OD 值 0.000 0.186 0.277 0.365 0.451 0.527 0.596 0.664 回归方程对应浓度下的OD 值 0.0192 0.185 0.269 0.352 0.435 0.518 0.602 0.684 线性回归方程斜率 0.0192 线性回归方程截距 0.0499 线性回归方程 y=0.0499x+0.0192 实验数据的相关因素 0.9960

蛋白质的定量法与标准曲线的制备

蛋白质的定量法与标准曲线的制备 A. Folin-phenol(lowry method)定量法 此法以Biuret方法反应为基础发展而起，因此会严重干扰Biuret测定方法的因 子都会影响此测定法的准确度。这些干扰因子包括：含-CS-NH2，-CH2-NH2，-CRH-NH2，-CH2-NH-CHNH2-CH2OH，-CHOH-CH2NH2等基团的物质以及 缓冲剂如Tris、蔗糖、低浓度的酚类、柠檬酸等，但低浓度的尿素、硫酸胺可以增加碳酸钠-氢氧化钠的浓度来校正显色结果。1951年Lowry对于 Folin-Ciocalteu 试剂在不同的pH值条件下得到此试剂作用的最佳反应条件， 此法的灵敏度较Biuret方法高约100倍，反应时间只要约15分钟即可显色，颜色的稳定度可达数小时，故目前多用Folin-phenol法测定待测样本的蛋白质浓度。 原理：蛋白质与Folin试剂作用分成两个阶段： 1.蛋白质先与碱性铜离子作用 Cu2+ + Protein- Cu-Protein 当碱性的铜离子试剂和蛋白质中的peptide bond反应时会产生biuret test 的初步呈色反应，此蛋白质铜复合物会再由Phosphomolybdic-phosphotungstic试剂(Folin-Ciocalteu Reagent)作用形成蓝色物质。 蛋白质分子中可和Folin – Ciocalteu 试剂作用的团基有：Histidine的Imidazole Group、Tyrosine的Phenolic Hydroxyl Group、Cysteine的Sulfhdryl Group、Arginine的Guanidino Group。在这些团基中，Tyrosine的Phenolic Hydroxyl Group最为重要，碱性蛋白质与Folin-Ciocalteu Reagent复合物的颜色强度与 蛋白质中的芳香族官能基(aromatic group) 成正比。 值得注意的是当Folin-Ciocalteu 试剂在强碱的环境中易使phosphomolybdate 解离而丧失作用的能力，所以此剂须新鲜配制并避免与蛋白质中的Tyrosine 及Tryptophan 反应前置于强碱的环境中，依比色的方法测其吸亮度，换算蛋白质的量。 * 注意 Folin-Ciocateu phenol 试剂在酸性环境中才稳定，但Lowry method 必须在 pH=10 才会发生，所以Folin - Ciocalteu Reagent 一加入碱性的硫酸铜-蛋白质溶液中(alkaline cooper protein )必须马上混合均匀，以确保还原反应在phosphomolybdic- phosphotungstate 分解之前发生。 以上两种蛋白质显色定量法均会破坏样本中的蛋白质，故当蛋白质样本量少又需要回收时，不可以使用此种方法定量。 B.紫外线吸收值测定法

