【开题报告】金黄色葡萄球菌产肠毒素的研究

开题报告

食品质量与安全

金黄色葡萄球菌产肠毒素的研究

一、选题的背景与意义

金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）(以下简称金葡)是动物和人类化脓感染中最常见的病原菌，在自然界中分布广泛，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可能存在［8］，因而食品特别是牛奶及奶制品受其污染的机会很多。金葡菌最常见的污染是通过化脓性皮肤疾病、上呼吸道炎症、口腔内疾病的人，以及健康人咽喉和鼻腔内带菌，经与食物接触或者通过空气传播而污染食物，并在其中繁殖和产毒。金葡菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶的数量，当金葡菌污染了含淀粉和水分较多的食品时，在温度等条件适宜时，经10小时左右即可产生相当数量的肠毒素，据估计，进食者吃下约100g的肠毒素A即可出现食物中毒的症状。因此食品和食品原料中污染有金葡菌就有可能产生肠毒素，就有食物中毒的潜在危险。葡萄球菌毒素（SE）是食物中毒最常见的原因之一，它引起的食物中毒症状主要是呕吐和腹泄，这些毒素蛋白质的结构主要为金葡菌的次生代谢产物。

虽然热处理可破坏葡萄球菌，但致病毒素对热稳定，可在热处理过程中保持甚至增加活性，100℃加热30分钟仍不失去其活性，因此金葡菌一旦污染了食品并在其中产生了肠毒素，用一般的烹调方法将活菌体灭活后，也不能将肠毒素破坏，必须加热100℃两小时才能破坏其毒性。而对于冷冻食品，由于其制作及保藏处于温状态，所以更易感染金葡菌。金葡菌肠毒素还有一种特点是对蛋白酶有耐性，在活性阶段可抗蛋白水解酶水解，故在水货道中也不易被破坏，因而食品极易被金葡菌污染极易引起食源性疾病的爆发。

金葡菌繁殖、是否产毒和产毒程度与食品的性质和组分密切相关，金葡菌污染食品后，如果被污染食品具备产毒条件时，就会产生肠毒素，对产品造成更进一步的污染，一般地，在PH6.0-

8.0、水分含量较多、蛋白质或者淀粉比较丰富的食品中，在温度等条件合适的情况下，该菌最容易繁殖并产生毒素，并且当氧分压较低时肠毒素较易形成，而冻虾仁具备金葡菌的繁殖和生产的主要条件。即使通过物理或者化学的方法将产口中的金葡菌完全灭活，但其中肠毒素仍不容易被破坏，因此产品也你存在肠毒素污染的危险。

如今，国内外贸易增多，国外食品和食品原料大量进入我国市场，检验局经常从进口的冷冻虾仁中检验出金葡菌，因此该产品也有存在金葡菌肠毒素的危险，而对于此肠毒素未做过相应的检测。因此研究冻虾仁中金葡菌和产生金葡菌肠毒素之间的关系，研究虾仁中金葡菌的产肠毒素条件，对于预示冷冻虾仁中是否有肠毒素，防止金葡菌产生肠毒素和改进虾仁后加工工序步骤有指导

作用。

金葡菌是一种重要的致病菌，当它污染食品后，在适宜的条件下会产生金黄色葡萄球菌肠毒素。因此，本实验拟调查研究冻虾仁中金黄色葡萄球的数量，按照国家标准方法GB/T 4789.10检测并计数。同时采用Mini-VIDAS的葡萄球菌肠毒素（SET）试剂盒提供的方法提取产品肠毒素，根据酶联荧光免疫分析原理检测是否污染肠毒素，研究金葡菌和肠毒素间存在的关系。在虾仁中感染接种入金葡菌，初步研究虾仁中金葡菌的产毒情况，包括培养时间和培养温度等条件的影响，为现实条件中的产品存放和安全食用供指导。

二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：

1、金黄色葡萄球菌致病性研究

金黄色葡萄球菌污染食物后，不仅使其腐败变质，而且部分细菌产生肠毒素，引起食物中毒。金葡菌具有多种蛋白质抗原，常用于食品检测的有葡萄球菌肠毒素和葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A,SPS）,葡萄球菌肠毒素是一组结构相关，毒力相近的胞外蛋白质，迄今为止从血清上已被鉴定的SE有10种：A，B，C，D，E，G，H，I，J，K型，其中C型抗原又根据等电点的不同分为3个严型（C1，C2，C3），其中肠毒素A是分子量为27KD的单体蛋白，它是葡萄球菌食物中毒最常见的类型，D，B，C次之［4］。肠毒素可与相应的抗毒素特异性结合。因此，采用其中之一有可检测标记的，特异性的单克隆或多克隆抗体，与样品中肠毒素结合，结果可采用比色、放免、荧光检测，或采用凝集、沉淀等肉眼可观察的免疫学现象来判断肠毒素的有无。

A蛋白存在于葡萄球菌的表面，具有种属特异性，无型别特异性，能与人与多种哺乳动物的免疫球蛋白IgG和Fc片段结合。因此可采用IgG包埋的乳胶颗粒，结合血浆纤维蛋白原与凝集因子的凝集反应，来检测金葡菌的有无。

按照国家标准GB/T4789.10-2008的附录B中，对金葡菌肠毒素的检测，采用酶联免疫分析法（ELISA）方法，预先将肠毒素的抗体（单价或多价抗体）与载体吸附。当加入待检样品后，如样品中含有肠毒素，即可与之特异性结合。再采用第二抗体（抗抗体）与抗原抗体复合物结合，形成抗原——抗体——抗抗体三层“夹心”结构，而抗抗体上标记有某种酶（如碱性磷酸酶、过氧化物酶等），最后加上该酶的底物使之显色。根据颜色深浅进行定性或定量检测。

利用该方法的已经有多种商品化的试剂盒，提供已吸附单价或多家抗体的微孔板，以及阴性、阳性对照等。此法灵敏（0.5mg/mL），专一，操作简单而快速（约4个小时）。但其缺点是由相关抗原引起的交叉反应或内源性过氧化物干扰酶，肠毒素蛋白可能会凝集，而降低反应原性（仍保持毒性），造成假阴性。

