测硒的方法

硒的测定方法及中草药中硒含量的测定

冯程

08应用化学

摘要

硒是人体健康必需的微量元素之一，具有抗癌、抗氧化、抗辐射、抗衰老和提高人体免疫力等作用，人体补硒的最佳途径是食用农副产品，但其含量过多或过少都会对人体造成损害[1 ]，因此，硒含量的测定非常重要。目前测定硒的方法很多，主要有电化学法[2]、原子吸收法[3]、紫外分光光度法[4]、催化动力学光度法[5]、催化极谱法[6]、氢化物原子荧光法[7]等。利用原子荧光分光光度法测定了活血化瘀中草药和普通中草药的硒含量,活血化瘀中草药中硒含量平均值高于普通中草药,两者具有显著性差异(P<0·01)。

[关键词] 中草药,硒,荧光分光光度法,心血管疾病

ABSTRACT

To study the method of determination contents of Selenium of tea by hydride generation atomic fluorescence spectrometry, the influence of instrument parameters and sample digestion condition are discussed, and the optimized experimental conditions were obtained.The average content of seleniumwas (0·73±0·26) ×10-6and (0·34±0·24)×10-6respectively. The difference of selenium between common herbs and invigorating circulation blood and removing blood stasis herbs was significant (P<0·01).

[Key words] herb, selenium, fluorometry

目录

摘要 (i)

ABSTRACT (ii)

前言 (1)

1总硒的测定方法 (1)

1.1荧光法............................................................................... 错误！未定义书签。

1.2原子吸收光谱法 (1)

1.3氢化物原子荧光光谱法 (1)

1.4电感偶合等离子体发射光谱法....................................... 错误！未定义书签。

1.5催化吸光光度法 (1)

1.6紫外可见吸光光度法 (2)

1.7化学发光猝灭法............................................................... 错误！未定义书签。

1.8电分析法.............................................................................. 错误！未定义书签。

1.9中子活化分析................................................................... 错误！未定义书签。

1.10色谱法 (2)

2实验部分 (1)

2.1仪器和试剂....................................................................... 错误！未定义书签。

2.2样品的采集和处理 (2)

2.3测定方法........................................................................... 错误！未定义书签。3结果和讨论.............................................................................. 错误！未定义书签。

3.1仪器条件的选择............................................................... 错误！未定义书签。

3.2混酸比例的调节 (2)

3.3样品分析 (3)

3.4讨论 (3)

参考文献........................................................................................ 错误！未定义书签。

安康学院化学化工系学年论文第1页

前言

硒是人体必需的痕量元素,具有维持心血管系统正常结构和功能作用。缺硒与冠心病、动脉硬化及高血压等心血管系统疾病有关。因此探索硒含量与活血化瘀中草药药理活性关。因此,灵敏可靠的分析方法对于发展含硒食品、保健营养学非常必要。有研究表明,倘若长期每天摄入超过3mg的硒就会引起慢性中毒。硒的毒性大小随硒化物的种类不同而异,单质硒实际上是无毒的,因为它既不易溶解又不易吸收。人体内对硒的需求量目前尚没有统一的标准。1976年,国际硒学会推荐的标准为每天60μg。饮食中含硒量应达到0.1mg·kg-1才能预防硒缺乏症的出现。1988年中国营养学会推荐的日采食量标准为50μg。所以人们一直在关注天然产物中硒含量的分析。

1总硒含量测定方法

1.1 荧光法

荧光法的基本原理是在一定条件下将样品中不同形态硒转化为Se(Ⅳ),用2,3-二氨基萘(DAN)对Se(Ⅳ)的选择性反应生成的Se-DAN,其荧光强度与硒浓度在一定条件下成正比。用环己烷等有机溶剂萃取后于激发光波长376nm,发射光波长520nm,与绘制标准曲线比较定量。

荧光法是测定硒的经典方法,具有灵敏度高的优点,但该法操作繁琐费时。

1.2 原子吸收光谱法

原子吸收光谱法是基于物质所产生的原子蒸汽对特定谱线的吸收作用来进行定量分析的一种方法。石墨炉原子吸收光谱法存在硒的挥发损失、干扰等问题。张奇、李海涛、杨锦发等在用石墨炉原子吸收法测定样品中硒时采用不同的基体改进剂均获得较好的效果。王宏采用石墨炉平台技术和塞曼扣背景系统消除基体干扰,并用铜基体改进剂,测定了鸡蛋中微量硒,也获得满意结果。氢化物石墨炉原子吸收

光谱法是近年来发展起。它使测定元素转化成气态氢化物与基体分离,受干扰较小、灵敏度高、重现性好。马玉平将流动注射技术与之结合,克服了间歇式氢化物发生器操作复杂,测定速度慢的缺点,使该法的实用价值得到提高。样品不经分离,直接进样测定。该方法下限可达17ng·g-1,样品回收率为98.89%101.20%。

1.3 氢化物原子荧光光谱法(HG-AFS)

氢化物原子荧光光谱法原理是将样品中硒转化为Se(Ⅳ),用NaBH4或KBH4作还原剂,将Se(Ⅳ)在HCl介质中还原成SeH4,由载气带入原子化器中进行原子化,在硒特制空心阴极灯照射下,基态硒原子被激发至高能态,在去活化回到基态时,发射出特征波长的荧光,其荧光强度与硒含量成正比。氢化物原子荧光光谱法,测定食品中硒准确度高、灵敏度、精密度好,线性范围宽,所用试剂毒性小,实用性强,已列入国标法。)

1.4 电感偶合等离子体发射光谱法(ICP-AES)

在任何高温气体中,如有1%以上原子或分子被电离,该气体即具有相当大的电导率,这种自由电子、离子和中性原子或分子组成的中性气体,即称为等离子体。HG-ICP-AES已广泛应用于啤酒、蜂蜜、猪肉中痕量硒的分析。在天然药物中该法也常被使用。

1.5 催化吸光光度法(CSA)

利用Se(Ⅳ)能够催化KClO3氧化苯肼生成偶氮离子,继而与变色酸偶合成红色偶氮染料,生成的红色偶氮染料的吸光度与一定量范围的硒成正比。因而可利用催化吸光光度法测Se(Ⅳ)的量。郝素娥采用此法测定了硒酵母中硒的含量。许卉等也利用CSA法测定了海产品中硒。

1.6 紫外可见吸光光度法

李保林、李剑华等利用Se(Ⅳ)与DAB的络合显色反应,用紫外吸光光度法测定硒。贺萍等采用双硫腙-CCl4萃取吸光光度法测定海产品中痕量硒。用硒-硫氰酸钾

-罗丹明B-明胶-OP体系吸光光度法测定微量硒。

1.7 化学发光猝灭法(CEM)

利用硒对鲁米诺-过氧化氢-高锰酸钾发光体系的阻化作用,实现化学猝灭法测定微量硒。李建国利用Se(Ⅳ)与I-反应生成I-3,而I-3使罗丹明6G荧光猝灭,建立了间接测定Se(Ⅳ)含量的荧光猝灭法。

1.8 电分析法

电分析法中的极谱法和溶出伏安法在硒分析中应用较广。极谱法和溶出伏安法是特殊条件下进行的电解分析法。具有仪器简单、灵敏度高、准确度高、分析速度快、应用范围广等特点。用催化极谱法测定蚂蚁及其制剂中的硒,示波极谱法测定植物药类中的硒等均已得到满意效果。

1.9 中子活化分析(NAA)

