实验一 TLC法进行药物中特殊杂质的检查

实验二TLC法进行药物中特殊杂质的检查

一、目的要求

1、掌握阿司匹林片、盐酸哌唑嗪中特殊杂质检查的基本原理和方法。

2、掌握薄层色谱在药物杂质检查中的应用。

3、掌握薄层色谱法的基本操作。

二、乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查

取本品0.1克，加乙醇1mL溶解后，加冷水适量使成50mL，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液（取盐酸溶液（9→100mL）1mL，加硫酸铁铵指示液2mL后，再加水适量使成100mL）1mL，摇匀，30秒钟内，如显色。与对照液（精密称取水杨酸0.1克，加水溶解后，加冰醋酸1mL，摇匀，再加水使成1000mL，摇匀。精密量取1mL，加乙醇1mL，水48mL，与上述新制的稀硫酸铁铵溶液1mL，摇匀）比较。不得更深（0.1%）。

三、盐酸哌唑嗪中有关物质检查

1.薄层板的制备

取硅胶GF254硅胶4g，加水约12mL，（1份固定相和3份水）在研钵中按同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2～0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃活化30 分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。

2.盐酸哌唑嗪中有关物质检查

取本品，加三氯甲烷-甲醇-二乙胺（10︰10︰1）溶液制成每1mL中含5.0mg 的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加同一溶液稀释成每1mL中含50μg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录V B）试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-二乙胺（95︰5)为展开剂；展开，晾干，置紫外灯（254nm）下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。

四、注意事项

1.点样采用微量注射器进行，在距薄层板底边

2.5cm处开始点样，应少量多次点于同一原点处，原点面积应尽量小。

2.采用倾斜上行法展开，展开剂应浸入薄层板底边的1cm深度。

3.碱性四氮唑蓝试液应临用新配，新鲜试剂应呈黄色，颜色如变深者不宜使用。

4.显色后，应立即检视斑点，并用针头定位，以便记录图谱

5.游离水杨酸的检查，样品管应尽量干燥，不得带入过多水分，否则样品加醇后不易溶解。

五、思考题

1.薄层层析法检查盐酸哌唑嗪中有关物质与氢化可地松中其他甾体的原理是什么？为何用稀释液作对照品？

2.试计算三种药物的杂质限度？

实验二药物特殊杂质检查

一、原始记录

①附薄层层析板图谱

②列式计算杂质限量

二、实验报告

检品名称：乙酰水杨酸盐酸哌唑嗪醋酸可的松

化验目的：特殊杂质检查游离水杨酸有关物质其他甾体化验方法：按中国药典P283 P543 2000年版

化验结果：〈0.1% 合格

药物分析特殊杂质检查项目与方法

药物分析特殊杂质检查项目与方法 药物名称特殊杂质检查项目检查方法 阿司匹林游离水杨酸纳氏比色管比色法 布洛芬有关物质TLC,自身稀释对照法 丙磺舒有关物质TLC,自身稀释对照法 盐酸普鲁卡因注射液对氨基苯甲酸TLC,杂质对照品(对氨基苯甲酸)法 对乙酰氨基酚有关物质TLC,杂质对照品(对氯乙酰苯胺)法 对氨基酚纳氏比色管比色法 肾上腺素酮体UV,310nm测定吸光度值 苯巴比妥中性或碱性物质重量分析法,碱性条件下用乙醚提取后称定重量 司可巴比妥钠中性或碱性物质重量分析法,碱性条件下用乙醚提取后称定重量 异烟肼游离肼TLC,杂质对照品（硫酸肼）法 硝苯地平有关物质HPLC，外标法 诺氟沙星有关物质HPLC，外标法 盐酸氯丙嗪有关物质TLC，自身稀释对照法 地西泮及其注射液有关物质HPLC，不加校正因子的主成分自身对照法 奥沙西泮有关物质TLC，自身稀释对照法 硫酸阿托品莨菪碱旋光法 其他生物碱比浊法 盐酸吗啡阿扑吗啡比色法 罂粟酸比色法 其他生物碱TLC，自身稀释对照法与对照品（磷酸可待因）法硫酸奎宁三氯甲烷-乙醇中的不溶物重量分析法 其他金鸡纳碱TLC，自身稀释对照法 硝酸士的宁马钱子碱硝化反应后观察颜色，不得显红色或红棕色 葡萄糖亚硫酸盐与可溶性淀粉加碘试液反应应，应即显黄色 蛋白质与磺基水杨酸反应，不得产生沉淀 右旋糖酐20 分子排阻HPLC，示差折光检测器 醋酸地塞米松有关物质HPLC，不加校正因子的主成分自身对照法 硒UV，氧瓶燃烧破坏后测定吸光度值 维生素B1 总氯量容量分析法，银量法

维生素C 铁盐和铜盐原子吸叫分光光度法 维生素E 生育酚容量分析法，铈量法 正已烷外标法，GC，FID检测器 维生素K1 甲萘醌比色法 顺式异构体HPLC，面积归一化法 青霉素钠（钾）吸光度难关UV 青霉素聚合物分子排阻HPLC，葡聚糖凝胶柱，UV检测器阿莫西林有关物质HPLC，梯度洗脱 阿莫西林聚合物分子排阻HPLC，葡聚糖凝胶柱，UV检测器硫酸庆大霉素G组分HPLC，蒸发光散射检测器 盐酸四环素有关物质HPLC，加校正因子的主成分对照法 罗红霉素有关物质HPLC