2、肠毒素检测（ELFA）

VIDAS SET2试剂盒是用自动化VIDAS设备进行酶联荧光免疫分析（ELFA）以测定葡萄球菌肠毒

素。小型VIDAS检测金黄色葡萄球菌毒素肯有灵敏度高，特异性强，操作简单方便等优点。

VIDAS食品自动完成全冲毁实验程序。将食物提取物加于试剂条上，样品将在SPR内定时循环，样品中的葡萄球菌肠毒素与包被在SPR内侧的抗葡萄球菌肠毒素单克隆抗体结合，未结合的样品则被洗去。抗体——碱性磷酸复合物通过SPR循环并与SPR内壁上的任何肠毒素抗原结合，最后洗去未结合复合物。荧光底物（4—甲基—香琣素—磷酸酯）在SPR内外反复循环，SPR上存留的酶催化底物分解为荧光底物（4—甲基—伞形酮）。VIDAS的光扫描仪在450nm处自动测定荧光产物。试验结束时，计算机自动分析结果并打印报告，得出检测并与阈值比较，得出最终解释（阴性或阳性）。

该方法只需简单的提取后，VIDAS SET2试剂盒可直接用于筛选食物中任何一种肠毒素的存在，实验室全自动化，80分钟可获得结果。

该方法可以弥补国家标准中的检测金黄色葡萄球菌肠毒素时的提取困难，试剂来源难，保存时间短，毒素检测样本少而导致试剂盒过期，操作繁等问题而无法检测此毒素的空白，弥补了用金黄色葡萄球菌计数来确定是否为此菌引起食物中毒过程中由于标本量太少及一些特殊改善标本而无法进行计数的缺陷。尽管目前用小型VIDAS检测金黄色葡萄球菌肠毒素还不能分型，但对判断此菌引起民的食物中毒的诊断起到简便操作并明示作用。

三、研究的方法与技术路线：

1 细菌分离检验

金葡菌的检测：金葡菌能耐受10%～15%的氯化钠，对温度适应强，最适温度35-36度。多数能产生溶血素、血浆凝固酶，以及卵磷脂，热稳定核酸酶、磷酸酶、脲酶，还原亚碲酸钾、还原硝酸盐，发酵甘露醇产酸、触酶阳性、产生金黄色或柠檬色色素。

1.1金葡菌的定性检测

金葡菌的检测根据GB/T4879.10方法来检测。样品接种。4%氯化钠胰蛋白胨肉汤，培养后转接Baird-Parker琼脂和血平板。

金葡菌在Baird-Parker平板上典型菌落为圆形光学的灰黑色菌落（因还原亚碲酸钾生产碲，所以菌落呈灰黑色），直径1—3mm，边缘颜色较浅，周围有透明圈（因含卵磷脂酶分解培养基中的卵黄所致）。在血平板上典型菌落为圆形光滑的金黄色或者黄白色菌落。直径2—3mm，周围有溶血圈（因含溶血素所致）。

血浆凝固酶试验：将可疑菌落转接到营养肉汤中，培养物加入到1：4的兔血浆中36度放置2—6小时，试管中呈凝块者，为血浆凝固酶试验阳性，同时以阳性菌株及内分泌作为对照，血浆凝固酶试验采用商品化的北京陆桥公司生产的冻干血浆。

