中华人民共和国国家标准 生活饮用水标准检验方法微生物指标

中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验方法微生物指标Standard examination methods for drinking water一Microbioloical parameters

1、菌落总数

1.1平皿计数法1.1.1范围本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定。1.1.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。1.1.

2.1菌落总数standard plate - count 加cteria水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1ml水样所含菌落的总数

1.1.3培养基与试剂1.1.3.1营养琼脂1.1.3.1.1成分：A 蛋白陈10gB 牛肉膏3g

C 氯化钠5g

D 琼脂10g——20g

E 蒸馏水1000ml1.3.1.2制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4一7.6，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43 kPa (121℃，15lb）灭菌20 min，储存于冷暗处备用。

1.1.4仪器

1.1.4.1高压蒸汽灭菌器。

1.1.4.2干热灭菌箱。

1.1.4.3培养箱36℃士2℃。

1.1.4.4电炉。

1.1.4.5天平。

1.1.4.6冰箱。1.1.4.7放大镜或菌落计数器。1.1.4.8 pH计或精密pH试纸。1.1.4.9灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等1.1.5检验步骤1.1.5.1生活饮用水1.1.5.1.1门以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注人灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照1.1.5.1.2待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36℃士1℃培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为水样1 ml 中的菌落总数1.1.5.2水源水1.1.5.

2.1以无菌操作方法吸取lml充分混匀的水样，注入盛有9ml、灭菌生理盐水的试管中，混匀成1 : 10稀释液。1.1.5.2.2吸取I : 10的稀释液工ml注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成l ：10稀释液。按同法依次稀释成l : 1000 , l : 10000稀释液等备用。如此递增稀释一次，必须更换一支1mL灭菌吸管。1.1.5.2.3用灭菌吸管取未稀释的水样和2个——3个适宜稀释度的水样1ml，分别注入灭菌平皿内以下操作同生活饮用水的检验步骤。1.1.6菌落计数及报告方法作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。1.1.7不同稀释度的选择及报告方法1.1.7.1首先选择平均菌落数在30一300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例1）1.1.7.2若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30一300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数（如表1中实例2）若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数（如表l中实例3）若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数（见表l中实例4）。1.1.7.3若所有稀释度的

平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例5 )1.1.7.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表l中实例6）。1.1.7.5若所有稀释度的平均菌落数均不在30——300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例7）。1.1.7.6若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之1.1.7.7如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2个平板1cm翌中的菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落数．乘以皿底面积63.6cm2，再乘其稀释倍数作报告。1.1.7.8菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五人方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示（见表I“报告方式”栏）

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Standard examination methods for drinking water一Microbiolo只ical parameters 2、总大肠菌群

2.1多管发酵法2.1.1范围本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定。

2.1.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准2.1.2.1总大肠菌群total coljforms 总大肠菌群指一群在37℃培养2h能发酵乳搪、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌2.1.3培养基与试荆2.1.

3.1门乳糖蛋白膝培养液2.1.3.1.1成分 A 蛋白陈 10g B 牛肉膏 3g C 乳糖 5g D 氯化钠 5g E 嗅甲酚紫乙醇溶液（16g/L) 1mL F 蒸馏水 1000ml2.1.3.1.2制法将蛋白陈、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整pH为7.2——7.4，再加人1 ml 16g/l的澳甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，68.95kPa (115℃，10lb）高压灭菌20min，贮存于冷暗处备用2.1.3.2二倍浓缩乳糖蛋白膝培养液按上述乳糖蛋白陈培养液〔2.1.3.1)，除蒸馏水外，其他成分量加倍。2.1.3.3伊红美蓝培养基

2.1.

3.3.1成分 A 蛋白陈 10g

B 乳糖 10g

C 磷酸氢二钾 2g

D 琼脂 20g一30g

E 蒸馏水 l000ml

F 伊红水溶液（20g/l) 20ml

G 美蓝水溶液（5g/L) 13ml 2.1.3.3.2制法将蛋白陈、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH为7.2，加人乳糖，混匀后分装，以68.95kPa (115℃，10lb）高压灭菌20min。临用时加热融化琼脂，冷至50℃～55℃，加入伊红和美蓝溶液，混匀，倾注平皿。2.1.3.4革兰氏染色液2.1.3.4.1结晶紫染色液A成分： a 结晶紫 1g b 乙醇（95%，体积分数） 20mL c 草酸钱水溶液（10g/l） 80mLB 制法：将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸馁溶液混合。注：结晶紫不可用龙胆紫代替，前者是纯品，后者不是单一成分，易出现假阳性结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。2.1.3.4.2革兰氏碘液A成分： a 碘 1g b 碘化钾 2g

c 蒸馏水 300 mlB制法：将碘和碘化钾先进行混合，加人蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水。

2.1.

3.

4.3脱色剂乙醇（95%，体积分数）。2.1.3.4.4沙黄复染液A成分： a 沙黄 0.25g b 乙醇（95沉，体积分数） 10ml c 蒸馏水 90mLB 制法：将沙黄溶解于乙醇中，待完全溶解后加人蒸馏水2.1.3.4.5染色法A将培

养18h一24h的培养物涂片。B将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。C滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。D滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止，约30s，水洗E滴加复染剂，复染1min，水洗，待干，镜检。2.1.4仪器2.1.4.1培养箱：36℃士1℃。2.1.4.2冰箱：0℃～4℃。2.1.4.3天平2.1.4.4显微镜。2.1.4.5平皿：直径为9cm。2.1.4.6试管2.1.4.7分度吸管：1mL , 10mL。

2.1.4.8锥形瓶2.1.4.9小倒管。2.1.4.10载玻片2.1.5检验步骤2.1.5.1乳糖发酵试验2.1.5.1.1取10ml水样接种到10ml双料乳糖蛋白陈培养液中，取lml水样接种到10mL单料乳糖蛋白陈培养液中，另取1mL水样注入到9mL灭菌生理盐水中，混匀后吸取1ml（即0.1ml水样）注入到10ml单料乳糖蛋白陈培养液中，每一稀释度接种5管对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每天检验一次的，可直接种5份10 mL水样双料培养基，每份接种10ml水样2.1.5.1.2检验水源水时，如污染较严重，应加大稀释度，可接种1，0.1，0.0lmL甚至0.1 ,0.01 ,0.001 ml，每个稀释度接种5管，每个水样共接种15管。接种1mL以下水样时，必须作10倍递增稀释后，取1mL接种．每递增稀释一次，换用1支1 mL灭菌刻度吸管。2.1.5.1.3将接种管置36℃士l℃培养箱内，培养24h士2h，如所有乳糖蛋白膝培养管都不产气产酸，则可报告为总大肠菌群阴性，如有产酸产气者，则按下列步骤进行。2.1.5.2分离培养将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于36℃土1℃培养箱内培养18h——24h，观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落作革兰氏染色、镜检和证实试验深紫黑色、具有金属光泽的菌落；紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色、中心较深的菌落2.1.5.3证实试验经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽抱杆菌，同时接种乳糖蛋白豚培养液，置36℃士1℃培养箱中培养24h士2h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在2.1.6结果报告根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN ( most Probable number，最可能数）检索表，报告每l00ml水样中的总大肠菌群最可能数（MPN）值。乌管法结果见表2.15管法结果见表3稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数。如所有乳糖发酵管均阴性时，可报告总大肠菌群未检出。

表2 用5份10mL水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（MPN )

5个10ml管中阳性管数最可能数（MPN）

0 < 2.2

1 2.2

2 5.1

3 9.2

4 16.0

5 >16

2.2滤膜法2.2.1范围本标准规定了用滤膜法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定2.2.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.2.2.1总大肠菌群滤膜法membrane rilter technique ror total coliforms总大肠菌群滤膜法是指用孔径为0.45um的微孔滤膜过滤水样，将滤膜贴在添加乳糖的选择隆培养基上37℃培养24h，能形成特征性菌落的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌以检测水中总大肠菌群的方法。

2.2.3培养基与试剂2.2.

3.1品红亚硫酸钠培养基

2.2.

3.1.1成分： A 蛋白膝 10g B 酵母浸膏 5g C牛肉膏 5g D 乳糖 10g

E 琼脂 15g——20g

F 磷酸氢二钾 3.5g

G 无水亚硫酸钠 5g

H 碱性品红乙醇溶液（50g/L) 20 mL

I 蒸馏水 1000 mL

2.2.

3.1.2储备培养基的制备先将琼脂加到500ml蒸馏水中，煮沸溶解，于另500ml一蒸馏水中加人磷酸氢二钾、蛋白陈、酵母浸膏和牛肉膏，加热溶解，倒人已溶解的琼脂，补足蒸馏水至1000mL，混匀后调pH为7.2一7.4，再加人乳糖，分装，68.95 kPa (115℃,10lb）高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基，使用时加2 mL一3 mL于灭菌吸收垫上．再将滤膜置于培养垫上培养2.2.3.1.3平皿培养基的配制将上法制备的储备培养基加热融化，用灭菌吸管按比例吸取一定量的50g/l的碱陛品红乙醇溶液置于灭菌空试管中，再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一灭菌试管中，加灭菌水少许，使其溶解后，置沸水浴中煮沸10min以灭菌。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉色为止，将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此种培养基15 ml倾人已灭菌的空平皿内待冷却凝固后置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存不宜超过两周。如培养基已由淡粉色变成深红色，则不能再用

2.2.

3.2乳糖蛋白膝培养液同2.1.3.1。

2.2.4仪器

2.2.4.1滤器

2.2.4.2滤膜，孔径0.45um

2.2.4.3抽滤设备

2.2.4.4无齿镊子。2.2.4.5其他仪器同多管发酵法2.1.42.2.5检验步骤2.2.5.1准备工作2.2.5.1.1滤膜灭菌：将滤膜放人烧杯中，加人蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次巧m谊。前两次煮沸后需更换水洗涤2次～3次，以除去残留溶剂。

2.2.5.1.2滤器灭菌：用点燃的酒精棉球火焰灭菌。也可用蒸汽灭菌器l0

3.43kPa (121℃，151b）高压灭菌20min。

2.2.5.2过滤水样用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100mL水样（如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释）注人滤器中，打开滤器阀门，在一5.07*10（4）Pa（负0.5大气压）下抽滤。2.2.5.3培养水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分。移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37℃恒温箱内培养24h士2h。2.2.6结果观察与报告2.2.6.1挑取符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检：紫红色、具有金属光泽的菌落；深红色、不带或略带金属光泽的菌落；淡红色、中心色较深的菌落2.2.6.1.1凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，再接种乳糖蛋白脉培养液，于37℃培养24h，有产酸产气者，则判定为急大肠菌群阳性2.2.6.1.2按式（1）计算滤膜上生长的总大肠菌群数，以每100ml水样中的总大肠菌群数（CFU／100ml)报告之

总大肠菌群菌落数（CFU／100ml)=数出的总大肠菌群数*100/过滤的水样体积（ml）

2.3酶底物法2.

