由金黄色葡萄球菌引起食物中毒的实验室检测分析
由金黄色葡萄球菌引起食物中毒的实验室检测分析
发表时间：2013-11-01T10:15:10.420Z 来源：《中外健康文摘》2013年第29期供稿作者：冼桂江郭永强蔡周梅彭美薇盘珍梅
[导读] 葡萄球菌在自然界中广泛存在，食品从原料、生产加工、藏运输、流通经营、到消费者食用，都有可能受到污染。
冼桂江郭永强蔡周梅彭美薇盘珍梅 (广西梧州市疾病预防控制中心 543002)
【中图分类号】R446 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）29-0223-02
【摘要】目的调查本次食物中毒的原因，为临床诊断和现场处理提供可靠的依据。方法依据GB/T4789-2010、GB17012-1997、
WS/T8、T13、T80、T81、T82-1996 等方法对样品进行致病菌检测。结果 3份腹痛、腹泻病人的肛拭子标本中均检出金黄色葡萄球菌，3份可疑食品中有一份检出金黄色葡萄球菌。结论这是一起由金黄色葡萄球菌感染引起的食物中毒。
【关键词】食物中毒实验室检测金黄色葡萄球菌
1 调查资料
梧州市某大酒店200多名员工于2012年6月11日11时左右，在单位食堂集体进午餐，其中9名员工进食了同事从广州带回的卤鸭食品（封口塑料袋包装），中午13时30分左右，该9名员工中有5名出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状，其中3名症状较重的患者到当地医院就珍；其他未食卤鸭食品的员工未出现上述症状。
2 实验室检测
2.1 标本来源
2.1.1 采集3名到医院就诊的患者肛拭子标本，置C-B运送培养基中保存。
2.1.2 在酒店现场采集患者吃剩的周黑鸭脖、绝味鸭脖、绝味鸭翅共3份可疑食品。
2.1.3 上述标本采集完毕后均在4h内送达实验室进行检测。
2.2 培养基与试剂
各种常见食物中毒致病菌的增菌培养基、分离及鉴定培养基、各种生化鉴定管均由北京陆桥生物技术有限公司生产，各种显色培养基由上海科玛嘉公司生产，沙门氏菌、志贺氏菌和致泻性大肠埃希氏菌诊断血清由宁波天润生物药业有限公司生产，兔血浆由青岛海博生物公司生产，以上培养基与试剂均在有效期内使用。
2.3 检测方法
参照GB/T4789-2010《食品卫生微生物学检验》、GB17012-1997感染性腹泻的诊断标准和处理原则、WS/T8-1996病原性大肠埃希氏菌食物中毒诊断标准及处理原则、WS/T13、T80、T82-1996 沙门氏菌、葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽胞杆菌等致病菌食物中毒诊断及处理原则。
2.4 病原菌分离
2.4.1病人肛拭子把病人肛拭子直接划到选择性平板分离培养后，用生理盐水把肛拭子冲洗稀释，分别接种到各种致病菌增菌培养基中作增菌培养，6-24h后划选择性平板作分离培养。
2.4.2食品样品用相应致病菌的增菌液225ml，分别取25g样品作1:10稀释后进行增菌培养，6-24h后划选择性平板进行分离培养。
2.4.3挑选可疑致病菌从所有直接和增菌后接种到各种选择性培养基平板上，排除了沙门氏菌、志贺氏菌、致泻性大肠埃希氏菌、副溶血弧菌、蜡样芽胞杆菌等。挑取在B-P平板上直径在2-3mm，灰黑色、边缘淡色、周围有一混浊带、外层有一透明圈的菌落进行革兰氏染色镜检，并接种至营养琼脂平板纯化后进行生化试验。
2.4.4生化鉴定试验挑取G+球菌的纯化菌株，接种至脑心浸液肉汤培养24h后，取0.3ml加入兔血浆中混匀，同时做金黄色葡萄球菌标准阳性菌株对照，表皮葡萄球菌阴性菌株对照，置36±1℃温箱。经1h后观察，样品菌株和标准阳性菌株的血浆凝固酶均呈现凝固，阴性菌株的血浆凝固酶在6 h内都不出现凝固。另取样品菌株、阳性菌株和阴性菌株的肉汤菌液分别在2份甘露醇生化管中各滴加3d，分别作需氧和厌氧培养24h，结果样品菌株、阳性菌株均发酵甘露醇，阴性菌株不发酵甘露醇。
2.4.5肠毒素试验对检出的金黄色葡萄球菌菌株送区CDC检测，肠毒素试验均为阳性，其毒素型均为B型。
3 结果
3.1 3份患者的肛拭子标本均检出金黄色葡萄球菌，未检出其它致病菌。
3.2 3份可疑卤鸭食品中，绝味鸭脖检出金黄色葡萄球菌，未检出其它致病菌。其余2份可疑卤鸭食品未检出致病菌。
3.3根据本次病患者的临床表现、潜伏期、流行病学特点，以及实验室病原菌分离及鉴定结果，确认这是一起由金黄色葡萄球菌污染“绝味鸭脖”引起的食物中毒事件。[1]
4 讨论
葡萄球菌在自然界中广泛存在，食品从原料、生产加工、藏运输、流通经营、到消费者食用，都有可能受到污染。金黄色葡萄球菌是国内外最常见的细菌性食物中毒的重要致病菌之一。[2]在我国，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒约占细菌性食物中毒事件的25%。[3-4]该菌引起中毒的主要因子是菌体产生的耐热肠毒素，金黄色葡萄球菌在含水份、蛋白质丰富的食品，20℃以上，通风不良的环境中容易产生肠毒素。卤鸭制品蛋白质丰富，受到金黄色葡萄球菌污染时，用塑料袋包装，在保温保湿的环境很容易产生肠毒素，人们直接食用后极易引起急性中毒。
本起事件从可疑食品和病人肛拭子中都分离出金黄色葡萄球菌，且肠毒素均为阳性，其毒素型均为B型，证实病人是因为食用了该食品而引起的食物中毒。提示，为预防和减少食物中毒的发生，在食用该类的熟食肉制品时，先作加热处理足够的时间；不宜蒸煮的，最好用微波炉进行加热消毒处理，以便杀灭污染食品的致病菌及其产生的毒素。
2011年以来，我市在食品安全风险食源性致病菌监测中，均有检出金黄色葡萄球菌。2011年主要在果蔬汁、豆制品、米面制品中检出共6株金黄色葡萄球菌；2012年主要在塑料袋包装的即食肉制品中检出了7株金黄色葡萄球菌，果蔬汁中检出2株金黄色葡萄球菌。其中肉制品、米面制品蛋白质的含量都非常丰富，而且水份含量高，金黄色葡萄球菌容易产生肠毒素，存在食物中毒的风险。