中子活化分析技术近年来在不断发展且日趋完善,适用于测定含量很少的微量元素,具有微量、快速、准确和同时分析许多元素的优点。国内已有采用中子活化分析法分析我国所产的四种主要麻黄中硒的含量。但由于中子活化法所需的设备不宜为一般实验室所具备,未得到广泛应用。

1.10 色谱法

气相色谱法测定水中的Se(Ⅳ)具有很高的灵敏度和可靠性。原理是4-硝基邻苯二胺在酸性介质中选择性地与Se(Ⅳ)反应,生成稳定性高、热挥发性好的5-硝基-2,1,3-苯并硒二唑,通过涂渍SE-30,Chromosorb-W色谱柱分离,然后用电子捕获检测器进行检测,内标法定量。检出限为0.1ng,回收率达96.5%。高效液相色谱法原理同气相色谱法用荧光检测器检测。

2实验部分

2.1 仪器和试剂

PF6-2非色散原子荧光分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；101-2B型电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；ML1.8-4型可调式电热板（北京化玻医疗器械有限公司）；FW80型高速万能试样粉碎机（北京科伟永兴仪器有限公司）；DZKW-4电子恒温水浴锅（黄骅卸甲渤海电器厂）；SDMB恒温电热板（山东省鄄城新华电热仪器厂）；SZ-97自动三重水蒸馏气（上海亚荣生化仪器厂）；AE200 型分析天平 ( 上海梅特勒—托利多仪器公司)。

硒标准溶液(100μg/mL)：国家标准物质中心；硒标准工作液(100μg/L)：由标准储备液逐级稀释配制,现用现配；硼氢化钾溶液：称取15.0 g硼氢化钾，溶于氢氧化钾溶液(0.5%)中，然后定容至1000m L；铁氰化钾溶液：准确称取1.000 0 g 铁氰化钾K3Fe( CN) 6，用三重蒸馏水定容至100 mL 混匀；载液：5﹪盐酸溶液；氩气：纯度为99.99%；水：为三重蒸馏水；其余试剂均为分析纯或优级纯。

2.2 样品的采集和处理

取未经泡制的中药材1kg用清水洗净,再用去离子水洗三次。放在真空干燥箱中烘干（60℃）之后粉碎备用。称取粉碎后的样品0.5000g左右，放入小锥形瓶内，分别加入硝酸+高氯酸混酸10mL，盖住瓶子冷消化一定时间，置恒温电热板上加热，温度控制在一定范围，并及时补加混酸，当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热至剩余体积2mL左右，很快取下，冷却后加入5mL盐酸（1：1），置于沸水浴加热10 min左右，取下锥形瓶，冷却至室温，再加三重蒸馏水，过滤，用三重蒸馏水冲洗滤渣至少三次，清洗液合并至容量瓶，加1. 0mL的铁氰化钾溶液，用蒸馏水定容至25mL至容量瓶中，混匀待测。同时做空白试验。

2.3测定方法

开机后设定好仪器最佳条件, 逐步将炉温升至所需温度后,稳定30 min后开始测量。连续用硒标准溶液的1号管进样,待读数稳定之后,转入标准系列测量,绘制标准曲线。在转入样品测定之前,再进入空白值测量状态,用样品空白消化液进样,让仪器取其均值作为扣底的空白值。随后即可依次测定样品。每次测不同的样品前用载液清洗进样器。

3 结果和讨论

3·1仪器条件的选择

通过对仪器条件的负高压、灯电流、原子化器高度、载气和屏蔽气流量、延迟

时间、读数时间、加液时间、进样体积等进行试验, 建立了仪器的最佳工作条件(见

表1)。

表1仪器工作条件

T able 1 Instrument operating conditions

多道同时点灯无负高压（V）300.00

信道元素B道：Se

通道灯电流（mA）B主灯：40 B辅灯：40

载气流量（mL/min）300 屏蔽气流量（mL/min）600

原子化气温度(℃) 160 炉丝亮暗度 3 第一次载液进样量（mL） 1.5 第二次载液进样量（mL） 1.5 样品进样量（mL） 1.0 清洗过程载液进样量（mL） 1.0

进样方式自动进样测量方法标准曲线法

读数方式面积推样时间（S）20

延迟时间（S） 5 读数时间（S）15

空白判别值 5.0 标样是否自动配置是

3·2混酸比例的调节

精确称取0.5000g同一采摘时间的样品15份，三份一组做平行实验，加入不同比例的混酸溶液10mL消解过夜后，后续处理步骤同1.2。由测得相对荧光值结果，结果见表2。可知，混酸比为（3：2）时样液荧光值最高，说明利用硝酸：高氯酸（3：2）消解处理样品对茶叶中硒的提取率最高。

3·3 样品分析

按实验方法测定样品中硒的荧光值,扣除试剂空白值,按公式计算出样品中硒的含量

3·4 讨论

硒是谷胱甘肽氧化酶(GSH-Px)的活性中心,它与心血管的结构功能及疾病的发生关系密切。动物实验表明,低硒或缺硒导致鼠末梢组织缺血,形成心脑血管疾患。Se可增加GSH-Px的活性,因此硒在心血管疾病的防治中起十分重要的作用。本实验中检测了常用于治疗心血管疾病的传统中药和普通中药各12种。将表1、表2的数据进行统计,t检验表明,活血化瘀中草药与普通中草药硒含量分别为(0·73±0·26 )×10-6和(0·34±0·24 )×10-6【参考文献编号】,两者有显著性差异(P<0·01),显示活血化瘀中草药的药理活性同痕量元素硒含量有一定关系,本实验结果为进一步研究中药硒含量与心血管疾病关系提供了实验依据。

参考文献:

[1] 王夔.生命科学中的微量元素[M].北京:中国计量出版社, 1991. 5.

[2] 王亚光等.营养学报, 1985, 7 (1): 39.

[3] 方正.国外医学老年医学分册, 1995, 5 (16): 3.

[4] William GH. Fed Proc, 1975, 34: 2083~2089

[5] 周形海.微量元素与疾病.北京:人民军医出版社,1987:15

[6] 沈同等主编生物化学北京:高等教育出版社。

[7] 北大生物系编生物化学实验指导北京:高等教育出版社。

[8] 周形海.微量元素与疾病.北京:人民军医出版社。

[9] 李建武,肖能更,余瑞元等.生物化学实验原理和方法.北京:北京大学出版社,199

安康学院化学化工系学年论文

蛋白质的测定方法

蛋白质的测定方法 测定食物中的蛋白质含量有二种方法，一是凯氏微量法，二是自动定氮分析法。 一．凯氏微量法 有手工滴定定氮和自动定氮仪定氮，实验者可根据经济条件设备而定。 1.原理 蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用过量硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。 2NH2（CH2）2COOH+13H2SO4 （NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2O （NH4）2SO4+2NaOH 2NH3+2H2O+Na2SO4 2.方法 本法参照GB 5009.5 -85 适用于各类食品及饲料中蛋白质的测定 3.试剂 所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。试剂均为分析纯。 3.1硫酸铜 3.2硫酸钾 3.3浓硫酸 3.4 2%硼酸溶液（或1%的硼酸） 3.5 混合指示剂：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。 3.6饱和氢氧化钠：500g氢氧化钠加入500ml水中，搅拌溶解，冷却后放置数日，澄清后使用。 3.7 0.01mol/L或0.05mol/L盐酸标准溶液：需标定后使用(配制及标定方法见附录) 4.仪器 消化炉凯氏定氮蒸馏装置万分之一电子天平 凯氏定氮蒸馏装置：如图所示 5. 操作步骤 5.1样品处理：精密称取0.1~2.0g固体样品或2~5g半固体样品或吸取液体样品5~20ml，放入100ml或500ml凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜，0.3g硫酸钾及3~20ml浓硫酸，放置过夜后小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，取下放冷后用约2～10ml蒸馏水冲洗瓶壁，混匀后继续加热至液体呈蓝绿透明，取下放冷，小心加10~20ml水混匀，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白实验。 5.2按图装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。 5.3向接收瓶内加入10ml ,1~2%硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10ml样品消化稀释液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使之流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将3~10ml饱和氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯中，提起玻璃塞使其缓缓流入反应室，立即将玻璃塞盖紧，并加水于小玻璃杯中以防漏气。加紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏2min，移动接收瓶，使冷凝管下端离开液面，然后用少量中性水冲洗冷凝管下端外部，再蒸馏1min取下接收瓶，以0.01或0.05mol/L盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。 同时吸取10ml试剂空白消化液按5.3操作。 6. 计算