3.1范围本标准规定了用酶底物法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的检测。本法可

在24h判断水样中是否含有总大肠菌群及含有的总大肠菌群的最可能数（MPN）。本法可同时检测大肠埃希氏菌，见大肠埃希氏菌检测（4.3）。2.3.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.3.2.1 总大肠菌群酶底物法enzym : sub , trate technique for total coliforms 总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生价半乳糖昔酶的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，以此技术来检测水中总大肠菌群的方法

2.3.3培养基与试荆2.3.3.1培养基在本标准中酶底物法采用固定底物技术，本方法采用( MMO一MUG）培养基，可选用市售商品化制品。每1000mlMMO一MUG培养基所含基本成分为： A硫酸铵 5.0g B硫酸锰 0.5 rng C硫酸锌 0.5 mg D硫酸镁 100 mg E氯化钠 10g F氯化钙 50mg G亚硫酸钠 40mg H两性霉素B 1mg 1邻硝基苯件-β-D-毗喃半乳糖普（ONPG ) 500mg J4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸普（MUG ) 75mg K茄属植物萃取物（solanium萃取物） 500mg L N-2-乙基呱嗓NZ乙磺酸钠盐（HEPES钠盐） 5.3g M N-2-乙纂呱嗦NZ乙磺酸（HEPEs ) 6.9g 2.3.3.2生理盐水 8.5g/l的生理盐水，用于稀释样品成分：

氯化钠 8.5g蒸馏水加至1000mL 溶解后．分装到稀释瓶内，每瓶90mL , 103.43kPa ( 121℃, 15lb) 20min高压灭菌

2.3.4仪器设备2.3.4.1量筒：100ml、500ml、l000ml。2.3.4.2吸管：lml、5ml及10ml的无菌玻璃吸管或塑料一次性吸管2.3.4.3稀释瓶：100ml、250ml、500mL 及1O00ml能耐高压的灭菌玻璃瓶2.3.4.4试管：可高压灭菌的玻璃或塑料试管，大小约15mm*10cm。2.3.4.5培养箱：36℃士1℃。2.3.4.6高压蒸汽灭菌器。2.3.4.7于热灭菌器（烤箱）。2.3.4.8定量盘：定量培养用无菌塑料盘，含51个孔穴，每一孔穴可容纳2ml水样。

2.3.4.9程控定量封口机：用于51孔或97孔法（MPN法，最可能数法）定量盘的封口。

2.3.5检验步骤2.3.5.1水样稀释检测所需水样为100mL若水样污染严重，可对水样进行稀释。取10mL水样加人到90ml灭菌生理盐水中，必要时可加大稀释度。2.3.5.2定性反应用100ml的无菌稀释瓶量取100mL水样，加入2.7g士0.5gMMO—MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解后，放人36℃士1℃的培养箱内培养24h。2.3.5.3 10管法2.3.5.3.1用100ml的无菌稀释瓶量取100mL水样，加人2.79士0.5gMMO—MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解2.3.5.3.2准备10支15mm*10cm或适当大小的灭菌试管，用无菌吸管分别从前述稀释瓶中吸取10ml水样至各试管中，放人36℃士1℃的培养箱中培养24h。2.3.5.4 51孔定量盘法2.3.5.4.1用100ml的无菌稀释瓶量取100mL水样，加人2.7g士0.5gMMO一MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解。2.3.5.4.2将前述100 ml 水样全部倒人51孔无菌定量盘内，以手抚平定量盘背面以赶除孔穴内气泡，然后用程控定量封口机封口。放入36℃士1℃的培养箱中培养24h。

2.3.6结果报告2.3.6.1结果判读将水样培养24h后进行结果判读，如果结果为可疑阳性，可延长培养时间到28h进行结果判读，超过28h之后出现的颜色反应不作为阳性结果。2.3.6.2定性反应水样经24h培养之后如果颜色变成黄色，判断为阳性反应，表示水中含有总大肠菌群。水样颜色未发生变化，判断为阴性反应定性反应结果以总大肠菌群检出或未检出报告2.3.6.3 10管法2.3.6.3.1将培养

24h之后的试管取出观察，如果试管内水样变成黄色则表示该试管含有总大肠菌群。2.3.6.3.2计算有黄色反应的试管数，对照表4查出其代表的总大肠菌群最可能数（MPN）。结果以MPN/100 mL表示。如所有管未产生黄色，则可报告为总大肠菌群未检出。

2.3.6.4 51孔定量盘法2.3.6.4.1将培养24h之后的定量盘取出观察，如果孔穴内的水样变成黄色则表示该孔穴中含有总大肠菌群。

2.3.6.4.2计算有黄色反应的孔穴数，对照表5查出其代表的总大肠菌群最可能数（MPN）。结果以ml表示。如所有孔未产生黄色，则可报告为总大肠菌群未检出。

3.1多管发酵法3.1.1范围本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源水中的耐热大肠菌群。本法适用于生活饮用水及其水源水中耐热大肠菌群的测定。3.1.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准 3.1.2.1耐热大肠菌群thermotolerant coliform bacteria用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，在4

4.5℃仍能生长的大肠菌群，称为耐热大肠菌群。3.1.3培养基与试剂 3.1.3.1 EC培养墓 3.1.3.1.11成分： A 胰蛋白脉 20g B 乳糖 5g C 3号胆盐或提合胆盐〕 1.5g D 磷酸氢二钾 4g

E 磷酸二氢钾 1.5g

F 氯化钠 5g

G 蒸馏水 1000mL3.1.3.1.2制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，分装到带有倒管的试管中，68.95 kPa (l15℃，10lb）高压灭菌20min，最终pH为6.9士0.23.1.3.2伊红美蓝琼脂同2.1.3.33.1.4仪器3.1.4.1恒温水浴：44.5℃士0.5℃或隔水式恒温培养箱。3.1.4.2其他同总大肠菌群多管发酵法（2.1.4.1——2.1.4.9 )3.1.5检验步骤3.1.5.1自总大肠菌群乳糖发酵试验中的阳性管（产酸产气）中取1滴转种于EC培养基中．置44.5℃水浴箱或隔水式恒温培养箱内（水浴箱的水面应高于试管中培养基液面），培养24h 士2h，如所有管均不产气，则可报告为阴性，如有产气者，则转种于伊红美蓝琼脂平板上，置44.5℃培养18h—24h，凡平板L有典型菌落者，则证实为耐热大肠菌群阳性3.1.5.2如检测未经氯化消毒的水，且只想检测耐热大肠菌群时，或调查水源水的耐热大肠菌群污染时，可用直接多管耐热大肠菌群方法，即在第一步乳糖发酵试验时按总大肠菌群 2.1.5工接种乳糖蛋白陈培养液在44.5℃士0.5℃水浴中培养，以下步骤同3.1.5.1。3.1.6结果报告根据证实为耐热大肠菌群的阳性管数，查最可能数（MPN）检索表，报告每100 mL水样中耐热大肠菌群的最可能数（MPN）值。3.2滤膜法3.2.1范围本标准规定了用滤膜法测定生活饮用水及低浊度水源水中的耐热大肠菌群本法适用于生活饮用水及低浊度水源水中耐热大肠菌群的测定 3.2.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。

3.2.2.1 耐热大肠菌群滤膜法mcmbrane filter technique for thermotolerant colifl甘nl bacteria耐热大肠菌群滤膜法是指用孔径为0.45um的滤膜过滤水样，细菌被阻留在膜上，将滤膜贴在添加乳糖的选择性培养基上，4

4.5℃培养24h能形成特征性菌落以此来检测水中耐热大肠菌群的方法3.2.3培养基与试荆3.2.3.1 MFC培养基3.2.3.1.1成分 A 胰陈 10g B 多陈 5g C 酵母浸膏 3g D 氯化钠 5g E 乳糖 12.5g F 3号胆盐或混合胆盐 1.5g

G 琼脂 15g H 苯胺蓝 0.2g I 蒸馏水 1000ml

3.2.3.1.2制法在l000mL蒸馏水中先加人玫红酸（10g/l）的0.2mol/L氢氧化钠溶液10mL，混匀后，取500mL加人琼脂煮沸溶解，于另外500ml蒸馏水中，加人除苯胺蓝以外的其他试剂，加热溶解，倒人已溶解的琼脂，混匀调pH为7.4，

加人苯胺蓝煮沸，迅速离开热源，待冷却至60℃左右，制成平板，不可高压灭菌。

制好的培养基应存放于2℃～10℃，不超过96h。本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基使用时加2mL——3mL于灭菌吸收垫上，再将滤膜置于培养垫上培养3.2.3.2 EC培养基同3.1.3.13.2.4仪器3.2.4.1隔水式恒温培养箱或恒温水浴3.2.4.2玻璃或塑料培养皿：60mm*15mm或50mm*12mm。3.2.4.3其他仪器同2.2.43.2.5检验步骤3.2.5.1准备工作同2.2.5.1。3.2.5.2过滤水样同2.2.5.2。3.2.5.3培养：水样滤完后，再抽气约5s，关仁滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在MFC培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放人44.5℃隔水式培养箱内培养24h士2h。如使用恒温水浴，则需用塑料平皿，将皿盖紧，或用防水胶带贴封每个平皿，将培养皿成叠封人塑料袋内，浸到44.5℃恒温水浴里，培养24h士2h耐热大肠菌群在此培养基上菌落为蓝色，非耐热大肠菌群菌落为灰色至奶油色。3.2.5.4对可疑菌落转种EC培养基，44.5℃培养24h士2h，如产气则证实为耐热大肠菌群

3.2.6结果报告计数被证实的耐热大肠菌落数，水中耐热大肠菌群数系以100ml，水样中耐热大肠菌群菌落形成单位（CFU）表示，见式（2）。

耐热大肠菌菌落数（CFU/100ml）=所计得的耐热大肠菌菌落数*100/过滤的水样体积（mL )

4、大肠埃希氏菌

4.1多管发酵法4.1.1范围本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源水中的大肠埃希氏菌。本法适用于生活饮用水及其水源水中大肠埃希氏菌的测定。4.1.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准4.1.2.1大肠埃希氏菌多管发酵法multiple tube fermentation technique for Escherichia coli大肠埃希氏菌多管发酵法是指多管发酵法总大肠菌群阳性，在含有荧光底物的培养基上44.5℃培养24h产生β-葡萄糖醛酸酶，分解荧光底物释放出荧光产物，使培养基在紫外光下产生特征性荧光的细菌，以此来检测水中大肠埃希氏菌的方法4.1.3培养基与试剂 4.1.3.1 EC - MUG培养基 4.1.3.1.1成分 A 胰蛋白陈 20.0g B 乳糖

5.0g C 3号胆盐或混合胆盐 1.5g D 磷酸氢二钾 4.0g E 磷酸二氢钾 1.5g F 氯化钠 5.0g G 4-甲基伞形酮书-β-D-葡萄糖醛酸昔（MUG）0.05g4.1.3.1.2制法将干燥成分加人水中，充分混匀，加热溶解，在366nm紫外光下检查无自发荧光后分装于试管中，68.95 kPa (115℃，10lb）高压灭菌20min，最终pH为

6.9士0.2

4.1.4仪器4.1.4.1紫外光灯：6W、波长366nm的紫外灯，用于观测荧光反应4.1.4.2培养箱：36℃士1℃。4.1.4.3天平。4.1.4.4平皿：直径为9cm4.1.4.5试管4.1.4.6分度吸管：1 ml , 10 mL4.1.4.7锥形瓶。4.1.4.8小倒管4.1.4.9金属接种环4.1.4.10冰箱：O℃一4℃。4.1.5检验步骤4.1.

5.1接种将总大肠菌群多管发酵法初发酵产酸或产气的管进行大肠埃希氏菌检测。用烧灼灭菌的金属接种环或无菌棉签将上述试管中液体接种到EC-MUG管中。4.1.5.2培养将已接种的EC-MUG管在培养箱或恒温水浴中44.5℃士0.5℃培养24h士2h。如使用恒温水浴，在接种后30min内进行培养，使水浴的液面超过EC-MUG管的液面。4.1.6结果观察与报告将培养后的EC一MUG管在暗处用波长为366nm功率为6W的紫外光灯照射，如果有蓝色荧光产生则表示水样中含有大肠埃希氏菌。计算EC-MUG

阳性管数，查对应的最可能数（MPN）表得出大肠埃希氏菌的最可能数，结果以MPN/100 ml报告。4.2滤膜法4.2.1范围本标准规定了用滤膜法测定生活饮用水及其水源水中的大肠埃希氏菌本法适用于生活饮用水及其水源水中大肠埃希氏菌的测定4.2.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。4.2.2.1大肠埃希氏菌谁膜法membrane rilter technique for Escherichia coli用滤膜法检测水样后，将总大肠菌群阳性的滤膜在含有荧光底物的培养基上培养，能产生-β-葡萄糖醛酸酶分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光，以此来检测水中大肠埃希氏菌的方法。4.2.3培养基与试剂4.2.3.1 MUG营养琼脂培养基（NA—MUG )

4.2.3.1.1成分

A 蛋白陈 5.0g

B 牛肉浸膏 3.0g

C 琼脂 15.0g

D 4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸苷（MUG）0.1g

E 蒸馏水 1000 ml

4.2.3.1.2制法将干燥成分加入水中，充分混匀，加热溶解．103.43kPa ( 121℃，15lb）高压灭菌15min，最终pH为6.8士0.2在无菌操作条件F倾倒直径50mm 平板备用。倾倒好的平板在4℃条件下可保存两个星期本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基，使用时加2mL——3ml于灭菌吸收垫上，再将滤膜置于培养垫上培养4.2.4仪器4.2.4.1紫外光灯：6W、波长366 nm的紫外灯，用于观测荧光反应4.2.4.2其他仪器同2.2.44.2.5检验步骤4.2.