金黄色葡萄球菌引起的细菌性中毒和细菌性感染已经成为人们非常关注的突发公共卫生事件。为此，提醒食品安全监督执法部门应引
一起金黄色葡萄球菌引起食物中毒的调查报告
一起金黄色葡萄球菌引起食物中毒的调查报告 【摘要】目的：分析食物中毒的原因、性质和特征，探讨预防措施。方法：描述性分析这次食物中毒的流行病学和现场卫生学调查资料。结论：加强从业人员及大众卫生知识培训与销售店的卫生监督，控制食物中毒的发生。 【关键词】金黄色葡萄球菌；食物中毒 【文章编号】1004-7484（2014）04-1987-01 1 流行病学调查： 2013年7月26日8时30分，疾控中心接卫生局电话，县医院报告有5个食物中毒住院病例，立即组织食物中毒调查小组前往县医院进行调查。经调查任显军等住院5人是选营乡松木沟的一家人，（家长任显军，41岁；妻子隋淑琴，42岁；长女任静，17岁；次女任畅，5岁；长子任成茁，3岁）于7月25日18时许，在村小卖铺购买真空包装完好扒鸡一只，后回家立即开封食用，其他食物还有炒芹菜、咸菜和新蒸的米饭，共同就餐有6人，其中1人（任显军的同村亲属），因不吃肉而未食用扒鸡未发病，其他5人均食用了扒鸡，于20：30时起陆续出现以胃肠道症状为主的不适反应，主要表现为恶心、反复呕吐并伴有腹痛等症状。 2 临床表现：
5人症状均是恶心、呕吐、腹痛、腹泻、头晕、体温正常。腹泻5-7次，为稀便，临床诊断为食物引起中毒反应，进行了补液治疗，未用抗生素，次日有明显好转。 3 实验室检测： 3.1标本种类共采样10份，其中患者呕吐物2份，患者大便3份，留样食品4份（芹菜、咸菜、米饭、扒鸡），操作台面1份。 3.2 检测方法对采集的标本进行金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌等食源性致病菌的实验室检测。在剩余样品扒鸡、患者的粪便、患者呕吐物中均检出金黄色葡萄球菌。 4 结论： 根据流行病调查，临床表现及实验室结果，判定此次事件是由于食用了被污染了金黄色葡萄球菌的扒鸡所造成的食物性中毒。 5 分析 由于患者是买完包装完好的扒鸡后回家立即开封食用，这就说明了扒鸡是在生产过程中某一环节受到污染，在保存时常温保存，扒鸡又是很好的培养基，当时夏季温度较高，正是金黄色葡萄球菌生长的适宜温度，因此被金黄色葡萄球菌污染后极易增值并产毒。 6 措施： 6.1 加强对食品加工、零售行业的卫生监测、监督和管
金黄色葡萄球菌危害评估报告
宁城县中蒙医院 SOP文件金黄色葡萄球菌危害评估报告 一．危害程度分类 金黄色葡萄球菌是最常见的化脓性球菌，因排列的规则形似葡萄状，故称之为金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌为需氧或兼性厌氧，广泛分布于自然界中。如空气，土壤，水以及日用物品，在卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中将其列为第二类病原微生物，属高致病性病原微生物，引起人和动物的化脓性疾病。 二．背景资料 金黄色葡萄球菌呈球形，直径微米，无鞭毛、无芽孢，革兰氏染色呈阳性，对营养要求不高，在普通培养基上生长良好，最适生长温度37度，PH为，耐盐性强，培养24小时出现，表面光滑、湿润，有光泽，不透明菌落（1-2mm），产不同色素，如金黄、白色、柠檬色，对湿热敏感，在100度煮沸5分钟后杀死，浓汁中，紫外线敏感致病性和感染数量：金黄色葡萄球菌之所以能引起疾病是其产生多种毒素和酶，主要有a溶血毒素b杀白细胞素c肠毒素d剥脱性毒素e凝固酶f其他物质引起的局部的蜂窝组织炎等化脓性感染，还可引起如肺炎，心包炎，骨髓炎，肾盂肾炎等重症者可发展呈脑膜炎，败血症，脓毒血症，目前，耐药性菌株的增多，已成为医院内交叉感染的一个急待解决的问题 金黄色葡萄球菌有多种传播途径，主要为吸入带菌的飞沫及接触
带菌的感染伤口引起肺炎及伤口化脓性感染，传染源为带菌的物品，空气等。传播途径主要为接触。金黄色葡萄球菌对实验室人员以及其他可能暴露在实验室传染性气溶胶中的人员是一种危害，尤其是有伤口暴露在空气中，其传染的实验室人员发病率比其他人群高。三．实验活动及及其危害性与预防措施 四、实验室实验活动危害评估本实验室主要从事金黄色葡萄球菌微生物学的实验内容有： 1、金黄色葡萄球菌的培养与耐药检测，生化分型实验 2、金黄色葡萄球菌的涂片染色 金黄色葡萄球菌培养传代，药物敏感实验，生化分型、涂片、染色等工作中可产生气溶胶，培养物制剂的溅出，泼洒和容器的破碎等也可造成严重污染。 拟采取防护措施： 1在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其高压灭菌或按感染性废物处理。避免感染性物质的扩散。 2 为了避免转移物质洒落，微生物接种环的直径应为2~3mm并完全封闭，手柄的长度应小于6cm以减小振动，或者采用一次性灭菌棉签。 3 用封闭式微型电加热器消毒接种环能够避免在本生灯的明火上加热所引起的感染性物质爆溅。 4 样品容器应当坚固，正确地用盖子或塞子盖好后应无泄漏。在容器外部不能有残留物。
金黄色葡萄球菌检测方法
金黄色葡萄球菌检测方 法 Revised as of 23 November 2020
