一测多评法同步测定柴胡药材中3种皂苷的含量

一测多评法同步测定柴胡药材中3种皂

苷的含量

（作者： _________ 单位：___________ 邮编：___________ ）

作者：黄帅，马淼，黄倩倩，符颖，魏建和，潘瑞乐

【摘要】目的首次将一测多评分析方法应用于柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d的含量测定，为柴胡药材多指标质量评价奠定基础。方法以柴胡皂苷a为对照品，建立药材中该成分与柴胡皂苷c及柴胡皂苷d 的相对校正因子，利用校正因子计算柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的含量，同时用外标法测定药材中3种成分的绝对含量，采用t-检验法对一测多评法的计算值与外标法实测值进行比较，评价一测多评法对柴胡药材中3种皂苷含量测定的准确性和科学性。结果在一定的线性范围内，柴胡皂苷a与柴胡皂苷c 及柴胡皂苷d的相对校正因子分别为0.735，0.944，且在不同的实验条件下重现性良好（RSD=0.70%，0.56%）;常规的外标法对柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的实测含量与一测多评法计算的含量没有显著性差异，经统计学t检验，P0.05，实验

所得校正因子可信。结论该方法使用一个对照品可同时测定柴胡药材中3种柴胡皂苷的含量，为柴胡药材的多指标质量评价及控制提供了科学依

据。

【关键词】一测多评；高效液相色谱；校正因子；柴胡；柴胡皂苷

中药的质量评价和控制是制约中药现代化、国际化发展的关键问题之一，也一直是中医药研究的难点和热点。然而，由于中药本身的复杂性，现行以单一活性成分或指标成分定性定量分析为核心的质量控制模式，已不能适应全面控制中药质量的要求，多指标综合质量控制

模式已成为中药质量评价和控制的发展趋势。由于多指标质量控制模

式需要足够量的化学对照品，而中药化学对照品分离难度大，有些单体结构不稳定难以分离或分离成本过高等因素，致使中药多指标成分质量控制仅限于科研，在实际生产应用中很难推广。王智民等［1］利用中药有效成分内在函数和比例关系，提出了“一测多评”的想法，即只测定1个成分(对照品易得者)，来实现对多个成分(对照品没有或难以供应)的同步监控，并已成功运用于木通3种有效成分及人参与三七药材中多种人参皂苷含量的同步测定［1，2］。

中药柴胡为伞形科(Umbelliferae)柴胡属(Bupleurum)植物，柴胡Bupleurum chinense DC.(北柴胡)及狭叶柴胡B. scorzonerifolium Willd.(南柴胡)的干燥根，是一味疗效显著的常用中药，其主要活性成分为柴胡皂苷a、柴胡皂苷d及柴胡皂苷c，目前柴胡的质量评价主要以这3种成分作为指标［3?5］。由于柴胡皂苷结构复杂，在酸性条件下不稳定等，其对照品制备难度非常大，致使柴胡药材及制剂的质量难以准确控制。本文以柴胡皂苷a (SSa)作为对照品，建立柴胡皂苷a与柴胡皂苷d (SSd)及柴胡皂苷c (SSc)的相对校正因子，并用

相对校正因子计算柴胡皂苷d及柴胡皂苷c的含量。以统计学t-检验法对相对校正因子的计算值与外标法实测值进行比较，对不同品牌色

谱柱、不同厂家的高效液相色谱仪及不同实验室的实验结果进行考察，综合评价一测多评法在柴胡药材中应用的准确性和科学性。

1仪器与试药

Waters系列高效液相色谱仪，包括：Waters 600 controller ，Waters 600 pump ，Waters 2487 dual absorbanee detector ，Waters Empower工作站。电子分析天平（上海天平仪器厂），KQ5200B型超

声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），乙腈、甲醇为色谱纯（Fisher 公司）。Wahaha纯净水（市售），提取用甲醇为分析纯（北京化工厂）。

柴胡皂苷a（批号110777-200406）和柴胡皂苷d（批号110778-200505）均由中国药品生物制品检定所提供，柴胡皂苷c由本实验室分离纯化，HPLC（面积归一化法）纯度98%。柴胡药材收集自不同产地，经作者鉴定为北柴胡 B. chinense DC.的干燥根。对照品结构式见图1。

图1柴胡皂苷a （1），柴胡皂苷d （2）和柴胡皂苷c （3）的结构式

2方法与结果

2.1方法原理在一定的线性范围内成分的量（质量或浓度）与检

测器响应成正比，即：W=f朋［6］。在多指标质量评价时，以药材中

某一典型组分（有对照品供应者）为内标，建立该组分与其他组分之间

的相对校正因子，通过校正因子计算其他组分的含量。这种测定一个成分，实现对多个成分定量的方法命名为一测多评法。

假设某样品中含有i个组分，存在Wi/Ai二fi(i=1,2,…,k,…,m)①。

式中Ai为组分i的峰面积;Wi为i组分的量。选取其中一组分k为内标，建立组分k与其他组分m之间的相对校正因子，有fkm=fk/fm=(Wk xAm) /(Wm X Ak)②。由此可导出定量计算公式：Wm=(Wk X Am) /(fkm

X Ak)③。式中Ak为内标物峰面积，Wk为内标物量;Am为组分m的峰面积，Wm为组分m的量。

2.2 一测多评方法学考察

2.2.1 色谱条件色谱柱为Venusi ASB-C18 柱(4.6 mm X250 mm,5

g);流动相：乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱(0?50 min, 25TO% A;50 ?55 min,

90 T0% A;55 ?60 min, 90 展5% A;60 ?70 min, 25 宀25% A);流速1.0 ml min-1;柱温30 C ;检测波长210 nm。在上述色谱条件下，SSc，SSa，SSd与其它峰能达到较好的分离。对照品及样品HPLC图谱见图2。

2.2.2对照品溶液的制备精密称定柴胡皂苷c、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品1.02，2.05，2.39 mg置于同一 2 ml量瓶中，用色谱甲醇定容，制得混合对照品溶液，于4C保存备用。

