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现代分子生物学试题及答案

现代分子生物学习题及答案

一、填空题

1．基因工程是70年代发展起来的遗传学的一个分支学科。2．基因工程的两个基本特点是：(1)分子水平上的操作，(2)细胞水平上的表达

3．基因克隆中三个基本要点是：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择

4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的限制性酶切图谱。5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自属名的第一个字母，第二、三两个字母取自_种名的前两个字母，第四个字母则用株名表示。6．部分酶切可采取的措施有：(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积等。

7．第一个分离的限制性内切核酸酶是EcoK；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_ EcoRl。

8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是GGCC，它们属于异源同工酶。

9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_枯草杆菌蛋白酶切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1) 5'-3'合成酶的活性；(2) 3'-5'外切核酸酶的活性。

10．为了防止DNA的自身环化，可用碱性磷酸酶去双链DNA_5’端的磷酸基团。

11．EGTA是_Ca2+_离子螯合剂。

12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_ 5'-3'合成酶的活性，而没有3'-5'外切酶的活性。

13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用DNA聚合酶I的__5'一3'外切核酸酶和5'一3'合成酶的作用。

14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用____ S1核酸酶切割或DNA聚

合酶补平。

15．反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有__核酸水解酶H的作用，可以将DNA-

RNA杂种双链中的_RNA_水解掉。

16．基因工程中有3种主要类型的载体：质粒DNA，病毒DNA，质粒和病毒DNA杂合体。

17．就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：__复制区：含有复制起点；选择标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA的插入。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。

18．一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测

不出质粒，这种现象叫质粒消除(或治愈) 。19．pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于pMBl，它的四环素抗性基因来自于pSCl01，它的氨苄青霉素抗性基因来自于pSF2124(R质粒)。

20．YAC的最大容载能力是1000kb，BAC载体的最大容载能力是300kb 。

21．pSCl01是一种严紧复制的质粒。

22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过pBR322和M13

两种质粒改造而来。它的复制子来自pMBl，Amp

抗性基因则是来自转座子。

23．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA 的扩增；二是对某些噬菌体(如噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽。

24．野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是没有合适的限制性内切核酸酶识别位点和选择标记。25．黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子

来自质粒、COS位点序列来自λ噬菌体，最大的

克隆片段达到45 kb。

26．野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1) 分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记27．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是复制区，而来自噬菌体的主要结构是IG区。

28．λ噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基

因组的75％～105％的范围内。

29．在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是

螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性。

30．用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子，如NaCl和NaAc，

其目的是中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力。

31．引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1)合成探针；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反应；(4)进行序列分析32．Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出

碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的T—载体。

33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在第二链合成时形成的发夹环

34．乙醇沉淀DNA的原理是乙醇使DNA分子脱水。35．假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：

(1)保持正确的可读框(2)能够使其转录的启动子(3)具有翻译的起始和终止信号

36．受体细胞的感受态是接受外源DNA的生理状态_。37．DNA重组连接的方法大致分为四种：(1)黏性末端连接；(2)平末端连接；(3)同聚物接尾连接；(4)接头连接法。

38．将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个基因组DNA克隆_，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个基因组DNA文库。

39．将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个_cDNA 克隆，源于同一批RNA制备物的克隆群则构建了一个_ cDNA文库_。

40．只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用_聚合酶链式反应(PCR)可以将这段DNA进行百万倍的扩增。

41．人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为0?C 时吸附DNA, 42?C _时摄人DNA。

42．目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。

大致可以分为：(1)遗传学方法；(2)物理筛选法；(3)核酸杂交法；(4)表达产物分析法等。

43．PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于_插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选。

44．核酸杂交探针可分为两大类：DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为___基因组DNA探针和cDNA 探针。45．如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端，则可以用_ Klenow酶填补的方法_进行3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端，可以用__ T4DNA聚合酶进行3’末端标记。46．单链DNA探针的标记可以采用下列方法：(1)用M13噬菌体载体合成单链DNA探针；(2)从mRNA反转录合

成单链cDNA探针；(3)用不对称PCR合成单链DNA

探针。

47．根据Northern杂交的结果可以说明：外源基因是否进行了转录_。

48．差示杂交(differential hybridization)技术需要__两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能

够表达一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这

些基因。

49．RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜)

上，同一放射DNA探针杂交的技术称__ Northern印迹_。50．在__ Southern印迹_技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。

51．可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有__5’→3’合成酶_和_3’ →5’外切核酸酶_的活性。

52．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含内含子。

53．Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：

(1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；

(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条

件。

54．放射免疫筛选的原理基于以下三点：(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合；

(3)抗体能够被标记

二、选择题(单选或多选)

1．因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( )

(a)A．Kornberg (b)W．Gilbert (c)P．Berg (d)B．McClintock

2．第一个作为重组DNA载体的质粒是( )

(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl8

3．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。

(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成

(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶

(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA 进行修饰

(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统

4．Ⅱ型限制性内切核酸酶：( )

(a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列

(b)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供

(c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性

(e)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供

5．下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( )

(a)限制酶是外切酶而不是内切酶

(b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割

(c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的

(d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端

(e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端

6．第一个被分离的Ⅱ类酶是：( )

(a)EcoK (b)HindⅢ(c)HindⅡ(d)EcoB

7．在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?( )

(a)反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度

8．在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?( )

(a)EDTA (b)柠檬酸钠(c)SDS (d)EGTA 9．在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?( )

(a)S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶

10．限制性内切核酸酶可以特异性地识别：( )

(a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列

(c)特定的三联密码(d)以上都正确

11．下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是( )。

(a)Sau3A I (b)E．coRI (c)hind III (d)Sau 3A1 12．限制性内切核酸酶的星号活性是指：( )

(a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。

(b)活性大大提高

(c)切割速度大大加快(d)识别序列与原来的完全不同

13．下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( )

(a)甘油含量过高(b)反应体系中含有有机溶剂

(c)含有非Mg2+的二价阳离子(d)酶切反应时酶浓度过低

14．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当

(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成

(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶

(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA 进行修饰

(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统

15．在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用( )

(a)T4DNA聚合酶(b)Klenow酶．

(c)大肠杆菌DNA聚合酶I (d)T7DNA聚合酶16．末端转移酶是合成酶类，( )

(a)作用时不需要模板

(b)在Ca2+的存在下，可以在突出的3，末端延长DNA 链

(c)在Ca2+的存在下，可以在隐蔽的3，末端延长DNA 链

(d)上述说法有两种是正确的

17．在基因工程中，可用碱性磷酸酶( )

(a)防止DNA的自身环化(b)同多核苷酸激酶一起进行DNA的5，末端标记

(c)制备突出的3，末端(d)上述说法都正确

18．下列酶中，除( )外都具有磷酸酶的活性

(a)λ核酸外切酶(b)外切酶Ⅲ(c)单核苷酸激酶(d)碱性磷酸酶

19．下列哪一种酶作用时需要引物? ( )

(a)限制酶(b)末端转移酶(c)反转录酶(d)DNA连接酶

20．S1核酸酶的功能是( )

(a)切割双链的DNA (b)切割单链的RNA (c)切割发夹环(d)以上有两项是正确的

21．Klenow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了( )的活性。

(a)5，--3，合成酶，(b)3，--5，外切酶(c)5，---3，外切酶(d)转移酶

22．下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( )是不正确的

(a)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，

因而有较多的拷贝数

(b)可以在氯霉素作用下进行扩增(c)通常带有抗药性标记

(d)同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子

23．基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载

体中只有( )被视为用作基因工程载体的天然质粒载体

(a)pBR322 (b)pSCl01 (c)pUBll0 (d)pUCl8

24．下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?( )

(a)质粒(b)黏粒(c)酵母人工染色体(YAC) (d) 噬菌体(e) cDNA表达载体

25. 松弛型质粒：( )

(a)在寄主细胞中拷贝数较多(b)可用氯霉素扩增

(c)一般没有选择标记(d)上述(a)、(b)两项正确

26．Col El是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒：( )

(a)是松弛复制型（b)具有，四环素抗性

(c)能被氯霉素扩增(d)能产生肠杆菌素27．同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：( )

(a)OCDNA>SCDNA>LDNA

(b)SCDNA>LDNA>OCDNA

(c)LDNA>OCDNA>SCDNA

(d)SCDNA>OCDNA>LDNA

28．pBR322是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自：( )

(a)ColEl (b)Ri质粒(c)pSCl01 (d)pUCl8

29．关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?( )

(a)在不同的宿主中具有不同的复制机制

(b)在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点

(c)在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶

(d)在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率

30．能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是( )

(a)charomid (b)plasmid (C)cosmid (d)phagemid 31．第一个作为重组DNA载体的质粒是( )