金黄色葡萄球菌检测方法 1.纸片法 目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。采用快速测试片检测具有显着的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。 技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。 技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。 此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。使目视效果下降，导致计数偏低。 2.免疫学方法 各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。 免疫学方法包括下面两个部分： （1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。毒素抗体优势在于敏感度高，易于检查，缺点毒素种类多，检测其中几种不具有普遍性。毒素分离工艺复杂，要得到纯毒素成本比较高。 （2）免疫学方法技术分析：上述免疫学技术应用最多的是酶联免疫技术和胶体金侧向层析技术。酶联免疫技术广泛应用于实验室检测，由于一次可以检测多个样本，此技术多用于体外诊断，目前也广泛用于食品安全。胶体金技术由于操作简单，检测适度快等优势，在食品安全领域广泛用于现场快速检测。 基于免疫学方法的技术主要分为：酶联免疫技术、胶体金侧向层析技术、免疫荧光技术、免疫沉淀技术、乳胶凝集技术、免疫磁珠技术。 3.分子生物学方法 金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：肠毒素、血浆凝固酶、溶血素、杀白细胞素、表皮溶解毒素、毒性体克综合重量毒素I 等。而这些致病因子基因的鉴定(包括耐药性相关基因、毒素基因、酶基因及多
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌革兰氏染色显微照片 金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。 目录 简介 流行病学 引发病症 球菌检验 球菌控制 感染处理 限量存在 简介 金黄色葡萄球菌细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，相反，阴性菌没有细胞壁结构，所以紫色被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色。金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素。而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显。这也是由肽聚糖层的厚度和结构造成的。新出现的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，被称作超级细菌，几乎能抵抗人类现在所有的药物，但是万古霉素可以对付它。典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm 左右，显微镜下排列成葡萄串状。
显微图像 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。 流行病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。 金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位，常成为污染源。 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不密封，运输过程中受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：
论金黄色葡萄球菌
论金黄色葡萄球菌 思念水饺一出，大家的心又提到了嗓子眼儿，因为想大家对金黄色葡萄球菌有跟多的理解，还有对生物产品在葡萄球菌的检测一块能够更好的理解，所以出于这目的，还有也是一项老师的作业，只有好好的完成了。 细菌按形态可分为：球菌,杆菌,和螺旋菌.金黄色葡萄球菌就是球菌的一种.它是革兰氏阳性菌的代表。革兰氏阳性菌就是可以被结晶紫初染，碘液媒染,乙醇脱色，沙黄(红色)复染后呈现紫红色的细菌.而革兰氏阴性菌则呈现红色。这些差别源于金黄色葡萄球菌具有阴性菌所没有的细胞壁结构.金黄色葡萄球菌细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密,染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色,相反,阴性菌没有细胞壁结构所以紫色被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色.金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素.而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显。这也是由肽聚糖层的厚度和结构造成的. 生物学特性 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。 显微图像 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4,干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。 选择不同的培养基就可以分离鉴别了，而且可供选择的培养基种类非常之多。在不含氮的培养基中可生长的是圆褐固氮菌。在含盐量非常高或含氯霉素的培养基中可生长并且表面绒毛状的是青霉菌，可用的培养基：高盐察氏培养基、孟加拉红培养基等等。在伊红美蓝平板上为紫黑带金属光泽、在SS平板上为粉红色菌落、在XLD平板上为黄色菌落的是大肠杆菌。在MRS培养基上可生长、在改良MC培养基上为粉红色菌落、在改良TJA培养基上为底部黄色表面微白色菌
金黄色葡萄球菌的测定