糖化血红蛋白检测的临床意义

如对您有帮助，请购买打赏，谢谢您！ 糖化血红蛋白检测的临床意义 血糖测定只代表即刻的血糖水平，提示患者当时的身体状况，并不能作为评价疾病控制程度的指标。 糖化血红蛋白是指血液中和葡萄糖结合了的那一部分血红蛋白。 当血液中葡萄糖浓度较高时，人体所形成的糖化血红蛋白含量也会相对较高。人体内红细胞的寿命一般为120天，在细胞死亡前，血液中糖化血红蛋白含量也会保持相对不变。因些糖化因红蛋白水平反映的是在检测前120天内的平均血糖水平，而与抽血时间，病人是否空腹，是否使用胰岛素等因素无关。是判定糖尿病长期控制的良好指标。 糖化血红蛋白的测定结果以百分率表示，指的是和葡萄糖结合的血红蛋白占全部血红蛋白的比例。非糖尿病患者的糖化血红蛋白的水平为4-6%；许多研究发现糖尿病患者如查能将糖化血红蛋白水平降低至8%以下，糖尿病的并发症将大大降低，如果糖化血红蛋白>9%，说明患者待续性高血糖，会发生糖尿病性肾病,动脉硬化,白内障等并发症，并有可能出现酮症酸中毒等急性合并症。因此，有关专家建议,如果糖尿病患者血糖控制已达标准，并且血糖控制状态较为了平稳，每年至少应该接受2次糖化血红蛋白检测；对于那些需要改变资料方案，或者血糖控制状态不稳定的患者，及正在进行胰岛素治疗的患者，应该每三个月进行一次糖化血红蛋白测定。 糖化血红蛋白的检测可以指导临床更好地制定糖尿病例患者的诊疗方案。如果某位患者每天仅在早餐前测定空腹血糖，发现这个值为130mg/ml,处于政党范围内;但再检测糖化血红蛋白却发现为11%，这意味着该患者在过去的3个月内平均血糖水平已接近270mg/ml，暗示其将来发生糖尿病并发症的危险性非常高,。尽管早餐前血糖结果尚满意，但是一天其它时间的血糖水平却严重超标，需要对患者饮食，运动及药物治疗作出重新评估，并作出相应调整,此外患者还需较现在更为频繁地测定血糖。 综上所述，糖化血红蛋白是糖尿病患者疾病控制程度一项良好的指标，糖尿病患者应定期检测糖化血红蛋白，并据此制定，修正相关治疗方案。 对于糖尿病患者来说，糖化血红蛋白（hba1c）是一个非常重要的检测指标。通过检测糖化血红蛋白可以了解糖尿病患者过去2～3个月内血糖控制的平均水平，它不受患者偶尔一次的血糖升高或降低的影响。英国糖尿病前瞻性研究证实，糖化血红蛋白每下降1%，糖尿病患者发生死亡的几率就会降低21%，发生心肌梗死的几率就会下降14%，发生中风的几率就会下降12%，发生微血管病变的几率就会下降37%，需要做白内障摘除手术的几率就会下降19%，因周围血管疾病而导致截肢或死亡的几率就会下降43%，发生心力衰竭的几率就会下降16%。 1、作为糖尿病患者长期血糖控制的评价指标；糖化血红蛋白（HbA1c）的测定目的在于消除波动的血糖对病情的控制观察的影响，因而对血糖波动较大的Ⅰ型糖尿病患者，测定糖化血红蛋白（HbA1c）是一个有价值的血糖控制指标。对于2型糖尿病患者，血糖和尿糖测定较简单和经济，且能较可靠地反映病情的控制，故测定糖化血红蛋白（HbA1c）的意义低于1型患者，但可作为辅助检查，用于判定口服药是否失效而须用胰岛素治疗。 2、有助于对糖尿病慢性并发症的认识；血糖测定只代表即刻的血糖水平，提示患者当时的身体状况，并不能作为评价疾病控制程度的指标。 3、用于糖尿病的诊断；健康人HbA1c为4.0%-7.7%(6.5±1.5%), 未控制的DM病人HbA1c 可高达10%-20%；随机检测HbA1c，若＜8%，多不考虑糖尿病。HbA1c＞9%，预报糖尿病的标准度约为78%，灵敏度为68%，特异性94%；HbA1c＞10%，则有80%以上为糖尿病，灵敏度43%，特异性99%，有效率86%。所以，目前并不主张单独用HbA1c来诊断糖尿病，原因是精确度不高，有时造成临床解释困难。