(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl8

32. Ti质粒：( )

(a)可从农杆菌转到植物细胞中(b)作为双链DNA被转移

(c)在植物中导致肿瘤(d)介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素

(e)需要细菌的vir基因帮助转移(f)在植物细胞中作为染色体外质粒

33．黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体，( )

(a)它具有COS位点，因而可进行体外包装(b)它具有质粒DNA的复制特性

(c)进入受体细胞后，可引起裂解反应(d)进入受体细胞后，可引起溶源化反应

34．有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。酶学测

序法的基本原理／优点是：( )

(a)碱基与特殊染料间不同的相互作用

(b)一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止

(c)限制性位点与DNA末端标记的相关性

(d)可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序

(e)反应是DNA特异的，RNA不会带来干扰。这样

既减少纯化步骤，也节约了开支。

35．关于cDNA的最正确的说法是：( )

(a)同mRNA互补的单链DNA (b)同mRNA互补的双链DNA

(c)以mRNA为模板合成的双链DNA (d)以上都正确

36．用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：( )

(a)染色体DNA断成了碎片(b)染色体DNA分子量大，而不能释放

(c)染色体变性后来不及复性(d)染色体未同蛋白质分开而沉淀

37. 关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确?( )

(a)溶液I的作用是悬浮菌体(b)溶液Ⅱ的作用是使DNA变性

(c)溶液Ⅲ的作用是使DNA复性

(d)质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性

38. Clark做了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不

需要模板，在双链DNA的

末端加一个碱基，主要是加( ) ．

(a)dGTP (b)dATP (c)dCTP (d)dTTP

39．根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA 文库等。在下列文库中，

( )属cDNA文库

(a) YAC文库(b) MAC文库(c) 扣减文库(d) BAC文库

40．下面关于多克隆位点(multiple clone site,MCS)的描述，不正确的—句是( )

(a)仅位于质粒载体中(b)具有多种酶的识别序列

(c)不同酶的识别序列可以有重叠(d)一般是人工合成后添加到载体中

41．在cDNA技术中，所形成的发夹环可用( )

(a)限制性内切核酸酶切除(b)用31外切核酸酶切除

(c)用S1核酸酶切除(d)用51外切核酸酶切除42．在DNA的酶切反应系统中，通常：( )

(a)用SSC缓冲液(b)加入Mg2+作辅助因子

(c)加入BSA等保护剂(d)上述说法中，有两项是正确的

43．黏性末端连接法，不仅操作方便，而且( )

(a)产生新切点(b)易于回收外源片段(c)载体不易环化(d)影响外源基因的表达

44．在下列表型中，( )是基因工程上理想的受体菌表型

(a)r+m+rec*(b)r-m-rec-(C)r-m-rec+(d)r+m+rec-45．关于DNA接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确?( )

(a)给外源DNA添加适当的切点(b)人工构建载体

(c)调整外源基因的可读框(d)增加调控元件46．cDNA文库包括该种生物的( )

(a)某些蛋白质的结构基因(b)所有蛋白质的结构基因

(c)所有结构基因(d)内含子和调控区

47．下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的?( )

(a)从特定组织或细胞中提取DNA或RNA

(b)用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA

(c)以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA

(d)新合成的双链DNA甲基化

48．下列对黏性末端连接法的评价中，哪一项是不正确的?

( )

(a)操作方便(b)易于回收片段

(c)易于定向重组(d)载体易于自身环化，降低重组率49．关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?( )

(功具有可诱导性(b)具有可转移性

(c)细菌生长的任何时期都可以出现(d)不同细菌出现感受态的比例是不同的

50．下面关于用T4多核苷酸激酶标记5' 端制备探针的描述中( )是不正确的。

(a)既能标记DNA，又能标记RNA (b)既能标记双链DNA又能标记单链DNA

(c)只能标记突出的5' 端不能标记其他类型末端

(d)DNA或RNA必须有5'-OH的存在51．Southem印迹的DNA探针( )杂交。

(a)只与完全相同的片段(b)可与任何含有相同序列的DNA片段

(c)可与任何含有互补序列的DNA片段’．

(d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段

(e)以上都是

52．用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。

(a)Southem印迹杂交(b)Northem印迹杂交

(c)Western印迹(d)原位菌落杂交

53．下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?( )

(a)用限制酶消化DNA (a)DNA与载体的连接

(c)用凝胶电泳分离DNA片段(d)DNA片段转移至硝酸纤维素膜上

(e)用一个标记的探针与膜杂交

54．报告基因( )

(a)以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列

(b)以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区

(c)能用于检测启动子的活性(d)能用于确定启动子何时何处有活性

55．在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是( )

(a)诱导宿主的α肽的合成(b)诱导宿主的ω肽的合成

(c)作为酶的作用底物(d)作为显色反应的指示剂

56. 切口移位是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。

(a)DNA聚合酶I，RNA (b)DNA聚合酶I，DNA

(c)DNA聚合酶Ⅲ，RNA (d)DNA聚合酶Ⅲ，DNA 57．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的( )

(a)DNA (b)RNA (c)抗体(d)抗原58．Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段，而Northern 印迹则是：( )

(a)用RNA探针检测DNA片段(b)用RNA探针检测RNA片段

(c)用DNA探针检测RNA片段(d)用DNA探针检测蛋白质片段

59．用免疫化学法筛选重组体的原理是( )

(a)根据外源基因的表达(b)根据载体基因的表达

(c)根据mRNA同DNA的杂交(d)根据DNA同DNA的杂交

60．随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的?( )

(a)双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的

(b)不需要用Dnase I预处理

(c)反应时可用Klenow酶(d)反应时可用DNA 聚合酶1

61．在切口移位标记DNA探针时只能使用( )

(a)Klenow酶(b)DNA聚合酶I (c)DNA 聚合酶Ⅱ(d)DNA聚合酶Ⅲ

62．要对一双链的DNA分子进行31末端标记，可用( )

(a)Klenow酶(b)DNA聚合酶I (c)T4DNA聚合酶(d)T7DNA聚合酶

答案

1．c；2．c；3．b；4．b 5．b，C，d，e；6．c；7．b；8．d；9．d；10．B；11．d；12．a；13．d；14．b 15．d；16．c；17．a，b；18．a；19．c；20．d；21．c；22．C；23．b；24．C；25．d；26．a，C，d；27．b；28．c；29．b；30．a；31．c；32．a,c,d,e，33．a，b，c；34．b；35．c；36．c；37．d；38．b；39．c；40．a；41．c；42．a，b，c；43．b；44．b；45．d；46．a；47．a；48．c；49．c；50．b；51．c；52．c；53．b；54．a,c,d；55．a；56．b；57．a，b；58．c；59．a；60．d；61．b；62．c；

三、简答题

1．说明Sanger DNA测序法的原理。

Sanger DNA测序法是建立在两个基本原理之上：(1)核酸是依赖于模板在聚合酶的

作用下由5'端向3'端聚合(DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程)；(2)可延

伸的引物必须能提供游离的3'羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3'羟基末

端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获

得4组长度不同的DNA片段。通过比较所有DNA片段的长度可以得知核苷酸的

序列。

2．某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因?

盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。

3．在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?

回文序列是：5'-CATA TG-3，

4．下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是Ⅱ类酶的识别序列：

GAATCG，AAATTT，GATATC，ACGGCA? 为什么?

GA TATC；AAA TTT，因为它们是回文序列。

5．当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施?

为什么?

注意星活性，先低盐，后高盐；先低温酶，后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一种酶失活，再加第二种酶，否则，易产生星活性。或使用通用缓冲液。

6．为什么反转录酶在聚合反应中会出错?

由于反转录酶缺少在E．coli DNA聚合酶中起校正作用的3'-5'外切核酸酶活性，所以聚

合反应往往会出错，在高浓度的dNTP和Mg2+下，每500个碱基中可能有一个错配。7．什么是测序酶(sequenaseTM)?

所谓测序酶即是修饰了的T7 DNA聚合酶，是采用缺失的方法，从外切核酸酶结构域中除去28个氨基酸，这样使T7 DNA聚合酶完全失去了3'-5'的外切核酸酶活性，只有5'---3'聚合酶的活性，而且聚合能力提高了3～9倍，测序时常用此酶。

8．什么是S1核酸酶作图(S1 nuclease mapping)?

S1核酸酶作图是一种对RNA转录产物的末端和剪接位点进行作图的方法

9 Y AC载体具有什么样的功能性DNA序列?为什么在克隆大片段时，Y AC具有优越

性?

YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个DNA复制起点，两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。

10．列举质粒载体必须具备的4个基本特性。

(1)独立复制；(2)有选择标记；(3)有独特的酶切位点；(4)能转化但不扩散。11．什么叫穿梭载体？

含有细菌质粒和克隆的真核生物DNA片段的杂种质粒，有两个复制起点和既能在细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主转到另一个宿主(来回穿梭)。

12．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体?