药物的杂质检查

一、选择题： 1．药物中的重金属是指（） A Pb2＋ B 影响药物安全性和稳定性的金属离子 C 原子量大的金属离子 D 在规定条件下与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质 2．古蔡氏检砷法测砷时，砷化氢气体与下列那种物质作用生成砷斑（） A 氯化汞 B 溴化汞 C 碘化汞 D 硫化汞 3．检查某药品杂质限量时，称取供试品W(g)，量取标准溶液V(ml)，其浓度为C(g/ml)，则该药的杂质限量(%)是（） A B C D 4．用古蔡氏法测定砷盐限量，对照管中加入标准砷溶液为（） A 1ml B 2ml C 依限量大小决定 D 依样品取量及限量计算决定 5．药品杂质限量是指（） A 药物中所含杂质的最小容许量 B 药物中所含杂质的最大容许量 C 药物中所含杂质的最佳容许量 D 药物的杂质含量 6．氯化物检查中加入硝酸的目的是（） A 加速氯化银的形成 B 加速氧化银的形成 C 除去CO2+3、SO2-4、C2O2-4、PO3-4的干扰 D 改善氯化银的均匀度 二、多选题： 1．用对照法进行药物的一般杂质检查时，操作中应注意（） A 供试管与对照管应同步操作 B 称取1g以上供试品时，不超过规定量的±1% C 仪器应配对 D 溶剂应是去离子水 E 对照品必须与待检杂质为同一物质 2．关于药物中氯化物的检查，正确的是（） A 氯化物检查在一定程度上可“指示”生产、储存是否正常

B 氯化物检查可反应Ag+的多少 C 氯化物检查是在酸性条件下进行的 D 供试品的取量可任意 E 标准NaCl液的取量由限量及供试品取量而定 3．检查重金属的方法有（） A 古蔡氏法 B 硫代乙酰胺 C 硫化钠法 D 微孔滤膜法 E 硫氰酸盐法 4．关于古蔡氏法的叙述，错误的有（） A 反应生成的砷化氢遇溴化汞，产生黄色至棕色的砷斑 B 加碘化钾可使五价砷还原为三价砷 C 金属新与碱作用可生成新生态的氢 D 加酸性氯化亚锡可防止碘还原为碘离子 E 在反应中氯化亚锡不会铜锌发生作用 5．药品的杂质会影响（） A 危害健康 B 影响药物的疗效 C 影响药物的生物利用度 D 影响药物的稳定性 E 影响药物的均一性 三、填空题： 1．药典中规定的杂质检查项目，是指该药品在___________和____________可能含有并需要控制的杂质。 2．古蔡氏检砷法的原理为金属锌与酸作用产生____________，与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的___________，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的______，与一定量标准砷溶液所产生的砷斑比较，判断药物中砷盐的含量。 3．砷盐检查中若供试品中含有锑盐，为了防止锑化氢产生锑斑的干扰，可改用__________。 四、名词解释： 1. 一般杂质： 2. 特殊杂质：

实验二 葡萄糖的一般杂质检查

实验二葡萄糖的一般杂质检查 一、目的要求 1．掌握一般杂质检查的原理、操作方法及限量计算方法。 2．熟悉药物中一般杂质检查的目的和意义。 3.掌握葡萄糖中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属限量检查的基本原理和方法。 二、基本原理 葡萄糖是用淀粉以无机酸水解或在酶催化下经过水解得稀葡萄糖液，再经脱色、浓缩结晶制得。 1．国内生产方法有以下几种： ⑴酸水解法：以无机酸将淀粉水解为葡萄糖。 (C6H10O5)n + nH2O HCl nC6H12O6 ⑵双酶水解法：以生物酶为催化剂将淀粉水解为葡萄糖。 (C6H10O5)n + nH2O生物酶nC6H12O6 ⑶酸酶水解法：以盐酸为液化剂，糖化酶为催化剂，将淀粉水解为葡萄糖。 (C6H10O5)n + nH2O HCl 糖化酶nC6H12O6 根据葡萄糖生产工艺特点，应进行氯化物、重金属、砷盐等一般杂质检查，进行蛋白质、可溶性淀粉等特殊杂质检查。 2．各种杂质检查原理如下： ⑴氯化物检查法氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下处理生成的氯化银浑浊相比较，测定供试品中氯化物的限量。 C1- + Ag+—→ AgCl↓ ⑵硫酸盐检查法药物中微量硫酸盐与氯化钡在酸性溶液中作用，生成硫酸钡微粒而显白色浑浊液，同一定量标准硫酸钾溶液与氯化钡在同样条件下，用同法处理生成的浑浊比较，判断药物中含硫酸盐的限量。 SO4 2- 十Ba2+ —→ BaS04↓ ⑶铁盐检查法三价铁盐在硝酸酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色可溶性硫氰酸铁络离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。 Fe3++6SCN- —→ [Fe(SCN)6]3- 红色 进行葡萄糖的铁盐检查时，需在显色前加硝酸3滴，煮沸5min，使Fe2+氧化为Fe3+。由于硝酸中可能含有亚硝酸，亚硝酸也能与硫氰酸根离子反应生成红色的亚硝酰硫氰化物，影响比色，因此加入显色剂之前加热煮沸有助于除去氧化氮，以消除氧化氮生产的亚硝酸干扰。 ⑷重金属检查法重金属是指在实验条件下，能与S2-作用生成硫化物而显

