亲和层析名词解释

亲和层析名词解释

亲和层析是研究样品中的各组分与某些对生物大分子有专一性

吸附能力的特殊分子或离子相互作用，并利用这种相互作用选择和富集待测组分。

所谓亲和层析是根据生物大分子具有可解离或与配体结合成牢

固的结合态，因而它们与蛋白质、核酸、糖类及脂质等生物大分子形成复杂的亲和力。这些生物大分子不仅能与不同的蛋白质、核酸以及糖类等结合，而且还能与多种其他分子结合。这种结合的专一性使它在吸附分离生物大分子时比一般选择性薄层色谱更加灵敏、迅速。所以根据生物大分子的可解离性以及由此产生的不同的亲和力，在某些生物大分子上就能达到高度的分离，获得纯化的生物大分子。这是亲和层析技术应用的理论基础。

8-nm亲和层析与氨基酸、核酸的亲和层析一样，属于离子交换

层析法的一种。它是用2。 5-5。 0尼龙的电极，以连续可变的电压通过被洗脱组分，从而将它带出来的。亲和层析也可以用阴离子型缓冲溶液（如Ca(2+)， Mg(2+)等）进行，然后再用等电点沉淀或分子筛效应进行分离。在亲和层析时，要使用电极活性较低的阴离子，并要用与样品等电点接近的缓冲溶液洗脱，避免电解质引起的组分沉淀。9。 11。 12。 13。 16。

大多数氨基酸、核酸等生物大分子都有亲和性。氨基酸中的甘氨酸、丝氨酸、半胱氨酸等的羧基部分都有强亲和性，例如氨基酸的

D-COOH-COO NH2与亲和层析的AgNO3等阴离子或阳离子生成稳定的

Ag，而氨基则保持游离状态。相反，许多游离胺基酸如丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸等都具有亲和性。氨基酸中的尿素、天冬酰胺、谷酰胺等碱性氨基酸都不具有亲和性，它们的亲和性与相应的羧酸有关。游离的蛋白质多数也具有亲和性。在亲和层析时，电极活性越低，对生物大分子的亲和性越小，则洗脱时的迁移率越快，即层析的分辨率越高。蛋白质的氨基虽然能以N-NH2基形式存在，但多数只有N-NH2的形式才具有亲和性，所以通常称为弱亲和蛋白质。通常用于分离蛋白质的有氨基苯甲酸盐、咪唑啉酮、大豆苷、天冬酰胺等。各种动植物的天然蛋白质中，许多蛋白质的氨基或羧基也有亲和性。

亲和层析名词解释

亲和层析名词解释 亲和层析的基本原理是通过层析柱使吸附剂对某种物质的结合 能力增强，或者改变其分子形状使它更易于与其他组分进行亲和层析。简言之就是把组分放在亲和层析柱上，让吸附剂对某个组分的吸附作用增强，因此减弱或避免了它对其他组分的吸附作用。 亲和层析技术具有一些特殊性：①亲和层析反应体系属于多组 分反应体系，具有相当大的范围可以选择；②利用亲和层析方法可 以将含量低的同类型物质，甚至许多非亲和性组分结合在一起；③ 由于亲和层析不但具有显著的选择性，而且还能同时对两种或两种以上的不同物质进行层析，因此对这类化合物的分离和鉴定具有独特的优越性；④对混合物中不同类型的化合物都能进行层析，即使物质 间的亲和性很差，如异构体之间也能被分离。亲和层析技术已经广泛地用于天然产物化学成分的分离和鉴定、药物分子的筛选和结构改造、环境污染物的检测、生物活性物质的研究以及疾病的诊断等领域。目前，该技术已经成功地应用于维生素A、维生素E、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素C、蛋氨酸、生物碱、三尖杉酯碱、芦荟 大黄素、葛根素、万寿菊素、番茄红素、菠菜素、辣椒素、藏红花素、皂苷元、蛋白质、酶、雌性激素、黄酮类化合物、动物激素、血清和细胞培养液中多种微量元素等物质的分离和鉴定。在植物化学、药学、分子生物学、生命科学等领域，亲和层析方法也得到了广泛应用。自1960年第一次用亲和层析方法对一些水果蔬菜和草药中的几十种成 分进行了分离后，亲和层析方法就受到各国科学家的重视，并获得了

飞速发展。亲和层析是基于极性分子吸附剂上的疏水部分和亲和性化合物中的亲水部分互相吸引而实现的。不同的亲和层析方法常采用不同的吸附剂，如水合物(或疏水性吸附剂)和氧化物(或亲水性吸附剂)。根据吸附剂与待分离化合物的亲和程度，常用四级亲和度(级别越高 说明与化合物的亲和性越强)：(1)较弱亲和，用氧化物吸附剂；(2) 中等亲和，用水合物吸附剂；(3)较强亲和，用亲水性吸附剂；(4) 极强亲和，用强水合物吸附剂。目前广泛应用的吸附剂主要有氧化铝、硅胶、蒙脱土、沸石、分子筛等。一般认为亲和层析法适合分离脂溶性物质和水溶性物质。

