小鼠衰老检测

小鼠全体实验记录

1，全身拍照

衰老治疗正常组

正常组衰老治疗组

2，全身称重

寿命

1.对平均寿命（mean lifespan）/最大寿命（maximum lifespan）的影响

二、衰老性心脏肥大

1.心室中部横截面染色，观察截面大小情况，年轻小鼠较小，老年小鼠肥大。

2.心脏重量/胫骨长度（mg/mm），表征肥大状况，数值越大，衰老程度越高。（选择原因：胫骨长度在小鼠发育成熟后不再有变化，可作为量化对比标准）

3.左心室（left ventricle，LVs）PAS染色（过碘酸雪夫染色，periodic acid Schiff stain），观察细胞横截面积大小。（心脏肥大是因为细胞个体变大还是细胞数量变多）

4.心肌细胞（cardiomyocyte，CM）横截面积（crosssectional area，CSA）测定。雌雄分组，每个动物选5个独立切片，结果根据平均值计算，测量方法：选取一定面积区域，数区域内细胞数量，计算出心肌细胞横截面积。

5.小鼠心脏部位取材，RT-PCR测量心房利尿钠肽（atrial natriuretic peptide，ANP）,脑钠素（brain natriuretic peptide，BNP）,肌浆网钙ATP酶（sarcoplasmic reticulum calcium ATPase，SERCA-2）的表达量。

6.Western测生长分化因子11 （growth differentiation factor 11，GDF11）在血浆的水平。老年小鼠少，年轻小鼠多。

三、认知功能

1.Morris水迷宫实验（Morris water maze，MWM）。学习逆转阶段评估短期学习记忆能力、探索阶段评估长期记忆、对象偏好评估识别记忆、对新伙伴的认可能力。

2.海马裂解物中，免疫印迹定量突触蛋白I（synapsin I）、突触素（synaptophysin）、突触后密度蛋白（postsynaptic density protein 95，PSD95）。

3.测定整个海马的基因表达谱，2090个可变表达基因分层聚类。156个最上调和76个最下调的转录物进行基因本体富集分析的网络可视化。

4. RT-PCR评估Klotho（KI）甲状腺素转运蛋白（transthyretin ，Ttr）、Bdnf

H4 ，H2A。

四．生殖能力

1.足月妊娠成功的比例/数量（雌性小鼠）

2.后代存活数量

3.卵巢部位切片，对EGFP表达免疫分析。

五．骨质疏松

1.小鼠BMSCs中衰老标记物53BP1和c-H2AX的表达。表达量大表示干细胞衰老。

2.左图是小鼠胫骨三维（3D）图像，中间图像是X射线图像，右图像小鼠胫骨样本的3Dmicro-CT 重建图像，计算骨体积分数BV/TV

六．其他

1.衰老抑制剂加入后21天，测定SA-β-半乳糖苷酶活性，活性降低，表示抗衰老效果好

2.加入后21天，测定细胞增殖量（与对照组比较），细胞增殖量多，抗衰老效果好

3.降低ATM磷酸化水平，以及其下游目标p-CHK2, p-p53, 和p21。衰老相关的p16marker也

在治疗后下降

4.流式细胞仪测定线粒体膜电位（与年轻小鼠对照）

5.氧消耗量（OCR）（与年轻小鼠对照）

6.细胞外酸化速率（ECAR）（与年轻小鼠对照）

7.糖酵解/氧化磷酸化ATP的生成量（与年轻小鼠对照）

8.对活性氧ROS监测，其中DHR123对羟基自由基、过氧化氢染色，MitoSOX对超氧阴离子染色

9.细胞核形态观察（与年轻小鼠对照）

10.肝、脑组织中单胺氧化酶MAO-B活性，活性越低越年轻。

11.全血谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px活性和心肌脂褐素含量，GSH-Px活性高年轻，心肌脂褐素含量低年轻。

12.皮肤中羟脯氨酸Hyp的含量，含量越高越年轻。

13.各组织、脏器（皮肤，心肝脾肺肾脑等）中脂质过氧化物MDA（丙二醛）的含量，含量低年轻，超氧化物歧化酶SOD活性，活性越高越年轻。

参考文献：

Loffredo F S, Steinhauser M L, Jay S M, et al. Growth Differentiation Factor 11 is a Circulating Factor that Reverses Age-Related Cardiac Hypertrophy[J]. Cell, 2013, 153(4):828-39. Bilkeigorzo A, Albayram O, Draffehn A, et al. A chro nic low dose of Δ9-tetrahydrocannabinol (THC) restores cognitive function in old mice.[J]. Nature Medicine, 2017.

Selesniemi K, Lee H J, Niikura T, et al. Young adult donor bone marrow infusions into female mice postpone age-related reproductive failure and improve offspring survival.[J]. Aging, 2009, 1(1):49.

Shen J, Tsai Y T, Dimarco N M, et al. Transplantation of mesenchymal stem cells from young donors delays aging in mice[J]. Scientific Reports, 2011, 1(6045):67.

Kang H T, Park J T, Choi K, et al. Chemical screening identifies ATM as a target for alleviating

senescence[J]. Nature Chemical Biology, 2017.