5.1接种将总大肠菌群滤膜法有典型菌落生长的滤膜进行大肠埃希氏菌检测。在无菌操作条件下将滤膜转移到NA-MuG平板上，细菌截留面朝上，进行培养4.2.5.2培养将已接种的NA-MUG 平板36℃士1℃培养4h。4.2.6结果观察与报告将培养后的NA-MUG平板在暗处用波长为366nm功率为6W的紫外光灯照射，如果菌落边缘或菌落背面有蓝色荧光产生则表示水样中含有大肠埃希氏菌。记录有蓝色荧光产生的菌落数并报告，报告格式同总大肠菌群滤膜法格式

4.3酶底物法4.3.1范围本标准规定了用酶底物法测定生活饮用水及其水源水中的大肠埃希氏菌本法适用于生活饮用水及其水源水中大肠埃希氏菌的检测本法可在24h判断水样中是否含有大肠埃希氏菌及含有的大肠埃希氏菌的最可能数（MPN）值。本法可同时检测总大肠菌群，方法见23。4.3.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。4.3.2.1大肠埃希氏菌酶底物法即zyme substrate technique for Escherichia coli在选择性培养基上能产生β一半乳糖苷酶分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，并能产生β一葡萄糖醛酸酶分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光；以此技术来检测大肠埃希氏菌的方法为大肠埃希氏菌酶底物法。

4.3.3培养基与试荆培养基与试剂同2.3.3。4.3.4仪器设备4.3.4.1紫外光灯：6W、波长366 nm的紫外灯，用于观测荧光反应4.3.4.2其他仪器同2.3.4。4.3.5检验步骤检验步骤同2.3.54.3.6结果观察与报告4.3.6.1结果判读结果判读同2.3.6.1，对照表同表4与表5。水样变黄色同时有蓝色荧光判断为大肠埃希氏菌阳性，水样未变黄色而有荧光产生不判定为大肠埃希氏菌阳性4.3.6.2定性反应将经过2或I，培养颜色变成黄色的水样在暗处用波长为366 nm的紫外光灯照射，如果有蓝色荧光产生判断为阳睦反应，表示水中含有大肠埃希氏菌。水样未产生蓝色荧光判断为阴性反应。结果以大肠埃希氏菌检出或未检出报告。4.3.6.3 10管法

4.3.6.3.1将培养2连h颜色变成黄色的水样的试管在暗处用波长为366 nm的紫外光灯照射，如果有蓝色荧光产生则表示有大肠埃希氏菌存在4.3.6.3.2计算有荧光反应的试管数，对照表4查出其代表的大肠埃希氏菌最可能数。结果以MPN/100ml表示。如所有管未产生荧光，则可报告为大肠埃希氏菌未检出。

4.3.6.4 51孔定量盘法4.3.6.4.1将培养24h颜色变成黄色的水样的定量盘在暗处用波长为366nm的紫外光灯照射，如果有蓝色的荧光产生则表示该定量盘孔穴中含有大肠埃希氏菌。4.3.6.4.2计算有荧光反应的孔穴数，对照表5查出其代表的大肠埃希氏菌最可能数。结果以MPN 100 ml表示。如所有孔未产生荧光，则可报告为大肠埃希氏菌未检出。

5、贾第鞭毛虫5.1免疫磁分离荧光抗体法5.1.1范围本标准规定了用免疫磁分离荧光抗体法测定生活饮用水及其水源水中的贾第鞭毛虫抱囊和隐抱子虫卵囊。本法适用于生活饮用水及水源水中贾第鞭毛虫抱囊和隐抱子虫卵囊的测定 5.1.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。5.1.2.1贾第鞭毛虫glardia一种可能在水中或其他介质中发现的原虫类寄生虫有两个种．它们的宿主是：人类和鼠类。

5.1.2.2隐抱子虫cryptosporidium一种可能在水中或其他介质中发现的原虫类寄生虫，有6个种，且它们可能的宿主是：哺乳类动物，包括人类；鸟类；鼠类；爬行类和鱼类。5.1.3器材与试剂5.1.3.1采样器材5.1.3.1.1 Envirochek方法A蠕动泵；B泵管；C Evlrocheck滤囊（醚矾滤膜，有效过滤面积1300crn，孔径1.0um) ;D 夹子；E水表；F流量控制阀；G过滤管；H塑料连接5.1.3.1.2 FIlta一Max方法A FIlta一Max滤芯：压缩后的多孔海绵滤膜模块（共60层多孔海绵滤膜从600 mm压缩到30mm，其中单层多孔海绵滤膜厚10mm，外径55mm，内径15mm) ;B Filta一Max滤器：带进出水样口及配套软管和辅助工具的FiltaMax滤器；C 合适的压力泵（导流泵，蠕动泵等）；D 泵管；E夹子；F水表；G 流量控制阀（IL/mln ——4l／min）。5.1.3.1.3 Filta一MaxXpress快速方法A FiltaMaxXpresS决速滤芯；B Fllta一MaXpres、滤器带进出水样口及配套软管和辅助工具的Fllta—MaxXpress滤器；C合适的压力泵（导流泵，蠕动泵）;D 泵管；E夹子；F水表；G流量控制阀（IL/mln ——4l／min）。5.1.3.2淘洗／浓缩／纯化器材5.1.3.2.1 Envirochek方法A过滤夹：带臂水平振荡装置，臂有垂直安装的过滤夹，最大频率600r/min ;B 175ml锥形离心管；C离心机：容量175 ml 刻度锥形离心管和能达到1500g的加速度的离心机；D旋涡搅拌器；E塑料吸耳球；F 10mL移液管；G 5omL移液管；H 100mL有刻度的量筒；l一侧平面试管，125mm*16mm，带管塞，一侧为60mm*10mm平面；J用于一侧平面试管的磁颗粒浓缩器〔 MPCM ) ;K锥形具塞5 ml一微量离心管；I巴斯德移液管5.1.3.2.2 FIlta 一Max方法A、手动或自动Filt-Max淘洗主设备及配套装置（浓缩管及底座，洗涤管及不锈钢虹吸管）;

B手动真空泵；C磁力搅拌器和搅拌棒；D滤膜（3.0um），直径73 mm5.1.3.2.3 Filta 一Max Xpree快速法A Filta一Max Xpree快速淘洗装置；B空气压缩机，至少0.4 MPa以上压力．151压缩空气；C容量500ml刻度锥形离心管和能达到20009加速度的离心机；D 5OOml、锥形离心管；E蠕动泵。5.1.3.3染色器材5.1.3.3.1三通真空泵。5.1.3.3 .2湿度孵化盒。5.1.3.3.3显微镜玻璃井形载玻片（井的直径为9mm )，容积100ul。5.1.3.3.4玻璃盖玻片。5.1.3.3.5 37℃培养箱。5.1.3.3.6荧光显微镜。5.1.3.3.7 450nm～480 nm的蓝色滤光片。5.1.3.3.8 33Onm-385nm的紫外光滤光片。5.1.3.3.9 20倍、40倍、100倍的目镜 5.1.3.3.1O测微计。

5.1.3.3.11 5ul——20ul的可调微量移液管。5.1.3.3.12 20uL一200uL的可调微量

移液管5.1.3.3.13 200ul-1000ul的可调微量移液管

5.1.3.4接种器材5.1.3.4.1小口塑料瓶（20L )5.1.3.4.2 Mallasez或修改的Neubauer 血球计数器。所有玻璃器皿和塑料管都必须在使用后及洗涤前经高压消毒。用热的浓洗涤剂溶液清洁器材，然后将它们放到浓度最小为509 / L的次氯酸钠溶液中，至少在室温浸泡30 min。用蒸馏水冲洗器材，然后将其放到没有卵囊的环境中干燥。尽可能使用一次性物品。5.1.3.5试剂 5.1.3.5.1超纯水5.1.3.5.2 15Ommol/lPBS溶液（磷酸缓冲盐）A成分： NaCL 8.5g Na2HPO4 1.079 Na2HPO4.2H2O 0.39g加超纯水到1000ml B制法：用盐酸或氢氧化钠将pH调到7.2士0.1，在4℃可储存1个星期

5.1.3.5.3贾第鞭毛虫／隐袍子虫免疫磁分离（IMS）试剂盒A抗隐抱子虫单克隆抗体磁微粒；B抗贾第鞭毛虫单克隆抗体磁微粒；C 10SL缓冲液A (15mL)，透明无色；D 10SL-M缓冲液B(loml)，品红色。将免疫磁分离（IMS）试剂盒，4℃储存。5.1.3.5.4免疫荧光试剂盒抗隐抱子虫／贾第鞭毛虫单克隆抗体一异硫氰酸盐荧光素试剂盒（5mL )，于4℃储存

5.1.3.5.5封固剂：2%DABCO／甘油。A成分：甘油／PBS缓冲盐溶液（60%/40%) 100 mL DABCO 2gB保存：室温条件下储存12个月。

5.1.3.5.6 1mol/LTris , pH7.4 在1000 mL超纯水中溶解132.29的TriS盐酸；然后再加19.49的TriS碱。用盐酸或氢氧化钠溶液将pH调到7.4士0.1。用孔径0.2um 的滤膜将它过滤灭菌后，移到一个无菌的塑料容器中室温条件下储存6个月。

5.1.3.5.7 0.5mol/lNa2—EDTA , pH8.0。将37.22g乙二胺四乙酸二钠盐二水化合物（Na2一EDTA）溶解到200 mL的超纯水中，然后用盐酸或氢氧化钠溶液将pH 调到8.0士0.1，室温条件下储存6个月。5.1.3.5.8淘洗缓冲液。A Envirochek淘洗缓冲液：月桂醇聚醚12 ( Laureth一12 ) 4g 1mol/lTris , pH7.4 4Oml 0.5mol/l Na2一EDTA , pH8.0 8 mL A 型止泡剂 600ul 加超纯水到4000mL 称取1g月桂醇聚醚12到玻璃烧杯中，然后加100 mL超纯水。用电炉或微波炉将烧杯加热，使月桂醇聚醚一论溶解，然后再将其转移到1 000 ml有刻度的量筒中。用超纯水将烧杯冲洗几次，确保所有的洗涤剂都转移到量筒中。加10mLpH为7.4的TriS溶液；2mLpH为8.0的Na2一EDTA溶液和150ulA型止泡剂最后用超纯水稀释到1000mL。室温条件下储存l个月。 B FiltaMax淘洗缓冲液（PBST缓冲液）: Na2HPO4 1.44g KH2PO4 0.24g KCl 0.2g NaCI 8g非离子表面活性剂Tween-20 0.1mL超纯水 900mL将1.44g磷酸氢二钠、O.24g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾及89氯化钠加人900mL超纯水，搅拌20 min至完全溶解，加人0.lm工非离子表面活性剂Tween20并继续搅拌10min，然后用超纯水稀释至1 000 ml．。C、FiltaMaxPress决速法淘洗缓冲液（PETT缓冲液）:焦磷酸四钠 0.29EDTA柠檬酸三钠 0.39 Tris一HCI (1mol/l) 10 mL Tween8O 0.1 mL将0.2g焦磷酸四钠和0.3gEDTA柠檬酸三钠加人900ml，超纯水，搅拌10min使之完全混合。然后加人10 mL 1.0mol/L TrisHCI并搅拌5min使之混合。再加人0.1 ml Tweenso并搅拌10min混合（Tween80粘度高，吸取时务必注意）。最后用超纯水稀释至1000mL，并调节pH至7.4士0.2 5.1.3.5.9 0.1mol/l盐酸溶液。5.1.3.5.10 lmol/L氢氧化钠溶液5.1.3.5.11 纯甲醇。5.1.3.5.12 DAPJ储存溶液：在一个含有1mg4，6一二氨基一2苯基引噪（DAPI）的烧瓶中，注人500川的纯甲醇（2mg/l）。4℃暗处

储存15天。5.1.3.5.13 DAPI染色溶液：用50mLPBS稀释10ulDAPI母液每日配制并将它储存在暗的4℃环境中。5.1.3.5.14 50g/L的次氯酸钠溶液。