怎么让生鸡粪发酵腐熟

怎么让生鸡粪发酵腐熟 广大农民朋友们众所周知，生鸡粪是不能直接施在地里，因为作物生长发育是 依靠吸收土中经过发酵溶解于水中的氮、磷、钾、镁、铁……各种营养元素的，而生鸡粪，未经发酵即直接埋入土壤内，施后进行发酵产生高温，会直接烫伤作物根系，加上微生物活动，造成土壤缺氧，可致作物死亡。同时，未腐熟的 鸡粪会带有很多有害菌种，危害作物生长。所以生鸡粪一定经过菌种的腐熟才能上地。 粪发酵腐熟的方法： 1、塑料袋腐熟 将周长为7～8米长的塑料筒，一端用细绳子扎紧，放在蔬菜行间。从另一 端装入鸡粪150～200千克，袋中要留出适当的空隙，不能太满。然后，往里灌水，水量大小以淹没鸡粪为宜，再扎紧口发酵，5～6天即可完全腐熟。要注意 两端一定要扎紧口，以其中的水不流出来为宜，如果要加快腐熟的速度和防止 腐熟不彻底，可在其中加入如金有机肥发酵剂。此法简单易操作，腐熟速度快，不会对棚里的蔬菜造成气害。 2、堆制自然腐熟 将要腐熟的鸡粪在水泥地上或覆盖塑料膜的泥地上，将鸡粪堆成高不超过 1.5～ 2.0米，宽1.5～ 3.0米的长条状，长度视场地大小和鸡粪多少而定。加 入适量水（55%左右），然后再盖上塑料薄膜，使堆肥自然发热达50℃以上， 杀灭病原菌、寄生虫卵。注意粪堆不要太密闭，这样缺少氧气，微生物无法大 量繁殖，可以在腐熟时，掺入一定量的锯末、砻糠或稻草、小麦、玉米等作物 秸秆，并使薄膜与粪堆有一定的间隙，以提高透气性，补充氧气，促进微生物 的快速、大量繁殖。还可在鸡粪内撒入过磷酸钙、沸石、生土等吸附剂，吸附 发酵过程中产生的臭气。 3、生物制剂腐熟 如上法，但在在腐熟前，将沃宝生物有机肥发酵剂均匀喷洒到鸡粪上，再堆制或翻入土壤，可快速除臭、腐熟。这种方法鸡粪发酵腐熟速度快、效果好。 4、大棚内腐熟池腐熟 在大棚的西端靠棚口处建一个体积为2立方米左右的池子，把鸡粪放入，加入沃宝生物有机肥发酵剂腐熟后再冲施蔬菜。但在大棚里腐熟要注意不要在严 冬期和阴雪天气栅内通气受限的情况下进行，以免腐熟过程中产生的氨气等有 害气体在棚内积累过多，引发气害。此法主要是针对鸡粪发酵腐熟过程中，会 释放出热量和二氧化碳，这些都是冬季棚内蔬菜最需要的，可谓一举多得。 以上这几种方法都是进行鸡粪发酵腐熟，方法简单、容易操作，使用沃宝生物有机肥发酵剂病可以大大的减少发酵的时间，并增加了土壤中的有益微生物 的菌群。

6种方法测定蛋白质含量

6种方法测定蛋白质含量 [ 文章来源： | 文章作者： | 发布时间：2006-12-25| 字体： [大 中 小] 一、微量凯氏（kjeldahl ）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： nh 2ch 2cooh+3h 2so 4——2co 2+3so 2+4h 2o+nh 3 (1) 2nh 3+h 2so 4——(nh 4)2so 4 (2) (nh 4)2so 4+2naoh ——2h 2o+na 2so 4+2nh 3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。 计算所得结果为样品总氮量，如欲求得 样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。 二、双缩脲法（biuret 法） （一）实验原理 双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg 蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris 缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速 ，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材

有机肥发酵方法分析

有机肥 有机肥： 主要指各种动物和植物等，经过一定时期发酵腐熟后形成的肥料（其中包括经过加工的菜籽饼，是没有异味的）。 有机肥含有大量生物物质、动植物残体、排泄物、生物废物等物质、施用有机肥料不仅能为农作物提供全面营养，而且肥效长，可增加和更新土壤有机质，促进微生物繁殖，改善土壤的理化性质和生物活性，是绿色食品生产的主要养分来源。堆肥 以各类桔秆、落叶、青草、动植物残体、人畜粪便为原料，与少量泥土混合堆积而成的一种有机肥料。 沤肥 沤肥所用原料与堆肥基本相同，只是在淹水条件下进行发酵而成。 厩肥 指猪、牛、马、羊、鸡、鸭等畜禽的粪尿与秸秆垫料堆沤制成的肥料。 沼气肥 在密封的沼气池中，有机物腐解产生沼气后的副产物，包括沼气液和残渣。 绿肥 利用栽培或野生的绿色植物体作肥料。如豆科的绿豆、蚕豆、草木樨、田菁、苜蓿、苕子等。非豆科绿肥有黑麦草、肥田萝卜、小葵子、满江红、水葫芦、水花生等。 作物秸秆 农作物秸秆是重要的有机肥之一，作物秸秆含有作物所必需的营养元素有N、P、K、 Ca、s等。在适宜条件下通过土壤微生物的作用，这些元素经过矿化再回到土壤中，为作物吸收利用。 饼肥 菜籽饼、棉籽饼、豆饼、芝麻饼、蓖麻饼、茶籽饼等。 泥肥 未经污染的河泥、塘泥、沟泥、港泥、湖泥等。 现在，随着科学技术的不断发展，通过有益菌群的人工纯培养技术，采用科学的提炼，可以生产出多种多样不同品种的生物有机肥，它能改善土质、减少环境污染、增肥增效等。生物有机肥将是未来农业生产用肥的主要发展趋势。 1.发酵作业流程 1.从取料口取出一定量的产品 2.用带式输送机搬运出 3.把定量原料投入到料斗提升机 4.用料斗提升机从投入口投入到发酵槽里 5.根据原料状态有时要添加废粘土