药物中特殊杂质的检查

药物中特殊杂质的检查 一、目的要求 1．掌握阿司匹林片、盐酸普鲁卡因注射液、盐酸四环素片中特殊杂质检查的基本原理和方法； 2．掌握薄层色谱法在药物杂质检查中的应用； 3．掌握薄层色谱法的基本操作； 4. 掌握检验结果的处理与判断，能够规范书写检验原始记录及检验报告书； 5. 正确并更科学合理地解释检验中的现象，处理检验中的异常情况。 二、试剂与仪器 1．试剂（查阅《中国药典》，进行所用试剂的配制） 2. 仪器 纳氏比色管、玻璃板（5×15cm）、全自动点样器、层析缸、可见分光光度计 三、实验步骤 （一）阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查 取本品5片，研细，用乙醇30mL分次研磨，并移入100mL量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即过滤，精密量取滤液2mL，置50mL纳氏比色管中，用水稀释至50mL，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液（取1mol/L盐酸溶液1mL，加硫酸铁铵指示液2mL后再加水使成100mL）3mL，摇匀，30秒钟内如显色，与对照液（精密量取0.01%水杨酸溶液4.5mL，加乙醇3mL，0.05%酒石酸溶液1mL，用水稀释至50mL，再加上述新配制的稀硫酸铁铵溶液3mL，摇匀）比较，不得更深。 （二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查 薄层板的制备：取硅胶H2.5g，加0.5%羧甲基纤维素钠水溶液5.5～6mL调成糊状，均匀涂布于光滑、平整、洁净的玻璃板（5×15cm）上，置水平台上晾干，在110℃烘0.5小时，置干燥器备用。 操作：精密量取本品，加乙醇稀释使成每1mL中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。另取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1mL中含30μg 的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各10微升，分别点样于同一羧甲

实验1 药物一般杂质检查(学生)

实验开始前清点实验仪器，约半小时。 实验1 药物一般杂质检查 一、目的要求 1、通过对葡萄糖分析，了解药物的一般杂质检查项目和意义 2、掌握葡萄糖分析中氯化物、硫酸盐、铁盐和重金属限度检查的原理和方法 二、原理 《药物分析》书中一般杂质检查方法中的氯化物检查法、硫酸盐检查法、铁盐检查法和重金属检查法的原理。 Ag+ + Cl-→AgCl↓白色凝乳状的沉淀 氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银的白色浑浊液，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银的浑浊液比较，以判断供试品中氯化物是否超过了限量。 Ba2++ SO42-→BaSO4↓硫酸钡微粒 硫酸盐的检查是利用SO42-与Ba2+在盐酸酸性溶液中生成的硫酸钡的白色浑浊液，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下生成的浑浊比较，以判断供试品中硫酸盐是否超过了限量。Fe3++ 6SCN-→ [Fe(SCN)6]3- ↓红色可溶性的硫氰酸铁配位离子 铁盐在酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性的硫氰酸铁配位离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后所显的颜色进行比较，以判断供试品中铁盐是否超过了限量。 CH3CSNH2+ H2O →CH3CONH2+ H2S ( pH =3.5) Pb2++ H2S →PbS↓+ 2H+ 硫代乙酰胺在弱酸性（pH =3.5醋酸盐缓冲液）条件下，产生硫化氢，与重金属离子（如Pb2+）生成黄色到棕黑色的硫化物浑悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，判断供试品中重金属含量是否符合限量规定。 三、操作 1、氯化物 样品：葡萄糖0.6g————————︳ 标准：标准NaCl (aq) 6.0mL————︳（标准NaCl (aq)浓度为0.01mgCl-/mL）→用水溶解为25mL→加稀HNO3 10mL→加水至40mL →加AgNO3 溶液1.0mL→加水至50mL→摇匀，暗处放置5min，置黑色背景下-实验台面上，从比色管上方自上向下观察、比较，写出实验现象。

实验三 药物一般杂质检查

实验三 药物一般杂质检查 一、实验目的 熟悉药物中杂质检查的项目、原理和方法，并能进行检查操作。 二、实验原理 1.氯化物检查法 药物中微量氯化物在硝酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银的白色混浊液，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银混浊液比较，以判断药物中氯化物的限量。 ↓→++-AgCl Ag Cl 2．硫酸盐检查法 药物中微量硫酸盐与氯化钡在酸性溶液中作用，生成硫酸钡白色混浊液，与一定量标准硫酸钾溶液与氯化钡在相同条件下生成的混浊比较，以判断药物中硫酸盐的限量。 ↓→++-4224BaSO Ba SO 3．重金属检查法 采用《中华人民共和国药典》（以下简称“中国药典”）（2005年版二部）收载的重金属检查的第一法。硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸盐缓冲液）溶液中水解，产生硫化氢，与微量重金属离子作用，生成黄色到棕黑色的硫化物均匀昏悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，可判定药物中中重金属的限量。 S H CONH CH O H CSNH CH 223223+→+ ↓→++PbS S H Pb 22 4．砷盐检查法 采用古蔡氏法检查砷盐。利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中的微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，可判定药物中砷盐的限量，其反应如下： O H Zn AsH H Zn AsO 223333393++↑→++++- 223)(22HgBr AsH HBr HgBr AsH +→+黄色 323)(33HgBr As HBr HgBr AsH +→+棕色 三、实验方法 1．酸碱度 取本品10ml ，加甲基红指示剂2滴，不得显蓝色；另取10ml ，加溴麝香草酚蓝指示剂5滴，不得显蓝色。 2．氯化物、硫酸盐与钙盐 取本品，分置三支试管中，每管各50ml 。第一管中加硝酸5滴与硝酸银试液1ml ，第二管中加氯化钡试液2ml ，第三管中加草酸铵试液2ml ，均不