实验七血红蛋白

实验七脱辅基血红蛋白的制备和重组 一、实验目的 1.了解生物化学中典型的血红蛋白的性质和结构以及结合在蛋白上的辅基的作用。 2.学习一种生物无机生化科研中常用的为金属酶和蛋白质代换金属离子的方法。 3.学习快速扫描分光光度计的使用及紫外可见吸收光谱的应用。 4.学习柱层析和透析袋脱盐的方法。 二、实验原理 血红蛋白(Hemoglobin)是由二价铁Fe(Ⅱ)血红素作为辅基与多肽链结合组成的一种结合蛋白，它是由四个亚基组成的四聚体，分子量大约为65000。四个亚基中，两个亚基具有相同的氨基酸序列，称为α—亚基，每条链含141个氨基酸，另外两个氨基酸序列相同的亚基，称为β—亚基，各含146个氨基酸。两种亚基有其各自的二级、三级空间结构，亚基之间以非共价键结合在一起。每个亚基中均含有一个血红素辅基，血红素是一个铁原卟啉Ⅳ，它处于一个疏水环境，此疏水环境对血红蛋白的可逆载氧功能起着非常重要的作用。Fe(Ⅱ)在血红蛋白中始终是以+2价还原态存在的，若被氧化成Fe(Ⅲ)，则称为高铁血红蛋白，它就失去了可逆载氧功能。 血红素辅基与血红蛋白均以非共价键相连，其中包括Fe(Ⅱ)与近端组氨酸(F8His)上的Nε上的配位键；卟啉环侧链丙酸阴离子与蛋白氨基酸侧链之间的盐桥；以及卟啉环中乙烯基与蛋白的疏水相互作用。在酸性条件下，由于蛋白的变性而使这些作用变得很弱，以至于高铁血红素可以从血红蛋白的疏水区中游离出来。利用高铁血红素在丁酮中的溶解度大大高于它在水溶液中的溶解度的性质，用多次丁酮萃取的方法将血红素与蛋白分离。分离得到的脱辅基血红蛋白(ApoHb)可以用金属卟啉化合物(例如高铁血红素、钴卟啉、铜卟啉等)进行重组，生成各种不同金属卟啉的血红蛋白。 由于高铁血红蛋白的紫外可见吸收光谱中，在405nm处有很强的特征吸收峰，而脱辅基血红蛋白只在280nm处有蛋白的特征吸收峰，当将高铁血红素加入ApoHb溶液中后，重组成功的高铁血红蛋白又会在405nm处出现它的特征吸收峰，因而血红蛋白的脱辅基与重组试验均可用紫外可见分光光度计进行检测。 三、实验方法 1. 氧合血红蛋白的制备(供全班学生使用) 在市血站购买一袋人血，用高速冷冻离心机4000r/min离心10min，取下层血球加四倍体积的0.9% NaCl洗血球，再用4000r/min离心10min，如此重复2～3次，取下层血球，按1∶1(v/v)体积比加甲苯，振荡2分钟以上，使血球破膜，8000r/min离心20min，弃去上层甲苯和中层脂肪，取下层血球沉淀，加10分之一沉淀体积的9% NaCl，激烈振 209页

蛋白质标准曲线测试方法

试剂与器材 一、试剂 考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G―250 100 mg溶于50 mL 95%乙醇中，加入100 mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL。 二、标准和待测蛋白质溶液 1. 标准蛋白质溶液 结晶牛血清蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度用9gl/L NaCl配制成 0.1 mg/mL蛋白溶液。 三、器材 试管1.5×15 cm(×6)，试管架，移液管管0.5 mL(×2);1 mL(×2);5 mL(×1);恒温水浴;分光光度计。 操作方法 一、制作标准曲线 取7支试管，按下表平行操作。 试管编号0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 标准蛋白溶 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 液（mL） 9gl/LNaCl 0.1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 （mL） 考马斯亮蓝 4mL 试剂 蛋白质浓度 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 ug/ml 摇匀，1h内以0号管为空白对照，在595 nm处比色 绘制标准曲线：以A595 nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。 二、未知样品蛋白质浓度测定 测定方法同上，取1样品，加4ml考马斯亮蓝溶液，使其测定值在标准曲线的直线范围内。根据所测定的A595 nm值，在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量，从而计算出未知样品的蛋白质浓度(ug/mL)。（超出范围应稀释样品。） 注意事项 在试剂加入后的5-20 min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色是最稳定的。 测定中，蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。 利用考马斯亮蓝法分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用，重复测定吸光度时，比色杯一定要冲洗干净，制作蛋白标准曲线的时候，蛋白标准品最好是从低浓度到高浓度测定，防止误差。

