分光光度法测定自来水中的镁

分光光度法测定自来水中的镁

摘要

本实验是应用分光光度法测定自来水中镁含量。在pH值为10的氨水-氯化铵碱性缓冲液中，以MTB（甲基百里香酚蓝）作为显色剂，镁与MTB生成稳定的蓝紫色络合物，其吸光度与镁含量在一定浓度范围内成正比。在室温条件下，用721B型分光光度计，在602nm波长处、4mLpH值为10的氨水-氯化铵碱性缓冲液、3mL的MTB(0.3784μg/mL)溶液、显色时间8分钟测定吸光度，络合物的吸光度达到最大值并且相对稳定。实验结果表明：镁浓度在1.00~5.00ug·mL-1呈良好的线性关系得到标准曲线的线性回归方程为y=0.0632x+0.1626（x：镁含量，y：吸光度），相关系数为0．9995，摩尔吸光系数为1.79×104L/mol·cm，实验对16种干扰离子进行了考察，发现标准偏差在 5%范围外的有钙、锌2种离子对镁测定结果存在较大干扰，加入EGTA（乙二醇二乙醚二胺四乙酸）和六次甲基四胺为掩蔽剂，可以分别消除钙离子和锌离子的干扰。最后试验测得自来水中镁离子含量为28.25g/L,平均回收为99.63%，镁离子测定比较准确。

关键词：分光光度法，镁，MTB，自来水,EGTA，六次甲基四胺

SPECTROPHOTOMETRIC METHOD FOR

DETERMINATION OF WATER MAGNESIUM

Abstract

a method for determining in magnesium content in water with spectrophotometry is proposed in this paper. MTB is selected as the chromomeric reagent. Magnesium and MTB generate amaranth complex. In the medium(pH=10) of Ammonium Hydroxide–ammonium chloride acetate, magnesium combined with MTB to form a stable quaternion – mixed micelles system with the existence of polyethylene glycol The absorbency was direct proportion to the content of magnesium in a certain range of concentration. It has been determined the wavelength of maximum absorption is 602nm. At room temperature, with 721 type spectrophotometer to measure spectrophotometry, through the experiment determination of the stability and reproducibility worse after the test, 5×10-4 μg mL-1 the MTB in solution 3 mL sensitive, and measure the highest when at room temperature, show color time after 8 minutes, in the pH value of 10 Ammonium Hydroxide–ammonium chloride alkaline solution in the complex, the absorbency and reach a maximum relatively stable. The experimental results show that: magnesium concentration in 1.00 ~5.00ug/mL is good linear relationship between the get standard curve of the linear regression equation is Y=0.0632X+0.1626, correlation coefficient is 0.9915, the molar absorption coefficient is 7.1 ×4

10L / mol·cm, molar absorption coefficient is 7.1 ×4

10L/mol·cm, experiments on 16 ion of jamming in the determination, the author finds that there were seven allowed for magnesium determination result in bigger interference, join EGTA and methenamine as masking agent can remove interference, other ion to the magnesium ion determination are in the allowable value range.Magnesium ions in the final tests measured water content of

28.25g/L, an average recovery of 99.63%, magnesium ion content more accurately. Keyword:spectrophotometry ,magnesium, MTB , water,EGTA

目录

前言 (1)

1 实验部分 (2)

1.1实验原理 (2)

1.2主要仪器与试剂 (4)

1.2.1仪器 (4)

1.2.2试剂和标准样的配制 (4)

1.2.3 721B分光光度计仪器的结构及操作事项 (5)

1.3样品取样 (7)

2 结果与讨论 (8)

2.1最佳实验条件选择 (8)

2.1.1测定最大吸收波长 (8)

2.1.2显色剂的用量选择 (9)

2.1.3显色时间的考察 (9)

2.1.4缓冲溶液的考察 (10)

2.3干扰离子的考察 (12)

2.3.1钡离子的干扰考察 (13)

2.3.2钠离子的干扰考察 (13)

2.3.3钾离子的干扰考察 (14)

2.3.4锶离子的干扰考察 (14)

2.3.6铬离子的干扰考察 (15)

2.3.7磷离子的干扰考察 (15)

2.3.8锰离子的干扰考察 (16)

2.3.9锌离子的干扰考察 (16)

2.3.10钙离子的干扰考察 (16)

2.3.11铅离子的干扰考察 (17)

2.3.12锡离子的干扰考察 (17)

2.3.13镉离子的干扰考察 (17)

2.3.14铜离子的干扰考察 (18)

2.3.15镍离子的干扰考察 (18)

2.3.16铝离子的干扰考察 (19)

2.4对干扰离子的掩蔽 (19)

2.5样品分析实验 (20)

2.5.1样品测定及精密度的考察 (20)

2.5.2回收率的考察 (21)

3 结论 (23)

4 致谢 (24)

5 参考文献 (25)

前言

镁属于人体营养素——矿物质元素中的一种，镁元素在人体中的生理[1]作用有3种：a、作为酶的激活剂，参与300种以上的酶促反应。糖酵解、脂肪酸氧化、蛋白质的合成、核酸代谢等需要镁离子参加;b、促进骨的形式。在骨骼中仅次于钙、磷，是骨细胞结构和功能所必需的元素，对促进骨形成和骨再生，维持骨骼和牙齿的强度和密度具有重要作用;c、维持神经肌肉的兴奋性。镁、钙、钾离子协同维持神经肌肉的兴奋性。血中镁过低或钙过低，兴奋性均增高；反之则有镇静作用。自来水中镁含量过高会导致很多危害[2]：a、会引起心血管、神经、泌尿造血等系统的病变；b、烧开的水口感差，且常常造成壶底结垢，严重影响饭菜的口感和质量；c、沐浴时头发皮肤常有干涩、发紧的感觉，伤害皮肤和加快皮肤衰老。所以自来水做为居民日常生活用水，对其质量的检测尤为重要，研究测定自来水中镁的分析方法是十分重要的[3]。

钙镁共存时的测定方法比较常见的是EDTA配位滴定法[4]，但测定结果精度不高。国内常用以二甲酚橙做显色剂的分光光度法[5]，来测定钙镁含量，但游离显色剂吸收较大，影响了灵敏度，线性也较差，操作条件要求严格。国外常用铬黑T做显色剂的方法，但如果待测液还有少量Fe3+、Al3+、Cu2+、Co2+、Ni2+时，这些粒子与铬黑T生成稳定的络合物，影响镁离子的测定。

本实验中，在602nm波长处、4mLpH值为10的氨水-氯化铵碱性缓冲液[6]、3mL 的0.3784μg/mLMTB溶液作为显色剂[7]、显色时间8分钟测定不同浓度的镁离子标准溶液的吸光度，绘制出工作曲线。以EGTA（乙二醇二乙醚二胺四乙酸）[8]和六次甲基四胺[9]为掩蔽剂，可以消除钙离子和镁离子的干扰，进而测定自来水中的镁的含量。

1 实验部分

1.1实验原理

比色原理是根据朗伯比尔定律[10]

A=εbc

上式中A：被测物质的吸光度

ε：摩尔吸光系数，单位L/mol·cm

b 液层厚度，单位cm

c：溶液浓度，单位mol·L-1

朗伯比尔定律表明：当一束平行单色光垂直照射均匀非散射的溶液时，溶液的吸光度A与吸光物质的浓度c以及液层的厚度b的乘积成正比。

分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。它是一种被测物质的分子或离子对特征电磁辐射的吸收进度进行定量分析的方法。溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的。

分光光度计就是基于上述原理，溶液中的物质在光的照射下产生了对光的吸收效应。各种不同的物质都具有各自的吸收光谱，因此当有相应的单色光通过溶液时，其能量就会因被吸收而减弱。光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，即符合比色原理——比尔定律。

T= I t/ I0

A=Log I0/ I t=-lg·T=k·L·c=εc·b

即A=εc·b

其中：T—透射比；

I0—入射光强度；

I t—透射光强度；

k—为吸收系数；

L—为被分析物质的光程；

A—吸光度；

ε—摩尔吸收系数（L/mol·cm）；

b—溶液的光径长度（即比色皿厚度，单位:cm）；

c —浓度(mol·L-1)。

图1：分光光度计原理图

比尔定律可以叙述如下：一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。

从上述公式可以看出，当入射光、摩尔吸收系数和溶液的光径长度不变时，吸光度随溶液浓度的变化而变化，溶液的吸光度与溶液的浓度成正比，即A∝C，由此绘制工作曲线。

本文镁与显色剂发生显色反应，生成有色物质。根据比尔定律，利用分光光度计，绘制标准工作曲线，在现实中得到应用进而测定自来水中总镁的含量。

1.2主要仪器与试剂

1.2.1仪器

1. 721B型分光光度计（上海分析仪器厂）

2. 分析天平

3. 1cm比色皿

4. 电炉

5. 移液管：0.2mL、1mL、2mL、5mL

6. 容量瓶：10mL、25mL、50mL、100mL、500mL

7. 烧杯

8. 量筒

1.2.2试剂和标准样的配制

实验所用试剂除特殊说明外，均为分析纯试剂，所用水均为去离子水。

（1）镁标准溶液：称取0.8333g氧化镁固体，滴加适量的盐酸，用去离子水定容至500mL容量瓶配制成1g/L的镁标准溶液；去1g/L的溶液2.5mL用去离子水定容到