1.SSc

2.SSa

3.SSd

图2对照品(A)及样品(B)的HPLC图

2.2.3供试品溶液的制备取本品粉末(过60目筛)约0.5 g，精密称定，置50 ml三角瓶中，加入5%氨水甲醇溶液25 ml，密闭，于30 C水温超声处理30 min，滤过，滤渣用甲醇润洗两次，每次10 ml，

合并滤液，回收甲醇至干。残渣加甲醇（色谱纯）溶解并转移至5 ml 量瓶中，过0.45 mm的微孔滤膜，即得。

224线性范围精密吸取上述混合对照品溶液2, 5, 10, 15, 20 “注入高效液相色谱仪，按2.2.1 ”项下色谱条件进行分析。分别以对照品量C （⑷）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，得柴胡皂苷c、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的标准曲线回归方程及线性范围（见表1），表明各化合物在相应范围内线性关系良好。表1线性关系实验结果

2.2.5校正因子计算以SSa为内标，按2.1 ”项下公式②，分别计算SSa对SSc禾口SSd的校正因子，见表2。表2 SSa对SSc禾口SSd的相对校正因子

2.2.6精密度实验精密吸取同一混合对照品溶液20山连续进样6次，记录SSc, SSa和SSd的峰面积，其峰面积的RSD分别为 1.40%，

1.30%和1.47%。表明仪器精密度良好，符合含量测定要求。

2.2.7稳定性实验取同一供试品溶液20 “分别于0，2，4, 6, 8, 10 h进样测定，记录SSc, SSa和SSd峰面积，其峰面积的RSD 分别为1.70%, 2.00% 和2.10%。表明SSc、SSa 和SSd 在10 h 内稳定不

变。

2.2.8重复性实验称取同一批柴胡药材粉末（60目）约0.50 g共6份,精密称定，按供试品溶液处理方法制备样品并测定，SSc, SSa 和SSd 含量的RSD（n=6）分别为 1.20%, 2.94% 和 2.87%。表明实验方法重复性较好。

229加样回收率精密称取已知含量的柴胡药材粉末(60目)适

量6份，分别加入一定量的SSa对照品，按供试品溶液处理方法制备样品并测定，计算加样回收率，SSa的平均回收率为101.64%,

RSD(n=6)为2.33%。表明实验方法准确度符合要求。

2.2.10样品测定分别精密吸取供试品、混合标准品各20山注

入高效液相色谱仪并测定。分别采用一测多评法和外标法计算柴胡药材中SSc、SSa和SSd含量(见表3)。表3两种方法测定不同产地柴胡药材中3种皂苷含量

2.3 一测多评方法耐用性和系统适应性评价

2.3.1色谱柱及高效液相色谱仪考察取2.2.2 ”项下混合对照品溶液，进样2, 5, 10, 15, 20山测定，按22.5 ”项下计算SSa对SSc禾口SSd的校正因子。

实验考察了Waters 600, Waters 2690 两种高效液相色谱系统和Venusi ASB-C18(4.6 mm >250 mm, 5 ^m), Venusi MP-C18(4.6 mm X250 mm, 5 ^m)，Hibar RT-C18(4.6 mm >250 mm, 5 ^m) 3 种色谱柱。结果

见表4。表4不同仪器和不同色谱柱测得的相对校正因子

2.3.2实验室考察采用建立的一测多评分析方法在两个实验室进行

复核实验，结果表明两个实验室实验结果差异不大。见表5。表

5不同实验室测得的相对校正因子

2.4统计学方法采用统计学t检验，对一测多评法与常规法得到的柴胡药材SSc和SSd含量进行比较，P0.05，表明两种方法测得含量没

有显著性差异。

3讨论

本实验通过方法学验证、方法耐用性、系统适应性考察，对一测多评法用于柴胡药材3种皂苷含量测定的技术适用性和应用可行性进行了探讨。结果表明在不同色谱柱、不同仪器及不同实验条件下，柴胡皂苷a 与柴胡皂苷c和柴胡皂苷d之间的相对校正因子（RCF）有较好的重现性（RSD分别为0.70%和0.56%）。用一测多评法计算的含量与常规的外标法测得的含量经统计学t-检验没有显著性差异，说明本研究所得的SSa对SSc与SSd的校正因子具有普适性。在本研究的色谱条件下，柴胡药材HPLC色谱图中色谱峰比较简单，可

以通过SSa与SSc和SS d之间的相对保留时间差进行色谱峰定位，因此在定量柴胡皂苷a、c、d含量时，只要有柴胡皂苷 a 一个对照品，即可通过该方法实现3种成分同步含量测定。本实验所得的相对保留时间差RTSSa-RTSSc 和RTSSa-RTSSd 的平均值分别为3.7185 和-5.9955 min，校正因子f SSa/SSc 和f SSa/SSd 的平均值分别为0.742和

0.945，可供参考和使用。

中药化学成分非常复杂，在不同色谱条件下有不同的色谱峰，在同

天然药物化学

【奥鹏】[吉林大学]吉大18年9月《天然药物化学》作业考核试题试卷总分:100 得分:100 第1题,齐墩果烷型又称（）型，此类三萜在植物界分布极为广泛。 A、β-香树脂烷型 B、α-香树脂烷型 C、羽扇豆烷型 D、木栓烷型 正确答案:A 第2题,下列关于强心苷的说法错误的是（） A、强心苷是存在于植物中具有强心作用的甾体苷类化合物 B、动物中至今未发现有强心苷类存在 C、在强心苷元分子的甾核上，C3-OH大多是α-构型 D、强心苷中糖均与苷元C3-OH结合形成苷，可多至5个单元 正确答案:C 第3题,下列色谱法是根据物质分子大小差别进行分离的是 A、硅胶吸附柱色谱 B、凝胶色谱 C、聚酰胺吸附色谱 D、离子交换色谱 正确答案:B 第4题,甲基五碳糖的甲基质子信号在（） A、δ2.0左右 B、δ4.3～6.0 C、δ1.0左右 D、δ3.2～4.2 正确答案:C 第5题,下列水解易难程度排列正确的是（） A、糖醛酸七碳糖六碳糖甲基五碳糖 B、五碳糖六碳糖七碳糖糖醛酸 C、糖醛酸甲基五碳糖七碳糖六碳糖 D、甲基五碳糖六碳糖七碳糖糖醛酸 正确答案:A 第6题,下列关于溶剂极性的大小关系正确的是（） A、石油醚氯仿乙酸乙酯乙醇

