常见生理测定用方法-2017-5-20-新版
常见生理指标测定用方法
――SOD、POD、CAT、可溶性蛋白、叶绿素、电导率、可溶性糖、MDA、脯氨酸、叶片含水量
SOD酶液可用于SOD、POD、CAT、可溶性蛋白指标的测定，即POD、CAT、可溶性蛋白三个指标不用再取叶片。
SOD酶液的提取。每个重复称取去叶脉的叶片组织约0.25g。剪碎放入预先冷却好的研钵中，加入少量(2-3 ml，因总体积只有9 ml，还要冲洗2次)的磷酸缓冲液(0.05 mol/L，PH=7.8)（不加PVP）研磨成匀浆，然后倒入10 ml的带刻度的塑料离心管中（预先洗好晾干），并用此磷酸缓冲液定容到9 ml。在3000转，4℃高速离心机（提前4℃预冷一下，设好4℃后提前空转运行一下）中离心15分钟，将提取的酶液放入置有冰袋的塑料盒中，低温保存，备用。宜用酶液将4个指标当天测完，切记。
实验一氮蓝四唑(NBT)法测定SOD活力（优先1-用材0.25 g）
1.实验原理
超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶，它的反应产物可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。
本实验依据超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560 nm处有最大吸收。而SOD可清除超氧阴离子自由基，从而抑制甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。
2. 材料、仪器设备及试剂
（一）材料
叶片。
（二）仪器设备
高速台式离心机，分光光度计，微量进样器（要注意测试一下是否准确，用玻璃移液管来对比），荧光灯（反应试管处照度为4000 lx），我们用的光照培养箱，33%的光照下，上数第二个架子中间位置为4000 lx。试管。
（三）试剂
（1）0.05 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.8）。
注：PBS（磷酸缓冲液）配制
母液：A液：0.2 mol/L Na2HPO4溶液：Na2HPO4.12 H2O 71.63 g定容至1000 ml; (计算步骤：358.14*0.2=71.628 g)
B液：0.2 mol/L NaH2PO4溶液：NaH2PO4. 2 H2O 31.20 g定容至1000 ml; (计算步骤：156.01*0.2=31.202 g)
0.05 mol/L pH=7.8 PBS：A液取114.38 ml，B液取10.63 ml，将A与B液混合并用蒸馏水定容至500 ml.（详见李合生版《植物生理生化实验原理和技术》P267）
（2）130 mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399 g Met用0.05 mol/L PBS定容至100ml。
（3）750 μmol/L氮蓝四唑溶液：称取0.0613 g （精确到最后一位，相差不要超0.0003 g）NBT用磷酸缓冲液定容至100 ml，4℃冰箱中，置于棕色瓶中避光保存。
（4）100 μmol/L EDTA-Na2溶液称取0.0372 g EDTA-Na2，用0.05 mol/L PBS磷酸缓冲液定容至1000 ml。
（5）20 μmol/L核黄素溶液：称取0.0753 g核黄素用蒸馏水定容至1000 ml。（注：核黄素现用现配，不用时严格避光保存，放在棕色瓶中，切记）
3. 实验步骤
1) 酶液提取
称取去叶脉的叶片组织约0.2500 g（精确到小数点后两位），剪碎放入预先冷却好的研钵中，加入少量的磷酸缓冲液(0.05 mol/L，pH=7.8)（不加PVP）研磨成匀浆，然后倒入10 ml的离心管(带刻度)中，并用此磷酸缓冲液定容到9 ml。在3000 r/min，4℃高速离心机中离心15分钟（离心务必澄清，否则再离一次），将提取的酶液放入冰箱中，4℃低温保存。
2)反应混合液的配置(根据测定样品现配，如50或100个样品用量)
每支试管中各溶液显色反应用量：0.05 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.8），1.5 ml；130 mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液，0.3 ml；750 μmol/L氮蓝四唑溶液，0.3 ml；100 μmol/L EDTA-Na2溶液，0.3 ml；蒸馏水，0.10 ml；以上总计2.50 ml。
根据样品的量配制反应混合液。
3)显色反应
取5 ml指形管（要求透明度好）4支，2支为测定管，另2支为对照管，每支加入2.50 ml的反应混合液，然后向对照管中加入0.20 ml（200 μl）的0.05mol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）；向测定管管中加入0.20 ml（200 μl, 酶液用量可以调整，夏枯草采用200 μl）的酶液，然后再迅速向四支试管中分别加0.3 ml的20 μmol/L 核黄素溶液。
混匀后将1支对照管置暗处，其他各管于4000 lx日光下（置于2#209实验室靠门侧光照培养箱由上往下第二层正中心位置，33%光照度）反应20 min（要求各管受光情况一致，温度高，时间缩短，低时延长）。
注：反应结束应立即测定，以防数值出现较大偏颇。
4) SOD 活性测定
反应结束后，以不照光的对照管作空白，在560 nm 处，分别测定其他各管的吸光度（在测定中测定管与吸收管应该比对照管的吸光度值降低）。
4. 结果计算
已知SOD 活性单位以抑制NBT 光还原的50％为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD 活性。
T CK E CK V W A V A A g U SOD ????-=5.0)()/(总活性
式中：SOD 总活性以每克样品鲜质量酶单位表示(U/g)，A CK 为对照管的吸光度A E 为样品管的吸光度；V 为样品液总体积；V T 为测定时样品用量(mL)；W 为叶片的鲜重(g)。
实验二 过氧化物酶POD 活性的测定
（优先1-用材0.25 g ，同SOD 酶液)
1. 实验原理
在过氧化物酶POD 的催化下，过氧化氢将愈创木酚氧化为茶褐色产物，此产物在470 nm 有最大光吸收,因此测定470 nm 的吸光度变化就可得到过氧化物酶的活性。
2. 材料、仪器设备及试剂
1)材料
新鲜芍药叶片
2)仪器设备
722型分光光度计，离心机，研钵，容量瓶
3)试剂
(1) 0.05 mol/L ，pH=6.0的磷酸缓冲液（用于反应混合液的配制） 注：PBS （磷酸缓冲液）配制
母液：A 液：0.2 mol/L Na 2HPO 4溶液： Na 2HPO 4.12 H 2O 71.62 g 定容至1000 ml; B 液：0.2 mol/L NaH 2PO 4溶液：NaH 2PO 4. 2 H 2O 31.2 g 定容至1000 ml;
0.05 mol/L pH=6 PBS ：A 液取15.375 ml ，B 液取109.6 ml ，将A 与B 液
混合并用蒸馏水定容至500 ml （详见李合生版《植物生理生化实验原理和技术》P267）。
(2) 愈创木酚
(3) 30%过氧化氢
3. 实验步骤
(1) 取两支试管，一只为对照管，一只为试验管。将提取的SOD 酶液取1 ml 加入到实验管中，对照管加1 ml 蒸馏水。将两支试管都放在室内自然上升至室
温(约25摄氏度，最好当天测完)。
(2) 然后在对照管和实验管中分别加入3 ml 反应混合液(反应混合液包括：0.05 mol/L ，pH=6.0的磷酸缓冲液100 ml ，加愈创木酚56 μl ，待加热完全溶解后，看不到有愈创木酚液滴方行。然后冷却至室温，加入30%过氧化氢38 μl ，以防H 2O 2分解)。然后摇匀，立即在470 nm 测定POD 的活性（在测定中吸光值应该不断升高）。
4. 结果计算
以每分钟ΔA 470变化0.01为一个POD 活性单位(U)
t
V W V A g U POD S T ????=??01.0min)]/([470活性 式中：ΔA 470为反应时间内吸光度的变化；t 为反应时间(min)；V T 为提取酶液总体积(mL)；V S 为测定时所用酶液体积(mL)；W 为叶片的鲜重(g)。
实验三 过氧化氢酶CAT 测定（优先1-用材0.25 g ，同SOD 酶液)
（要用752S 测定）
1. 实验原理
过氧化氢在240 nm 下有强烈吸收，但过氧化氢酶可分解过氧化氢使反应溶液吸光度发生改变，可根据测定吸光度的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
方法参考：赵世杰与苍晶的书：植物生理学实验指导（230页）。
2. 材料、仪器设备及试剂
1)材料
新鲜植物叶片
2)仪器设备
752 S 型紫外可见分光光度计，离心机，研钵，容量瓶
3)试剂
(1) 0.2 mol/L 磷酸缓冲液(PH=7.8，0.05 mol/L)
(2) 30%过氧化氢
(3) 过氧化氢(0.1mol/L)
30%过氧化氢的摩尔浓度为9.8 mol/L （1.11*1000*0.30/34=9.79 mol/L ），
0.1 mol/L 过氧化氢配制：1.02 ml 30%过氧化氢稀释到100 ml 蒸馏水中。
3. 实验步骤
1）酶液提取
采用前SOD 酶液
2）酶活性测定
用0.2 mol/L pH 7.8的磷酸缓冲液（PBS ）调零。