5.1.3.5.15 碱胜洗涤剂5.13.5.16 纯的Giar山alalnbl血抱囊：浓度为100个袍囊／ml，能在4℃储存2个月。

5.1.3.5.17 纯的Cryptoporidium paruuum卵囊：浓度为100个卵囊／mL，能在4℃储存2个月

注：对于储存了2个月以上的卵囊存储液．可以在对其浓度和荧光的强度检查之后继续使用

5.1.4分析步骤5.1.4.1采样／淘洗／浓缩因水样中的卵囊数量很少，因此需要浓缩较大体积的水样，采样的体积取决于水样的类型：体积（L)原水 20L处理水 10OL5.1.4 .1.1 Envirochek方法A采样系统的组成a一次性使用的，孔径1um，褶聚醚矾滤纸的滤囊；b压力标定在0.21 MPa的控制阀（对于处理水来说是可任意选择的）;C连接在滤囊出口的水表，能控制过滤水样的体积；d流量能达到2l/ min的蠕动泵B采样a连接滤囊以外的采样系统。b打开蠕动泵的开关，并将流量调到2l/ min。c在作业线上安装滤囊，用适当的夹子将滤囊的进口和出口固牢d记录水表上指示的体积e将采样系统连接到自来水龙头或其他水源上。于通过滤囊过滤适当体积的水样。g在过滤结束的时候，记录滤囊过滤的水样体积b 将连接在水源上的采样系统取下i打开泵，尽快把滤囊放空。过滤后，要将滤囊放到4℃的暗处存放，一般不要超过72h C淘洗a取下滤囊进水口的乙烯栓，用量筒加110m工，左右的淘洗缓冲液到每个滤囊的外腔中b将滤囊插到带臂水平振荡器的夹钳上，滤囊的出水阀在12点钟的位置。C打开振荡器的开关，将速度设在最大速度的80%，然后将样本振荡10 mind将滤囊中的淘洗液倾注到175ml的锥形离心管中．再用110mL的淘洗缓冲液将滤囊的外腔再充满e将过滤器插到振荡器的夹钳上，这次出水阀的位置是它原来位置沿着它的轴方向转90°角。在80％的功率下，再摇10min。f重复操作步骤d，将乙烯帽小心取下，将滤囊中的淘洗液倾注到175 mL的锥形离心管中D浓缩a将装有淘洗液样本的175 mL离心管置1500g离心15min自然地减速，以免扰乱沉淀物

b用移液管小心地将上清液吸掉，使上清液刚好到沉淀物的上面为止（不要扰乱沉淀物）。

c如果压实的沉淀物体积小于或等于0.5 mL，就要加试剂水到离心管中，使其总体积为10 mL将试管置于旋转式搅拌器10s一15s，以便使沉淀物再悬浮。d如果压实的沉淀物体积大于0.5 mL，就要用式（3）确定在离心管中需要的总体积：总需要体积（mL）=沉淀物体积*10ml/0.5ml.....（3 )

以便将再悬浮的沉淀物调整到一个0.5ml相同压实的沉淀物体积，加试剂水到离心管中，使其总体积达到仁面计算的水平。将试管旋转搅拌10s—15s，以便使沉淀物再悬浮记录这个再悬浮物的体积。5.1.4.1.2 Filta - Max方法A采样a将滤芯（螺栓头朝下）安装在支架上，拧紧盖子（盖子即为进样口）b将过滤装置连接到需采样的水源注1：为使液体流经滤芯斋在顶部施加0.05MP。的压力。推荐的0.05MPa工作压力形成的液体流速为3l/min—4L/min。工作压力最大不应超过0.8MMPa。注2：采样时如使用导流泵、蠕动泵等泵类装置，应安装在过滤装置上游。注3：样品采集可在水源现场或实验室完成B淘洗与浓缩在淘洗与浓缩过程中，参考生产商的手动或自动淘洗装置使用手册操作。a手工淘洗步骤1）第一次淘洗。将3um滤膜放置到浓缩器中．组装好浓缩管和洗涤管。将过滤模块（滤芯）从支架上取下，安装到淘洗器的活塞顶部将淘洗器的狭口与洗涤管用

决接头连接。拉下淘洗器的延伸臂至锁住，从过滤模块上去除螺栓。再连接上不锈钢虹吸管。向浓缩管注人600 mL PBST缓冲液，随后连接到快接头上将活塞上下活动20次，以冲洗解压的过滤模块拆下浓缩管，挤压活塞5次以清除过滤器中的残留液体。2）第一次淘洗液浓缩将浓缩管与磁性搅拌棒连接，放置在磁性搅拌盘上，以60r/min一12r/min搅拌。将真空泵连接到浓缩器上，形成压力为13. kPa —0.0 kPa的真空。打开活栓，使流出液浓缩到30 mL——40 ml。将浓缩液轻轻倒人50 mL离心管中。3）第二次淘洗浓缩管中重新加人600 mL PBST 缓冲液，再连接到洗涤管上。重复第一次淘洗过程，只需10次。4）第二次淘洗液浓缩。将第一次的浓缩液加人到第二次的淘洗液中按上述方法重复浓缩过程。5）将3um滤膜转移到提供的袋子中，加人5 m1PBST缓冲液，隔着袋子用手轻轻磨擦滤膜。如此，清洗2次。将清洗液与浓缩液混合。b自动淘洗步骤1）第一次淘洗。将3um滤膜放置到浓缩器中，组装好浓缩管和洗涤管。打开自动淘洗器电源。将过滤模块从支架上取下，安装到淘洗器的活塞顶部。将淘洗器的狭口与淘洗管用决接头连接。按控制面板上的F1键，卸下过滤模块上的螺栓。再连接上不锈钢虹吸管。向浓缩管注人600 mL PBST缓冲液，随后连接到快接头上。按F1键开始初次浸润，然后按F3键进行第一次淘洗。拆下浓缩管，按F4键以清除过滤器中的残留液体。2）第一次淘洗液浓缩。将浓缩管与磁性搅拌棒连接，放置在磁性搅拌盘上，以60r / min一120r/min搅拌。将真空泵连接到浓缩器上，形成压力为13.3kPa ——40.0 kPa的真空。打开活栓，使流出液浓缩到30 mL一40 ml。将浓缩液轻轻倒人50ml离心管中3）第二次淘洗。浓缩管中重新加人600 mL PBST缓冲液，再连接到洗涤管上。按F3键开始淘洗。拆下浓缩管，按F4键以清除过滤器中的残留液体。4）第二次淘洗液浓缩。将第一次的浓缩液加人第二次的淘洗液中。按上述方法重复浓缩过程。

5）将3um滤膜转移到提供的袋子中，加人5ml一PBST缓冲液，隔着袋子用手轻轻磨擦滤膜。如此，清洗2次。将清洗液与浓缩液混合。5.1.4.1.3 Fjlta一MaxXpress快速方法A采样a将过滤模块（螺栓头朝下）安装在支架上，拧紧盖子（盖子即为进样口）。b将过滤装置连接到需采样的水源。注1：为使液体流经滤膜需在顶部施加0.05MPa的压力．推荐的005MPa工作压力形成的液体流速为3L/min一4L/min。工作压力最大不应超过。SM目。注2：采样时如使用导流泵、蠕动泵等泵类装置，应安装在过滤装置上游注3样品采集可在水撅现场或实验室完成注4本方法亦适用于浊度高的水源水的采样．B淘洗采用Filta一Max xpress 压力淘洗装置可使淘洗过程全自动完成。详细操作程序参见生产商使用指南将压力淘洗装置准备就绪，向缓冲液槽中加入足量的淘洗缓冲液，利用厂商提供的连接锁合将缓冲液槽与压力淘洗装置连接，确保二者之间形成良好密封。连接压缩空气源和压力淘洗装置，保证足够的空气压力和体积。打开压力淘洗装置后面的封闭阀。淘洗步骤为：a打开压力淘洗器b过滤装置进样口朝上，移开样品阻留器，连接出样口分流装置（过滤模块仍在过滤装置内）。

c将过滤装置倒转，用快接头连接到压力淘洗器上。d将50001锥形离心瓶放置在样品收集器支架上，关闭压力淘洗装置。e按控制面板的Fl键，开始自动淘洗。f淘洗结束时，打开压力淘洗装置卸下过滤装置，再拿开出样分流装置，打开过滤装置，弃掉过滤模块。g将离心瓶盖好，从样品收集器支架中取出。C浓缩a 将装有淘洗液样本的500 mL离心管置2000g离心15min。漫慢地减速，以免搅起沉淀物。记录沉淀物体积。注意：勿用制动器！b离心后，用吸气装置将沉淀物上层8 mL一10 ml处的悬浮物小心吸出（吸气装置的真空应小于3.3 kPa。

如果压实的沉淀物体积小于或等于0.5mL，将试管置于旋转式搅拌器20s，然后将样品转人Leighton管中；用lml试剂水冲洗离心瓶两次，清洗液转人同一Leighton管中d如果压实的沉淀物体积大于0.5 ml，就要用式（4）确定在离心管中需要的总体积，以便将再悬浮的沉淀物调整到相当于0.5mL压实沉淀物的体积。总需要体积（mL）=沉淀物体积*10ml/0.5ml· · · · · · ·（4 )

加试剂水到离心管中，使其总体积达到上面计算的水平。将试管旋转搅拌105一155，以便使沉淀物再悬浮。记录这个再悬浮物的体积

5.1.4.2 IMS分离5.1.4.2.1试剂制备A由10火SLA型缓冲液配制稀释的1火SIA型缓冲液用试剂水作为稀释剂每个样品制备lmL的1只SIA型缓冲液。注意：长时间在O℃～4℃储存后，可能会在IOxSL一A型缓冲液中形成一些结晶沉淀。为了确保这些沉淀的结晶能够再溶解，使用前应将其置室温（15℃～22℃）恒温H加lm工一10只SLA型缓冲液和1 mL 10*SL B型缓冲液到一侧平面试管中5.1.4.2.2卵囊捕获A定量转移10m工水样浓缩物到含有SI、缓冲液的一侧平面试管中H将抗隐抱子虫抗体和抗贾第鞭毛虫的磁微粒原液置于漩涡混合器上搅拌，以便使珠粒悬浮通过倒置试管的方法保证珠粒再悬浮．并确定底部没有残留的小团。C在含有水样浓缩物和SI、一缓冲液样品的一侧试管中各加100川上述悬浮的微粒。D将样品试管固定到旋转式的搅拌器上，在大约25r/min 的条件下至少旋转lh E至少旋转lh后．将试管从搅拌器上取下，然后再将其放在磁粒浓缩器（MPC一1）上，并将试管有平面的一边朝向磁铁F用手柔和地大约900角头尾相连地摇动试管，使试管的盖顶和基底轮流上下倾斜以每秒大约倾斜一次的频率持续2minG如果让MPC-I中的样品静置105以上，就要在进行下一个步骤之前，重复前一个（即步骤F)步骤。H立即打开顶端的盖，同时将保持在MPC一1上的试管中的所有上清液倒到一个适当的容器中做这一步骤时，不要摇动试管，也不要将试管从MPcl土取下I将试管从MPCI上取下，加lmLX SL一A型缓冲液非常柔和地将试管中的所有物质再悬浮。不要形成漩涡。J将样品试管中的所有液体定量转移到有标签的1 . smL微量离心管中K将微量离心管放到另一磁粒子浓缩器（MPCM）中，MPCM在放微量离心管的位置有一根磁条。L用手180°角轻轻地摇动试管每秒大约摇动一个180°角的频率，持续大约1 min在这一步结束时，珠粒和卵囊会在试管的背面形成一个褐色圆点。M立即从留在MPCM上的试管和顶盖中的上清液吸出。如果同时处理一个以上的样品，就要在吸去每个试管的上清液之前，进行3个180°角的摇动或滚动的动作。小心不要扰乱与磁铁邻近管壁上的附着物不要摇动试管。当进行这些步骤时，不要将试管从MPCM上取下5.1.4.2.3磁珠与抱（卵）囊复合物的分离A将磁条从MPC一M上取下B加50ul 0.1 mol/l的盐酸（HCI）至上述微量离心管中，用涡旋棍合10s。C将试管放在MPC一M上，然后让它在室温垂直静止10min。D用力涡旋5s——10s.E保证所有样品都在试管的底部，然后将微量离心管放在DynalMPcM上