B、石油醚氯仿乙醇乙酸乙酯 C、氯仿石油醚乙酸乙酯乙醇 D、石油醚乙醇乙酸乙酯氯仿 正确答案:A 第7题,下列关于生物碱的叙述错误的是（） A、生物碱极少与萜类和挥发油共存于同一植物类群中 B、生物碱根据分子中氮原子所处的状态主要分为六类 C、极少数生物碱是以盐的形式存在的 D、来源于色氨酸的生物碱又称吲哚类生物碱，是最大最复杂的一类生物碱。 正确答案:C 第8题,香豆素类都具有（）基本骨架。 A、苯醌母核 B、苯骈呋喃 C、苯骈α-吡喃酮母核 D、联苯 正确答案:C 第9题,下列哪个物质属于乌苏烷型五环三萜（） A、柴胡皂苷 B、雷公藤酮 C、白华醇 D、积雪草酸 正确答案:D 第10题,单萜类是由（）个异戊二烯单位构成，含10个碳原子的化合物类群。 A、1 B、2 C、3 D、4 正确答案:B 第11题,关于三萜类化合物叙述正确的是（） A、三萜皂苷在豆科、五加科、葫芦科、毛茛科、等植物分布较多 B、三萜皂苷是由三萜皂苷元和糖组成的，常见的苷元为四环三萜和五环三萜 C、在甾体和三萜的生物合成中，在酶的作用下鲨烯和环氧鲨烯的环合是最重要的途径 D、主要的五环三萜为齐墩果烷型、乌苏烷型、羽扇豆烷型和木烷型 正确答案:A,B,C,D

柴胡的化学成分及药理作用研究

柴胡的化学成分及药理作用研究 摘要柴胡来源于伞形科（Umbelliferae）柴胡属（BupleurumL.）植物。其中主要包括了多糖、发挥油、柴胡皂苷一些化学成分。国内外的文献研究发现，柴胡对解决抗病毒、抗细菌内毒素、降脂、抗炎等方面有很好的疗效，这是近10年发现的。柴胡的主要毒性成分是柴胡皂苷和柴胡的挥发油，这些毒性把器官作为主要肝脏，与多种途径的氧化损伤有关的是肝损伤机制。对柴胡毒性有影响的问题是在临床实验中发现的，这都是根据不同的品种与方法进行的，柴胡的皂苷和含的挥发油量也影响着其毒性的大小。 关键词柴胡化学成分药理作用现代研究毒理作用 ABSTRACT Root from Umbelliferae BupleurumL plants.Mainly contain volatile oil,saikoside and polysaccharide.Through nearly 10 years of domestic and foreign literature research found that toot on antipyretic、antiviral、anti bacterial endotoxin、anti-inflammatory、reducing blood lipid、liver、regulating immune and antitumor analgesic and so on several aspects has pharmacological effect.At the same time,the essential oil is zhe main component of the toxicity of the volatile oil from zhe root and zhe root of the Chinese.The toxicity target organ is mainly liver.The mechanism of liver injury is related to oxidative stress injury in many ways.Different varieties,different processing methods,different extraction methods and so on the toxicity of the root of the root of the root is in the process of clinical use gradually found,the size of the toxicity and the content of volatile oil. KEY WORDS Root Chemical composition Pharmacological action Modern research toxicological effects 前言 形状是伞状且多年的草本植物的是柴胡，它的根晒干后可以入药，这是在《神农本草经》中记载的。狭叶柴胡也就是南柴胡和伞形科多年的生草本植物柴胡也就是北柴胡是药中的极品，这是《中国药典》中规定的，柴胡味道辛辣，味苦，性微寒，对舒肝郁结，祛痛散热有很好的疗效。一些研究表明柴胡能够降血压，