对照管（S 0）：0.2 ml 的酶液（预先在沸水中放1分钟，以煮死酶液，煮时用
保鲜膜密封），冷却后，再加1.5 ml pH 7.8的0.2mol/L磷酸缓冲液（PBS），再加1 ml 的蒸馏水与0.3 ml 0.1 mol/L的过氧化氢。
测定管（S1与S2，两个重复）：0.2 ml的酶液（未煮死酶液，），加1.5 ml pH 7.8的0.2mol/L磷酸缓冲液（PBS），再加1 ml 的蒸馏水，加入0.3 ml 0.1 mol/L 的过氧化氢后立即计时，迅速倒入石英比色杯中，在波长240 nm下测定吸光值，每隔1分钟读数1次，测定3分钟。待3支管全部测定完后，代入公式，计算酶活性。
4．结果计算。以1分钟内A240减少0.1的酶时为1个酶活单位（U）。
过氧化氢酶活性=(ΔA240 ×V t)/ (0.1 × V1 ×t × W)
ΔA240=As o-(As1+As2)/2
As o：加入煮死酶液的对照管的吸光值；As1与As2为2个样品测定管的吸光度值；V t为酶液总体积，ml（我们的体系为9 ml）；V1为测定用酶液体积，ml（0.2 ml）;W为样品鲜重，g；0.1 为A240每下降0.1为1 个酶活性单位，U；t为加过氧化氢到最后一次读数的时间，min（3 min）。
实验四抗坏血酸过氧化物酶（APX)活力测定
（优先1-用材0.25 g，同SOD酶液，要用752S测定)
（紫外比色法）
【实验目的】
学习和掌握用分光光度法测定抗坏血酸过氧化物酶（APX)活力的方法。
【实验原理】
抗坏血酸过氧化物酶（APX)是叶绿体中专一清除H2O2的酶，它催化还原型抗坏血酸（AsA)与H2O2反应，使AsA氧化成单脱氢抗坏血酸（MDAsA)。因此，在酶提取液中加入AsA,可测定APX活性。随着AsA被氧化，溶液的OD290值下降，根据单位时间内OD290的减少值，计算APX活性。
【实验器材与试剂】
1.实验材料：水稻等植物叶片。
实验试剂:50 mmol/L pH 7.0磷酸缓冲液（附表2）
母液：A液：0.2 mol/L Na2HPO4溶液：Na2HPO4.12 H2O 71.62 g定容至1000 ml;
B液：0.2 mol/L NaH2PO4溶液：NaH2PO4. 2 H2O 31.2 g定容至1000 ml;
0.05 mol/L pH=7.0 PBS：A液取125*0.61= 76.25 ml，B液取125*0.39=48.75 ml，将A与B液混合并用蒸馏水定容至500 ml（详见李合生版《植物生理生化实验原理和技术》P267）。
15 mmol/L AsA溶液（称52.896 mg抗坏血酸，用蒸馏水配成20 mL溶液），
0.3 mmol/L H2O2（吸取30 L 30%H2O2，配置成10 mL，得30 mmol/L H2O2,
吸取该溶液1 mL，配成100 mL，即为0.3 mmol/L H2O2)。
2.实验仪器：紫外分光光度计、分析天平、冰冻离心机、微量进样器、研钵等。
【实验步骤】
1.酶液的配置
采用SOD酶液。
2.酶活性的测定
在3 mL反应体系中，加入50 mmol/L pH 7.0磷酸缓冲液 1.8 mL，15 mmol/L AsA 0.1 mL，酶液0.1 mL，0.3 mmol/L H2O2 1 mL。以不加酶液（以磷酸缓冲液代替）为空白，测定3 min内OD290变化。以一分钟内OD290减少0.01定义为一个酶活力单位（1 U）。
3.结果计算
APX活性（U·min-1 ·g-1 FW)=ΔA290 ×V1 / (0.01 × V2 ×t × W)
式中：ΔOD290--在一段时间内OD290的变化量；V1--提取酶液总体积（mL)；V2--测定用酶液体积（m L)；t--反应时间（min)；W--样品鲜重（g)。
测得样品中蛋白质含量后，APX活性也可以用―U·min-1 ·mg-1蛋白质‖表示。
实验五可溶性蛋白的测定(优先1-用材0.25 g，同SOD酶液)
1、标准曲线绘制
取6支试管，按下表加入各试剂。
表2
试剂
管号
0 1 2 3 4 5
100μg/ml牛血清白蛋白溶液0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水／mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 考马斯亮蓝液／mL 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
牛血清蛋白的配制：
取0.025 g（25 mg）牛血清蛋白（BSA在冰箱里找），蒸馏水溶解定容至100 ml（250 μg/ml），再从100 ml中取40 ml稀释定容至100 ml（100 μg/ml）。
考马斯亮蓝G250的配制：
取50 mg（0.0500）考马斯亮蓝溶于22.5 ml纯乙醇中，加50 ml 85%磷酸（买的磷酸即85%溶液），用蒸馏水定容至500 ml，储藏于棕色瓶中，保质期一个月。
加入考马斯亮蓝G-250蛋白试剂后，摇匀，放置2 min后，在595 nm波长下比色测定，记录A595。
以各管相应标准蛋白质含量（mg）为横坐标、A595为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品测定
用空白（1 ml蒸馏水+5ml考马斯亮蓝G-250）调零。试管中加自制蛋白质样品1.0 mL（SOD提取酶液），再加入5.0 mL考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀，放置2 min后，在595 nm波长下比色，记录A595。
根据所测A595从标准曲线上查得蛋白质含量。
3、结果计算
样品中蛋白质含量(mg/g)=C*V T/（V s*W F*1000）
式中：C为查标准曲线值，μg；V T为提取液总体积（我们用的为9 ml）；V s为测定时加样量；W F为样品鲜重。
注意事项：
（1）如果测定要求很严格，可以在试剂加入后的5～20min内测定吸光度，因为在这段时间内颜色是最稳定的。比色反应需在1 h内完成。
（2）测定中，蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，实验证明此复合物的吸附量是可以忽略的。测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。
（3）利用考马斯亮蓝法分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用，重复测定吸光度时，比色杯一定要冲洗干净，制作蛋白标准曲线的时候，蛋白标准品最好是从低浓度到高浓度测定，防止误差。
实验六光合色素含量测定（优先2-用材0.025 g）
叶绿体色素溶液各组成成分在可见光谱中具有不同的特征吸收峰。叶绿体色素的提取常用丙酮和乙醇有机溶剂。叶绿体色素80％丙酮提取液中叶绿素 a 和b 及类胡萝卜素分别在663 nm、646 nm 和470 nm 波长下有最大吸收峰，据此所测得的吸光度值代人不同的经验公式（见结果计算），计算出叶绿体色素丙酮提取液中叶绿素a 和 b 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度，并依据所使用的单位植物组织（鲜重、干重或面积），求算出色素的含量。
[ 实验目的]
掌握分光光度法对植物叶绿体色素提取液中叶绿素 a 和 b 的浓度及其叶
绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度测定与计算方法，以及植物材料中各种色素含量的求算方法。
[ 器材和试剂]
1. 植物材料新鲜（或烘干）植物叶片，如菠菜叶片等。
2. 实验器材分光光度计、天平、研钵、剪刀、漏斗、滤纸、棕色容量瓶、吸水纸、擦镜纸和滴管。
3. 实验试剂80％丙酮（80 ml体积的丙酮定容到100 ml蒸馏水中）
[ 操作步骤］
1. 色素的提取
称取新鲜（或干材料）的洗净擦干的植物叶片0.025 g（上下相差0.003 g），去中脉剪碎后置于带刻度试管中，用80%丙酮定容至5 ml，密封，避光放置48 h。
2. 吸光度的测定
①将色素提取液重新混匀。
②取光径 1 cm 的比色杯，注入上述色素丙酮提取液，以80％丙酮作为空白对照，在波长663、646 和470 nm 下测定吸光度。
3. 结果计算
依据下列丙酮提取液中色素浓度计算公式，分别计算出叶绿素 a 上的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。
C a = 12.21 * A663– 2.81 *A646 （叶绿素a的浓度）
C b = 20.13 *A646– 5.03 *A663（叶绿素b的浓度）
C c =（1000* A470– 3.27 C a– 104 C b）/229 （类胡萝卜素总浓度）
求得色素浓度后，代入下面公式：光合色素含量=色素浓度*提取液体积*稀释倍数/样品鲜重（mg/g)
[ 注意事项］
1. 光对叶绿素有破坏作用，实验操作应在弱光下进行，且应尽量在短时间内研磨。
2. 色素提取液若混有其他物质而造成浑浊，将影响吸光度的测定，应重新过滤或离心。
3. 色素吸光度测定前，应按仪器说明及标准叶绿素a、b 对分光光度计的波长进行校正，否则影印叶绿素含量的测定精度。
实验七电导率(优先3-用材0.025g)