(1)削减分子量(除去非必需区和整合区)；(2)削减酶切位点；(3)添加选择标记；

(4)引入终止突变

13．PCR的基本原理是什么?用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息?

(1)DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。

(2)至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。

14．cDNA克隆与基因组克隆有何不同?

基因组克隆包含所有不在cDNA中出现的内含子。

15．怎样将一个平末端DNA片段插入到EcoR I限制位点中去?

化学合成一些长为10bp含有EcoRI识别位点的短的DNA片段，然后与待克隆片段两端连接起来，如果用EcoRI切割这种连接片段，就会产生EcoRI的单链末端。这种片段就可以插入到任何EcoRI的限制性内切酶位点中

16．简述以黏粒为载体构建基因文库的原理。

(1)COS位点可以自身环化；(2)可以利用COS位点包装λ噬菌体颗粒；

(3)可以感染寄主细胞；(4)利用质粒复制子复制，不整合、不裂解。

17．酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在，必须有哪些基本的结构?

(1)着丝粒；(2)端粒；(3)ARS序列。

18．何谓YAC? 主要特性是什么?

(1)含有来自其他生物DNA的酵母人工染色体，叫YAC；

(2)主要特性是可以克隆较大的外源片段。

19．Muller的PCR反应同大肠杆菌体内的DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在哪里?

PCR用双引物，体内复制用单引物。

20．欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核生物(如E．coli)中进行表达，克隆时应注意哪些问题?

应注意的问题有：启动子、密码子、剪接、分泌。

21．假定你分离到一个E．coli的Thy- 突变体，并推测有可能是ThyA基因突变。请设计一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变的ThyA基因，测定突变的序列。(注：E．coli 野生型的ThyA基因的序列是已知的)

为了扩增突变体的thyA基因，先设计一对引物，其中一个引物的序列与thyA基因的5’端相同，另一个引物同该基因的3’端互补。在引物的5’端加上合适Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，以便于后来的克隆。将染色体DNA同引物混合后，进行PCR扩增。然后进

行琼脂糖凝胶电泳，纯化扩增片段，可以直接测序或克隆到合适的载体再测序。

22．你在做Southern印迹分析，并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案，下面一步骤是用NaOH溶液浸泡凝胶，使DNA变性为单链。为了节省时间，你略过了这一步，直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交，最后发现放射自显影片是空白。错在哪里?

如果你的杂交探针是双链的，可能因为在加人杂交混合物之前忘记将探针变性而得到空白的放射自显影结果。

23．切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤有哪些?

(1)DNaseI造成切口；

(2)DNA聚合酶III的5’ →3’外切核酸酶进行切割；

(3)DNA聚合酶Ⅲ的5’→3’合成酶进行修补；

(4)在修补过程中，随着切口(nick)的移动，将放射性的底物掺人到双链DNA中。24．用EcoRI和Hind Ⅲ分别切割同一来源的染色体DNA，并进行克隆，在前者的克隆中筛选到A基因，但在后者的克隆中未筛选到A基因，请说明原因。

原因是：HindⅢ的切点在A基因内。

25．什么是Western印迹?它与Southern印迹有什么不同?

Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上，然后用特异性的抗体进行检测。它与Southern的不同在于探针的性质不同，在Western印迹中使用的探针是抗体(蛋白质)。

26．用一限制性内切核酸酶切割Lac+ Tet+的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列，并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在lac基因内有切割位点，并在第二个氨基酸密码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化Lac- Tet s

受体菌，筛选Tet r转化子，问：Lac的基因型是什么?并说明原因。

基因型是lac-．原因是在该密码子中插入了两个碱基，造成了移码突变，所以Lac的基因是缺陷的。

27．在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA 而不用基因组DNA?为什么要在cDNA前加上细菌的启动子?

这是因为细菌没有内含子剪接系统，并且不能识别真核生物的启动子之故。四、问答题：

1．说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。

2．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影向?

3．影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些?

4．什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?

5．细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同?在基因工程中有什么用途?

6．λ外切核酸酶(1ambda exonuclease)基本活性是什么?在基因工程中有什么应用?

7．Mn2+、Mg2+对Dnase I(deoxyribonuclease ?)的活性有什么影响?Dnase I在基因工程中有什么作用?

8．质粒如何维持在细胞中的稳定？

9．由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，进行

严格的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。请问质粒载体的安全条件包括哪几

个方面?

10．为什么野生型的噬菌体DNA不宜作为基因工程载体? 11．什么是蓝白斑筛选法?

12．蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性?

13．M13系列载体具有哪些优缺点?

14．黏粒载体具有哪些特点与不足?

15．辅助噬菌体DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的? 16．如果知道某一基因的功能及其相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法

克隆该基因?

17．什么是基因文库?

18．什么是基因组文库(genomic library)?构建基因组文库，涉及哪些基本过程?它同遗

传学上的基因库有什么不同?

19．什么是cDNA文库(complementDNAlibrary)?同基因组文库有何差别?

20．黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出

这些不足之处。

21．什么是同聚物加尾连接法(homopolymer tails joining)?用何种方法加尾?具有哪些优

缺点?

22．何谓接头连接法(1inker ligation)?

23．什么是同裂酶?为什么说用同裂酶进行体外重组效率最高?

24．为了大量获得许多用于生化鉴定的产物，你想将拟南芥中的一个序列已知、编码单

体酶蛋白的基因在单细胞微生物中表达，你如何确保最终能得到产物?

25．某一质粒载体具有Tet r和Kan r的表型，在Kan抗性基因内有一Bgl I的切点。现用

Bgl I切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培

养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片

段的重组体?

26．以pBR322 DNA作为载体，从四环素抗性基因区克隆外源DNA时，可采用环丝氨

酸富集法筛选重组体，说明其基本原理和基本操作过程。

27．放射性抗体检测法(radioactive antibody test)的基本原理是什么?

28．什么是随机引物(random primer)?如何标记DNA? 29．什么是印迹(blotting)杂交?

30．什么是原位菌落杂交(colony hybridization)?

31．说明Southern杂交的原理和方法。

32．Northern印迹与Southern印迹有什么不同?

33．建立了一个基因文库后，如何鉴定一个携带目的基因的克隆?

答案：

1．答：

限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则，即属名+种名+株名的各一个首字母，再加上序号。基本原则：3-4个字母组成，方式是：属名+种名+株名+序号；首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写；第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写；

第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写；

(2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。

第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。

2．答：

Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星活性。

概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性

内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0 以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如

Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。

3．答：

影响DNA连接酶催化连接反应的因素有很多，但温度对连接反应的影响较大。黏性末端链通常以12°C一15°C最好，这种温度有利于末端退火和连接酶的活性稳定。温度高了难以进行末端退火，低于上述温度会降低连接酶的活性。平末端连接以室温为宜，因为平末端连接不存在DNA的退火问题，但是温度高于30℃，连接酶特别不够稳定。

平末端连接时连接酶的浓度要比黏性末端连接时高10-100倍。DNA中有残存的tRNA 不会抑制DNA连接酶的活性，但是，如果NaCl的浓度高于150mmol／L，则对连接反应有强的抑制作用。

另外反应体系中有NH4+离子的存在，对E．coli DNA连接酶具有激活作用。E．coli DNA 连接酶需要NAD+作辅助因子，而T4 DNA连接酶需要ATP。

4．答：

Klenow酶是1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I，得到两个片段，其中大片段的分子量为75kDa，它具有5'-3'聚合酶和3'-5'外切核酸酶的活性，小片段具有5'-3'外切核酸酶活性。由于大片段失去了DNA聚合酶I中会降解5'引物的5'-3'外切核酸酶的活性，所以在基因工程中更有用。

Klenow酶主要有下列用途：

(1)修复反应，制备平末端

可用Klenow酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的5'或3'突出末端，制备平末端，这样可以使原来具有不相容的黏性末端的DNA片段通过平末端重组。如在反应系统中加入放射性同位素标记的脱氧核苷酸，用这种末端填补的方法可以制备3'末端标记的探针。

用Klenow酶修复5'突出末端的反应主要是利用了Klenow酶的DNA聚合酶活性，是填补反应；而修复3'突出末端则是用Klenow酶的3'-5'外切核酸酶的活性，是切割反应。

用Klenow酶的切割反应来修复3'突出末端是不理想的，改用T4DNA聚合酶或其他的酶是更好的选择。

(2) 标记DNA3'突出末端(protruding end)

该反应分两步进行：先用3'-5'的外切核酸酶活性除去3'突出末端，产生3'隐含末端，然后在高浓度的标记底物( -32p-dNTP)存在下，使降解(3'-5')作用与聚合(5'-3')作用达到平衡。这种反应也叫交换或取代反应(exchange／replacement reaction)。不过这一反应用T4DNA聚合酶的效果更好，因它的3'-5'外切核酸酶活性较强。

