分光光度法
第十章 吸光光度法
吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。
吸光光度法或光度分析根据入射光的波长范围可分为紫外吸收光谱法、可见分光光度法、红外光谱法。可见吸光光度法又分为比色法（光电比色法和目视比色法）和分光光度法。
目视比色法：基于有色物质溶液颜色的深浅与其浓度有关，浓度愈大，颜色愈深。通过与标准色阶比较颜色深浅的方法确定溶液中有色物质的含量。目视法仪器简单，操作简便，但灵敏度和准确度不如分光光度法，只是在一些准确度要求不高的分析中仍有一定的实用性。如果用光电比色计代替人眼观察，则为光电比色法。
分光光度法：如果是使用分光光度计，利用溶液对单色光的吸收程度来确定物质含量，则称为分光光度法。
分光光度法灵敏度较高，可不经富集直接测定低至5510%-?微量组分。一般情况下，测定浓度的下限也可达0.11()g ppm g
μ，相当于含量为0.001%
0.0001%的微量组分。
如果是采用高灵敏度的显色试剂，或事先将待测组分加以富集，甚至可能测定低至
6710%10%--的组分。
虽然光度法的准确度相对于重量分析法和滴定分析法要低得多，通常分光光度法的相对误差为2%5%（比色法为5%20%），但这已经能满足一般微量组分测定准确度的要求。若用差示分光光度法，其相对误差甚至可达0.5%，已接近重量分析法和滴定分析法的误差水平。相反滴定分析法或重量分析法却难于完成这些微量组分的测定。
光度分析技术比较成熟，所需仪器相对廉价，操作简便易行，已广泛用于工农业生产和生物、医学、临床、环保等领域。几乎所有的金属元素和众多的有机化合物都可用光度法测定。
我们主要学习可见分光光度法。
§10.1物质对光的选择性吸收 一、光的基本性质
光是一种电磁波，具有波动性和微粒性。
光的折射、衍射、偏振和干涉等现象可用光的波动性来解释。描述波动性的重要参数是波长（cm ），频率ν（Hz ）。它们与光速的关系是：
c νλ
= 真空中101310c cm s -=?
光电效应、光的吸收和发射等，只能用光的微粒性才能解释，即把光看作是带有能量的微粒流。这种微粒称为光子或光量子。单个光子的能量E 决定于光的频率。
c
E h h νλ
== E 为光子的能量（J ），h ：普朗克常数（346.62610J s -?）
理论上，将仅具有某一波长的光称为单色光，单色光由具有相同能量的光子组成。由不同波长的光组成的光称为复合光。
当人为地按照波长将电磁波划分为不同的区域时，得到电磁波谱或光谱（见表10-1）。
其中400750nm波长范围内的光为可见光。由于受人的视觉分辨能力的限制，人们所看见的各种颜色，如黄色、红色等，实际上是可见光区中含一定波长范围的各种色光，即各种色光也是一种复合光。
二、物质的颜色和对光的选择性吸收
颜色是物质对不同波长光的特征吸收表现在人视觉上所产生的反映。如果把不同颜色的物体放在暗处，什么颜色也看不到。当光束照射到物体上时，由于不同物质对于不同波长的光的吸收、透射、反射、折射的程度不同而呈现不同的颜色。
溶液呈现不同的颜色是由于溶液中的质点（离子或分子）对不同波长的光具有选择性吸收而引起的。当让含有可见光区整个波长的多色光（白光）通过某一有色溶液时，该溶液会选择性吸收某些波长的色光而让那些未被吸收的色光透射过去即溶液呈现透射光的颜色，人们将被吸收的色光和透射过去的色光称为互补色光。
KMnO水溶液能吸收绿色光而呈现紫红色，则紫红色和绿色互为互补色。
例如
4
若物质对白光中所有颜色的光全部吸收，它就呈现黑色；若反射所有颜色的光则呈现白色；若透过所有颜色的光，则为无色。
三、物质对光产生选择性吸收的原因
物质的分子内部具有一系列不连续的特征能级，包括电子能级、振动能级和转动能级，这些能级都是量子化的，其中电子能级又可分为基态和能量较高的若干个激发态。
一般，物质的分子都处于能量最低最稳定的基态。当用光照射某物质后，如果光具有的能量恰好与物质分子的某一能级差相等时，这一波长的光就被吸收。从而使物质发生能级跃迁。
由于不同物质结构不同，所以能级也不同，对光的选择性吸收也不同。
四、吸收光谱（吸收曲线）
让不同波长的单色光依次照射某一吸光物质，并测量该物质在每一处对光吸收程度的大小（吸光度），以λ为横坐标，A 为纵坐标作图。得到一条吸光度随波长变化的曲线叫吸收曲线。
从吸收曲线中可以看到物质往往对某一波长的光有最大吸收，我们称max A 处的λ为max λ（最大吸收波长）。如4KMnO
max 525nm λ=。
①max λ和曲线的形状由物质的结构决定，可用于定性分析。
②而c 不同，则A 不同，可用于定量分析。
10-2
3
§10.2 光吸收定律 一．朗伯——比尔定律
1760年，朗伯（LamBer ）指出，当单色光通过浓度一定的均匀的吸收溶液时，溶液对光的吸收程度与液层厚度b 成正比，这种关系称为朗伯定律：
1t
I lg
K b I = 0I ：入射光的强度；t I 透射光的强度。
1852年，比尔指出，当单色光通过液层浓度一定的均匀吸收溶液时，该溶液对光的吸收程度与吸光物质的浓度成正比。这种关系称为比尔定律，数学表达式为：
2t
I lg
K c I = 如果同时考虑液层厚度和溶液浓度对吸光度的影响，既将上述两个定律结合起来，则可得：
2t
I A lg
K bc I == b ：液层厚度（cm ） c ：吸收物质的浓度 K ：比例常数
朗伯—比尔定律不仅适用于可见光区，也适用于紫外和红外光区；不仅适用于溶液，也适用于其它均匀的，非散射的吸光物质（包括气体和固体），是各类吸光光度法的定量依据。
0t I lg
I 项表明了溶液对光的吸收程度，定义为吸光度（A ）A =0t I lg I ，而0
t I
I 是透射光强度与入射光强度之比，表示了入射光透过溶液的程度，称为透光度（以%表示透光率），
以T 表示。
t
I T I =
01
t I A lg
lg Kbc I T
=== 当b 一定时，A ∝c ，前提是一束平行单色光垂直通过某一非散射的吸光物质。 二．吸光系数 1、吸收系数a
当b 的单位为cm ，c 的单位是1g L -时，K 用a 表示，其单位为11L g cm --
A=abc
2. 摩尔吸光系数
当b 的单位为cm ，c 的单位是1mol L -时，K 用ε表示，称为摩尔吸光系数，其单位
11L mol cm --。
A bc ε=
ε的物理意义：当吸光物质的浓度为11mol L -，吸收层厚度为1cm ，吸光物质对某
波长的光的吸光度。 在λ、T 和溶剂等条件一定时，ε的大小取决于物质本身的性质，是物质的特征值。同一物质与不同显色剂反应，生成不同的有色化合物时，具有不同的ε值，同一化合物在不同的波长处的ε亦可能不同。
在max λ处摩尔吸光系数，常以max ε表示。ε越大，表示该有色物质对入射光的吸收能力越强，显色反应越灵敏。所以，可根据不同的显色剂与待测组分形成有色化合物的ε值大小，比较它们对测定组分的灵敏度。
三．桑德尔灵敏度S
定义：当光度仪器的检测极限为0.001=1时，单位截面积光程内所能检出的光物质的最低质量。其单位为2m cm μ-。S 越小，显色反应的灵敏度越高。 根据定义： A =0.001=abc 时
bc =0.001/a （1）
b 单位为cm ，
c 的单位是1g L μ-时，b c 就是单位截面积（2cm ）光程内吸光物质的含量（g μ），则