杂质检查方法的方法学验证各项指标分析

杂质检查方法的方法学验证各项指标分析 姓名：王芳 药物分析中药品检验基本程序包括：鉴别、检查、含量测定、写实验报告等步骤 检查项下包括反映药品安全性有效性的试验方法和限度、均一性、纯度等制备工艺要 求等内容。药物的杂质是指药物中存在的无治疗作用或者影响药物的稳定性、 疗效,甚至对 人体的健康有害的物质。杂质的来源可由生产和贮藏过程中引入：①生产过程中主要是由 于所用原料不纯或者原料反应过程中反应未完全 ，以及反应的中间产物、 反应的副产物等 造成药品原料中杂质的存在；或者是由原料生产过程中反应的溶媒、催化剂等溶剂的残留 所造成的药物的杂质。②贮藏过程引入主要是受温度、 湿度、日光、空气等外界条件的 影响或者受微生物的作用产生的杂质。 在药物的研究、 生产、贮存和临床应用等方面，必 须保持药物的纯度，降低药物的杂质，这样才能保证药物的有效性和安全性。 原料药和制剂主要是对药物中的微量杂质进行纯度检查，以判断药物纯度是否符合杂 质限量的规定要求，而生物制品的杂质检查除包括一般杂质检查，特殊杂质检查外还应对 其进行安全性检查。杂质定量、定性检查方法主要是根据药物和特殊杂质在理化性质上的 差异来进行的，可以采用容量分析法，光谱法分析法，色谱分析法等，各种检测方法所需 的方法学验证的指标包括准确度，精密度，专属性，线性，范围，检测线、定量线，耐用 性八项指标，但采用不同方法所需的指标不尽相同，杂质限量检查一般需要验证专属性， 检测线，耐用性。而杂质定量分析方法除检测限外其它指标一般都需验证 ⑷。 不同实验应该根据不同实验目的对对各项指标进行验证，下面就杂质种类及近年来检 测杂质最常用的检测方法进行分析： 1、 特殊杂质 特殊杂质是指在药物制备和贮存过程中 ， 或 合成过程中产生的副产物等，多指有机杂质, 性的对 映体。 HPLC 法测定萘普生缓释片有关物质的含量： 该缓释片主药是萘普生，特殊杂质为(6 —甲氧基—2—萘乙酮)，方法采用高效液相色谱法(HPLC)法；色谱柱：以十八烷基硅烷键 合硅胶为学号: 由于药物性质不稳定而产生的降解产物 也包括残留溶剂和手性化合物中无特殊毒

最新药物分析教案——第四章 药物检查法

第四章药物检查法 第一节概述 主要内容：主要讲授药物的一般杂质检查和特殊杂质检查，并介绍固体制剂的含量均匀度检查法和溶出度测定法。 杂质定义：是指药物中存在的无治疗作用或影响疗效，甚至对人体健康有害的物质。 杂质分类：分为一般杂质和特殊杂质 一般杂质：指自然界中分布较广，容易引入的杂质，如酸、碱、水分，重金属等。 检查方法：一般在药典附录中。 特殊杂质：在个别药物生产，贮存过程中引入的，如阿司匹林中的水杨酸。 检查方法：一般放在药典的正文中。 杂质检查的意义： 药物中含有杂质是影响药物纯度的主要因素，杂质增多，不但可以使药物含量和活性降低，毒副作用增加，而且还可能使药物发生理化常数，外观性状的变化，因此有必要对杂质做检查。 但杂质检查要求不能太高，要求太高，会增加生产成本，同时我们讲要求也不能太低，太低，会影响药物的疗效，影响健康，人就不安全了。 所以杂质检查必须在有利于生产的前提下，不影响疗效，不影响健康，制订恰当的检查项目和限度。 明确应该检查什么？量是多少？ 药物中的杂质是影响药物纯度的因素，所以我们讲杂质检查，也叫纯度检查。 第二节药物中杂质的来源和杂质限量计算 一、药物中杂质的来源 1、生产过程中引入 A、原料不纯 B、有一部分原料没有反应完全 C、反应中间产物和副产物在精制时没有除净 D、与生产器皿接触均会不同程度地引入杂质 例：用水杨酸为原料合成阿司匹林，由于反应不完全，可能引入水杨酸杂质，或者反应中间产物，使用金属器皿，可引入铁、铜、锌等金属杂质。 2、贮存过程中引入 药物在贮存过程中受温度、湿度、日光、空气、微生物等外界条件的影响，发生水解、氧化、分解、聚合、并异构化、发霉等变化，产生杂质。 例：阿司匹林水解产生水杨酸 维生素C见光→氧化→颜色变黄 麻醉用乙醚→日光→氧化→有毒的过氧化物 四环素→酸性条件下→发生差向异构化，毒性增高，如梅花K胶囊事件 微生物污染→发霉→引起内毒素，如输液反应？上海某厂生产的输液，细菌无处不 在。 二、杂质限量

实验2 药物特殊杂质检查(学生)