金黄色葡萄球菌的测定 1 卫生学意义 金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。 2 检验方法 2.1 术语与定义 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。 2.2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： （1）恒温培养箱：36℃±1℃。 （2）冰箱：2℃～5℃。 （3）恒温水浴箱：37℃～65℃。 （4）天平：感量0.1g。 （5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 （6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。 （7）无菌培养皿：直径90mm。 （8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.3 培养基和试剂 （1）7.5%氯化钠肉汤 1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4； 2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。 （2）B－P琼脂平板 1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.2 2）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。 3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。分装每
常见食物中毒及其预防知识
常见食物中毒及其预防知识食物中毒是指吃了不洁或有毒食物而导致的疾病。通常在吃了有问题的食物1至72小时内发病，病情严重者可以致命。一般分为微生物性（包括细菌性和真菌性食物中毒）、化学性、有毒动植物中毒。 一、细菌性食物中毒 细菌性食物中毒是指进食含有细菌或细菌毒素的食物而引起的食物中毒。在各类食物中毒中，细菌性食物中毒最多见。其中又以沙门氏菌、金黄色葡萄球菌最为常见，其次为蜡样芽胞杆菌。 细菌性食物中毒发病率较高而病死率较低，多发生在气候炎热的季节。常见细菌性食物中毒的特点:一般在进食后1-36小时出现症状，主要有腹痛、呕吐、腹泻、发热等，一般病程3-4天。 二、化学性食物中毒 化学性食物中毒是指误食有毒化学物质，如鼠药、农药、亚硝酸盐等，或食入被其污染的食物而引起的中毒。发病率和病死率均比较高。轻度中毒表现头痛、头晕、乏力、恶心、呕吐、口唇麻木、酒醉感。重度中毒表现发作时全身抽搐、口吐白沫、小便失禁、意识丧失。 三、有毒动植物中毒
有毒动植物中毒是指误食有毒动植物或摄入因加工、烹调方法不当未除去有毒成分的动植物食物引起的中毒。发病率较高，病死率因动植物种类而异。 近几年学校常见的集体有毒动植物中毒有四季豆中毒、生豆浆中毒、发芽马铃薯中毒等。因学生误食有毒动植物导致的中毒有河豚鱼中毒、毒蕈中毒、蓖麻籽中毒、马桑果中毒等。 四、预防措施 1.严格食品的采购关。禁止采购腐败变质、油脂酸败、霉变、生虫、污秽不洁、混有异物或者其他感官性状异常的食品以及未经兽医卫生检验或者检验不合格的肉类及其制品（包括病死牲畜肉）。 2.注意食品的贮藏卫生，防止尘土、昆虫、鼠类等动物及其他不洁物污染食品，严禁食品贮存场所存放有毒、有害物品及个人生活物品。鼠药、农药等有毒化学物要标签明显，存放在专门场所并上锁。 3.食堂从业人员每年必须进行健康检查。凡患有痢疾、伤寒、病毒性肝炎等消化道疾病（包括病原携带者），活动性肺结核，化脓性或者渗出性皮肤病以及其他有碍食品卫生的疾病的，不得从事接触直接入口食品的工作。 4.食堂从业人员有皮肤溃破、外伤、感染、腹泻症状等不要带病加工食品。
金黄色葡萄球菌的生长及抑制
金黄色葡萄球菌的生长与抑制姓名：梁小丽学号：20142033 班级：食质201403 摘要 为了发展和研究微生物群体的生长和生长抑制，我们选用金黄色葡萄球菌为例，作为研究对象，映射关于微生物的生长及抑制。金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。因此研究金黄色葡萄球菌的生长及抑制有着重大的作用，稀土离子、甜菜碱、黄连与黄芩、甘草配伍对金黄色葡萄球菌生长都有不同程度的抑制效果。 关键词微生物群体葡萄球菌甜菜碱生长与抑制 前言 微生物生产与动植物生产并列为生物产业的三大支柱。 在工业中许多产品利用微生物来生产，如各种生物活性物质(抗生素等)、化工原料(酒精等)。微生物在农业生产中也有着多方面的作用。微生物在食品加工中有广泛用途，发酵食品和许多调味品都离不开微生物。微生物是消除污染、净化环境的重要手段。 因此，对微生物的研究具有深远的意义，而在微生物群体生长规律的研究，在人、畜传染病和植物病害的防治上也有着重要的意义，也是进行微生物生态学和数量遗传学研究的基础。将引领着人类社会的发展和进步。【1】 微生物生长的概念 微生物在适宜的外界环境条件下，不断地吸收营养物质，并按自身代谢方式进行新陈代谢，如同化作用大于异化作用，其结果是原生质的总量（包括重量、体积、大小）不断地增加，称为微生物的生长现象。 单细胞微生物如细菌的生长，往往伴随着细胞数目的增加。当细胞增长到一定程度时，就以二分裂方式，形成两个相似的子细胞，子细胞又重复上述过程，使细胞数目增加。当细胞增长到一定程度时，称为繁殖。在多细胞微生物中，例如某些霉菌，细胞数目的增加如不伴随着个体数目的增加，只能叫生长，不能叫
食物中毒分类
食物中毒分类 按病原物质分类可分为： 一、细菌性食物中毒 是指人们摄入含有细菌或细菌毒素的食品而引起的食物中毒。引起食物中毒的原因有很多，其中最主要、最常见的原因就是食物被细菌污染。据我国近五年食物中毒统计资料表明，细菌性食物中毒占食物中毒总数的50％左右，而动物性食品是引起细菌性食物中毒的主要食品，其中肉类及熟肉制品居首位，其次有变质禽肉、病死畜肉以及鱼、奶、剩饭等。 食物被细菌污染主要有以下几个原因： 1、禽畜在宰杀前就是病禽、病畜； 2、刀具、砧板及用具不洁，生熟交叉感染； 3、卫生状况差，蚊蝇滋生； 4、食品从业人员带菌污染食物。 并不是人吃了细菌污染的食物就马上会发生食物中毒，细菌污染了食物并在食物上大量繁殖达到可致病的数量或繁殖产生致病的毒素，人吃了这种食物才会发生食物中毒。因此，发生食物中毒的另一主要原因就是贮存方式不当或在较高温度下存放较长时间。食品中的水分及营养条件使致病菌大量繁殖，如果食前彻底加热，杀死病原菌的话，也不会发生食物中毒。