S
()
3210bc g cm μ-=
将（1）式代入上式： 1
S a
=
由a 和ε的定义可知： ε= aM
M S ε
=()2g cm μ-
四．朗伯—比尔定律的偏离
根据A bc ε=知，ε、b 一定时，A c ∝，所以，用A 作纵坐标，c 为横坐标做图，应
该是通过圆点的直线，但实际不完全相符。原因是：
1.物理因素
（1）非单色光引起的偏离
假设入射光为1λ和2λ两个波长的光，强度为01I 和02I ，c 为浓度，b 为吸收池厚，透射光为11I 和12I 对于1λ 011112
I A Lg
bc I ε== 11101
10bc
I I ε-∴= 2λ 022212
I A Lg
bc I ε== 21202
10bc
I I ε-∴= 实际测得结果是A 总 0102110t I I I I I I =+=+总总
； 1201020102
111201021010bc bc
I I I I A lg
lg
I I I I εε--++∴==++总 若12εεε==，则
()0102
010210
bc
I I A lg
bc I I εε-+==+总 即A c ∝总
若λ?较大或12εε≠，则不符合朗伯—比尔定律。 （2）非平行光入射
非平行光程b '大于吸收池厚度b ，使实际待测值A 大于理论值产生的吸光度偏高。 （3）介质不均匀
当物质不均匀，会因散射而损失部分光，使透射比减小，测得A 偏高，当c 越大，
散射越大，偏离越多。
2.化学因素
（1）浓度过高
c 过高，质点间有了相互作用，改变了微粒的电荷分布。所以适用于稀溶液。 2．化学反应引起的偏高 因为M R
MR +（有色物），为了使不同溶液的M 与R 在相同的条件下反应，往
往加入相对过量的R 。这样，由于[]MR 浓度与M c 不成正比，而使A 、C 不成正比。
又如227K Cr O 在溶液中有下列平衡：
222724
4
222Cr O H O
HCrO H CrO -
-
+-++
测227K Cr O 溶液的吸光度时，如果于波长350nm 处进行，则随着227K Cr O 浓度增加，
其中24CrO -
的相对浓度越来越小，结果将导致标准曲线向下弯曲。如果是在450nm 处测
定（灵敏度较低），标准曲线将向下弯曲。如果在等吸收点波长445nm 处进行测量，则
尽管227Cr O -离解为24CrO -，也不会发生偏离L-B 定律的情况。
§10.3 分光光度法的仪器 一．分光光度计的组成
分光光度计通常由光源、单色器、吸收池、检测系统和信号显示系统五大部分组成。
10-5
1．光源
钨灯()360800nm ——可见光区用 氢灯或氘灯()185375nm ——紫外光区用
要求：能够发射有足够的强度、稳定且波长连续变化的复合光。
2．单色器（分光系统）
凡是能把复合光分解为按波长顺序排列的单色光，并且能通过出射狭缝分离出某一波长单色光的仪器，称为单色器，亦称为分光器。它由入射狭缝、出射狭缝，反射镜和色散元件组成，关键部件是色散元件。色散元件有两种基本形式：棱镜和衍射光栅。 （1）棱镜
由玻璃或石英制成。复合光通过棱镜时，折射率与入射光的波长有关。对一般的棱镜材料在紫外—可见光区，折射率与波长之间的关系，可用科希经验公式表示：
24B C
n A λλ
=++ n ：波长为λ的入射光的折射率。
当复合光通过棱镜的两个界面发生光的折射时，根据折射定律，波长小的光偏向角大，波长大的光偏向角小。
由于玻璃对紫外光有强烈的吸收，故玻璃棱镜应在波长3603200nm 使用，主要用于可见分光光度计中。石英棱镜可用的波长范围一般为2004000nm ，适用于紫外—可见分光光度计中。 （2）光栅
当复合光射到光栅上时，光栅的每条刻线都产生衍射作用，而每条刻线所衍射的光又会相互干涉。利用不同波长的入射光产生的干涉条纹的衍射角不同，波长长的衍射角大，波长短的衍射角小，从而使复合光色散或按波长顺序排列的单色光。
光电比色计采用滤光片从复合光中滤出能被待测物最大程度吸收的光（波长范围20-50nm ），滤光片的颜色与溶液颜色成互补色。
3、吸收池
有玻璃的、石英的。玻璃吸收池只能用于可见光区，而石英池既可用于可见光区又可用于紫外光区。
4、检测器
是一种光电转换元件，其作用是将透过吸收池的光信号变成可测量的电信号。目前，分光光度计多用光电管和光电倍增管。
①光电管
光电管由一个半圆筒形的阴极和金属丝阳极组成的。阴极表面涂有一层光敏材料，当光照射于光敏材料时，阴极就发射电子。给两电极上加一电压，电子变流向阳极，形成光电流。常用的光电管有蓝敏和红敏两种。蓝敏光电管为铯锑阳极，适用范围为320625nm 。红敏光电管为银和氧化铯阳极，适用波长范围为6001200nm 。
②光电倍增管
是检测微弱光信号的光电元件。它由密封在真空管壳内的一个光阴极，多个倍增极和一个阳极组成。
光电倍增管应避免强光照射，所以装在暗盒之中。暗电流是仪器噪声的主要来源。
③硒光电池
用于光电比色计和简易的分光光度计中。
由三层物质构成的薄片，表面是导电性良好的可透光金属（如金、铂、银等）薄膜，中层是具有光电效应的半导体材料硒，底层是铁或铝片。
当光照射到光电池时，就有电子从半导体硒的表面逸出。由于硒的半导体性质，电子只能单向流动，既只能向金属薄膜移动，使薄膜带负电，成为光电极负极。硒层失去电子后带正电，使铁片带正电，成为光电极的正极。这样金属薄膜与铁片之间产生电位差，线路接通后，便产生光电流。如果把光电池与灵敏检流计连接起来，就可以测出电流强度。
5、信号显示系统
它的作用是检测光电流强度的大小，并以一定的方式显示或记录下来。早期近期的简易分光光度计多采用检流计（72型）、微安表（721型）和电位计（751型）等指针式指示系统，有T 和A 两种标尺。由于吸光度是透射比的负对数，所以吸光度的标尺是不均匀的。
现在分光光度计采用数字电压表，函数记录仪，示波器及数据处理机等进行信号处理和显示。
二．吸光度的测量原理
从仪器的介绍可知，检测器测得的是与透射光成正比的光电流，并不是吸光度A。想获得待测溶液的A，一般通过以下几步：
（1）调零。调节检测器零点，既仪器的机械零点，在检流计面板上表现为T=0或A=∞的哪个端点。
（2）调100。用参比溶液调节吸光度为0，又称工作零点，既检流计工作面板上T=100%或A=0的那一端。
A的值。
（3）将待测溶液推入光路，读出
x
三．分光光度计的类型
据波长范围可分为：1可见分光光度计；2 LW—VIS；3 IR。
根据仪器结构：1单光束；2双光束；3双波长。
1M 反射；4M 透射时通过样品池
1M 透射；4M 反射通过参比池 23M ,M 平面反射镜
从光源发出的光分成两束，分别经过两个单色器，得到强度均为0I ，波长分别为
12λλ，的两束光。经过切光器的调制，两束单色光以一定的频率交替通过装有试液的吸
收池。设透过光的强度分别为1I 和2I ，则检测器交替接收1I 和2I ，将其处理后两透射光的对数值为1
2
I lg
I 。 1110
1
b I A lg
bc A I λλε==+ 2220
2
b I A lg
bc A I λλε==+ 若选择合适，在12λλ，处12b b A A =，两式相减得：
()
21211
2
I A A A lg
bc I λλλλεε?=-==- 可见，两波长透射光强度之比的对数值，即试液在两波长处的吸光度之差A ?与被测组分浓度c 成正比，而与背景吸收无关，这是双波长分光光度法定量分析的依据。