从对照及不同处理中分别称取生长一致的鲜苗0. 05 g（苗子多的话建议0.10 g），剪成长度为0.5 cm的小段，3个重复。用去离子水充分冲洗干净后，用吸水纸吸干水分，置于20 ml，试管中（电导仪测试棒应该可以伸进去接触到液面，先试一下，然后提前选好试管），并加10 ml 去离子水，摇匀、密封，室温放置24 h，用数字电导仪测定电导率E1；然后置沸水浴中煮30 min，冷却后测定电导率E2；同时测定其背景电导值E0。按下式计算电导率(P):
P= (E1-E0)/(E2-E0)*100%。
实验八可溶性糖的测定(优先4-用材0.05-0.1g)
1．试剂
(1) 1%蔗糖标准液: 将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000 g。
加少量水溶解，移入100 ml容量瓶中，加入0.5 ml浓硫酸，定容至刻度（10000 μg/ml）。
(2) 100 μg/ml蔗糖标准液: 精确吸取1%蔗糖标准液1 ml加入100 ml容量瓶
中，加水定容（100 μg/ml）。
(3) 蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1.0 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，用时
加热溶解。
(4)标准曲线：
精确吸取1%的蔗糖标准液1 ml加入100 ml容量瓶中，得终浓度为100
μg/ml。取20 ml 刻度试管，从0-5进行编号，按下表加入溶液与蒸馏水。
试剂
管号
0 1 2 3 4 5
100 μg/ml蔗糖液（ml）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 水（ml） 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 相当于蔗糖量（μg）0 20 40 60 80 100
按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其吸光度，以吸光度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
2、测定方法
取新鲜植物样品，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.05 g（叶片多的话可取0.10 g），放入带刻度试管中，加入8 mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30 min（提取2次），提取液过滤入25 mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
显色测定：吸取0.5 ml糖提取液于20 ml刻度试管中（重复2次），加入蒸馏水1.5 ml，按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml浓硫酸，充分振荡，保鲜膜封口后立即将试管放入沸水浴中，均准确保温1 min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比（0.5 ml 蒸馏水+1.5 ml 蒸馏水+0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂+5 ml浓硫酸），在630 nm波长下测其吸光度，由标准曲线查得待测液的含糖量。
3、结果计算
可溶性糖含量(mg/g)=C*V/( a*m*106) 式中C－标准方程求得糖量(μg)；a －吸取样品液体积(ml)；V－提取液量(ml)；m－称样质量（g）。
附注
（1）加浓H2SO4时应缓慢加入，以免产生大量热量而爆沸，灼伤皮肤，如出现上述情况，应迅速用自来水冲洗。
（2）水浴加热时用保鲜膜封口，多封几圈，以免加热热气冲开。
实验九硫代巴比妥酸法测定丙二醛的含量(优先5-用材0.25 g)
1．实验原理
植物器官衰老时，或在逆行环境下，往往会发生膜质过氧化作用，丙二醛（MDA）是其产物之一，通常利用它作为膜质过氧化的指标，表示细胞膜质过氧化程度和植物对逆性条件反应的强弱。
丙二醛（MDA）在高温、酸性的条件下能与0.67 %的硫代巴比妥酸(TBA)反应生成有色的三甲基复合物。该复合物在532 nm的波长处有最大的光吸收，在600 nm的波长处有最小的光吸收，该复合物的吸光系数为155[mmol/(L.cm)]，可按公式：
A532－A600=155000×C×L
算出MDA浓度C(μmol/L)，进一步算出单位重量鲜组织中 MDA 含量(μmol/g)。式中，A532和A600分别表示532 nm和600 nm处的吸光度值。L为比色杯厚度(cm)
需要指出的是，植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰作用。为消除这种干扰，经试验，可用下列公式消除由蔗糖引起的误差。
C(μmol/L)=6.45(A532－A600)－0.56A450 （2）
A450、A532、A600分别代表离心后的溶液在450 nm、532 nm、600 nm波长下的吸光度值，进一步算出其在植物组织中的含量。
2．实验仪器、材料、试剂
（一）实验仪器
研钵，恒温水浴锅，分光光度计，冷冻离心机，天平，刻度试管。
（二）材料
植物新鲜叶片
（三）试剂
1）5%三氯乙酸（TCA)：称取5.0 g的三氯乙酸溶于蒸馏水并用其定容至100 mL
2）0.67%硫代巴比妥酸(TBA)：称取硫代巴比妥酸0.67 g溶于10％TCA溶液中(70度水浴加热，提前配，避光保存，即棕色瓶中)，并用其定容至100 mL。3．实验步骤
1）酶液的提取
称取0.25 g的芍药叶片，加入提取液5%三氯乙酸（TCA)研磨均匀后，定容至5 ml，3000 r/min下离心10分钟。
2）吸取上清液2 ml并加入2 ml 0.67%硫代巴比妥酸(TBA)摇匀，在沸水中煮沸30分钟，冷却后再离心一次。
4）以2 ml的提取液和2 ml反应液0.67%硫代巴比妥酸(TBA)的混合液为对照，分别在450 nm、532 nm、600 nm的波长下测定吸光度值并记录数据。按公式C(μmol/L)=6.45(A532－A600)－0.56A450 （2）
计算植物样品提取液中丙二醛的浓度。
实验十脯氨酸含量的测定(优先6-用材0.25 g)
1. 原理
用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520 nm波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。
2. 材料、仪器设备及试剂
（一）材料：待测植物（水稻、小麦、玉米、高粱、大豆等）叶片。
（二）仪器设备：1) 722型分光光度计；2) 研钵；3) 100 ml小烧杯；4) 容量瓶；5) 大试管；6) 普通试管；7) 移液管；8) 注射器；9) 水浴锅；10) 漏斗；
11) 漏斗架；12) 滤纸；13) 剪刀。
（三）试剂
1) 酸性茚三酮溶液：将1.25 g茚三酮溶于30 ml冰醋酸和20 ml 6 mol/L磷酸中(0.025*6*98/0.85/1.69=10.23ml，10.23 ml 85%的磷酸定容到25 ml容量瓶中)，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中(现在现配，放置超24 h即重配)；
2) 3％磺基水杨酸：3 g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100 ml；3) 冰醋酸；4) 甲苯。
3. 实验步骤
1) 标准曲线的绘制
（1）在分析天平上精确称取25 mg(0.0250 g)脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250 ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100 μg。
（2）系列脯氨酸浓度的配制：取6个50 ml容量瓶，分别盛入脯氨酸原液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5及3.0 ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1，2，3，4，5及6 μg/ml。
（3）取6支试管，分别吸取2 ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2 ml冰醋酸和2ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30 min。
（4）冷却后各试管准确加入4 ml甲苯，振荡30 s，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。
（5）用注射器或吸管轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520 nm波长处进行比色。
（6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y）依脯氨酸浓度（X）变化的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2 ml测定液中脯氨酸的含量（μg/ml）。
2) 样品的测定