(3)其他的一些用途：包括用双脱氧末端终止法进行DNA序列分析、用于cDNA第二链

的合成、在定点突变中用于合成第二链、用引物延伸法(primer extension)制备单链DNA 探针等。

5．答：

主要差别是：CIP68°C时失活，而BAP68°C稳定，且耐酚抽提。应用：

(1)dsDNA的5'端脱磷酸，防止DNA的自身连接。但是用CIP处理后，最好将CIP除去

后，再进行连接反应。

(2)DNA和RNA脱磷酸，然后用于多核苷酸激酶进行末端标记。

6．答：

外切核酸酶是从噬菌体感染的E．coli中分离纯化的，能够从双链DNA上依次切下5'单核苷酸，作用底物是双链DNA的5'磷酸末端，不能切割羟基化5'端。该酶虽然能切割单链DNA,但效率较低(下降200倍)。不能切割带切口或缺口的dsDNA。该酶作用时是行进性的，一步一步进行的。在基因工程中主要用于除去双链DNA突出的5'末端，以便让末端转移酶加尾。

7．答：

DNase I是一种内切核酸酶，在Mg2+存在下，DNase I随机切割DNA两条链中的任意一条链；当Mn2+代替Mg2+时，DNase I几乎是在双链DNA两条链相对的位置上打开缺口，使双链DNA断裂，产生的末端几乎是平末端或只突出1～2个核苷酸的DNA片段。

DNase I有许多用途：(1)在切口移位标记中，制造切口；(2)在足迹法中保护DNA；

(3)除去RNA制备物中的DNA；(4)体外转录中除去DNA模板；(5)检测染色体中的转录

活性区；(6)产生可在噬菌体M13载体上进行测序的随机克隆。

8．答：

质粒通过以下几种机制维持在细胞中的稳定：

(1)多聚体质粒的分解

如果质粒在复制时形成多聚体的话，在细胞分裂过程中质粒丢失的可能性就会增加。一个多聚体是由多个单体相互连接而成的。多聚体的形成可能是由于在复制终止时发生错误或者是由于单体间重组的结果。由于多聚体在细胞分裂时将作为一个质粒进入一个子细胞，这样，多聚体的形成就大大降低了质粒的有效拷贝数，因此，多聚体也就大大增加了细胞分裂时质粒丢失的机会。为了避免这种情况的发生，很多质粒都具有位点专一性重组的系统，可以破坏多聚体。

(2)分离(partitioning)

质粒通过一种分离系统来防止在细胞分裂过程中质粒的丢失，这种机制保证在细胞分裂过程中每个子细胞至少可得到一个质粒拷贝，这是由称为par功能(Par functions)完成的。所谓par功能是指某些质粒，包括F、R1等质粒上具有的一些短的区域，这些区域能够增强质粒拷贝的合适分配。如果从质粒中将这种区域拿掉，质粒丢失的频率就会相当高。已经深入研究过P1质粒的分离系统，发现P1质粒的分离系统由一个顺式激活par序列和两个蛋白ParA和，ParB的基因构成，其中一个蛋白同par位点结合。

关于par位点是怎样增强质粒适当分离的机制有两种模型，按照这两种模型，细菌的膜具有真核生物有丝分裂纺锤体的功能，在细胞分裂之前将质粒分开。par位点是质粒同质膜结合的区域，在细胞分裂时，由于膜的生长，质粒的两个拷贝就被拉到两个子细胞中。

这两个模型对于细胞分裂时，质粒同质膜的结合是怎样保证每个细胞至少得到一个质粒的解释是不同的。

模型．A：par位点同细菌质膜的一个假定位点结合。在这个模型中，每一种质粒都有它自己独特的同质膜结合的位点。当细胞生长时，位点也加倍，每一个质粒拷贝结合一个位点。由于这些位点随着细胞分裂而分开，每一个质粒拷贝将分配到一个子细胞。这就保证了质粒不会丢失。该模型要解决的问题是质膜上必须有许多独特的位点以供不同的质粒拷贝结合，这似乎不太可能。

将模型A稍微改动一下，就可以满足质粒分离所需的位点。如果我们假定质粒结合的位点不在质膜而是在细菌的染色体上就可以了。染色体上有很多的位点，并且随着DNA 的复制而加倍，这些位点可供质粒结合。剩下的唯一问题就是在质膜上有同染色体结合的独特位点，这样，质粒将随着染色体的分离而分离。

模型B同模型A基本类似，在这个模型中，质粒的两个拷贝在同质膜结合之前必须通过它们的par位点相互配对。然后这两个质粒在细胞分裂过程中随着质膜位点的分离而分离。高拷贝数的质粒常常具有增加质粒适当分离的位点，但是这些区域并没有相同的结构，并不以相同的机制起作用。例如，质粒pSCl01的par区可以增加质粒的超螺旋，至于超螺旋的增加如何帮助质粒的适当分离是不清楚的。可能是增强了质粒分离后的迅速复制，防止了下次分裂时的丢失。

(3)质粒溺爱(plasmid addiction)

即使质粒具有分离功能，质粒也会从增殖的细胞中丢失。在一类复仇的细胞中，质粒能够编码一些杀死丢失了质粒的细胞。像F质粒、R1质粒、以及P1噬菌体都有这种功能。

这些质粒编码一些毒性蛋白质，这些蛋白质一旦表达就会杀死细胞。根据质粒的来源不同，毒性蛋白质可通过各种方式杀死细胞。

例如，质粒的毒性蛋白Ccd,通过改变DNA螺旋酶来杀死细胞，由于螺旋酶的改编，引起了双螺旋DNA的断裂。质粒R1的杀手蛋白Hok,破坏细菌细胞质膜的功能，引起细胞活力的丧失。为什么毒性蛋白仅仅是在细胞丢失了质粒之后立即杀死细胞?当细胞含有这种质粒时，沉溺系统的蛋白质或RNA可作为一种解毒药，既能阻止毒蛋白的合成，又能同毒蛋白结合并阻止毒蛋白起作用。

然而，这些其他基因的产物要比毒性蛋白不稳定得多，所以它们会很快失活。如果一个细胞丢失了质粒，既没有毒性蛋白也没有解毒剂的合成。但是，由于解毒剂更不稳定，当解毒剂失活后，毒性蛋白就可以起杀伤作用。这些系统使细胞对质粒产生溺爱，并防止细胞丢失质粒。

现代分子生物学试题

现代分子生物学试题邯郸学院12生技 Chapter 3 生物信息的传递——从DNA到RNA 一、名词解释： 1、Transcription 2、Coding strand (Sense strand) 3、Intron 4、RNA editing 5、Messenger RNA (mRNA) 二、判断正误： 1、基因表达包括转录和翻译两个阶段 2、mRNA是以有义链为模板进行转录的 3、转录起始就是RNA链上第一个核苷酸键的产生 4、σ因子的作用是负责模板链的选择和转录的起始 5、聚合酶可以横跨40个碱基对，所以解旋的DNA区域也是40个碱基对 6、流产式起始是合成并释放2~9个核苷酸的短RNA转录物 7、启动子是有义链上结构基因5’端上游区的DNA序列 8、大肠杆菌基因中存在-10bp处的TTCACA区 9、-35区是指5’到3’方向-35区最后一个碱基离+1碱基为35个bp 10、真核基因几乎都是单顺反子三、单选： 1、_______号帽子存在于所有帽子结构中 A、0号 B、1号 C、2号 D、以上全不是 2、在对启动子识别中起关键作用的是_______ A、α亚基 B、β亚基 C、σ因子 D、β’亚基 3、RNA聚合酶中提供催化部位的是_______ A、α+α B、α+β C、α+β’ D、β+β’ 4、_______是细胞内更新率极高不稳定的RNA A、mRNA B、rRNA C、tRNA D、snRNA 5、mRNA由细胞核进入细胞质所必需的形式是_______ A、5’端帽子 B、多聚腺苷酸尾 C、ρ因子 D、以上都不是 6、真核生物RNA聚合酶II所形成的转录起始复合物不包括_______ A、TBP B、TFIIA C、TFIIC D、TFIID 7、真核生物转录的所在空间是_______ A、细胞质 B、细胞核 C、核孔 D、线粒体 8、ρ因子本质上是一种_______ A、核苷酸 B、蛋白质 C、多糖类 D、碱基

分子生物学试题及答案

分子生物学试题及答案一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。

除了5’ 3’外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。二、填空 1． DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（ IF-2 ）和（IF-3 ）。4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。 5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（ DNA重组技术）三部分。 7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（ hnRNA在转变为mRNA 的过程中经过剪接，）、