25mL容量瓶中可配制成100．0 ug/mL的镁标准溶液；取100．0 ug/mL的溶液2.5mL 用去离子水定容到25mL容量瓶中可配制成10.0 ug/mL的镁标准液；

（2）缓冲溶液（氨水一氯化铵缓冲液）：用天平称取17.5g氯化铵、用量筒量取142.5 mL氨水，加至250 mL容量瓶中用去离子水定容;

（3）0.3784mg/mL MTB(甲基百里香酚蓝)：称取0.0378 mg MTB，加水溶解并定容至100 mL;

（4）1.0 g/LEGTA（乙二醇二乙醚二胺四乙酸）：称取0.5g乙二醇二乙醚二胺四乙酸，用水溶解并定容至100 mL（期间加1.0 g/L NaOH溶液调节PH到10）；

（5）1.0 g/L NaOH溶液：称取0.1g氢氧化钠，水溶解并定容至100 mL，临用时现配;

1.2.3 721B分光光度计仪器的结构及操作事项

1. 721B分光光度计的结构：

主要装置均是由光源、原子化器、单色器及检测系统四大部件所组成[11]。

图2 分光光度计结构图

其中各部分的作用[12]：

光源：提供所需波长范围的连续光谱

单色器：提供需要的单色光

样品池：比色皿，用于盛待测及参比溶液。

检测器系统：是利用光电效应，将光能转换成电流讯号。

2. 仪器使用的注意事项[13]

(1)使用仪器前，将各个旋钮调节到起始位置，然后再接通电源开关。

(2)灵敏度旋钮调值―1‖档(放大倍率最小)。

(3)开启电源，指示灯亮，选择开关置于―T‖，波长调置测试所用的波长。仪器预热20分钟。

(4)打开试样室盖(光门自动关闭)，调节―0‖旋钮,使数字显示为―0.00‖盖上试样室盖，将比色皿架出于蒸馏水校正位置,使光电管受光，调节透过率100%旋钮，使数

字显示为―100.0‖。

(5)如果显示不到―100.0‖，则可适当增加微电流放大器的倍率档数，但尽可能倍率置低档使用，这样仪器将有更高的稳定性。但改变倍率后必须按(4)重新校正―0‖和―100%‖。

(6)预热后，按(4)连续几次调整―0‖和―100%‖，确保测试结果有效仪器即可进行测定工作。

改变波长：通过旋转波长调节手轮可以改变仪器的波长显示值(顺时针方向旋转波长调节手轮波长显示值增大，逆时针方向旋转则显示值减少)。

吸光度A的测定按(4)调整仪器的―0‖和―100%‖，将选择开关置于―A‖档，调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为―.000‖，然后将被测试样移入光路，显示值即为被测样品的吸光值。

浓度C的测量: 旋择开关由―A‖转换到―C‖，将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字器为标定值，将被测样品放入光路，即可读出被测样品得浓度值。

(7)如果大幅度改变波长时，在调整―0‖和―100%‖后稍等片刻（因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响相应平衡时间）。当稳定后，重新调整―0‖和―100%‖即可工作。

(8)每台套仪器所配套的比色皿，不能与其它仪器上的比色皿单个调换。

(9)当仪器工作时，切断电源，电源开关同时切断。

(10)为了避免积灰和污染，在停止工作时间内,用塑料套子罩住整个仪器，在套子内放数袋防潮硅胶避免灯室受潮和反射镜面发霉点，以及影响仪器的性能。

（11）该仪器应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发亮不稳定。

1.3样品取样

由于本实验的待测物属于液体，且溶液中没有固体杂质，可直接取样测量其吸光度，不需要进行样品处理。

本试验采用了不同时间段，早上6点，中午12点，下午6点用洗净烘干的玻璃容器各取等体积20mL分别保存在100mL容量瓶中待测。

2 结果与讨论

2.1最佳实验条件选择

为了得到准确的实验结果，根据实验原理，对实验过程中对镁离子显色可能造成影响结果的因素进行了下面几个方面的考察：

2.1.1测定最大吸收波长

为了使测定的实验结果有较高的灵敏度，需要选用最大的吸收波长来测定溶液的吸光度的值。在镁离子1μg/mL相同浓度条件下，按不同波长下测定吸光度，后找出最大吸收波长。

表1 吸收波长与吸光度

波长/nm 570 580 590 600 601 602

吸光度0.236 0.289 0.342 0.364 0.365 0.366 波长/nm 603 604 605 608 610 620

吸光度0.363 0.362 0.359 0.356 0.348 0.288 由表1的做出图3

图3 波长对吸光度的影响

由图3可以看出，在波长λ=602nm处，被测物质吸光度最大，所以选用620nm作为实验的测定波长[14]。

2.1.2显色剂的用量选择

在显色反应中，所用的显色剂的量对实验结果的影响较大，显色剂的用量太少，显色反应不能完全，吸光度的值偏小，测量结果会因此偏低；显色剂用量太大，既浪费了药品，还容易造成其他的副反应，影响测定结果[15]。所以显色剂用量的考察尤为重要。

本实验取2.5mL（10μg/mL）标镁准溶液，缓冲溶液4mL，加入不同量的显色剂，按试验方法进行吸光度测定，结果如下表：

表2 显色剂用量的考察

根据上表做下图

图4 显色剂用量的考察

由图4可知当MTB加入量为3mL时吸光度最大，且吸光度在0.2—0.3之间。

2.1.3显色时间的考察

所谓的显色时间就是指加入显色剂后，溶液内的显色反应达到稳定，吸光度保持不变所需要的时间[16]。

显色时间考察是非常重要的，时间过短，尚未反应完全，所测定吸光度的值就

不能反应出被测物质的吸光度，测得的吸光度值偏小，显色时间过长，所需要的分析时间会长，还常常会发生副反应，溶液发生变化，对结果产生偏差，所以需要对显色时间进行考察，找出最佳显色时间。在室温下，取2.5mL（10μg/mL）的镁标准溶液，4mL pH=10的缓冲液，3mL（0.3644mg/mL）的MTB溶液配成测定液，测定结果如表3：

表3 室温下显色时间对吸光度的影响

时间0 2 4 6 8 10

吸光度0.503 0.504 0.505 0.51 0.511 0.509

时间15 20 30 60 120 2h

吸光度0.506 0.503 0.502 0.492 0.49 0.489 从表3可以看出在室温下，显色时间8分钟后，络合物的吸光度达到最大值并且相对稳定，所以在实验中需用显色时间为8分钟。

2.1.4缓冲溶液的考察

缓冲液的用量对于吸光度是有影响的[17]，因为不同用量不同的PH下的显色络合反应的进行程度会有所不同，从而影响到吸光度的测定。为此要选出最佳的反应用量值。在分光光度法测定中，酸碱度对显色的影响非常大。因此，选择合适的溶液显色酸碱度范围是准确测定的首要条件。在镁标准浓度相同条件下，测定不同用量值的吸光度，绘制成表格：

表4 缓冲液用量对吸光度的影响

缓冲液的用量mL 1 2 3 4 5 6 吸光度0.102 0.138 0.174 0.233 0.349 0.387 如表4所示,吸光度随缓冲液用量的增大逐渐上升，pH逐渐增大，考虑到分光光度计的灵敏度在吸光度0.2—0.3范围比较大，因此选用4mL的用量比较适合。

2.2工作曲线的绘制

依次移取1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50、4.00、4.50、5.00、5.50mL镁标准（μg/mL）使用液于25 mL容量瓶中，向各容量瓶中加入3.0 mL的0.3784mg/mL MTB(甲基百里香酚蓝)，加如氨水-氯化铵碱性缓冲液4mL，加0.2g/L混匀，充分混匀后，用去离子水稀释至刻度。室温放置8min，用1cm比色皿于分光光度计上，于602nm波长测其吸光度，绘制标准工作曲线。

表5 镁离子含量和吸光度值

镁离子含量（μg/mL） 1 1.5 2 2.5 3 吸光度0.231 0.261 0.290 0.321 0.351 镁离子含量（μg/mL） 3.5 4 4.5 5 5.5 吸光度0.381 0.410 0.441 0.475 0.510 由上述数据作图5：