细胞凋亡与衰老

细胞凋亡与衰老 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【关键词】细胞凋亡；衰老 衰老是指增龄过程中机体出现的多器官渐进性功能减退，其确切机制并不清楚，有多种学说，如自由基学说、端粒学说和细胞凋亡学说等。以啮齿类动物为研究对象，肌肉、脑、心脏等多种衰老组织中均存在细胞凋亡异常〔1〕。细胞凋亡参与多种与衰老相关的病理过程，如骨质疏松、阿尔茨海默病等。目前细胞凋亡在衰老中的作用成为国内外研究热点，本文就二者的最新研究进展作综述。 1 细胞凋亡 细胞凋亡涉及一系列基因的激活、表达及调控，是机体为更好地适应环境采取的主动死亡，其参与许多重要生命活动，如胚胎发育、免疫防御和维持组织稳态等，对维持细胞增殖与死亡的平衡有重要意义。 1.1 细胞凋亡途径 1.1.1 外源性途径又称死亡受体途径，是由膜受体介导的细胞死亡过程。死亡受体是属于肿瘤坏死因子受体超家族的跨膜受体，其中研究较透彻的是Fas/FasL系统。Fas广泛分布于胸腺、肝、心、肾等

组织细胞表面。当Fas与其配体FasL结合后发生多聚化，与胞浆内死亡结构域结合蛋白（FADD）结合，活化胞浆caspase8，再活化凋亡执行者caspase3，水解蛋白质，启动核酸内切酶剪切DNA，造成凋亡。这是发育过程和免疫系统中最主要的凋亡途径。通过该途径可清除发育过程及免疫反应中活化的淋巴细胞。增龄过程中Fas表达呈上升趋势。衰老大鼠胸腺细胞和脾细胞凋亡速度加快，可能造成衰老机体免疫功能下降。 1.1.2 内源性途径以线粒体为核心，又称线粒体途径。该途径凋亡信号来自体内各种应激，如DNA损伤、氧化应激、紫外线、生长因子缺乏等。凋亡信号引起前凋亡蛋白Bax活化，Bax诱导线粒体释放细胞色素c（Cyt c）。进入胞质的Cyt c与凋亡蛋白激活因子（Apaf1）、caspase9前体组成凋亡体，激活caspase9，再活化caspase3引起细胞凋亡。线粒体也可释放凋亡诱导因子(AIF)和内切核酸酶G进入胞浆，二者转移到细胞核，断裂DNA。随着年龄增长，内源性凋亡途径逐渐变得活跃。 1.1.3 内质网应激介导的细胞凋亡内质网(ER)参与蛋白质合成及翻译后加工修饰。当非折叠或错折叠蛋白质在ER内堆积超过处理能力时，引起ER应激。ER应激的一个后果是细胞凋亡。位于ER膜上的Bak、Bax发生构象变化形成多聚体，使Ca2+进入ER，活化caspase12，引起下游级联反应，活化caspase9和caspase3。机体具有应对ER应激的保护措施，如使翻译起始因子eIF2去磷酸化，减少蛋白质合成。但衰老机体应对ER应激能力降低，eIF2磷

D_半乳糖致衰老小鼠模型的实验研究_鞠文博

第16卷第2期北华大学学报（自然科学版） Vol．16No．22015年4月 JOUＲNAL OF BEIHUA UNIVEＲSITY （Natural Science ） Apr．2015 文章编号：1009-4822（2015）02-0199-04DOI ：10．11713/j．issn．1009-4822．2015．02．014 D -半乳糖致衰老小鼠模型的实验研究 鞠文博1，于春艳1，陈建光 2 （1．北华大学基础医学院，吉林吉林132013；2．北华大学药学院，吉林吉林132013） 摘要：目的 探讨应用D-半乳糖制作小鼠衰老模型，并进行指标检测．方法 D-半乳糖连续皮下注射42d 制作 小鼠衰老模型，同时进行体质量变化测量、行为学测试和形态学衰老指标的测定．结果 与正常对照组相比，造 模4周后，D-半乳糖致衰老小鼠体质量显著降低（P ＜0．01）；D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆能力减弱，水迷宫探索路径长度、 搜台潜伏期均显著延长（P ＜0．01）；形态学观察显示各器官组织结构出现衰老改变．结论D-半乳 糖可以成功制作小鼠衰老模型． 关键词：D-半乳糖；衰老；行为学检测；形态学检测中图分类号：Ｒ32 文献标志码：A 【引用格式】鞠文博， 于春艳，陈建光．D-半乳糖致衰老小鼠模型的实验研究［J ］．北华大学学报：自然科学版，2015，16（2）：199-202． 收稿日期：2014-11-19基金项目：吉林省教育厅科学技术研究项目（2013-194）；吉林市科技发展计划项目（201464064）．作者简介：鞠文博（1970－），男，副教授，主要从事组织学、药理组织学研究，E-mail ：1024716077@qq．com ；通信作者：陈建光（1962－），男，博士，教授，硕士生导师，主要从事心血管药理学研究， E-mail ：644257703@qq．com．Experimental Study of Aging Mice Model Induced by D-galactose Ju Wenbo 1，Yu Chunyan 1，Chen Jianguang 2 （1．Basic Medical College of Beihua University ，Jilin 132013，China ； 2．Pharmacy College of Beihua University ，Jilin 132013，China ） Abstract ：Objective To explore the application of D-galactose in establishing aging mice model ，and to detect the related indexes．Method D-galactose was given to the mice continuously by subcutaneous injection for 42 days to make aging model．During this period ，their changes in weight ，behavior and senescence indications were measured as well．Ｒesults Compared to the control group ，the body weight of the aging mice decreased significantly after 4weeks modeling （P ＜0．01）．Besides ，both exploration path length and escape latency were seriously prolonged in the water maze experiment （P ＜0．01）， indicating that the ability of learning and memory retarded in the aging mice．Morphological observations showed aging changes in the structures of several organs and tissues．Conclusion D-galactose can successfully establish aging mice model． Key words ：D-galactose ；aging ；behavior detection ；morphological detection 老龄人口的增多促使人们更加关注衰老的研究，脑衰老是人衰老的最明显表现．脑衰老是一个非常复杂的过程，导致脑结构与功能的改变，是由多种因素引起的，学习和记忆能力的减退是其最重要的表现之一 ［1］ ． D-半乳糖是一种机体内正常的营养成分， 能够在正常机体代谢中转变为葡萄糖，从而参与葡萄糖代谢，如果摄入过量则会导致代谢紊乱．在半乳 糖氧化酶作用下，D-半乳糖转化成醛糖和过氧化氢，从而产生大量的超氧化阴离子自由基，使多种