F再将磁条放到MPCML，然后大约90°角头尾相连地轻轻摇动试管。使试管的盖顶和基底轮流上下倾斜，以每秒大约倾斜一次的频率持续305G准备一个井型载玻片，然后加5ul 1mol/l的氢氧化钠（NaOH）溶液至样本井中。H不要将微量离心管从MPCM上取下将所有样品从MPCM上的微量离心管中转移到有氢氧化钠的样品井中。不要扰乱试管背壁上的珠粒。l重复步骤A一F，然后将样品转移到相同的井形载玻片上 5.1.4.3染色 5.1.4.3.1将有样品的井形载玻片放到42℃的培养箱中，蒸发干5.1.4.3.2在每一含有干样品的井中加一滴（50ul）纯甲

醇，然后让它空干3 min——5 min。

5.1.4.3.3用试管准备所需体积（每井50ul）的抗隐抱子虫抗体和抗贾第鞭毛虫单克隆抗体异硫氰酸荧光素（FITC）工作稀释液。5.1.4.3.4加50ul用上述异硫氰酸荧光素（FITC）单克隆抗体工作稀释液至含样本井中。将载玻片放到湿室中于37℃培养30 min左右5.1.4.3.5 30min后，取出载玻片，然后用一个干净的顶端带有真空源的巴斯德移液管轻轻地从每个井边吸掉过量的荧光素标记单克隆抗体5.1.4.3.6在每个井中加70ul的PBS，静止1min一2 min后．吸掉多余的PBS。

5.1.4.3.7加50ulDAPI溶液（使用时配制，即加10ul2mg/ml溶于纯甲醇中的DAPI 于50ml的PHS中）到侮个井中，然后让它在室温静止2面n左右。5.1.4.3.8吸掉过量的DAPI溶液。5.1.4.3.9加70uL的PBS到每个井中，静止1 min一2 mln 后，吸掉多余的PBSo5.1.4.3.1O加70ul的试剂水到每个井中，静止lmin后，吸掉多余的试剂水5.1.4.3.11 让载玻片在暗处干燥后，加一滴含防荧光减弱的封固剂到每个井的中心。

5.1.4.3.12在井形载玻片上盖七盖玻片，然后将它存放在干燥的暗盒中，备查

5.1.4.4镜检打开显微镜和汞灯。预热10min后，在200倍的荧光显微镜下检查，在400倍的荧光显微镜下进一步证实。井将全井进行记数。贾第鞭毛虫的袍囊是椭圆形的它们的长度为8um-14um，宽度为7um-10um。抱囊壁会发出苹果绿的荧光。在紫外光下，DAPI阳性抱囊会出现4个亮蓝色的核。隐抱子虫的卵囊为稍微椭圆的圆形。它们的直径为2um-6um。卵囊壁会发出苹果绿的荧光在紫外光下．DAPI阳性卵囊会出现4个亮蓝色的核计数整个井面，呈现表6特征的就是抱（卵）囊。

5.1.5结果的计算、报告和检测限5.1.5.1用式（5）报告每升样本中的抱（卵）囊数：Y一（X*V ) / ( V1*V2 · · · · · · ·…（5 )式中：y每升水中抱囊或卵囊的数目；X―计数样本的体积中抱囊或卵囊的数目；V―离心后再悬浮的体积，单位为毫升（mL ) ;V1―计数样本的体积，单位为毫升（mL ) ;V2―过滤后水的体积，单位为升（L ) ;5.1.5.2用式6计算分析的检测限：D一V / ( V1*V2）· · · ·（6 )式中：D一一每升抱囊或卵囊的检测限；V―离心后再悬浮的体积，单位为毫升（mL ) ;V1―计数样本的体积，单位为毫升（mL ) ;V2一过滤后水的体积，单位为升（I .）。5.1.6质量控制5.1.

6.1免疫荧光质量控制免疫荧光试剂盒的控制必须每个星期做一次它由两个试验组成：一个阳性对照和一个阴性对照

5.1.

6.2阴性对照5.1.6.2.1制准备一个井形载玻片。5.1.6.2.2加50uL蒸馏水，然后将它放在培养箱中干燥。5.1.6.2.3参照5.1.4.3染色5.1.6.2.4对整个井面进行计数。不得找出任何贾第鞭毛虫囊和隐抱子虫的卵囊。5.1.6.3阳性对照 5.1.6.3.1制备一个井形载玻片5.1.6.3.2涡旋储存的原虫2min。5.1.6.3.3在同一井中搀加5uL贾第鞭毛虫囊和5uL隐抱子虫卵囊阳性样本，然后将它放在培养箱中干燥。

5.1.

6.3.4参照5.1.4.3染色。5.1.6.3.5对整个井面进行计数。必须找到根据表6中描述的规则而均匀染色的抱囊和卵囊5.1.6.4整个程序的质量控制整个步骤（从采样到质量控制显微镜检查）的质量控制应每三个月做一次。它由两个试验组成：分析ZoL加有原虫的水作为阳性对照，分析20L的蒸馏水作为阴性对照。5.1.6.4.1阴性对照A加201蒸馏水到小口塑料瓶中。B与样品分析一样分析蒸馏水。不得找到任何贾第鞭毛虫或隐抱子虫将所有结果记录在表7原虫测定方法质量控制表格中5.1.6.4.2阳性对照为了做阳性对照，应在20l蒸馏水中搀加已知数量的囊和卵囊。用血球计数器和用染色的井形载玻片．测定在201蒸馏水中加人的饱囊和卵囊的数量A原虫接种液的计数涡旋2min储存的原虫。b在一个有10ml

蒸馏水的烧杯中加一些抱囊和卵囊，以便得到一个最终浓度大约每ml50000护个抱（卵）囊的溶液。用磁棒搅拌30min。d用血球计数器测定这种溶液的浓度10次e用染色的井形载玻片［加大约250个抱〔卵）囊到井上」测定这种溶液的浓度5次。计数这两种方法的浓度和标准差。如果标准差小于25 %，那么就可以把这个读数看作是正确的。如果标准差大于25 %，就要制备新的原虫接种液，然后再测定它的浓度。B阳哇对照的分析在装有101，蒸馏水的小口塑料瓶中加500个贾第鞭毛虫的抱囊和500个隐抱子虫的卵囊。b用滤囊过滤该水用10L蒸馏水冲洗小口塑料瓶，然后用同一个滤囊过滤该水。d分析这个样品要象分析一个典型的样品一样将所有结果记录在表7中。这种方法的回收率为10％一100％之间如不在此范围，需检查所有的设备和试剂，同时再做一个阳性对照 5.1.6.5免疫灸光质，控制记录原虫测定方法质量控制记录到表7中

食品微生物检验技术论文

食品微生物检验技术课程文献综述 题目: 常见致病菌导致的食物中毒及其检测姓名: 木日西提江 学院: 新疆农业大学食品科学与药学学院专业: 食品科学 班级: 071班 学号: 074031156 指导教师: 王伟 2010年12 月7 日

常见致病菌导致的食物中毒及其检测 摘要:食品安全与食源性疾病已成为一个全球性的重大公共卫生问题，而食物中毒作为最典型的一大类食源性疾病更得到了世界各国政府的广泛关注与重视。凡是导致机体正常生理功能破坏，引发机体病理改变甚至死亡的物质被称为毒物。毒物随食物或毒物被当作食物进入人体引起的中毒被称为食物中毒。本文以常见致病菌导致的食物中毒为出发点，对常见食物中毒分为化学性、有毒动植物中毒、微生物性三大类，叙述其中毒原理及常见症状，描述食物中毒的发病原理，发病症状，检验方法（包括快速检验）。并详细描述微生物的快速检测。 关键字致病菌沙门氏菌检验快速检验 正文 食物中毒是指吃了不洁或有毒食物而导致的疾病。通常在吃了有问题的食物1至72小时内发病，病情严重者可以致命。食物中毒一般分为化学性、有毒动植物中毒、微生物性（包括细菌性和真菌性食物中毒）。 一、化学性食物中毒 化学性食物中毒是指误食有毒化学物质，如鼠药、农药、亚硝酸盐等，或食入被其污染的食物而引起的中毒。发病率和病死率均比较高。中毒症状急性中毒有心悸，面颈、四肢肌肉颤动，有手抖甚至不能站立，头晕，乏力，原有心律失常的患者更容易发生反应，心动过速，室性早搏，心电图示S-T段压低与T波倒置。其中常见的化学性食物中毒有： （一）毒鼠强中毒：毒鼠强毒性极大，对人致死量5—12毫克。一般在误食10－30分钟后出现中毒症状。轻度中毒表现头痛、头晕、乏力、恶心、呕吐、口唇麻木、酒醉感。重度中毒表现突然晕倒，癫痫样大发作，发作时全身抽搐、口吐白沫、小便失禁、意识丧失。 （二）亚硝酸盐中毒：俗称“工业用盐”。摄入亚硝酸盐0.2-0.5克就可以引起食物中毒，3克可导致死亡。发病急，中毒表现为口唇、舌尖、指尖青紫等缺氧症状，重者眼结膜、面部及全身皮肤青紫。自觉症状有头晕、头痛、无力、心率快等。急救处理：催吐、洗胃和导泻以消除毒物；应用氧化型亚甲蓝（美蓝）、

《生活饮用水卫生标准》(GB5749-2006)

《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006） 随着经济的发展，人口的增加，不少地区水源短缺，有的城市饮用水水源污染严重，居民生活饮用水安全受到威胁。1985年发布的《生活饮用水卫生标准》（GB5749－85）已不能满足保障人民群众健康的需要。为此，卫生部和国家标准化管理委员会对原有标准进行了修订，联合发布新的强制性国家《生活饮用水卫生标准》（GB5749－2006）（下称“新标准”）。 2007年7月1日，由国家标准委和卫生部联合发布的《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）强制性国家标准和13项生活饮用水卫生检验国家标准将正式实施。这是国家21年来首次对1985年发布的《生活饮用水标准》进行修订。 《生活饮用水卫生标准》的修订是保证饮用水安全的重要措施之一。在国家标准化管理委员会协调下，由卫生部牵头，会同建设部、国土资源部、水利部、国家环保总局，组织卫生、供水、环保、水利、水资源等各方面专家共同参与完成了该项标准的修订工作。 新标准具有以下三个特点：一是加强了对水质有机物、微生物和水质消毒等方面的要求。新标准中的饮用水水质指标由原标准的35项增至106项，增加了71项。其中，微生物指标由2项增至6项；饮用水消毒剂指标由1 项增至4项；毒理指标中无机化合物由10项增至21项；毒理指标中有机化合物由5项增至53项；感官性状和一般理化指标由15项增至20项；放射性指标仍为2项。二是统一了城镇和农村饮用水卫生标准。三是实现饮用水标准与国际接轨。新标准水质项目和指标值的选择，充分考虑了我国实际情况，并参考了世界卫生组织的《饮用水水质准则》，参考了欧盟、美国、俄罗斯和日本等国饮用水标准。 1985年出台的《生活饮用水卫生标准》里，饮用水浑浊度的指标是“3-5”，新《标准》则将之提高到“1-3”，也就是说，抛开一大堆老百姓看不懂的理化指标不说，最直观能感受到的，是水色将更为清亮。