实验三 食品中硒的测定-原子荧光光谱法

光谱技术在食品分析中的应用 实验三食品中硒的测定-原子荧光光谱法 一、实验目的 1、了解原子荧光光度计仪器的基本结构和原理； 2、学会原子荧光光度计的操作技术； 3、了解食品中硒的测定意义； 4、学会湿法消化样品的操作。 二、基本原理 利用硼氢化钠作为还原剂，将四价硒在盐酸介质中还原为硒化氢（SeH2），由载气带 入原子化器中进行原子化，在硒特制空心阴极灯照射下，基态硒原子被激发至高能态，再 去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与硒含量成正比，从而定量硒在 食品中的含量。 三、仪器和试剂 1、仪器： AFS-230E型双道原子荧光光谱仪、硒特制空心阴极灯、可调式电热板 2、试剂 除非另有规定，本方法所使用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的三级水；所用玻璃仪器均需以硝酸（1+5）浸泡过夜，用水反复冲洗，最后用纯水冲冼干净。 硝酸（优级纯）、盐酸（优级纯）、氢氧化钠（5g/L，优级纯）、硼氢化钠溶液（8g/L）、铁氰化钾溶液（100g/L）、硒标准储备液（100μg/mL，光谱纯）、盐酸（6 mol/L）、混合酸：将硝酸与高氯酸按9：1 体积混合等。 硒标准储备液制备（100μg/mL）：称取0.100g高纯硒粉于1000mL容量瓶中，溶于少 量硝酸中，加入2mL高氯酸，置沸水浴中加热3h~4h冷却后再加8.4mL盐酸，再置沸水浴 中煮2min，用蒸馏水准确稀释至1000mL，摇匀。 硒标准应用液制备：取100μg/mL硒标准储备液1.0mL，定容100mL，摇匀备用。 硼氢化钠溶液（8g/L）制备：称取8.0g硼氢化钠（NaBH4），溶于氢氧化钠溶液（5g/L）中，然后定容至1000mL。 铁氰化钾溶液（100g/L）制备：称取10.0g铁氰化钾（K3Fe(CN)6），溶于100mL容量 瓶中，摇匀。 载流溶液：5%盐酸水溶液。

食品中蛋白质的含量测定

蛋白质的测定方法 测定食品中的蛋白质含量有二种方法，一是凯氏微量法，二是自动定氮分析法。 一．凯氏微量法 有手工滴定定氮和自动定氮仪定氮，实验者可根据经济条件设备而定。 1.原理 蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用过量硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。 2NH2（CH2）2COOH+13H2SO4 （NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2O （NH4）2SO4+2NaOH 2NH3+2H2O+Na2SO4 2.方法 本法参照GB 5009.5 -85 适用于各类食品及饲料中蛋白质的测定 3.试剂 所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。试剂均为分析纯。 3.1硫酸铜 3.2硫酸钾 3.3浓硫酸 3.4 2%硼酸溶液（或1%的硼酸） 3.5 混合指示剂：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2 份0.1%甲基红乙醇溶与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。 3.6饱和氢氧化钠：500g氢氧化钠加入500ml水中，搅拌溶解，冷却后放置数日，澄清后使用。 3.7 0.01mol/L或0.05mol/L盐酸标准溶液：需标定后使用(配制及标定方法见附录) 4.仪器 消化炉凯氏定氮蒸馏装置万分之一电子天平 凯氏定氮蒸馏装置：如图所示 5. 操作步骤 5.1样品处理：精密称取0.1~2.0g固体样品或2~5g半固体样品或吸取液体样品5~20ml，放入100ml 或500ml凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜，0.3g硫酸钾及3~20ml浓硫酸，放置过夜后小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，取下放冷后用约2～10ml蒸馏水冲洗瓶壁，混匀后继续加热至液体呈蓝绿透明，取下放冷，小心加10~20ml水混匀，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白实验。

鸡粪发酵的方法和作用

鸡粪、鸽子粪发酵的方法和用途 粪便的加工处理方式多种多样，有物理方法、化学方法、微生物发酵法、多种方式综合法，其洋法与土法、古老与现代并存，各有优劣，应因地制宜。粪便发酵作肥料的传统老办法是，让其自然堆积发酵5~6个月，作饲料也要二十天或一个月左右，这样臭味散发,既污染环境又造成养分大量流失。而用微生物发酵法处理粪便，不仅能加快发酵过程，缩短发酵时间，防止浪费提高粪便的营养价值；而且能通过发酵产生温度烘干粪便，节省能耗，成本低廉，操作简单，易于推广，因而受到用户欢迎。本方法适合处理鸡粪、猪粪、牛羊粪、鸭粪、鹌鹑粪、兔粪、鸽粪等动物粪便。 一发酵方法： 1）发酵原料：健康新鲜的粪便 2）工具：搅拌机；塑料容器或水泥池（或者土坑垫塑料薄膜）；塑料薄膜；粉碎机（普通农用型）；铁锹。 3）发酵菌种：农盛乐em菌发酵剂。 4）配比：配方一：干粪便1000公斤，农盛乐em菌液发酵剂3-5公斤；配方二：湿粪便700公斤，麦麸或稻糠或秸秆粉300公斤，农盛乐em菌液发酵剂3-5公斤。 5）操作规程： ①将发酵原料按配比准备1000公斤，此为发酵原料待用； ②将3-5公斤农盛乐em菌液发酵剂倒入350公斤水中稀释搅拌均匀，稀释用水最好为井水或河水，若为自来水请放置24小时后再用； ③如有搅拌机：可以先将粪便混合2分钟后，再倒入发酵液稀释液搅拌6分钟；没有搅拌机：用铁锹搅拌按由少到多的原则，即先将发酵液稀释液倒入少量发酵原料中搅拌均匀，直到没有团块，然后再将搅拌好的少量发酵原料倒入剩余发酵原料中搅拌均匀，直到没有团块；（注意：视发酵原料干湿程度增减稀释用水水量，稀释的发酵液用水应是发酵原料的35%左右，拌成以手握成团，指缝见水但不滴水珠，松手即散为好。 注意：水多了易酸，少了发酵不透。如发酵原料较湿，应减少稀释的用水量。） ④将混合后的发酵原料放入塑料容器或水泥池（或者土坑垫塑料薄膜）中，最后装满压实，排去空气后用塑料薄膜密封，一定要完全密闭，适宜温度为25-35℃，发酵5-10天（一般夏5天，春秋7天，冬10天），注意温度和时间的掌握，直到没有臭味含有酒味即为发酵成功。 二粪便发酵的后的用途： 1、可以用来养殖鱼虾，不污染水质，既可以作为鱼虾饲料，又可以作肥水产品； 2、可以用来养殖黄粉虫、蝇蛆、蚯蚓建立生态养殖模式； 3、可以制作种植、花卉等生物有机肥。 4、粪便发酵做有机肥料能增强农作物抗病能力。有机物料在肥料发酵剂类产品发酵处理过程中，伴随着微生物的大量快速繁殖和一系列复杂的生化反应过程，微生物在繁殖过程中会产生大量的特效代谢物质（如酶、激素、抗生素，这些物质是生物体本身自然所产生的，不是外来的化学激素抗生素，只有好处而无任何毒副作用），其中激素可刺激作物快速生长发育；而抗生素则能明显抑制土传病菌的传播，提高作物抗病、抗逆性能。而不发酵处理的粗制有机肥不但没有这些优点，反而由于其自身带有致病菌，成为传播作物病害的主要传染源。