医学教育网收。集整理那么，最后一个重要原因为食前未充分加热，未充分煮熟。 细菌性食物中毒的发生与不同区域人群的饮食习惯有密切关系。美国多食肉、蛋和糕点，葡萄球菌食物中毒最多；日本喜食生鱼片，副溶血性弧菌食物中毒最多；我国食用畜禽肉、禽蛋类较多，多年来一直以沙门氏菌食物中毒居首位。引起细菌性食物中毒的始作俑者有沙门茵、葡萄球菌、大肠杆菌、肉毒杆菌、肝炎病毒等。这些细菌、病毒可直接生长在食物当中，也可经过食品操作人员的手或容器，污染其他食物。当人们食用这些被污染过的食物，有害菌所产生的毒素就可引起中毒。每至夏天，各种微生物生长繁殖旺盛，食品中的细菌数量较多，加速了其腐败变质；加之人们贪凉，常食用未经充分加热的食物，所以夏季是细菌性食物中毒的高发季节。 二、真菌毒素中毒 真菌在谷物或其他食品中生长繁殖产生有毒的代谢产物，人和动物食人这种毒性物质发生的中毒，称为真菌性食物中毒。中毒发生主要通过被真菌污染的食品，用一般的烹调方法加热处理不能破坏食品中的真菌毒素。真菌生长繁殖及产生毒素需要一定的温度和湿度因此中毒往往有比较明显的季节性和地区性。 三、动物性食物中毒
【高中生物】金黄色葡萄球菌生物危害评估报告
（生物科技行业）金黄色葡萄球菌生物危害评估报告
金黄色葡萄球菌生物危害评估报告 一、金黄色葡萄球菌的传播与致病 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，在空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。 金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道；上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。 而肠毒素形成条件包括：存放温度，在37℃内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。 葡萄球菌性菌血症可发生于任何与血管内导管或其他异物有关的局限性葡萄球菌脓肿或感染,它是严重烧伤病人死亡的常见原因。持续性发热常见,而且可伴有休克。 葡萄球菌性心内膜炎特别好发于静脉注射给药者和装有人工心脏瓣膜的病人。突然出现心脏杂音,脓毒性栓子和其他经典体征便可作出可疑诊断,确诊需依据超声心动图和血培养。 葡萄球菌性骨髓炎主要见于儿童,可引起寒战,发热和受累骨疼痛,继之出现红肿。关节周围感
实验七--食品中金黄色葡萄球菌的检验
实验七食品中金黄色葡萄球菌的检验 一、实验目的要求 1、了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。 2、掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 3、掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。 4、掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。 二、原理 葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。 三、试剂和仪器 （一）最先准备的器材 规格名称数量用途 1、500ml广口瓶1个稀释样品 2、500ml三角瓶1个制生理盐水 3、250ml三角瓶3个制培养基等 4、10×100mm试管6支血浆凝固酶试验 5、1ml移液管2支 6、10ml移液管 2 支 7、直径为90 mm平皿12套制血平板B-P平板 8、250ml量筒1支 （二）应灭菌的其它器材 剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量 （三）应制备的培养基 培养基总量所用容器 1.无菌水50ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 2.0.85%生理盐水70ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 3.0.85%生理盐225ml/瓶1瓶500ml三角瓶 4.7.5%NaCl肉汤50ml/瓶1瓶250ml三角瓶
食物中毒培训试题及答案
食物中毒培训试卷 一、单选题 1.引起组胺中毒的鱼类是（） A、河豚鱼 B、青皮红肉鱼海产鱼 C、红肉鱼 D、内陆湖泊鱼 2.金黄色葡萄球菌肠毒素中毒是由（）引起 A、金黄色葡萄球菌污染的食物 B、金黄色葡萄球菌肠毒素污 染的食物C、化脓性球菌污染的食物D、金黄色葡萄球菌在 肠道内大量繁殖 3.肉毒梭菌毒素食物中毒是由（）引起 A、肉毒梭菌 B、肉毒杆菌 C、肉毒梭菌产生的外毒素D肉毒 梭菌产生的内毒素 4.引起蜡样芽孢杆菌食物中毒最常见的食物是（） A、米饭、米粉 B、水果 C、蛋类D腐败肉类 5.属于有毒动植物中毒的是（） A、毒中毒 B、化学性食物中毒 C、砷污染食品而引起的中毒D 细菌性食物中毒 6.常见的食物中毒是（） A、毒中毒 B、化学性食物中毒 C、砷污染食品引起的食物中毒 D细菌性中毒 7.食物中毒与其他急性疾病最本质的区别是（） A、潜伏期短 B、很多人同时发病 C、急性肠道症状为主D病 人曾进食同一批某种食物 8.引起肉毒梭菌中毒最多见的食品是（）
A、肉制品 B、鱼制品 C、自制发酵食品 D、罐头食品 9.摄入大量亚硝酸钠，可是血红蛋白变成高铁血红蛋白，失去输 氧能力，引起（） A、营养不良 B、肠源性青紫症 C、腹泻 D、腐败变质 10 .有机磷农药中毒具有（）毒性. A、肾脏 B、神经 C、内分泌 D、血液 E、肝脏 二、判断题 1.食物中毒就是食源性疾病（） 2.安全食品是指完全没有风险的食品（） 3.食物烧煮过程中只要中心温度达到65度就可保证食品安全卫生 （） 4.正确的餐具清洗消毒顺序是：刮、洗、过清、消毒、保洁（） 三、简答题 食物中毒的分类？ 一、单选题：1、b 2、b 3、c 4、a 5、a 6、d 7、d 8、c9、b 10、b 二、判断题：1、错2、错3、错4、错 三、简答题：1、细菌性食物中毒 2、真菌及其毒素性食物中毒 3、动物性食物中毒 4、有毒植物性食物中毒 5、化学性食物中毒