食品微生物检验技术复习题完整版

食品微生物检验技术复 习题 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】

名词解释 样品（sample）是指从某一总体中抽出的一部分。 食品采样（sampling）是指从较大批量食品中抽取能较好地代表其总体样品的方法。 接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 菌落总数：指一定数量或面积的食品样品，在一定条件下进行细菌培养，使每一个活菌只能形成一个肉眼可见的菌落，然后进行菌落计数所得的菌落数量。 V-P试验：某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。 生理生化试验：微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。 硫化氢（H2S）试验：有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。 增殖培养基: 在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基。 外源性污染：食品在生产加工、运输、贮藏、销售食品过程中不遵守操作规程或不按卫生要求使食品发生污染称为外源性污染，也称为第二次污染． 环状沉淀反应：是一种定性试验方法，可用已知抗体检测未知抗原。将已知抗体注入特制小试管中，然后沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原与抗体对应，则在两液界面出现白色的沉淀圆环。 微生物性食物中毒：食用被微生物或微生物毒素污染的食品而引起的中毒称为微生物性食物中毒。 无菌接种操作：培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具在无菌条件下接种含菌材料于培养基上，这过程叫做无菌接种操作。 菌落：指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。 细菌总数：指一定数量或面积的食品样品．经过适当的处理后，在显微镜下对细菌进行直接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。 大肠菌群：系指一群在37度能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽胞杆菌。 淀粉水解试验：某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 糖酵解试验：不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。甲基红（Methyl Red）试验：肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至以下，使甲基红指示剂变红。 靛基质（Imdole）试验：某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。尿素酶（Urease）试验：有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。氧化酶（Oxidase）试验：氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。硫化氢-靛基质-动力（SIM）琼脂试验：试验方法：以接种针挑取菌落或纯养物穿刺接种约1/2深度，置36±1℃培养18~24h，观察结果。培养物呈现黑色为硫化氢阳性，混浊或沿穿刺线向外生长为有动力，然后加Kovacs氏试剂数滴于培养表面，静置10min，若试剂呈红色为靛基质阳性。培养基未接种的下部，可作为对照。选择培养基:在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基，称之为选择培养基。鉴别培养基: 在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助开快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴别培养基。 无菌技术:指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。 粪大肠菌群：系一群需氧及兼性厌氧，在℃培养24h内能发酵乳糖产酸产气和分解色氨酸产生靛基质的革兰氏阴性无芽胞杆菌。玻片凝集法：是一种常规的定性试验方法。原理是用已知抗体来检测未知抗原。常用于鉴定菌种、血型。试管凝集法：是一种定量试验方法。多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查。 沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应（Precipitation）。絮状沉淀反应：将已知抗原与抗体在试管（如凹玻片）内混匀，如抗原抗体对应，而又二者比例适当时，会出现肉眼可见的絮状沉淀，此为阳性反应。琼脂扩散试验：利用可溶性抗原抗体在半固体琼脂内扩散，若抗原抗体对应，且二者比例合适，在其扩散的某一部分就会出现白色的沉淀线。每对抗原抗体可形成一条沉淀线。有几对抗原抗体，就可分别形成几条沉淀线。大肠菌群MPN：大肠菌群MPN是采用一定的方法，应用统计学的原理所测定和计算出的一种最近似数值。 大肠菌群值：大肠菌群值是指在食品中检出一个大肠菌群细菌时所需要的最少样品量。内源性污染：凡由动物体在生活过程中，由于本身带染的微生物而造成食品的污染者，称为内源性污染，也称第一次污染．食品腐败变质：是指食品受到各种内外因素的影响，造成其原有化学性质或物理性质发生变化，降低或失去其营养价值和商品价值的过程．

自来水的饮用标准及常见的检测指标

自来水的饮用标准及常见的检测指标 一、自来水能否饮用？ 自来水厂生产的水是符合饮用标准的。但是，这并不表明它是标准的饮用水。原因有二：（1）自来水在生产过程中用氯净化水虽可杀死病原微生物等有害物质，但加入氯本身又可造成新的化学污染。氯可与水中的有机物生成三氯甲烷，它是一种致癌物质。同时，氯还破坏营养，易导致心脏病。（2）在自来水的管网中，长距离管道运输，管道陈旧生锈，城市高楼水箱和楼群蓄水池不清洁或常年使用不消毒，都可造成二次污染。二次污染使细菌、病毒和藻类繁殖，再加上原有的氯及氯化物、铁锈、重金属、放射性物质、使水体浑浊、有异味，其害无穷。所以说，自来水并不是标准的饮用水。在各种污染日益加重的环境下，我们喝到身体里的水一定要有严格的标准。还水的本来面目，喝纯净水才符合人体的需要，并且喝生水比喝开水更有利于人的健康。因为开水失去氧气太多，喝开水不利于向人体供氧。可能有的朋友要说，我喝了一辈子自来水，身体不照样挺好的吗？其实不然，首先，人体的疾病是个积累和渐进的过程，如果您不饮或少饮不洁的水，身体肯定比现在更健康。其次，现在的水环境也不能与若干年前相比。以前的水污染主要来源于有机物和自然界的污物，主要污染物质为细菌和病毒，因此，经过煮沸后的自来水基本可以达到消毒的目的。而现代水污染我们以上已经讲到，主要是工业废水中的化学污染和重金属，而这些污染物通过把水煮沸的办法是不可能去除掉的。因此，煮沸的开水同样不是标准的饮用水。 二、为什么自来水有时发浑、发白、发黄 1．发浑的原因主要是因城市供水管道实发性爆管，在抢修过程中带入了泥沙。当打开供水阀门恢复通水时，泥沙随着水流的冲击，可能造成局部、短时的浑水现象，很快就会恢复正常。 2．发白的原因主要是供水管网中溶入了空气，经压力作用分解成微小气泡（凭肉眼观察不到），气泡的紧密排列就会感觉到流出的水呈乳白色，当在容器中静止数分钟后，随着气泡消失，水就会变清。这种现象不会影响到自来水水质。另一种原因，某些二次供水储水池（箱）微生物超标，投加了漂白粉产生一种轻微白灰色。漂白粉主要成分为Ｃａ（ＣｌＯ）２、Ｃａ（ＯＨ）２、ＣａＣｌ２等成分，主要有效成分是次氯酸钙：２Ｃａ（ＣｌＯ）２＋２Ｈ２Ｏ＝Ｃａ（ＯＨ）２＋ＣａＣｌ２＋２ＨＯＣｌ。当放水后，流出水的颜色是一种轻微白灰色，并能闻到轻微刺鼻氯气味，待静置数分钟后，有很少量微小颗粒沉淀物（一般情况不会有）。这种现象不会危害人体健康。如你感兴趣的话，可以用白色透明杯观察水的颜色。打开水龙头放水，将水流入杯中后观察水的颜色，如水发白，你可以观察到白色逐渐从杯底向上变清，这就是水中溶入了气体的现象。也就是水中微小气泡逐渐从杯底向上逸出，逐步变清，而且透明。如水中投加漂白粉，流入杯中水，排除气泡形成水发白外，观察杯中水仍然有轻微白灰色，能闻到轻微氯气味。 3. 发黄原因有两个。一是从用户总表后第一个阀门至用户家中的镀锌管道因长年使用或管材质量问题造成锈蚀而形成的自来水二次污染。这种现象在早晨尤为突出。二是使用二次供水设施水的用户，因产权单位未按规定定期清刷、清毒水池及水箱，容易造成自来水的二次污染。 三、常见水处理技术 随着人类物质生活的提高,环境污染的程度也日趋严重,特别是对水的污染尤为严重,为了人类的健康,而产生了净化水的概念,最原始的水处理方法是通过沉淀的方法,是混浊的水变清, 但这只能除去水中的泥沙等肉眼能见大颗粒,而对看不见的有害菌束手无策,进而人们用消毒

食品微生物检验的内容及检测技术

食品微生物检验的内容及检测技术 食品安全检验过程的主要内容 食品微生物的检验。食物在生产过程中以及放置过程中会受到环境中微生物的损坏或影响，在部分研究中，将食品中细菌数量对食品的损坏程度作为食品安全检测的首 要内容。在食品微生物的检验过程中，我们主要对人体有害微生物进行检验，其中在食品安全检验过程中，因为食品中有多种微生物共存现象，所以在检验前，微生物检验员要把不同的菌体进行分离，这样才能更加清楚的了解各种微生物的数量及菌体的分布情况，包括生产型食品微生物，如醋酸杆菌，酵母菌等和使食物变质的微生物，如霉菌、细菌等和食源性病原微生物如溶血性大肠杆菌，肉毒杆菌等。对食品原辅料微生物的控制和产成品微生物的检验是保证食品安 全的重要途径。 针对食品致病菌的相关检验。不同的致病菌会对人们的身体健康有不同程度的危害，像我们在生活中经常吃到的大米，有些不法商家将发霉的大米加工后再次放入市场进行二次销售，虽然经加工后，在外表上和普通大米没啥两样，但这种大米中含有黄曲霉这一致病菌，据可靠信息表明，黄曲霉的危害性十分巨大，如果人们长时间吃这样的大米，出

现癌症的风险要比常人高出很多倍，由此可见，食品中致病菌的检验是保证我们能吃到放心食品十分关键的微生物检 测技术，所以我们在致病菌的检验上对不同种类的致病菌进行定量严格检验。如乳制品和肉制品的致病菌主要是黄曲霉菌和大肠杆菌，而蛋制品中则容易出现染沙门菌、大肠菌群、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，罐头食品容易出现肉毒梭菌、产气荚膜梭菌、蜡样芽胞杆菌。 食品微生物检验中的主要特点 对食品检测要求相对较高。在食品微生物的一系列检验中，由于食品中涉及的微生物种类较多，因此加大了食品微生物检验的难度。国家标准或行业标准对不同食品中微生物的含量特别是致病菌的含量有明确的要求。在食品的运输过程中，食品致病菌以及其他微生物对相应的食品有一定的污染，随着微生物种类的增多，检测人员需要对食品受致病菌影响的程度、食品保质期以及其他相关的标准进行测量，难度会随着微生物种类的增多而复杂。所以在微生物检验上我们对每一阶段的食品安全检测都要重视，在各个微生物的测量上，相关的检测技术要求就有所提高。 食品微生物检验效率。随着食品市场的商品流通提高，人们对食品需求不断增加，而食品安全问题却在日益严重，为了保障人们在能够及时满足食品种类和数量要求的同时，进一步促进食品安全的保障措施落实，必须加强食品安

食品微生物检验的指标

食品微生物检验的指标 食品在食用前的各个环节中，被微生物污染往往是不可避免的。评价食品被微生物污染的程度，要采用微生物检验指标采进行。常采用的微生物检验指标为三项细菌指标，即细菌数量(主要是菌落总数)、大肠菌群最近似数(MPN)和致病菌。 第一节菌落总数 一、菌落总数的概念及卫生意义 食品中细菌数量越多，则食品腐败变质的速度就越快，甚至可引起食用者的不良王应．如有人认为细菌数量达到100—1000万个／g时食品就可能引起食用者的食物中毒。 菌落：指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。 细菌数量的表示方法由于所采用的计数方法不同而有两种：菌落总数和细菌总数： 1、菌落总数 指一定数量或面积的食品样品，在一定条件下进行细菌培养，使每一个活菌只能形成一个肉眼可见的菌落，然后进行菌落计数所得的菌落数量。通常以lg或1ml或lcm2样品中所含的菌落数量来表示。 按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 2、细菌总数 指一定数量或面积的食品样品．经过适当的处理后，在显微镜下对细菌进行直接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。细菌总数也称细菌直接显微镜数。通常以1g或1m1或lcm2—样品中的细菌总数来表示。 菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣 二、菌落总数的常规检验方法 菌落总数的常规检验方法(GB4789．2-84)： 一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。 基本操作一般包括：样品的稀释——倾注平皿——培养48（24）小时——计数报告。（一）样品的处理和稀释： 1．操作方法： 1）、以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。 2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。

(完整word版)食品微生物检验技术

《食品微生物检验技术》期末考试卷 适用班级：考试方式：闭卷 班级学号姓名 一、名词解释： 1.细菌：是一类细胞细而短（细胞直径约0.5μm，长度约0.5～5μm）、结构简单、细胞壁坚韧、以二等分裂方式繁殖和水生性较强的原核微生物。 2.菌落：固体培养基上（内）以母细胞为中心的一堆肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团，这就是菌落（colony）。 3.放线菌：是一类呈菌丝状生长、主要以孢子繁殖和陆生性强的原核生物。 4.菌丝体：许多分枝菌丝相互交织在一起构成菌丝体。 5.生长因子：通常是指那些微生物生长所必需而且需要量很小的，但微生物自身不能合成的，必须在培养基中加入的有机营养物。 6.培养基：根据微生物对营养物质的需要，经过人工配制的适合不同微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质称为培养基。 7.消毒：是指利用某些理化方法杀死物体表面或内部所有对人体或动植物有害的病原菌，而对被消毒的对象基本无害的措施。 8.菌株：又称品系（在病毒中则称毒株或株），表示任何由一个独立分离的单细胞（或单个病毒粒子）繁殖而成的纯种群体及其一切后代。 9.诱变育种：是利用物理和化学诱变剂处理微生物细胞群，促进其突变率大幅度提高，再从中筛选出少数符合育种目的的突变株。 10.干酪：是在乳中（也可用脱脂奶油或稀奶油）加入适量的乳酸菌发酵剂和凝乳酶，使蛋白质（主要是酪蛋白）凝固后，排除乳清，将凝块压成块状而制成的产品。