原子荧光法测定食品中的硒

【摘要】采用原子荧光法测定食品中的硒，硒的相对标准偏差为 1.2％，检出限为0.40mg/ml。线性范围为0～400μg/L，相关系数为0.9999.回收率为95.1%～103.8％。【关键词】硒；原子荧光；食品硒是人体必需的微量元素，但是摄入过多对人体健康造成危害。近年来，在食品加工方面有任意在一些食品中强化硒的倾向。为了保障人体健康，因此要加强硒在食品、水中含量的监测力度。常用方法有荧光法、原子吸收法和比色法等，荧光法虽然准确但繁琐，并且所用试剂DAN毒性大且需进口。原子吸收法火焰法灵敏度低，石墨炉法有严重的基体干扰，比色法简便、灵敏度低。原子荧光法测定硒克服以上方法的缺点，是一种简便、灵敏度高的方法。 1 实验部分 1.1 试剂与仪器单光道原子荧光分光光度计（北京瑞利分析仪器公司ＡＦ-610），配有计算机处理系统，硒空心阴极灯：北京真空电子技术研究所，硝酸（优级纯），高氯酸（优级纯），盐酸（优级纯），混合酸：硝酸＋高氯酸（4+1），氢氧化钾（分析纯），硼氢化钾溶液（15g/L）称取2g KOH溶于约200ml纯水中，加入15g硼氢化钾并使之溶解后，用脱脂棉过滤，用纯水稀释至1000ml，摇匀。宜现配现用。铁氰化钾（100g/L)：称取10.0g铁氰化钾（K3Fe(CN)6)溶于100ml蒸馏水中，混匀。硒标准贮备液：国家标准物质GBW（E）080215 100μg/ml，硒标准应用液：取100μg/ml 硒标准贮备液1ml，定容至100ml，此应用液浓度为1μg/ml。载流：20%（V/V）HCl本方法中，除特殊规定外，所用试剂分析纯，实验用水为去离子水。 1.2 仪器工作条件ＰＭＴ电压：340V，ＨＣl主阴极电流：100mA。HCl辅助阴极电流：0mA；原子化器温度：室温（档）。原子化器高度：7mm。载气流量：600ml/min。测量方式：标准曲线法，进样体积：0.5ml。分析信号：峰面积，读数延时：1.0ｓｅｃ。读数时间：12.0ｓｅｃ。流动程序方式：断续流动。采样泵速：100ｒ/ｍｉｎ，采样时间：5sｅｃ，停泵时间：4sec，注入泵速：100r/min，注入时间：16sｅｃ，停泵时间：5sｅｃ。 1.3 样品处理及消化粮食：样品用水洗3次，60℃烘干，用不锈钢磨粉碎，储于塑料瓶内，备用。蔬菜及其他植物性食物：取可食部分用水洗净后用纱布吸去水滴，打成匀浆后备用。称取0.5～2.0g样品于150ml 高筒烧杯内，加10ml混合酸及几粒玻璃珠，盖上表面器冷消化过夜。次日于电热板上加热，并及时补加混合酸。当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热至剩余体积2ml左右，切不可蒸干。冷却，再加5ml 6mol/L盐酸，继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现，以完全将六价硒还原成四价硒。冷却，转移定容至50ml容量瓶中，同时做空白实验。吸取10ml样品有消化液于15ml离心管中，加浓盐酸2ml，铁氰化钾溶液1ml，混匀待测。 1.4 标准曲线制作分别取0.0，0.5，1.0，2.0，4.0，5.0ml标准应用液于50ml比色管中，再分别加浓盐酸5ml，铁氰化钾1ml，混匀，用去离子水定容至50ml制成标准工作曲线。[!--empirenews.page--] 1.5 测定［1］开机，预热20～30ｍｉｎ，输入必要的参数：样品量（g或ｍｌ）、稀释体积（ｍｌ）、进样体积（ｍｌ）、结果的浓度单位、测定点重复测量次数、标准系列点数及各点的浓度值。先测定空白溶液，然后转入标准系列测量，绘制标准曲线后，再测定两个空白溶液的空白值。随后测定样品，测定完毕，打印出测定结果。2结果与讨论 2.1 标准曲线线性范围及回归方程测定0～100μg/L的标准曲线，相关系数为0.9999，回归方程Y=33.807-24.515X。标准曲线线性范围0～400μg/L。 2.2 干扰及消除经实验1000倍Al3+、Fe2+、Fe3+、Ca2+、Mg2+、K+及Cl-、F-、NO3-、SO42-、PO43-不干扰测定。氢化物发生原子吸收法中观察到Sn对Se测定的严重干扰，而氢化物原子荧光法中未发现。对于基体成分复杂，而Se的含量较低的样品，可采用萃取、疏基棉吸附、离子交换等分离高集方法来消除干扰［2］。 2.3 相对标准偏差和检出限对40ng/ml的硒进行11次测定得相对标准偏差1.2%。连续测定11次空白荧光值11次。空白值的标准偏差ＳＤ。根据工作曲线的斜率K和检出限Ｄ＝3δ/K。算出硒的检出限0.4ng/ml。按分析方法测定高中低浓度样品，各测定6次得平均值及相对标准偏差。平均值分别为0.013、0.156、0.456mg/kg，其相对标准偏差分别为5.0、4.2、3.2%。 2.4 方法准确度用

蛋白质定量检测方法

Bradford法蛋白定量（Bradford Protein Assay ） Bradford Assay is a rapid and accurate method commonly used to determine the total protein concentration of a sample. The assay is based on the observation that the absorbance maximum for an acidic solution of Coomassie Brilliant Blue G-250 shifts from 465 nm to 595 nm when binding to protein occurs. Both hydrophobic and ionic interactions stabilize the anionic form of the dye, causing a visible color change. Within the linear range of the assay (~5-25 mcg/mL), the more protein present, the more Coomassie binds. Reference Bradford, M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. (1976) 72, 248-254. 考马斯亮蓝染色法(Bradford法)测定蛋白质含量 原理 1976年Bradford建立了用考马斯亮蓝G250与蛋白质结合的原理，迅速、敏感的定量测定蛋白质的方法。染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收的改变，从465nm变为595nm，光吸收增加。蛋白质-染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度，最低检出量为1μg蛋白。染料与蛋白质的结合是很迅速的过程，大约需2min，结合物的颜色在1h内是稳定的。一些阳离子，如K+，Na+，Mg2+，(NH4)2SO4，乙醇等物质不干扰测定，而大量的去污剂如TritonX100，SDS等严重干扰测定，少量的去污剂可通过用适当的对照而消除。由于染色法简单迅速，干扰物质少，灵敏度高，现已广泛应用于蛋白质含量的测定。 操作 一、标准方法 取含10～100μg蛋白质溶液于小试管中，用双蒸水或缓冲液调体积到0.1mL，然后加入5mL蛋白试剂，充分振荡混合，2min后于595nm测定光吸收值。以0.1mL 双蒸水或缓冲液及5mL蛋白试剂作为空白对照。 二、微量蛋白分析法 取含1～10μg蛋白质溶液，用双蒸水调体积到0.8mL，加0.2mL蛋白试剂，充分振荡混合，2min后于595nm测定光吸收值，以0.8mL双蒸水及0.2mL蛋白试剂作为空白对照。用不同浓度的蛋白质溶液作标准曲线，以蛋白质浓度为横坐

鸡粪发酵有机肥必须注意的几个步骤

鸡粪发酵有机肥必须注意的几个步骤！ 鸡粪是一种比较优质的有机肥，其含纯氮、磷（P2O5）、钾（K2O）约为1.63%、1.54%、0.85%。鸡粪在施用前必须经过充分的腐熟，将存在鸡粪中的寄生虫及其卵，以及传染性的一些病菌通过在腐熟（沤制）的过程得到灭活。由于鸡粪在腐熟的过程中产生高温，容易造成氮素损失。因此，在腐熟前要适量加水，以及加入5%的过磷酸钙，肥效会更好。 一、拌匀发酵剂 1～1.5吨干鸡粪(鲜鸡粪约2.5～3.5吨)加一公斤沃宝有机肥发酵剂，每公斤的沃宝发酵剂平均加5～10公斤米糠或玉米、麸皮，搅拌均匀后撒入已准备好的物料中，效果最佳。 二、调剂碳氮比 发酵肥料的碳氮比应保持在25～30：1，酸碱度调到6～8(ph)为宜，因鸡粪的碳氮比偏高，应在发酵时加入一些秸秆、稻草、蘑菇渣等一起发酵。 三、调节鸡粪水分 发酵有机肥料的过程中，水分含量是否适宜非常重要的，不能太高，也不能太低，应保持在60～65%，判断方法：手紧抓一把物料，指缝见水印但不滴水，落地能散开为宜。 四、鸡粪建堆 在做发酵堆时不能做的太小太矮，太小会影响发酵，高度一般在1.5米左右，宽度2米左右，长度在2～4米以上的堆发酵效果较好。 五、拌匀通气 沃宝有机肥发酵剂是耗氧性微生物，所以在发酵过程中应加大供氧措施，做