营养与衰老的关系

营养与衰老的关系 摘要：营养与衰老有着十分密切的关系。本文论述了热量的摄入、糖类、脂类、蛋白质、维生素、矿物质、纤维素和水等与衰老的关系，并根据它们之间的关系提出了延缓衰老的相关营养措施。 关键字：营养；衰老；关系 衰老是我们每个人必须经历的一个生理过程。人体在到达一定年龄后，就会出现种种衰老的迹象，最终走向死亡。人体的衰老与遗传、环境、生活方式等诸多因素都有关系。营养也与衰老有着密切的关系。过量摄入某些营养素可能会加速衰老的进程，而多补充另一些营养素却会延缓衰老的进程。 一．营养与衰老的关系 “营养不仅是维持人们生命活动和生产、生活活动的必需物质，而且与人的衰老有着十分密切的关系。”[1] （一）热量的摄入与衰老 早在1935年McCay就已经提出限制热量延缓衰老的学说，引起了医学界和营养学界的广泛重视。[2]这一学说的基本点是：在满足机体对各种营养素需要量的前提下，适当限制热量的摄入，能明显延缓衰老的速度，延长实验动物的寿命。动物如此，人作为高等动物，亦如此。当人从壮年步入老年后，基础代谢能降低，体力活动减少，代谢强度下降，每天消耗的热量也相应地减少。因此，如果这个阶段的人从食物中摄取过多的热量，很容易转变为脂肪贮存于体内，使身体发胖。而身体发胖后又容易诱发动脉粥样硬化、高血压、冠心病和糖尿病等疾病。从而损害人体健康，加速衰老的过程。 （二）糖类与衰老 “人体1/5的基础代谢能量用于脑组织，它的能量仅来源于糖，它也是神经组织赖以维持及保持正常活动的主要能源。”[3]由此可见，糖类是人体不可缺少的一种重要的营养素。如果血液中的糖过多，它就会被运送到肝，在那里被转化成糖原并储存起来。但身体只能储存一定量的糖原。如果过多了，剩余的就会被

肝脏P450还原酶特异性敲除小鼠模型在毒理学中的应用

肝脏P450还原酶特异性敲除小鼠模型在毒理学中的应用1 Application of Liver-specific Cytochrome P450 Reductase knockout mice in Toxicology 肖瑛，武元峰，薛翔，顾军，任进* Xiao Ying, Wu Yuanfeng, Xue Xiang, Gu Jun, Ren Jin 中国科学院上海药物研究所，新药研究国家重点实验室,上海201203 State Key Laboratory for New Drug Research，Shanghai Institute of Materia Medica,Chinese Academy of Sciences, Shanghai, 201203 关键词: NADPH-细胞色素P450酶还原酶，基因敲除，器官毒性 Key Word: NADPH-P450 Cytochrome Reductase, Knockout, Organ Toxicity 1.引言 微粒体细胞色素P450单加氧酶（P450，CYP）在内源与外源性化合物的生物转化中起着重要的作用。P450酶蛋白种类的多样性及其底物的重叠性使P450酶系可以催化多种类型的反应，不仅对许多外来物质如杀虫剂及环境有毒物质具有代谢作用，还参与一些起重要生理功能的内源性物质如激素、脂肪酸的代谢。P450酶的功能与生物学作用的重要性，使其研究具有广阔的应用前景。通过调控其表达和活性，可望改变生物体内外源性化合物尤其是药物的代谢，对于药物的研究和开发也有重要的意义。由于P450酶系的生物学重要性，自其发现以来，该酶系的研究一直是药理学和毒理学中一个十分引人注目的领域。 P450酶基因的多态性使其有多种亚型且多具有类似的功能和相似的组织分布特征，使在一个特异组织中很难去区别单个P450酶亚型的功能。目前已有多个P450酶亚型敲除（knockout，KO）小鼠模型，这些模型已被广泛用来研究特异性P450酶亚型在外源性化合物的代谢和毒性中的作用[[1]]。然而这些KO模 1基金项目：国家重点基础研究发展计划973项目（编号：2006CB504700） 作者简介：肖瑛（1981-），女，博士研究生，研究方向为药物毒理学。 *通讯作者：任进，Email: CDSER_SIMM@mail. https://www.docsj.com/doc/c51716892.html, Tel & Fax：（021）50806600-2207