11.食品腐败变质：是指食品受到各种内外因素的影响，造成其原有化学性质或物理性质发生变化，降低或失去其营养价值和商品价值的过程 12.发酵乳制品：是指良好的原料乳经过杀菌作用接种特定的微生物（主要是乳酸菌）进行发酵，产生具有特殊风味的食品，称为发酵乳制品。 13.栅栏技术：已知的防腐方法根据其防腐原理归结为高温处理，低温冷藏或冻结，降低水分活性，酸化，降低氧化还原值和添加防腐剂等几种，即可归结为少数几个因子。把这些起控制作用的因子，称作栅栏因子。栅栏因子共同防腐作用的内在统一，称作栅栏技术。 14.食物中毒：是指人体因食用了含有害微生物、微生物毒素或化学性有害物质的食物而出现的非传染性的中毒。 15.双歧因子：一种能促进双歧杆菌生长，不被人体吸收利用的天然或人工合成的物质。 二、填空题： 1.原核微生物中常见的类群有细菌、放线菌、蓝细菌、支原体、螺旋体、衣原体、立克次体等。 2.肽聚糖是原核微生物细胞壁所特有的成分，是由N- 乙酰葡萄糖胺（NAG）、N- 乙酰胞壁酸（NAM）和短肽聚合而成的网状结构的大分子化合物。 3.放线菌的菌丝由于形态与功能不同分成三类：基内菌丝、气生菌丝、孢子丝。 4.在自然界中霉菌主要是形成各种无性孢子和有性孢子进行繁殖，无性孢子有孢子囊孢子、分生孢子、节孢子、厚垣孢子和芽孢子。有性孢子常见的有卵孢子、接合孢子、子囊孢子和担孢子。 5.微生物生长所需的营养物质应该包含组成细胞的各种化学元素。营养物质按照它们在机体中的生理作用不同，可分成碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大类。 6.配制培养基的基本原则：根据不同微生物对营养的要求、根据营养物质的浓度及配比、适当的pH 、培养基中原料的选择。 7.高压蒸汽灭菌法一般采用0.1 MPa 的压力、121摄氏度处理20min。 8.目前根据发酵乳制品的生产过程、发酵剂的种类、产品的特征及其他特性的不同大致

生活饮用水标准检验方法微生物指标

生活饮用水标准检验方法 微生物指标 1 菌落总数 1.1平皿计数法 1.1.1范围 本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数。 本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定 1.1.2术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 1.1. 2.1 菌落总数 standard plate-count bacteria 水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数 1.1.3 培养基与试剂 1.1.3.1 营养琼脂 1.1.3.1.1 成分： A 蛋白胨10g B 牛肉膏 3 g C 氯化钠5g D 琼脂10g~20g E 蒸馏水1000mL 1.1.3.1.2 制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43kPa（121℃，151b）灭菌20min，储存于冷暗处备用。 1.1.4 仪器 1.1.4.1 高压蒸汽灭菌器。 1.1.4.2 千热灭菌箱。 1.1.4.3 培养箱36℃±1℃。 1.1.4.4 电炉。 1.1.4.5 天平。 1.1.4.6 冰箱。 1.1.4.7 放大镜或菌落计数器。 1.1.4.8 pH计或精密pH试纸。 1.1.4.9 灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等。 1.1.5 检验步骤 1.5.1 生活饮用水。 1.1.5.1.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15mL 已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

食品微生物常见检测指标

1菌落总数 菌落总数是指示性微生物指标，并非致病菌指标。主要用来评价食品清洁度，反映食品在被加工过程中被污染的程度及卫生质量的重要指标。菌落总数超标可能是企业所使用的原辅料初始菌数较高，或未按要求严格控制生产加工过程的卫生条件，或包装容器清洗消毒不到位，还有可能是产品包装密封不严，储运条件控制不当等导致。如果食品的菌落总数严重超标，将会破坏食品的营养成分，加速食品的腐败变质，使食品失去食用价值。 2大肠菌群 大肠菌群是国内外通用的食品污染常用指示菌之一。食品中检出大肠菌群，提示被致病菌（如大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等）污染的可能性较大。大肠菌群超标可能由于产品的加工原料、包装材料受污染，或在生产过程中产品受人员、工具器具等生产设备、环境的污染而导致。大肠菌群，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。 大肠菌群都是直接或间接地来自人和温血动物的粪便。一般食品中大肠菌群超标，表示食品受动温血动物的粪便污染，其中典型大肠杆菌为粪便近期污染，其他菌属则可能为粪便的陈旧污染。人吃了大肠菌群超标的食物可能会导致：肠道传染病、食物中毒等。 3霉菌 霉菌，是丝状真菌的俗称，意即"发霉的真菌"，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不像蘑菇那样产生大型的子实体。在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。霉菌在我们的生活中无处不在，它比较青睐于温暖潮湿的环境，一有合适的环境就会大量的繁殖，必须采取措施来阻止霉菌的繁殖或切断其传播途径，就可以摆脱霉菌的污染。霉菌毒素对人主要毒性表现在神经和内分泌紊乱、免疫抑制、致癌致畸、肝肾损伤、繁殖障碍等。

浅析生活饮用水微生物检验质量控制

浅析生活饮用水微生物检验质量控制 发表时间：2018-05-07T09:54:06.903Z 来源：《健康世界》2018年4期作者：孙菡昕 [导读] 探讨并研究生活饮用水微生物检验质量影响因素 孙菡昕 香坊区卫生监督所 150030 摘要：目的探讨并研究生活饮用水微生物检验质量影响因素，并提出质控措施。方法选取2017年1—12月期间在疾病预防控制中心进行的960件生活饮用水微生物检验为研究对象，回顾分析检测报告，分析影响检测结果的因素，并提出针对性的质量控制措施。结果生活饮用水微生物检验影响因素主要包括环境因素、实验设备因素、人为因素。结论分析生活饮用水微生物检验质量影响因素，并采取有效地措施加强对生活饮用水微生物检验质量控制，具有重要的意义。 关键词：生活饮用水；微生物检验；影响因素 [Abstract] Objective To explore and study the factors affecting the quality of microbiological test in drinking water，and to put forward the quality control measures. Methods from 2017 to December，960 microbiological tests of drinking water in the center for Disease Control and prevention from 1 to December were selected as the research objects. The test reports were analyzed retrospectively，and the factors influencing the detection results were analyzed，and the targeted quality control measures were put forward. Results the factors affecting the microbial test of drinking water mainly include environmental factors，experimental equipment factors and human factors. Conclusion it is of great significance to analyze the influencing factors of microbiological inspection quality of drinking water and take effective measures to enhance the quality control of microbial testing for drinking water. [Key words] drinking water；microbial test；influencing factors 生活飲用水与人类生活、健康息息相关，通过科学、有效的微生物检测，可确保生活饮用水水质合格、水处理符合标准[1]。然而在生活饮用水微生物检验过程中，存在一些影响因素，会影响微生物检验结果。生活饮用水是微生物的载体，如果人饮用了质量不合格的生活饮用水，极易受到微生物的侵害，从而导致疾病的发生。所以，研究生活饮用水微生物检验影响因素，并提出可行、有效的质量检验控制措施，具有至关重要的作用。结合2017年1—12月期间在该中心进行的960件生活饮用水微生物检验结果，分析生活饮用水微生物检验质量控制措施，进一步为检验人员提供参考依据。现报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选取2017年1—12月期间在该中心进行的960件生活饮用水作为研究对象。 1.2 方法 1.2.1样本采集选取具有代表性的地点取样，采集过程必须严格执行无菌操作要求，确保水样采集、运输、储存等过程不受污染，且确保在采集4 h内进行检验，以免因放置时间过长造成水样变化或污染。若当天不能检测，应冷藏4℃下，并于24 h内完成检测。 1.2.2材料按照《生活饮用水标准检验方法》（GB /T 5750—2006）要求[2]，配制培养基并经121℃灭菌15 min。培养基制成平板以后，置于培养箱37℃培养24 h，若无菌落生长，证明培养基无菌，符合实验要求。将含有大肠埃希氏标准菌株的菌液接种在培养基上，若大肠埃希氏菌能够正常生长，证明培养基的成分能够满足细菌生长的条件，符合实验要求。 1.2.3实验仪器水浴箱、恒温培养箱、高压灭菌器等。 1.2.4检验方法按照《生活饮用水标准检验方法》（GB /T 5750—2006）要求，依据检验微生物类型，选择最适宜、最准确、最科学的实验检验方法。 2 结果 2.1 不同季节水样微生物检测情况 第一季度合格率最高为97.91%，第三季最低为83.33%。 2.2 不同存放时间水样微生物检测结果 存放24 h的水样菌落总数最多（13 MPN/100 mL），总大肠菌群也最多为（1.8×103）CFU/mL。 2.3 不同体积水样微生物检测结果 100 mL的水样菌落总数与总大肠菌群多于1 mL水样。 2.4 不同培养温度水样微生物检测结果 36℃为最适宜菌落为大肠菌群生长的温度。 3 讨论 3.1 影响生活饮用水微生物检验因素 3.1.1环境因素通过以上分析认识到微生物检测结果容易受到外部环境的影响，并且其操作环境必须在无菌环境进行。若无菌环境遭到破坏，生活饮用水微生物检验结果可能存在误差，影响检验质量。 3.1.2实验设备因素由于实验设备长期使用，若日常维护和保养不到位，可能会导致实验检测结果存在误差。特别是恒温培养箱，需要检定内部不同角落温度是否符合检测需求。细菌的培养温度对其生长效果影响极大。 3.1.3人为因素①若操作技术不规范，可能影响检测结果；②微生物样品被接收之后需要立即进行检测，避免其遭到破坏或者发生变化。样品存放时间越长，菌落总数的检测结果越高。③检测过程中取样体积、检测方法和标准限值的不同，检测结果可能出现不符合规律现象。 3.2 生活饮用水微生物检验质量控制措施 3.2.1控制实验环境加强对实验室环境的控制，依据实验实际需求和性质，检测环境采用超净工作台或洁净间，避免生活饮用水受到

食品微生物检验技术

一、定义 通过一定的实验方法测定食品中的微生物，特别是致病微生物的数量、种类、性质，从而判断食品的卫生质量，保证消费者的身体健康。 二、食品微生物检验的内容 卫生指标菌检验 菌落总数测定 细菌检验 大肠菌群数测定 致病菌检验 霉菌、酵母菌数测定 真菌检验 产毒霉菌检验 霉菌毒素测定 三、食品微生物检验的特点 1、具有法规性 2、检验的范围广 3、杂菌含量多，要检验的菌少。 （1）需要增菌（2）抑制杂菌 4、检验结果具有数量界限 5、需要采样后尽快检验，快出结果 四、意义： 检出有害微生物，避免食物中毒，避免造成经济损失。 五、食品卫生细菌常规检验项目 卫生指标菌 菌落总数测定 大肠菌群测定 沙门氏菌检验 u 致病菌 志贺氏菌检验 金黄色葡萄球菌检验 溶血性链球菌检验 六、细菌污染食品的途径 1、食品加工原料的污染 2、产、储、运、销过程中的细菌污染 3、从业人员的污染 4、食品加工过程中的污染 第一章 食品微生物检验中的生理生化实验 设计生化实验的原则：在实验中加入某些化学物质，使细菌代谢途径中分解代谢产物与加入<的化学物质发生反应，产生某些变化或出现某种特征。 一、过氧化氢酶及过氧化物酶实验原理 1、2H 2O 2 过氧化氢酶 2H 2O+O 2 阳性 2、过氧化物酶： RH 2+H 2O 2 过氧化物酶 R+2H 2O 阳性：细菌变为黑褐色； 阴性： 不变色。 阳性 阴性 二、细胞色素氧化酶实验原理 细胞色素C 细胞色素氧化酶 氧化型细胞色素C +对苯二胺 + --奈酚 靛酚兰（蓝色） 阳性： 2分钟内生成蓝色为阳性； 阴性：无变化。 三、氰化钾实验 阳性： 不抑菌，变混浊 阴性：抑菌 无 蓝 四、硝酸盐还原实验原理 KNO 3 还原酶 KNO 2KNO 2 +对氨基苯磺酸+ a -萘胺 红色化合物（立刻或数分钟内）红色 无色 五、糖发酵实验 分解糖产酸，PH 值下降，使 培养基的 酸碱指示剂发生变化。 阳性：产酸产气 六、氧化发酵实验（O/F 实验 有些微生物分解葡萄糖 必须有氧参加，此种细菌菌称为氧化型； 阳 阴 有些细菌有氧无氧均可分解葡萄糖，称发酵型； 有些细菌任何条件都不能分解葡萄糖，称产碱型。 灭菌琼脂（厌氧） 七、甲基红实验（MR 实验）和V-P 实验 1、MR 实验原理：一些细菌分解葡萄糖产 生丙酮酸，丙酮酸可被进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸而使培养基的PH 值下降到4.5以下，加入甲基红指示剂出现红色反应 2、V-P 实验原理 一些细菌分解葡萄糖为丙酮酸，进一步脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的氧氧化成二乙酰丁二酮，进而与培养基内蛋白胨中所含的精氨酸的胍基发生反应生成红色化合物。（实验结果同MR 实验） 阴 八 、柠檬酸盐实验（枸橼酸盐实验） 一些微生物可以以铵盐作为唯一 的氮源，以柠檬酸盐作为唯一的碳 源，在柠檬酸盐培养基上生长，分 解柠檬酸盐生成碳酸盐，使培养基 变成碱性，酸碱指示剂变色 九、丙二酸钠实验 一些微生物可以以丙二酸钠 作为唯一碳源，分解丙二酸钠生成碳酸钠，使培养基变成碱性，酸碱指示剂变色。 十、马尿酸盐实验 一些细菌可以水解马尿酸生成苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸和Fe3+反应生成有色的苯甲酸盐沉淀。 十一、明胶液化实验 一些细菌可产生胞外酶，使明胶蛋白分解为氨基酸,而失去明胶的凝固能力。 十二、苯丙氨酸脱氨酶实验 一些细菌有苯丙氨酸脱氨酶， 可以脱氨 生成苯丙酮酸， 其与FeCl 3反应产生绿色 。 十三、氨基酸脱羧酶实验 一些细菌可以产生氨基酸 脱羧酶使氨基酸脱酸，产生胺类物质，使培养基