由图5可知，镁离子的浓度为1—5.0μg/mL符合朗伯比尔定律，对以上数据进行如下计算，可以得到线性方程。

设标准曲线的回归方程为A=bC+a。

图5 镁离子工作曲线

镁离子含量平均值C =

10

1

∑10

1

i C ，带入表3数据可得到C =3.25μg/mL 。吸光度平

均值A =

10

1

∑10

1

i A ，带入表3数据得到A =0.368。b=

∑∑--?-10

1

2

10

1

)()

()(C C

A A C C

i

i i

，将上

述数据带入式中，可得到b=0.0632。a=C b A -,数据带入得到a=0.1626。所以可以得到标准曲线的线性回归方程为Y=0.0632X+0.1626，相关系数为0．9996，摩尔吸光系数为1．79×l04 L/mol ·cm 。

在实际工作中，对于曲线的回归直线是否有意义，可用相关系数γ来检验[18]。

2

101

10

1

2

)

()(∑∑--=A A C C

b

i

i

γ，带入数据可得到γ=0.9996。

当置信度为95%时，我们视作可信。当置信度为95%时，γ=0.9996，所以工作曲线良好可信[19]。

摩尔吸光系数ε=

bC

A

，A ：吸光度的值；b ：液层厚度，本实验为1cm ；C ：溶液的镁离子浓度。带入数据得到ε=1.79×410L/cm ·mol

一般来说，当摩尔吸光系数的值在410-510时，可认为此显色反应的灵敏度较高

[20]

，而本实验的值在此范围内，所以本实验测定方法的灵敏度是令人满意的。

2.3干扰离子的考察

由于在分光光度法测定自来水中的镁离子时，用MTB 溶液做显色剂，在离子与其反应的同时，水中的其他离子可能与显色剂反应，对实验结果产生干扰，所以我们要对实验进行干扰离子的考察。

实验考察干扰离子时，参比液为3mL 的0.3644mg/mL 的MTB 溶液和4mL 的缓冲液稀释到25mL 。镁标准测定液是 2.5mL 的10μg/mL 的镁标准液和3mL 的

0.3644mg/mL的MTB溶液和4mL的缓冲液稀释到25mL。干扰离子考察液是2.5mL 的10μg/mL的镁标准液和3mL的0.3784mg/mL的MTB溶液和4mL的缓冲液和不同浓度干扰离子稀释到25mL。以参比液吸光度为零。

干扰离子考察时，当干扰离子浓度是镁离子浓度的25倍时，而吸光度的标准误差在±5%范围内，可认为干扰离子对镁离子的测定没有影响。

镁标准测定液镁离子浓度为1μg/mL。

2.3.1钡离子的干扰考察

测定结果如表6

Ba的考察

表6 +2

2

+

Ba浓度（μg/mL）0 5 10 15 20 25 吸光度0.231 0.234 0.235 0.234 0.238 0.239 由表6可知，当钡离子加入量小于25μg/mL（镁离子的25倍）时，吸光度的标准偏差在5%之内，考虑到实验测定的自来水中是以钙镁元素最多，其他离子不超过镁离子的25倍，所以钡离子对于镁离子的干扰可以忽略，不需要对其进行掩蔽。

2.3.2钠离子的干扰考察

测定结果表7

Na的考察

表7 +

+

Na浓度（μg/mL）0 5 10 15 20 25 吸光度0.231 0.232 0.235 0.236 0.238 0.240 由表7可知，当钠离子加入量小于25μg/mL（镁离子的25倍）时，吸光度的标准偏差在5%之内，考虑到实验测定的自来水中是以钙镁元素最多，其他离子不超过镁离子的25倍，所以钠离子对于镁离子的干扰可以忽略，不需要对其进行掩

蔽。

2.3.3钾离子的干扰考察

测定数据如表8

K的考察

表8 +

+

K浓度（μg/mL）0 5 10 15 20 25 吸光度0.231 0.230 0.228 0.227 0.225 0.224 由表8可知，当钾离子加入量小于25μg/mL（镁离子的25倍）时，吸光度的标准偏差在5%之内，考虑到实验测定的自来水中是以钙镁元素最多，其他离子不超过镁离子的25倍，所以钾离子对于镁离子的干扰可以忽略，不需要对其进行掩蔽。

2.3.4锶离子的干扰考察

测定结果如表9

Sr的考察

表9 +2

2

+

Sr浓度（μg/mL）0 5 10 15 20 25 吸光度0.231 0.229 0.228 0.224 0.221 0.220 由表9可知，当锶离子加入量小于25μg/mL（镁离子的25倍）时，吸光度的标准偏差在5%之内，考虑到实验测定的自来水中是以钙镁元素最多，其他离子不超过镁离子的25倍，所以锶离子对于镁离子的干扰可以忽略，不需要对其进行掩蔽。

2.3.5钼离子的干扰考察

测定结果如表10

Mo的考察

表10 +6

6

+

Mo浓度（μg/mL）0 5 10 15 20 25 吸光度0.231 0.234 0.235 0.237 0.238 0.241 由表10可知，当钼离子加入量小于25μg/mL（镁离子的25倍）时，吸光度的标准偏差在5%之内，考虑到实验测定的自来水中是以钙镁元素最多，其他离子不超过镁离子的25倍，所以钼离子对于镁离子的干扰可以忽略，不需要对其进行掩蔽。

2.3.6铬离子的干扰考察

实验数据如表11

Cr的考察

表11 +3

3

+

Cr浓度（μg/mL）0 5 10 15 20 25 吸光度0.231 0.207 0.127 0.088 0.053 0.036 由表11可知，当铬离子加入量小于25μg/mL（镁离子的25倍）时，吸光度的标准偏差在5%之外，考虑到实验测定的自来水中是以钙镁元素最多，铬离子含量较少，所以铬离子对于镁离子的干扰可以忽略，不需要对其进行掩蔽。

2.3.7磷离子的干扰考察

实验数据如表12

P的考察

表12 +5

+

5

P浓度（μg/mL）0 5 10 15 20 25 吸光度0.231 0.233 0.234 0.236 0.238 0.240 由表12可知，当磷离子加入量小于25μg/mL（镁离子的25倍）时，吸光度的标准偏差在5%之内，考虑到实验测定的自来水中是以钙镁元素最多，其他离子不超过镁离子的25倍，所以磷离子对于镁离子的干扰可以忽略，不需要对其进行掩

分光光度法测定水中铁离子含量.

专业项目课程课例 项目十二分光光度法测定水中铁离子含量 一、项目名称：分光光度法测定水中铁离子含量 二、项目背景分析 课程目标：本课程是培养分析化学操作技能和操作方法的一门专业实践课，以定量分析的基本理论为基础，以实验强化理论，以期提高化工工作者的分析操作能力。 功能定位：在定量分析中我们常常用到分光光度分析法，它具有操作简便、快速、准确等优点，在工农业生产和科学研究中具有很大的实用价值。是仪器分析的基础实验，也是一种重要的定量分析方法。分光光度法测定水中铁离子含量的测定项目综合训练了学生分光光度计使用、系列标准溶液配制、标准曲线绘制等多个技能。 学生能力：学生通过相关基础学科的学习已经具备了相应的化学知识和定量分析知识，也具备一定的独立操作和思维能力。 项目实施条件：该项目是仪器分析的基础实验，一般中职学校具备相关的实训实习条件，学生有条件完成相应的实习任务。 三、教学目标 1、了解721可见分光光度计的构造 2、了解分光光度法测定原理 3、掌握721可见分光光度计的操作方法 4、掌握分光光度法测定分析原始记录的设计 5、掌握分光光度法测定分析报告的设计 6、掌握分光光度法测定水中铁离子含量的测定方法 7、掌握分光光度法测定水中铁离子含量的分析原始记录和分析报告的填写 四、工作任务 1

2 五、参考方案 参考方案一 1、邻二氮杂菲-Fe 2+ 吸收曲线的绘制 用吸量管吸取铁标准溶液（20μg/mL ）0.00、2.00、4.00mL ，分别放入三个50mL 容量瓶中，加入1mL 10%盐酸羟胺溶液，2mL 0.1%邻二氮杂菲溶液和5mL HAc-NaAc 缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀。放置10min ，用3cm 比色皿，以试剂空白（即在0.0mL 铁标准溶液中加入相同试剂）为参比溶液，在440～560nm 波长范围内，每隔20～40nm 测一次吸光度，在最大吸收波长附近，每隔5～10nm 测一次吸光度。在坐标纸上，以波长λ为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制A 和λ关系的吸收曲线。从吸收曲线上选择测定Fe 的适宜波长，一般选用最大吸收波长λmax 。 2、标准曲线的制作 用吸量管分别移取铁标准溶液（20μg/mL ）0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL ，分别放入6个50mL 容量瓶中，分别依次加入1.00mL 10%盐酸羟胺溶液，稍摇动；加入2.00mL 0.1%邻二氮杂菲溶液及5.00mL HAc-NaAc 缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀。放置10min ，用1cm 比色皿，以试剂空白（即在0.00mL 铁标准溶液中加入相同试剂）为参比溶液，选择λmax 为测定波长，测量各溶液的吸光度。在坐标纸上，以含铁量为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制标准曲线。 3、水样中铁含量的测定 取三个50mL 容量瓶，分别加入5.00mL （或10.00mL 铁含量以在标准曲线范围内为合适）未知试样溶液，按实验步骤2的方法显色后，在λmax 波长处，用1cm 比色皿，以试剂空白为参比溶液，平行