D-半乳糖衰老小鼠模型的建立

龙源期刊网 https://www.docsj.com/doc/c51716892.html, D-半乳糖衰老小鼠模型的建立 作者：刘佳 来源：《健康必读（上旬刊）》2019年第04期 【摘; 要】目的：建立 D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型建立。方法：8周龄ICR小鼠，32只，雌性各半，10%D-半乳糖溶液500mg/（kg·d）颈后部皮下注射.连续注射 56天后后摘眼球取血，颈椎脱臼处死小鼠，并通过检测小鼠血清中 SOD 活力和 MDA 含量，对此衰老模型做出生物学鉴定。结果：造模过程中模型小鼠逐渐变得不活泼，喜蜷缩，脊椎隆起，体形消瘦，皮肤松弛，毛发稀疏、竖起失去光泽等一系列衰老体征，而正常对照组未出现上述衰老体征;与正常对照组相比，模型组血清SOD活力明显降低（P<0.01），差异有显著性意义;与正常对照组相比，血清MDA含量明显升高（P<0.01），差异有显著性意义。结论：本课题组成功建立了 D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型。 【关键词】D-半乳糖 【中图分类号】R764;;;;; 【文献标识码】A;;;;; 【文章编号】1672-3783（2019）04-0031-01 【Abstract】Objective：To establish a D - galactose subacute aging mice model.Methods：8 weeks of ICR mice， 32， female and male in half，500 mg/D - galactose 10% solution （kg·D） at the back of the neck subcutaneous; injection . After 56days continuousinjection，blood were sampled from the eyes ，then the mice were executed.Through testing the SOD activity and MDA contentsin the serum， we can make biology identification of the aging mod.Results： The process of building model ，the model mice gradually became less active，liked curled， the spine upheavaled，body were thin ，skin were loose， hair were sparse，erecting and lost shineetc，a series of signs of aging，.However the normal control group did not appear the aging https://www.docsj.com/doc/c51716892.html,pared with the normal control group， the model group serum SOD activity decreased significantly （P < 0.01）;Compared with the normal control group， serum MDA contents increased significantly （P<0.01）.Conclusion：Our research group had established the D-galactose subacute aging model mice sucssessfully 【Key word】D- galactose 有文献报道选用D-半乳糖来建立衰老动物模型时发现，雄性大鼠相对于雌性大鼠更为敏感，可以首选雄性SD大鼠作为动物来源。但亦可选用Wistar大鼠、昆明小鼠、ICR小鼠等。目前D-半乳糖致衰老动物模型所需剂量及时间尚无统一规定，剂量范围从50-1250mg/（kg·d）不等。有学者认为，在制备D-半乳糖衰老大鼠或小鼠模型时，给D-半乳糖 50-500mg/（kg·d），连续6-8周比较合适。

心肺复苏试题

单选题(每题1分,共40题) 1、患者,女性,因触电致呼吸心跳骤停。患者心肺复苏后脑复苏的主要措施(C) A、维持有效的循环 B、确保呼吸道通畅 C、降温与脱水疗法 D、加强基础护理 E、治疗原发疾病 2、患者,男性,34岁,突然呼吸停止,使用简易呼吸器急救,首要步骤就是(D) A、患者头后仰,托起下颌,扣紧面罩 B、挤压简易呼吸器 C、加压给氧 D、清除呼吸道异物及分泌物 E、立即注射呼吸兴奋剂 3、抢救时间的记录不包括(E) A、患者到达的时间 B、医生到达的时间 C、抢救措施落实的时间 D、病情变化的时间 E、家属到达的时间 4、患者,男性,46岁,因车祸致伤,现场急救时发生呼吸心跳已停止约2分钟,复苏时首先应采取的措施就是(A) A、胸外心脏按压 B、口对口人工呼吸 C、胸内心脏按压 D、心内注射肾上腺素 E、静脉输液 5、患者,男,55岁,因频发室性早搏入院,如厕时突然倒地不省人事,颈动脉扪不到搏动,未闻及呼吸音,双侧瞳孔散大,此时应立即采取的措施就是(D) A、平卧保暖 B、氧气吸入 C、心电监护 D、CPR E、建立静脉通路 6、患者,男性,7岁,不慎溺水,检查发现该男童面部青紫,首要的处理措施就是(B) A、通知医生 B、清除口鼻分泌物及异物 C、吸氧 D、CPR E、大声呼救 7、当怀疑患者有心跳呼吸骤停时,为迅速确诊,首先应(D) A、测血压 B、听心音 C、数呼吸

D、触颈、股动脉搏动 E、做心电图 8、现代医学主张死亡的依据就是(C) A、心跳停止 B、呼吸停止 C、脑死亡 D、心电图平直 E、瞳孔散大 9、患者,男性,28岁,因触电致心跳呼吸骤停,胸外心脏按压操作哪项不正确(E) A、按压部位在胸骨下端 B、双手相叠按压 C、每次按压胸骨下陷至少5cm D、每分钟至少100次 E、与人工呼吸配合的比率为2:1 10、患者,男性,25岁,在湖里游泳时不慎溺水,抢救出水后发现呼吸心跳已停,如心肺复苏有效,以下哪项不符合救护原则(E) A、保持呼吸道通畅 B、倒水处理 C、心肺复苏 D、糖皮质激素与脱水剂防止脑水肿 E、不宜注射盐水 11、新生儿复苏中,如果心脏停止确定就是由心脏病因性心律不整所造的,建议两人施救者按压通气比(A) A、15:2 B、30:2 C、3:1 D、5:1 E、10:1 12、非专业急救者遇到心跳呼吸停止的无意识患者时应(A) A、立即开始胸外按压 B、给予2次人工呼吸 C、打开气道 D、呼救打120,等待救援 E、就近寻求其她救援人员 13、2010年CPR指南中,一旦循环恢复,监测动脉血氧饱与度大于或等于多少即可(A) A、94% B、100% C、90% D、95% E、85% 14、您瞧见一位45岁男性突然倒下,您让别人打120急救电话,自己开始做心肺复苏,您已经高质量的完成了生存链中的前两个环节,提高该男子生存率的第三步就是(C) A、给予药物治疗 B、将该男子转送至医院进一步治疗

1,2-二溴乙烷

化学品安全技术说明书 化学品中文名：1,2-二溴乙烷 化学品英文名：1,2-dibromoethane; 1,2-ethylene dibromide 企业名称： 生产企业地址： 邮编: 传真: 企业应急电话： 电子邮件地址： 技术说明书编码: √纯品混合物 有害物成分浓度CAS No. 1,2-二溴乙烷106-93-4 危险性类别：第6.1类毒害品 侵入途径：吸入、食入、经皮吸收 健康危害：具有中度麻醉作用。对皮肤粘膜有刺激作用。重者可致肺炎和肺水肿。对中枢神经有抑制作用。可致肝、肾损害。急性中毒可有头痛、头晕、耳鸣、 全身无力、面色苍白、恶心、呕吐，可死于心力衰竭。引起皮炎和结膜炎。 环境危害：对大气可造成污染。 燃爆危险：不燃，无特殊燃爆特性。 皮肤接触：脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。如有不适感，就医。 眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。如有不适感，就医。 吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。呼吸、心跳停止，立即进行心肺复苏术。就医。 食入：饮足量温水，催吐。就医。 危险特性：受高热分解产生有毒的溴化物气体。与强氧化剂接触可发生化学反应。 有害燃烧产物：溴化氢。