柴胡皂苷对肝脏的药理作用研究进展

柴胡皂苷(saikosaponins，SS)是从伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC. 和狭叶柴胡 B. scozonerifolium Willd.的干燥根中获得的一类成分，是柴胡的主要化学和生物活性成分。关于SS 的化学成分研究已经较为深入，至今为止，共研究了该属20多种柴胡，从柴胡属植物已分离出90 多种皂苷类成分，发现了30多种新化合物。近10年分离鉴定的皂苷为43个，文献报道较多的是SSa，SSb，SSc，SSd等。现代药理研究表明，SS 具有解热、镇静、抗炎、免疫调节、抗病毒、抗肝纤维化、抗肿瘤等药理活性，一般认为SSa和SSd为其主要活性成分，而尤以SSd 的药理活性最强[1]。目前，国内外学者把SS 应用于肾病、肝纤维化、肿瘤等疾病治疗取得了显著疗效，但以保肝作用效果最佳，这也与传统中医记载柴胡疏肝解郁功效一致。 1、对肝脏的药理作用 柴胡功善疏肝解郁，升举清气，历代医家常以其治肝郁气滞等症，临床疗效显著。现代药理研究发现SS 保肝作用的特点为: ①降低细胞色素P450 的活性，对肝细胞坏死具有保护作用，同时还促进肝细胞再生; ②刺激垂体肾上腺皮质系统，使内原性糖皮质激素分泌增加; ③降低细胞色素C还原酶的活性，使得脱氢酶活性下降，激素样副作用降低; ④使巨噬细胞活化，促进抗体、干扰素产生，增强NK 细胞和LAK细胞活性，调节免疫; ⑤促进蛋白合成，增加肝糖原，降低过氧化脂质，促进肝细胞再生。近年来，在研究柴胡皂苷对肝脏的药理作用方面，主要进展为发现其具有对抗多种因素导致的肝损伤和肝纤维化。 1．1抗肝损伤作用 SS对CCl4、D-氨基半乳糖、脂多糖及卡介苗致小鼠慢性肝损伤均有显著的修复保护作用，其有效成分是SS单体III，VI和XIII[2]，周世文等发现SS 对CCl4实验性肝损伤小鼠有保护和促进肝内脂质代谢的作用，使肝内过氧化脂质含量降低，ALT 和TG 含量降低，而GSH 含量升高;提示SS 通过减少氧及其他自由基对肝脏损伤和提高细胞色素P450等其他毒物结合酶系统，加强肝脏对毒物代谢而发挥保肝作用[3]。李素婷研究发现: SSd 对乙醇损伤大鼠肝细胞有保护作用，其机制可能与SSd 清除自由基、抑制质脂过氧化作用有关［4］。陈爽等发现柴胡皂苷对肝细胞具有保护作用，表现为直接抑制原代培养贮脂细胞( FSC) 内DNA 的合成，还可抑制FSC 的激活，从而抑制FSC 合成细胞外基质( ECM) 的能力[2]。林明栋等体外研究首次发现柴胡分离组分CH- 5（柴胡粗皂苷）能显著抑制小鼠肝制备腺苷酸环化酶（AC）的活性，在一定浓度范围内有明显量效关系[5]。 1.2抗肝纤维化作用 肝纤维化是慢性肝病的共有病理变化，不同病因导致的慢性肝损伤，使得肝细胞外基质（ECM）合成增加、降解不足，过多沉积在肝内引起肝纤维化。肝纤维化主要病理机制为：①肝细胞慢性损伤；②星状细胞激活导致细胞外基质产生；③细胞因子紊乱后促进活化肝星状细胞的凋亡；SS 对上述环节有一定作用。 研究发现，SSd 在保护肝细胞、抑制星形细胞活化、细胞因子生成等方面发挥了抗肝纤维化作用[3]。作用机制与降低α-SAM 表达，抑制肝HSC 活化［6］，升高IL-10，NO，降低TNF-α有关［7］，也可能与改善纤溶功能、清除过氧化脂质和调节血清中微量元素锌、钙的水平有关［8-10］。肝星状细胞( HSC) 又称贮脂细胞( FSC) ，病理状态FSC 被激活和增殖并合成胶原和细胞外基质( ECM) ，使胶原和ECM 过度蓄积从而形成肝纤维化。SS 可以抑制FSC 激活及FSC 合成ECM的能力，且SS 还可以有效地稳定肝细胞膜系统，中和可溶性细胞因子对肝细胞增殖的抑制效应，防止肝细胞损伤和坏。陈爽等发现柴胡皂苷可抑制FSC 的激活，从而抑制FSC 合成细胞外基质(ECM) 的能力，并进一步研究发现，实验组肝细胞( HC) 内DNA 含量呈上升趋势，胶原蛋白总量及I，III，IⅤ型胶原和纤维粘连蛋白( FN) 含量及其合成受到抑制，从而抑制了HC 对ECM 的合成［11］。

第八节皂苷类

第八节皂苷类 一、皂苷的结构特点和分类 皂苷是一类结构复杂的苷类化合物，其苷元为具有螺甾烷及其有相似生源的甾族化合物或三萜类化合物。 大多数皂苷水溶液用力振荡可产生持久性的泡沫，故称为皂苷。 皂苷的结构可分为苷元和糖两个部分。如果苷元为三萜类化合物则称为三萜皂苷，苷元为螺甾烷类化合物，则称为甾体皂苷。 [讲义编号NODE70267800231300000101：针对本讲义提问] （一）三萜皂苷 1.定义：苷元为三萜类化合物，其基本骨架由6个异戊二烯（30个碳）单位组成。 分类：四环三萜（羊毛甾烷型、达玛烷型） 五环三萜（齐墩果烷型、乌苏烷型、羽扇豆烷型） 特点：多含羧基，显酸性。 [讲义编号NODE70267800231300000102：针对本讲义提问] [讲义编号NODE70267800231300000103：针对本讲义提问]

乌苏烷型E环为六元环，D/E为顺式，E环上两个甲基的位置有异，即位于C－19和C－20上乌苏酸 羽扇豆烷型E环为五元碳环，且在E环C－19位有异丙基以α构型取代 羽扇豆醇、白桦醇和白桦酸 [讲义编号NODE70267800231300000104：针对本讲义提问] 多项选择题 常见的三萜皂苷的类型有 A.羊毛甾烷型 B.螺旋甾烷型 C.乌苏烷型 D.齐墩果烷型 E.羽扇豆烷型 [讲义编号NODE70267800231300000105：针对本讲义提问] 配伍选择题 A.四环三萜 B.五环三萜 C.四环四萜 D.五环四萜 E.六环三萜 1.人参二醇是 2.人参三醇是 3.齐墩果酸是 4.羽扇豆烷是 [讲义编号NODE70267800231300000106：针对本讲义提问]