可疑金葡菌进行镜检：为革兰氏阳性球菌，直径0.8~1um的不规则成堆排列，类似葡萄串，无芽孢。

挑平板上的可疑菌进行血浆凝固酶实验并进行VITEK生化鉴定。报告样品中是否含带金黄色葡萄球菌。

1.2 虾仁产品中的金葡菌的定量检测

取25g样品于225ml生理盐水中稀释均匀，并取该1ml十倍稀释液涂布于Baird-Parker琼脂平板培养48小时进行可疑菌的计数及鉴定，可疑菌的判断同上。

可疑菌同时分离纯化，接种于血平板上，并进行VITEK生化鉴定。

根据结果报告样品的金黄色葡萄球菌含量（CFU/g）。

2肠毒素中的毒素提取与检测

毒素提取后采用酶联免疫荧光分析方法，用全自动免疫荧光分析仪（mini-VIDAS）检测。

提取的方法：

生肉、海产品与熟肉：

1. 称取25克的样品加入25ml蒸馏水。

2. 反复混匀以得到均匀悬液，如悬液过稠，再加25ml蒸馏水混匀。

3. 回收全部的提取液。

4. 使用5%的盐酸调整PH值至4.0。

5. 18～25摄氏度静置15～30分钟。

6. 将悬液18～25摄氏度，3000—5000转，15min离心。

7. 使用1%氢氧化钠调整滤液P至7.5—8.0之间。

取0.5ml离心上清液作为毒素样品，放入VIDAS SET2试剂条的样品孔中，测定肠毒素。80min后自动出结果。判断肠毒素有无及其强弱程度。

综合以上实验得出结论。

四、总体安排与进度：

2010年11月查找资料，撰写综述和开题报告。开题答辩。

2010年12月翻译外文文献

201年1月确定实验方案，准备材料和实验仪器，开展实验。

2011年2至3月处理数据

2011年5月撰写毕业论文，准备论文答辩

五、主要参考文献：

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金黄色葡萄球菌的耐药性分析

金黄色葡萄球菌的耐药性分析 目的：了解医院住院患者金黄色葡萄球菌感染分布及耐药情况，为临床合理用药提供参考依据。方法：收集2013年1月至2014年12月临床分离的106株金黄色葡萄球菌，采用纸片扩散法（K-B法）测定15种抗菌药物的敏感情况。结果：106株金黄色葡萄球菌，其中MRSA为66株（62.3%），MSSA40株（37.7%），金黄色葡萄球菌对多种抗菌药物呈普遍耐药。结论：MRSA对大部分抗菌药物具有较高的敏感性，而MSSA表现为多重耐药性，未发现耐万古霉素MRSA菌株，医院金黄色葡萄球菌对多种抗菌药物耐药。 标签：金黄色葡萄球菌；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；耐药性 金黄色葡萄球菌是重要的医院感染菌，能引起皮肤软组织[1]、内脏器[2]、全身感染[2]。由于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）同时对多种抗生素耐药，使治疗由它所引起的感染和控制其传播变得十分困难。本文将分析我院近2年中106株金黄色葡萄球菌医院感染病历的临床分布及药敏情况。 1 材料与方法 1.1 菌株来源 106株金黄色葡萄球菌来自2013年1月至2014年12月本院临床各科室送检的住院患者的标本，包括呼吸道分泌物、创面分泌物、尿液、胸水、腹水等。 1.2 分离鉴定 按照《全国临床检验操作规程》第3版进行细菌的分离鉴定，药敏纸片及M-H琼脂均为法国生物梅里埃公司配套产品。 1.3 药敏试验 采用K-B琼脂纸片扩散法检测对15种抗生药物的耐药性。 1.4 质控菌株 金黄色葡萄球菌ACTT25923购于内蒙古临床检验中心。 2 结果 2.1 标本分布 106株金黄色葡萄球菌主要来自呼吸道分泌物（占53.5%），创面分泌物（占21.4%）、尿液（占9.4%）、胸水（占8.6%）、腹水（占4.0%）、其它（占3.1%）。

金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌革兰氏染色显微照片 金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。 目录 简介 流行病学 引发病症 球菌检验 球菌控制 感染处理 限量存在 简介 金黄色葡萄球菌细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，相反，阴性菌没有细胞壁结构，所以紫色被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色。金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素。而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显。这也是由肽聚糖层的厚度和结构造成的。新出现的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，被称作超级细菌，几乎能抵抗人类现在所有的药物，但是万古霉素可以对付它。典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm 左右，显微镜下排列成葡萄串状。

显微图像 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。 流行病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。 金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位，常成为污染源。 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不密封，运输过程中受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：

金黄色葡萄球菌检测方法

金黄色葡萄球菌检测方 法 Revised as of 23 November 2020

金黄色葡萄球菌检测方法 1.纸片法 目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。采用快速测试片检测具有显着的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。 技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。 技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。 此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。使目视效果下降，导致计数偏低。 2.免疫学方法 各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。 免疫学方法包括下面两个部分： （1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。毒素抗体优势在于敏感度高，易于检查，缺点毒素种类多，检测其中几种不具有普遍性。毒素分离工艺复杂，要得到纯毒素成本比较高。 （2）免疫学方法技术分析：上述免疫学技术应用最多的是酶联免疫技术和胶体金侧向层析技术。酶联免疫技术广泛应用于实验室检测，由于一次可以检测多个样本，此技术多用于体外诊断，目前也广泛用于食品安全。胶体金技术由于操作简单，检测适度快等优势，在食品安全领域广泛用于现场快速检测。 基于免疫学方法的技术主要分为：酶联免疫技术、胶体金侧向层析技术、免疫荧光技术、免疫沉淀技术、乳胶凝集技术、免疫磁珠技术。 3.分子生物学方法 金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：肠毒素、血浆凝固酶、溶血素、杀白细胞素、表皮溶解毒素、毒性体克综合重量毒素I 等。而这些致病因子基因的鉴定(包括耐药性相关基因、毒素基因、酶基因及多

金黄色葡萄球菌肠毒素产量的优化工艺

金黄色葡萄球菌肠毒素产量的优化工艺 金黄色葡萄球菌肠毒素产量的优化工艺 杨玉涛 专业：食品科学与工程学号：2007464211 指导老师：张英慧 摘要：实验旨在探求金黄色葡萄球菌肠毒素的产生情况、测定方法以及制备最佳工艺。选取标准金黄色葡萄球菌纯化菌种，依国标GB/T4789-10-94液体透析培养法进行肠毒素的培养提取，根据肠毒素的蛋白质特性，利用紫外光分光光度法跟踪肠毒素的产量曲线。结果显示在产毒培养48h，振荡培养温度为40℃，菌种培养30h条件下肠毒素产量最大，单个菌落肠毒素产量为14.505mg。生产工艺中产毒培养时间和振荡培养时间以及菌种培养时间对肠毒素产量的影响较大。 关键词：金黄色葡萄球菌；肠毒素；产量；优化工艺 Abstract：The purpose was to explore the production situation, assay method and the preparation technology of staphylococcal enterotoxins. The standardard production method of Staphylococcus aureus was chosen according to GB/T4789-10-94, and the output was assessed by ultraviolet

spectrophotometry. The results showed that the largest production of staphylococcal enterotoxin was 14.505mg per colony. The optimium process was shaking toxicogenic incubation at 40℃for 48 h, followed by strain incubation for 30 h. And the time of oxicogenic incubation, shaking culture and strain incubation exerted great influence. Key words: Staphylococcus aureus; Staphylococcal enterotoxins; output; optimium process 恶性肿瘤（简称肿瘤）是威胁人民健康、危及人民生命的严重疾病。据统计，对于最佳工作时期（35-60岁）人群死因调查中肿瘤居首位。在我国，近年来癌症死亡率顺位上升，城市已是第一位，农村是第三位。人们经过一个多世纪的努力，还是没有征服癌症。 1981年，世界卫生组织癌症顾问委员会指出：利用掌握的方法和技术，1/3的癌症是可以预防的，1/3的癌症如早期诊断是可以治愈的，1/3的癌症是可以减轻痛苦，延长寿命的。30多年已经过付出了，总体上来说这个论断没有成为现实，世界范围的癌症发病率和死亡率仍在上升。但随着医学的进步和发展，使大约80%~90%的癌症得到确诊，而且使1/3的癌症患者能在早期被发现。这些早期癌症患者中，90%可以得到根治。