灭火方法：用泡沫、干粉、二氧化碳、砂土灭火。 灭火注意事项及措施：消防人员须佩戴防毒面具、穿全身消防服，在上风向灭火。尽可能将容器从火场移至空旷处。喷水保持火场容器冷却，直至灭火结束。处 在火场中的容器若已变色或从安全泄压装置中产生声音，必须马上撤离。 应急行动：根据液体流动和蒸气扩散的影响区域划定警戒区，无关人员从侧风、上风向撤离至安全区。建议应急处理人员戴正压自给式呼吸器，穿防毒服。穿上 适当的防护服前严禁接触破裂的容器和泄漏物。尽可能切断泄漏源。防止泄 漏物进入水体、下水道、地下室或密闭性空间。小量泄漏：用干燥的砂土或 其它不燃材料吸收或覆盖，收集于容器中。大量泄漏：构筑围堤或挖坑收容。 用飞尘或石灰粉吸收大量液体。用泵转移至槽车或专用收集器内。 操作注意事项：密闭操作，加强通风。操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴自吸过滤式防毒面具（半面罩），戴安全防护眼镜， 穿透气型防毒服，戴防化学品手套。防止蒸气泄漏到工作场所空气中。避免 与氧化剂、碱金属接触。搬运时要轻装轻卸，防止包装及容器损坏。配备泄 漏应急处理设备。倒空的容器可能残留有害物。 储存注意事项：储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。保持容器密封。应与氧化剂、碱金属、食用化学品分开存放，切忌混储。储区应备有泄漏应急处理 设备和合适的收容材料。 接触限值： MAC(mg/m3): 未制定标准PC-TWA（mg/m3）: 未制定标准 PC-STEL（mg/m3）: 未制定标准TLV-C(mg/m3): 未制定标准 TLV-TWA(mg/m3): TLV-STEL(mg/m3): 监测方法：无资料。 工程控制：生产过程密闭，加强通风。 呼吸系统防护：空气中浓度超标时，应该佩戴过滤式防毒面具(半面罩)。 眼睛防护：戴安全防护眼镜。 身体防护：穿透气型防毒服。 手防护：戴防化学品手套。 其他防护：工作现场禁止吸烟、进食和饮水。工作完毕，淋浴更衣。单独存放被毒物污染的衣服，洗后备用。注意个人清洁卫生。 外观与性状：无色有甜味的液体，有氯仿味。 pH值: 无资料熔点(℃): 9.3

敲基因小鼠鼠尾基因鉴定实验报告

碱法提取小鼠总DNA及基因鉴定： 一、实验器材：加样枪（1ml、200ul、20ul、10ul）、枪头（大中小一套）、EP管（20ul、1.5ml、 10ml）、试管架、浮标、温度计、胶布、手套、记号笔、锥形瓶、称量匙、冰盒 二、实验试剂：A液、B液、引物、mix、双蒸水、三蒸水、琼脂糖、TBE（5x、1x、回收液）、 核苷酸染料、Marker 三、母液配置： 1.10M NaOH:NaOH 40g加双蒸水至90ml，待NaOH完全溶解冷却后定容至100ml 2.0.5M EDTA：EDTA.Na2盐18.61g, NaOH 1.5g, 加双蒸水至80ml,逐滴加入10M NaOH 至EDTA完全溶解后加双蒸水定容至100ml 3.1M TrisHCl（pH8.0）：Tris碱12.1g，加水至70ml，边搅拌边加入浓盐酸4ml，然后 边逐滴加入1M HCl边测PH值，直至PH升至8.0（+\-0.05），定容至100ml（pH=8.8 的TrisHCl中边加入浓盐酸边测PH值至PH=8.0（+\-0.05）为止） 四、实验步骤： 1.剪取鼠尾（约芝麻大小）储存于-20度冰箱（-20度冰箱，主要是防止DNA降解，4度不 行） 2.提取DNA： 1)配置工作液——20ml体系液：50ul 10M NaOH 加双蒸水至20ml 8ul 0.5M EDTA B液：800ul 1M TrisHCl（pH8.0）加双蒸水至20ml 2)加150ulA液（液体应完全浸没标本），95度水浴锅煮1.5h（将EP管插入浮标 中后用胶布缠好防止EP管在加热过程中爆开） 3)加150ulB液，混匀（上下颠倒3-5下） 4)12000r/min 4度离心5分钟（可储存于-20度冰箱） 3.PCR（冰上操作）：P1 0.5ul（P为AC3I，G为AAA） 1)配置PCR体系——15ul体系P2 0.5ul Mix 7.5ul 三蒸水4.5ul DNA 2ul 2)加2ul上述离心后的上清液至PCR体系，瞬离 3)PCR仪扩增，参数设定：预变性：94度——3min 变性：94度——30s 退火：55度——30s 30个循环 延伸：72度——24s 72度——5min 4度——∞ 4.琼脂糖凝胶电泳： 1)制胶——2%琼脂糖凝胶配方： 总体积（ml）20 30 40 50 60 120 琼脂糖（g）0.4 0.6 0.8 1 1.2 2.4 TBE 1x（ml）20 30 40 50 60 120 Tris-base 13.6g TBE 5x配方：硼酸 6.56g EDTA 0.73g