《食品微生物检测技术》A卷

农产品质量检测专业及绿色食品生产与经营专业2015级《食品微生物检测技术》课 程期末考试卷（A卷） 是，观察真菌采取的制片方法是。 4．微生物生长需要的营养要素有、、、、生长因子和能源。 5．根据细菌的生长曲线，可将细菌的生长分为、、、四个时期，作为研究材料应取的细菌最合适。 6．一般培养基的制备主要程序可分为：称量、、调节pH、过滤、、加塞包扎、和无菌检查等步骤。 7．无菌室的熏蒸消毒，主要采用熏蒸消毒法，测定无菌室无菌程度一般采用法。

三、单项选择题（总分20分，每题1分，将答案写在下面） 1——5 ： 6——10： 11——15： 16——20： 1.紫外线的杀菌机理可能是（） A.紫外线的高热作用 B.紫外线的辐射作用 C.紫外线凝固细菌蛋白质 D.紫外线干扰细菌DNA复制与转录 2.革兰氏染色的关键操作步骤是（） A.结晶紫染色 B.碘液固定 C.酒精脱色 D.复染 ） C.用65％的酒精棉球擦容器口周围 D.用酒精灯烤容器口周围 9.某微生物在有氧和无氧时均可以生长并可以利用氧，它属于（）。 A.微好氧菌 B. 好氧菌 C. 厌氧菌 D. 兼性厌氧菌 10.一般培养基高压蒸汽灭菌的条件是：（） A.121℃/15-30min B.115℃/15-30min C.130℃/15-30min D.65℃/15-30min 11.采用湿热高压蒸汽灭菌，（）是影响灭菌质量的关键。

A.灭菌时间 B. 压力表的指针 C.视锅内装量 D. 排除冷空气 12.根据食品卫生要求，或对样品污染程度的估计，一般选择2—3个适宜稀释度做10倍递增稀释液，每个稀释度作( )平皿， A.4个 B.3个 C.2个 D.1个 13.依据GB/T 4789.2-2010，菌落数测定结果1:100（第一稀释度）菌落数分别为204,213； 1:1000（第二稀释度）菌落数分别为19,18。结果菌落总数报告为（）。 A.2.0×104 B.2.1×104 C.1.9×104 D.4.0×104 14.霉菌及酵母菌的培养温度是( )。 直径 20.在微生物检测中最常见的是细胞生物，其中最多的是（）。 A.病毒 B.真菌 C.霉菌 D.细菌 四、判断题（下列叙述中，对于正确的在括号里标“√”，错误的标“×”每小题1分，总分10分，共10题。将答案写在下面:） 1——5： 6——10： 1.进行微生物检验采集的食品样品，在送检过程中应越快越好，一般不应超过24h。（） 2.病原微生物分离鉴定工作可以在普通微生物检测实验室中进行。（）

生活饮用水中微生物检验分析

龙源期刊网 https://www.docsj.com/doc/8c17681270.html, 生活饮用水中微生物检验分析 作者：牟驰谢明岐胡腊生 来源：《健康必读（上旬刊）》2019年第02期 【摘要】目的：研究居民生活用水中微生物情况，对生活饮用水的质量进行检测。方法：从2017年6月到2017年12月，对市民生活饮用水检测点进行采集124份水样，水质管 控半年后于2018年1月到2018年6月，对相同市民生活饮水检测点进行采集124份水样，根据水质检验标准结合实际情况对市民生活饮用水中微生物情况进行检验，对比同一检测点生活饮用水中微生物情况。结果：研究表明，检测治理前采集的124份水样，其中118份水样合格，合格率为（95.16%），检测水质管控采集的124份水样，其中123份水样合格，合格率为（99.19%），水质管控水样合格率显著高于治理前。对比两份采集水样中耐热大肠杆菌、总大肠杆菌和细菌总数，水质管控生活饮用水微生物检验结果明显高于治理前。其结果差异具有统计学意义（P 【关键词】生活饮用水；微生物检测；合格率； 【中图分类号】R47 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2019）02-0221-02 水在人类生活以及社会发展进程中起着至关重要的作用，人体组织中含70～80%水分，由于自然水资源中存在杂质、细菌、微生物等，如果直接饮用会引发人类机体一些疾病，所以，需要对大自然中水资源进行系统规范的治理之后才能成为居民生活用水。生活饮用水作为人类生活的基本需求，对居民日常生活意义重大[1]。近年来，由于社会快速发展的过程中，工业 水平日益发展，各类工厂不断增加，加之气候、环境变化的影响，水资源污染日趋严重[2]。 因此为了解居民生活饮用水中微生物情况，对市民生活饮用水检测点进行治理前后饮用水中微生物进行检测，具体检测报告如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料： 从2017年6月到2017年12月，对市民生活饮用水检测点进行采集124份水样，为治理 前水样；经过半年水质管控后于2018年1月到2018年6月，对相同市民生活饮水检测点进行采集124份水样，为水质管控后水样，根据水质检验标准结合實际情况对治理前后市民生活饮用水中微生物情况进行检验。 1.2方法 为保障居民安全饮用水，有效治理应用水资源，参考世界卫生组织修订的《饮用水水质准则》以及充分考虑当地实际情况，定期检测生活用水中微生物情况。①水样采集，对生活饮用水中微生物情况进行检测分析，评价水质情况。首先需要对水样进行采集，确保水样具有代表

食品微生物检验(大肠杆菌全部)

第三章大肠菌群测定 一、大肠菌群检验 (一)检验方法 (二)培养基 (三)检验时应注意事 二、大肠菌群的卫生学意义 大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国外广泛应用于食品卫生工作中。该菌群主要来源于人及温血动物粪便，一般多用来作为食品中的粪便污染指标。过去我国在大肠菌群的检验方面经验不多，对该菌群的认识也不够充分。1974年全国修订食品卫生细菌检验方法座谈会和1976年全国食品卫生标准会议建议以大肠菌群作为粪便污染指标菌，并提出进行有关大肠菌群方面的科研工作。为此，我们成立了大肠菌群科研协作组，对犬肠菌群的检验方法(包括快速检验方法)及其卫生学意义进行了广泛的科学研究和实践，取得了一定成绩，为制订大肠菌群检验方法提供了科学依据。 在这次修订l976年版食品卫生检验方法的过程中，大肠菌群科研协作组又于1983～1985年对大肠菌群检验方法进行了实验研究，并作了对比观察，同时对国常用的大肠菌群快速检测方法也进行了研讨，为这次修订国家标准食品卫生检验方法微生物学部分中的大肠菌群测定提供了科学依据。 大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出来的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。其定义为：系指一群需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。有些科学工作者又用靛基质、甲基红、V～P、柠檬酸盐、硫化氢、明胶、动力和44．5℃乳糖分解等试验，将这群细菌再分为大肠艾希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。不论分法如何，对大肠菌群的判定，均应以上述定义为基础。 一、大肠茵群检验 (一)检验方法 1．乳糖发酵试验。以无菌操作采取样品，采取量及稀释倍数，依据国家或当地卫生标准要求及样品污染情况而定。将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管，接种量在l m J以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，lm1及1mI以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±l℃温箱，培养24±2小时，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者，则按下列程序进行。 2．分离培养。将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±l℃温箱，培养18～24小时，然后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验。 3．证实试验。在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落l～2个进行革兰氏染色，同时

食品微生物检验技术试题库

食品微生物检验技术试题库 （期末考试 15×2＝30。黑体为重点，期末为 8 道小题。 ） 一、名称解释： 1.微生物：是对所有形体微小、单细胞或个体结构较为简单的多细胞，甚至无细胞结构的低 等生物的总称。 2.原核微生物：是指一大类没有核膜和核仁，仅含一个由裸露的 DNA 分子构成的原始核区 的单细胞生物。 3.细菌：是一类细胞细而短（细胞直径约 0.5μm，长度约 0.5～5μm）、结构简单、细胞壁 坚韧、以二等分裂方式繁殖和水生性较强的原核微生物。 4.荚膜：是细菌的特殊结构，是某些细菌在新陈代谢过程中产生的覆盖在细胞壁外的一层疏 松透明的粘液状物质。 5.芽孢：某些细菌生长到一定阶段或在一定环境条件下，细胞的正常生长和分裂停止，细胞 内细胞质浓缩，逐步行成一个圆形、椭圆形或圆柱形的，对不良环境有较强抵抗力的特殊结 构，称为芽孢。 6.菌落：固体培养基上（内）以母细胞为中心的一堆肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞 集团，这就是菌落（colony）。 7. 菌苔：将某一纯种的大量细胞密集地接种到固体培养基表面，结果长成的各“菌落”相 互联接成一片，这就是菌苔（lawn）。 ： 是一类呈菌丝状生长、 主要以孢子繁殖和陆生性强的原核生物。 8.放线菌 （actinomycetes） 9.酵母菌（yeast） ：是一通俗名称，是指以出芽繁殖为主的单细胞真菌。 10. 菌丝体：许多分枝菌丝相互交织在一起构成菌丝体。 ：是一类超显微的非细胞型微生物，每一种病毒只含有一种核酸（DNA 或 11.病毒（virus） RNA) ；它们只能在活细胞内营专性寄生，依靠其宿主的代谢系统进行增殖，它们在离体条 件下，能以无生命的化学大分子状态长期存在并保持其侵染活性。 12.微生物的营养：微生物从环境中吸收营养物质并加以利用的过程即称为微生物的营养 13.碳源 ：凡是可以被微生物用来构成细胞物质或代谢产物中碳素来源的物质通称碳源。 14.生长因子：通常是指那些微生物生长所必需而且需要量很小的，但微生物自身不能合成 的，必须在培养基中加入的有机营养物。 15.自养微生物：以 CO2 为唯一的碳源，能够在完全无机的环境中生长。 16. 培养基： 根据微生物对营养物质的需要，经过人工配制的适合不同微生物生长繁殖或积 累代谢产物的营养基质称为培养基。 17.微生物的生长曲线（growth curve） ：将少量单细胞微生物纯菌种接种到新鲜的液体培养 基中，在适宜条件下培养，以细胞数目的对数为纵坐标，时间为横坐标，可以画出一条有规 律的曲线，这就是微生物的生长曲线（growth curve）。