§10.4 分光光度法分析条件的选择
在比色法和分光光度法分析中，常用显色反应把待测组分转变为有色化合物，然后再进行测定。显色反应主要有配位反应和氧化还原反应，多数是配位反应。
分光光度法准确测定的条件控制主要是两个方面：一是显色反应条件，一是测量条件。
一、显色反应及反应条件的选择 （一）对显色反应的要求
能与待测组分形成有色化合物的试剂称为显色剂。
1.选择性要好。显色剂不与干扰组分反应，或显色剂与干扰组分生成的有色物的max
λ与显色剂与待测组分生成的有色化合物的max λ相隔较远。
2.灵敏度高 ε值大。对于高含量组分，不一定要ε值大，但选择性要好。
3.对比度要大 60nm λ?>。
4. 有色化合物要稳定，组成要稳定。
5.显色反应条件要易于控制。 （二）、反应条件的选择 1. 显色剂的用量
为使反应完全通常加入过量的显色剂。
2. 反应体系的酸度
衡常数估计pH
3. 时间和温度
4. 有机溶剂和表面活性剂。
有机溶剂可以降低MR 的解离度。表面活性剂可以提高灵敏度。 二．测量误差及测量条件的选择
在吸光光度分析中，仪器测量不准确也是误差的主要来源。任何光度计都有一定的测量误差。这些误差可能来源于光源不稳定，实验条件偶然变动，读数不准确等。
透射比很小或很大时，浓度测量误差都较大，即光度测量最好选吸光度读数在刻度尺的中间而不落两端。待测溶液的透射比T 在15%~70%之间，或使吸光度A 在0.15~0.8之间，才能保证测量的相对误差较小。
1．入射光波长
一般选显色溶液的max λ作为入射波长。这不仅能获得高的灵敏度，而且由于在max
λ附近吸光度的变化较小，入射光波长稍许偏移和非单色性引起A 变化小。 如果max λ的附近有其他谱峰干扰时，只能选其他的测量波长。
2．测量狭缝的选择
选不影响A 时的最大狭缝宽度。
狭缝宽度太小时，光强弱，且仪器的噪声增大；狭缝宽度太大时，非吸收光的引入将导致测量灵敏度下降，和工作曲线线性关系变差。
3．控制适当的A 的范围
任何分光光度计都有一定的测量误差，其中透光率的读数误差是主要原因。大多数分光光度计的T 读数变动性为0.10.2%，0.2%被认为是实际能达到的读数准确度极限。对于一个给定的分光光度计，T ?是一常数，但由于T 与c 的关系并不是直线关系，在不同的透射率读数范围，同样大小的T ?所引起的浓度误差c ?是不同的。
当T 小时，c ?大，此时虽然c 较大，但c ?/c 仍较大。 只有当T 适中时，测量的相对误差小。从相对误差与T 的关系曲线可见，一个几乎固定的最小误差出现在
()%15%70%0.150.80T A ==的范围内。
()0.3680.434T A ==时，浓度测量的相对误差最小。
4．参比溶液的选择
将朗伯—比尔定律关系式应用于实际分析时，所研究的溶液必须装在吸收池中，由于吸收池表面对光的反射和吸收，入射光的强度要受到一定的损失。此外，由于溶液的某种不均匀性引起的散射，光强可能减弱，以及因过量显色剂和其它试剂甚至溶剂本身
10
所引起的吸收，都会引起所测A 的测量，故必须对这些因素进行校正。
（1）当试液，显色剂及所其它试剂在所测波长处无吸收时，可用纯溶剂作参比。
（2）当试液无吸收，而显色剂或其它的试剂在测定的波长处有吸收时，可用不加试样的“试剂空白”作参比溶液。
（3）若待测试液本身在λ存在吸收，而显色剂等无吸收，则采用不加显色剂的“试样空白”作参比。
（4）如显色剂和试液在λ处有吸收，可将一份试样溶液加入适当掩蔽剂，将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂反应，然后按相同步骤加入显色剂和其它试剂，所得溶液作参比溶液。
§10.5 吸光光度法的应用 一、定量分析 1、单组分的测定
（1）标准曲线法
普通光度法不适用于常量组分，因为测量误差较大。 （2）示差分光光度法
示差法可用于常量组分的测定。与普通光度法的区别就在于参比溶液不同。用一个比待测试液x c 稍低的标准溶液s c 为参比(调节T =100% A =0)，然后再测定溶液的吸光度。
在普通光度法中：
x x x A lgT bc ε=-=
在示差法中：s c 为参比，测得的是f A 。
x x x A lgT bc ε=-= s s s A l g T b c
ε=-= ()f x s x s A A A b c c ε=-=-
f A c ∝?，制作f A c -?标准曲线。从其中查得的c ?，即可求得x s c c c =+?。
那么，示差法用于高含量组分准确度高的原因是什么？如果普通法以空白作参比，x c 的
x T =5%，s c 的T =10%，而示差法中标准溶液s c 为参比调节T =100%，这相当于把读数标尺扩大了10倍。恒定的仪器误差导致较小的相对误差。
0.434
dc dT c TlgT
= 2．多组分的同时测定
如果各组分的吸收相互重叠，可利用吸光度的加和性用解联立方程组的方法测定其
含量。
111111111
x y x x y y A A A bc bc λλλλλεε=+=+
222222222
x y x x y y A A A bc bc λλλλλεε=+=+
11
x λε、12
x λε、11
y λε、12
y λε可由各自的标准溶液测出。
二、络合物组成的测定 1、摩尔比法
如反应n M nR MR += 为了测定n ，可以固定金属离子的浓度M c ，改变络合物的浓度，组成一系列M R c c :的溶液，测定A 。
摩尔比法适合于解离度较小，络合比高的络合物组成的测定。解离度大时将得到虚线的情况无明显转折。
2、等摩尔连续变化法
保持溶液中M c
和R
c 的总浓度不变，既M R c c +=常数，连续改变其比值，在选定条件下
和波长下测定溶液吸光度A 。以A 对/M M R c c c +作图，曲线转折点/M M R c c c +值即为配位比值。配合物稳定时，转折点敏锐。稳定性差时，转折点不明显。可用点切线的方
法找出。
如果/M M R c c c += 0.5 , 表示M ：R=1：1 /M M R c c c +=0.25, 表示M ：R=1：3
该法不适合稳定性差的配合物。
三．酸和碱解离度的测定
如果一种有机化合物的酸性官能团或碱性官能团是发色团的一部分，则该物质的吸光度随溶液pH 而改变。
23HA H O
H O A +-++
[]
3a H O A K HA +-
????????=
当[]HA A -??=??时，则3a K H O +
??=?? 3a p K L g H O p H
+??=-=?? 只要找出[]HA A -??=??时溶液的pH 值，该pH 值就是该酸的a pK 。
测定方法：配制一系列pH 值的标准溶液。每一pH 溶液中准确加入一定量的待测酸HA ，
然后以水为空白，测A 。
A 点以前，溶液中全为酸HA
B 点以后，溶液中全为A - AB 间即为HA 和A -的形式共存
C 点间[]HA A -??=??，对应的pH 值为a pK 。
或按照书中的方法：
配三种溶液，分析浓度[]c HB B -??=+??相等，pH 值不同。
第一种a pH pK ≈，此时HB 和B -共存，用1cm 的吸收池在某下测定：
[]HB HB B B A A A K HB K B ---
??=+=+??