金黄色葡萄球菌的危害评估

金黄色葡萄球菌的危害评估 （一）一般情况：葡萄球菌感染是一组常见的细菌感染性疾病，包括皮肤软组织感染、中毒性休克综合征、败血症、心内膜炎、肺炎、肠炎、脑膜炎及骨髓炎等。在医院感染的致病菌中，金黄色葡萄球菌(Staphylococcal aureus，金葡萄)仅次于大肠杆菌，处于第二位。金葡菌感染常对多种抗菌药物耐药。金葡菌以其存在的普遍性、致病的多样性及对抗菌药物的耐药性，已成为细菌性感染的主要病原之一。金葡菌感染一般呈散发，但也可呈流行或爆发，后二者多为毒力较强的菌株引起。全年均可发生，以夏秋季发病较多。目前血浆凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negative staphylococcus, CNS)感染有逐渐增多的趋势。皮肤软组织感染、食物中毒、尿路感染及骨髓炎等预后良好。败血症在有效药物处理下病死率仍高，约30%。脑膜炎中死亡者可达50%～60%。治疗早晚对肺炎患者的影响较大，在积极治疗下病死率为15%～20%，否则可达50%左右，幼儿和老年患者的预后较差。当前TSS的病死率约3%。到目前为止，人类还未研制出有效的疫苗。 （二）致病性：金葡菌能产生金黄色色素，血浆凝固酶阳性，能分解甘露醇，致病性强。金葡菌产生多种外毒素和酶，如α溶血毒素除引起溶血外，尚可损伤血小板、巨噬细胞和白细胞，使血管平滑肌收缩而导致局部组织缺血坏死；杀白细胞素能破坏白细胞和巨噬细胞；血浆凝固酶可使血浆中纤维蛋白沉积于菌体表面，从而阻止吞噬细胞的吞噬和杀灭作用，并有利于血栓形成；透明质酸酶可溶解组织

间质中的透明质酸，易于病菌扩散。此外，某些菌株可产生肠毒素(有A、B、C1、C2、D和E6种)、剥脱性毒素、溶纤维蛋白酶、过氧化氢酶、磷酸酶及溶脂酶等。金葡菌主要寄殖于鼻前庭粘膜、腋下、腹股沟及会阴部等处，偶也寄生于皮肤、肠道、阴道及口咽部等，人群带菌者相当普遍，在一般人群中约15%正常人鼻咽部带菌，医护人员带菌率约30%，免疫缺陷疾病患者中带菌率也高。入侵途径主要为受损伤的皮肤粘膜，也可因进食含肠毒素的食物，或吸入染菌尘埃而致病。病房中凡可引起尘埃飞扬的操作(如整理床铺)，均易导致葡萄球菌的传播。染菌手直接接触易感者为传播金葡菌感染的重要途径，空气传播等其他途径较少见。医院中较易发生金葡菌感染的为有创伤的外科和烧伤科患者，还有营养不良，免疫缺陷、恶性肿瘤、肺部疾患、糖尿病及尿毒症等疾病患者，以及新生儿和老年人等。农民、工人、儿童因受伤机会多而易患金葡菌感染。病后免疫力不强，可反复感染。（三）抵抗力：本菌广泛分布于自然界，存在于正常人皮肤、鼻咽部及肠道等部位，对外界抵抗力较强，加热80℃30分钟可杀灭。金葡菌产生的肠毒素为一组热稳定性单纯蛋白质，能耐受100℃30分钟加热不被破坏。

金黄色葡萄球菌危害评估报告

宁城县中蒙医院 SOP文件金黄色葡萄球菌危害评估报告 一．危害程度分类 金黄色葡萄球菌是最常见的化脓性球菌，因排列的规则形似葡萄状，故称之为金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌为需氧或兼性厌氧，广泛分布于自然界中。如空气，土壤，水以及日用物品，在卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中将其列为第二类病原微生物，属高致病性病原微生物，引起人和动物的化脓性疾病。 二．背景资料 金黄色葡萄球菌呈球形，直径微米，无鞭毛、无芽孢，革兰氏染色呈阳性，对营养要求不高，在普通培养基上生长良好，最适生长温度37度，PH为，耐盐性强，培养24小时出现，表面光滑、湿润，有光泽，不透明菌落（1-2mm），产不同色素，如金黄、白色、柠檬色，对湿热敏感，在100度煮沸5分钟后杀死，浓汁中，紫外线敏感致病性和感染数量：金黄色葡萄球菌之所以能引起疾病是其产生多种毒素和酶，主要有a溶血毒素b杀白细胞素c肠毒素d剥脱性毒素e凝固酶f其他物质引起的局部的蜂窝组织炎等化脓性感染，还可引起如肺炎，心包炎，骨髓炎，肾盂肾炎等重症者可发展呈脑膜炎，败血症，脓毒血症，目前，耐药性菌株的增多，已成为医院内交叉感染的一个急待解决的问题 金黄色葡萄球菌有多种传播途径，主要为吸入带菌的飞沫及接触

带菌的感染伤口引起肺炎及伤口化脓性感染，传染源为带菌的物品，空气等。传播途径主要为接触。金黄色葡萄球菌对实验室人员以及其他可能暴露在实验室传染性气溶胶中的人员是一种危害，尤其是有伤口暴露在空气中，其传染的实验室人员发病率比其他人群高。三．实验活动及及其危害性与预防措施 四、实验室实验活动危害评估本实验室主要从事金黄色葡萄球菌微生物学的实验内容有： 1、金黄色葡萄球菌的培养与耐药检测，生化分型实验 2、金黄色葡萄球菌的涂片染色 金黄色葡萄球菌培养传代，药物敏感实验，生化分型、涂片、染色等工作中可产生气溶胶，培养物制剂的溅出，泼洒和容器的破碎等也可造成严重污染。 拟采取防护措施： 1在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其高压灭菌或按感染性废物处理。避免感染性物质的扩散。 2 为了避免转移物质洒落，微生物接种环的直径应为2~3mm并完全封闭，手柄的长度应小于6cm以减小振动，或者采用一次性灭菌棉签。 3 用封闭式微型电加热器消毒接种环能够避免在本生灯的明火上加热所引起的感染性物质爆溅。 4 样品容器应当坚固，正确地用盖子或塞子盖好后应无泄漏。在容器外部不能有残留物。

金黄色葡萄球菌的测定

金黄色葡萄球菌的测定 1 卫生学意义 金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。 2 检验方法 2.1 术语与定义 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。 2.2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： （1）恒温培养箱：36℃±1℃。 （2）冰箱：2℃～5℃。 （3）恒温水浴箱：37℃～65℃。 （4）天平：感量0.1g。 （5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 （6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。 （7）无菌培养皿：直径90mm。 （8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.3 培养基和试剂 （1）7.5%氯化钠肉汤 1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4； 2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。 （2）B－P琼脂平板 1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.2 2）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。 3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。分装每