实验2 药物特殊杂质检查 一、目的要求 1、掌握葡萄糖分析中砷盐限度检查的原理和方法。 2、了解某些药物中特殊杂质的检查意义，并掌握其操作方法。 二、实验原理 As 3+ +3Zn +3H +3Zn 2++AsH AsO 3 3-+3Zn +9H +3Zn 2++AsH +H 2O AsO 43-+4Zn +11H +4Zn 2++AsH +4H 2O AsH 3+3HgBr 23HBr +As(HgBr)3黄色2As(HgBr)3+AsH 33AsH(HgBr)2棕色As(HgBr)3 +AsH 3 3HBr +3As 2Hg 3 棕黑色 本实验采用古蔡（Gutzeit ）法检查药物中微量的砷盐，其原理为金属锌与酸作用生成新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，判断供试品中砷盐含量是否符合限量规定。 O OH OH 水杨酸 OCOCH 3 OH O 乙酰水杨酸 O OH OH +Fe 3+ +3H + 3 O O Fe /3 3 O H 利用乙酰水杨酸结构中无酚羟基，不能与高铁盐作用，而水杨酸则可与高铁盐反应呈紫(堇)色，与一定量水杨酸对照液生成的色泽比较，从而控制游离水杨酸的限量。 C 2H 5OOC 2H 5+2KI H 2O C 2H 5OC 2H 5I 2 2 KOH + ++ I 2 遇淀粉显色，判断供试品中是否有过氧化物存在。 5CH 3OH+2MnO 4-+ 6H + 5HCHO +2Mn 2++ 8H 2O 3Mn 2++ 2MnO 4-+2H 2 O 5MnO 2+ 4H + 甲醇在磷酸溶液中，被高锰酸钾氧化成甲醛，用偏重亚硫酸钠除去过量的高锰酸钾，甲醛与变色酸在浓硫酸存在下，先缩合，随之氧化，生成对醌结构的蓝紫色化合物。

提取物杂质、中药材等药物的杂质检查

第三章药物的杂质检查 第一节概述 主要内容：主要讲授药物的一般杂质检查和特殊杂质检查，并介绍固体制剂的含量均匀度检查法和溶出度测定法。 杂质定义：是指药物中存在的无治疗作用或影响疗效，甚至对人体健康有害的物质。 杂质分类：分为一般杂质和特殊杂质 一般杂质：指自然界中分布较广，容易引入的杂质，如酸、碱、水分，重金属等。 检查方法：一般在药典附录中。 特殊杂质：在个别药物生产，贮存过程中引入的，如阿司匹林中的水杨酸。 检查方法：一般放在药典的正文中。 杂质检查的意义： 药物中含有杂质是影响药物纯度的主要因素，杂质增多，不但可以使药物含量和活性降低，毒副作用增加，而且还可能使药物发生理化常数，外观性状的变化，因此有必要对杂质做检查。 但杂质检查要求不能太高，要求太高，会增加生产成本，同时我们讲要求也不能太低，太低，会影响药物的疗效，影响健康，人就不安全了。 所以杂质检查必须在有利于生产的前提下，不影响疗效，不影响健康，制订恰当的检查项目和限度。 明确应该检查什么？量是多少？ 药物中的杂质是影响药物纯度的因素，所以我们讲杂质检查，也叫纯度检查。 第二节药物中杂质的来源和杂质限量计算 一、药物中杂质的来源 1、生产过程中引入 A、原料不纯 B、有一部分原料没有反应完全

C、反应中间产物和副产物在精制时没有除净 D、与生产器皿接触均会不同程度地引入杂质 例：用水杨酸为原料合成阿司匹林，由于反应不完全，可能引入水杨酸杂质，或者反应中间产物，使用金属器皿，可引入铁、铜、锌等金属杂质。 2、贮存过程中引入 药物在贮存过程中受温度、湿度、日光、空气、微生物等外界条件的影响，发生水解、氧化、分解、聚合、并异构化、发霉等变化，产生杂质。 例：阿司匹林水解产生水杨酸 维生素C见光→氧化→颜色变黄 麻醉用乙醚→日光→氧化→有毒的过氧化物 四环素→酸性条件下→发生差向异构化，毒性增高，如梅花K胶囊事件 微生物污染→发霉→引起内毒素，如输液反应？上海某厂生产的输液， 细菌无处不在。 二、杂质限量 药物中只要不对人体有害，不会影响疗效和药物的稳定性，允许有一定量的杂质存在。 一般我们不测定其准确含量（到底有多少量） 我们只测定其最大允许量（有没有超过最大允许量）→所以杂质检查，我们也称为限度检查。 杂质限量 定义：是指药物中所含杂质的最大允许量，通常用大于、小于或等于百分之几或百万分之几表示，% PPM 操作：取一定量待检杂质的纯品或对照品（中国生物制品检定所提供）配成标准溶液，同时取一定量供试品配成供试品溶液，经同样处理后，比较结果。 注意：同样处理是指加同样的溶剂，同样量的溶剂稀释到同一容量等。