333a HB
B a a
H O c K c A K K H O K H O K -+
++????=+????++???? ① 第二种 pH 值比a K 高两个以上单位，B -为主要形体
B B B A K B K c ----
??==?? B B A K c -
-= ②
第三种 pH 值比a K 小两个单位，HB 为主要形体
[]HB HB HB A K HB K c == HB
HB A K c
=
③
②③代入①：
333a HB B a a
H O c A K c A A c c H O K H O K -+++
????=+????++???? 33HB a
B a
A H O A K A H O K -+
+
??+??=??+??
()3HB a B H O A A K A A -
+??-??=- B a HB A A pK pH lg
A A
--=+-
722N分光光度计使用方法
722N可见分光光度计使用说明书 目次 1仪器的主要用途--------------------------------------------------1 2仪器的工作环境--------------------------------------------------1 3仪器的主要技术指标及规格----------------------------------------1 4仪器的工作原理--------------------------------------------------2 5仪器的光学原理--------------------------------------------------2 6仪器的安装、使用与维护------------------------------------------3 7 仪器的调校和故障分析--------------------------------------------5 8 仪器的成套性----------------------------------------------------6 9 仪器的保管及免费修理期限----------------------------------------7 制造计量器具许可证编号： 产品执行标准的编号：Q/YXLZ50-2004
1仪器的主要用途 722N可见分光光度计能在近紫外、可见光谱区域对样品物质作定性和定 量的分析。该仪器可广泛地应用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工、环境保护、质量控制等部门，是理化实验室常用的分析仪器之一。 2仪器的工作环境 仪器应安放在干燥的房间内，使用温度为5℃～35℃，相对湿度不超过 85%。 使用时放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的震动或持续的震动。 室内照明不宜太强，且避免直射日光的照射。 电扇不宜直接向仪器吹风，以免影响仪器的正常使用。 尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。 供给仪器的电源电压为AC220V22V，频率为50Hz1Hz，并必须装有良好的接地线。 推荐使用交流稳压电源，以加强仪器的抗干扰性能。使用功率为1000W以上的电子交流稳压器或交流恒压稳压器。 2.7避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀气体的场所使用。 3仪器的主要技术指标及规格 仪器类别：2类 光学系统：单光束、衍射光栅。 波长范围：330nm～800nm。 光源：钨卤素灯12V30W。 接收元件：光电池。 波长准确度：2nm。 波长重复性：≤1nm。 光谱带宽： 5nm。 杂光：≤%（在360nm处）。 透射比测量范围：%～%。 吸光度测量范围：～。 浓度直读范围：0000～1999。 透射比准确度：%。 透射比重复性：≤%。 噪声：100%噪声≤%，0%噪声≤%。 稳定性：亮电流≤%/3min， 暗电流≤%/3min。 电源：AC220V22V， 50Hz1Hz。
分光光度法
第二节分光光度法 (一)基础知识 分类号：P2-O 一、填空题 1．分光光度法测定样品的基本原理是利用朗伯—比尔定律，根据不同浓度样品溶液对光信号具有不同的，对待测组分进行定量测定。 答案：吸光度(或吸光性，或吸收) 2．应用分光光度法测定样品时，校正波长是为了检验波长刻度与实际波长的，并通过适当方法进行修正，以消除因波长刻度的误差引起的光度测定误差。 答案：符合程度 3．分光光度法测定样品时，比色皿表面不清洁是造成测量误差的常见原因之一，每当测定有色溶液后，一定要充分洗涤。可用涮洗，或用浸泡。注意浸泡时间不宜过长，以防比色皿脱胶损坏。 答案：相应的溶剂(1+3)HNO3 二、判断题 1．分光光度计可根据使用的波长范围、光路的构造、单色器的结构、扫描的机构分为不同类型的光度计。( ) 答案：正确 2．应用分光光度法进行试样测定时，由于不同浓度下的测定误差不同，因此选择最适宜的测定浓度可减少测定误差。一般来说，透光度在20％～65％或吸光值在0.2～0.7之间时，测定误差相对较小。( ) 答案：正确 3．分光光度法主要应用于测定样品中的常量组分含量。( ) 答案：错误 正确答案为：分光光度法主要应用于测定样品中的微量组分。 4．应用分光光度法进行样品测定时，同一组比色皿之间的差值应小于测定误差。( ) 答案：错误 正确答案为：测定同一溶液时，同组比色皿之间吸光度相差应小于0.005，否则需进行校正。 5．应用分光光度法进行样品测定时，摩尔吸光系数随比色皿厚度的变化而变化。( ) 答案：错误 正确答案为：摩尔吸光系数与比色皿厚度无关。 三、选择题 1．利用分光光度法测定样品时，下列因素中不是产生偏离朗伯—比
紫外分光光度法测定蛋白质含量
上海百贺仪器科技有限公司提供ｗｗｗ．ｓｏｕｔｈｈｋ．ｃｎ 紫外分光光度法测定蛋白质含量 摘要： 考马斯亮兰G250与蛋白质结合，在0－1000ug/ml范围内，于波长595nm 处的吸光度与蛋白质含量成正比，可用于蛋白质含量的测定。考马斯亮兰G250 与蛋白质结合迅速，结合产物在室温下10分钟内较为稳定，是一种较好的蛋白 质定量测定方法。 1.实验部分 1.1仪器与试剂： Labtech UV POWER紫外分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝G250； 牛血清蛋白；超纯水。 1.2试液的制备： 牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml 容量瓶中，加入超纯水溶解并定容。 考马斯亮兰G250试剂称取100mg考马斯亮兰G250，溶于50ml95％的乙 醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀释至1升。 2.结果与讨论 2.1校正曲线的绘制 准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml 分别加入到6只10ml试管中，然后用超纯水补充到0.1ml，各试管分别加入5ml 考马斯亮兰G250试剂，混合均匀后，即可依次在595nm处测定吸光度。以浓度 为横坐标，吸光度为纵坐标绘制校正曲线如下图，校正曲线方程为 A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。
上海百贺仪器科技有限公司ｗｗｗ．ｓｏｕｔｈｈｋ．ｃｎ 2.2精密度 配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次，得到吸光度的 相对标准偏差。 表1精密度测定结果 次数123456RSD% A0.26260.26220.26200.26280.26290.26260.13 2.3稳定性 取1mg/ml牛血清蛋白标准溶液每十分钟测定一次，50分钟内的吸光度变化 如下表2。 表2稳定度测定结果 时间（min）A1A2A3A平均 00.55110.55230.55160.5517 100.52040.51840.51680.5185 200.49100.49010.49030.4905 300.47650.47160.47210.4734 400.45240.44750.44400.4480 500.39820.39350.40310.3983 3.结论 该方法测定快速、简便，干扰物少，是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定 的紫外分光光度法。
分光光度计使用方法
一、学习容 1、对乙酰氨基酚含量的测定 2、分光光度法测定水中的微量铁 3、气相色谱法测定苯系物中苯的含量 二、考核要点（技术文件） 1、写出实验主要用到的仪器、试剂 2、简要概述实验测定原理 3、写出具体的实验操作步骤 4、设计原始记录单，要求完整、正确 5、写出正确的计算公式 三、检验操作 1、正确使用分光光度计进行相关检测 2、正确记录实验数据 3、正克处理数据，得出检测结果 4、具体操作容由现场考核人员根据评分标准来定。 四、考试答卷模版 仪器使用方法 一、722S型可见分光光度计的使用方法 1、预热 打开样品槽盖，打开电源开关，预热20分钟,数字显示窗口显示TRANS值， 比色皿配对：将波长调到510nm，取需使用的一套比色皿注入纯化水，放入样品池中，将模式调至“透光比”，开盖调“0%”，关盖将其中一只的透射比调至“100%”，再将模式调至吸光度，拉开拉杆，测量其他比色皿的透射比，透射比之差不得大于0.5%，即可配套使用。数字显示不得超过0.005 2、调零 将模式调至“透光度”，打开盖，按”0%”键，即能自动调整零位 3、调整波长 使用波长调节方旋钮，具体波长由旋钮左侧的显示窗显示 4、样品液准备 将空白对照和样品液分别装入比色皿，比色皿有光面和毛面，手握手面。 5、调整100%T 将用作背景的空白样品置入样品室光路中，盖下试样盖（同时打开光门）按下“100%T”键即能自动调整100%T 6、测量 用仪器前面的拉杆来改变样品位置，打开样品室盖以便观察样品槽中的样品位置最靠近测试者的为“0”位置，
二、7504型紫外-可见分光光度计
3、T6紫外-可见分光光度计
实验分光光度法测定铁
实验分光光度法测定铁 The following text is amended on 12 November 2020.