一起金黄色葡萄球菌引起的食物中毒调查
【中图分类号】r155.3【文献标识码】a【文章编号】1005-2720(2010)05 - 136 - 02 【关键词】食物中毒;金黄色葡萄球菌 2009年9月11日,新民市胡台镇中心小学发生1起食物中毒,中小学生保健所接到报告后,立即会同疾病预防控制中心有关人员赶往现场。经流行病学调查,结合临床表现和实验室检验结果,证实是1起由金黄色葡萄球菌感染造成的细菌性食物中毒。 1 中毒发生经过 2009年9月11日中午11时30分胡台镇中心小学学生536人在该校食堂就餐。于当天下午13时20分开始有3名学生出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻,之后陆续有学生发生类似症状,至15时40分左右共有64名学生发病,发病人数占就餐人数的11.9%。该校老师及家长带学生到当地卫生院就诊,经输液应用抗生素及对症治疗(补液),患病学生病情稳定,截止9月13日已全部痊愈出院,无死亡病例。 2 流行病学调查 2.1 食谱调查64名患者早餐均在自家进餐,进食食谱均不一样。中午同时在该校食堂进餐,主食为大米饭,副食为土豆片炒尖椒,凉拌素鸡,凉拌黄瓜,火腿肠片。 2.2 现场调查情况胡台镇中心小学食堂已取得卫生许可证,但新上岗三名从业人员未进行健康检查。且该校食堂冰箱内存放食品生、熟混放;餐具、食品用容器消毒不彻底,没有消毒记录,无消毒管理制度;该食堂无冷荤配制间,凉菜制作时无专用洗手设施和专用菜板、刀具;生熟菜板无标记混用;凉拌菜工作人员张哲未使用专用工具,直接用手拌制凉菜;食堂库房没有通风设施。 2.3 临床表现通过对中毒学生的个案调查,此次食物中毒潜伏期最短为 1.8h,最长为4.2h,平均为2.6h。中毒的64例名学生中有不同程度的恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状。有恶心的61人,占95.3%,呕吐有57人,占89.06%,腹痛52人,占81.2%,腹泻48人,占75%。 2.4 实验室检查结果由于该校食堂未按照要求进行就餐食品留样,疾病预防控制中心的工作人员不能采集进餐食品,只采集到生、熟菜板刮取物、食品容器、生活饮用水、患者的呕吐物及粪便。做病原菌检测,gb/4789.10-2003常规操作,进行病原菌分离,结果在熟菜板刮取物和患者的呕吐物及便样中均检出金黄色葡萄球菌,生活饮用水中检出粪大肠菌群。 3 讨论 葡萄球菌在空气、土壤、水、粪便、污水及食物中广泛存在,主要来源于动物及人的鼻腔、咽喉、皮肤、头发及化脓性病灶。健康人的咽部带菌率可达40%～70%,手部达56%,葡萄球菌可产生多种毒素(a、b、c、d、e5型)和酶类,引起食物中毒的主要是能产生肠毒素的葡萄球菌,其中以金黄色葡萄球菌致病力最强,大约50%以上的金黄色葡萄球菌菌珠可在实验室条件下产生两种或两种以上的葡萄球菌肠毒素,食物中的肠毒素耐热性强,一般烹调温度不能将其破坏,218～248℃油温下才能被破坏。 3.1 本次发病的特征发病人员有共同进餐史和共同食物史,均食用了凉拌素鸡和凉拌黄瓜。该学校食堂无凉拌菜制作间,刀具和用具未经消毒,盛装生、熟食品容器未严格分开,菜板被污染后直接切凉拌菜原料,造成食品的交叉污染,是引起本次食物中毒的主要原因。
金黄色葡萄球菌的检查
金黄色葡萄球菌的检查 同学们，这一节我们一起来学习一下第四章微生物限度检查法中的金黄色葡萄球菌的检查。 金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属中的一种。本菌在自然界分布甚广，空气、土壤、水和日常用具，人的皮肤。看，这就是金黄色葡萄球菌，它是一种革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。 该菌是葡萄球菌中致病力最强的一种，可经皮肤、粘膜侵入人体引起化脓性病变等局部及全身化脓性炎症，严重时可导致败血症。 所以，国家规定外用药品和一般滴眼剂、眼膏剂、软膏剂等规定不得检出金黄色葡萄球菌，检验金黄色葡萄球菌有重要意义。 金黄色葡萄球菌的操作流程如图所示，与之前讲述过的其他控制菌的检查一样： 在完成培养基的配制和供试品的处理后，用营养肉汤于30～35℃增菌培养18～24小时，必要时可延至48小时。增菌培养的目的使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检。 接着，进行分离纯化，其目的是使被检菌从混合菌中分离出来。以接种环沾取以接种环沾取1～2环培养液，划
线接种于卵黄氯化钠琼脂平板或甘露醇氯化钠琼脂平板上，置30～35℃培养24～72小时。 当阳性对照平板呈典型菌落生长时，供试品分离平板无菌落生长，或有菌落生长但不同于表中所列特征，可判为未检出金黄色葡萄球菌。 若供试品分离平板生长的菌落与表中所列特征相似疑似时，应选取2～3个以上菌落，分别接种于营养琼脂斜面上，于30～35℃培养18～24小时，取其培养物做以下检查。 1. 革兰染色镜检 革兰染色镜检观察显微镜下的细菌结构是否符合金黄色葡萄球菌的形态特征：金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，无芽孢，无荚膜。排列呈不规则的葡萄状，亦可呈单个、成双或短链状排列，菌体较小。 2. 血浆凝固酶试验 金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，能将血浆里的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，使血浆凝固。
葡萄球菌食物中毒