基因敲除小鼠技术

转基因、基因敲入/敲除动物技术已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的重要技术，该技术从上世纪七八十年代诞生以来，已有近四十年的历史，经典技术如DNA原核显微注射、胚胎干细胞显微注射技术一直以来经久不衰，并逐渐从基 础研究实验室转向商业模式，成为一项高度标准化的新兴产业 一、技术介绍与研究进展 转基因、基因敲入/敲除动物技术已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的重要技术，该技术从上世纪七八十年代诞生 以来，至今已有近四十年的历史，经典技术如DNA原核显微注射、胚胎干细胞显微注射技术一直以来经久不衰，在小鼠模型构建方面日趋完善，并且如同剪切酶和抗体等 常规分子生物学试剂的制备技术一样，逐渐从基础研究实验室转向商业模式，成为一项高度标准化的新兴产业，催生了数以百计的创新药物和数以千计的优秀文章。尽管 如此，传统技术仍然存在一些难以克服的缺陷，如步骤繁琐、周期漫长、成功率低、费用高昂等，而ZFN和TALEN等新技术的出现，或有可能将这一局面彻底改变。 二、同源重组技术原理 基因敲除鼠技术是上世纪80年代中后期基于DNA同源重组的原理发展起来的，Capecchi和Smithies在1987年根据同源重组（homologous recombination）的原理，首次实现了ES的外源基因的定点整合（targeted integration），这一技术称为"基 因打靶"（gene targeting）或"基因敲除"（gene knockout），利用这种ES的显微注射就可以制作出基因敲出小鼠（KO Mice: knockout mice）;由于这一工作，Capecchi 和Smithies于2007年与Evans分享了诺贝尔医学奖。 同源重组（homologous recombination）定义：是指发生在姐妹染色单体（sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。在基因敲除小鼠制作过程中，需要针对目的基因两端特异性片段设计带有相同片段的

小鼠衰老检测

小鼠全体实验记录 1，全身拍照 衰老治疗正常组 正常组衰老治疗组 2，全身称重 寿命 1.对平均寿命（mean lifespan）/最大寿命（maximum lifespan）的影响 二、衰老性心脏肥大 1.心室中部横截面染色，观察截面大小情况，年轻小鼠较小，老年小鼠肥大。

2.心脏重量/胫骨长度（mg/mm），表征肥大状况，数值越大，衰老程度越高。（选择原因：胫骨长度在小鼠发育成熟后不再有变化，可作为量化对比标准） 3.左心室（left ventricle，LVs）PAS染色（过碘酸雪夫染色，periodic acid Schiff stain），观察细胞横截面积大小。（心脏肥大是因为细胞个体变大还是细胞数量变多） 4.心肌细胞（cardiomyocyte，CM）横截面积（crosssectional area，CSA）测定。雌雄分组，每个动物选5个独立切片，结果根据平均值计算，测量方法：选取一定面积区域，数区域内细胞数量，计算出心肌细胞横截面积。

5.小鼠心脏部位取材，RT-PCR测量心房利尿钠肽（atrial natriuretic peptide，ANP）,脑钠素（brain natriuretic peptide，BNP）,肌浆网钙ATP酶（sarcoplasmic reticulum calcium ATPase，SERCA-2）的表达量。 6.Western测生长分化因子11 （growth differentiation factor 11，GDF11）在血浆的水平。老年小鼠少，年轻小鼠多。

三、认知功能 1.Morris水迷宫实验（Morris water maze，MWM）。学习逆转阶段评估短期学习记忆能力、探索阶段评估长期记忆、对象偏好评估识别记忆、对新伙伴的认可能力。 2.海马裂解物中，免疫印迹定量突触蛋白I（synapsin I）、突触素（synaptophysin）、突触后密度蛋白（postsynaptic density protein 95，PSD95）。 3.测定整个海马的基因表达谱，2090个可变表达基因分层聚类。156个最上调和76个最下调的转录物进行基因本体富集分析的网络可视化。

课题-基因敲除小鼠的pcr鉴定

课题-基因敲除小鼠的pcr鉴定

一、技术介绍与研究进展 转基因、基因敲入/敲除动物技术已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的重要技术，该技术从上世纪七八十年代诞生以来，至今已有近四十年的历史，经典技术如DNA原核显微注射、胚胎干细胞显微注射技术一直以来经久不衰，在小鼠模型构建方面日趋完善，并且如同剪切酶和抗体等常规分子生物学试剂的制备技术一样，逐渐从基础研究实验室转向商业模式，成为一项高度标准化的新兴产业，催生了数以百计的创新药物和数以千计的优秀文章。尽管如此，传统技术仍然存在一些难以克服的缺陷，如步骤繁琐、周期漫长、成功率低、费用高昂等，而ZFN和TALEN 等新技术的出现，或有可能将这一局面彻底改变。 二、同源重组技术原理 基因敲除鼠技术是上世纪80年代中后期基于DNA同源重组的原理发展起来的，Capecchi和Smithies在1987年根据同源重组（homologous recombination）的原理，首次实现了ES的外源基因的定点整合（targeted integration），这一技术称为"基因打靶"（gene targeting）或"基因敲除"

（gene knockout），利用这种ES的显微注射就可以制作出基因敲出小鼠（KO Mice: knockout mice）;由于这一工作，Capecchi和Smithies于2007年与Evans分享了诺贝尔医学奖。 同源重组（homologous recombination）定义：是指发生在姐妹染色单体（sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。在基因敲除小鼠制作过程中，需要针对目的基因两端特异性片段设计带有相同片段的重组载体，将重组载体导入到胚胎干细胞后外源的重组载体与胚胎干细胞中相同的片段会发生同源重组，如图1所示： 图1.基因敲除鼠制作同源重组原理示意图 三、制作流程