实验十四邻二氮菲分光光度法测定铁的含量 一、实验目的 1．学习吸光光度法测量波长的选择方法; 2．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理及方法; 3. 掌握分光光度计的使用方法。 二、实验原理 分光光度法是根据物质对光选择性吸收而进行分析的方法，分光光度法用于定量分析的理论基础是朗伯比尔定律，其数学表达式为：A=εb C 邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的较好试剂，在pH=2～9的条件下，二价铁离子与试剂生成极稳定的橙红色配合物。摩尔吸光系数ε＝11000 L·mol-1·cm-1。在显色前，用盐酸羟胺把Fe3+还原为Fe2+。 2Fe3+＋2NH 2OHHCl→2Fe2+＋N 2 ＋4H＋＋2H 2 O＋2Cl- Fe2+ + Phen = Fe2+ - Phen (橘红色) 用邻二氮菲测定时，有很多元素干扰测定，须预先进行掩蔽或分离，如钴、镍、铜、铅与试剂形成有色配合物；钨、铂、镉、汞与试剂生成沉淀，还有些金属离子如锡、铅、铋则在邻二氮菲铁配合物形成的pH范围内发生水解；因此当这些离子共存时，应注意消除它们的干扰作用。 三、仪器与试剂 1．醋酸钠：l mol·L-1； 2．盐酸：6 mol·L-1； 3．盐酸羟胺：10％（用时配制）； 4．邻二氮菲（%）：邻二氮菲溶解在100mL1:1乙醇溶液中； 5．铁标准溶液。 (1)100μg·mL-1铁标准溶液：准确称取（NH 4） 2 Fe（SO 4 ） 2 ·12H 2 0于烧杯中， 加入20 mL 6 mol·L-1盐酸及少量水，移至1L容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀. 6．仪器:7200型分光光度计及l cm比色皿。 四、实验步骤 1.系列标准溶液配制 (1)用移液管吸取10mL100μg·mL-1铁标准溶液于100mL容量瓶中，加入2mL 6 mol·L-1盐酸溶液, 以水稀释至刻度，摇匀. 此溶液Fe3+浓度为10μg·mL-1. (2) 标准曲线的绘制: 取50 mL比色管6个，用吸量管分别加入0 mL，2 mL，4 mL, 6 mL, 8 mL和10 mL10μg·mL-l铁标准溶液，各加l mL盐酸羟胺，摇匀; 经再加2mL邻二氮菲溶液, 5 mL醋酸钠溶液，摇匀, 以水稀释至刻度，摇匀后放置 10min。 2.吸收曲线的绘制 取上述标准溶液中的一个, 在分光光度计上，用l cm比色皿，以水为参比溶液，用不同的波长，从440～560 nm，每隔10 nm测定一次吸光度，在最大吸收波长
紫外-可见分光光度法测定有色溶液 (2)
紫外-可见分光光度法测有色溶液最大吸收波波长 一、实验目的 1.学习紫外-可见分光光度法的原理； 2.掌握紫外-可见分光光度法测定的实验技术； 3.了解掌握U-3010型紫外-可见分光光度仪的构造及使用方法。 二、实验原理 1.紫外-可见吸收光谱法(称紫外-可见分光光度法)以溶液中物质的分子或离 子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析法。根据最大吸收波长可做定性分析；根据朗伯-比尔定律（标准曲线法和标准加入法）可做定量分析。紫外-可见分光光度法定性分析原理：根据吸收曲线中吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状进行定性分析。 2.紫外-可见分光光度法定量分析原理，根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入 射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。定量分析常用的方法是标准曲线法即只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。 3.仪器由五个部分组成：即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装 置。 三、仪器与试剂 日立U-3010型紫外-可见分光光度仪；吸量管；乙醇；待测溶液；烧杯等。 四、实验步骤 1.接通电源，启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器，预 热半小时。 2.在工作接口上选择测量项目为光谱扫描，设置扫描参数（起点：650nm，终 点：250nm，速度：中，间隔：1.0nm，单次扫描） 3.将两个均装有无水乙醇的1cm石英比色皿放入测量池中，进行基线扫描。 4.基线做好后，按下面的顺序进行操作：做Baseline→换样（换上待测样品置 于Sample池）→进入Analysis Method对相关的参数进行设定→Sample命名→Ready→Measure进行测量，寻找待测溶液的最大吸收波长，再在最大吸收波长处分别测定待测溶液的吸光度。
721可见分光光度计使用方法
721可见分光光度计使用方法 一、开机预热 仪器在使用前应预热30分钟。 二、波长调整 转动波长旋钮，并观察波长显示窗，调整至需要的测试波长。 注意事项：转动测试波长调100%T/0A后，以稳定5分钟后进行测试为好(符合行业标准及质监局检定规程要求)。 三、设置测试模式 按动“功能键”，便可切换测试模式。相应的测试模式循环如下：*开机默认的测试方式为吸光度方式 四、结果打印(721型无此功能) 在得到测试结果后按动“打印”键便可打印结果(需外接标准串行打印机)。 五、光源切换(适用于752、754、755B型) 因为仪器在紫外区和可见区使用不同的光源，所以需要波动光源切换杆来手动的切换光源。建议的光源切换波长为340nm，即200nm-339nm适应氘灯，340nm-1000nm使用卤素灯。 注意事项：如果光源选择不正确，或光源切换杆不到位，将直接影响仪器的稳定性。特殊测试要求除外。 六、比色皿配对性 仪器所附的比色皿是经过配对测试的，未经配对处理的比色皿将影响样品的测试精度。适应比色皿一套两只，供紫外光谱区使用，置入样品架时，两只石英比色皿上标记Q或箭头方向要一致。玻璃比色皿一套四只，供可见光谱区使用。 石英比色皿和玻璃比色皿不能混用，更不能和其他不经配对的比色皿混用。用手拿比色皿应握比色皿的磨砂表面，不应该接触比色皿的头光面，即透光面上不能有手印或溶液痕迹，待测溶液中不能有气泡、悬浮物，否则也将影响样品的测试精度。比色皿在使用完毕后应立即清洗干净。 七、调T零(0%T) 1.在T模式时，将遮光体置入样品架(如图七所示)，合上样品室盖，并拉动样品架拉杆使其进入光路。然后按动“调0%T”键，显示器上显示“00.0”或“-00.0”，便完成调T零，完成调T零后，取出遮光体。 注意事项：1.测试模式应在透射比(T)模式； 2.如果未置入遮光体合上样品室盖，并使其进入光路便无法完成调T零；
分光光度法(附答案)
分光光度法（附答案） 一、填空题1. 分光光度法测定样品的基本原理是利用朗伯-比尔定律，根据不同浓度样品溶液对光信号具有不同的_____，对待测组分进行定量测定。答案：吸光度(或吸光性，或吸收) 2. 分光光度法测定样品时，比色皿表面不清洁是造成测量误差的常见原因之一，每当测定有色溶液后，一定要充分洗涤。可用_____涮洗，或用_____浸泡。注意浸泡时间不宜过长，以防比色皿脱胶损坏。 答案：相应的溶剂(1+3)HNO 3 3. 分光光度法测定土壤中总砷时，制备土壤样品过程中，需取过2mm筛的土样，用玛瑙研钵将其研细至全部通过_____mm筛后，备用。答案：0.149 4. 光度法测定森林土壤全磷的样品，在碱熔完成后，应加入_____℃的水溶解熔块，并用硫酸和热水多次洗涤坩埚。答案：80 二、判断题 1. 应用分光光度法进行试样测定时，由于不同浓度下的测定误差不同，因此选择最适宜的测定浓度可减少测定误差。一般来说，透光度在20％~65％或吸光值在0.2~0.7之间时，测定误差相对较小。( ) 答案：正确 2. 分光光度法主要应用于测定样品中的常量组分含量。( ) 答案：错误正确答案为：分光光度法主要应用于测定样品中的微量组分。 3. 应用分光光度法进行样品测定时，同一组比色皿之间的差值应小于测定误差。( ) 答案：错误正确答案为：测定同一溶液时，同组比色皿之间吸光度相差应小于0.005，否则需进行校正。4. 应用分光光度法进行样品测定时，摩尔吸光系数随比色皿厚度的变化而变化。( ) 答案：错误正确答案为：摩尔吸光系数与比色皿厚度无关。 5. 分光光度法测定土壤中总砷时，在样品中加入酸，并在电热板上加热，目的是分解有机物和氧化样品中各种形态存在的砷，使之成为可溶态的砷。（）答案：正确 6. 分光光度法测定土壤中总砷时，应直接称取新鲜的土样进行测定。（）答案：错误正确答案为：应称取风干或冷冻干燥的样品测定。 7. 分光光度法测定土壤样品中总砷时，有机物会干扰测定，应加酸并加热分解，以消除其于扰。（） 答案：正确 8. 硼氢化钾-硝酸银分光光度法测定土壤中总砷时，样品消解过程中所加的酸分别是盐酸、硝酸和磷酸。（）答案：错误正确答案为：样品消解所加的酸分别是盐酸、硝酸和高氯酸。 9. 分光光度法测定生活垃圾或土壤中砷时，若所用试剂中含有少量氰化物，可用乙酸铅脱脂棉吸收去除。（）答案：错误正确答案为：乙酸铅脱脂棉吸收去除的是试剂中的硫化物。 10. 光度法测定土壤中全氮时，如需提供烘干基含量，则应测定土壤水分，并进行折算。（答案：正确 11. 光度法测定土壤中包括硝态和亚硝态氮的全氮时，若铁粉中含有大量的碳会干扰测定，所以在选择时应注意。（）答案：错误正确答案为：若铁粉含有大量的氮会干扰测定，所以在选择时应注意。