到拌匀、勤翻、通气为宜，否则会因为厌氧发酵影响物料发酵效果。 六、发酵完成 一般在鸡粪堆积48小时后，温度会升至50～60℃，第三天可达65℃以上，在此高温下翻倒一次，一般情况下，在发酵过程中会出现2～3次65℃以上的高温，翻倒2～3次即可完成发酵，正常一周左右可发酵完成，使物料彻底脱臭、发酵腐熟，灭菌杀虫。 注意 鸡粪经鸡粪发酵剂发酵之后，肥效更好，使用更安全方便，还可提高化肥利用率等。不仅鸡粪可以发酵有机肥，各种动物粪便、秸秆、落叶垃圾、树皮、锯末等均可发酵有机肥，发酵方法基本一样。最后还要提醒大家，无论用什么物料发酵有机肥，都要把握好水分含量，否则会功亏一篑。

Han原子荧光测硒2015-11-7

氢化物原子荧光测硒实验方案 1. 主要仪器和试剂： 1.1主要仪器：A FS-922 型氢化物发生双道原子荧光光谱仪（北京吉天仪器有限公司）；硒空心阴极灯(北京真空电子技术研究所)、SH220石墨消解仪（型号SH220；济南海能仪器有限公司）、优普超纯水机、电子天平（赛多利斯；Sartorious BS2245）、数显鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）、25ml容量瓶、消解管、小烧杯、漏斗、移液枪、离心管等常用实验仪器。 1.2主要试剂：盐酸（优级纯；武汉市中天化工有限公司）、硝酸（优级纯；国药集团化学试剂有限公司）、30%过氧化氢（优级纯；天津市光复科技发展有限公司）；氢氧化钾（优级纯）、硼氢化钾（优级纯）；硒标准储备液（100ug/ml）(GSB07 – 1253)(由国家环境保护总局标准样品研究所研制)。实验用水为超纯水。 1.3仪器工作条件（仪器设置及药品） B道硒灯； 光电倍增管负高压：300V; 原子化器高度：10mm; 灯电流：80mA 载气流量：400ml/min 屏蔽气流量：8000mL/min 分析信号：峰面积 读数时间：12s 延迟时间：1.2s 注入量：1.5ml 测定次数：3次 载流：5%HCl；还原剂：1%硼氢化钾（钠）

2、实验步骤：本次实验共有7个样品，14分血样，一份空白对照，分别做两个重复。分1次消解定容，每次消解16个。 2.1. 药品准备（注意：配制药品所用到的所有器皿均需要用1：1的硝酸浸泡过夜，第二天，将侵泡好了的仪器用清水冲洗，再用超纯水润洗三遍，烘干备用。）所需器皿：1000ml容量瓶1个，烧杯，离心管，25ml容量瓶，枪头，500ml容量瓶，移液管，玻璃棒，量筒，集气瓶） 2.1.1配制6ml/L的盐酸溶液200ml。 配方：量取50ml盐酸缓慢加入40ml水中，冷却后定容至100ml。（配制200ml）（※注意：盐酸的配制循序，先加水，再加盐酸，防止盐酸溅出受伤） 2.1.2 配制5%盐酸溶液 配方：50ml定容至1000ml（配2L） 2.1.3 配制标准硒溶液（硒标准溶液最好手工配制，其剃度为40ug/L、20 ug/L、10 ug/L、5 ug/L、2.5 ug/L） 配方：吸取0.025ml 40ug/mL 硒标准溶液，以5%盐酸溶液定容至25mL。制成20ug/L 储备液。再吸取12.25ml硒标准溶液，以5%盐酸溶液定容至25mL，同理配制10 ug/L、5 ug/L、2.5 ug/L硒标准溶液。（仪器可测定的最高浓度为20-30ug/L） 2.1.4配制1%硼氰化钾溶液 配方：将1.0g KBH4(优级纯)溶于100ml 0.5% KOH（优级纯）溶液中，混匀。该溶液易失效，所以需用前配制，放冰箱内可保存10天。（配200ml） 2.2样品处理 2.2.1取20支消解管、20个10ml容量瓶，20个15ml离心管，置于1：1的硝酸液中侵泡(至少一夜)。第二天，将侵泡好了的仪器用清水冲洗，再用超纯水润洗三遍，烘干备用。 2.2.2微波消解 ⑴浸酸：取5ml鳝鱼鲜血于消解管中，加8mL的浓硝酸，2mL的双氧水，浸酸一小时，每个土洋做两个个重复，分别记为A1、A2、并做一组对照 ⑵消解：至微波消解仪中，按下列表格设置好程序，

使用em菌发酵剂发酵鸡粪的方法

鸡粪、鸽粪、鸭粪、猪粪、牛粪、羊粪等动物粪便有很多的营养价值，直接排放不仅污染环境，而且造成很大的浪费，其实这些粪便经过专业的发酵剂处理之后不仅可以制作成肥料，还可以发酵做成动物饲料。 （一）、利用农盛乐em菌发酵剂发酵鸡粪做肥料的方法： 1）发酵原料：如谷糠、杂草、人、畜、禽粪便、作物秸秆（切碎）、茎叶、锯末木屑、食用菌基质残渣和饼粕等。 2）工具：搅拌机；塑料容器或水泥池（或者土坑垫塑料薄膜）；塑料薄膜；粉碎机（普通农用型）；铁锹。 3）发酵菌：种植em菌发酵剂 4）配比：谷糠、杂草、人、畜、禽粪便、作物秸秆（切碎）、茎叶、锯末木屑、食用菌基质残渣和饼粕等。准备400公斤材料和种植em 菌发酵剂1公斤 5）操作规程： ①将发酵原料按配比准备400公斤，此为发酵原料待用； ②将1公斤种植em菌发酵剂倒入50公斤水中稀释搅拌均匀，稀释用水最好为井水或河水，若为自来水请放置24小时后再用；能够适当的溶解一些红糖在里面效果更佳。 ③如有搅拌机：可以先将发酵原料混合2分钟后，再倒入发酵剂稀释液搅拌6分钟；没有搅拌机：用铁锹搅拌按由少到多的原则，即先将菌液稀释液倒入少量发酵原料中搅拌均匀，直到没有团块，然后再将搅拌好的少量发酵原料倒入剩余发酵原料中搅拌均匀，直到没有团