亲和层析名词解释

亲和层析名词解释 亲和层析是研究样品中的各组分与某些对生物大分子有专一性 吸附能力的特殊分子或离子相互作用，并利用这种相互作用选择和富集待测组分。 所谓亲和层析是根据生物大分子具有可解离或与配体结合成牢 固的结合态，因而它们与蛋白质、核酸、糖类及脂质等生物大分子形成复杂的亲和力。这些生物大分子不仅能与不同的蛋白质、核酸以及糖类等结合，而且还能与多种其他分子结合。这种结合的专一性使它在吸附分离生物大分子时比一般选择性薄层色谱更加灵敏、迅速。所以根据生物大分子的可解离性以及由此产生的不同的亲和力，在某些生物大分子上就能达到高度的分离，获得纯化的生物大分子。这是亲和层析技术应用的理论基础。 8-nm亲和层析与氨基酸、核酸的亲和层析一样，属于离子交换 层析法的一种。它是用2。 5-5。 0尼龙的电极，以连续可变的电压通过被洗脱组分，从而将它带出来的。亲和层析也可以用阴离子型缓冲溶液（如Ca(2+)， Mg(2+)等）进行，然后再用等电点沉淀或分子筛效应进行分离。在亲和层析时，要使用电极活性较低的阴离子，并要用与样品等电点接近的缓冲溶液洗脱，避免电解质引起的组分沉淀。9。 11。 12。 13。 16。 大多数氨基酸、核酸等生物大分子都有亲和性。氨基酸中的甘氨酸、丝氨酸、半胱氨酸等的羧基部分都有强亲和性，例如氨基酸的 D-COOH-COO NH2与亲和层析的AgNO3等阴离子或阳离子生成稳定的

Ag，而氨基则保持游离状态。相反，许多游离胺基酸如丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸等都具有亲和性。氨基酸中的尿素、天冬酰胺、谷酰胺等碱性氨基酸都不具有亲和性，它们的亲和性与相应的羧酸有关。游离的蛋白质多数也具有亲和性。在亲和层析时，电极活性越低，对生物大分子的亲和性越小，则洗脱时的迁移率越快，即层析的分辨率越高。蛋白质的氨基虽然能以N-NH2基形式存在，但多数只有N-NH2的形式才具有亲和性，所以通常称为弱亲和蛋白质。通常用于分离蛋白质的有氨基苯甲酸盐、咪唑啉酮、大豆苷、天冬酰胺等。各种动植物的天然蛋白质中，许多蛋白质的氨基或羧基也有亲和性。

亲和层析原理和方法

亲和层析原理和方法 引言 亲和层析是一种常用的分离纯化生物大分子的方法，广泛应用于生物工程、生物医学和生物化学等领域。本文将介绍亲和层析的基本原理和常用方法。 一、亲和层析的基本原理 亲和层析是利用化学结合的特异性，将目标分子与固定在层析柱上的亲和配体结合，从而实现目标分子的分离纯化。其基本原理如下： 1. 亲和配体选择性结合目标分子：亲和配体是一种具有特异性结合目标分子的生物大分子或化学物质。通过选择合适的亲和配体，可以实现对目标分子的选择性结合。 2. 层析柱固定亲和配体：亲和配体通常通过共价键或非共价键的方法固定在层析柱的填料上。固定亲和配体后，层析柱具有了对目标分子的特异性结合能力。 3. 样品溶液通过层析柱：样品溶液中含有目标分子和其他杂质分子。当样品溶液通过层析柱时，目标分子会与层析柱上的亲和配体结合，而杂质分子则流经层析柱。 4. 目标分子的洗脱和回收：通过改变洗脱缓冲液的条件，可以使目标分子与亲和配体解离，从而实现目标分子的洗脱和回收。

二、常用的亲和层析方法 亲和层析方法根据亲和配体的性质和结合方式的不同，可以分为多种不同的方法。以下是几种常用的亲和层析方法： 1. 金属离子亲和层析：利用金属离子与亲和配体之间的配位作用，实现对目标分子的选择性结合。常用的金属离子包括Ni2+、Cu2+和Zn2+等。 2. 免疫亲和层析：利用抗体与抗原之间的特异性结合，实现对目标分子的选择性结合。免疫亲和层析广泛应用于生物医学领域，用于分离纯化抗体和抗原。 3. 亲和色谱层析：利用染料、受体或配体等分子与目标分子之间的特异性结合，实现对目标分子的选择性结合。常用的亲和色谱层析方法有离子交换层析、亲和柱层析等。 4. 亲和吸附层析：利用亲和吸附剂与目标分子之间的特异性结合，实现对目标分子的选择性结合。常用的亲和吸附层析方法有亲和蛋白A/G层析、亲和葡萄糖层析等。 三、亲和层析的应用领域 亲和层析作为一种常用的分离纯化方法，广泛应用于生物工程、生物医学和生物化学等领域。以下是几个典型的应用领域：