考马斯亮蓝G-250标准曲线法测定蛋白含量

考马斯亮蓝G-250标准曲线法测定蛋白含量 实验目的： 学习和掌握考马斯亮蓝G-250 测定蛋白质含量的原理和方法。 实验原理： 考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250 在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合在2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。该法是1976年Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 材料、主要仪器和试剂 1．实验材料 新鲜绿豆芽 2．主要仪器 （1）分析天平、台式天平 （2）刻度吸管 （3）具塞试管、试管架 （4）研钵 （5）离心机、离心管 （6）烧杯、量筒 （7）微量取样器 （8）分光光度计 3．试剂 （1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取100mg 牛血清白蛋白，溶于100mL 蒸馏水中，即为1 000μg／mL 的原液。 （2）蛋白试剂考马斯亮蓝G-250 的配制：称取100mg 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。此溶液在常温下可放置一个月。 （3）乙醇 （4）磷酸（85％） 四、操作步骤 1．标准曲线制作 （1）0~100μg／mL 标准曲线的制作：取6 支10mL 干净的具塞试管，按表1 取样。盖塞后，将各试管中溶液纵向倒转混合，放置2min 后用1cm 光经的比色杯在595nm 波长下比色，记录各管测定的光密度OD595nm，并做标准曲线。

皮肤吸收光谱测量系统设计

物理与材料学院 课程设计报告 专业：光电子技术科学 课程：皮肤吸收光谱测量系统设计姓名： 班级：082 指导教师： 完成日期：__2011年7 月12 日___

摘要 本文以QE65000型光纤光谱仪为核心，设计了一套可以实现反射式吸收光谱测量的实验系统，该系统由表面反射式测量探头，Y型光纤，QE65000光纤光谱仪以及控制计算机组成，光源采用卤钨灯，实现400nm－1000nm光谱区域表面吸收光谱测量。本实验利用QE65000光纤光谱仪软件，实现了光谱数据的实时获取。对于获取的光谱数据进行背景扣除可得到表面的反射光谱。在完成标准板光谱测量后，通过计算吸收率并使用ORIGIN 软件进行处理，从而得到表面的吸收光谱曲线。利用该系统对人的皮肤进行了测量，结果表明400nm－700nm波段可以对人的肤色进行判定，700nm－1000nm波段可以对人体的血液进行测定，正常人的谱线没有特殊波动。 关键词：皮肤光谱，反射光谱，血液光谱，QE65000光纤光谱仪

目录 摘要 (1) 1 绪论 (3) 1.1 系统理论基础 (3) 1.2 反射式测量系统优势 (3) 1.3 光谱测量技术研究现状 (4) 1.4 本论文的主要工作 (4) 2 系统介绍 (4) 2.1 实际测量系统设计 (4) 2.2 硬件系统的性能及特点 (5) 3 功能实现 (6) 4 皮肤吸收特性实验 (6) 结论 (10) 参考文献 (11)