柴胡中柴胡皂苷a提取条件探讨

朱兰1，黄东萍1，宋英2 1成都中医药大学药学院，四川成都 （610075） 2成都中医药大学附属医院，四川成都（610072） E-mail：zhuzhu3227◎https://www.docsj.com/doc/7f13326611.html, 摘要：目的：考察柴胡中柴胡皂苷a提取率的影响因素。方法：考察提取溶媒，提取时间，粉碎程度等对柴胡皂苷a提取率的影响。结果：提取溶媒的影响最大。结论：柴胡皂苷a结构中的氧环易断裂，但采用碱醇提取能抑止其断裂，提取率高。 关键词：柴胡 柴胡皂苷a 提取 中图分类号：R28 1.引言 柴胡为伞形科植物柴胡(Bupleurum chinense DC.)和狭叶柴胡(B.scorzonerifoliunz Willd.)干燥根，具有疏散退热，疏肝解郁，升阳举陷之功效。柴胡皂苷a、d被认为是柴胡的主要药效成分，对整个药物的疗效起着举足轻重的作用。所以，在含有柴胡制剂的工艺研究过程中，应该以柴胡皂苷的含量为指标，找出影响其提取率的主要因素，确保制剂疗效，提高药材的利用度。 柴胡皂苷a、d具有13，28－氧环的结构，氧环不稳定，在酸的作用下醚键可能会断裂生成人工产物异环或同环双烯结构。所以，在柴胡皂苷a、d在提取过程中，受植物体内酸性成分的影响，转变为柴胡皂苷b1、b2[1]。又有人认为加热提取时间对柴胡皂苷a的含量影响较大，水提加热提取8h柴胡皂甙A已损失殆尽[2]。故笔者针对这些因素，对柴胡的提取工艺进行了考察。 2.材料和仪器 2.1试药与试剂 乙腈（色谱纯），甲醇（色谱纯），重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。柴胡皂苷a对照品，纯度>98％，由江西本草天工科技有限责任公司提供。 2.2 仪器 HP1100型高效液相色谱仪(美国惠普公司)，二极管阵列检测器。 3.柴胡皂苷a的含量测定 3.1色谱条件 色谱柱，Diamond C18柱(5μm,4.6×250mm)流动相：乙腈：水：甲醇（40：45：15），流速 - 1 -

柴胡皂苷的提取与结构鉴定

天然药物化学课程实验柴胡皂苷的提取及结构鉴定 XXXX XXXXXXXX

柴胡皂苷 ?【产品名称】柴胡提取物 ?【英文名称】Radix Stellaviae ?【拉丁名称】Radix Bupleuri ?【来源】本品为伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡Bupleurum scorzoner-ifolium Willd.的干燥根。按性状不同，分别习称“北柴胡”及“南柴胡”。春、秋二季采挖，除去茎叶及泥沙，干燥。 ?【功能主治】和解表里，疏肝，升阳。用于感冒发热，寒热往来，胸胁胀痛，月经不调，子官脱垂，脱肛。

柴胡皂苷理化性质 ? 1.物理性质 三萜皂苷分子大，不易结晶，大多数为白色或乳白色无定形粉末，仅少数为结晶体，皂苷元大多有完好的结晶。皂苷多数为具有苦味和辛辣味，且多具有吸湿性。三萜皂苷有降低水溶液表面张力的作用，其水溶液经常强烈振摇能产生持久性泡沫，不因加热而消失。三萜皂苷的熔点都很高，常在熔融前分解，分解点多在200℃-300℃之间。 ? 2.溶解度 三萜皂苷一般可溶于水，易溶于热水、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中，几乎不溶或难溶于丙酮、乙醚、苯等有机溶剂。皂苷在正丁醇或戊醇提取皂苷，可使之与亲水性杂质分离。三萜皂苷元能溶于石油醚、苯、乙醚、三氯甲烷等有机溶剂，而不溶于水。

?3.金属盐类反应 三萜皂苷的水溶液可与一些金属盐类，如铅盐、钡盐、 铜盐等产生沉淀。酸性皂苷水溶液，加入中性盐类即生成沉淀；中性皂苷水溶液则需加入碱式醋酸铅或氢氧化钡等碱性盐类才能产生沉淀。 ?4.显色反应 三萜皂苷在无水条件下，与强酸（硫酸、磷酸、高氯酸）、中强酸（三氯乙酸）或Lewis酸（氯化锌、三氯化锑）作用，会出现一系列显色变化或荧光。 ?5.光谱特征 除少数化合物如甘草酸、远志皂苷等外，大多数三萜化合物无明显的紫外吸收或仅在200 nm附近有末端吸收

柴胡皂苷代谢综述

柴胡皂苷代谢及药动学研究进展 柴胡属（Bupleurum L.）植物是伞形科（Umbelliferae）植物中的大属之一，据报道全世界有柴胡属植物约200种，主要分布在欧亚大陆及北非，我国已报道有42种，17种变种及7种变型。我国药典规定柴胡（Bupleurum Chinense DC.）或狭叶柴胡（B.Scorzonerifolium Willd.）为正品供药用，二者一般习称为“北柴胡”及“南柴胡”。我国柴胡资源丰富，北柴胡主产于辽宁、甘肃、河北、山东等地，南柴胡主要产于湖北、四川、江苏、安徽等地。柴胡性味苦，微寒，归肝胆实经，具有解表和里，疏肝解郁，升提中气之功效，可祛肠胃中结气、饮食积聚、寒热邪气而推陈致新，主治感冒发热、寒热往来、胸胁腹痛、黄疸肝炎及月经不调等症。近代药理研究表明柴胡不仅具有镇痛、解热、镇咳、抗炎、抗病原体、抗溃疡等作用，还具有保肝、调节免疫的功能，特别是对心血管系统也有显著作用。八十年代以来，国内外学者对柴胡进行了大量研究，尤其以柴胡皂苷为主。柴胡皂苷均为五环三萜类齐墩果烷型衍生物，实验证明，其具有解热、镇痛、镇静、抗炎、保肝、止咳、抗病毒、抗溃疡等多种药理活性。本文对近年来柴胡皂苷在代谢及药代动力学方面的研究进展进行综述，为进一步研究提供思路。 1.体外代谢研究 1.1.运用体外细胞、组织和器官模型进行吸收研究 传统中药的给药方式是口服，口服药物欲在体内发挥其特定的药效，关键在于吸收，小肠被认为是吸收的主要场所。然而，药物的吸收过程受着多种复杂动态屏障的影响，其中肠上皮作为一个重要的理化屏障和生化屏障限制了大量有活性的候选化合物的口服吸收生物利用度。肠上皮的理化屏障主要由细胞膜及细胞紧密连接组成。药物通过肠上皮的理化屏障的能力取决于药物的理化性质，如药物分子的大小、极性、亲脂性及剂型等。生化屏障由肠上皮表达的各种代谢酶(如细胞色素P450等)和多种外排系统(如P-糖蛋白等)组成，进一步限制着药物的肠吸收。为了克服这些障碍，必须弄清药物转运的基本机制。 在新药开发中用动物体内实验来评估新药的吸收的效果并不理想，因为整体动物实验变异性大，建立分析生物样本药物方法耗时长且所需药量大，周期长。