亲和层析

亲和层析(affinity chromatography) 在生物分子中有些分子的特定结构部位能够同其他分子相互识别并结合，如酶与底物的识别结合、受体与配体的识别结合、抗体与抗原的识别结合，这种结合既是特异的，又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除。生物分子间的这种结合能力称为亲和力。亲和层析就是根据这样的原理设计的蛋白质分离纯化方法。 原理 亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。此法具有高效、快速、简便等优点。 载体的基本要求和选择 理想的载体应具有下列基本条件：①不溶于水，但高度亲水；②惰性物质，非特异性吸附少；③具有相当量的化学基团可供活化；④理化性质稳定；⑤机械性能好，具有一定的颗粒形式以保持一定的流速；⑥通透性好，最好为多孔的网状结构，使大分子能自由通过；⑦能抵抗微生物和醇的作用。可以做为固相载体的有皂土、玻璃微球、石英微球、羟磷酸钙、氧化铝、聚丙烯酰胺凝胶、淀粉凝胶、葡聚糖凝胶、纤维素和琼脂糖。在这些载体中，皂土、玻璃微球等吸附能力弱，且不能防止非特异性吸附。纤维素的非特异性吸附强。聚丙烯酰胺凝胶是目前的首选优良载体。琼脂糖凝胶的优点是亲水性强，理化性质稳定，不受细菌和酶的作用，具有疏松的网状结构，在缓冲液离子浓度大于0.05Mol/L时，对蛋白质几乎没有非特异性吸附。琼脂糖凝胶极易被溴化氢活化，活化后性质稳定，能经受层析的各种条件，如0.1Mol/L NaOH或1Mol/L HCl处理2h~3h及蛋白质变性剂7Mol/L尿素或6Mol/L盐酸胍处理，不引起性质改变，故易于再生和反复使用。琼脂糖凝胶微球的商品名为Sepharose，含糖浓度为2%、4%、6%时分别称为2B、4B、6B。因为Sepharose 4B 的结构比6B疏松，而吸附容量比2B大，所以4B应用最广。 黄曲霉毒素B1亲和层析柱（磁珠法） “国内首次采用免疫磁珠方法配合仪器分析检测食品样品中黄曲霉毒素B1” 产品用途 采用纳米免疫磁珠捕获富集于食品、饲料以及原料中的黄曲霉毒素B1，从而达到快速净化和高效浓缩黄曲霉毒素B1的目的。 检测原理 免疫磁珠既可结合活性蛋白质，又可被磁性吸引。经过一定处理可将抗体结合在磁珠上，使磁珠成为抗体的载体。磁珠上的抗体和特异性抗原物质结合后形成抗原—抗体—磁珠免疫复合物，这种复合物在磁场作用下发生移动，从而使复合物从复杂的环境中高效分离出来，

第七章 亲和层析技术

第2章亲和层析 1 亲和分离技术概论 利用生物分子之间的专一性识别性或特定的相互作用的分离技术称为亲和分离技术。在该技术中，亲和分离过程是通过引入亲和配基得以实现的（如图2-1）。所谓亲和配基，是指具有对生物分子专一识别性或特异相互作用的物质。将亲和配基固定在不同的介质上，可得到不同的亲合分离技术，如固定在层析介质上，达到专一性层析分离的技术称为亲和层析技术。将亲和配基接在分离膜上，得到亲和膜分离技术。 图2-1：亲和分离过程的示意图 生物分子之间的亲和识别包括抗体和抗原、酶和底物、激素和受体等之间的亲合作用，这些亲和作用属于生物专一性识别；此外，某些物质和生物大分子之间还有一些特异性作用，如染料和某些酶（特别是脱氢酶和激酶等），植物凝集素和糖蛋白，金属离子和蛋白质表面的组氨酸等之间的作用，都可以应用于亲和分离过程。 根据以上两种亲和作用的不同，可将亲和配基按其来源分为二类：生物特异性配基，如抗体、NAD、AMP等和拟生物亲和配基，如染料、金属离子等。 表2-1常见亲和层析的命名作用原理以及它们的相关应用 的专一性识别或特异性作用，必须是可逆的。(2)配基与被分离的生物大分子之间要有足够高的结合常数，能形成稳定的复合物；但同时结合又不能太强，当外界条件适当的改变，且不使待分离的目的大分子变性时，就可将复合分子解离，使目标分子和配基分离，同时亲和