（1）脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待测植物叶片各0.25 g，分别置于大试管中，然后向各管中分别加入5 ml 3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10 min（提取过程中要经常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。
（2）吸取2 ml提取液于另一干净的带玻塞试管中，加入2ml冰醋酸及2ml 酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热30 min，溶液即呈红色。
（3）冷却后加入4 ml甲苯，摇荡30 s，静置片刻，取上层液至10 ml离心管中，在3000 rpm下离心5 min。
（4）用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在分光光度计上520 nm波长处比色，求得吸光度值。
4. 结果计算根据回归方程计算出（或从标准曲线上查出）2ml测定液中脯氨酸的含量（μg/ml），然后计算样品中脯氨酸含量的百分数。计算公式如下：脯氨酸含量（μg/ml）＝(X×5/2)/(样重*106)
式中X为从标准曲线中查得脯氨酸浓度。
注意事项：1）甲苯有毒，做实验时门窗要开着通风，做完实验最好把废液倒入厕所。
2）茚三酮不要沾染到手上，尽量戴手套，否则沾上洗不掉。
3）本实验药品很多都有刺激性和毒性，做实验时尽量戴口罩小心操作。
实验十一叶片相对含水量的测定(暂不测)
先求叶片鲜重Wf(取0.20 g，最好0.5 g以上)，然后将叶片浸入蒸馏水中数小时，使叶片吸水成饱和状态。取出用吸水纸吸取表面的水分，立即放入已知重量的称瓶中称重，再放入蒸馏水中一段时间后取出吸干外面水分，再称重，直至重量不再增加为止。此时即为叶片吸水饱和时的重量Wt，再将样品烘干，求得组织干重Wd，
即得相对含水量=（Wf-Wd）/（Wt-Wd）×100%
注：Wf——叶片鲜重（g）；Wd——叶片干重（g）；Wt——叶片饱和吸水重（g）。
一般认为24小时，叶片吸水以及达到饱和状态，没有必要继续。时间长了，叶片可能有所变化吧。烘干8小时，测重量。
注意事项：1、测含水量时要用刚采摘的新鲜叶片。
2、要烘干至恒重。
最新植物生理指标测定方法
实验一植物叶绿素含量的测定（分光光度法） (张宪政，1992) 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用效率的大小，比值高则大，则反之。 二、材料、仪器设备及试剂 试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮） 三、实验步骤 称取剪碎的新鲜样品0.2～0.3g，加乙醇10ml，提取直至无绿色为止。把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm和645nm下测定吸光度。四、实验结果按计算 丙酮法（Arnon法）【可以用于丙酮乙醇混合法和80%丙酮提取法的计算】 叶绿素a的含量（mg/g）=（12.71?OD663 – 2.59?OD645）V/1000*W 叶绿素b的含量（mg/g）=(22.88OD645 – 4.67OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(8.04?OD663 +20.29?OD645) V/1000*W 按Inskeep公式 叶绿素a的含量（mg/g）=（12.63?OD663 – 2.52?OD645）V/1000*W 叶绿素b的含量（mg/g）=(20.47OD645 – 4.73OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(7.90?OD663 + 17.95?OD645) V/1000*W
植物生理学实验课程
《植物生理学实验》课程大纲 一、课程概述 课程名称（中文）：植物生理学实验 （英文）：Plant Physiology Experiments 课程编号：18241054 课程学分：0.8 课程总学时：24 课程性质：专业基础课 前修课程：植物学、生物化学、植物生理学 二、课程内容简介 植物生理学是农林院校各相关专业的重要学科基础课，是学习相关后续课程的必要前提，也是进行农业科学研究和指导农业生产的重要手段和依据。本实验课程紧密结合理论课学习内容，加深学生对理论知识的理解。掌握植物生理学的实验技术、基本原理以及研究过程对了解植物生理学的基本理论是非常重要的。本大纲体现了植物生理学最实用的技术方法。实验内容上和农业生产实践相结合，加强学生服务三农的能力。实验手段和方法上，注重传统、经典技术理论与现代新兴技术的结合，提高学生对新技术、新知识的理解和应用能力。 三、实验目标与要求 植物生理学实验的基本目标旨在培养各专业、各层次学生有关植物生理学方面的基本研究方法和技能，包括基本操作技能的训练、独立工作能力的培养、实事求是的科学工作态度和严谨的工作作风的建立。开设植物生理学实验课程，不仅可以使学生加深对植物生理学基本原理、基础知识的理解，而且对培养学生分析问题、解决问题的能力和严谨的科学态度以及提高科研能力等都具有十分重要的作用。 要求学生实验前必须预习实验指导和有关理论，明确实验目的、原理、预期结果，操作关键步骤及注意事项；实验时要严肃认真专心操作，注意观察实验过程中出现的现象和结果；及时将实验结果如实记录下来；实验结束后，根据实验结果进行科学分析，完成实验报告。 四、学时分配 植物生理学实验课学时分配 实验项目名称学时实验类别备注 植物组织水势的测定3学时验证性 叶绿体色素的提取及定量测定3学时验证性 植物的溶液培养及缺素症状观察3学时验证性 植物呼吸强度的测定3学时设计性 红外CO2分析仪法测定植物呼吸速率3学时设计性选修 植物生长物质生理效应的测定3学时验证性 植物种子生活力的快速测定3学时验证性
工量具的使用方法详解讲解
工量具的使用方法 目录 第一章钢直尺、内外卡钳及塞尺 (2) 一钢直尺 (2) 二内外卡钳 (3) 三塞尺 (5) 第二章游标读数量具 (6) 一游标卡尺的结构型式 (6) 二游标卡尺的读数原理和读数方法 (8) 三游标卡尺的测量精度 (9) 四游标卡尺的使用方法 (10) 五游标卡尺应用举例 (12) 六高度游标卡尺 (13) 七深度游标卡尺 (13) 八齿厚游标卡尺 (14) 第三章螺旋测微量具 (15) 一外径百分尺的结构 (15) 二百分尺的工作原理和读数方法 (16) 三百分尺的精度及其调整 (17) 四百分尺的使用方法 (18) 五百分尺的应用举例 (19) 六杠杆千分尺 (20) 七内径百分尺 (20) 八内测百分尺 (21) 九三爪内径千分尺 (21) 十公法线长度千分尺 (22) 十一壁厚千分尺 (22) 十二板厚百分尺 (22) 十三尖头千分尺 (23) 十四螺纹千分尺 (23) 十五深度百分尺 (23) 十六数字外径百分尺 (23) 第四章量块 (24) 一量块的用途和精度 (24) 二成套量块和量块尺寸的组合 (24) 三量块附件 (25) 第五章指示式量具 (26) 一百分表的结构 (26) 二百分表和千分表的使用方法 (27) 三杠杆百分表 (29)
四杠杆百分表和千分表的使用方法 (30) 五内径百分表 (32) 六内径百分表的使用方法 (33) 第六章角度量具 (33) 一万能角度尺 (33) 二游标量角器 (34) 三万能角尺 (35) 四带表角度尺 (36) 五中心规 (36) 六正弦规 (36) 七车刀量角台 (38) 第七章水平仪 (39) 一条式水平仪 (39) 二框式水平仪 (40) 三光学合像水平仪 (43) 第八章量具的维护和保养 (44) 参考文献 (45) 第一章钢直尺、内外卡钳及塞尺 一钢直尺 钢直尺是最简单的长度量具，它的长度有150，300，500和1000 mm四种规格。图1-1是常用的150 mm钢直尺。 图1-1 150 mm钢直尺 钢直尺用于测量零件的长度尺寸(图1-2)，它的测量结果不太准确。这是由于钢直尺的刻线间距为1mm，而刻线本身的宽度就有0.1～0.2mm，所以测量时读数误差比较大，只能读出毫米数，即它的最小读数值为1mm，比1mm小的数值，只能估计而得。 (a) (b) (c)
植物生理生化测定