葡萄球菌食物中毒 葡萄球菌在空气、土壤、水、粪便、污水及食物中广泛存在，主要来源于动物及人的鼻腔、咽喉、皮肤、头发及化脓性病灶。葡萄球菌可产生多种毒素(A、B、C、D、E 型)和酶类。引起食物中毒的主要是能产生肠毒素的葡萄球菌，其中以金黄色葡萄球菌致病力最强。此菌耐热性不强，最适生长温度为37℃，最适pH 为7．4，大约50％以上的金黄色葡萄球菌菌株可在实验室条件下产生两种或两种以上的葡萄球菌肠毒素。食物中的肠毒素耐热性强，一般烹调温度不能将其破坏，218～248℃油温下经30 分钟才能被破坏。 (一)流行病学特点 1．中毒多发生在夏、秋季节，其他季节亦可发生。 2．中毒食品主要为乳及乳制品、、蛋及蛋制品、各类熟肉制品，其次为含有乳制品的冷冻食品，个别也有含淀粉类食品。 3．中毒原因主要是被葡萄球菌污染后的食品在较高温度下保存时间过长，如在25～30℃环境中放置5～10 小时，就能产生足以引起食物中毒的葡萄球菌肠毒素。 (二)发病机制 葡萄球菌肠毒素引起食物中毒的机制目前尚未全部阐明。有研究认为，葡萄球菌肠毒素对小肠粘膜细胞无直接破坏作用，而以完整的分子经消化道吸收入血，到达中枢神经后刺激呕吐中枢致病。 (三)中毒表现 1．起病急，潜伏期短，一般在2～3 小时，多在4 小时内，最短1 小时，最长不超过10 小时。 2．中毒表现为典型的胃肠道症状，表现为恶心、剧烈而频繁地呕吐(严重者可呈喷射状，呕吐物中常有胆汁、粘液和血)、腹痛、腹泻(水样便)等。 3．年龄越小对本葡萄球菌肠毒素的敏感性越强，因此儿童发病较多，病情较成人严重。 4．病程较短，一般在1—2 天痊愈，很少死亡。 (四)预防措施
金黄色葡萄球菌引起的食物中毒
金黄色葡萄球菌引起的食物中毒 发表时间：2018-01-21T14:06:33.717Z 来源：《健康世界》2017年23期作者：杨囡张俊君王丽娟王莹莹陈斌 [导读] 根据病原学检测结果及流行病学调查，这是一起由荷叶饼夹肉受金黄色葡萄球菌污染而引起的食物中毒。 陕西省咸阳市疾病预防控制中心陕西咸阳 712000 摘要：目的为了及时追查食物中毒发生的原因，查清致病菌污染食品的来源，为临床用药治疗提供依据。方法根据GB789.4-2010《食品微生物学检验沙门氏菌检验》、GB4789.10-2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》、GB4789.30-2010《食品微生物学检验单核增生李斯特菌检验》和GB4789.14-2014《食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》[1]的方法和有关的参考资料，对可疑食品进行致病性肠道杆菌、球菌检验。结果经培养鉴定，从食品荷叶饼夹肉及2名患者呕吐物中检出金黄色葡萄球菌，并进行了葡萄球菌肠毒素检测，3株致病菌产肠毒素检测均为阳性。结论根据病原学检测结果及流行病学调查，这是一起由荷叶饼夹肉受金黄色葡萄球菌污染而引起的食物中毒。 关键词：金黄色葡萄球菌；肠毒素检测；食物中毒 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因此，食品受其污染的机会很多，金黄色葡萄球菌能产生数中引起急性胃肠炎的蛋白质肠毒素，由其导致的食物中毒多见于春夏季节，且中毒食品种类繁多[2-5]，金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大占45%，而在我国由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占细菌性食物中毒的25%[6]。 2017年2月16日渭城区某幼儿园两个班级学生饭后出现不适，主要症状为恶心、呕吐。随后我实验室接到渭城区疾控中心送来学校餐厅食物留样及中心医院留取的病人呕吐物，经过数天培养与最后的生化鉴定，从患者呕吐物及食品荷叶饼夹肉中检出3株金黄色葡萄球菌，并进行了葡萄球菌肠毒素检测，证实该菌产生了肠毒素现将结果分析如下。 1 材料和方法 1.1 样品来源 现场采取餐厅食物留样：荷叶饼夹肉1份，约70g，南瓜粥1份，约110g患者呕吐物2份，患者肛拭子1份。 1.2检验项目 根据流行病学调查情况，将可疑样品根据GB789.4-2010《食品微生物学检验沙门氏菌检验》、GB4789.10-2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》、GB4789.30-2010《食品微生物学检验单核增生李斯特菌检验》和GB4789.14-2014《食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》的方法进行增菌分离鉴定。同时将食品样品的增菌液及患者的咽拭子、肛拭子标本按要求处理后提取核酸，进行分子生物学检测。 1.3培养基及试剂 缓冲蛋白胨水（BPW）、沙门显色平板、7.5%氯化钠肉汤、金黄色葡萄球菌显色平板、单核增生李斯特菌显色平板、磷酸盐缓冲液、蜡样芽孢杆菌平板（MYP）、血平板均采用青岛海博生物有限公司；Baird-Parker（BP）平板、LB增菌液、营养琼脂均采用北京路桥生物有限公司；VITEK2阳性杆菌鉴定卡、VITEK2阴性鉴定卡、VITEK2芽孢鉴定卡均采用法国梅里埃生物有限公司；金黄色葡萄球菌荧光定量PCR试剂盒采用江苏硕世生物有限公司；ELISA金黄色葡萄球菌肠毒素检测试剂盒采用德国拜发生物分析系统有限公司。 1.4检测方法 （1）增菌：①将食品荷叶饼夹肉、南瓜粥按比例称取样品分别进行沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特菌及蜡样芽孢杆菌增菌培养，将样品充分混匀，除单增菌外（单核增生李斯特菌30℃培养24小时），其它增菌液置于37℃培养24小时。②将2份呕吐物及1份肛拭子接种血平板、营养琼脂平板。 （2）分离培养：将上述增菌液分别取一接种环接种于相应的分离培养基（沙门显色平板、单增显色平板、MYP平板、金葡显色平板、BP平板、血平板）作平板划线，经37℃培养24小时后观察各平板上菌落，同时将剩余增菌液及患者咽拭子、肛拭子进行处理，用手工法提取核酸进行PCR分子生物学实验。 （3）各平板菌落生长形态：①食品荷叶饼夹肉及南瓜粥：沙门氏菌、单核增生李斯特菌、蜡样芽孢杆菌分离平板均无可疑菌落生长，食品南瓜粥中，金黄色葡萄球菌分离平板也无可疑菌落生长，故排除该菌污染食物的可能性。②食品荷叶饼夹肉：金黄色葡萄球菌显色平板上可见蓝绿色中等大小光滑湿润菌落；BP平板上可见灰黑色光滑湿润，周围有一混浊带边缘透明的小圆形菌落；血平板：圆形，菌落较大，乳黄色光滑湿润，周围有完全透明溶血圈。③呕吐物及肛拭子：2份呕吐物：血平板：圆形，菌落较大，乳黄色光滑湿润，周围有完全透明溶血圈；营养琼脂平板：乳黄色中等大小，光滑湿润的圆形菌落；1份肛拭子：血平板及营养琼脂平板均无可疑菌落生长。 （4）鉴定试验：将可疑的菌进行革兰染色、生化试验及分子生物学试验。 食品荷叶饼夹肉及2份呕吐物的金黄色葡萄球菌的鉴定试验 ①生化试验见表1 ②分子生物学试验：对荷叶饼夹肉的增菌液及2份呕吐物样品进行处理，用手工法提取核酸，进行了荧光定量PCR的检测，在PCR结果中也显示出食品荷叶饼夹肉中金黄色葡萄球菌结果为阳性，2份呕吐物样品结果也为阳性。 ③肠毒素检测试验：由于金黄色葡萄球菌对人的治病因子主要为肠毒素，所以我实验室对分离出的金葡菌株是否产肠毒进行了检测，我们分别采用了PCR方法和ELISA方法对5种金葡菌肠毒素进行了检测，结果见表2和表3。
金黄色葡萄球菌鉴别方法探讨
金黄色葡萄球菌鉴别方法探讨 目的探讨金黄色葡萄球菌的检验方法，提高金黄色葡萄球菌的鉴定准确率。方法本研究针对金黄色葡萄球菌的特异性、敏感性、准确性进行研究，比较该方法与传统国标法的检测结果。结果在传统国标法上增加API Staph 鉴定试条试验，检测结果与国标法的显示阳性的检测结果相一致。结论此方法可对似阳非阳的结果进行判定，甚至对假阴性进行修正，防止漏检，明显提高了金葡菌的检出水平和准确性，对日常的检验工作具有很现实的指导意义，值得推广。 标签：金黄色葡萄球菌；API Staph；鉴定 The identification method of Staphylococcus aureus SONG?Songwen Guangxi Yulin Institute for Food and Drug Control, Yulin 537000, China [Abstract] Objective To probe into the test methods of Staphylococcus aureus and improve Staphylococcus aureus identification accuracy. Methods This experiment was aimed at researching the specificity, sensitivity and accuracy of Staphylococcus aureus and compares the test results of this approach with that of the traditional national standard method. Results API Staph identification cards are increased in the traditional national standard method.The test results are the same as that of national standard method, which shows positive. Conclusion The results of unclear positive can be judged by this method, even the false negative can be revised to prevent undetection. Thus obviously improves the detection level and accuracy of Staphylococcus aureus.It has practical guiding significance on the daily inspection work, and is worthy to be popularized. [Key words] Staphylococcus aureus; API Staph; Identification 金黄色葡萄球菌（SA）广泛存在自然界，是一种引起食物中毒的常见致病菌之一，目前很多国家都把金黄色葡萄球菌列为药品和食品卫生的法定检测项目[1]。对金黄色葡萄球菌检验目前采用的方法是以《中国药典》2010年版及食品安全国家标准GB4789.10-2010[2-3]。然而，SA在特殊环境中，可产生变异性，使细菌形态及典型的生化反应有所改变，在检验中常有假阳性发生，影响判断结果。本实验在常规方法的基础上增加API鉴定系统确认，能显著提高金黄色葡萄球菌检出率。因食品和药品对金黄色葡萄球菌检验方法类同，且食品相对于药品而言污染机率较大，杂菌较多，故实验以9批试验结果革兰染色镜检均为阳性的食品样品更具代表性。 1?材料与方法 1.1?材料 1.1.1?对照用菌株?金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]；样品菌株：两批生食鱼片（批号：SP20110189、SP20110212）、三批熟肉制品（批号：SP20110151、SP20110182、SP20110745）、两批豆制品（SP20110740、SP20110847）和两批盒饭（批号：SP20110108、SP20110073）共9个批次，革兰染色镜检试验均显阳性，计划监管中抽取于市场。 1.1.2?培养基和试剂?7.5%氯化钠肉汤；Baird-Parker培养基（B-P）；血琼脂平板；脑心浸出液（BHI）肉汤；营养琼脂斜面；冻干血浆；革兰染色试剂，广州环凯生物技术有限公司。API Staph 鉴定试条，法国生物梅里埃公司。