病毒中和试验测定法

病毒中和试验测定法

1.固定病毒稀释血清法（a法）本法用于抗血清的中和价。试验需先滴定病毒毒价，试验时将其稀释成每一单位剂量含200个TCID5。，再将待检血清倍比稀释加等量200个TCID5o/ml的病毒液，混匀后37C 1h,每一稀释度接种24孔细胞培养板4孔，每孔0.2ml。5%C0培养箱培养一定时间后，记录出现CPE孔数，以不出现CPE数和接种数的比为中和比值。按Karber法计算中和价。其公式如下：

Log TCID5o=L+d （S-0.5 ）

（TCID50用对数计算，L为病毒最低稀释度的对数。d为组距，即稀释系数，在10倍系列稀释则为-1，S为各组CPE与接种数比值之和）

L=-1，d=-0.3，S=4/4+4/4+4/4+4/4+2/4=4.5

代入Karber 公式：LogND0= -1 —0.3*（4.5-0.5）=2.2

该抗血清ND0（半数中和单位）为10-2.2，即1/160，则其中和价为160 ND5a/ml，可以简写成160。

2.固定血清稀释病毒法（B法）本法用于测定抗血清的中和指数。将病毒原液10倍系列稀释，分列于2排无菌管，第一排加等量正常血清（对照组）；第二排加待检血清（中和组），混匀后，置37r 1h，分别接种细胞板孔（或鸡胚、实验动物）进行培养，记录CPE（鸡胚、动物死亡数），计算TCID50 （或LD50），按下式计算中和指数。

中和组TCID50 （或LD50）

中和指数= ---------------------------

对照组TCID50 （或LD50）

查反对数，即得该待检血清的中和指数。通常中和指数>50者判为阳性，

10-49为可疑，<10者为阴性。例如：

对照组滴度的LD50=10-6.5

中和组滴度的 LD 50=10-4.5

中和指数 =10

(6.5-4.5)

=102.0

=100

中和指数的对数 Log=Log 100=2.0

一般来说，以10倍稀释进行滴度测定，Log10=1。因此小于10 (11.7) 则是有意义的 .

(学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收 获，努力就一定可以获得应有的回报)