D-半乳糖致衰老模型小鼠皮肤衰老的观察

D-半乳糖致衰老模型小鼠皮肤衰老的观察 关键词：皮肤衰老半乳糖2008-07-14 00:00 来源：丁香园点击次数：1741 [摘要]目的观察D-半乳糖连续皮下注射对小鼠皮肤衰老指标的影响。方法 3月龄KM雌性小鼠60只,随机分为空白对照组(注射生理盐水)、D-半乳糖低剂量组(80mg/kg)和D-半乳糖高剂量组(1000mg/kg),连续每日背部皮下注射42天后,观察小鼠皮肤中与衰老相关的生化指标及组织病理学变化,并用计算机图像分析系统定量分析。结果高剂量组小鼠真皮厚度〔(624.5±48.5)μm〕较对照组〔(839.3±58.4)μm〕显著变薄(P<0.05),胶原纤维减少,排列疏松,弹力纤维总面积亦显著减少(P<0.05);高剂量组皮肤中超氧化物歧化酶(SOD)活性〔(131.2±11.5) U/ml〕、羟脯氨酸含量〔(0.57±0.13)μg/mg〕显著低于对照组的〔(178.1±20.7) U/ml、(0.74±0.17)μg /mg,P<0.05〕,丙二醛(MDA)含量增加〔(9.4±1.5)nmol/g和 (6.8±1.5)nmol/g,P<0.05〕;而低剂量组上述改变则不显著。结论每日1000mg/kg D-半乳糖连续皮下注射42天,可导致小鼠皮肤的明显衰老,为抗皮肤衰老研究提供一个简便、稳定的实验模型。 衰老是生物体在生命周期中随年龄增长而发生的全身组织、器官功能减退和稳态下降的过程。随着世界人口加速老龄化,抗衰老研究已成为迅速崛起的一门应用科学。若在人体上进行这一漫长衰老过程的研究及对抗衰老药物进行疗效观察是不易做到的,因此,人们根据衰 老的机制建立了许多动物衰老模型。目前,应用最多的是D-半乳糖所致的亚急性衰老模型,它可引起心、肝、肾、脑等重要器官的代谢异常,类似人类自然衰老时的表现[1]。我们于2003年1~6月采用KM雌性小鼠连续皮下注射D-半乳糖,建立小鼠亚急性衰老模型,观察衰老小鼠皮肤中与衰老相关的生化指标及组织病理学变化,为皮肤抗衰老研究提供实验工具。 材料和方法 一、材料与仪器 1.实验动物:选用3月龄清洁级KM雌性小鼠60只(广东医学院实验动物中心提供),平均体重(30±2)g,标准饲料饲养。 2.实验仪器:AE-240型电子分析天平(上海Mettler-Toledo仪器有限公司),JB-2型恒温磁力搅拌器(上海雷磁仪器厂),SHHW21.600三用电热恒温水浴箱子(天津市华北实验仪器有限公司),DHG-9070型电热恒温鼓风干燥箱子(上海医用恒温设备厂),752型紫外分光光度计(上海第三分析仪器厂),内切式组织匀浆机(浙西机械厂);55P-72超速离心机(日本Hitacht公司);计算机图象数字化分析系统(德国LEICA公司)。 3.主要试剂:D-半乳糖(上海试剂二厂);盐酸苄胺(上海试剂厂);硫代巴比妥酸(TBA,美国Sigma公司);四乙二氧基丙烷(瑞士Fluka公司);L-羟脯氨酸(中科院上海生化所);DTNB(德国Feinbiochemica公司);超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(南京建成生物科技公司);考马斯亮蓝 G250(瑞士Fluka公司);其余试剂均为市售分析纯。 二、实验方法 1.动物分组、给药及处理:动物随机分为3组:空白对照组、D-半乳糖低剂量组和D-半乳糖高剂量组,每组20只。对照组:每日背部皮下注射生理盐水0·2 ml。低剂量组:每日背部皮下注射D-半乳糖80 mg/kg;高剂量组:每日背部皮下注射D-半乳糖1000 mg/kg,注射均按无菌操作进行。42天后,所有小鼠摘眼球放血处死,立即检测全血中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过

乙酸酐

化学品安全技术说明书 化学品中文名：乙酸酐; 醋酸酐 化学品英文名：acetic anhydride; ethanoic anhydride 企业名称： 生产企业地址： 邮编: 传真: 企业应急电话： 电子邮件地址： 技术说明书编码: √纯品混合物 有害物成分浓度CAS No. 乙酸酐108-24-7 危险性类别：第8.1类酸性腐蚀品 侵入途径：吸入、食入、经皮吸收 健康危害：吸入后对呼吸道有刺激作用，引起咳嗽、胸痛、呼吸困难。蒸气对眼有刺激性。眼和皮肤直接接触液体可致灼伤。口服灼伤口腔和消化道，出现腹痛、 恶心、呕吐和休克等。慢性影响受本品蒸气慢性作用的工人，可有结膜炎、 畏光、上呼吸道刺激等。 环境危害：对水生生物有毒作用。 燃爆危险：易燃，其蒸气与空气混合，能形成爆炸性混合物。 皮肤接触：立即脱去污染的衣着，用大量流动清水冲洗20～30分钟。如有不适感，就医。 眼睛接触：立即提起眼睑，用大量流动清水或生理盐水彻底冲洗10～15分钟。如有不适感，就医。 吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。呼吸、心跳停止，立即进行心肺复苏术。就医。 食入：用水漱口，给饮牛奶或蛋清。就医。