【开题报告】金黄色葡萄球菌产肠毒素的研究

开题报告 食品质量与安全 金黄色葡萄球菌产肠毒素的研究 一、选题的背景与意义 金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）(以下简称金葡)是动物和人类化脓感染中最常见的病原菌，在自然界中分布广泛，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可能存在［8］，因而食品特别是牛奶及奶制品受其污染的机会很多。金葡菌最常见的污染是通过化脓性皮肤疾病、上呼吸道炎症、口腔内疾病的人，以及健康人咽喉和鼻腔内带菌，经与食物接触或者通过空气传播而污染食物，并在其中繁殖和产毒。金葡菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶的数量，当金葡菌污染了含淀粉和水分较多的食品时，在温度等条件适宜时，经10小时左右即可产生相当数量的肠毒素，据估计，进食者吃下约100g的肠毒素A即可出现食物中毒的症状。因此食品和食品原料中污染有金葡菌就有可能产生肠毒素，就有食物中毒的潜在危险。葡萄球菌毒素（SE）是食物中毒最常见的原因之一，它引起的食物中毒症状主要是呕吐和腹泄，这些毒素蛋白质的结构主要为金葡菌的次生代谢产物。 虽然热处理可破坏葡萄球菌，但致病毒素对热稳定，可在热处理过程中保持甚至增加活性，100℃加热30分钟仍不失去其活性，因此金葡菌一旦污染了食品并在其中产生了肠毒素，用一般的烹调方法将活菌体灭活后，也不能将肠毒素破坏，必须加热100℃两小时才能破坏其毒性。而对于冷冻食品，由于其制作及保藏处于温状态，所以更易感染金葡菌。金葡菌肠毒素还有一种特点是对蛋白酶有耐性，在活性阶段可抗蛋白水解酶水解，故在水货道中也不易被破坏，因而食品极易被金葡菌污染极易引起食源性疾病的爆发。 金葡菌繁殖、是否产毒和产毒程度与食品的性质和组分密切相关，金葡菌污染食品后，如果被污染食品具备产毒条件时，就会产生肠毒素，对产品造成更进一步的污染，一般地，在PH6.0- 8.0、水分含量较多、蛋白质或者淀粉比较丰富的食品中，在温度等条件合适的情况下，该菌最容易繁殖并产生毒素，并且当氧分压较低时肠毒素较易形成，而冻虾仁具备金葡菌的繁殖和生产的主要条件。即使通过物理或者化学的方法将产口中的金葡菌完全灭活，但其中肠毒素仍不容易被破坏，因此产品也你存在肠毒素污染的危险。 如今，国内外贸易增多，国外食品和食品原料大量进入我国市场，检验局经常从进口的冷冻虾仁中检验出金葡菌，因此该产品也有存在金葡菌肠毒素的危险，而对于此肠毒素未做过相应的检测。因此研究冻虾仁中金葡菌和产生金葡菌肠毒素之间的关系，研究虾仁中金葡菌的产肠毒素条件，对于预示冷冻虾仁中是否有肠毒素，防止金葡菌产生肠毒素和改进虾仁后加工工序步骤有指导

金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌 一、生物学性状 1、形态与染色 革兰阳性，球形，呈葡萄串状排列。无芽孢、无鞭毛，体外培养时一般不形成荚膜，少数菌株的细胞壁外层可见有荚膜样黏液物质。在某些化学物质（如青霉素）作用下，可裂解或变成L型。 2、培养特性 需氧或兼性厌氧。营养要求不高，在普通培养基中，37℃生长良好。属内不同菌种可产生金黄色、白色或柠檬色等不同颜色的脂溶性色素并使菌落着色。致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，于血琼脂平板上生长后，在菌落周围还可见完全透明溶血环（β溶血环）。 3、生化反应 多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。致病性菌株能分解甘露醇，产酸。触酶阳性，可与链球菌相区分。 4、抗原 （1）葡萄球菌A蛋白（SPA）：90%以上金黄色葡萄球菌细胞壁表面存在SPA 蛋白。在体内，SPA与IgG结合后所形成的复合物还具有抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等多种生物活性。 （2）荚膜多糖：利于细菌黏附道细胞或生物合成材料表面（如生物性瓣膜、导管、人工关节等）。 （3）多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁。金黄色葡萄球菌中可提出A群的多种抗原，其化学组成为磷壁酸中的N-乙酰葡糖胺核糖醇残基。 5、抵抗力 葡萄球菌对外界理化因素的抵抗力较强。在干燥的脓汁或痰液中科存活2～3个月；加热60℃1小时或80℃30分钟才能将其杀死；耐盐，于100～150g/LNaCl 培养基中仍能繁殖。对青霉素、金霉素、红霉素和庆大霉素高度敏感，对链霉素中度敏感，对磺胺、氯霉素敏感性差。该菌易产生耐药性，对青霉素G的耐药菌株已达90%以上，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），已成为医院感染最常见的致病菌。耐药性的产生机制与细菌的质粒或与细菌细胞壁成分改变和合

金黄色葡萄球菌耐药的现状及临床治疗对策

金黄色葡萄球菌耐药的现状及临床治疗对策 孙宏莉徐英春 单位：中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院 摘要：金黄色葡萄球菌，尤其是甲氧西林或苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）是引起院内感染的多重耐药菌。目前MRSA已逐渐成为全世界院内感染的主要病原菌。目前在许 多国家仍在增长，MRSA几乎对所有?-内酰胺类抗生素耐药，甚至累及到红霉素，环丙沙 星和庆大霉素。本文对金黄色葡萄球菌的耐药现状、耐药机制以及金黄色葡萄球菌感染的 危险因素和治疗对策进行了简要介绍。 关键词：金黄色葡萄球菌耐药现状耐药机制危险因素治疗对策 答 1. 甲氧西林或苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌（ MRSA ）是引起院内感染的多重耐药菌。是吗？ A.是 B.不是 2. 根据 NCCLS 判定标准，对于金黄色葡萄球菌，万古霉素的MIC≤4ug/ml 时为敏感。对吗？ A.不对 B.对 金黄色葡萄球菌，尤其是甲氧西林或苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌（ MRSA ）是引起院内感染的多重耐药菌。在第一个耐青霉素酶的β－内酰胺类抗生素甲氧西林用于临床治疗葡萄球菌感染不久， 1961 年在英国发现了世界首例 MRSA 。从此， MRSA 逐渐成为全世界院内感染的主要病原菌。目前在许多国家仍在增长， MRSA 几乎对所有β- 内酰胺类抗生素耐药，甚至累及到红霉素，环丙沙星和庆大霉素。 1996年在日本首次发现了MRSA对万古霉素敏感性下降的菌株，即万古霉素中介的金黄色葡萄球菌（VISA）。VISA 的出现预示着万古霉素治疗葡萄球菌感染的临床疗效下降，随之万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌（VRSA）临床株是否会分离到，成为人们监测和关注的热点。如果葡萄球菌一旦对万古霉素耐药，临床将如何治疗？