2.1.8转基因植株在盐胁迫下的超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 将转基因植株与非转基因对照植株继代于含有0.5% NaCl的MS固体培养上进行胁迫培养，培养条件为27±1℃，每天13 h、3000 lux光照。胁迫培养4 w后，取其叶片测定其SOD 活性，每个样品设3次重复，求其平均数，并进行多重比较。 2.1.8.1主要试剂及配方 （1）0.1 mol/l pH 7.8磷酸钠（Na2HPO4-NaH2PO4）缓冲液 A液（0.1 mol/l Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4·12H2O 7.163 g，用少量蒸馏水溶解后定容至200 ml，4℃冰箱中保存备用； B液（0.1 mol/l NaH2PO4溶液）：称取NaH2PO4·2H2O 0.780 g，用少量蒸馏水溶解后定容至50 ml，4℃冰箱中保存备用； 取上述A液183 ml与B液17ml充分混匀后即为0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液，4℃冰箱中保存备用。 （2）0.026 mol/l甲硫氨酸（Met）磷酸钠缓冲液 称取甲硫氨酸（C5H11NO2S）0.388 g，用少量0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液溶解后，再用相同磷酸钠缓冲液定容至100 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用1～2 d。 （3）7.5 × 10-4 mol/l NBT溶液 称取NBT（C40H30Cl2N10O6）0.153 g，用少量蒸馏水溶解后，定容至250 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用2～3 d。 （4）含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液 A液：称取EDTA 0.003 g，用少量蒸馏水溶解； B液：称取核黄素0.075 g，用少量蒸馏水溶解； C液：合并A液和B液，定容至100 ml，此溶液即为含0.1 mmol/l EDTA的2 mmol/l 核黄素溶液，避光保存（可用黑纸将装有该液的棕色瓶包好），4℃冰箱中可保存8～10 d，当测定SOD酶活时，将C液稀释100倍，即为含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液。 （5）含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液 取0.1 mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液50 ml，加入2 g PVP（聚乙烯吡咯烷酮），充分溶解后移入100 ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，充分混匀，4℃冰箱中保存备用。 2.1.8.2提取及测定方法 （1）称取1.0 g样品叶片于预冷的研钵中，加入4 ml预冷的提取介质（含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液），冰浴研磨匀浆，转入10 ml离心管，并用提取介质定容至
植物生理生化指标测定
小黑豆相关生理指标测定 1.表型变化：鲜重、株高、主根长和叶面积 鲜重：取处理好的植株，擦干根和叶表面水分，测量整株植物的重量，每个测6个重复。 株高：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度，记录，每个测6个重复。 主根长：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到主根最远点长度，记录，每个测6个重复。 叶面积：取处理好的植株，选择第二节段的叶片，测量叶面积，叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长，测叶片最窄处长度作为叶的宽，叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测6个重复。 2.总蛋白、可溶性糖、丙二醛（MDA）和H2O2含量测定 样品处理：取0.5g样品（叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净），速在液氮中冻存，在遇冷的研钵中加液氮研磨，然后加入1.5ml的Tris-HCl（pH7.4）抽提，将抽提液转移到2ml的EP管中，于4℃，12000rpm离心15min，取上清，保存在-20℃下，上清液可用于总蛋白、丙二醛（MDA）、可溶性糖和H2O2含量测定。 总蛋白测定（Bradford法）：样品反应体系（800ul H2O+200ul Bradford+5ul 样品），空白对照为（800ul H2O+200ul Bradford）。测定后带入标准曲线Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量，X代表OD595)，计算得出蛋白含量。 可溶性糖测定：样品反应体系（1ml蒽酮+180ul ddH2O+20ul样品提取液）；空白对照（1ml蒽酮+180ul ddH2O），测定OD625后带入标准曲线：Y=0.0345X+0.0204(Y代表OD625，X代表可溶性糖含量（ug）) 蒽酮配方：称取100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸+30mlH2O）.注意：浓硫酸加入水中时，一点一点递加，小心溅出受伤。 丙二醛（MDA）测定：在酸性和高温条件下，丙二醛可与硫代巴比妥（TBA）反应生成红棕色的3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮，在532nm处有最大吸收波长，但该反应受可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收，但其最大吸收波长在450nm处。采用双组分分光光度法，可计算出MDA含量。MDA的计算公式为：MDA（umol/L）=6.45OD532-0.56OD450. 反应体系为：400ul 0.6%TBA+350ul H2O+50ul样品，80℃水浴10min后，测OD532和OD450。对照用Tris-HCl. 0.6%TBA配方：称取硫代巴比妥0.6g，溶于少量1M NaOH中，待其完全溶解后用10%TCA（称取10gTCA三氯乙酸，溶于100ml蒸馏水中，待其溶解即可）定容至100ml。 H2O2测定（二甲酚橙法）：样品反应体系（82ul溶液A+820ul溶液B （A:B=1:10）+150ul样品提取液），30℃水浴30min，测OD560。标准曲线为:Y=0.01734X-0.0555(Y代表OD560，X代表H2O2含量)
植物生理生化指标测定(精)
小黑豆相关生理指标测定 1. 表型变化:鲜重、株高、主根长和叶面积 鲜重 :取处理好的植株,擦干根和叶表面水分,测量整株植物的重量,每个测 6个重复。 株高 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度,记录,每个测6个重复。 主根长 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到主根最远点长度,记录,每个测6个重复。 叶面积 :取处理好的植株,选择第二节段的叶片,测量叶面积,叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长, 测叶片最窄处长度作为叶的宽, 叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测 6个重复。 2. 总蛋白、可溶性糖、丙二醛(MDA 和 H2O2含量测定 样品处理:取 0.5g 样品(叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净 ,速在液氮中冻存,在遇冷的研钵中加液氮研磨,然后加入 1.5ml 的 Tris-HCl (pH7.4 抽提, 将抽提液转移到 2ml 的 EP 管中, 于 4℃, 12000rpm 离心 15min , 取上清, 保存在 -20℃下,上清液可用于总蛋白、丙二醛(MDA 、可溶性糖和 H2O2含量测定。 总蛋白测定(Bradford 法 :样品反应体系(800ul H2O+200ul Bradford+5ul样品 , 空白对照为(800ul H2O+200ul Bradford 。测定后带入标准曲线 Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量, X 代表 OD595 ,计算得出蛋白含量。 可溶性糖测定:样品反应体系(1ml 蒽酮 +180ul ddH2O+20ul样品提取液 ; 空白对照 (1ml 蒽酮 +180ul ddH2O , 测定 OD625后带入标准曲线 : Y=0.0345X+0.0204(Y代表 OD625, X 代表可溶性糖含量(ug
植物生理指标检测方法
植物组织中可溶性糖含量的测定 在作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖 一、原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。 二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 任何植物鲜样或干样。 （二）试剂 1. 80 ％乙醇。 2. 葡萄糖标准溶液（100 μg/mL ）：准确称取100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）。 3 ．蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL 中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周。 （三）仪器设备 分光光度计，分析天平，离心管，离心机，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管（ 5 、 1 、0.5 mL ），剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸。 三、实验步骤 1. 样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ～ 1.0 g （或干样粉末 5 ～100 mg ），放入大试管中，加入15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min ，取出冷却，过滤入100 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2. 标准曲线制作取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按表 24-1 加入各试剂。 表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量 将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10 min ，取出冷却，在620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（ μg ）为横坐标绘制标准曲线。 3 ．样品测定取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ，同以上操作显色测定光密度。重复 3 次。