第三章药物的杂质检查

一、氯化物检查法 药物的生产过程中，常常要用到盐酸，或原料、中间体呈盐酸盐等，氯化物因此极易被引入到药物中。Cl-对人体虽然无害，但它的量可以反映出药物的纯净程度及生产过程是否正常。因此作为信号杂质，氯化物在很多药物中需要检查。 原理中国药典对氯化物的检查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊液比较，浊度不得更大。 方法除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml(溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性)，再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml 纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0m1，用水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较。 中国药典对无水葡萄糖中氯化物的检查记叙为：取本品0.60g，依法检查(附录ⅤⅢA)，与标准氯化钠溶液6.0ml制成的对照液比较，不得更浓(0.010%)。 讨论以上检查方法中使用的标准氯化钠溶液每1ml相当于10μg的Cl-。在测定条件下，氯化物浓度以50ml中含50μg～80μg的Cl-（相当于标准氯化钠溶液5.0ml～8.0ml）所显浑浊梯度明显，便于比较。因此设计氯化物的检查方法时，应根据其限量，取用适宜的供试品量，使氯化物的浓度处在适宜比浊的范围内。 氯化物检查宜在硝酸酸性溶液中进行，因加入硝酸可避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成而干扰检查，同时还可加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊。 为了避免光线使单质银析出，在观察前应在暗处放置5min。由于氯化银为白色沉淀，比较时应将比色管置黑色背景上，从上向下观察，比较。 供试品处理有的药物在上述试验条件下对检查有干扰，应排除干扰后再检查。供试品溶液如不澄清，可用含硝酸的水洗净滤纸中的氯化物后滤过。供试品溶液如带颜色，可按中国药典附录所规定的方法处理。即取两份供试品溶液，于其中一份中先加入硝酸银试液1.0m1，摇匀，放置10min，如显浑浊，可反复滤过，至滤液澄清，即得无氯化物杂质又具有相同颜色的澄清溶液，再在其中加入规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml，作为对照溶液；另一份中加入硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，作为供试品溶液，将两液在暗处放置5 min后比较，即可消除颜色的干扰。某些有颜色的药物也可根据其化学性质，设计其他的排除干扰的方法。如高锰酸钾中的氯化物检查，可先加乙醇适量使高锰酸钾还原褪色后，再依法检查。检查碘化物（如碘化钠），I-也能与硝酸银形成沉淀，干扰检查。可在供试品中加入一定量的酸和过氧化氢溶液，加热煮沸，使氧化产物碘挥去、溶液澄明无色后，再依法检查。也可以利用碘化银沉淀稳定，在氨溶液中不溶解，而氯化银、溴化银沉淀在氨溶液中溶解的性质，除去碘化物的干扰。如检查碘中氯化物和溴化物，是将供试品加水研磨、滤过，于滤液中加锌粉使碘还原为无色的碘化物，再在氨碱性条件下滴加硝酸银试液使生成碘化银沉淀而滤除。向滤液中加入硝酸，破坏络离子后，AgBr和AgCl沉淀复析出，与一定量标准氯化钠溶液生成的沉淀比较，即可确定氯化物和溴化物是否符合要求。 溶于水的有机药物，可按中国药典附录规定的方法直接检查氯化物。不溶于水的有机药物，多数采用加水振摇，使所含氯化物溶解，滤除不溶物；或加热溶解供试品，放冷后析出沉淀，滤过，取滤液依法检查。如药物在稀乙醇或丙酮中有一定溶解度，也可加稀乙醇或丙酮溶解后依法检查。三氯叔丁醇、氯法齐明中氯化物的检查即如此。 检查有机氯杂质，可根据杂质结构，将有机氯转变为离子状态，再依法检查。若有机氯为氯代脂烃或氯在环的侧链上，可在碱性溶液中加热使水解生成Cl-。若杂质中氯原子连接于环

药物的杂质检查

药物的杂质检查 (总分：61.50，做题时间：90分钟) 一、A型题(总题数：43，分数：43.00) 1.检查维生素C中重金属时，若取样量为0.1g，要求含重金属不得超过百万分之十，应取标准铅溶液(0.01mgPb/m1) ?A．0.1ml ?B．0.2ml ?C．0.4ml ?D．1ml ?E．2ml （分数：1.00） A. B. C. D. √ E. 解析： 2.药物中氯化物质检查的一般意义在于 ?A．它是有效的物质 ?B．它是对药物疗效有不利影响的物质 ?C．它是对人体健康有害的物质 ?D．可以考核生产中引入的杂质 ?E．检查方法比较方便 （分数：1.00） A. B. C. D. √ E. 解析： 3.检查砷盐限度时，使用醋酸铅棉花的目的是 ?A．使溴化汞试纸呈色均匀 ?B．防止发生瓶内的飞沫溅出 ?C．除去硫化氢的影响 ?D．使砷还原成砷化氢

?E．使砷化氢气体上升速度稳定 （分数：1.00） A. B. C. √ D. E. 解析： 4.《中国药典》(2000年版)铁盐检查法中，所使用的显色剂是 ?A．硫氰酸盐 ?B．水杨酸盐 ?C．氰化钾 ?D．过硫酸铵 ?E．盐酸 （分数：1.00） A. √ B. C. D. E. 解析： 5.杂质是指 ?A．盐酸普鲁卡因中的盐酸 ?B．溴酸钾中的氯化钾 ?C．阿莫西林中的结晶水 ?D．维生素C注射液中的亚硫酸氢钠 ?E．维生素B1中的硫酸盐 （分数：1.00） A. B. √ C. D. E. 解析： 6.杂质限量