金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌

金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。它在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因此，它很容易就能够污染一些食物来源，从而引发疾病。特别是金黄色葡萄球菌肠毒素，它是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，中国金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件也时有发生。误食金葡菌污染的食品,可引起呕吐和腹泻等症状。因此，在本篇文献中，我们选取了关于金黄色葡萄球菌肠毒素的一部分内容进行了较为细致的思考。 文中提到，肠毒素能够引起人和哺乳动物肠胃道毒性反应。但是，金葡菌肠毒素同时也是一种典型的超级抗原。在免疫反应中，只需极微量，就能通过一种独特的机制，使之产生大量细胞因子和细胞毒性物质。从而抑制异常分裂的癌症细胞生长而可能起到治疗癌症的效果。 那么，肠毒素治疗肿瘤的机制是什么呢？ 首先，肠毒素是一种超级抗原。超抗原是一类只需极低浓度就能激活大量T细胞克隆或B细胞克隆、产生极强免疫效应的物质。它远超普通抗原的多克隆激活能力，可视其为具非特异性免疫原性但无免疫反应性的抗原。它在体内能够活化CD4 + T细胞，这种细胞能分泌多种细胞因子。它们不仅能够直接或间接地杀伤肿瘤细胞，而且可以增加肿瘤细胞表达MHC 抗原分子，增强肿瘤细胞刺激宿主免疫系统的能力; 另一方面，这些细胞因子又刺激T细胞进一步增殖分化，而增殖分化的T细胞又将产生更多的细胞因子与细胞毒作用，共同导致肿瘤细胞的破坏溶解，从而形成级联效应，达到对肿瘤的治疗作用。 除了对肿瘤的治疗作用，肠毒素在一定浓度和不同途径给予时，还具备着非特异性促进人和哺乳动物细胞的有丝分裂效果。特别是对损伤部位的组织有促进分裂和生长作用，能够致使损伤组织快速愈合。故有利于对损伤组织的治疗。但这种反应作用的机制我们小组尚且还无法解释，希望在之后的课程中能够有所启发。

实验七--食品中金黄色葡萄球菌的检验

实验七食品中金黄色葡萄球菌的检验 一、实验目的要求 1、了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。 2、掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 3、掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。 4、掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。 二、原理 葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。 三、试剂和仪器 （一）最先准备的器材 规格名称数量用途 1、500ml广口瓶1个稀释样品 2、500ml三角瓶1个制生理盐水 3、250ml三角瓶3个制培养基等 4、10×100mm试管6支血浆凝固酶试验 5、1ml移液管2支 6、10ml移液管 2 支 7、直径为90 mm平皿12套制血平板B-P平板 8、250ml量筒1支 （二）应灭菌的其它器材 剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量 （三）应制备的培养基 培养基总量所用容器 1.无菌水50ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 2.0.85%生理盐水70ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 3.0.85%生理盐225ml/瓶1瓶500ml三角瓶 4.7.5%NaCl肉汤50ml/瓶1瓶250ml三角瓶

金黄色葡萄球菌危害程度评估报告

金黄色葡萄球菌的危害程度评估报告 一、生物学特性 金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属，可引起多种严重感染。金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。 二、危害程度分类 根据中华人民共和国卫生部制定《人间传染的病原微生物名录》该菌危害程度为第三类。 三、致病性和感染剂量 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶，有报道目前出现越来越多的耐药菌株，MRSA即耐甲氧西林金黄色葡萄球，菌致病性也随着变强。 四、暴露的潜在后果 暴露后可能引起感染，菌量大时可使实验人员出现皮肤软组织感染、全身性感染、呼吸道感染、中毒、肠炎等。被感染后，成为传染源，可能对周围及环境造成污染，应及时得到治疗和控制。 五、感染途径 通过污染食品和水源经口传播，也可通过呼吸道和接触传播。 六、微生物在环境中的稳定性 葡萄球菌是无芽胞菌中抵抗力最强者，而干燥可达数月，加热80℃30min才被杀死。5％石炭酸，0.1％升汞10～15min死亡。1:100000～1:200000龙胆紫溶液能抑制其生长。对磺胺增效剂、青霉素、红霉素等较敏感，但耐药株逐年增多，MRSA即为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。 七、浓度和浓缩标本的容量

金黄色葡萄球菌及其检验

我们以SN标准中的最近似值(MPN)测定法来进行讲解： 这种方法适用于检测认为带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的食品中的少量金黄色葡萄球菌。 1、样品制备： 固体或半固体食品: 以无菌操作称取25g样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液。 液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。 供计数检验时,可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。 2、选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取1 mL稀释样品液，接种3管含10％氯化钠why?还记得么？金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。因此，这事实上是一种选择性的增菌。胰蛋白胨大豆肉汤。样品的最高稀释度必须达到能获得阴性终点,置36±1℃培养48 h。 3、用3 mm接种环,从有细菌生长的各管中移取1 环,划线接种于表面干燥的Baird- Parker琼脂平板,置36±1℃培养45～48h。 4、从有细菌生长的每一平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落,移种到肉汤培养基中,置36±1℃培养20～24 h。 5、取肉汤培养物0.3mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆于8mm×100mm试管内充分混合,置36±1℃培养,定时观察是否有凝块形成,至少观察6 h,以内容物完全凝固,使试管倒置或倾斜时不流动者为阳性。试验中需同时做巳知阳性和阴性对照。对可疑结果,应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验{如耐热核酸酶试验等} 加以证实。 6、报告结果：根据凝固酶试验结果查最近似值(MPN)表,报告金黄色葡萄球菌的MPN/g (mL)。 附：怎样在平板上进行细菌的划线分离。 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法