常用量具的使用方法
常用量具的使用方法 一、游标卡尺： 普通游标卡尺 数显卡尺 游标卡尺游标卡尺是工业上常用的测量长度的仪器，它由尺身及能在尺身上滑动的游标组成，如图2.3-1所示。若从背面看，游标是一个整体。游标与尺身之间有一弹簧片（图中未能画出），利用弹簧片的弹力使游标与尺身靠紧。游标上部有一紧固螺钉，可将游标固定在尺身上的任意位置。尺身和游标都有量爪，利用内测量爪可以测量槽的宽度和管的内径，利用外测量爪可以测量零件的厚度和管的外径。深度尺与游标尺连在一起，可以测槽和筒的深度。
尺身和游标尺上面都有刻度。以准确到0.1毫米的游标卡尺为例，尺身上的最小分度是1毫米，游标尺上有10个小的等分刻度，总长9毫米，每一分度为0.9毫米，比主尺上的最小分度相差0.1毫米。量爪并拢时尺身和游标的零刻度线对齐，它们的第一条刻度线相差0.1毫米，第二条刻度线相差0.2毫米，……，第10条刻度线相差1毫米，即游标的第10条刻度线恰好与主尺的9毫米刻度线对齐，如图2.3-2。 当量爪间所量物体的线度为0.1毫米时，游标尺向右应移动0.1毫米。这时它的第一条刻度线恰好与尺身的1毫米刻度线对齐。同样当游标的第五条刻度线跟尺身的5毫米刻度线对齐时，说明两量爪之间有0.5毫米的宽度，……，依此类推。 在测量大于1毫米的长度时，整的毫米数要从游标“0”线与尺身相对的刻度线读出。 游标卡尺的使用 用软布将量爪擦干净，使其并拢，查看游标和主尺身的零刻度线是否对齐。如果对齐就可以进行测量：如没有对齐则要记取零误差：游标的零刻度线在尺身零刻度线右侧的叫正零误差，在尺身零刻度线左侧的叫负零误差（这件规定方法与数轴的规定一致，原点以右为正，原点以左为负）。 测量时，右手拿住尺身，大拇指移动游标，左手拿待测外径（或内径）的物体，使待测物位于外测量爪之间，当与量爪紧紧相贴时，即可读数，如图2.3-3所示。
植物生理学实验指导
植物生理学实验指导主编胡君艳陈国娟张汝民 浙江农林大学植物学科 2013年8月
实验一植物组织水势的测定 水势与渗透势的测定方法可分为3大类：⑴液相平衡法，包括小液流法、重量法测水势，质壁分离法测渗透势；⑵压力平衡法（压力室法测水势）；⑶气相平衡法，包括热电偶湿度计法、露点法等。 Ⅰ小液流法 【实验目的】 了解采用小液流法测定植物组织水势的方法。 【实验原理】 水势表示水分的化学势，像电流由高电位处流向低电位处一样，水从水势高处流向低处。植物体细胞之间，组织之间以及植物体和环境间的水分移动方向都由水势差决定。 当植物细胞或组织放在外界溶液中时，如果植物的水势小于溶液的渗透势（溶质势），则组织吸水而使溶液浓度变大；反之，则植物细胞内水分外流而使溶液浓度变小；若植物组织的水势与溶液的渗透势相等，则二者水分保持动态平衡，所以外部溶液浓度不变，而溶液的渗透势即等于所测植物的水势。可以利用溶液的浓度不同其比重也不同的原理来测定试验前后溶液的浓度变化，然后根据公式计算渗透势。 【实验器材与试剂】 1.实验材料：八角金盘、大叶黄杨等。 2.实验试剂：0.05、0.10、0.15、0.20、0.30mol·L-1蔗糖溶液、甲烯蓝溶液。 3.实验仪器：试管10支、微量注射器、镊子、打孔器、垫板。 【实验步骤】 1.取干燥洁净的试管5支为甲组，标记1~5，各支中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液5mL。另取5支干燥洁净的试管为乙组，标记1'~5'，各试管中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液2ml。 2.取待测样品的功能叶数片，用打孔器打取小圆片约50片（避开叶脉），混合均匀。用镊子分别夹入10个小圆片到乙组试管中。并使叶圆片全部浸没于溶液中。放置约30~60min，为加速水分平衡，应经常摇动试管。 3.到时间后，在乙组试管中加入甲烯蓝溶液1~2滴，并用微量注射器取各试管糖液少许，将注射器插入对应浓度甲组试管溶液中部，小心地放出一滴蓝色溶液，并观察蓝色小液流的
生理指标测定
生理指标测定_16种 1、冻害指数——3~5株观察形态 【４种常绿水生鸢尾抗寒性的初步研究】张京，2012 李刚，姜卫兵，翁忙玲，等．木兰科６种常绿树幼苗抗寒性的初步研究［Ｊ］．园艺学报，２００７，３４（３）：７８３－７８６． 描述叶色变化： 在最冷月( 2月中旬) , 所有供试树种均有不同程度的冻害表现, 乐东拟单性木兰受冻害最轻,只有部分植株的少量叶片有些许水渍状, 大部分植株完好无损, 冻害指数为041, 基本不受冻害;阔瓣含笑也长势良好, 有少部分叶片出现褐色水渍状, 冻害指数为14, 受轻度冻害; 金叶含笑受到了中度水平的冻害, 部分植株的叶片整个叶面呈现红褐色水渍状, 冻害指数为25; 红花木莲、醉香含笑和观光木受到了重度冻害, 大多数植株的部分叶片呈焦黄、褐色脱落, 有的整个植株呈萎蔫状,长势非常差, 冻害指数分别为3.2、3.9、4.3. 2、相对含水量 叶片相对含水量采用饱和称重法［21］测定。选取各处理部位一致、成熟完好的叶片迅速称其鲜重，再用蒸馏水浸泡8~24 h，使组织吸水达到饱和状态，取出后吸去表面水后立即称其饱和重，然后在105 ℃下杀青30min，在80 ℃下烘干至恒重（1h~24h），放在干燥器中冷却，称其烘干重。根据公式计算:LRWC( %) = [ (鲜重－干重) /(饱和重－干重) ] × 100%
3、光合参数（光合仪测定） 光合速率、CO2浓度、光合有效辐射、叶绿素 或用95%乙醇浸泡法，浸泡4~5d，测定叶绿素。《植物生理生化实验原理和技术》 4、膜质过氧化：相对电导率（略）、MDA MDA（丙二醛）的测定 试剂：三氯乙酸10% （TCA 溶液）：称取100g溶于1L 蒸馏水中； 0.6％硫代巴比妥酸溶液（6%TBA）：1.8g溶于300ml TCA 溶液中（加热溶解） 称取植物叶片0.3克, 先加入2ml TCA和少量石英砂研磨至匀浆，再加入4ml 10%三氯乙酸(TCA)进一步研磨（总体积为6ml），然后以4000g离心10min, 取上清液待测。吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水)，加入2ml 0.6% TBA，混匀物于沸水浴上反应15分钟，迅速冷却后再离心(在冰箱中冷却较快)。取上清液测定在532，600和450nm波长下比色。 公式C MDA (nmol L-1)＝[(A532－A600)-0.0571×(A450-A600)]/0.155计算MDA量（排除多糖干扰），用每克干（鲜）重中MDA的量表示MDA的含量，单位μmol g-1干（鲜）重或nmol g-1干（鲜）重。 1、含量计算 双组分光光度计法：已知蔗糖与TBA反应产物在450nm和532nm波长下的比吸系数分别为 85.40,7.40；MDA与 TBA显色反应产物在450nm波长下无吸收，其吸收系数为0，532nm下比吸 收系数为155，根据双组分光光度计法建立方程组，计算公式如下： C 1（mmol/L）=11.71 D 450 C 2 =[6.45(D 532 —D 600 ) — 0.56 D 450 ]X提取液总体积/测定时用的提 取液体积*样品鲜重 C 1:可溶性糖的浓度, C 2 为MDA的浓度, D 450 D 532 D 600 分别代表450,532,600nm下的消光度值. 参：Brege J G.Microsomal lipid peroxiodation. Methods in Ezymmology.1978,52:302-306 J.G. Buege and S.D. Aust, Microsomal lipid peroxidation. Methods Enzymol.52(1978), pp. 302–306. 注: 沸水浴时,可使用小试管,然后上部用保鲜膜包扎.(如橡皮筋) 附4.1 MDA、可溶糖含量—硫代巴比妥酸加热显色法 【原理】植物遭遇逆境胁迫或衰老过程中，由于自由基、活性氧的积累引起膜脂过氧化，产生脂质自由基，进一步诱发膜脂连续过氧化并导致蛋白质交联变性，而引起细胞损伤或死亡。MDA 是膜脂过氧化的最终产物，通过其含量的测定可了解膜脂氧化伤害的程度，比较不同植物抗逆性的差异。 在酸性和高温条件下，MDA可与硫代巴比妥酸（TBA）反应，生成红棕色的产物三甲川（3，5，5-三甲基恶唑2，4-二酮）。该产物在532nm处有最大吸收峰，测定反应产物在532nm处的光密度值，可计算出MDA含量。但植物组织中的可溶性糖亦与TBA产生颜色反应，其产物对532nm 光的吸收干扰测定。采用双组分光光度法及其计算式，可排除干扰，计算出MDA的含量。 【器材】分光光度计离心机水浴锅研钵剪刀试管