天然药化习题

天然药物化学习题（本科） ※选择题之一 A、七叶内酯的基本结构属于 1. 异香豆素类 2. 简单香豆素类 3. 呋喃香豆素类 4. 吡喃香豆素类 5. 其他香豆素类 B、主要含有木脂素成分的中药为 1. 厚朴 2. 人参 3. 薄荷 4. 柴胡 5. 三七 C、组成木脂素类化合物的基本碳架是 1. C6-C3-C6 2. (C6-C3) × 2 3. C6-C2-C5 4. C6-C1-C6 5. C6-C4 D、确定化合物分子式可以用 1. IR 2. MS 3. UV 4. 1H NMR 5. 13CNMR E、确定化合物功能基可以用 1. IR 2. MS 3. UV 4. 1H NMR 5. 13CNMR F、碳苷可以用哪种方法裂解 1. 强酸水解 2. 碱水解 3. 酶解 4. Smith降解 5. 弱酸水解 G. 单糖端基质子核磁共振氢谱化学位移在` 1. 1.5- 2.5 2. 3.5-4.5 3. 4.5-5.5 4. 5.5-6.5 5. 6.5-7.5 H. 单糖端基碳核磁共振碳谱化学位移在 1. 78-93 2. 93-110 3. 110-125 4. 125-145 5. 145-160 I 下列哪种成分不是多糖 1. 淀粉 2. 芦丁 3. 纤维素 4. 银耳多糖 5. 黄芪多糖 J、下列哪个成分FeCl3反应阴性 1. 芦丁 2. 槲皮素 3. 补骨脂素 4. 厚朴酚 5. 水飞蓟素 选择题之二 A、. 蒽醌类化合物紫外光谱特征为在200-500 nm范围内` 1. 有两个特征吸收 2. 有一个特征吸收 3. 有五个特征吸收 4. 有三个特征吸收 5. 没有吸收 B. 红外吸收光谱显示有两个羰基吸收，峰位分别为1675，1645 cm-1，可能的结构为 1. 1-OH蒽醌 2. 2-OH蒽醌 3. 1,4-二OH蒽醌 4. 1,5-二OH蒽醌 5. 1,8-二OH蒽醌 C. 蒽醌1H NMR谱中，α-H位于 1. δ 6.0 2. δ 8.0 3. δ 7.0 4. δ 9.0 5. δ 5.0

中药复方中柴胡皂甙A和D的LC_MS_MS研究

第21卷质谱学报 Vol. 21第3,4期 JOURNAL OF CHINESE MASS SPECTROMETRY SOCIETY No.3,4 中药复方中柴胡皂甙Ａ和Ｄ的 ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ研究 刘密新吴筑平杨成对刘国文 （清华大学分析中心 北京 100084) 某中药复方是由黄芩半夏等十一味药材精制而成 柴胡是其中的一味主要药材柴胡中柴胡皂甙类成分具有解热镇静而其中含量最高 ３］ 本文采用了LC/MS对复方中的柴胡皂甙类成分进行了分析 试剂和样品材料 １．１　仪器 １．２试剂和样品材料乙腈为色谱纯对照品Ｄ购于日本和光纯药工业株式会社 色谱柱 5 μm (4.6 mm × 250 mm)òò??-水 流速梯度洗脱 ６５　６５变为55 ２．２质谱条件[4 扫描方式检测方式电喷雾电压 0.87 L/min 1.25 L/min 5 L/min; 离子源温度 ３　实验方法 ３．１标准品溶液的配制Ｄ标准品 ３．２样品的处理置于100 mL 具塞锥形瓶 　冷却 ３．３标准品添加实验再以3.2方法进行处理 取柴胡皂甙A和D的标准品适量然后A 和D的水溶液分别装在两组1.5 mL 的miro-tube管中 两组试液超声30 min后 ３．５以柴胡皂甙Ａ和Ｄ的准分子离子　ｍ／ｚ７８２为检测对象 ４　结果与讨论 限于篇幅柴胡皂甙A和D标准品Ｄ的离子 77

第３，４期 中药复方中柴胡皂甙Ａ和Ｄ的ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ研究 Ｂ６ 78 流色谱图图3 酸性条件下处理后的柴胡皂甙A 和D 标准品的离子流色谱图及UV 色谱图柴胡皂甙A 和D 经中性 处理后的选择离子色谱图4.1从图1 可知 用此方法不能检测到 根据文献[2]可知 柴胡皂甙A B 1和 B 2的结构式如图2所示 复方中柴胡皂甙A 和D 的三个异构体中的两个为B 1和B 2 2?oú?í?°A 和D 在酸性环境中其中A 的主要产物 推断应为柴胡皂甙B 1从图5可知柴胡皂甙A 和D 在中性溶液中基本无变化 R 1R 1柴胡皂甙 A: R 1=Glc-3Fuc, R 2=α-OH 柴胡皂甙 B 1: R 1=Glc-3Fuc, R 2=α-OH 柴胡皂甙 D: R 1=Glc-3Fuc, R 2=β-OH 柴胡皂甙 B 2: R 1=Glc-3Fuc, R 2=β-OH 图2 柴胡皂甙A B 2 ??2?oúò?2?2éó?μ?ê????ó1¤ò? 在煎煮的过程中会导致水溶液酸性变强 由于柴胡皂甙A 和D 的药理活性大于B 1和B 2[3], 建议在复 方制备工艺过程中 Study on Saikosaponin A and D in a Chinese Traditional Medicine by LC/MS. Liu Mixin, Wu Zhuping, Yang Chengdui, Liu Guowen ( Analysis Center, Tsinghua University, Beijing 100084) Abstract To study Saikosaponins in a Chinese traditional compound medicine by LC/MS.Saikosaponin A and D, which were the bioactive components of Bupleurum falcatum L., were not found in the medicine. And three isomeric compounds of Saikosaponin A and D were detected instead. Saikosaponin A and D were found have turned into two other isomers after treated by acid water, but keep unchanged when treated by neutral water. Two of the isomeric compounds which found in the Compound medicine were determined as Saikosaponin B 1 and B 2 . This work is helpful for quality control of the medicine and also is useful for supervising the procedures of manufacture.