现代分子生物学复习题

末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴。 9.蛋白质多亚基形式的优点是亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法、可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响、活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭。 10.质粒DNA具有三种不同的构型分别是： SC构型、 oc 构型、 L构型。在电泳中最前面的是SC构型。 11.哺乳类RNA聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件TATA、GC、 CAAT所对应的反式作用蛋白因子分别是TFIID 、SP-1 和 CTF/NF1 。 12.与DNA结合的转录因子大多以二聚体形式起作用，转录因子与DNA结合的功能域常见有以下几种螺旋-转角-螺旋、锌指模体、碱性-亮氨酸拉链模体。 13.转基因动物常用的方法有：逆转录病毒感染法、DNA 显微注射法、胚胎干细胞法。 14.RNA聚合酶Ⅱ的基本转录因子有、TFⅡ-A、TFⅡ-B、 TFII-D、TFⅡ-E他们的结合顺序是： D、A、B、E 。其中TFII-D的功能是与TATA盒结合。 15.酵母DNA按摩尔计含有32.8%的T,则A为_32.8%_,G 为_17.2%_和C为_17.2%__。 16.操纵子包括_调控基因、调控蛋白结合位点和结构基因。 17.DNA合成仪合成DNA片段时，用的原料是模板DNA 东隅已逝 3 桑榆非晚！

考研普通生物学考研朱玉贤《现代分子生物学》考研真题

考研普通生物学考研朱玉贤《现代分子生物学》考研真题第一部分考研真题精选一、选择题 1DNA模板链为5′-ATTCAG-3′，其转录产物是（）。[浙江海洋大学2019研] A．5′-GACTTA-3′ B．5′-CUGAAU-3′ C．5′-UAAGUC-3′ D．5′-CTGAAT-3′ 【答案】B查看答案【解析】在RNA转录过程中，RNA是按5′→3′方向合成的，以DNA双链中的反义链为模板，在RNA聚合酶催化下，以4种核苷三磷酸（NTPs）为原料，根据碱基配对原则（A-U、T-A、G-C）。因此答案选B。 2DNA的变性（）。[扬州大学2019研] A．可以由低温产生 B．是磷酸二酯键的断裂 C．包括氢键的断裂 D．使DNA的吸光度降低【答案】C查看答案【解析】DNA的变性是指当DNA溶液温度接近沸点或者pH较高时，DNA 双链的氢键断裂，最后完全变成单链的过程。DNA的复性是指热变性的DNA经缓慢冷却，从单链恢复成双链的过程。A项，DNA的变性是由于高温引起的，故A

项错误；B项，DNA的变性是核酸双螺旋碱基对的氢键断裂，但不涉及其一级结构的改变，故B项错误；D项，当DNA溶液温度升高到接近水的沸点时（DNA变性），260nm的吸光度明显增加，这种现象称为增色效应，故D项错误。 3密码GGC的对应反密码子是（）。[浙江海洋大学2019研] A．GCC B．CCG C．CCC D．CGC 【答案】B查看答案【解析】根据碱基互补配对原则，G与C相互配对。因此答案选B。 4原核生物启动序列－10区的共有序列称为（）。[扬州大学2019研] A．TATA盒 B．CAAT盒 C．Pribnow盒 D．GC盒【答案】A查看答案【解析】绝大部分启动子都存在两段共同序列：位于－10bp处的TATA区和－35bp处的TTGACA区。因此答案选A。 5．色氨酸生物合成操纵子为下列（）方面的例子。[浙江海洋大学2019研] A．正调控可抑制操纵子 B．负调控可诱导操纵子 C．正调控可诱导操纵子

现代分子生物学_复习笔记

现代分子生物学复习提纲第一章绪论第一节分子生物学的基本含义及主要研究内容 1 分子生物学Molecular Biology的基本含义 ?广义的分子生物学：以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象，从分子水平阐明生命现象和生物学规律。 ?狭义的分子生物学：偏重于核酸（基因）的分子生物学，主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调控等过程，也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。 1.1 分子生物学的三大原则 1) 构成生物大分子的单体是相同的 2) 生物遗传信息表达的中心法则相同 3) 生物大分子单体的排列（核苷酸、氨基酸）的不同 1.3 分子生物学的研究内容 ●DNA重组技术（基因工程） ●基因的表达调控 ●生物大分子的结构和功能研究(结构分子生物学） ●基因组、功能基因组与生物信息学研究第二节分子生物学发展简史 1 准备和酝酿阶段 ?时间：19世纪后期到20世纪50年代初。 ?确定了生物遗传的物质基础是DNA。 DNA是遗传物质的证明实验一：肺炎双球菌转化实验 DNA是遗传物质的证明实验二：噬菌体感染大肠杆菌实验 RNA也是重要的遗传物质-----烟草花叶病毒的感染和繁殖过程 2 建立和发展阶段 ?1953年Watson和Crick的DNA双螺旋结构模型作为现代分子生物学诞生的里程碑。 ?主要进展包括： ?遗传信息传递中心法则的建立 3 发展阶段 ?基因工程技术作为新的里程碑，标志着人类深入认识生命本质并能动改造生命的新时期开始。 ? 第三节分子生物学与其他学科的关系思考 ?证明DNA是遗传物质的实验有哪些？ ?分子生物学的主要研究内容。 ?列举5～10位获诺贝尔奖的科学家，简要说明其贡献。第二章染色体与DNA

现代分子生物学总结题库

第一章、基因的结构和功能实体及基因组 1、基因定义基因（遗传因子）是遗传的物质基础，是DNA（脱氧核糖核酸）分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称，携带有遗传信息的DNA序列，是具有遗传效应的DNA分子片段，是控制性状的基本遗传单位，通过指导蛋白质的合成来表达自己所携带的遗传信息，从而控制生物个体的性状表现。 2、DNA修复 DNA修复（DNA repairing）是细胞对DNA受损伤后的一种反应，这种反应可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能；但有时并非能完全消除DNA的损伤，只是使细胞能够耐受这DNA的损伤而能继续生存。也许这未能完全修复而存留下来的损伤会在适合的条件下显示出来（如细胞的癌变等），但如果细胞不具备这修复功能，就无法对付经常在发生的DNA损伤事件，就不能生存。对不同的DNA损伤，细胞可以有不同的修复反应。3、DNA损伤 DNA损伤是复制过程中发生的DNA核苷酸序列永久性改变，并导致遗传特征改变的现象。情况分为：substitutation （替换）deletion （删除）insertion （插入）exon skipping （外显子跳跃）。 DNA损伤的改变类型：a、点突变：指DNA上单一碱基的变异。嘌呤替代嘌呤（A与G之间的相互替代）、嘧啶替代嘧啶（C与T之间的替代）称为转换（transition）；嘌呤变嘧啶或嘧啶变嘌呤则称为颠换（transvertion）。b、缺失：指DNA链上一个或一段核苷酸的消失。c、插入：指一个或一段核苷酸插入到DNA链中。在为蛋白质编码的序列中如缺失及插入的核苷酸数不是3的整倍数，则发生读框移动（reading frame shift），使其后所译读的氨基酸序列全部混乱，称为移码突变（frame-shift mutaion）。d、倒位或转位：（transposition）指DNA链重组使其中一段核苷酸链方向倒置、或从一处迁移到另一处。 e、双链断裂：对单倍体细胞一个双链断裂就是致死性事件。 4、同源重组同源重组，（Homologus Recombination)是指发生在姐妹染色单体（sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。同源重组需要一系列的蛋白质催化，如原核生物细胞内的RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR等；以及真核生物细胞内的Rad51、Mre11-Rad50等等。同源重组反应通常根据交叉分子或holiday 结构（Holiday Juncture Structure) 的形成和拆分分为三个阶段，即前联会体阶段、联会体形成和Holiday 结构的拆分。 a、基因敲除基因敲除（geneknockout），是指对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将该基因去除，或用其它顺序相近基因取代，然后从整体观察实验动物，推测相应基因的功能。这与早期生理学研究中常用的切除部分-观察整体-推测功能的三部曲思想相似。基因敲除除可中止某一基因的表达外，还包括引入新基因及引入定点突变。既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。 b、因转移法同源重组(homologousrecombination)是将外源基因定位导人受体细胞染色体上的方法，因为在该座位有与导人基因同源的序列，通过单一或双交换，新基因片段可替换有缺陷的基因片段，达到修正缺陷基因的目的。位点特异性重组是发生在两条DNA链特异位点上的重组，重组的发生需一段同源序列即特异性位点(又称附着点；attachmentsite，att)和位点特异性的蛋白因子即重组酶参与催化。重组酶仅能催化特异性位点间的重组，因而重组具有特异性和高度保守性。