金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些

如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 生活常识分享金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些 导语：金黄色葡萄球菌感染是皮肤化脓性感染的最常见致病菌，也是四种最常见的医院获得性感染的病原之一。其传播方式在医院内部主要是经健康医务人 金黄色葡萄球菌感染是皮肤化脓性感染的最常见致病菌，也是四种最常见的医院获得性感染的病原之一。其传播方式在医院内部主要是经健康医务人员暂时寄居细菌的手进行传播，尤其是在新生儿童症监护病房(NICU)金葡菌是最常见的毒力最强的致病原。那么金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些呢？看过下面的文章相信你就会明白。 金黄色葡萄球菌脑膜炎是指由金黄色葡萄球菌引起的脑膜炎，起病急，常有全身感染中毒症状，如畏寒、发热，伴持久而剧烈的头痛，颈强直较一般脑膜炎明显，除有脑膜炎症状外，尚有局部感染病灶，败血症患者还有其他迁徙性病灶，出现皮疹，如荨麻疹样、猩红热样皮疹或小脓疱疹，皮肤可见出血点，很少融合成片。 金黄色葡萄球菌引起的脑膜炎多继发于金葡菌败血症，尤其多见于合并左心内膜炎的患者，通过细菌栓子经血流侵袭脑膜。面部痈疖并发海绵窦血栓性静脉炎可进一步导致脑膜炎，颅脑损伤、颅脑手术后及腰椎穿刺时消毒不严也可并发脑膜炎。脑膜附近的感染病灶如中耳炎，乳突炎、鼻窦炎等亦可引起本病，新生儿脐带和皮肤的金葡菌感染也可继发脑膜炎，发病时间多在产后2周左右。 金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些呢？上面的内容已经让我们知道了答案.为了您和家人的健康，如有发现类似感染的症状请及时就医，如果您还有什么需要咨询的请随时向我们提问，我们的专家24小时在线回答您的问题接军您的疑惑给您提供一个最佳的治疗方案，相信一定能给您满意的答复。

实验5 金黄色葡萄球菌的检验

实验5 金黄色葡萄球菌的检验 1 目的和要求 （1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法 （2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理 2 基本原理 金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。 3 实验材料 3.1 检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料 3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。 3.3 培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基 3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。 3.5 仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。 4 检样程序 5 操作步骤 5.1 5.1.1样品的处理

称取25 g 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预臵适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。 5.1.2 增菌和分离培养 5.1.2.1 将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。 5.1.2.2 将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板和血平板，血平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。Baird-Parker 平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h 或45 h～48 h。 5.1.2.3 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径为2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 5.1.3 鉴定 5.1.3.1 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5 μm～1 μm。 5.1.3.2 血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ℃±1℃培养18 h～24 h。 取新鲜配臵兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI 培养物0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，臵36℃±1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒臵时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36 ℃±1℃培养18 h～48 h，重复试验。 病原性葡萄球菌多数产生血浆凝固酶，非病原性的一般不产生。因此，该法是判定葡萄球菌有无致病性的重要指标。 5.2 金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 5.2.1 样品的稀释 5.2.1.1固体和半固体样品：称取25 g样品臵盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或臵盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2 min，制成1:10的样品匀液。 5.2.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品臵盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预臵适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 5.2.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支1 mL 无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 5.2.1.4 按5.2.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。 5.2.2 样品的接种

金黄色葡萄球菌肠毒素研究进展

龙源期刊网 https://www.docsj.com/doc/4716016866.html, 金黄色葡萄球菌肠毒素研究进展 作者：刘保光宋博利李进福 来源：《农家科技下旬刊》2017年第03期 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种革兰阳性菌，广泛分布于自然界，寄生于人类和畜禽动物，是一种常见的条件致病菌，能引起包括食物中毒、非感染性疾病和中毒性休克综合征等严重疾病。截止目前，已发现的超过20种金黄色葡萄球菌肠毒素，本文就肠毒素的特性、致病性及其检测方法等方面进行了阐述，旨在为临床治疗和食品监控提供一定的指导意义。 一、肠毒素的特性 金黄色葡萄球菌可以产生多种类型葡萄球菌肠毒素（SEs），根据发现时间先后顺序按照英文字母进行区分，目前已发现20多种肠毒素（SEA～SElX）。通常把这些肠毒素分为传统肠毒素（SEA～SEE）和新型肠毒素（SEG～SElX）。根据这些肠毒素是否具有呕吐活性对金黄色葡萄球菌肠毒素做了新的分类：其中SEA、B、C、D、E、G、H、I、R、S、T这11 种肠毒素已被证明具有催吐活性，称为肠毒素SEs。而那些在灵长目动物实验中没有表现出催吐活性（如SElL和SElQ），或是还没有被证实是否具有催吐活性的肠毒素，如SElJ、SElK、SElM、SElN、SElO、SElP、SElU、SElU2、SElV、SElX称为金黄色葡萄球菌类肠毒素蛋白（staphylococcal enterotoxin-like proteins，SEls）。另外根据血清型分类SEs已知有 A、B、 C1、C2、C3、D、E、G、H和 I等 10种血清型。所有SEs的氨基酸组成都已测定，分子中赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、亮氨酸和酪氨酸等较集中。除 TSST外，所有 SEs含有2个半胱氨酸残形成的大约有20个氨基酸的胱氨酸环，在这个区域靠分子羧基端 SEA、SEB和 SEC1有明显的相似性。由此推测此区域含有催吐部位。TSST在化学上完全不同于其他肠毒素，它不含半胱氨酸，氨基酸排列顺序与其他肠毒素不完全一致，它含有188个氨基酸残基，末端氨基酸为丝氨酸。 二、肠毒素致病性 金黄色葡萄球菌肠毒素可引起食物中毒，根据食物中毒的原因分析，2014年微生物性食 物中毒人数最多，占总中毒人数的52.1%，其中沙门氏菌、致泻性大肠埃希氏菌、肉毒毒素、蜡样芽孢杆菌、葡萄球菌肠毒素等引起的细菌性食物中毒。其中葡萄球菌肠毒素为最主要的污染源，约1μg /kg的毒素量即可刺激呕吐中枢而导致以呕吐，人在吃了被金黄色葡萄球菌肠毒素污染的食物后，会出现恶心、剧烈呕吐（多呈喷射状）等相关症状 2016年7月，黄埔检验检疫局从一批几内亚海域捕捞的进口冻马面鲀中检出金黄色葡萄球菌。这是黄埔局口岸首次从自捕食用水生动物中检出该病菌。金黄色葡萄球菌污染产生的肠毒素是个世界性卫生难题，2000年，日本雪印乳业事件中，1.45万多人感染；2008年广东某品牌高钙牛奶也因污染此菌导致过百名幼儿发病，金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占细菌性食品中毒比重大，仅次于大肠杆菌，对肠道破坏性极大，常引起金黄色葡萄球菌肠炎，发病急，临床症状表现为呕吐、发