一测多评法同步测定柴胡药材中3种皂苷的含量

一测多评法同步测定柴胡药材中3种皂 苷的含量 （作者： _________ 单位：___________ 邮编：___________ ） 作者：黄帅，马淼，黄倩倩，符颖，魏建和，潘瑞乐 【摘要】目的首次将一测多评分析方法应用于柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d的含量测定，为柴胡药材多指标质量评价奠定基础。方法以柴胡皂苷a为对照品，建立药材中该成分与柴胡皂苷c及柴胡皂苷d 的相对校正因子，利用校正因子计算柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的含量，同时用外标法测定药材中3种成分的绝对含量，采用t-检验法对一测多评法的计算值与外标法实测值进行比较，评价一测多评法对柴胡药材中3种皂苷含量测定的准确性和科学性。结果在一定的线性范围内，柴胡皂苷a与柴胡皂苷c 及柴胡皂苷d的相对校正因子分别为0.735，0.944，且在不同的实验条件下重现性良好（RSD=0.70%，0.56%）;常规的外标法对柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的实测含量与一测多评法计算的含量没有显著性差异，经统计学t检验，P0.05，实验 所得校正因子可信。结论该方法使用一个对照品可同时测定柴胡药材中3种柴胡皂苷的含量，为柴胡药材的多指标质量评价及控制提供了科学依

据。 【关键词】一测多评；高效液相色谱；校正因子；柴胡；柴胡皂苷 中药的质量评价和控制是制约中药现代化、国际化发展的关键问题之一，也一直是中医药研究的难点和热点。然而，由于中药本身的复杂性，现行以单一活性成分或指标成分定性定量分析为核心的质量控制模式，已不能适应全面控制中药质量的要求，多指标综合质量控制 模式已成为中药质量评价和控制的发展趋势。由于多指标质量控制模 式需要足够量的化学对照品，而中药化学对照品分离难度大，有些单体结构不稳定难以分离或分离成本过高等因素，致使中药多指标成分质量控制仅限于科研，在实际生产应用中很难推广。王智民等［1］利用中药有效成分内在函数和比例关系，提出了“一测多评”的想法，即只测定1个成分(对照品易得者)，来实现对多个成分(对照品没有或难以供应)的同步监控，并已成功运用于木通3种有效成分及人参与三七药材中多种人参皂苷含量的同步测定［1，2］。 中药柴胡为伞形科(Umbelliferae)柴胡属(Bupleurum)植物，柴胡Bupleurum chinense DC.(北柴胡)及狭叶柴胡B. scorzonerifolium Willd.(南柴胡)的干燥根，是一味疗效显著的常用中药，其主要活性成分为柴胡皂苷a、柴胡皂苷d及柴胡皂苷c，目前柴胡的质量评价主要以这3种成分作为指标［3?5］。由于柴胡皂苷结构复杂，在酸性条件下不稳定等，其对照品制备难度非常大，致使柴胡药材及制剂的质量难以准确控制。本文以柴胡皂苷a (SSa)作为对照品，建立柴胡皂苷a与柴胡皂苷d (SSd)及柴胡皂苷c (SSc)的相对校正因子，并用

柴胡有效成分及药理作用分析

龙源期刊网 https://www.docsj.com/doc/7f13326611.html, 柴胡有效成分及药理作用分析 作者：穆箫吟 来源：《健康必读·下旬刊》2018年第06期 【摘要】目的：探讨柴胡有效成分和药理作用。方法：通过查阅、分析相关文献资料来 总结得出研究成果。结果：经过系统研究不难发现柴胡具有镇静、解热、抗病毒、抗肿瘤、抗炎、抗菌、降血脂和血糖、调节免疫力以及保肝的功效，值得在今后的临床治疗中使用和推广。 【关键词】柴胡；有效成分；药理作用 【中图分类号】R285 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2018）06-03--02 柴胡最早出现在《神农本草经》上，被称之为上品，其中在《本草求真》、《千金翼方》等著作中都对其进行系统详细的记载，柴胡作为常用的一种中医药物，外形类似于雨伞，柴胡性味苦、微寒，在多年研究中发现柴胡能够产生显著的解热、抗肿瘤、抗癫痫、降压以及抗炎的优势[1]，下面就针对柴胡的有效成分和药理作用展开研究。 一、柴胡有效成分分析 （一）柴胡皂苷。该种物质是从伞形科植物柴胡中提取而成的化学物质之一，属于有效 成分和化学物质，其解饿和化学结构的不同划分为柴胡皂苷a、b、c、d四中，其中a和d作 为主要的一种生活性物质，后者具有最强的药性，柴胡皂苷从柴胡根分离得到，地上部分相对较少，各种柴胡皂苷都有着相似的结构，难以顺利进行鉴别，一般都算是选择波普方式来实现鉴定。 （二）其他成分。黄酮类主要成分为黄酮醇类，后者主要为榭皮素、山奈酚、异鼠李素三种物质；木脂素类则是从柴胡属中分离得到的木脂素类化合物，大都是从叶这种分离得到，包括三种不同的结构类型，分别为单环氧木脂素、木脂内酯类以及双氧木脂素等；香豆素类则包括白芷花素和补骨内酯等[2]。 二、柴胡药理作用分析 （一）中枢神经系统。首先，具有显著的抗惊厥作用，实验选择50只小鼠，随机分为对照组和实验组，每组25只，其中实验组小鼠选择柴胡煎剂20g/kg进行实验，对照组不接受任何处理，1h之后对两组小鼠进行相同剂量和浓度的咖啡因皮下注射，15min之后对两组出现惊厥数的小鼠数量进行比较，明显发现实验组要超过对照组，走着就充分说明柴胡煎剂对于咖啡因惊厥具有对抗作用。柴胡还具有抗癫痫的功效，在实际研究中发现柴胡和龙骨牡蛎汤配合使用能够产生显著的抗癫痫效果，主要的作用机制就是和有效成分减轻氧自由基损伤程度，从而