块；（注意：视发酵原料干湿程度增减稀释用水水量，稀释的em菌发酵剂用水应是发酵原料的40%左右，拌成以手握成团，指缝见水但不滴水珠，松手即散为好。注意：水多了易酸，少了发酵不透。如发酵原料较湿，应减少稀释的用水量。） ④将混合后的发酵原料放入塑料容器或水泥池（或者土坑垫塑料薄膜）中，最后装满压实，排去空气后用塑料薄膜密封，一定要完全密闭，适宜温度为25-35℃，发酵5-10天（一般夏4天，春秋7天，冬10天），注意温度和时间的掌握，直到没有臭味含有酒味即为发酵成功。 （二）利用农盛乐em菌发酵剂发酵鸡粪做饲料的方法：将无霉变无病菌的新鲜鸡粪60%(或鸽子粪、鸭粪也可发酵使用），玉米粉15%，谷糠10%、麦麸5%、em菌发酵剂0.5-1%（加入与菌液等比例红糖效果更好），充分搅拌均匀，调节水分到60%左右（可以提前将em菌发酵剂加入适量水中稀释，更利于其搅拌均匀）。其简单判断办法为：即用手紧抓物料一把能成团，松手落地能散开为宜，水分过高过低均不利。然后装入塑料袋或能密封的池子（缸或者做个小发酵池），密封发酵5-7天（冬天时间略长），当鸡粪呈黄绿色，无臭味而略带酒酸味时（发酵时间过长酒味过浓），发酵基本完成，即可饲喂。饲喂时应注意遵从“由少到多，慢慢适应”的原则，猪很爱吃，不易生病，皮毛红润发亮，喜睡，一般能替代最多30%的精饲料。 发酵后鸡粪的缺点是：能值仍然较低，非蛋白氮仍然较多，所以，需

硒 原子荧光法

HZHJSZ00124 水质硒的测定　原子荧光法 HZ-HJ-SZ-0124 水质原子荧光法 1 范围 本方法测硒的最低检出浓度为0.06ìg/L测定上限为10ìg/L μ?3§áò?á3§?ˉ1¤?ˉ·ê3§μè?à??·????D×ü??μ?2a?¨ ?á(III)钴(II)锌(II)各200ìg 铁(III)4mg没有干扰对于铜 此时可容许10ìg铜(II)存在常见阴离子 2 原理 在盐酸和高氯酸溶液中使硒生成硒化氦 硒原子受光辐射后被激发产生电子跃迁 此时产生的荧光谱线与硒无极放电灯发射谱线产生共振 其荧光强度与试样中硒含量成正比 优级纯 优级纯 优级纯 　 ３．５ １＋１硝酸-高氯酸混合消解液 将300mL浓盐酸加入500mL水中加入50mL浓高氯酸 　 ３．７ 硼氢化钾碱溶液将4g氢氧化钠溶解于500mL水中搅拌至溶解完全用定性滤纸过滤　 ３．８ 硒标准贮备溶液99.9%的金属硒(Se)0.1000g溶于少量浓硝酸中在沸水浴上加热除去硝酸继续加热2min ó?????êí?á±ê??2￠?ì?è于冰箱内保存 3.9 硒标准使用溶液 　 4 仪器 4.1 无色散原子荧光分析仪 5 试样制备 取适量水样(含硒量加入2.5mL混合消解液 取下冷却后加热微沸3~5minó?3.2mol/L盐酸小心将溶液转入25mL具塞刻度管中 备测 盖上磨口塞打开电磁阀自动加入硼氢化钾碱溶液 于波长196.0nm处测量所发出的荧光强度从校准曲线上查得硒量 1

2 6.2 校谁曲线的绘制 分别吸取0 2.00 4.00和5.00mL 硒标准使用溶液于氢化物发生器中以下操作与样品测定步骤相同 7 结果计算 c 硒 ìg/L m /V 1 m 由校准曲线查得硒量(ng) V 1分取消解试样体积 (mL) 8 精密度和准确度 经四个实验室分析16个工业废水和3个河水样品　 　 表1 测定水中硒的精密度与准确度 水样种类 总硒度范围 相对标准偏差 河水 皮革厂焦化厂废水 硫酸厂电厂废水 电厂废水 (1) 对含有机物质多的复杂样品 较清洁样品进行一次消解即可否则会因加热温度过高造成硒损失 可在瓶口加上一个小漏斗以防试液转移时溅漏 水和废水监测分析方法水和废水监测分析方法 中国环境科学出版社1997

食品中蛋白质的测定方法

食品中蛋白质的测定方法 蛋白质的测定方法分为两大类：一类是利用蛋白质的共性，即含氮量，肽链和折射率测定蛋白质含量，另一类是利用蛋白质中特定氨基酸残基、酸、碱性基团和芳香基团测定蛋白质含量。但是食品种类很多，食品中蛋白质含量又不同，特别是其他成分，如碳水化合物，脂肪和维生素的干扰成分很多，因此蛋白质的测定通常利用经典的剀氏定氮法是由样品消化成铵盐蒸馏，用标准酸液吸收，用标准酸或碱液滴定，由样品中含氮量计算出蛋白质的含量。由于食品中蛋白质含量不同又分为凯氏定氮常量法、半微量法和微量法，但它们的基本原理都是一样的。 一凯氏定氮法 我们在检验食品中蛋白质时，往往只限于测定总氮量，然后乘以蛋白质核算系数，得到蛋白质含量，实际上包括核酸、生物碱、含氮类脂、叶啉和含氮色素等非蛋白质氮化合物，故称为粗蛋白质。 (一)、常量凯氏定氮法 衡量食品的营养成分时，要测定蛋白质含量，但由于蛋白质组成及其性质的复杂性，在食品分析中，通常用食品的总氮量表示，蛋白质是食品含氮物质的主要形式，每一蛋白质都有其恒定的含氮量，用实验方法求得某样品中的含氮量后，通过一定的换算系数。即可计算该样品的蛋白质含量。 一般食品蛋白质含氮量为l6％，即1份氮素相当于6.25分蛋白质,以此为换算系数6.25，不同类的食物其蛋白质的换算系数不同.如玉米、高梁、荞麦,肉与肉制品取6.25，大米取5.95、小麦粉取5.7,乳制品取6.38、大豆及其制品取5.17，动物胶5.55。 测定原理： 食品经加硫酸消化使蛋白质分解，其中氮素以氨的形式与硫酸化合成硫酸铵。然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸液吸收形成硼酸铵，再用盐酸标准溶液或硫酸标准溶液滴定，根据盐酸消耗量计算出总氮量，再乘以一定的数值即为蛋白质含量，其化学反应式如下。 (1) 消化反应：有机物(含C、N、H、O、P、S等元素)+H2S04 -→(NH4)2S04+C02↑+S02↑+S03+H3PO4+CO2↑ (2) 蒸馏反应：(NH4)2SO4+2NAOH-→2NH3↑+2H2O+NA2SO4 2NH3+4H3BO3-→(NH4)2B4O7+5H2O (3) 滴定反应：(NH4)2B4O7+2HCH+5H2O-→2NH4CH+4H3BO3 或 (NH4)2B407+H2S04+5H20-(NH4)9SO4+4H2BO2 试剂与仪器： 1、硫酸钾；