木糖葡萄球菌与金黄色葡萄球菌、表面葡萄球菌的基因组比较(阐述毒力、侵染性,样本是健康人的鼻腔)副本

LETTER TO THE EDITOR Genome of Staphylococcus xylosus and Comparison with S.aureus and S.epidermidis Staphylococci are Gram-positive,AT-rich cocci,and often stick together in grape-like clusters.The genus can be classi-?ed into two groups based on their ability to produce coagu-lase,an enzyme that causes clotting of blood plasma (Otto,2004).Coagulase-positive Staphylococci include Staphylo-coccus aureus ,a common pathogen of community-acquired and nosocomial infections (Smith et al.,2009).Their inva-siveness is associated with the ability to adhere to host sur-faces (Vuong et al.,2003).Among coagulase-negative Staphylococci (CNS),S.epidermidis is the most frequently found pathogen in humans,and is also a common cause of nosocomial infections (Nostro et al.,2007;Wang et al.,2009).S.epidermidis is believed to account for most of the infections caused by CNS and is highly resistant to many antibiotics including penicillins and cephalosporins (Al-Shuneigat et al.,2005).S.xylosus is also a CNS.It is naturally present in raw meat and milk and is commonly used in starter culture for fermentation (Planchon et al.,2006,2007).This species is normally regarded as non-pathogenic,but a few strains are related to human opportunistic infections (Akhaddar et al.,2010).In addition,some S.xylosus strains have the ability to form bio?lm (Planchon et al.,2006). Bacterial virulence genes can be regulated by diffusible signal molecules termed autoinducers (AIs).Because the control of gene expression by AIs is cell-density dependent,this phenomenon has been called quorum sensing (Brelles-Marino and Bedmar,2001;Antunes et al.,2010).In Staphy-lococci,there are two quorum sensing systems,P2and P3.Their regulatory mechanism was described earlier by Liu et al.(2012).Other regulatory genes and virulence factors shared by S.epidermidis and S.aureus have also been reported (Frebourg et al.,2000;Gelosia et al.,2001).However,it is still not clear whether these virulence related genes are also present in non-pathogenic S.xylosus genome. In this study,we isolated S.xylosus NJ from a nasal sample of a healthy person at Jiangsu People’s Hospital in China and determined its genome sequence using whole-genome shotgun sequencing strategy with a Hiseq2000(Illumina,CA,USA)sequencer.The project generated a total of w 2739Mb sequences and w 927folds coverage of the genome.The draft genome data were assembled using the Velvet assembly pro-gram.The assembly generated 45contigs with a size of >200bp,22of which were longer than 500bp with the N 50length of 396,400bp.These 45contigs were deposited in GenBank and annotated using Rapid Annotation using Sub-system Technology (RAST)server.In addition,96tandem repeat sequences were found in these contigs.The draft genome contained a chromosome of 2,940,053bp with a 32.40%G tC content.The general features are listed in Table 1.There are 6predicted rRNA genes and 22tRNA genes,and 83.64%nucleotides are predicted to encode proteins.By a combination of coding potential prediction and homology search,2783coding DNA sequences (CDSs)with an average length of 884bp were identi?ed on the draft genome (Table 1).The 2199CDSs annotated by speci?c Clusters of Orthologous Groups (COG)function groups can be classi?ed into 21COG categories,and 2456CDSs can be annotated into 1221KEGG orthology by KAAS (Moriya et al.,2007).The organization of the genome of S.xylosus NJ was shown in a circular map in Fig.1A.In addition,phylogenetic dendrogram based on a comparison of 16S rRNA sequences for S.xylosus NJ with members of the Staphylococcus was shown in Fig.S1.There is another S.xylosus draft genome,S.xylosus DMB3-Bh1,in GenBank.Therefore,we compared S.xylosus NJ with S.xylosus DMB3-Bh1using BLAST (version 2.2.26).The result showed that there are 2319CDSs in S.xylosus DMB3-Bh1(89.30%)similar to S.xylosus NJ (Fig.S2). The metabolic network of S.xylosus NJ was constructed using the RAST server with the 411subsystems identi?ed in the genome.There are many carbohydrate subsystem features,including genes involved in organic acids,fermentation,sugar alcohols,di-and oligo-saccharides,central carbohydrates,monosaccharides,and one-carbon metabolisms.Many protein metabolism features are also present,including protein biosynthesis machinery such as the small subunit (SSU)and large subunit (LSU)of the bacterial ribosome.Moreover,we prepared the comparative analysis of this genome with other staphylococcal genomes (S.aureus subsp.aureus N315( S. Available online at https://www.docsj.com/doc/4716016866.html, ScienceDirect Journal of Genetics and Genomics 41(2014)413e 416 JGG 1673-8527/$-see front matter Copyright ó2014,Institute of Genetics and Developmental Biology,Chinese Academy of Sciences,and Genetics Society of China.Published by Elsevier Limited and Science Press.All rights reserved.https://www.docsj.com/doc/4716016866.html,/10.1016/j.jgg.2014.03.007