配基得以再生。(3)能够进行一定的化学改性，易于固定在层析介质或其他分离介质上。且固定到分离介质上之后，配基的专一性识别或特异性作用不发生明显的变化。 目前，亲和分离技术众多，命名方法也很多。一般而言，常根据配基的名称和所使用技术的名称组合来命名，如固定化金属离子亲和膜技术、染料亲和层析等。现将常用的亲和层析技术名称、原理和应用简单的列如表2-1： 1.1 亲和配基 在亲和分离技术中，亲和配基起着举足轻重的作用。亲和配基的专一性和特异性，决定着分离纯化时所得产品的纯度，亲和配基与目标分子之间作用的强弱决定着吸附和解吸的难易程度，影响它们的使用范围。 根据配基亲和作用专一性程度和配基分子量的大小，可以将它们做如下分类： (1)单专一性的小分子配基。如激素、维生素和某些酶抑制、金属离子等小分子，这些亲和配基只和某个或少数几个特定的蛋白作用，无论这些蛋白来源于特定细胞或生物体。单专一性的亲和配基专一性高，结合力较强，比较难于洗脱。 (2)基团专一性小分子亲和配基。主要包括酶的辅因子，如NAD和其类似物，惰性染料等。如果被分离的酶需要辅因子，该蛋白就能够和辅因子结合（如果配基是辅因子类似物，原理也一样，只是酶可将其识别为辅因子）。将该辅因子或类似物作为亲和配基，便可将蛋白质结合到亲和配基上，实现分离纯化的过程。 表2-2列出了一些基团专一性小分子亲和配基和它们对应能纯化的蛋白质。 表2-2小分子亲和配基和对应所分离的产品 其中蓝染料Cibacron Blue是NAD辅因子的类似物，因而可用于提取需要NAD或NADP＋的蛋白质酶类。 (3)专一性的大分子亲和配基。利用生物大分子具有三维识别结构的亲和作用，将其中的一种作为配基，就可以用来分离另外所对应的生物大分子，如凝集素ConA对多糖和糖蛋白有专一性；蛋白A及G对IgG和IgM等免疫蛋白有专一性。组织纤维溶酶原激活剂（t-PA）是一种糖蛋白，具有激活溶酶原，促进血纤维蛋白溶解的作用。该蛋白质可以用纤维蛋白作为亲和配基进行分离。表2-3给出了几种常见的亲和配基和对应的分离产品。 表2-3大分子亲和配基和所对应分离的产品 吸附(Immunosorbent)，在免疫吸附中使用的亲和配基称为免役亲和配基。该配基即可以是抗原，也可以是抗体。现代杂交瘤技术已经有可能大规模生产单克隆抗体，这为免疫亲和配基的生产和免疫亲和吸附的应用创造了前提条件。相对于其他的亲和配基而言，免疫亲和配基专一性高，纯化效率高，只需一步操作就可以得到很高纯度的产品。但是，它的价格相对较

层析的概念

层析的概念 层析的概念 层析是一种物理化学分离技术，利用样品中不同成分在固定相（也称为层析柱）和流动相（也称为移液相）之间的差异性，通过逐渐分离出各个组分达到纯化或者分离的目的。层析技术广泛应用于生物、化学、制药等领域中。 一、层析技术的基本原理 1.1 固定相 固定相是指在某种材料上涂覆或者填充有一种特殊化合物，这种化合物能够与样品中成分发生作用，并且能够将不同成分区分开来。常见的固定相包括硅胶、氧化铝、聚合物等。 1.2 流动相 流动相是指在固定相中流动的液体，它可以将样品输送到固定相上，并且通过与固定相发生作用来实现成分之间的分离。流动相可以是单一溶剂或者是多种溶剂混合而成的溶剂体系。

1.3 分离原理 在层析过程中，样品中不同成分会因为它们与固定相和流动相之间作用力的不同而被逐渐分离。比如，如果一个成分在固定相上的亲和力比较强，那么它就会在固定相上停留的时间比较长，从而与其他成分分离开来。 二、层析技术的分类 2.1 按照固定相的不同，层析技术可以分为几种类型： - 气相层析（GC） - 液相层析（LC） - 离子交换层析（IEC） - 亲和层析（AC） - 尺寸排除层析（SEC） 2.2 按照流动相的不同，层析技术可以分为几种类型： - 反相层析 - 正相层析 - 离子对反向色谱

- 亲和色谱 三、常用的层析技术 3.1 气相层析 气相色谱是一种利用气体作为流动相，在某种特殊材料上涂覆有化合物作为固定相，在高温下将样品中各个组分逐渐分离出来的技术。气象色谱广泛应用于环境、食品、制药等领域。 3.2 液相色谱 液象色谱是一种利用液体作为流动相，在某种特殊材料上涂覆有化合物作为固定相，通过逐渐分离出各个组分达到纯化或者分离的目的。液相色谱广泛应用于生物、制药、食品等领域。 3.3 离子交换层析 离子交换层析是一种利用带电荷的固定相与样品中带电荷的成分之间发生作用，通过逐渐分离出各个组分达到纯化或者分离的目的。离子交换层析广泛应用于制药、生物等领域。 3.4 亲和层析

生物分离工程名词解释

膜分离的概念：利用膜的选择性（孔径大小），以膜的两侧存在的能量差作为推动力，由于溶液中各组分透过膜的迁移率不同而实现分离的一种技术。 或者：利用具有一定选择性透过特性的过滤介质进行物质的分离纯化。 离子交换: 在吸附剂与溶液间发生离子交换，即吸附剂吸附离子后，它同时要放出等当量的离子于溶液中。 亲和层析：是利用生物分子对之间所具有的专一而又可逆的亲和力使生物分子分离纯化的技术。 过滤：是在外力作用下，利用过滤介质使悬浮液中的液体通过，而固体颗粒被截留在介质上，从而实现固液分离的一种单元操作。 或者：利用薄片形多孔性介质（如滤布）截留固液悬浮液中的固体粒子，进行固液分离的方法。 重结晶：是利用杂质和结晶物质在不同溶剂和不同温度下的溶解度不同，将晶体用合适的溶剂再次结晶，以获得高纯度的晶体的操作。 分辨率：也称分离度。它是指相邻两色谱保留值之差与两峰底宽平均值之比。 晶体：形成新相（固体）需要一定的表面自由能。因此，溶液浓度达到饱和溶解度时，晶体尚不能析出，只有当溶质浓度超过饱和溶解度后，才可能有晶体析出。溶液达到过饱和状态是结晶的前提；过饱和度是结晶的推动力。 初级分离：指从菌体发酵液、细胞培养液、胞内抽提液（细胞破碎液）及其他各种生物原料初步提取目标产物，使目标产物得到浓缩和初步分离的下游加工过程。 截留率：表示膜对溶质的截留能力，可用小数或百分数表示。 （真实截留率和表观截留率） 自溶：通过调节温度、PH值或添加有机溶剂，诱使细胞产生溶解自身的酶的方法，也是一种酶溶法。 ：指从进样开始到被测组份在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相保留体积V R 体积。 ：指色谱柱内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的死体积V M 空间以及检测器的空间的总和，当后两项很小而可忽略不计时，V M可由t m与流动相体积流速F0(ml/min)的乘积计算。 理论塔板高度：单位理论塔板的长度称为理论塔板高度。它等于色谱柱长度除以理论塔板数。用理论塔板数与板高表示柱效率时是等价的。