分光光度法

第二节分光光度法 (一)基础知识 分类号：P2-O 一、填空题 1．分光光度法测定样品的基本原理是利用朗伯—比尔定律，根据不同浓度样品溶液对光信号具有不同的，对待测组分进行定量测定。 答案：吸光度(或吸光性，或吸收) 2．应用分光光度法测定样品时，校正波长是为了检验波长刻度与实际波长的，并通过适当方法进行修正，以消除因波长刻度的误差引起的光度测定误差。 答案：符合程度 3．分光光度法测定样品时，比色皿表面不清洁是造成测量误差的常见原因之一，每当测定有色溶液后，一定要充分洗涤。可用涮洗，或用浸泡。注意浸泡时间不宜过长，以防比色皿脱胶损坏。 答案：相应的溶剂(1+3)HNO3 二、判断题 1．分光光度计可根据使用的波长范围、光路的构造、单色器的结构、扫描的机构分为不同类型的光度计。( ) 答案：正确 2．应用分光光度法进行试样测定时，由于不同浓度下的测定误差不同，因此选择最适宜的测定浓度可减少测定误差。一般来说，透光度在20％～65％或吸光值在0.2～0.7之间时，测定误差相对较小。( ) 答案：正确 3．分光光度法主要应用于测定样品中的常量组分含量。( ) 答案：错误 正确答案为：分光光度法主要应用于测定样品中的微量组分。 4．应用分光光度法进行样品测定时，同一组比色皿之间的差值应小于测定误差。( ) 答案：错误 正确答案为：测定同一溶液时，同组比色皿之间吸光度相差应小于0.005，否则需进行校正。 5．应用分光光度法进行样品测定时，摩尔吸光系数随比色皿厚度的变化而变化。( ) 答案：错误 正确答案为：摩尔吸光系数与比色皿厚度无关。 三、选择题 1．利用分光光度法测定样品时，下列因素中不是产生偏离朗伯—比

水质 硫酸盐 铬酸钡分光光度法

本电子版为发布稿。请以中国环境科学出版社出版的正式标准文本为准。 HJ 中华人民共和国环境保护行业标准 HJ/T342─2007 水质 硫酸盐的测定 铬酸钡分光光度法(试行) Water quality—Determination of sulfate—barium chromate spectrophotometry （发布稿） 2007-03-10 发布 2007-05-01 实施 国家环境保护总局发 布

HJ/ T 342—2007 目次 前言 (Ⅱ) 1适用范围 (1) 2原理 (1) 3试剂 (1) 4仪器 (1) 5干扰的消除 (1) 6步骤 (2) 7结果的计算 (2) 8精密度和准确度 (2)

HJ/T 342—2007 前 言 为了规范《地表水环境质量标准》（GB3838-2002）的实施工作，制定本试行标准。 本标准规定了地表水、地下水中硫酸盐的铬酸钡分光光度测定方法。 本标准适用于地表水、地下水中硫酸盐的测定。 本标准为首次制订。 本标准由国家环境保护总局科技标准司提出。 本标准由国家环境保护总局水和废水监测分析方法编委会组织中国环境监测总站等单位起草。 本标准国家环境保护总局2007年3月10日批准。 本标准自2007年5月1日起实施。 本标准由国家环境保护总局解释。

HJ/T 342─2007 水质 硫酸盐的测定铬酸钡分光光度法 1 适用范围 本标准适用于一般地表水、地下水中含量较低硫酸盐的测定。本方法适用的浓度范围为8~200mg/L：本方法经取13个河、湖水样品进行检验，测定浓度范围为8~85mg/L：相对标准偏差0.15%~7%：加标回收率97.9%~106.8%。 2原理 在酸性溶液中，铬酸钡与硫酸盐生成硫酸钡沉淀，并释放出铬酸根离子。溶液中和后多余的铬酸钡及生成的硫酸钡仍是沉淀状态，经过滤除去沉淀。在碱性条件下，铬酸根离子呈现黄色，测定其吸光度可知硫酸盐的含量。 3 试剂 本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新制备的去离子水。 3.1 铬酸钡悬浊液：称取19.44g铬酸钾(K2CrO4)与2 4.44g氯化钡（BaCl2·2H2O），分别溶于1L蒸馏水中，加热至沸腾。将两溶液倾入同一个3L烧杯内，此时生成黄色铬酸钡沉淀。待沉淀下降后，倾出上层清液，然后每次用约1L蒸馏水洗涤沉淀，共需洗涤5次左右。最后加蒸馏水至1L，使成悬浊液，每次使用前混匀。每5mL铬酸钡悬浊液可以沉淀约48mg硫酸根(SO42-)。 3.2 (1+l)氨水。 3.3盐酸溶液：2.5mol/L。 3.4 硫酸盐标准溶液：称取1.4786g无水硫酸纳(Na2SO4, 优级纯)或1.814lg无水硫酸钾(K2SO4, 优级纯)，溶于少量水，置1000mL容量瓶中，稀释至标线。此溶液1.00mL含1.00mg硫酸根（SO42-）。 4仪器 4.1 比色管：50mL。 4.2 锥形瓶：150mL。 4.3 加热及过滤装置。 4.4 分光光度计。 5干扰的消除 水样中碳酸根也与钡离子形成沉淀。在加入铬酸钡之前,将样品酸化并加热以除去碳酸盐。

水中六价铬的测定-二苯碳酰二肼分光光度法

一、实验目的 （1）掌握分光光度法测定六价铬的原理和方法。 （2）熟悉分光光度计的使用。 二、实验原理 在酸性介质中，六价铬与二苯碳酰二肼（DPC）反应，生成紫红色络合物，于540nm波长处进行比色测定。

三、使用仪器规格及实际用量 （1） 分光光度计 （2） 具塞比色管、移液管、容量瓶等。 （1） （1+1）硫酸::将浓硫酸缓慢加入到同体积水中，混匀。 （2） （1+1）磷酸：将浓磷酸缓慢加入到同体积水中，混匀。 （3） 铬标准贮备液（0.100 mg-Cr6+/mL）：经120℃烘干2小时的重铬酸钾： 0.2829g溶于水中，定容至1000mL。 （4） 铬标准使用液（1.00 μg-Cr6+/mL）：取5 mL铬标准贮备液于500mL容量瓶中，定容。 （5） 二苯碳酰二肼（C13H14N4O）溶液：称取二苯碳酰二肼0.2g溶于50mL丙酮中，加水稀释至100mL. 四、实验步骤 （1） 水样预处理：本试验由于时间限制，将水样作为不含悬浮物、低浊度的清洁地表水，进行直接测定。但在实际环境监测中需要根据不同水样性质进 行预处理。 （2） 标准曲线的绘制：取5支50mL比色管，依次加入0，1，3，5，7 mL铬标准使用液，用水稀释至标线，分别加入（1+1）硫酸0.5 mL和（1+1）磷酸0.5 mL，摇匀。加入2 mL 显色剂溶液摇匀。静置5-10分钟后，放入比色皿中于 540nm处测吸光度值。以加入0 mL铬标准使用液的溶液作为参比。注意： 为了测量准确，测定时应用同一个比色皿，浓度由低到高测定，且每次测 完都应用蒸馏水清洗，再用待测液润洗2-3次。以吸光度为纵坐标，相应六 价铬含量为横坐标绘制标准曲线。 （3） 水样的测定：各取50mL水样和50mL自来水于比色管中，分别加入（1+1）硫酸0.5 mL和（1+1）磷酸0.5 mL，摇匀。加入2 mL 显色剂溶液摇匀。静 置5-10分钟后，放入比色皿中于540nm处测吸光度值。根据所测吸光度从标 准曲线上查得六价铬含量。 （4） 分光光度计的使用： （a） 打开点源，预热30min，将光镜选择杆调到正确位置； （b） 仪器归零：调整波长选择钮至540nm，灵敏度置于“1”，选择开关置于“T”，开盖调“0％T”显示“00.0”，闭盖（装有参比） 调“100％T”显示“100.0”。 （c） 吸光度测定：按MODE键使功能显示为ABSORBANCE，显示吸光度的值，拉动样品室拉杆，将待测液拉入光路，此时显示值即为待 测液的吸光度。注意：每次测量时都应对仪器进行调零。 五、主要结果计算及分析（可另附纸） Cr6+（mg/L）=m/V 式中 m—从标准去线上查得的Cr6+含量（μg）； V—水样的体积（mL）