植物生理学实验指导
植物生理学实验指导 Prepared on 24 November 2020
植物生理学实验指导
目录
植物材料的采集、处理与保存 植物生理实验使用的材料非常广泛，根据来源可划分为天然的植物材料（如植物幼苗、根、茎、叶、花等器官或组织等）和人工培养、选育的植物材料（如杂交种、诱导突变种、植物组织培养突变型细胞、愈伤组织、酵母等）两大类；按其水分状况、生理状态可划分为新鲜植物材料（如苹果、梨、桃果肉，蔬菜叶片，绿豆、豌豆芽下胚轴，麦芽、谷芽，鳞茎、花椰菜等）和干材料（小麦面粉，玉米粉，大豆粉，根、茎、叶干粉，干酵母等）两大类，因实验目的和条件不同，而加以选择。 植物材料的采集和处理，是植物生理研究测定中的重要环节。在实际工作中，往往容易把注意力集中在具体的仪器测定上，而对于如何正确地采集和处理样品却不够注意，结果导致了较大的实验误差，甚至造成整个测定结果的失败。因此，必须对样品的采集、处理与保存给予足够的重视。 一、原始样品及平均样品的采取、处理 植物生理研究测定结果的可靠性（或准确性），首先取决于试材对总体的代表性，如果采样缺乏代表性，那么测定所得数据再精确也没有意义。所以，样品的采集除必须遵循田间试验抽样技术的一般原则外，还要根据不同测定项目的具体要求，正确采集所需试材。目前，随着研究技术的不断发展，应该不断提高采样技术的水平。 在作物苗期的许多生理测定项目中都需要采集整株的试材样品，在作物中后期的一些生理测定项目中，如作物群体物质生产的研究，也需要采集整株的试材样品，有时虽然是测定植株的部分器官，但为了维持器官的正常生理状态，也需要进行整株采样。 除研究作物群体物质生产外，对于作物生理过程的研究来说，许多生理指标测定中的整株采样，也只是对地上部分的采样，没有必要连根采样，当然对根系的研究测定例外。采样时间因研究目的而不同，如按生育时期或某一特殊需要的时间进行。除逆境生理研究等特殊需要外，所取植株应是能代表试验小区正常生育无损伤的健康植株。
测量工具及其使用方法
第二章测量工具及其使用方法 第一节测量工具 量具或检验的工具，称为计量器具，其中比较简单的称为量具；具有传动放大或细分机构的称为量仪。 一般的测绘工作使用的量具有： 简易量具：有塞尺、钢直尺、卷尺和卡钳等，用于测量精度要求不高的尺寸。 游标量具：有游标卡尺、高度游标卡尺、深度游标卡尺、齿厚游标卡尺和公法线游标卡尺等，用于测量精密度要求较高的尺寸。 千分量具：有内径千分尺、外径千分尺和深度千分尺等，用于测量高精度要求的尺寸。 平直度量具：水平仪，用于水平度测量。 角度量具：有直角尺、角度尺和正弦尺等，用于角度测量。 根据我们教学的具体情况，这里仅简单介绍一下钢直尺、卡钳、游标卡尺的使用方法。图2-1为几种常用的测量工具。 （1）钢直尺 （3）游标卡尺（4）外卡钳 （2）千分尺 （5）内卡钳 图2-1 测量工具 一、钢直尺 使用钢直尺时，应以左端的零刻度线为测量基准，这样不仅便于找正测量基准，而且便
于读数。测量时，尺要放正，不得前后左右歪斜。否则，从直尺上读出的数据会比被测的实际尺寸大。 用钢直尺测圆截面直径时，被测面应平，使尺的左端与被测面的边缘相切，摆动尺子找出最大尺寸，即为所测直径。 二、卡钳 凡不适于用游标卡尺测量的，用钢直尺、卷尺也无法测量的尺寸，均可用卡钳进行测量。 卡钳结构简单，使用方便。按用途不同，卡钳分为内卡钳和外卡钳两种：内卡钳用于测量内部尺寸，外卡钳用于测量外部尺寸。按结构不同，卡钳又分为紧轴式卡钳和弹簧式卡钳两种。 卡钳常与钢直尺，游标卡尺或千分尺联合使用。测量时操作卡钳的方法对测量结果影响很大。正确的操作方法是：用内卡钳时，用母指和食指轻轻捏住卡钳的销轴两侧，将卡钳送入孔或槽内。用外卡钳时，右手的中指挑起卡钳，用母指和食指撑住卡钳的销轴两边，使卡钳在自身的重量下两量爪滑过被测表面。卡钳与被测表面的接触情况，凭手的感觉。手有轻微感觉即可，不宜过松，也不要用力使劲卡卡钳。 使用大卡钳时，要用两只手操作，右手握住卡钳的销轴，左手扶住一只量爪进行测量。 测量轴类零件的外径时，须使卡钳的两只量爪垂直于轴心线，即在被测件的径向平面内测量。测量孔径时，应使一只量爪于孔壁的一边接触，另一量爪在径向平面内左右摆动找最大值。 校好尺寸后的卡钳轻拿轻放，防止尺寸变化。把量得的卡钳放在钢直尺、游标卡尺或千分尺上量取尺寸。测量精度要求高的用千分尺，一般用游标卡尺，测量毛坯之类的用钢直尺校对卡钳即可。 三、游标卡尺 游标卡尺在使用前应检查卡尺外观，轻轻推、拉尺框检查各部位的相互作用、两测量面的光洁程度。移动游标，使两量爪测量面闭合，观察两量爪测量面的间隙（精度为0.02毫米卡尺的间隙应小于0.006毫米；精度为0.05毫米和0.1毫米卡尺的间隙应小于0.01毫米），然后校对“0”位。校对“0”位时，无论游标尺是否紧固，“0”位都应正确。当紧固或松开游标尺时，“0”位若发生变化，不要使用。 游标卡尺的正确使用方法： 1．测量外尺寸时，应先把量爪张开比被测尺寸稍大；测量内尺寸时，把量爪张开得比被测尺寸略小，然后慢慢推或拉动游标，使量爪轻轻接触被测件表面。（图2-2 ）
常用的测绘量具以及测量零件尺寸的方法
常用的测绘量具以及测量零件尺寸的方法
1. 测量零件尺寸时常用的测量工具 测量尺寸常用量具有：钢板尺、外卡钳和内卡钳。测量较精确的尺寸，则用游标卡尺，如图1－3所示。 2. 常用的测量方法 (1) 测量长度尺寸的方法 一般可用钢板尺或游标卡尺直接测量，如图 1－4所示。 (2) 测量回转面直径尺寸的方法 用内卡钳测量内径，外卡钳测量外径。测量时，要把内、外卡钳上下、前后移动，测得最大值为其直径尺寸，测量值要在钢板尺上读出。遇到精确的表面，可用游标卡尺测量，方法与用内外卡钳相同，如图 1－5 a、b、c、d 所示。 (3) 测量壁厚尺寸 一般可用钢板尺直接测量，若不能直接测出，可用外卡钳与钢板尺组合，间接测出壁厚，如图1-6所示。 (4) 测量中心高 利用钢板尺和内卡钳可测出孔的中心高，如图 1－7 所示。也可用游标卡尺测量中心高。 (5) 测量孔中心距 可用内卡钳、外卡钳或游标卡尺测量，如图 1－8 所示。
(6) 测量圆角 一般可用圆角规测量，如图 1－9 是一组圆角规，每组圆角规有很多片，一半测量外圆角，一半侧量内圆角，每一片标着圆角半径的数值。测量时，只要在圆角规中找到与零件被测部分的形状完全吻合的一片，就可以从片上得知圆角半径的大小。 (7) 测量螺纹 测量螺纹需要测出螺纹的直径和螺距。螺纹的旋向和线数可直接观察。对于外螺纹，可测量外径和螺距，对于内螺纹可测量内径和螺距。测螺距可用螺纹规测量，螺纹规是由一组带牙的钢片组成，如图 1－10所示，每片的螺距都标有数值，只要在螺纹规上找到一片与被测螺纹的牙型完全吻合，从该片上就得知被测螺纹的螺距大小。然后把测得的螺距和内、外径的数值与螺纹标准核对，选取与其相近的标准值。 《画法几何及机械制图》零件测绘实验教程 一、课程所属类型及服务专业 课程属于技术基础课，服务机械类各专业。 二、实验的目的和要求 1实验目的： 通过对轴、盘盖、箱体三类零件的测绘以及对减速箱拆卸，了解零件测绘的一般步骤，掌握其测绘的常用方法，熟悉量具的选用和使用。进一步巩固零件的视图选择和表达方法，以及查表计算等有关知识。 2实验要求： 对不同形状的轴、盘盖、箱体三类零件进行测绘，在方格纸上绘制草图，根据其的大小和复杂程度选择合适的图幅，绘制零件图，并填写实验报告。 三、学时分配及实验项目表
植物生理测定方法
1 叶圆片放氧活性的测定 原理：同光合速率一样，叶片光合放氧速率是反应光合能力的一项重要指标，其大小本质上取决于PSII活性的大小。 称取2～3 cm2 叶片约0.2g，用打孔器2-3 mm2的小圆片后放入含有200mmol Trincine-NaOH，100 mmol NaHCO3，pH7.0 的缓冲液中，并用注射器抽真空1min 左右，使缓冲液充分渗入到叶肉细胞里，最后将叶圆片连同缓冲液转移至极谱氧电极(Hansatech，英国)的反应杯里测定放氧活性，测定在20℃及800μmol.m-2.s-1光强下进行，每个样品测定3个重复。 2 核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶（RuBPCase）活性测定 原理：Rubiscase是光合作用中最重要的关键酶，它既催化RuBP羧化反应，又催化RuBP加氧反应，对植物的光合作用具有重要的调控作用。 参照李合生等[57]的方法，称取0.5g叶片加入匀浆液6ml（100mmol/L Tris-HCl 缓冲液pH7.8，10 mmol/L MgCl2，1.0 mmol/L EDTA，20 mmol/L 2-巯基乙醇，2%聚乙烯吡咯烷酮）冰浴研磨匀浆，14000g、4℃离心20min，上清液作酶液活性分析。反应液总体积为200μL，内含反应介质100mmol/L Tris- HCI 缓冲液(pH7.8)、0.4mmol/L EDTA、12 mmol/L MgCl2）93.3μL、50 mmol/L ATP、50mmol/L 磷酸肌酸，200mmol/L NaHCO3各13.3μL，160 u/ml 磷酸肌酸激酶，160 u/ml 磷酸甘油酸激酶，160 u/ml 磷酸甘油醛脱氢酶各6.7μL，5mM/L NADH，蒸馏水各13.3μL，RuBPCase提取液6.7μL 30℃恒温水浴10 min, 最后加入9 mmol/L RuBP 6.7μL反应开始，用Theymo1500型酶标仪96孔板测定340 nm下光吸收的变化。以ΔA340·min-1下降0.01为l U，每个样品测定3个重复。
各种尺寸测量量具的使用方法.