亲和层析原理和方法

亲和层析原理和方法 亲和层析是一种分析方法，通过利用物质之间的亲和性来分离和分析目标物质。它基于物质之间的特异性亲和作用，通过将目标物质与具有亲和性的固相材料结合，实现目标物质的富集和分离。 亲和层析的原理是基于生物分子之间的亲和性。在生物体内，许多分子之间存在着特定的亲和性相互作用。例如，抗体与抗原之间的结合就是一种典型的亲和性相互作用。利用这种亲和性原理，可以将含有特定抗原的样品与具有相应抗体的固相材料结合，然后通过洗脱的方式将目标物质从固相材料上分离出来。 亲和层析的方法包括亲和层析柱和亲和层析片。亲和层析柱是将具有亲和性的固相材料填充在柱子中，样品通过柱子时，目标物质会与固相材料结合，非目标物质则通过柱子。然后可以通过洗脱的方式将目标物质从固相材料上分离出来。亲和层析片则是将具有亲和性的固相材料固定在薄膜上，样品与薄膜接触时，目标物质会与固相材料结合，非目标物质则被排除。然后可以通过洗脱的方式将目标物质从薄膜上分离出来。 亲和层析方法具有许多优点。首先，亲和层析可以选择性地富集目标物质，从而降低了样品中其他干扰物质的影响。其次，亲和层析具有高灵敏度和高分辨率的特点，可以检测到低浓度的目标物质。此外，亲和层析还具有快速、简单和可重复性的优点，适用于大规

模的样品分析。 亲和层析在许多领域中得到了广泛的应用。在生物医学领域，亲和层析可以用于分离和富集特定蛋白质或生物分子，以便进行后续的分析和研究。在药物研发中，亲和层析可以用于筛选和分离具有特定药物靶点亲和性的化合物。在环境监测和食品安全领域，亲和层析可以用于检测和分离目标污染物或有害物质。 亲和层析是一种基于亲和性相互作用的分析方法，通过选择性地富集和分离目标物质，实现了样品的准确分析。亲和层析方法具有许多优点，并在各个领域中得到了广泛应用。未来随着技术的不断发展，亲和层析方法将进一步完善和应用于更多的领域，为科学研究和工业生产提供更多的可能性。

亲和层析原理和步骤

亲和层析原理和步骤 亲和层析（affinity chromatography）是一种常用的分离和纯化靶标蛋白的方法。它利用配体与目标蛋白的高亲和力来实现目标蛋白的选择性结合和纯化。亲和层析的原理和步骤如下。 一、亲和层析的原理 亲和层析的原理基于配体与目标蛋白之间的特异性结合。配体是一种具有特异性反应性的化合物，可以和目标蛋白的结构域或位点发生特异性作用。在亲和层析中，配体被固定在固定相上，也可以被连接到大分子载体上，形成亲和层析介质。当样品通过亲和层析柱时，目标蛋白会与配体发生选择性结合，而其他非目标蛋白则不结合或弱结合，从而实现了目标蛋白的分离和纯化。 亲和层析的步骤通常包括以下几个方面： 2.固定配体：将配体固定在固定相上是亲和层析的关键一步。固定相可以是固定在柱子内壁的小分子配体，也可以是连接在大分子载体上的配体。常用的固定剂包括琼脂糖、丙烯酰胺凝胶、硅胶等。 3.样品准备：在进行亲和层析之前，需要对样品进行准备。通常包括细胞裂解、蛋白质提取、预处理等步骤。样品中的废物和干扰物需要被去除，以便目标蛋白的有效分离和纯化。 4. 亲和层析操作：样品通过亲和层析柱时，目标蛋白与配体发生特异性结合。通常需要选择适当的Buffer、pH值和盐浓度等条件来提高结合效率。非目标蛋白会通过柱子流失，而目标蛋白则留在柱子中。目标蛋白可以通过洗脱步骤从柱子中进行脱附。