1 绪论 1.1 系统理论基础 物质中的原子和分子永远处于运动的状态，这种物质的内部运动，在其外部可以以辐射或吸收能量的形式（即电磁辐射）表现出来。光谱就是按照波长顺序排列的电磁辐射或者说是一种复色光按波长顺序展开而呈现的光学现象。通常所说的光谱仅指光学光谱。 当一束具有连续波长的光通过某一种物质时，就有一个或几个一定波长的光被吸收，光束中的一些成分便会有所减弱，当经过物质而被吸收的光束由光谱仪展开成光谱时，就得到该物质的吸收光谱。几乎所有物质都有着独特的吸收光谱。人体皮肤主要由表皮、真皮和皮下脂肪构成, 表皮不含血管, 真皮含有丰富的血管, 主要有两丛: 上层血管丛, 主要是一些小血管, 位于乳头真皮层；深部血管丛, 主要是一些大血管, 位于网状真皮层。入射到皮肤组织表面的光束, 一部分进入皮肤, 被皮肤组织散射与吸收, 其散射、吸收的情况由皮肤组织内各种色基, 如血红蛋白、胆红素和黑色素等决定, 未被吸收的散射光最后会重新返回皮肤表面而进入空气中, 这一部分散射光称为漫反射光, 在皮肤表面可探测到各波长相应的漫射光强度, 组成反射光谱。皮肤的真皮上层血管丛的血液含量对光谱强度的影响大，深部血管丛血液含量对光谱强度的影响小。 肤色是由皮肤各层中的载色体所决定，载色体主要是黑色素和血色素。表皮主要吸收光线，表皮中的散射可以忽略不计。因此，表皮具有光学滤波器的特性,光的透射率取决于波长和表皮中黑色素的浓度。在真皮中光线被散射和吸收,吸收光线是血液中的血色素、胆红素和胡萝卜素等成分。因此，可利用光谱法进行皮肤颜色的特性分析和血液的诊断。 1.2 反射式测量系统优势 目前对样品的光谱测量主要有透射式和反射式技术测量等方法。本文设计的光谱测量系统采用反射式的光学系统。 由于各种光电探测器的光谱响应范围有所不同，为具备较强的通用性，通常一个好的探测器光谱响应度测量系统是在宽光谱范围的。在宽光谱范围的光学设计中，采用反射式的光路设计要比透射式得到更高品质的光束质量。在透射式的光学系统中，由于不同波长的单色光在光学材料中的折射率不同，透射式光谱测量会受不同材料的穿透性影响较大, 波长范围越宽，影响就越大，在实际应用方面有一定的局限性。而在反射式的光学系统中，由于根本不涉及折射，所以不存在这样的问题。因此采用反射式光路，成像质量大大优于透射式光路。

血红蛋白的测定方法

血红蛋白的测定方法 血红蛋白是一种色素蛋白，可以用比色法测定。血液中血红蛋白以各种形式存在，包括氧合血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白或其他衍生物。 1）氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法：血液中除了SHb以外，其他各种血红蛋白均可被试剂转化、生成HiCN，其最大的吸收峰为540nm波长，可经比色测定。此法为国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐的国际标准参考方法，操作简单，显色快且结果稳定医`学教育网搜集整理；但本法试剂中KCN有剧毒，测定过程中高白细胞和高球蛋白血症易致混浊，HbCO转化较慢。 2）十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白（SLS-Hb）法：除SHb外，血液中各种Hb均可与低浓度十二烷基月桂酰硫酸钠（SLS）作用，生成SLS-Hb棕红色化合物。SLS-Hb最大吸收波峰538nm，波谷500nm，肩峰560nm.由于摩尔消光系数尚未最后确认，因此不能用吸光度“A”值直接计算血红蛋白浓度。本法操作简单，呈色稳定，准确性和精确性符合要求，且无公害。但SDS质量差异较大，并且SDS可破坏白细胞，不适合进行白细胞计数的血液分析仪使用。 3）叠氮高铁血红蛋白（HiN3）测定法：与HiCN法相似，但仍然有公害问题。

4）碱羟血红蛋白（AHD 575nm）测定法：试剂简单、不含有毒试剂、呈色稳定，但由于其吸收峰在575nm，限制了此法在血液分析仪的使用。 5）溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法：该法试剂溶血性强又不破坏白细胞，可同时进行白细胞计数，可用于血细胞分析仪自动检测Hb和白细胞。缺点是对Hb测定结果的准确度和精密度较低。 近年来，多参数血细胞分析仪的应用，使Hb测定逐步以仪器法取代手工法，其优点是操作简单、快速，同时可以获得多项红细胞的参数，血液分析仪法测定血红蛋白的原理与手工法原理相似，多采用HiCN法，但由于各型号仪器使用的溶血剂不同，形成Hb的衍生物不同医`学教育网搜集整理。某些溶血剂形成的衍生物稳定性较差，因此要严格控制溶血剂加入量及溶血时间，特别是半自动血细胞分析仪应严格控制实验条件。有些溶血剂内虽加入了KCN，但其衍生物并非是HiCN，仪器要经过HiCN标准液校正后，才能进行Hb测定。仪器法测定血红蛋白精确度CV约为1%. 分为生理性或病理性增高和减低。