?A．检查药物中遇到硫酸易炭化而成色的重量有机杂质 ?B．药物在规定条件下经干燥后所减失的重量 ?C．有机药物经炽灼炭化，再加硫酸湿润，低温加热至硫酸除尽后于高温(700～800度)炽灼至完全灰化 ?D．药物中杂质最大允许量 ?E．检查杂质的量是否超过限量的杂质检查方法 （分数：1.00） A. B. C. D. √ E. 解析： 7.葡萄糖中重金属检查方法如下：取本品4.0g，加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml，依法检查，含重金属不得过百万分之五。应取标准铅溶液(每lml相当于10μg的Pb)的体积为 ?A．2ml ?B．2.0m1l ?C．4ml ?D．4.0ml ?E．5ml （分数：1.00） A. B. √ C. D. E. 解析： 8.检查某药物杂质限量是，称取供试品w克，量取待检杂质的标准溶液体积为V(ml)，浓度为C(g/m1)，则该药品的杂质限量是 ?A．w/CV×100％ ?B．CVw×100％ ?C．VC/w×100％ ?D．Cw/V/×100％ ?E．Vw/C×100％

药物中特殊杂质的检查

药物中特殊杂质的检查 一、实验目的 1.掌握某些药物中特殊杂质的来源和检查原理。 2.掌握薄层色谱法用于特殊杂质检查的一般操作。 3.掌握旋光光度法用于特殊杂质检查的一般操作。 二、仪器与试药 1.仪器 Mettler AL204电子天平 WZZ-1型自动旋光仪 刻度移液管 规格：1mL 、5mL 、10mL 研钵 容量瓶 规格：50mL 、100mL 、1000mL 酸式滴定管 规格：50mL 2.试药 乙酰水杨酸 硫酸阿托品 盐酸普鲁卡因 规格：2mL/支 乙醇 硫酸铁铵 水杨酸 冰醋酸 对氨基苯甲酸 羧甲基纤维素钠 苯 硅胶H （薄层层析用） 冰醋酸 丙酮 甲醇 对二甲氨基苯甲醛 蒸馏水 三、实验原理 1.乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查 游离水杨酸为生产中未反应的原料或乙酰水杨酸贮存过程中的水解产物，由于结构中酚羟基在空气中逐渐被氧化，成为淡黄到红棕色的一系列醌型化合物，而使乙酰水杨酸变色。 2.盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查 盐酸普鲁卡因分子中含酯键，因此盐酸普鲁卡因注射液在贮藏期间，普鲁卡因易水解。其注射液制备过程中受灭菌温度、时间、溶液pH 值、光线等因素影响，可发生水解反应生成对氨基苯甲酸和2-二乙氨基乙醇。其中对氨基苯甲酸随贮藏时间的延长或高温加热，可进一步脱羧转化为苯胺，而苯胺又可被氧化为有色物，使注射液变黄。已变黄的注射液不仅疗效下降，而且毒性增加。故药典规定检查对氨基苯甲酸。 -二甲氨基苯甲醛溶液，在冰醋酸存在下与对氨基苯甲酸缩合形成Schiff 碱呈有色斑点，并同时与对照品溶液的主斑点进行比较。 COOH OCOCH 3 +H 2O COOH OH +CH 3COOH 6 COOH OH + 4 Fe 3+ Fe( COO O --)23 Fe ++ 12H + N C H 3C H 3N H 2COOH CH=N N C H 3C H 3COOH N C NH C H 3H 3COOH + + H +

二药物中特殊杂质的检查

实验二药物中特殊杂质的检查 【目的要求】 1. 掌握药物特殊杂质的来源、检查原理及杂质限量的计算。 2. 掌握薄层色谱法用于特殊杂质检查的一般操作。 3. 熟悉薄层板的制备。 【仪器与材料】 分析天平、层析缸、量瓶（25ml、10ml）、刻度吸管（5ml、2ml）、10μl微量进样器、薄层板、甲醇、硅胶G、羧甲基纤维素钠、醋酸乙酯、异丙醇、氨水、水、碘 【实验内容】 1. 薄层板的制备 取薄层用硅胶G 3克，加CMC-Na约10ml，研磨至适宜稠度，可铺于10×20cm板1块（厚度0.2～0.3mm）。等自然干燥后，于105℃活化1小时，置干燥器内备用。 2. 盐酸雷尼替丁胶囊中有关物质的检查 取本品的内容物适量，加甲醇使盐酸雷尼替丁溶解并制成每1ml 中约含10mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取适量，加甲醇分别稀释制成每1ml 中含0.05mg、0.10mg、0.15mg、0.20mg、0.40mg的溶液，作为对照溶液(1)、(2)、(3)、(4)和(5)。照薄层色谱法（附 Ⅴ）试验，吸取上述六种溶液各10μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板录B 上，以乙酸乙酯–异丙醇–浓氨溶液–水(25:15:5:1) 为展开剂，展开，晾干，置碘蒸气中显色后，立即检视。供试品溶液如显杂质斑点，其颜色分别与对照溶液(1)、(2)、(3)、(4)和(5)所显的主斑点比较，杂质总量不得过4.0％。

【注意事项】 1. 点样采用微量注射器进行，在距薄层板底边 2.5cm处开始，点样应少量多次点于同一原点处，原点面积应尽量小。 2. 采用倾斜上行法展开，展开剂应浸入薄层板底边约1cm深度。 3. 显色后，应立即检视斑点，并用针头定位，以便记录图谱。 【思考题】 1. 薄层色谱法用于杂质检查常用的方法有哪些？ 2. 试计算盐酸雷尼替丁胶囊中有关物质的杂质限度。 【参考资料】 《药物分析》第六版刘文英主编 《中华人民共和国药典》2010年版二部 1