分光光度法(附答案)

分光光度法（附答案） 一、填空题1. 分光光度法测定样品的基本原理是利用朗伯-比尔定律，根据不同浓度样品溶液对光信号具有不同的_____，对待测组分进行定量测定。答案：吸光度(或吸光性，或吸收) 2. 分光光度法测定样品时，比色皿表面不清洁是造成测量误差的常见原因之一，每当测定有色溶液后，一定要充分洗涤。可用_____涮洗，或用_____浸泡。注意浸泡时间不宜过长，以防比色皿脱胶损坏。 答案：相应的溶剂(1+3)HNO 3 3. 分光光度法测定土壤中总砷时，制备土壤样品过程中，需取过2mm筛的土样，用玛瑙研钵将其研细至全部通过_____mm筛后，备用。答案：0.149 4. 光度法测定森林土壤全磷的样品，在碱熔完成后，应加入_____℃的水溶解熔块，并用硫酸和热水多次洗涤坩埚。答案：80 二、判断题 1. 应用分光光度法进行试样测定时，由于不同浓度下的测定误差不同，因此选择最适宜的测定浓度可减少测定误差。一般来说，透光度在20％~65％或吸光值在0.2~0.7之间时，测定误差相对较小。( ) 答案：正确 2. 分光光度法主要应用于测定样品中的常量组分含量。( ) 答案：错误正确答案为：分光光度法主要应用于测定样品中的微量组分。 3. 应用分光光度法进行样品测定时，同一组比色皿之间的差值应小于测定误差。( ) 答案：错误正确答案为：测定同一溶液时，同组比色皿之间吸光度相差应小于0.005，否则需进行校正。4. 应用分光光度法进行样品测定时，摩尔吸光系数随比色皿厚度的变化而变化。( ) 答案：错误正确答案为：摩尔吸光系数与比色皿厚度无关。 5. 分光光度法测定土壤中总砷时，在样品中加入酸，并在电热板上加热，目的是分解有机物和氧化样品中各种形态存在的砷，使之成为可溶态的砷。（）答案：正确 6. 分光光度法测定土壤中总砷时，应直接称取新鲜的土样进行测定。（）答案：错误正确答案为：应称取风干或冷冻干燥的样品测定。 7. 分光光度法测定土壤样品中总砷时，有机物会干扰测定，应加酸并加热分解，以消除其于扰。（） 答案：正确 8. 硼氢化钾-硝酸银分光光度法测定土壤中总砷时，样品消解过程中所加的酸分别是盐酸、硝酸和磷酸。（）答案：错误正确答案为：样品消解所加的酸分别是盐酸、硝酸和高氯酸。 9. 分光光度法测定生活垃圾或土壤中砷时，若所用试剂中含有少量氰化物，可用乙酸铅脱脂棉吸收去除。（）答案：错误正确答案为：乙酸铅脱脂棉吸收去除的是试剂中的硫化物。 10. 光度法测定土壤中全氮时，如需提供烘干基含量，则应测定土壤水分，并进行折算。（答案：正确 11. 光度法测定土壤中包括硝态和亚硝态氮的全氮时，若铁粉中含有大量的碳会干扰测定，所以在选择时应注意。（）答案：错误正确答案为：若铁粉含有大量的氮会干扰测定，所以在选择时应注意。

实验分光光度法测定铁

实验分光光度法测定铁 The following text is amended on 12 November 2020.

实验十四邻二氮菲分光光度法测定铁的含量 一、实验目的 1．学习吸光光度法测量波长的选择方法; 2．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理及方法; 3. 掌握分光光度计的使用方法。 二、实验原理 分光光度法是根据物质对光选择性吸收而进行分析的方法，分光光度法用于定量分析的理论基础是朗伯比尔定律，其数学表达式为：A=εb C 邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的较好试剂，在pH=2～9的条件下，二价铁离子与试剂生成极稳定的橙红色配合物。摩尔吸光系数ε＝11000 L·mol-1·cm-1。在显色前，用盐酸羟胺把Fe3+还原为Fe2+。 2Fe3+＋2NH 2OHHCl→2Fe2+＋N 2 ＋4H＋＋2H 2 O＋2Cl- Fe2+ + Phen = Fe2+ - Phen (橘红色) 用邻二氮菲测定时，有很多元素干扰测定，须预先进行掩蔽或分离，如钴、镍、铜、铅与试剂形成有色配合物；钨、铂、镉、汞与试剂生成沉淀，还有些金属离子如锡、铅、铋则在邻二氮菲铁配合物形成的pH范围内发生水解；因此当这些离子共存时，应注意消除它们的干扰作用。 三、仪器与试剂 1．醋酸钠：l mol·L-1； 2．盐酸：6 mol·L-1； 3．盐酸羟胺：10％（用时配制）； 4．邻二氮菲（%）：邻二氮菲溶解在100mL1:1乙醇溶液中； 5．铁标准溶液。 (1)100μg·mL-1铁标准溶液：准确称取（NH 4） 2 Fe（SO 4 ） 2 ·12H 2 0于烧杯中， 加入20 mL 6 mol·L-1盐酸及少量水，移至1L容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀. 6．仪器:7200型分光光度计及l cm比色皿。 四、实验步骤 1.系列标准溶液配制 (1)用移液管吸取10mL100μg·mL-1铁标准溶液于100mL容量瓶中，加入2mL 6 mol·L-1盐酸溶液, 以水稀释至刻度，摇匀. 此溶液Fe3+浓度为10μg·mL-1. (2) 标准曲线的绘制: 取50 mL比色管6个，用吸量管分别加入0 mL，2 mL，4 mL, 6 mL, 8 mL和10 mL10μg·mL-l铁标准溶液，各加l mL盐酸羟胺，摇匀; 经再加2mL邻二氮菲溶液, 5 mL醋酸钠溶液，摇匀, 以水稀释至刻度，摇匀后放置 10min。 2.吸收曲线的绘制 取上述标准溶液中的一个, 在分光光度计上，用l cm比色皿，以水为参比溶液，用不同的波长，从440～560 nm，每隔10 nm测定一次吸光度，在最大吸收波长

废气中硫酸雾的测定-铬酸钡分光光度法

废气中硫酸雾的测定-铬酸钡分光光度法

1.原理 用玻璃纤维滤筒进行等速采样，用水浸取，除去阳离子。在弱酸性溶液中，样品溶液中的硫酸根离子与铬酸钡悬浊液发生以下交换反应： SO42-＋BaCrO4─→BaSO4↓＋CrO42- （黄色） 在氨－乙醇溶液中，分离除去硫酸钡及过量的铬酸钡，反应释放出的黄色铬酸根离子与硫酸根浓度成正比，根据颜色深浅，用分光光度法测定。 2.干扰及消除 样品中有钙、锶、镁、锆、钍等金属阳离子共存时对测定有干扰，通过阳离子树脂柱交换处理后可除去干扰。 测定范围：5～120mg/m3。 3.仪器 ①酸式滴定管：25ml。 ②玻璃漏斗：直径60mm。 ③中性定量滤纸。 ④玻璃棉。 ⑤电炉或电热板。 ⑥烟尘采样器。

⑦过氯乙烯滤膜、中速定量滤纸、慢速定量滤纸。 ⑧紫外或近紫外分光光度计。 4.试剂 ①玻璃纤维滤筒。 ②阳离子交换树脂（732型等均可）200g。 ③氢氧化铵溶液C(NH4OH)=6.0mol/L：量取160ml浓氨水，用水稀释至400ml。 ④氯化钙－氨溶液：称取1.1g氯化钙，用少量1mol/L盐酸溶液溶解后，加6.0mol/L氢氧化铵溶液至400ml。若浑浊应过滤。 ⑤酸性铬酸钡悬浊液：称取0.50g铬酸钡于200ml含有0.42ml浓盐酸和14.7ml冰乙酸的水中，得悬浊液。贮存于聚乙烯塑料瓶中，使用前充分摇匀。 ⑥硫酸钾标准溶液：称取1.778g硫酸钾（优级纯，105～110℃烘干2h），溶解于水，移入1000ml容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。此溶液每毫升相当于含1000μg硫酸。临用时，用水稀释成每毫升含100.0μg 硫酸的标准溶液。 ⑦偶氮胂Ⅲ指示剂：称取0.40g偶氮胂Ⅲ，溶解于100ml水中，放置过夜后取上清液贮于棕色瓶中，在冷暗处保存，可使用一个月。 5.采样 按国家有关污染源监测技术规范规定的采样方法，用玻璃纤维滤筒，等速采样5～30min。 6.步骤