血红蛋白浓度测定及医学意义

血红蛋白浓度测定及医学意义 血红蛋白（hemiglobin）测定是一项非常普及的血液学检测项目，其最广泛的应用就是判断你是否贫血，虽然它不是血液细胞学检测项目，但常包含在血常规细胞学检测项目里与血液细胞学分析同时测定。该项目以前也称为血色素测定，该项目的英文缩写是HGB或Hb，正常参考值范围如下： 成年男性：120～160 g/L(12.0～16.0 g/dL) 成年女性：110～150 g/L(11.0～15.0 g/dL) 新生儿：170～200 g/L(17．0～20．0 g/dL) 血红蛋白浓度测定的临床意义 分为生理性或病理性增高和减低。 1．生理性增高：住在高原地区的居民其红细胞和血红蛋白往往高于平原地区的居民。饮水过少或出汗过多，排除水分过多可导致暂时性的血液浓缩，造成红细胞和血红蛋白轻度升高。新生儿则为生理性增高。 2．生理性减低：婴儿从出生3个月起到15岁以前的儿童，因身体发育较快，造成红细胞和血红蛋白相对生成不足，因而出现相对的减低，可能比正常成人低约10％～20％。孕妇在妊娠的中后期因血浆容量增加，导致血液被稀释；老年人因为骨髓造血机能减低，可能导致红细胞和血红蛋白的减少，也称为生理性贫血，此时需要进行适当的营养与治疗，并不意味着患有贫血性疾病或疾病导致的贫血。 3．病理性升高： (1)严重呕吐，腹泻，大量出汗，大面积烧伤病人，尿崩症，甲状腺功能亢进危象，糖尿病酸中毒等，由于血浆中水分丢失过多，导致血液浓缩，会出现红细胞和血红蛋白量的明显增加。 (2)慢性心脏病、肺源性心脏病、子绀型先天性心脏病等因为组织缺氧，血液中促红细胞生成素增多而使血液中红细胞和血红蛋白量呈代偿性增加。 (3)某些肿瘤，如肾癌，肝细胞癌，子宫肌瘤，卵巢癌，肾胚胎癌等也可使促红细胞生成素呈非代偿性增加，导致上述的结果。 (4)真性红细胞增多症是一种原因不明的以红细胞增多为主的血液疾病。 4．病理性减低：

标准曲线制作考马斯亮蓝法测蛋白质含量

标准曲线制作考马斯亮蓝法测蛋白质含量

标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量 一、标准曲线 一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。 二、蛋白质含量测定方法 1、凯氏定氮法 2、双缩脲法 3、Folin-酚试剂法 4、紫外吸收法 5、考马斯亮蓝法 三、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作 （一）、试剂： 1、考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。 2、标准蛋白质溶液： 纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。 （二）、器材： 1、722S型分光光度计使用及原理（）。 2、移液管使用（）。 （三）、标准曲线制作： 1、 试管编号0 1 2 3 4 5 6 100ug/ml标准蛋白（ml）0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 考马斯亮蓝试剂（ml） 5 5 5 5 5 5 5 摇匀，1h内以1号管为空白对照,在595nm处比色 A595nm 2、以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、