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现代分子生物学复习题 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】

现代分子生物学一.填空题的物理图谱是DNA分子的限制性内切酶酶解片段的排列顺序。 2.核酶按底物可划分为自体催化、异体催化两种类型。 3.原核生物中有三种起始因子分别是IF-1、 IF-2 和IF-3 。 4.蛋白质的跨膜需要信号肽的引导，蛋白伴侣的作用是辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质。 5.真核生物启动子中的元件通常可以分为两种：核心启动子元件和上游启动子元件。 6.分子生物学的研究内容主要包含结构分子生物学、基因表达与调控、DNA重组技术三部分。 7.证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是肺炎球菌感染小鼠、T2噬菌体感染大肠杆菌这两个实验中主要的论点证据是：生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能。与mRNA之间的差别主要有两点： hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接、 mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴。 9.蛋白质多亚基形式的优点是亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法、可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响、活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭。 10.质粒DNA具有三种不同的构型分别是： SC构型、 oc构型、 L构型。在电泳中最前面的是SC构型。 11.哺乳类RNA聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件TATA、GC、CAAT所对应的反式作用蛋白因子分别是TFIID 、SP-1 和 CTF/NF1 。 12.与DNA结合的转录因子大多以二聚体形式起作用，转录因子与DNA结合的功能域常见有以下几种螺旋-转角-螺旋、锌指模体、碱性-亮氨酸拉链模体。 13.转基因动物常用的方法有：逆转录病毒感染法、DNA显微注射法、胚胎干细胞法。聚合酶Ⅱ的基本转录因子有、TFⅡ-A、TFⅡ-B、TFII-D、TFⅡ-E他们的结合顺序是： D、A、 B、E 。其中TFII-D的功能是与TATA盒结合。 15.酵母DNA按摩尔计含有%的T,则A为%_,G为%_和C为%__。 16.操纵子包括_调控基因、调控蛋白结合位点和结构基因。合成仪合成DNA片段时，用的原料是模板DNA‘TAQ 、引物、缓冲液、dNTP。 18.在琼脂糖电泳中，DNA会向正极移动。 19.染色体包括蛋白质、染色体两大部分。 20.环状DNA双链的复制主要可分为θ形、滚环形、D-环形三种类型。 21.转录的基本过程包括转录的起始、延伸、终止。 22.半乳糖对细菌有双重作用；一方面可以作为碳源供细胞生长；另一方面它又是细胞壁的成分。所以需要一个不依赖于cAMP—CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP—CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从 S2 开始，无G 时转录从 S1 开始。重组技术也称为基因克隆或分子克隆。最终目的是把一个生物体中的遗传信息DNA转入另一个生物体。典型的DNA重组实验通常包含以下几个步骤：

医学分子生物学试题答案

名词解释：基因是核酸中贮存遗传信息的遗传单位，是贮存有功能的蛋白质多肽链或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。基因组（gencme）：细胞或生物中，一套完整单倍体遗传物质的总和（包括一种生物所需的全套基因及间隔序列）称为基因组。基因组的功能是贮存和表达遗传信息。 SD序列(Shine-Dalgarno sequence,SD sequence) 是mRNA能在细菌核糖体上产生有效结合和转译所需要的序列。SD序列与16S rRNA的3’末端碱基(AUUCCUCCAC-UAG-5’)互补，以控制转译的起始分子克隆：克隆（clone）：是指单细胞纯系无性繁殖，现代概念是将实验得到的人们所需的微量基因结构，引入适当的宿主细胞中去，在合适的生理环境中进行无性繁殖，从而利用宿主的生理机制繁衍人们所需要的基因结构，并进行表达。由于整个操作在分子水平上进行，所以称为分子克隆（molecular cloning）。动物克隆(Animal cloning)就是不经过受精过程而获得动物新个体的方法. 基因诊断：就是利用现代分子生物学和分子遗传学的技术方法，直接检测基因结构（DNA水平）及其表达水平（RNA水平）是否正常，从而对疾病做出诊断的方法。基因治疗就是将有功能的基因转移到病人的细胞中以纠正或置换致病基因的一种治疗方法，是指有功能的目的基因导入靶细胞后有的可与宿主细胞内的基因发生整合，成为宿主细胞遗传物质的一部分，目的基因的表达产物起到对疾病的治疗作用。转基因动物就是把外源性目的基因导入动物的受精卵或其囊胚细胞中，并在细胞基因组中稳定整合，再将合格的重组受精卵或囊胚细胞筛选出来，采用借腹怀孕法寄养在雌性动物（foster mother）的子宫内，使之发育成具有表达目的基因的胚胎动物，并能传给下一代。这样，生育的动物为转基因动物。探针：在核酸杂交分析过程中，常将已知顺序的核酸片段用放射性同位素或生物素进行标记。这种带有一定标记的已知顺序的核酸片段称为探针。限制性核酸内切酶：限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）是一类专门切割DNA 的酶，它们能特异结合一段被称为限制酶识别顺序的特殊DNA序列并切割dsDNA。载体：要把一个有用的基因（目的基因-研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。限制性片段长度多肽性分析(RFLP):DNA片段长度多态性分析（restriction fragment length polymer-phism,RFLP）基因突变导致的基因碱基组成或(和)顺序发生改变,会在基因结构中产生新的限制性内切酶位点或使原有的位点消失. 用限制酶对不同个体基因组进行消化时，其电泳条带的数目和大小就会产生改变，根据这些改变可以判断出突变是否存在。简答题： 1.蛋白质的生物合成过程中的成分参与，参与因子，作用？ mRNA是合成蛋白质的“蓝图（或模板）” tRNA是原料氨基酸的“搬运工” rRNA与多种蛋白质结合成核糖体作为合成多肽链的装配机（操作台） tRNA mRNA是合成蛋白质的蓝图，核糖体是合成蛋白质的工厂，但是，合成蛋白质的原料——20种氨基酸与mRNA的碱基之间缺乏特殊的亲和力。因此，需要转运RNA把氨基酸搬运到核糖体中的mRNA上 rRNA 核糖体RNA（rRNA）和蛋白质共同组成的复合体就是核糖体，核糖体是蛋白质合成的场所。

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分子生物学试题（一）一.填空题(,每题1分,共20分) 一.填空题(每题选一个最佳答案,每题1分,共20分) 1. DNA的物理图谱是DNA分子的（）片段的排列顺序。 2. 核酶按底物可划分为（）、（）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（）、（）和（）。 4．蛋白质的跨膜需要（）的引导，蛋白伴侣的作用是（）。5．真核生物启动子中的元件通常可以分为两种：（）和（）。6．分子生物学的研究内容主要包含（）、（）、（）三部分。 7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（）、（）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（）、（）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（）、（）、（）。 10.蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11.半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP-CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP-CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（S2 ）开始，无G时转录从（S1 ）开始。 12．DNA重组技术也称为（基因克隆）或（分子克隆）。最终目的是（把一个生物体中的遗传信息DNA转入另一个生物体）。典型的DNA重组实验通常包含以下几个步骤： ①提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一DNA分子上（克隆载体），形一个新的重组DNA分子。 ②将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。 ③对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。 ④对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。 13、质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（严紧型质粒），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为（松弛型质粒）。 14．PCR的反应体系要具有以下条件： a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的 DNA引物（约20个碱基左右）。 b、具有热稳定性的酶如：TagDNA聚合酶。 c、dNTP d、作为模板的目的DNA序列 15．PCR的基本反应过程包括：（变性）、（退火）、（延伸）三个阶段。 16、转基因动物的基本过程通常包括： ①将克隆的外源基因导入到一个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中； ②接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫；