常用紫外分光光度法测定蛋白质含量
6种方法测定蛋白质含量 一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1) 2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2) (nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。 计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。 二、双缩脲法（biuret法） （一）实验原理 双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材 1. 试剂： （1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正
紫外可见分光光度法含量测定
【含量测定】照紫外-可见分光光度法(附录V A)测定。 1.仪器与测定条件：室温：____℃相对湿度：____% 分析天平编号：；水浴锅编号：； 紫外可见分光光度计编号：； 2.对照品溶液的制备： 取西贝母碱对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含_______mg的溶液，即得。 3. 供试品溶液的制备： 取本品粉末(过三号筛)约______g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液3ml，浸润1小时。加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液40ml，置80℃水浴加热回流2小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用适量三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液洗涤药渣2～3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液至刻度，摇匀,即得。 4.标准曲线的制备： 精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml，置25ml具塞试管中，分别补加三氯甲烷至10.0ml，精密加水5ml、再精密加0.05％溴甲酚绿缓冲液(取溴甲酚绿0.05g，用0.2mol／L氢氧化钠溶液6ml使溶解，加磷酸二氢钾1g，加水使溶解并稀释至100ml，即得)2ml，密塞，剧烈振摇，转移至分液漏斗中，放置30分钟。取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以相应的试剂为空白。 5.测定法： 照紫外-可见分光光度法(附录ⅤA），在nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含西贝母碱的重量，计算，即得。 6.结果与计算 6.1 标准曲线制备：
对照品批号 纯 度 S 对照品来源 干燥条件 对照品称重W 对(mg) 各浓度点稀释倍数f 对 溶液浓度C 对(ug/ml) 吸光度A 对 线性回归方程 A=( )C ＋/-（ ） r ＝（ ） 计算公式： W S C f ?= 对对对 C 对= 6.2 样品测定： 水分Q 取样量W 样（g ） 样品稀释倍数f 样 样品吸光度A 样 样品平均吸光度A 样 浓度C(ug/ml) 含量X （%） 平均含量X （%） 计算公式：() %100Q 110W f C X 6 ?-???= 样样 样 X 1= X 2= 7.本品按干燥品计算，含总生物碱以西贝母碱(C 27H 43NO 3)计，不得少于0.050％。 结果: 规定 检验人： 检验日期： 复核人： 复核日期:
分光光度法(附答案)
分光光度法（附答案） 一、填空题 1. 分光光度法测定样品的基本原理是利用朗伯-比尔定律，根据不同浓度样品溶液对光信号具有不同的_____，对待测组分进行定量测定。答案：吸光度(或吸光性，或吸收) 2. 分光光度法测定样品时，比色皿表面不清洁是造成测量误差的常见原因之一，每当测定有色溶液后，一定要充分洗涤。可用_____涮洗，或用_____浸泡。注意浸泡时间不宜过长，以防比色皿脱胶损坏。 答案：相应的溶剂(1+3)HNO3 3. 分光光度法测定土壤中总砷时，制备土壤样品过程中，需取过2mm筛的土样，用玛瑙研钵将其研细至全部通过_____mm筛后，备用。答案： 4. 光度法测定森林土壤全磷的样品，在碱熔完成后，应加入_____℃的水溶解熔块，并用硫酸和热水多次洗涤坩埚。答案：80 二、判断题 1. 应用分光光度法进行试样测定时，由于不同浓度下的测定误差不同，因此选择最适宜的测定浓度可减少测定误差。一般来说，透光度在20％ 65％或吸光值在之间时，测定误差相对较小。( ) 答案：正确 2. 分光光度法主要应用于测定样品中的常量组分含量。( ) # 答案：错误正确答案为：分光光度法主要应用于测定样品中的微量组分。 3. 应用分光光度法进行样品测定时，同一组比色皿之间的差值应小于测定误差。( ) 答案：错误正确答案为：测定同一溶液时，同组比色皿之间吸光度相差应小于，否则需进行校正。 4. 应用分光光度法进行样品测定时，摩尔吸光系数随比色皿厚度的变化而变化。( ) 答案：错误正确答案为：摩尔吸光系数与比色皿厚度无关。 5. 分光光度法测定土壤中总砷时，在样品中加入酸，并在电热板上加热，目的是分解有机物和氧化样品中各种形态存在的砷，使之成为可溶态的砷。（）答案：正确 6. 分光光度法测定土壤中总砷时，应直接称取新鲜的土样进行测定。（）答案：错误正确答案为：应称取风干或冷冻干燥的样品测定。 7. 分光光度法测定土壤样品中总砷时，有机物会干扰测定，应加酸并加热分解，以消除其于扰。（） 答案：正确 8. 硼氢化钾-硝酸银分光光度法测定土壤中总砷时，样品消解过程中所加的酸分别是盐酸、硝酸和磷酸。（） > 答案：错误正确答案为：样品消解所加的酸分别是盐酸、硝酸和高氯酸。 9. 分光光度法测定生活垃圾或土壤中砷时，若所用试剂中含有少量氰化物，可用乙酸铅脱脂棉吸收去除。（）答案：错误正确答案为：乙酸铅脱脂棉吸收去除的是试剂中的硫化物。
紫外分光光度计的使用方法
UV2600型紫外分光光度计操作规程 一、开机 1.打开仪器电源。 2.打开电脑，点击UV Analyst 进入光谱分析软件。 3.软件将自动搜索仪器端口，点击“联机”，软件与仪器联机成功。 二、选择测试模式 根据实验需求选择测试模式。仪器提供的测试模式有“波长扫描”“时间扫描”“定点测量”“定量测量”“核酸测量”和“蛋白质测量” 【波长扫描】主要用以检测样品对一定范围波长光的吸收情况，以便对样品进行定性测量。 1.点击左侧主功能栏中的“波长扫描”即可进入波长扫描界面。 2. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。 3. 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“基线测量”以扣除空白的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“扫描”。以完成样品波长扫描检测。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存谱图。 注意：在“基线测量”中所选择的基线必须与参数设置中基线一致！ 【时间扫描】是检测样品在特定波长范围内吸光度（或透过率）随时间的推移而发生变化情况。主要用以检测样品的稳定性或进行化学动力学研究。 1. 点击左侧主功能栏中的“定量测量”即可进入定量测量界面。 2. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。 3 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“基线测量”以后扣除样品空白的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“扫描”。以完成样品波长扫描检测。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存谱图。 【定点测量】是检测样品在特定波长中的吸光度（或透过率）。 1. 点击左侧主功能栏中的“定量测量”即可进入定量测量界面。 2. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。 3. 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“自动校零”，以扣除该波长中空白溶液的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“测量”，以完成样品的吸光度（或透过率）的测量。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存测量结果。 【定量测量】可通过检测标准样品或输入特定的系数建立标准曲线后测量样品的浓度值。