水中六价铬的测定分光光度法

水中六价铬的测定—分光光度法 废水中铬的测定常用分光光度法，其原理基于：在酸性溶液中，六价铬离子与二苯碳酰二肼反应，生成紫红色化合物，其最大吸收波长为540nm，吸光度与浓度的关系符合比尔定律。如果测定总铬，需先用高锰酸钾将水样中的三价铬氧化为六价铬，再用本法测定。 一.实验目的 掌握分光光度法测定六价铬的原理和方法； 二.六价铬的测定 1.仪器 ①分光光度计、比色皿（1cm） ②50mL具塞比色管、移液管、容量瓶等。 2.试剂 (1)丙酮。 (2)（1+1）硫酸。 (3)（1+1）磷酸。 (4) 0.2%（m/V）氢氧化钠溶液。 (5)铬标准贮备液：称取于120℃干燥2h的重铬酸钾（优级纯）0.2829g，用水溶解，移入1000mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。每毫升贮备液含0.100mg六价铬。 (6)铬标准使用液：吸取5.00mL铬标准贮备液于500mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。每毫升标准使用液含1.00μg六价铬。使用当天配制。 (7) 二苯碳酰二肼溶液：称取二苯碳酰二肼（简称DPC，C13H14N4O）0.2g，溶于50mL丙酮中，加水稀释至100mL，摇匀，贮于棕色瓶内，置于冰箱中保存。颜色变深后不能再用。 3.测定步骤 (1)水样预处理： 对不含悬浮物、低色度的清洁地面水，可直接进行测定。 (2)标准曲线的绘制：取9支50mL比色管，依次加入0、0.20、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00和10.00mL铬标准使用液，用水稀释至标线，加入1+1硫酸0.5mL和1+1磷酸0.5mL，摇匀。加入2mL显色剂溶液，摇匀。5～10min 后，于540nm波长处，用1cm或3cm比色皿，以水为参比，测定吸光度并做空白校正。以吸光度为纵坐标，相应六价铬含量为横坐标绘出标准曲线。 (3)水样的测量：取适量（含Cr6+少于50μg）无色透明或经预处理的水样于50mL比色管中，用水稀释至标线，以下步骤同标准溶液测定。进行空白校正后根据所测吸光度从标准曲线上查得Cr6+含量。 4.计算 Cr6+（mg·L-1）=m/V 式中：m—从标准曲线上查得的Cr6+量，μg； V—水样的体积，mL； 第 1 页共1 页

紫外可见分光光度法含量测定

【含量测定】照紫外-可见分光光度法(附录V A)测定。 1.仪器与测定条件：室温：____℃相对湿度：____% 分析天平编号：；水浴锅编号：； 紫外可见分光光度计编号：； 2.对照品溶液的制备： 取西贝母碱对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含_______mg的溶液，即得。 3. 供试品溶液的制备： 取本品粉末(过三号筛)约______g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液3ml，浸润1小时。加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液40ml，置80℃水浴加热回流2小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用适量三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液洗涤药渣2～3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液至刻度，摇匀,即得。 4.标准曲线的制备： 精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml，置25ml具塞试管中，分别补加三氯甲烷至10.0ml，精密加水5ml、再精密加0.05％溴甲酚绿缓冲液(取溴甲酚绿0.05g，用0.2mol／L氢氧化钠溶液6ml使溶解，加磷酸二氢钾1g，加水使溶解并稀释至100ml，即得)2ml，密塞，剧烈振摇，转移至分液漏斗中，放置30分钟。取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以相应的试剂为空白。 5.测定法： 照紫外-可见分光光度法(附录ⅤA），在nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含西贝母碱的重量，计算，即得。 6.结果与计算 6.1 标准曲线制备：

对照品批号 纯 度 S 对照品来源 干燥条件 对照品称重W 对(mg) 各浓度点稀释倍数f 对 溶液浓度C 对(ug/ml) 吸光度A 对 线性回归方程 A=( )C ＋/-（ ） r ＝（ ） 计算公式： W S C f ?= 对对对 C 对= 6.2 样品测定： 水分Q 取样量W 样（g ） 样品稀释倍数f 样 样品吸光度A 样 样品平均吸光度A 样 浓度C(ug/ml) 含量X （%） 平均含量X （%） 计算公式：() %100Q 110W f C X 6 ?-???= 样样 样 X 1= X 2= 7.本品按干燥品计算，含总生物碱以西贝母碱(C 27H 43NO 3)计，不得少于0.050％。 结果: 规定 检验人： 检验日期： 复核人： 复核日期:

铬酸钡分光光度法

铬酸钡光度法 1.方法原理 在酸性溶液中，铬酸钡与硫酸盐生成铬酸钡沉淀，并释放出铬酸根离子。溶液中和多余的铬酸钡及生成的硫酸钡仍是沉淀状态，经过滤除去沉淀。在碱性条件下，铬酸根离子呈现黄色，测定其吸光度可知硫酸盐的含量。 2.干扰及消除 水样中碳酸根也与钡离子形成沉淀。在加入铬酸钡之前，将样品酸化并加热以除去碳酸盐。 3.方法的适用范围 本法适用于测定硫酸盐含量较低的清洁水样。 经取13个河、湖水样进行检验，测定浓度范围为8~15mg/L；相对标准偏差0.15%~7%； 加标回收率97.9%~106.8%。 4.仪器 ①比色管：50ml ②锥形瓶：250ml ③加热及过滤装置 ④分光光度计 5.试剂 ①铬酸钡悬浊液：称取19.44g铬酸钾与24.44g氯化钡，分别溶于1L蒸馏水中，加热 至沸腾。将两溶液倾入同一个3L烧杯内，此时生成黄色铬酸钡沉淀。待沉淀下降后，倾出上层清液，然后每次用约1L蒸馏水洗涤沉淀，共需洗涤5次左右。最后加蒸馏水至1L，使成悬浊液，每次使用前混匀。每5ml铬酸钡悬浊液可以沉淀约48mg硫酸根。 ②（1+1）氨水 ③ 2.5mol/L盐酸溶液 ④硫酸盐标准溶液：称取1.4786g优级纯无水硫酸钠或1.8141g无水硫酸钾，溶于少量 水，置1000ml容量瓶中，稀释至标线。此溶液1.00ml含1.00mg硫酸根。 6.步骤 ①分取50ml水样，置于150ml锥形瓶中 ②另取150ml锥形瓶八个，分别加入0、0.25、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00及10.00ml 硫酸根标准溶液，加蒸馏水至50ml。 ③向水样及标准溶液中各加1ml 2.5mol/L盐酸溶液，加热煮沸5min左右。取下后再各 加2.5ml铬酸钡悬浊液，再煮沸5min左右。 ④取下锥形瓶，稍冷后，向各瓶逐滴加入（1+1）氨水至呈柠檬黄色，再多加2滴。 ⑤待溶液冷却后，用慢速定性滤纸过滤，滤液收集于50ml比色管内（如滤液浑浊，应 重复过滤至透明）。用蒸馏水洗涤锥形瓶及滤纸三次，滤液收集于比色管中，用蒸馏水稀释至标线。 ⑥在420nm波长，用10mm比色皿测量吸光度，绘制校准曲线。 7.计算 硫酸根=(M/V)*1000 式中：M—由校准曲线查得的硫酸根量（mg） V—取水样体积（ml）

实验5水中铬的测定--分光光度法(精)