5.洗脱与纯化：在洗脱过程中，目标蛋白从亲和层析柱中脱附。洗脱 条件需要根据结合强度和目标蛋白的特性来选择。常用的洗脱方法包括 pH值的调节、离子浓度的变化、配体浓度的变化等。洗脱后的目标蛋白 可以通过浓缩和纯化步骤得到纯品。 二、亲和层析的优缺点 亲和层析作为一种分离和纯化方法，具有以下优点： 1.特异性：亲和层析可以选择性地结合目标蛋白，从而实现与其他非 目标蛋白的分离。 2.高纯度：亲和层析可以显著提高目标蛋白的纯度，使其达到实验或 工业应用的要求。 3.选择性：亲和层析可以基于不同的配体，实现对不同蛋白的选择性 结合和纯化。 4.高效性：亲和层析操作简单方便，对目标蛋白的分离和纯化速度快，产量高。 然而，亲和层析也存在一些缺点： 1.特异性：亲和层析的选择性可能存在一定的限制，一些非特异性结 合的分子或杂质可能会与配体发生竞争结合，影响纯化效果。 2.成本：亲和层析的耗材和试剂比较昂贵，成本较高。 3.试剂需求：亲和层析需要大量的配体和柱子，对于大规模应用而言，试剂的耗费相对较大。

dna亲和层析

dna亲和层析 DNA亲和层析是一种分离和纯化特定DNA序列的技术。它基于 DNA结构的物理和化学特性，利用无机和有机化学反应的基础进行操作。DNA亲和层析的基本原理是通过DNA双链结构的独特性质，将含有亲和指定的蛋白或化合物与其他DNA序列分离。下面我们将更具体的了解DNA亲和层析的步骤。 1、预处理样品 样品处理是DNA亲和层析的首要环节，对于纯化产品的收获直接反映 样品质量。样品应该充分摇匀后，使用必要的杀菌剂对样品进行消毒 处理，如不含重金属，并保持营养成分的不变性。另外，这是使用前 操作纯化树脂的关键步骤，以去除不纯物质和局部污染，保持树脂材 料的完整性和生物特征。 2、DNA连接 DNA连接的目的是连接特定的连接部位，以便亲和柱树脂上的DNA结合。DNA连接通常是通过将亲和融合蛋白注入，将融合蛋白与适当的表达质粒截取，并在水中孵育24小时用于纯化目的。 3、树脂滴定 树脂滴定的目的是在样品通过过滤小孔树脂技术时产生的混合物中固 定目标DNA。购买树脂时需要注意其特定用途和亲和指数。在使用前应通过相关材料得知树脂规格和性质，在标准化材料上进行初步实验后 进行实验。 4、色谱洗脱和纯化 色谱洗脱和纯化是通过DNA亲和树脂池中的柱子，将目标物分离出来 的最后一步。此步骤是通过以逆向溶液作为洗脱液，分别分离特定DNA 分析、基因进行分级分体分析。在此步骤中，最重要的是确保一个合 适的洗脱液种类和浓度的选择，这定义了分离效率的高或低。 DNA亲和层析利用DNA双链结构独特的物理、化学特性，采用有 机和无机化学反应进行操作。预处理样品、DNA连接、树脂滴定、色谱

洗脱和纯化是DNA亲和层析的主要步骤。正确的DNA亲和层析操作将在分离达到优良效果和富集纯度较高的目标DNA时反映出来，具有良好的应用前景。

亲和层析的用途与分类

亲和层析的用途与分类 亲和层析（Affinity Chromatography）是一种广泛应用于生物分离与纯化的层析技术。该技术利用生物分子之间的特异结合作用，将目标分子从混合物中高效地提取出来。亲和层析在生物制药、蛋白质纯化、基因工程等领域发挥着重要作用。本文将从亲和层析的基本原理、用途和分类三个方面进行介绍。 一、亲和层析的基本原理 亲和层析的基本原理是利用配体与目标分子之间的特异性结合作用。配体是一种具有高亲和力的分子，可以选择性地结合目标分子，而与其他非目标分子无关。常见的配体包括抗体、金属离子、蛋白质结合域等。亲和层析通常分为两个步骤：吸附和洗脱。在吸附步骤中，将含有目标分子的混合物通过与配体固定在固定相上的填料床，目标分子与配体结合，而非目标分子则被洗脱。在洗脱步骤中，通过改变条件，如pH、温度或离子浓度，使目标分子与配体解离，从而得到纯净的目标分子。 二、亲和层析的用途 亲和层析在生物分离与纯化中有广泛的应用。以下是亲和层析的几个主要用途： 1. 蛋白质纯化：亲和层析是蛋白质纯化中最常用的技术之一。通过针对特定蛋白质设计合适的配体，可以高效地纯化目标蛋白质。例

如，利用亲和层析技术可以从复杂的细胞提取物中纯化出特定的酶、抗体或膜蛋白。 2. 生物制药：在生物制药过程中，亲和层析可用于纯化目标药物。例如，利用特定的配体可以从发酵液中选择性地富集重组蛋白，如重组人胰岛素、重组人干扰素等。这对于生物制药产品的高效制备和纯化至关重要。 3. 基因工程：亲和层析在基因工程中也具有重要应用。通过设计合适的配体，可以选择性地富集携带特定标签（如His标签、GST标签）的重组蛋白。这为基因工程中的蛋白质表达、酶标记和功能研究提供了有效的手段。 4. 药物筛选：亲和层析可以用于药物筛选和药物分子鉴定。通过将目标蛋白固定在亲和层析填料上，可以筛选出与目标蛋白结合的化合物，进而进行药物分子的鉴定和优化。 三、亲和层析的分类 根据配体与目标分子的结合方式和特性，亲和层析可以分为多种不同的分类。以下是亲和层析的几种常见分类： 1. 金属螯合层析：利用金属离子与蛋白质中的亲和位点结合，实现目标蛋白的选择性富集。常见的金属螯合层析包括镍螯合层析、铜螯合层析等。