危险特性：易燃，其蒸气与空气可形成爆炸性混合物，遇明火、高热能引起燃烧爆炸。 与强氧化剂接触可发生化学反应。 有害燃烧产物：一氧化碳。 灭火方法：用雾状水、抗溶性泡沫、干粉、二氧化碳灭火。 灭火注意事项及措施：消防人员必须穿全身耐酸碱消防服、佩戴空气呼吸器灭火。尽可能将容器从火场移至空旷处。喷水保持火场容器冷却，直至灭火结束。处 在火场中的容器若已变色或从安全泄压装置中产生声音，必须马上撤离。 应急行动：消除所有点火源。根据液体流动和蒸气扩散的影响区域划定警戒区，无关人员从侧风、上风向撤离至安全区。建议应急处理人员戴正压自给式呼吸器， 穿防静电、防腐服。穿上适当的防护服前严禁接触破裂的容器和泄漏物。尽 可能切断泄漏源。勿使泄漏物与可燃物质（如木材、纸、油等）接触。防止 泄漏物进入水体、下水道、地下室或密闭性空间。小量泄漏：用干燥的砂土 或其它不燃材料覆盖泄漏物，用洁净的无火花工具收集泄漏物，置于一盖子 较松的塑料容器中，待处置。大量泄漏：构筑围堤或挖坑收容。用飞尘或石 灰粉吸收大量液体。用稀苛性钠(NaOH)或苏打灰(Na2CO3)中和。用耐腐蚀泵 转移至槽车或专用收集器内。 操作注意事项：密闭操作，加强通风。操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴自吸过滤式防毒面具（全面罩），穿防酸碱塑料工作 服，戴橡胶耐酸碱手套。远离火种、热源，工作场所严禁吸烟。使用防爆型 的通风系统和设备。防止蒸气泄漏到工作场所空气中。避免与氧化剂、还原 剂、酸类、碱类、活性金属粉末、醇类接触。搬运时要轻装轻卸，防止包装 及容器损坏。配备相应品种和数量的消防器材及泄漏应急处理设备。倒空的 容器可能残留有害物。 储存注意事项：储存于阴凉、干燥、通风良好的库房。远离火种、热源。库温不超过32℃，相对湿度不超过80％。保持容器密封。应与氧化剂、还原剂、酸类、 碱类、活性金属粉末、醇类等分开存放，切忌混储。采用防爆型照明、通风 设施。禁止使用易产生火花的机械设备和工具。储区应备有泄漏应急处理设 备和合适的收容材料。 接触限值： MAC(mg/m3): -PC-TWA（mg/m3）: 16 PC-STEL（mg/m3）: 32*TLV-C(mg/m3): - TLV-TWA(mg/m3): 5ppm TLV-STEL(mg/m3): - 监测方法：溶剂解吸-气相色谱法。

衰老动物模型及其研究进展

2019年9月第29卷一第9期中国比较医学杂志CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE September,2019Vol.29一No.9卢延华,管博文,孟爱民.衰老动物模型及其研究进展[J].中国比较医学杂志,2019,29(9):109-113. Lu YH,Guan BW,Meng AM.Research progress in aging animal models [J].Chin J Comp Med,2019,29(9):109-113. doi:10.3969/j.issn.1671-7856.2019.09.017[基金项目]中国医学科学院医学与健康科技创新工程经费资助(2017-I2M-3-015);国家重点研发计划(2017YFA0105204);国家自然科学 基金(81573094)三 [作者简介]卢延华(1993 ),女,硕士研究生,专业:放射医学三E-mail:2439660316@https://www.docsj.com/doc/c51716892.html, [通信作者]孟爱民(1963 ),女,研究员,研究方向:造血干细胞放化疗损伤机制研究三E-mail:ai_min_meng@https://www.docsj.com/doc/c51716892.html, 衰老动物模型及其研究进展 卢延华,管博文,孟爱民? (中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室,北京市人类重大疾病实验动物模型工程技术研究中心,北京一100021) 一一?摘要?一衰老是生物体的必然结局三延缓衰老延长寿命二减少老年病改善老年人生活质量一直是人们的研究热点三构建衰老动物模型,使实验动物呈现与人类相似的衰老表型,是研究人类衰老机制和研发抗衰老药物的 重要手段三目前广泛应用的衰老模型,涵盖了从果蝇二线虫等无脊椎动物,到小型鱼类二啮齿动物和非人灵长类等 等三近年来,各种基因修饰小鼠在研究衰老发生二发展及干预评价中起到重要作用;另外在常规模式动物之外,选 用寿命不同的生物以及寿命差异较大的同一物种,进行寿命相关生物学分析也为研究衰老提供了新的手段三由于 衰老是复杂的生物学过程,影响因素多,只有充分进行比较医学研究才能更好地将研究成果转化,为人类健康老年 提供保障三 ?关键词?一衰老;动物模型;比较医学 ?中图分类号?R -33一一?文献标识码?A一一?文章编号?1671-7856(2019)09-0109-05 Research progress in aging animal models LU Yanhua,GUAN Bowen,MENG Aimin ?(Institute of Laboratory Animal Sciences,Chinese Academy of Medical Sciences (CAMS);Comparative Medicine Center, Peking Union Medical College (PUMC);NHC Key Laboratory of Human Disease Comparative Medicine;Beijing Engineering Research Center for Experimental Animal Models of Human Critical Diseases,Beijing 100021,China)一一?Abstract ?一Aging is an inevitable outcome for all organisms.Researchers are exploring how to delay senescence and reduce the incidences of age-related diseases,prolong life-span and improve the quality of life in old age.Establishing aging animal models that show aging phenotypes similar to those of humans is an effective way to explore the mechanisms of human aging and research of anti-aging drugs.There are various animal models,such as nematodes,rodents and primates.In recent years,different types of genetically modified mice have emerged.At the same time,researchers have started to use animal models with different life-spans to conduct comparative studies.As aging is a complex biological process with many influencing factors,only by conducting fully comparative medical research can we better transform the research results of aging and guarantee healthier aging of human beings.?Keywords ?一aging;animal model;comparative medicine 一一据年鉴显示,2017年末中国老年人口(65岁及以上)占全国总人口的11.4%,已达1.58亿[1]三老龄化不可避免地伴随一系列社会医疗问题,衰老相 关疾病也给人类带来了沉重的疾病负担,如何延缓