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一名词解释 1缺口（gap）：DNA分子中，一条链上失去一段单链，称为gap。切口（nick）：DNA分子中，一条链上失去一个磷酸二酯键称为nick。 DNA hellicase (DNA解链酶)：也叫DNA解螺旋酶，其通过水解ATP获得能量来解开双链DNA，每解开一对碱基，需水解2分子A TP→ADP+Pi(磷酸盐) 拓扑异构酶：细胞内一类催化DNA拓扑异构体（topoisomerase）相互转化的酶，其为topoisomerase，其与DNA双条链形成共价结合的Pr-DNA中间体，在DNA 双链骨架的3’，5’-磷酸二酯键处造成暂时的切口，使DNA的多聚核苷酸链得以穿越，通过改变DNA的连接数，而改变的分子拓扑结构。 3 无义突变(nonsense mutation)：DNA序列三联体密码子发生突变，导致AA密码子变为终止密码子，称为无义突变，其导致翻译提前结束而常使产物失活错义突变（missense mutation）：DNA序列三联体密码子发生突变导致pr中原来的AA被另一种AA取代。 4 转座子：是存在于染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位。 DNA的转座：或称移位，是由可移位因子介导的遗传物质重排现象。 5转录单位：RNA链的转录起始于DNA模板的一个特定起点（启动子），并在一终点处（终止子）终止，此转录区域称为转录单位。一个转录单位可是一个基因，也可是多个基因。转录因子：RNA聚合酶起始转录需要的辅助因子称为转录因子。其作用或是认别DNA的顺式作用位点，或是识别其他因子，或是识别RNA聚合酶。 6 复制子：DNA的复制单位。终止子（Terminator）：模板DNA上提供转录停止信号得DNA序列。 7. 单顺反子mRNA：编码1条多肽链的mRNA RNA编辑：是某些RNA，特别是mRNA的一种加工方式，其改变RNA的序列，而导致DNA所编辑的遗传信息改变。 8 起始tRNA：有一类能特异的识别MRNA摸板上起始密码子的tRNA 多顺反子mRNA：编码多条多肽链的mRNA。 9 RNA的再编码（RNA recoding）:mRNA在某些情况下不是以固定的方式被翻译，而可以改变原来的编码信息，以不同的方式进行翻译，科学上把RNA编码和读码方式的改变称为…… 同工tRNA：几种搬运相同AA的tRNA成为同工tRNA。 10通读（readthrough）：有些纵止子的作用被特异的因子所阻止，使酶得以越过终止子继续转录，这种现象称为通读 10 翻译跳跃(translation jumping)：翻译中读码框架发生位移，核糖体跳过一个碱基或一大段 mRNA（如50nt）后读继翻译。这一过程称tranlational jumping 1基因家族：真核生物基因中许多来源相同、结构相近、功能相关的基因按功能成套组合，这样的一组基因称为基因家族，其编码另一个蛋白质家族。 2拓扑异构酶：细胞内一类催化DNA拓扑异构体（topoisomerase）相互转化的酶，其为topoisomerase，其与DNA双条链形成共价结合的Pr-DNA中间体，在DNA双链骨架的3’，5’-磷酸二酯键处造成暂时的切口，使DNA的多聚核苷酸链得以穿越，通过改变DNA的连接数，而改变的分子拓扑结构。 3基因突变：指DNA的碱基顺序发生突然而永久性地变化，从而影响DNA的复制，并使DNA 的转录和翻译也跟着改变，因而表现出异常地遗传特征。 4 DNA的转座：或称移位，是由可移位因子介导的遗传物质重排现象。 5信号肽：在多肽链合成过程中，先合成的一段多肽序列，该序列引导后合成的多肽链进入

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第2章染色体与DNA 名词解释原癌基因：细胞与细胞增殖相关的正常基因，是维持机体正常生命活动所必须的，在进化上高等保守。当原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时，使细胞过度增殖，从而形成肿瘤。半保留复制：以亲代DNA双链为模板以碱基互补方式合成子代DNA，这样新形成的子代DNA 中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式叫半保留复制。填空题 3.在聚合酶链反应中，除了需要模板DNA外，还需加入引物、DNA聚合酶、dNTP和镁离子。 4.引起DNA损伤的因素有自发因素、物理因素、化学因素。 5.DNA复制时与DNA解链有关的酶和蛋白质有拓扑异构酶Ⅱ、解螺旋酶、单链DNA结合蛋白。 6.参与DNA切除修复的酶有DNA聚合酶Ⅰ、DNA连接酶、特异的核酸切酶。 7.在真核生物中DNA复制的主要酶是DNA聚合酶δ。在原核生物中是DNA聚合酶Ⅲ。 8.端粒酶是端粒酶是含一段RNA的逆转录酶。 9.DNA的修复方式有错配修复、碱基切除修复、核苷酸切除修复、DNA的直接修复。简述DNA复制的过程 DNA的复制过程可被分为3个阶段，即复制的起始、延伸和终止。每个DNA复制的独立单元主要包括复制起始位点和终止位点。 DNA复制的起始包括预引发和引发两个阶段。在预引发阶段，DNA解旋解链，形成复制叉，引发体组装；在引发阶段，在引发酶的催化下以DNA链为模板合成一段短的RNA引物。复制时DNA链的延伸由DNA聚合酶催化，以亲代DNA链为模板，引发体移动，从5′→3′方向聚合子代DNA链。当子链延伸到达终止位点是，DNA复制就终止了，切除RNA引物，填补缺口，在DNA连接酶的催化下将相邻的冈崎片段连接起来形成完整的DNA长链。试述真原核生物的DNA复制的特点的不同之处 ①真核生物染色体有多个复制起点，多复制眼，呈双向复制，多复制子。原核生物的染色体只有一个复制起点，单复制子也呈双向复制。 ②真核生物冈崎片段长约200bp比原核生物略短。真核生物DNA复制速度比原核慢，速度为1000～3000bp/min(仅为原核生物的1/20～1/50）。 ③真核生物复制的终止在端粒处，原核生物的复制叉相遇时即终止。 ④真核生物染色体在全部复制完之前起点不再重新开始复制；而在快速生长的原核生物染色体DNA复制中，起点可以连续发动复制。真核生物快速生长时，往往采用更多的复制起点。 ⑤真核生物有多种DNA聚合酶，DNA聚合酶δ是真正的复制酶，在PCNA存在下有持续的合成能力。PCNA称为增殖细胞核抗原，相当于大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ的β-夹子，RFC蛋白相当于夹子装配器。原核生物的DNA聚合酶有三种DNA聚合酶ⅢDNA的真正复制酶：多亚基酶，含十种亚基，该酶DNA合成的持续能力强。 ⑥真核生物线性染色体两端有端粒结构，它是由许多成串的重短复序列组成，端粒功能是稳定染色体末段结构，防止染色体间的末端连接，并可补偿滞后链5’-末段在消除RNA 引物后造成的空缺，使染色体保持一定长度。端粒酶是含一段RNA的逆转录酶。 ⑦RPA：真核生物的单链结合蛋白；RNaseH1和MF-1切除RNA引物，DNA聚合酶ε填补缺口。简述半保留复制的生物学意义

分子生物学习题与答案

第0章绪论一、名词解释 1.分子生物学 2.单克隆抗体二、填空 1．分子生物学的研究内容主要包含（）、（）、（）三部分。三、是非题 1、20世纪60年代，Nirenberg建立了大肠杆菌无细胞蛋白合成体系。研究结果发现poly(U)指导了多聚苯丙氨酸的合成，poly(G)指导甘氨酸的合成。（×）四、简答题 1. 分子生物学的概念是什么？ 2. 你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？ 3. 分子生物学研究内容有哪些方面？ 4. 分子生物学发展前景如何？ 5. 人类基因组计划完成的社会意义和科学意义是什么？ 6．简述分子生物学发展史中的三大理论发现和三大技术发明。 7. 简述分子生物学的发展历程。 8. 二十一世纪生物学的新热点及领域是什么？ 9. 21世纪是生命科学的世纪。20世纪后叶分子生物学的突破性成就，使生命科学在自然科学中的位置起了革命性的变化。试阐述分子生物学研究领域的三大基本原则，三大支撑学科和研究的三大主要领域？答案：一、名词解释 1.分子生物学：分子生物学就是研究生物大分子之间相互关系和作用的一门学科，而生物大分子主要是指基因和蛋白质两大类；分子生物学以遗传学、生物化学、细胞生物学等学科为基础，从分子水平上对生物体的多种生命现象进行研究。

2.单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。二、填空 1.结构分子生物学，基因表达与调控，DNA重组技术三、是非题四、简答题 1. 分子生物学的概念是什么？答案：有人把它定义得很广：从分子的形式来研究生物现象的学科。但是这个定义使分子生物学难以和生物化学区分开来。另一个定义要严格一些，因此更加有用：从分子水平来研究基因结构和功能。从分子角度来解释基因的结构和活性是本书的主要内容。 2. 你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？分子生物学是从分子水平研究生命本质的一门新兴边缘学科，它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象，是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。狭义：偏重于核酸的分子生物学，主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调节控制等过程，其中也涉及与这些过程有关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会，也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。所谓在分子水平上研究生命的本质主要是指对遗传、生殖、生长和发育等生命基本特征的分子机理的阐明，从而为利用和改造生物奠定理论基础和提供新的手段。这里的分子水平指的是那些携带遗传信息的核酸和在遗传信息传递及细胞内、细胞间通讯过程中发挥着重要作用的蛋白质等生物大分子。这些生物大分子均具有较大的分子量，由简单的小分子核苷酸或氨基酸排列组合以蕴藏各种信息，并且具有复杂的空间结构以形成精确的相互作用系统，由此构成生物的多样化和生物个体精确的生长发育和代谢调节控制系统。阐明这些复杂的结构及结构与功能的关系是分子生物学的主要任务。 3. 分子生物学主要包含以下三部分研究内容：A.核酸的分子生物学，核酸的分子生物学研究核酸的结构及其功能。由于核酸的主要作用是携带和传递遗传信息，因此分子遗传学（moleculargenetics）是其主要组成部分。由于50年代以来