亲和层析原理

亲和层析原理 亲和层析原理是一种分子生物学技术，它可以通过结合蛋白质或其他大分子来识别、分离和分析样本中的分子。亲和层析原理最初由罗伯特·霍夫曼开发，在20世纪70年代末和80年代初受到关注，并开始被广泛应用于生命科学研究。它可以使用多种不同的技术，如普通吸附、替代吸附、抗原-抗体交互作用等，以提取样本中的蛋白质或其他大分子，从而为识别、分离和分析提供帮助。 亲和层析是一种十分有效的分离和分析技术，它的基本原理是利用亲和性来将目标分子从其他杂质分离出来，也就是说，它可以利用亲和性来增强分子之间的结合。这一技术的基本步骤是将目标分子与一种能够与之结合的叫做“亲和剂”的物质结合起来，然后将其放置在一种叫做“层析介质”的专用介质中。当亲和剂与目标分子结合时，所有其他不能与亲和剂结合的分子都会被隔离出来，而只留下与亲和剂结合的分子。 层析介质可以由具有亲和性的物质组成，以及能够提供分离支持的物质。其中一种常用的层析介质是硅胶，它具有很强的亲和性，可以将目标分子从样品中分离出来。 亲和层析技术除了可以用来分离和分析样品中的特定分子外，还可以用来对样品进行浓缩、纯化和重新构建，

以便进一步研究。它还可以用来将蛋白质分解成单个活性部件，以及用于诊断、毒性学研究和其他科学研究。 亲和层析技术的最大优势在于它的精确性和效率。它可以很快地将样品中的特定分子分离出来，而且可以获得比传统方法更高的精度。它也可以省时、省力，因为它可以在较短的时间内获得更多的结果。 亲和层析技术的应用非常广泛，在医学研究、制药、食品安全检测、环境监测等领域都有应用。它可以用来快速检测样品中的抗原，并鉴定出特定的抗体，以帮助识别某种疾病或其他特定情况。亲和层析技术也可以用来研究病毒感染的机制，以及研究细胞内的分子机制，以帮助了解疾病的发展和治疗方法。 总之，亲和层析技术是一种非常有效的分子生物学技术，可以用来快速准确地分离、分析和浓缩样品中的分子，从而为研究和治疗疾病提供重要的信息。

生物化学复习资料名词解释

生物化学复习资料名词解释 1．zinc finger：是一种常出现在DNA结合蛋白质中的一种结构基元。是由一个含有大约30个氨基酸残基的环和一个与环上的4个Cys或2个Cys和2个His配位的Zn2＋构成，形成的结构象个手指状。 2．Edman degradation：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。N末端氨基酸残基被苯异硫氰酸酯修饰，然后从多肽链上切下修饰的残基，再经层析鉴定，余下的多肽链（少了一个残基）被回收再进行下一轮降解循环。 3．enzyme：生物催化剂，除少数RNA外几乎都是蛋白质。酶不改变反应的平衡，只是通过降低活化能加快反应的速度。 4．Chargaff's rules：所有DNA中腺嘌呤与胸腺嘧啶的摩尔含量相等，（A＝T），鸟嘌呤和胞嘧啶的摩尔含量相等（G＝C），即嘌呤的总含量与嘧啶的总含量相等（A＋G＝T＋C）。DNA 的碱基组成具有种的特异性，但没有组织和器官的特异性。另外生长发育阶段、营养状态和环境的改变都不影响DNA的碱基组成。 5．G proteins：在细胞内信号传导途径中起着重要作用的GTP结合蛋白质，由α、β、γ三个不同亚基组成。与激素受体结合的配体诱导GTP与G蛋白结合的GDP进行交换，结果激活位于信号传导途径中下游的腺苷酸环化酶。G蛋白将胞外的第一信使肾上腺素等激素和胞内的腺苷酸环化酶催化的腺苷酸环化生成的第二信使cAMP联系起来。G蛋白具有内源GTP酶活性。 1．active unit（U）：酶活力的度量单位。1961年国际酶学会议规定：1个酶活力单位是指在特定条件（25℃，其它为最适条件）下，在1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔的有关基团的酶量。 2．competitive inhibition：通过增加底物浓度可以逆转的一种酶抑制类型。一个竞争性抑制剂通常与正常的底物或配体竞争同一个蛋白质的结合部位。这种抑制使得Km增大，而Vmax 不变。

生物分离技术题库(带答案)