柴胡的主要成分和作用

柴胡的主要成分和作用 核心提示：柴胡的主要成分和作用柴胡的化学成分柴胡其成分主要含柴胡皂苷(saikosapoins a、 b、 c、 d 四种)，甾醇，挥发油(柴胡醇、丁香酚等)，脂肪酸(油酸、亚麻油酸、棕…… 柴胡的化学成分 柴胡其成分主要含柴胡皂苷(saikosapoins a、 b、 c、 d 四种)，甾醇，挥发油(柴胡醇、丁香酚等)，脂肪酸(油酸、亚麻油酸、棕榈酸、硬脂酸等)和多糖等。 还含黄酮、多元醇、香豆素和微量元素等成份。大叶柴胡的根和茎中含有柴胡皂甙a、c、d、I，含量高达3.8%，并从中分离到4种多烯炔类化合物：柴胡毒素、柴胡酮醇、乙酰柴胡毒素和柴胡炔醇。这些化合物对光、热不稳定，易氧化。柴胡毒素和乙酰柴胡毒素有剧毒，它们的半数致死量分别为3.03 毫克/千克，3.13 毫克/千克。 柴胡含挥发油有： 2-甲基环戊酮(2-Methyl cyclopentaone)，柠檬烯(Limonene)，月桂烯(Myrcene)、反式-葛缕醇(Trans-tarved carveol)、长叶薄荷酮(Pulegone)、桃金娘烯醇(Myrtenol)、α-萜品醇(α-Terpineol)、芳樟醇(Linalool)、α-荜澄茄油烯(α-Cubebene)、反式-石竹烯 (Trans-caryophyllene)、长叶烯(Longi- folene)、努特卡酮(Nootkatone)、六氢法尼基丙酮(Hexahydrofarnesylacetone)、十六酸(Hexade- canoic acid)、戊酸(Pentanic acid)、己酸(Caproic acid)、庚酸(Heptylic acid)、辛酸(Caprylic acid)、壬酸(Pelargonic acid)、2-庚烯酸(2-Heptenic acid)、2-辛烯酸(2-Octenic acid)、2-壬烯酸(2- Nonenic acid)、苯酚(Phenol)、邻甲氧基苯酚(O- Methoxy phenol)、甲苯酚(Methyl phenol)、乙苯酚(Ethyl phenol)、百里酚(Thymol)、γ-庚酸内酯(γ- Heptalactone)、γ-辛酸内酯(γ-Decalac- tone)、玛索依内酯(Messoia lactone)、香草醛乙酸酯(Vanillin acetate)等. 亦含皂甙，如柴胡皂甙(Saikosaponin)a、b、c、d及柴胡甙元(Saikogenin)E、F、G,龙吉甙元(Longispinogenin). 尚含有机酸，如油酸(Oleic acid)、亚麻酸(Linolenic acid)、棕榈酸(Palmitic acid)、硬脂酸(Stearic acid)、廿四酸(Lignoceric acid)以及α-菠菜甾醇(α-Spinasterol)、春福寿草醇(Adonitol)、豆甾醇(Stigmasterol)、柴胡醇(Bupleurumol)、侧金盏花醇(Adonitol)等醇类物质.此外，还含白芷素(Ange- licin). 狭叶柴胡根含皂甙、脂肪油、挥发油、柴胡醇、春福寿草醇、α-菠菜甾醇.全草还含槲皮素、异槲皮素、芦丁、水仙甙等. 柴胡医学作用

天然药物化学的试题7-9章

天然药物化学的试题7-9章

第七章三萜及其苷类 一、选择题 （一）单项选择题（在每小题的五个备选答案中，选出一个正确答案，并将正确答案的序号填在题干的括号内） 1． OH HO O H H O H glc glc按结构特点应属于（） A．异螺甾烷型皂苷B．呋甾烷型皂苷C．四环三萜皂苷D．螺甾烷型皂苷E．五环三萜皂苷 2．皂苷具溶血作用的原因为（） A．具表面活性B．与细胞壁上胆甾醇生成沉淀C．具甾体母核D．多为寡糖苷，亲水性强E．有酸性基团存在 4．不符合皂苷通性的是（） A．分子较大，多为无定形粉末B．有显著而强烈的甜味C．对粘膜有刺激D．振摇后能产生泡沫E．大多数有溶血作用 5．三萜皂苷结构所具有的共性是（） A．5个环组成B．一般不含有羧基C．均在C3位成苷键D．有8个甲基E．苷元由30个碳原子组成 6．属于齐墩果烷衍生物的是（） A．人参二醇B．薯蓣皂苷元C．甘草次酸 D．雪胆甲素E．熊果酸 7．溶剂沉淀法分离皂苷是利用总皂苷中各皂苷（） A．酸性强弱不同B．在乙醇中溶解度不同C．极性不同 D．难溶于石油醚的性质E．分子量大小的差异 8．可以作为皂苷纸色谱显色剂的是（） A．醋酐-浓硫酸试剂B．香草醛-浓硫酸试剂C．三氯化铁-冰醋酸试剂D．三氯醋酸试剂E．α-萘酚-浓硫酸试剂 9． COOH H O 按结构特点应属于（） A．螺甾烷型皂苷元B．五环三萜类C．乙型强心苷元D．呋甾烷型皂苷元E．四环三萜类 10．可用于分离中性皂苷与酸性皂苷的方法是（） A．中性醋酸铅沉淀B．碱性醋酸铅沉淀C．分段沉淀法D．胆甾醇沉淀法E．酸提取碱沉淀法 11．三萜类化合物结构的共同特点是都有（） A．30个碳原子B．8个甲基C．6个甲基D．E环为五元环E．都在C3位成苷键 12．Liebermann-Burchard反应所使用的试剂是（） A．氯仿-浓硫酸B．三氯醋酸C．香草醛-浓硫酸 D．醋酐-浓硫酸E．盐酸-对二甲氨基苯甲醛