发酵鸡粪肥水养鱼的方法

发酵鸡粪肥水养鱼 池塘养鱼，通过优菌康鸡粪发酵剂发酵鸡粪撒到池塘，不但可以起到肥水作用，还可以当作饲料直接喂鱼。 鸡粪是所有常规畜禽粪便中营养价值最高的，因为鸡肠子相对于牛羊鹅猪而言太短，食物在肠道中逗留的时间不长，所以鸡饲料的养分一般只能吸收其中的三分之一左右，大部分从直肠排出体外，最终造成鸡“拉出去”的都是“宝”了。鸡粪含粗蛋白约28%、纯蛋白13%，总氨基酸8%，且各种氨基酸比较平衡，此外，还含有丰富的B族维生素和多种微量元素。所以，鸡粪是廉价的低能蛋白饲料，用鸡粪代替部分蛋白料，再补充一些能量饲料，能大大提高畜牧养殖业的经济效益，而且能减少污染，净化环境，形成生态产业链。 鱼塘施肥的作用主要是繁殖浮游生物、附生藻类、底栖动物等天然饵料，为鲢、鳙、泥鳅等养殖鱼类提供丰富的食料资源。 春季鱼塘施肥应注意以下事项： 一、有机肥料须经优菌康充分发酵。 春季鱼塘水温较低，水中含氧丰富，合理施用有机肥不但成本低，而且可以达到很好的养殖效果。鱼塘施用大粪、畜禽粪等有机肥料必须经过优菌康发酵剂充分发酵，因为经过优菌康发酵剂发酵腐熟、有机物质充分分解的肥料施入鱼塘既可减少水中氧的消耗，又能较快地被浮游植物吸收利用，还能杀死有机肥料中的病原体。 二、少施、匀施、勤施所谓少施。 即每667平方米每次施用有机肥几十千克到100千克；所谓匀施，即用水和粪汁全塘均匀泼洒，使鱼塘水色呈黄褐色或油绿色，水面无油膜，透明度保持在20厘米-30厘米；所谓勤施，即随着鱼类的摄食，每当塘水肥度下降、透明度大于30厘米时立即再施肥。 三、因鱼制宜确定施肥数量。 不是主养鲢、鳙鱼的鱼塘，由于投喂饲料，春季施肥量需相应减少，使透明度保持在30厘米-40厘米，随着气温的上升，塘水肥度会越来越大。精养高产鲤鱼、草鱼的鱼塘即使混养了部分鲢、鳙鱼，春天也不宜施肥。 四、施肥时间以晴天上午为好。 要注意收听（看）天气预报，不在阴天、雨天施肥。浮游植物通过光合作用繁殖生长，在连续2-3天晴朗天气的上午施肥，能最快、最好地促进微生物增生繁殖，最大程度地降低有机肥料对水质的污染，保证鱼塘物质的良性循环。 五、定期换水、保持水质清新。 如果鱼塘中有机物和各类生物的代谢废物积累过多、水中的含氧量下降、浮游生物组成不良，都会影响养殖鱼类的生长。因此，要定期换注新水，以免鱼塘水质过肥，始终保持水质“肥、活、嫩、爽”。 经优菌康发酵剂发酵后的鸡粪鱼也会吃： 1．投喂经过优菌康生物发酵剂发酵的鸡粪，新鲜无污染，粪便中有大量鸡未食用的饵料和未使鸡吸收消化利用的营养成分，可供鱼直接食用，而且鱼爱吃、易消化，效果好。 2．现在养鸡的农户很多，因此鸡粪的来源很广，成本也很低，使用方便，而且效果好，它既能给吃食鱼提供优质适口饵料，又能肥水，促进肥水鱼生长。 3．鸡粪喂鱼要比猪粪喂鱼效果好。鸡饲料的主要成分是由纯豆饼、玉米及鸡料精等优质蛋白质的饲料配合而成的，它的营养丰富，在喂鸡时由于鸡群体密度高，互相之间往往挣抢饵料，将有5％的饲料被鸡啄落在地面上的粪便中，加之还有相当一部分的未消化吸收就排出体外，所以鸡粪比猪粪喂鱼效果要好得多。所以将发酵好的鲜鸡粪和其它原料拌和发酵后喂鱼，效果很好。

蛋白质检测方法

蛋白质的检测（参考GB/T6432-94） 一、原理 凯氏定氮法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化为硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氮溢出，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数 6.25，计算出粗蛋白含量。 二、试剂 （1）硫酸化学纯，含量为98%，无氮； （2）混合催化剂 0.4g硫酸铜，含5个结晶水，6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀； （3）氢氧化钠化学纯，40%水溶液（m/V）； （4）硼酸化学纯，2%水溶液（m/V）； （5）混合指示剂甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月； （6）盐酸标准溶液基准无水碳酸钠法标定； a)0.1mol/l盐酸标准溶液：8.3mL盐酸注入1000mL蒸馏水中。 b)0.02mol/l盐酸标准溶液：1.67mL盐酸注入1000mL蒸馏水中。（7）蔗糖分析纯； （8）硫酸铵分析纯，干燥； （9）硼酸吸收液 1%硼酸水溶液1000mL，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1%甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液，混合，置阴凉处保存期为1个月（全自动程序用）。

三、仪器设备 （1）实验室用样品粉碎机或研钵； （2）分样筛孔径0.45mm（40目）； （3）分析天平感重0.0001g； （4）消煮炉或电炉； （5）滴定管酸式，10、25mL； （6）凯氏烧瓶 250mL； （7）凯氏蒸馏装置常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式； （8）锥形瓶 150、250mL； （9）容量瓶 100mL； （10）消煮管 250mL； （11）定氮仪以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。 四、分析步骤 （一）仲裁法 1.试样的消煮称取试样0.5-1g（含氮量5-80mg）（精确至0.0002g）， 放入凯式烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯式烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化、泡沫消失后，再加强活力（360-410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，消化全过程至少2h。 2.氨的蒸馏 （1）常量蒸馏法将试样消煮液冷却，加入60-100mL蒸馏水，摇匀，

鸡粪发酵的方法

鸡粪发酵的方法

?传统粪便堆沤的缺点与问题 ?鸡粪含有丰富的氮、磷、钾等养分，而且富含有机质，是培肥改良土壤的优质有机肥资源。 ?但如果直接施用鲜粪便，会产生作物伤根、病害、草害等负面影响；如果按传统自然堆沤发酵，也存在以下几个弊端：

?堆沤时间长，一般需要4-6个月，气温低时时间更长，而且堆沤发酵效果差； ?长期堆置既占场地，又对周围环境造成污染； ?自然堆沤发酵的粪便呈烂湿状、恶臭，难以运输，也很难直接施用； ?自然堆沤发酵不能很好地清除粪便里的病原菌、虫卵等有害物质。

?如金菌(em菌种)发酵鸡粪的作用 ?如金菌含有大量的功能性菌群（光合细菌、乳酸菌、酵母菌等多种复合菌群）及其代谢产物，具有加速分解转化粪便物质的作用，能够提高发酵转化率，缩短发酵时间，提高发酵效果，减少甚至消除发酵过程中的恶臭问题，减轻环境污染，而且益生菌能够杀死或抑制粪便中病原菌及 虫卵的生长与繁殖。 ?

?鸡粪N、P、K含量5.3%。 ?猪粪N、P、K含量4.8%。 ?牛粪N、P、K含量4.3%。 ?秸秆N、P、K含量1.2-2.5%。 ?经过如金菌发酵后，N、P、K含量均会提高10-15%。（GB 氮磷钾总含量大于等于干物质总量的4%称作有机肥，小于则是机制营养土)

?需要注意的是，用户为了增加有机肥养分含量（例如磷、钾等养分含量），希望能将化学磷肥和钾肥添加入原料中一起发酵，这种方法不仅会因为化肥加入降低微生物发酵作用影响有机肥质量，而且发酵过程中会造成化肥养分的损失，因此不建议在发酵有机肥时添用化学肥料，除非是C/N比值过高的原料发酵可适当添加1-5%的尿素。 ?若想增加发酵后的成品有机肥养分，可在有机肥充分腐熟发酵成功后，向有机肥中添加需要比例的化学磷肥和钾肥后，再装袋包装即可，一般添加量也不可超过有机肥的10%。