题库名称：生物分离技术 一、名词解释 1．质量作用定律：化学反应的速率与参加反应的物质的有效质量成正比。 2．凝聚：在电解质作用下，破坏细胞菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，使胶体粒子聚集的过程。 3．分配系数：在一定温度、压力下，溶质分子分布在两个互不相溶的溶剂里，达到平衡后，它在两相的浓度为一常数叫分配系数。 4．干燥速率：干燥时单位干燥面积，单位时间内漆画的水量。 5．CM-Sephadex C-50：羧甲基纤维素、弱酸性阳离子交换剂，吸水量为每克干胶吸水五克。 6．絮凝：指在某些高分子絮凝剂存在下，在悬浮粒子之间发生架桥作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程 7．过滤：是在某一支撑物上放过滤介质，注入含固体颗粒的溶液，使液体通过，固体颗粒留下，是固液分离的常用方法之一。 8．萃取过程：利用在两个互不相溶的液相中各种组分（包括目的产物）溶解度的不同，从而达到分离的目的9．吸附：是利用吸附剂对液体或气体中某一组分具有选择性吸附的能力，使其富集在吸附剂表面的过程。10．反渗析：当外加压力大于渗透压时，水将从溶液一侧向纯水一侧移动，此种渗透称之为反渗透。 11．离心沉降：利用悬浮液或乳浊液中密度不同的组分在离心力场中迅速沉降分层，实现固液分离 12．离心过滤：使悬浮液在离心力场作用下产生的离心力压力，作用在过滤介质上，使液体通过过滤介质成为滤液，而固体颗粒被截留在过滤介质表面，从而实现固液分离，是离心与过滤单元操作的集成，分离效率更高13．离子交换：利用离子交换树脂作为吸附剂，将溶液中的待分离组分，依据其电荷差异，依靠库仑力吸附在树脂上，然后利用合适的洗脱剂将吸附质从树脂上洗脱下来，达到分离的目的。 14．固相析出技术：利用沉析剂（precipitator）使所需提取的生化物质或杂质在溶液中的溶解度降低而形成无定形固体沉淀的过程。 15．助滤剂：助滤剂是一种具有特殊性能的细粉或纤维，它能使某些难以过滤的物料变得容易过滤 16．沉降：是指当悬浮液静置时，密度较大的固体颗粒在重力的作用下逐渐下沉，这一过程成为沉降 17．色谱技术：是一组相关分离方法的总称，色谱柱的一般结构含有固定相（多孔介质）和流动相，根据物质在两相间的分配行为不同（由于亲和力差异），经过多次分配（吸附-解吸-吸附-解吸…），达到分离的目的。18．有机溶剂沉淀：在含有溶质的水溶液中加入一定量亲水的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出。19．等电点沉淀：调节体系pH值，使两性电解质的溶解度下降，析出的操作称为等电点沉淀。 20．膜分离：利用膜的选择性（孔径大小），以膜的两侧存在的能量差作为推动力，由于溶液中各组分透过膜的迁移率不同而实现分离的一种技术。 21．化学渗透破壁法：某些化学试剂，如有机溶剂、变性剂、表面活性剂、抗生素、金属螯合剂等，可以改变细胞壁或细胞膜的通透性，从而使胞内物质有选择地渗透出来。 22．超临界流体：超临界流体是状态超过气液共存时的最高压力和最高温度下物质特有的点——临界点后的流体。23．临界胶团浓度：将表面活性剂在非极性有机溶剂相中能形成反胶团的最小浓度称为临界胶团浓度，它与表面活性剂种类有关。 24．反渗透：在只有溶剂能通过的渗透膜的两侧，形成大于渗透压的压力差，就可以使溶剂发生倒流，使溶液达到浓缩的效果，这种操作成为反渗透。

王镜岩生物化学名词解释

1、异构:指存在两个或多个相同数目和种类的原子并因而具有相同相对分子质量的化合物的现象。只要有结构异构和立体异构。 2、构型:在立体异构中的原子或取代基团的空间排列关系叫做构型。2005 3.构象:在分子中由于共价键的旋转所表现出的原子或基团的不同空间排布叫构象。2005 4. 肽单位:指肽链中的酰胺基(-CO-NH-) 5. 肽平面:组成基的4个原子和2个相邻的Cα原子趋向于共面，形成所谓多肽主链的酰胺平面又称肽平面。 6、亚基:蛋白质分子中，最小的单位通常称为亚基或亚单位Subunit,它一般由一条肽链构成，无生理活性。 7、结构域:多肽链在二级结构或超二级结构的基础上形成三级结构的局部折叠区，它是相对独立的紧密球状实体。称为结构域。2004 06 8、超二级结构:若干相邻的二级结构单元(螺旋、折叠、转角)组合在一起，彼此相互作用，形成有规则在空间上能辨认的二级结构组合体、充当三级结构的构件，称为超二级结构，包活: aa、βaβ和ββ-曲折。2006 09 15 17 9.桑格反应(Sanger reaction) 2.4-二硝基氟苯在碱性条件下，与肽键N-端的游离氨基作用，生成二硝基茶衍生物（DNP)，在酸性条件下水解，得到黄色DNP-氨基酸。该产物能够用乙醚抽提分离。不同的DNP-氨基酸可以用色增法进行鉴定， 10、艾德曼反应（Edman reactoin) :氨基酸与PTC生成PTH-AA是EDMAN 降解法的原理，在多肽蛋白质氨末端测定和氨基酸顺序分析中占有重要地位。 11、玻尔(Bohr)效应: 1904 年丹麦生理学家Bohr C.发现增加H+浓度将提高氧血红蛋白的释放这种pH对血红蛋白与氧亲和力的影响被称为玻尔效应。2004 08 15 12、免疫印迹:蛋白质经凝胶电泳分离，通过转移电泳将蛋白质条带转移硝酸纤维素膜上，进行酶联免疫反应。 13、Western blot: 蛋白质经凝胶电泳分离，通过转移电泳将蛋白质条