实验五水中铬的测定—分光光度法 废水中铬的测定常用分光光度法，其原理基于：在酸性溶液中，六价铬离子与二苯碳酰二肼反应，生成紫红色化合物，其最大吸收波长为540nm，吸光度与浓度的关系符合比尔定律。如果测定总铬，需先用高锰酸钾将水样中的三价铬氧化为六价铬，再用本法测定。 一.实验目的和要求 1.掌握分光光度法测定六价铬和总铬的原理和方法；熟练应用分光光度计。 2.预习第二章第六节中测定铬的各种方法，比较其优点、缺点。 二.六价铬的测定 1.仪器 ①分光光度计、比色皿（1cm、3cm）。 ②50mL具塞比色管、移液管、容量瓶等。 2.试剂 (1)丙酮。 (2)（1+1）硫酸。 (3)（1+1）磷酸。 (4) 0.2%（m/V）氢氧化钠溶液。 (5)氢氧化锌共沉淀剂：称取硫酸锌（ZnSO4·7H2O）8g，溶于100mL水中；称取氢氧化钠2.4g，溶于新煮沸冷却的120mL水中。将以上两溶液混合。 (6)4%（m/V）高锰酸钾溶液。 (7)铬标准贮备液：称取于120℃干燥2h的重铬酸钾（优级纯）0.2829g，用水溶解，移入1000mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。每毫升贮备液含0.100mg 六价铬。 (8)铬标准使用液：吸取5.00mL铬标准贮备液于500mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。每毫升标准使用液含1.00μg六价铬。使用当天配制。 (9)20%（m/V）尿素溶液。 (10)2%（m/V）亚硝酸钠溶液。 (11) 二苯碳酰二肼溶液：称取二苯碳酰二肼（简称DPC，C13H14N4O）0.2g，溶于50mL丙酮中，加水稀释至100mL，摇匀，贮于棕色瓶内，置于冰箱中保存。颜色变深后不能再用。 3.测定步骤 (1)水样预处理： ①对不含悬浮物、低色度的清洁地面水，可直接进行测定。 ②如果水样有色但不深，可进行色度校正。即另取一份水样，加入除显色剂以外的各种试剂，以2mL丙酮代替显色剂，用此溶液为测定试样溶液吸光度的参比溶液。 ③对浑浊、色度较深的水样，应加入氢氧化锌共沉淀剂并进行过滤处理。 ④水样中存在低价铁、亚硫酸盐、硫化物等还原性物质时，可将Cr6+还原为Cr3+，此时，调节水样pH值至8，加入显色剂溶液，放置5min后再酸化显色，并以同法做标准曲线。 (2)标准曲线的绘制：取9支50mL比色管，依次加入0、0.20、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00和10.00mL铬标准使用液，用水稀释至标线，加入1+1硫酸0.5mL和1+1磷酸0.5mL，摇匀。加入2mL显色剂溶液，摇匀。5～10min

紫外分光光度法测定未知物

紫外分光光度法测定未知物 1.仪器 1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个 1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个 1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支 1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支 2.试剂 2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。 2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。（其必为给出的五种物质之一） 3.实验操作 3.1比色皿配套性检查 石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。 3.2未知物的定性分析 将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。。。。 3.3未知物定量分析 根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。 推荐方法 3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于

环境空气—肼的测定—固体吸附—分光光度法

FHZHJDQ0153 环境空气肼的测定固体吸附分光光度法 F-HZ-HJ-DQ-0153 环境空气—肼的测定—固体吸附—分光光度法 1 范围 以1L/min的流量，采集60L空气的最小检出浓度为0.0012mg/m3。测定范围为0.00714～1.00mg/m3。 本方法受氯气、一甲基肼、偏二甲基肼的氧化产物干扰，空气中的氨、偏二甲基肼、二氧化氮、二氧化硫、硫化氢等不干扰肼的测定。 2 原理 空气中微量的肼通过涂硫酸的固体吸附剂浓集，与硫酸作用生成硫酸肼，脱附后与对二甲氨基苯甲醛反应，生成黄色的连氮化合物。于460nm波长下测定，在25mL溶液中含0～11.25μg肼时符合朗伯—比尔定律。摩尔吸光系数为6.5×104L/moL?cm。 3 试剂 3.1 硫酸：优级纯。 3.2 甲醇：优级纯。 3.3 乙醇：分析纯。 3.4 硫酸肼：分析纯。 3.5 对二甲氨基苯甲醛：分析纯。 3.6 101白色担体：40～60目。 3.7 0.05mol/L硫酸：用分度吸管吸取7mL浓硫酸，缓慢加入盛有2500mL蒸馏水的试剂瓶中，摇匀。 3.8 6mol/L硫酸：缓慢注入33.3mL浓硫酸于50mL蒸馏水中，再用蒸馏水准确稀释至100mL，摇匀。 3.9 硫酸-甲醇溶液：在250mL容量瓶中，加入200mL甲醇，缓慢注入硫酸(3.8)36mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀。 3.10 20g/L对二甲氨基苯甲醛溶液：称取10.0g对二甲氨基苯甲醛，溶于盛有500mL乙醇的试剂瓶中，加硫酸(3.1)20mL，摇匀。室温下可保存二周。 4 仪器 4.1 具塞刻度管：25mL，10支。 4.2 分度吸管：5mL，2支；10mL，2支。 4.3 分光光度计。 4.4 大气采样器。 4.5 空盒气压表。 4.6 分样筛。 4.7 采样管：按图1加工。 1一不锈钢网；2一涂硫酸担体 图1 玻璃采样管 5 采样 选好采样点，安装好采样器，调整高度使其距地面1.5m左右。接上采样管，令管口向下，

紫外分光光度法测定蛋白质含量实验报告.docx

紫外分光光度法测定蛋白质含量 一、实验目的 1.学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理； 2.掌握紫外分光光度法测蛋白质含量的实验技术。 二、实验原理 1.测蛋白质含量的方法主要有：①测参数法：折射率、相对密度、紫外吸收等；②基于化学反应:定氮法、双缩脲法、Folin―酚试剂法等。本实验采用紫外分光光度法。 2.蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环中含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近（不同蛋白质略有不同）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯―比尔定律。 利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：①对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；②样品中含有的嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。 三、仪器与试剂 TU―1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液3.00mg·mL-1、0.9%NaCl 溶液、试样蛋白质溶液。 10mL比色管、1cm石英比色皿、吸量管。 四、实验步骤 1.绘制吸收曲线 用吸量管吸取2mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在190~400nm间每隔5nm测一次吸光度Abs，记录数据并作图。 2.绘制标准曲线 用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在波长280nm处分别测其吸光度，记录数据并作图。 3.样品测定 取适量浓度试样蛋白质溶液，在波长280nm处测其吸光度，重复三次。在已经得到标准曲线的情况下，为了使测量结果准确度高，待测溶液的浓度需在标准曲线的线性范围内，所以，先测定试样蛋白质原液的吸光度（1.363），估算浓度为2.0960 mg·mL-1，再将原试液稀释至5倍（即取2mL试液，用0.9%NaCl 溶液稀释至刻度，摇匀），估算浓度为0.4192 mg·mL-1，测吸光度，重复三次五、数据处理与结果分析

分光光度法(附答案)

分光光度法（附答案） 一、填空题 1. 分光光度法测定样品的基本原理是利用朗伯-比尔定律，根据不同浓度样品溶液对光信号具有不同的_____，对待测组分进行定量测定。答案：吸光度(或吸光性，或吸收) 2. 分光光度法测定样品时，比色皿表面不清洁是造成测量误差的常见原因之一，每当测定有色溶液后，一定要充分洗涤。可用_____涮洗，或用_____浸泡。注意浸泡时间不宜过长，以防比色皿脱胶损坏。 答案：相应的溶剂(1+3)HNO3 3. 分光光度法测定土壤中总砷时，制备土壤样品过程中，需取过2mm筛的土样，用玛瑙研钵将其研细至全部通过_____mm筛后，备用。答案： 4. 光度法测定森林土壤全磷的样品，在碱熔完成后，应加入_____℃的水溶解熔块，并用硫酸和热水多次洗涤坩埚。答案：80 二、判断题 1. 应用分光光度法进行试样测定时，由于不同浓度下的测定误差不同，因此选择最适宜的测定浓度可减少测定误差。一般来说，透光度在20％ 65％或吸光值在之间时，测定误差相对较小。( ) 答案：正确 2. 分光光度法主要应用于测定样品中的常量组分含量。( ) # 答案：错误正确答案为：分光光度法主要应用于测定样品中的微量组分。 3. 应用分光光度法进行样品测定时，同一组比色皿之间的差值应小于测定误差。( ) 答案：错误正确答案为：测定同一溶液时，同组比色皿之间吸光度相差应小于，否则需进行校正。 4. 应用分光光度法进行样品测定时，摩尔吸光系数随比色皿厚度的变化而变化。( ) 答案：错误正确答案为：摩尔吸光系数与比色皿厚度无关。 5. 分光光度法测定土壤中总砷时，在样品中加入酸，并在电热板上加热，目的是分解有机物和氧化样品中各种形态存在的砷，使之成为可溶态的砷。（）答案：正确 6. 分光光度法测定土壤中总砷时，应直接称取新鲜的土样进行测定。（）答案：错误正确答案为：应称取风干或冷冻干燥的样品测定。 7. 分光光度法测定土壤样品中总砷时，有机物会干扰测定，应加酸并加热分解，以消除其于扰。（） 答案：正确 8. 硼氢化钾-硝酸银分光光度法测定土壤中总砷时，样品消解过程中所加的酸分别是盐酸、硝酸和磷酸。（） > 答案：错误正确答案为：样品消解所加的酸分别是盐酸、硝酸和高氯酸。 9. 分光光度法测定生活垃圾或土壤中砷时，若所用试剂中含有少量氰化物，可用乙酸铅脱脂棉吸收去除。（）答案：错误正确答案为：乙酸铅脱脂棉吸收去除的是试剂中的硫化物。