药品的配制（磷酸缓冲液的配制） 一、药品的配制步骤 （一）、实验准备： 1、准备所需的药品和玻璃仪器。 2、洗涤。（怎样洗涤算干净？） （二）、计算： 1、百分比浓度计算： 1)、G/V比 例如配1% NaCl，称1g NaCl溶于100ml 水。 2）、V/V比： 例如配75%乙醇100ml，75%×100%=100%×X, X=75ml。取75ml无水乙醇，加25ml蒸馏水。 乙醇：乙醚：丙酮=2：1：2配500ml，各取200 ml，100 ml，200 ml混合。3）G/V比：用的较少，如计算灰分中某种元素如Fe的含量。 2、摩尔浓度计算：注：药品的分子量一般在标签中注明。 1）、0.1M或0.1mol/L NaCl配100ml。 M=质量/体积（L）称取NaCl0.1×0.1×40=0.4g 摩尔数=G（g）/摩尔质量2）、0.1mMNaCl配100ml mM=毫摩尔数/体积（L）称取NaCl0.1×0.1×40=0.4g 毫摩尔数=G（mg）/摩尔质量 3）、0.1uNaCl配100ml mM=微摩尔数/体积（L）称取NaCl0.1×0.1×40=0.4mg 微摩尔数=G（ug）/摩尔质量称取NaCl0.1×0.1×40=0.4ug 3、混合溶液配制的计算： 如配3uMEDTA，2.25mM NBT以及60uM 溶液100ml，用50mM磷酸缓冲液配制。 注意：1、分别标定体积计算 2、分别配制再混合，但总体积不能为100ml

血红蛋白测定及注意事项

（2）以上述同样的方法取血，并使血红蛋白转化为氰化高铁血红蛋白。然后以转化液作空白，测定标本吸光度A。 （3）通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度或用K值来计算血红蛋白浓度，即Hb（g·L-1）=K×A (6.2-2) 3.使用沙里氏血红蛋白计测定 沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。 （1）沙里血红蛋白计主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方形刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度；一侧为血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含血红蛋白的克数)表示，从2～22 g；另一侧为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，从10%～160%。为避免所使用的平均值不一致，因此一般采用绝对值来表示。 （2）具体测定方法如下： ①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度管内,(约加到管下方刻度”2”或多或10%处)。 ②用微量采血管吸血至20 μl(方法同上述)，仔细揩去吸管外的血液。 ③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。操作时勿产生气泡,以免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。 ④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。 ⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色一致为止。 ⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中所含的血红蛋白的克数。比色前，应将玻棒抽出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液凹面最低处相一致的刻度为准。换算成每升血液中含血红蛋白克数（g·L-1）。 [注意事项] 1.取血前要做好充分的消毒。 2.血液要准确吸取20 μl，若有气泡或血液被吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干净，重新吸血。洗涤方法是：先用清水将血迹洗去，然后再依次吸取蒸馏水、95%酒精、乙醚洗涤采血管1～2次，使采血管内干净、干燥。作为学生练习，微量采血管可反复使用。 3.使用血红蛋白仪测定时，吸样管应插入试管底部，避免吸入气泡，否则会影响测试结果。仪器连续使用时，每隔4小时要观察一次零点，即吸入文齐试剂，用“调零旋钮”使仪器恢复到零点。仪器用完后，关机前要用清洗液清洗。否则会影响零点的调整。 [实验结果] 报告该实验动物的血红蛋白浓度。并将全班的结果加以统计,用平均值±标准差表示。[思考题] 血红蛋白的含量与年龄的关系？ 影响血红蛋白含量的主要因素？※1.HiCN转化液：即文齐氏液，有标准商品出售。也可配制：高铁氰化钾(K3Fe（CN）6)200 mg，氰化钾（KCN）50 mg，无水磷酸二氢钾（KH2PO4）140 mg，Triton X-100 1.0 ml，蒸馏水加至1000 ml。过滤后为淡黄色透明液体，pH 7.0～7.4，置有色瓶中加盖、冷暗处保存。如发现试剂变绿、变浑浊则不能使用。 2.用分光光度计直接测定血红蛋白 （1）取血、血红蛋白转化和比色同前述1、2的方法，得到标本的吸光度A。 （2）根据标本吸光度A直接计算出血红蛋白浓度：