紫外分光光度法测定未知物
紫外分光光度法测定未知物 1.仪器 1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个 1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个 1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支 1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支 2.试剂 2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。 2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。（其必为给出的五种物质之一） 3.实验操作 3.1比色皿配套性检查 石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。 3.2未知物的定性分析 将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。。。。 3.3未知物定量分析 根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。 推荐方法 3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于
紫外分光光度法测定蛋白质含量实验报告.docx
紫外分光光度法测定蛋白质含量 一、实验目的 1.学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理； 2.掌握紫外分光光度法测蛋白质含量的实验技术。 二、实验原理 1.测蛋白质含量的方法主要有：①测参数法：折射率、相对密度、紫外吸收等；②基于化学反应:定氮法、双缩脲法、Folin―酚试剂法等。本实验采用紫外分光光度法。 2.蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环中含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近（不同蛋白质略有不同）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯―比尔定律。 利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：①对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；②样品中含有的嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。 三、仪器与试剂 TU―1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液3.00mg·mL-1、0.9%NaCl 溶液、试样蛋白质溶液。 10mL比色管、1cm石英比色皿、吸量管。 四、实验步骤 1.绘制吸收曲线 用吸量管吸取2mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在190~400nm间每隔5nm测一次吸光度Abs，记录数据并作图。 2.绘制标准曲线 用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在波长280nm处分别测其吸光度，记录数据并作图。 3.样品测定 取适量浓度试样蛋白质溶液，在波长280nm处测其吸光度，重复三次。在已经得到标准曲线的情况下，为了使测量结果准确度高，待测溶液的浓度需在标准曲线的线性范围内，所以，先测定试样蛋白质原液的吸光度（1.363），估算浓度为2.0960 mg·mL-1，再将原试液稀释至5倍（即取2mL试液，用0.9%NaCl 溶液稀释至刻度，摇匀），估算浓度为0.4192 mg·mL-1，测吸光度，重复三次五、数据处理与结果分析
分光光度法测定氯
分光光度法测定氯 文章介绍了盐碱土壤氯的分光光度分析方法，在酸性介质中，氯离子能取代硫氰酸汞中的硫氰酸根，加入铁盐，使与游离的硫氰酸根作用，生成橙红色配合物，借以间接测定氯含量。方法的检出限为35μg/g，精密度RSD在2.1%-5.1%之间，加标回收率99.1-101.3，通过实际样品分析，结果令人满意。 标签：分光光度法；氯；盐碱土壤 引言 吉林省农业地质调查项目涉及西部地区大面积盐碱化土壤，盐碱土分布面积4403km2，集中分布于大安市、通榆县、长岭县、扶余、镇赉、农安等地。有的盐碱土氯含量较高，最高达1%。而农业地质调查中氯多用X射线荧光光谱法分析，最高测至1000μg/g氯，因而根据工作需要，我们对盐碱性土壤进行氯的分析实验，采用分光光度法测定高含量氯。岩石、土壤中氯的分光光度法有报道，但盐碱土中氯分光光度分析报道很少。通过实验确定了分析方法的分析条件及操作方法。 1 实验部分 1.1 主要试剂和仪器 所用的水（不管是蒸馏水或去离子水）都需经检查确定无氯离子后方可使用。 氢氧化钠高氯酸（70%）硫氰酸汞乙醇饱和溶液：取 1.5g硫氰酸汞溶于500mL无水乙醇中，剧烈振荡后（最好放置过夜）即可使用，保存于棕色瓶中。 高氯酸铁溶液：称取硝酸铁25.0g，加入70%高氯酸50mL，缓缓加热，蒸发大量的高氯酸，直到有大量的黄色结晶析出，停止加热，冷却后即得高氯酸铁。再用500mL5mol/L高氯酸溶解，此溶液1mL含铁6.9mg。 氯标准溶液：准确称取于500℃～600℃灼烧过1h的基准氯化钠0.1649g溶于水中，移入1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液为0.1mg/mL Cl-。再从中分取适量逐级稀释为10ug/mL Cl-备用。 仪器：722G分光光度计。 1.2 样品采集 根据盐碱土形成的地貌、地质环境特点，采样点布置在盐碱土分布广具有代表性的地段。样品采自20cm深度盐碱土，在采样点周围50米范围内采集3个子样组合成一个样品，以提高样品代表性。样品自然风干后，清理杂物，砸碎土
可见光分光光度计的操作方法
可见光分光光度计的操作方法 学时：2学时 一、实验原理 利用可见光等测定物质的吸收光谱，利用此光谱对物质进行定性定量分析和物质结构分析的方法，称为分光光度法，使用的仪器是分光光度计。分光光度计灵敏度高，测定速度快，应用范围广，是生物化学研究中必不可少的基本手段之一。 可见光光谱：光是电磁波，可用波长“λ”表示，电磁波谱是由不同性质的连续波长的光谱所组成，对于生物化学来说，最重要的波长区域是可见光和紫外光。光的波长是二个相邻的波峰之间的距离。λ=C/V 其中，λ-波长；C-光速；V-频率；单位时间要通过一个定点的波数。可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。 根据朗伯-比尔（Lambert- Beer）定律：A=εbc，（A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，b为液池厚度，c为溶液浓度）可以对溶液进行定量分析。ε越大，吸收光的能力越强，相应的分光光度法测定的灵敏度就越高。ε值越大，说明电子跃迁的几率越大，通常ε=10～105：一般认为ε>104为强吸收；ε=103～104为较强吸收；ε<102为弱吸收，此时分光光度法不灵敏。通常使用分光光度计可检测出的最小吸收度A=0.001，所以b=1cm，ε=105时，可检测的溶液最小浓度是C=10-8mol/L。 二、分光光度计的基本参数和组成与构造 1. 722S可见光分光光度计的基本参数 波长范围：340-1000nm 波长精度：±2nm（360-600nm） 表面刻度：（T）0-100%（A）0-2 2. 组成与结构 各种型号的分光光度计不论是何种型式，基本上都是由五部分组成：（1）