水中六价铬的测定 二苯碳酰二肼分光光度法

1. 掌握二苯碳酰二肼分光光度法(DPC法)测定水中六价铬的原理及方法； 2. 熟悉分光光度计的使用方法。

在酸性介质中，Cr 6+与二苯碳酰二肼(C 13H 14N 4O ，简称DPC)反应生成紫红色络合物，该紫红色络合物溶液的最大吸收波长为540 nm ，并且其摩尔吸光系数为4×104L?mol -1?cm -1。 若测定总铬，先用高锰酸钾将水样中的Cr 3+氧化为Cr 6+， 再用本法测定。C H 5H 6C H N N 6+3+ Cr Cr N N H C 6H 5H O +O H 56C N N N N H C 6H 5H C +紫红色络合物

本法适用于地面水和工业废水中Cr 6+的测定。Mo 6+、Hg +、Hg 2+、V 5+的存在或Fe 3+大于1 mg/L ，会使水样显色或与显色剂反应生成有色化合物，但在本方法的显色酸度下反应不灵敏。钼和汞含量低于200 mg/L 不会干扰测定。V 5+含量高于4 mg/L 就会干扰测定，10 min 后可自行褪色。 水样中含有氧化性及还原性物质(ClO -、Fe 2+、SO 32-、S 2O 32-等)、水样有色或混浊，必须进行预处理。 DPC 法测定Cr 6+的范围为0.004-1.0mg/L ，当取样体积为50 mL 时，使用光程为30 mm 比色皿，方法的最低检出浓度为0.004 mg/L ，使用光程为10 mm 比色皿，测定上限浓度为1.0 mg/L 。

(1) 分光光度计，配10 mm、30 mm比色皿 (2) 恒温干燥箱 (3) 分析天平 (4) 刻度移液管，1 mL、2 mL、5 mL (5) 50mL具塞比色管

分光光度法测定DNA的浓度和纯度Word版

分光光度法测定DNA的浓度和纯度 【目的要求】： 了解：分光光度法测定DNA浓度和纯度的原理； 掌握：分光光度法测定DNA浓度和纯度的技术方法； 熟悉：分光光度法测定DNA浓度和纯度的实验操作步骤和注意事项。 【实验原理】： 前面提取得到的DNA的浓度和纯度都是未知的，在后续的DNA酶切、连接及转化等实验中需要一定的浓度和纯度要求，因此要测定DNA的浓度和纯度。 测定DNA的方法通常有：紫外分光光度法；琼脂糖凝胶电泳法（也叫荧光光度法） （1）紫外分光光度法： 组成DNA的碱基均具有一定的吸收紫外线特性，最大吸收值在波长为250～270nm之间，腺嘌呤的最大紫外线吸收值在260.5nm，胞嘧啶：267nm，鸟嘌呤：276nm，胸腺嘧啶：264.5nm，尿嘧啶：259nm。这些碱基与戊糖、磷酸形成核苷酸后其最大吸收峰不会改变，但核酸的最大吸收波长是260nm，吸收低谷在230nm。这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。在波长260nm紫外线下，10OD值的光密度相当于双链DNA浓度为 50μg/ml；单链DNA或RNA为40μg/ml；单链寡聚核苷酸为20μg/ml。可以此来计算核酸样品的浓度。 分光光度法不但能够确定核酸的浓度，还可以通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值（A260/A280）估计核酸的纯度。DNA的比值为1.8，RNA的比值为2.0。若DNA比值高于1.8，说明制剂中RNA尚未除尽。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。当然也会出现既含蛋白质又含RNA的DNA溶液比值为1.8的情况，所以有必要结合凝胶电泳等方法鉴定有无RNA，或用测定蛋白质的方法检测是否存在蛋白质。紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液。 （2）琼脂糖凝胶电泳法（荧光光度法）：

二苯碳酰二肼分光光度法测定六价铬

实验十八二苯碳酰二肼分光光度法测定六价铬 1、实验目的 ① 练习使用721分光光度计。 ② 配制标准色列并测定地表水中六价格。 2﹑实验原理 在酸性溶液中，六价铬遇二苯碳酰二肼反应，生成紫红色化合物，其最大吸收波长为540nm，摩尔吸光系数为4×104。 本方法适用于地面水和工业废水中六价铬的测定。 3﹑药品与仪器 3.1 实验药品： ①铬标准储备液：称取于120℃干燥2hr的重铬酸钾（K2Cr2O7，优级纯） 0.2829g，用水溶解后，移入1000mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。每毫升溶液含0.100mg六价铬，即100ppm。 ②铬标准使用液：吸取5.00mL铬标准储备液，置于500mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。每毫升溶液含1.00μg六价铬，即1ppm。使用时当天配制。 ③显色剂：称取二苯碳酰二肼（C13H14N4O）0.2g，溶于50mL丙酮中，加水稀释至100mL，摇匀。处于棕色瓶置于冰箱中保存。色变深后不能使用。 ④1+1硫酸 ⑤1+1磷酸

3.2 实验仪器 ①721型分光光度计 ②50mL比色管 ③1cm或3cm比色皿 4﹑实验步骤 4.1 标准曲线的绘制 向一系列50mL比色管中分别加入0、0.20、0.50、1.00、2.00、4.00、 6.00、8.00、10.00mL铬标准使用液，用水稀释至标线。加入1+1硫酸溶液 0.5mL，1+1磷酸溶液0.5mL，摇匀，加入2mL显色剂，摇匀。5—10min之后，于540nm波长处，用3cm比色皿，以水为参比，测定吸光度，绘制标准曲线。 4.2 样品测定 取适量（含六价铬少于50μg）无色透明水样，置于50mL比色管中，用水稀释至标线。以下步骤同标准曲线绘制。 5、注意事项 ①当水样混浊或有色时，应进行预处理。 ②所有玻璃仪器(包括采样瓶)，不能用重铬酸钾洗液洗涤，可用硝酸—硫酸混合液或洗涤液洗涤。洗涤后要冲洗干净。玻璃器皿内要求光洁，防止铬被吸附。 6﹑数据处理

可见—紫外分光光度法测定浓度-Word整理

一．目的(Objective) 1．初步熟悉可见-紫外分光光度仪的使用方法。 2．熟悉测绘吸收曲线的方法。 3．学会利用可见-紫外分光光度仪进行未知物的浓度分析。 二、基本原理(Principle) 亚甲基蓝溶液在665nm下有最大光度吸收值，利用此性质绘制亚甲基蓝的吸收曲线，并测定未知亚甲基蓝溶液的浓度。 三、仪器与试剂(Equipment and Reagents) 1．仪器：上海棱光技术有限公司Spectrumlab 22 pc 紫外可见分光光度计，1cm 石英吸收池。 2．试剂：亚甲基蓝溶液(25ppm)、亚甲基蓝溶液(未知浓度) 四．实验步骤(Procedure) 1．打开样品室的仓盖（预热20min），调节好测定波长。 2．利用亚甲基蓝标准液(25ppm)配制亚甲基蓝溶液(1ppm)、亚甲基蓝标准液(2ppm) 亚甲基蓝标准液(3ppm)、亚甲基蓝标准液(4ppm)、亚甲基蓝标准液(5ppm)。3．关上样品室仓盖，按100%键至显示器显示100按再打开样品室仓盖0键归零，. 4．将空白比色皿放入样品池一号位，再依次放入装有不同浓度亚甲基蓝溶液的比色皿，盖好样品室仓盖进行测量，先测出亚甲基蓝标准液的吸光度，再测出亚甲基蓝未知液的吸光度。 5．绘制出亚甲基蓝标准液的吸光度——浓度吸收曲线，再利用吸光度——浓度吸收曲线与测得的测出亚甲基蓝未知液的吸光度算出亚甲基蓝未知液的浓度度。

五、实验数据及处理(Data and Calculations) 亚甲基蓝标准液浓度—吸光度表

由图可得该曲线线性拟合的线性函数为：A= 实验测得未知浓度亚甲基蓝溶液的吸光度A x= ，根据上述线性函数可计算的该溶液浓度为C x= ppm 六、误差分析 1、配制得到的亚甲基蓝溶液浓度与实验要求的浓度有一定的偏差，导致了 实验结果的误差； 2、含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。 七、实验总结 1、实验过程中要保持谨慎、实事求是的态度，配制溶液时应严格按照实验操作要求来进行以减小实验误差，尊重实验结果，认真分析误差。 2、测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸收峰波长±2nm 以内测试几个点的吸光度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。 3、当吸光度和浓度关系不呈良好线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同一体积，显色后测定各份溶液的吸光度，然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并 求出其含量。 4、由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。