现代分子生物学试题及答案汇总-共32页

现代分子生物学试题及答案汇总-共32页 https://www.docsj.com/doc/9c5015232.html,work Information Technology Company.2020YEAR

现代分子生物学习题及答案一、填空题 1．基因工程是70年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2．基因工程的两个基本特点是： (1)分子水平上的操作，(2)细胞水平上的表达 3．基因克隆中三个基本要点是：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择 4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的限制性酶切图谱。5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自属名的第一个字母，第二、三两个字母取自_种名的前两个字母，第四个字母则用株名表示。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积等。 7．第一个分离的限制性内切核酸酶是EcoK；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_ EcoRl。 8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是GGCC，它们属于异源同工酶。 9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_枯草杆菌蛋白酶切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性： (1) 5'-3'合成酶的活性； (2) 3'-5'外切核酸酶的活性。 10．为了防止DNA的自身环化，可用碱性磷酸酶去双链DNA_5’端的磷酸基团。 11．EGTA是_Ca2+_离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_ 5'-3'合成酶的活性，而没有3'-5'外切酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用DNA聚合酶I的__5'一3'外切核酸酶和5'一3'合成酶的作用。

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1．SD序列：起始密码子AUG上游5-10个核苷酸处，有一段可与核糖体16S rRNA配对结合的、富含嘌呤的3-9个核苷酸的共同序列，一般为AGGA(也有说是AGGAGG)，此序列称 SD序列(Shine-Dalgarno sequence) 2．顺式作用元件：cis-acting element是指对基因表达有调控活性的DNA序列，其活性只影响与其自身同处于一个DNA 分子上的基因 3．核小体nucleosome构成真核染色质的一种重复珠状结构，是由大约200 bp的DNA区段和多个组蛋白组成的大分子复合体。其中大约146 bp的DNA区段与八聚体(H2A、H2B、H3和H4各两分子)的组蛋白组成核小体的核心颗粒，核心颗粒间通过一个组蛋白H1的连接区DNA彼此相连。基因产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核苷酸序列。冈崎片段Okazaki fragment 在DNA不连续复制过程中，沿着后随链的模板链合成的新DNA片段，模板链DNA双链中其序列与编码链或信使核糖核酸互补的那条链。在DNA复制或转录过程中，作为模板指导新核苷酸链合成的亲代核苷酸链。基因家族真核生物的基因组中有很多来源相同、结构相似、功能相关的基因，将这些基因称为基因家族蛋白质内含子其DNA序列与外显子一起转录和翻译，产生一条多肽链，然后从肽链中切除与内含子对应的aa序列，再把与外显子对应的氨基酸序列连接起来，成为有功能的蛋白质。翻译内含子mRNA中存在与内含子对应的核苷酸序列，在翻译过程中这一序列被“跳跃”过去，因此产生的多肽链不含有内含子对应的氨基酸序列 Northern blot过电泳的方法将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因互补配对的探针杂交来检测目的片段 Sorthern blot 蛋白激酶C protein kinase丝氨酸/苏氨酸激酶的家族成员。在多种免疫受体介导的信号转导中可被二酰甘油和钙离子所激活。原癌基因proto-oncogene调控细胞生长和增殖的正常细胞基因。突变后转化成为致癌的癌基因。多顺反子mRNA两个以上相关基因串在一起转录所得到的信使核糖核酸(mRNA)。多顺反子mRNA一般可同步翻译产生功能相关的多个蛋白质或酶。 Alternative splicing在高等真核生物中，内含子通常是有序或组成型地从mRNA前体分子中被剪接，然而，在个体发育或细胞分化时，可以有选择地越过某些外显子或某个剪接点进行变位剪接，产生出组织或发育阶段特异性mRNA，成为内含子的可变剪接。端粒酶端粒酶是一种含RNA链的逆转录酶，通过识别并结合于富含G的端粒末端，以所含的RNA为模板，逆转录合成端粒。 X染色体失活人和鼠的Xist（ Xi-specific transcript）基因只在失活的X染色体上表达，编码一功能性RNA分子，此分子能与Xic位点相互作用，引起后者构象变化，更容易与各种蛋白因子相结合，最终导致X染色体失活锌指结构指的是在很多蛋白中存在的一类具有指状结构的结构域，这些具有锌指结构的蛋白大多都是与基因表达的调控有关的功能蛋白由一个含有大约30个氨基酸的环和一个与环上的4个Cys或2个Cys和2个His配位的Zn构成，反式作用因子trans-acting factor是指能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的蛋白质。染色质chromatin chromosome 指间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成的线性复合结构, 是间期细胞遗传物质存在的形式。所谓C值，通常是指一种生物单倍体基因组DNA的总量。一般高等生物的C值均大于低等生物,但某些植物或两栖动物的C值比人高出几十倍,这种C值与进化复杂性不一致的现象称为C值反常现象或称为C值矛盾（C-value paradox）断裂基因或不连续基因（interrupted/discontinuous genes）所谓断裂基因就是基因的编码序列在DNA分子上是不连续的，为不编码的序列所隔开。编码的序列称为外显子（exon），不编码的序列称为内含子（intron）。寡核苷酸（oligonucleotide）：一般是指二至十个核苷酸残基以磷酸二酯键连接而成的线性多核苷酸片段。回文序列是指沿同一方向(如5’→3’)序列相同的结构，即碱基序列的反向重复(inverted repeats) 核酸的变性：是指核酸双螺旋区的氢键断裂，DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象变性的DNA在适当的条件下，两条彼此互补的DNA单链可以重新缔合形成双螺旋结构，这个过程称之为复性 DNA复制时每个子代DNA分子的一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的，这种复制方式称半保留复制

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现代分子生物学一.填空题 1.DNA的物理图谱是DNA分子的限制性内切酶酶解片段的排列顺序。 2.核酶按底物可划分为自体催化、异体催化两种类型。 3.原核生物中有三种起始因子分别是IF-1、 IF-2 和IF-3 。 4.蛋白质的跨膜需要信号肽的引导，蛋白伴侣的作用是辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质。 5.真核生物启动子中的元件通常可以分为两种：核心启动子元件和上游启动子元件。 6.分子生物学的研究内容主要包含结构分子生物学、基因表达与调控、DNA重组技术三部分。 7.证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是肺炎球菌感染小鼠、T2噬菌体感染大肠杆菌这两个实验中主要的论点证据是：生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能。 8.hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点： hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接、 mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴。 9.蛋白质多亚基形式的优点是亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法、可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响、活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭。 10.质粒DNA具有三种不同的构型分别是： SC构型、 oc构型、 L构型。在电泳中最前面的是SC构型。 11.哺乳类RNA聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件TATA、GC、CAAT所对应的反式作用蛋白因子分别是TFIID 、SP-1 和 CTF/NF1 。 12.与DNA结合的转录因子大多以二聚体形式起作用，转录因子与DNA结合的功能域常见有以下几种螺旋-转角-螺旋、锌指模体、碱性-亮氨酸拉链模体。 13.转基因动物常用的方法有：逆转录病毒感染法、DNA显微注射法、胚胎干细胞法。 14.RNA聚合酶Ⅱ的基本转录因子有、TFⅡ-A、TFⅡ-B、TFII-D、TFⅡ-E他们的结合顺序是： D、 A、B、E 。其中TFII-D的功能是与TATA盒结合。 15.酵母DNA按摩尔计含有32.8%的T,则A为_32.8%_,G为_17.2%_和C为_17.2%__。 16.操纵子包括_调控基因、调控蛋白结合位点和结构基因。 17.DNA合成仪合成DNA片段时，用的原料是模板DNA‘TAQ 、引物、缓冲液、dNTP。 18.在琼脂糖电泳中，DNA会向正极移动。 19.染色体包括蛋白质、染色体两大部分。 20.环状DNA双链的复制主要可分为θ形、滚环形、D-环形三种类型。 21.转录的基本过程包括转录的起始、延伸、终止。 22.半乳糖对细菌有双重作用；一方面可以作为碳源供细胞生长；另一方面它又是细胞壁的成分。所以需要一个不依赖于cAMP—CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP—CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从 S2 开始，无G时转录从 S1 开始。 23.DNA重组技术也称为基因克隆或分子克隆。最终目的是把一个生物体中的遗传信息DNA转入另一个生物体。典型的DNA重组实验通常包含以下几个步骤： ①提取供体生物的目的基因或称外源基因，酶接连接到另一DNA分子上克隆载体，形成一个新东隅已逝 1 桑榆非晚！

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