量具的使用方法 目录 第一章钢直尺、内外卡钳及塞尺 (3) 一钢直尺 (3) 二内外卡钳 (3) 三塞尺 (6) 第二章游标读数量具 (8) 一游标卡尺的结构型式 (8) 二游标卡尺的读数原理和读数方法 (9) 三游标卡尺的测量精度 (11) 四游标卡尺的使用方法 (12) 五游标卡尺应用举例 (14) 六高度游标卡尺 (16) 七深度游标卡尺 (16) 八齿厚游标卡尺 (17) 第三章螺旋测微量具 (19) 一外径百分尺的结构 (19) 二百分尺的工作原理和读数方法 (21) 三百分尺的精度及其调整 (22) 四百分尺的使用方法 (23) 五百分尺的应用举例 (24) 六杠杆千分尺 (25) 七内径百分尺 (25) 八内测百分尺 (27) 九三爪内径千分尺 (27) 十公法线长度千分尺 (27) 十一壁厚千分尺 (28) 十二板厚百分尺 (28) 十三尖头千分尺 (28) 十四螺纹千分尺 (29) 十五深度百分尺 (29) 十六数字外径百分尺 (29) 第四章量块 (30)
一量块的用途和精度 (30) 二成套量块和量块尺寸的组合 (30) 三量块附件 (31) 第五章指示式量具 (33) 一百分表的结构 (33) 二百分表和千分表的使用方法 (33) 三杠杆百分表 (37) 四杠杆百分表和千分表的使用方法 (37) 五内径百分表 (40) 六内径百分表的使用方法 (41) 第六章角度量具 (42) 一万能角度尺 (42) 二游标量角器 (43) 三万能角尺 (44) 四带表角度尺 (44) 五中心规 (45) 六正弦规 (45) 七车刀量角台 (47) 第七章水平仪 (49) 一条式水平仪 (49) 二框式水平仪 (50) 三光学合像水平仪 (53) 第八章量具的维护和保养 (55) 参考文献 (56)
植物生理指标
植物生理指标 1、植物酶液提取： 1)PVPP(固体,PVP单体与金属元素结合) 酚类吸附剂，酚的羟基与蛋白质 的羰基形成氢键，醌导致蛋白质聚合。或polyclarAT（Polyclar-AT is insoluble PVP, also called as PVPP (PolyVinyl PolyPyrrolidine). It binds phenols etc more efficiently than PVP and is easily removable by filtration or a low speed spin）去除酚的毒害防止醌 颜色干扰。PVP的肽键中的氧与酚羟基上的质子牢固结合，防止酚与酶 中肽键结合，保护了酶。 2)母液制备：0.1mol/L二硫苏糖醇DTT: 100mg至微量离心管，+650ul 水 0.5mo/L EDTA : 93gEDTANa,10g NaOH,定容到500ml 10mg/ml BSA：100mgBSA于9.5ml 水中 2、可溶性总糖测定（蒽酮比色法） （1）原理：糖+硫酸—糠醛，其与蒽酮形成绿色络合物，620nm下显色。本实验采用浓硫酸，倒入水中产生大量热，促进反应发生。 （2）标准曲线绘制：取略大于0.01g的葡萄糖，105度烘干至恒重，取0.01g 定容至100ml，配成100ug/ml的溶液。取200mg蒽酮，溶于100ml 浓硫酸，冷却，保存于棕色瓶。（注意：不需定容，量取100ml硫酸倒入烧杯即可，定容混匀时产气热溅出。注意硫酸中是否存在杂质。蒽酮非常敏感，不能用勺等挖取，只能直接倒，否则就会污染。溶液配后呈亮黄色，放置 620nm. 实验结果：实际上并不理想，因abs均偏低，可试将标糖浓度适当升高。 葡萄糖含量ug 20 40 60 80 100 abs 0.09 0.169 0.259 0.332 0.427
植物生理学实验详解
一植物组织中ETH（乙烯）释放量的测定 测定原理：ACC是乙烯合成的直接前体，为了更好地了解乙烯对植物的调节作用，有必要测定植物中ACC的含量，在冷却的Hg+存在下，NaClO专一地使ACC转化成乙烯。ACC：1-氨基环丙烷-1-羧酸 测定中气相色谱仪用的是氢火焰检测器FID。 色谱仪包括固定相和流动相。由于固定相和流动相对各种物质的吸附或溶解能力不同，因此各物质的分配系数不一样。当待测样（含ETH混合气体）加入固定相以后，不断通以流动相（通常为氮气、氢气）待测物不断再分配，最后按照分配系数大小顺序依次被分离，并进入检测系统被检测，检测信号的大小，反映出物质含量的多少，在记录仪上呈现色谱图。判断气相色谱仪氢火焰检测器是否点燃的3种方法？如何判断检测器已工作？ 1、将不锈钢镊子接触到检测器的喷扣处，若镊子上有水珠证明氢气已被点燃； 2、根据记录笔的位置来判断； 3、微电流放大器的“引燃开关”切换“引燃”时，检测器如发出扑声火焰已被点燃。 结果分析：经冷冻的苹果ETH释放速率低于常温的乙烯释放速率。经低温处理ACC合成酶的形成受到损伤和影响，从而降低乙烯的合成与释放。 3大温度3大气流量：基线成一直线表明稳定了 柱温80度进样器温度120度检测器温度140度 N2 流量35微升每分钟400 H2 流量45 微升每分钟55千帕空气流量350 微升每分钟40 千帕 二植物组织中脂肪氧化酶活力测定 原理根据基质浓度一定，反应体系中溶解氧浓度的变化与酶活力大小呈线性相关原理进行测定。LOX氧化多元不饱和脂肪酸生成具有共轭双键的过氧化物时消耗氧气，溶液中氧浓度的减少速率与酶活力大小成正比，用氧电极可精确的测定酶活力。 结果：经过干旱处理的小麦组织中LOX活力低（受干旱条件的诱导LOX基因的表达） 注意事项：1测定时，维持温度恒定，氧电极对温度变化非常敏感; 2 反应杯中不应有气泡，否则会造成信号不稳 3 进行试验时要保持磁转子的转动，以平衡氧气浓度 4 电极使用一段时间后，在阳极上形成一层氧化膜，使电极的灵敏度下降，需要用清洁剂清洁阳极。 三半伤害温度的求算 1 以伤害度为纵坐标，温度为横坐标，制作曲线，50%伤害对应的温度即半伤害温度； 2 以Logistic生长曲线方程拟合Y=K/(1+Ae-BT) Y 伤害度（相当于胁变）K 最大外渗量 T 温度（相当于胁强）A，B 常数 据Logistic方程，以Ln（（K/Y）-1）为纵坐标，以T为横坐标作图，的一直线，直线与横轴交点即半伤害温度。 半伤害温度的生理意义，半伤害温度通常可用来表示植物对高温或低温抗性的大小。在高温伤害情况下，若半伤害温度高，说明对高温伤害抗性强；在低温伤害时，则半伤害温度越低，植物对低温伤害抗性强。对于其他逆境，具有相应的生理意义。 但是对于高温伤害，同样以Ln（（K/Y）-1）为纵坐标，以T为横坐标作图，发现做出的不是直线而是S型曲线。 四蒸汽压渗透压计测植物组织渗透势蒸汽压渗透压计的工作原理 1 原理对于一种溶液来说，溶质颗粒数的增加改变了溶剂分子的自由度，导致溶剂分子主要特征的改变。这些溶液特征的相对变化与溶液中粒子的增加量呈线性相关，所以称他们为
常见生理测定用方法-2017-5-20-新版
常见生理指标测定用方法 ――SOD、POD、CAT、可溶性蛋白、叶绿素、电导率、可溶性糖、MDA、脯氨酸、叶片含水量 SOD酶液可用于SOD、POD、CAT、可溶性蛋白指标的测定，即POD、CAT、可溶性蛋白三个指标不用再取叶片。 SOD酶液的提取。每个重复称取去叶脉的叶片组织约0.25g。剪碎放入预先冷却好的研钵中，加入少量(2-3 ml，因总体积只有9 ml，还要冲洗2次)的磷酸缓冲液(0.05 mol/L，PH=7.8)（不加PVP）研磨成匀浆，然后倒入10 ml的带刻度的塑料离心管中（预先洗好晾干），并用此磷酸缓冲液定容到9 ml。在3000转，4℃高速离心机（提前4℃预冷一下，设好4℃后提前空转运行一下）中离心15分钟，将提取的酶液放入置有冰袋的塑料盒中，低温保存，备用。宜用酶液将4个指标当天测完，切记。 实验一氮蓝四唑(NBT)法测定SOD活力（优先1-用材0.25 g） 1.实验原理 超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶，它的反应产物可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。 本实验依据超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560 nm处有最大吸收。而SOD可清除超氧阴离子自由基，从而抑制甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。 2. 材料、仪器设备及试剂 （一）材料 叶片。 （二）仪器设备 高速台式离心机，分光光度计，微量进样器（要注意测试一下是否准确，用玻璃移液管来对比），荧光灯（反应试管处照度为4000 lx），我们用的光照培养箱，33%的光照下，上数第二个架子中间位置为4000 lx。试管。 （三）试剂 （1）0.05 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.8）。 注：PBS（磷酸缓冲液）配制