药物的杂质检查总结

第三章 药物的杂质检查 杂质（forin 、impurities ）是指： 1. 有毒副作用的物质 2. 本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质 3. 本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但影响药物的科学管理的物质 药物中杂质的来源 1. 生产过程中引入 （1）原料、反应中间体及副产物 （2）试剂、溶剂、催化剂类 （3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质 2. 贮藏过程中产生 水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等 易发生水解反应的结构： 酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等 药物中的杂质按来源分为 1. 一般杂质（general impurities ）如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质的检查方法收载在中国药典的附录中。 2. 特殊杂质（special impurities ）：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的有关物质。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。 杂质限量：指药物中允许杂质存在的最大量，通常用百分之几或百万分之几来表示 药物的杂质检查法 1. 对照法 限量检查法 （Limit Test ） 特点：不需知道杂质的准确含量 2. 灵敏度法 系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。 特点：不需对照物质 3. 比较法 含量测定法：测定杂质的绝对含量，如测定吸光度、pH 值等。 特点：准确测定杂质的量，不需对照品 杂质限量的计算 供试品量 允许杂质存在的最大量 杂质限量

生物药物的杂质检查 练习题

练习题 幻灯片3 2．中国药典（1995年版）中规定的一般杂质检查中不包括的项目是(C) A. 硫酸盐检查 B. 氯化物检查 C. 溶出度检查 D. 重金属检查 E. 砷盐检查 4．检查某药物中的砷盐，取标准砷溶液2ml（每1ml相当于1g的As）制备标准砷斑，砷盐限量为0.0001％，应取供试品的量为(B) A. 0.20g B. 2.0g C．0.020g D. 1.0g E. 0.10g 已知：c＝1 g/ml＝1×10 6 g/ml V＝2ml L＝0.0001% g0.2 % 100 % 0001 .0 10 1 2 % 100 6 = ? ? ? = ? ? = - L c V S 5．检查维生素C中的重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十，问应吸取标准铅溶液（每1ml＝0.01mg的Pb）多少ml？(D) A. 0.2ml B. 0.4ml C．2ml D. 1ml E. 20ml

ml 110100.1101066 =???=?=--c S L V 6. 药物中氯化物杂质检查，是使该杂质在酸性溶液中与硝酸银作用生成氯化物浑浊，所用的稀酸是（B ） A. 硫酸 B. 硝酸 C. 盐酸 D. 醋酸 E. 磷酸 7. 中国药典 （2000年版） 规定，检查氯化物杂质时，一般取用标准氯化钠溶液（10μgCl －/ml ）5～8ml 的原因是（D ） A. 使检查反应完全 B. 药物中含氯化物的量均在此范围 C. 加速反应 D. 所产生的浊度梯度明显 E. 避免干扰 8. 采用硝酸银试液检查氯化物时，加入硝酸使溶液酸化的目的是（ABCDE ） A ．加速生成氯化银浑浊反应 B ．消除某些弱酸盐的干扰 C ．消除碳酸盐干扰 D ．消除磷酸盐干扰 E ．避免氧化银沉淀生成 9. 当采用比浊法检查氯化物杂质时，若药物本身有颜色而干扰检查的话，应该选用的处理方法为（AB ） A ．内消色法 B ．外消色法 C ．比色法 D ．差示比浊法 E ．差示可见分光法 10. 若要进行高锰酸钾中氯化物的检查，最佳方法是（D ）

第三章药物杂质检查

第三章药物杂质检查 一、选择题 （一）单选题 1．杂质检查又称为（）。 A．药物检查B．均一性检查C．限量检查D．有效性检查E．安全性检查答案:C 2．干燥失重主要是检查药物中（）。 A．遇硫酸呈色的有机杂质B．水分及其他挥发性物质C．表面水 D．结晶水E．微量不溶性杂质 答案:B 3．药物中有害杂质限量很低，有的不允许检出如（）。 A．硫酸盐B．碘化物C．氰化物D．重金属E．氯化物 答案：C 4．关于药物中杂质及杂质限量的叙述正确的是（）。 A.杂质限量通常只用百万分之几表示 B. 杂质限量指药物中所含杂质的最大容许量 C. 杂质的来源主要是由生产过程中引入的其它方面可不考虑 D. 检查杂质，必须用标准溶液进行比对 答案:B

5．药物的杂质限量是指（）。 A．杂质的检查量B．杂质的最小允许量C．杂质的最大允许量 D．杂质的合适含量E．杂质的存在量 答案:C 相同知识点：杂质限量公式的计算 6．检查药物中的砷盐，称取样品2.0g，依法检查，与标准溶液2.0ml（砷溶液）在相同条件下制成材的砷斑比较，不得列深。砷盐限量是（）。 A．百万分之一B．百万分之二C．百万分之十D．0.01％E．0.1％ 答案：C 7．检查某药物中的砷盐：取标准砷溶液2.0mL（每1mL相当于1μg的As），砷盐限量为0.0001%，应取供试品的量为（）。 A. 0.02g B. 2.0g C. 0.020g D. 1.0g E. 0.10g 答案：B 8．葡萄糖中重金属检查方法为：取本品适量，加水23ml溶解后，加醋酸缓冲溶液(pH3．5)2ml，依规定方法检查，与标准铅溶液(每1ml相当于10μgPb)2．0ml同法制成的对照液比较，不得更深。如重金属的限量要求为百万分之五，需取本品的量为（）。 A．1．0g B．2．0g C．4．0g D．6．0g E．8．0g 答案:C