分光光度法测定水中氯含量
·分析测试· 分光光度法测定微量氯离子的研究与应用 STUDY AND APPLICATION OF SPECTROPHOTOMETRIC METHOD FOR DETERMINATION OF MICRO CHLORION 1 前言 含有有机物工艺水中氯离子的测定, 是化工生产中常用的分析指标,其含量的高低,对生产的稳定性、生产过程参数的调节至关重要。目前,含有有机物工艺水中的氯离子的测定方法有硝酸银滴定法、汞量滴定法、比色法、离子选择电极法等。这些方法各有利弊,在生产中直接应用有一定的难度。分光光度法以其灵敏度高,选择性好,操作简单等优点广泛用于各种微量以及痕量组分的分析。由于氯化银沉淀不稳定, 直接应用分光光度法测定结 果不理想。笔者通过研究氯化银沉淀在明胶- 乙醇水溶液中的稳定性。建立了一种新的测定微量氯离子的分光光度法,并应用到有机物工艺水中微量氯离子的测定,结果令人满意。线性范围为0～6 mg/ L , 方法的标准偏差为01108 , 变异系数为01026 。回收率为101 %～105 %。 2 实验部分 211 试剂 明胶- 乙醇水溶液: 称取011250 g 明胶, 溶于100 ml 水中, 取其20mL 明胶溶液+ 30 mL 乙醇, 放于100 mL 容量瓶中,用水稀释到满刻度。硝酸溶液:1 + 2 。氯标准溶液:012 mg/ mL 。称取116439 (称准至010002 g) 氯化钠溶解后,全部转移到1000 mL 容量瓶中,用水稀释至满刻度,摇匀,取此
溶液50 mL 稀释到250 mL 。硝酸银溶液:20 g/ L 。称取2 g 硝酸银于100 mL 容量瓶中, 用无氯化物水稀释到刻度。 212 仪器 3 运行效果 根据该厂污水处理场的实际情况, 在两间浮选池上各装一套溶气设备,经过试运行,在认为设备运行正常的情况下,进行了检验和验收,结果如下: (1) 污水泵、循环加气泵及电机运行平稳, 无振动和异常声音。 (2) 污水泵和循环加气泵压力均在013～0134MPa 之间。 (3) 气泡微细。 (4) 截止目前射流加压溶气设备运行情况良好,除油效果显著,提高了污水处理的质量。 4 结论 (1)JDAF - Ⅱ型射流加压溶气设备应用效果良好,运行稳定,操作简单,根除了释放器堵塞现象,减轻了操作人员的劳动强度。 (2) 该设备采用内循环式,所需的溶解空气经循环射流器和真空进气阀自吸气作用完成, 毋需空气压缩机供给,因此减轻了噪声污染。 (3) 除油效果显著。浮选出水含油由原来的6018 %提高到现在的7310 % , 浮选出水含油量可控制在20 mg/ L 以下。 (4) 自动化程度高。该设备自动调整溶气罐内气液平衡,无需人工控制。 一般实验室仪器及7550 紫外可见分光光度计。 213 测定步骤 于100 mL 比色管中,依次加入氯标准溶液、水、明胶- 乙醇水溶液、硝酸溶液,混匀后再加
实验一 紫外分光光度法测定苯甲酸
实验一紫外分光光度法测定苯甲酸 一、实验目的 学习、了解紫外分光光度法原理 了解紫外分光光度计的结构和使用方法 二、实验原理 当辐射能（光）通过吸光物质时，物质的分子对辐射能选择性的吸收而得到的光谱称为分子吸收光谱。分子吸收光谱的产生与物质的分子结构、物质所在状态、溶剂和溶液的PH等因素有关。分子吸收光谱的强度与吸光物质的浓度有关。表示物质对光的吸收程度，通常采用“吸光度”这一概念来量度。 根据朗伯－比尔定律，在一定的条件下，吸光物质的吸光度A 与该物质的浓度C和液层厚度成正比。即A＝ LC 因此，只要选择一定的波长测定溶液的吸光度，即可求出该溶液浓度，这就是紫外－可见分光光度计的基本原理。 在碱性条件下，苯甲酸形成苯甲酸盐，对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长为225nm。因此，采用紫外分光光度计测定苯甲酸在225nm处的吸收度就能进行定量分析。 三、仪器与主要试剂 TU-1810紫外可见分光光度计1cm石英比色皿 0.1M氢氧化钠溶液 苯甲酸(AR) 四、实验步骤 1、苯甲酸标准溶液的制备 称取苯甲酸(105℃烘干)100mg,用0.1M氢氧化钠溶液100ml溶解后,转入1000ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度.此溶液1ml含0.1mg 苯甲酸. 2、制作苯甲酸吸收曲线,选择最大吸收波长 ①移取苯甲酸标准溶液4.00ml于50ml容量瓶中,用0.01M氢氧化钠溶液定容,摇匀,此溶液1ml含苯甲酸8ug. 以氘灯为光源,用0.01M氢氧化钠溶液作为参比,改变测量波长(从210-240nm)测量8ug/ml苯甲酸的吸光度. ②以波长为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制苯甲酸的紫外吸收曲线,并找出最大的吸收波长 (是否是225nm). 3﹑样品的测定 ①取10.00ml苯甲酸样品,放入50ml容量瓶中,用0.01M氢氧化钠
分光光度法测定铁
实验1邻二氮菲 一、实验原理 邻二氮菲(phen)和Fe2+ 在pH3～9的溶液中，生成一种稳定的橙红色络合物Fe(phen) 32+ ，其lgK=21.3，κ 508=1.1×104 L·mol-1 ·cm-1 ，铁含量在0.1～6μg·mL-1 范围内遵守比尔定律。其吸收曲线如图1-1所示。显色前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+ 全部还原为Fe2+ ，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。有关反应如下： 2Fe3+ +2NH 2OH·HC1＝2Fe2+ +N 2↑+2H 2O+4H+ +2C1－
图1-1邻二氮菲一铁(Ⅱ)的吸收曲线 用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度(A)，以溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度值，即可计算试样中被测物质的质量浓度。 二、仪器和试剂 1．仪器721或722型分光光度计。 2．试剂 (1)0.1 mg·L-1 铁标准储备液准确称取0.702 0 g NH 4Fe(S0 4) 2·6H 20置于烧杯中，加少量水和20 mL 1:1H 2S0 4溶液，溶解后，定量转移到1L容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。 (2)10-3 moL-1 铁标准溶液可用铁储备液稀释配制。 (3)100 g·L-1 盐酸羟胺水溶液用时现配。
(4)1.5 g·L-1 邻二氮菲水溶液避光保存，溶液颜色变暗时即不能使用。 (5)1.0 mol·L-1 叫乙酸钠溶液。 (6)0.1 mol·L-1 氢氧化钠溶液。 三、实验步骤 1．显色标准溶液的配制在序号为1～6的6只50 mL容量瓶中，用吸量管分别加入0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.0 mL铁标准溶液(含铁0.1 g·L-1 )，分别加入1 mL 100 g·L-1 盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min，再各加入2 mL 1.5 g·L-1邻二氮菲溶液、5 mL 1.0 mol·L-1 乙酸钠溶液，以水稀释至刻度，摇匀。 2．吸收曲线的绘制在分光光度计上，用1 cm吸收池，以试剂空白溶液(1号)为参比，在440～560 nm之间，每隔10 nm测定一次待测溶液(5号)的吸光度A，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，从而选择测定铁的最大吸收波长。 3．显色剂用量的确定在7只50 mL容量瓶中，各加2.0 mL 10-3 mol·L-1铁标准溶液和1.0 mL 100 g·L-1 盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min。分别加入0.2， 0.4，0.6，0.8，1.0，2.0，4.0 mL 1.5 g·L-1 邻二氮菲溶液，再各加5.0 mL 1.0 mol·L-1