高效液相色谱法测定银曲胶囊中银杏总黄酮醇苷的含量-精品
高效液相色谱法测定银曲胶囊中银杏总黄酮醇
苷的含量-精品
2020-12-12
【关键字】方法、条件、系统、良好、研究、关键、稳定、作用、关系、分析、凝聚、改善作者：顾燕刘萌张现涛邵文豪
【摘要】目的银曲胶囊中银杏总黄酮醇苷的含量测定。方法用高效液相色谱法（HPLC）和DAD紫外检测器测定银曲胶囊中总黄酮醇苷的含量。结果槲皮素浓度在9.60～76.80 μg /ml，山柰素在7.33～58.62 μg /ml，异鼠李素在1.76～14.08 μg /ml之间浓度与峰面积呈良好的线性关系。结论根据3批样品的检测结果，规定银曲胶囊中总黄酮醇苷的含量不低于6 mg/粒。
【关键词】银曲胶囊总黄酮醇苷高效液相色谱法
Abstract：ObjectiveTo determine the total flavonoid glycosides in Yinqu Capsule．MethodsHPLC was adopted with DAD detection for content determination of the total flavonoid glycosides. ResultsThe concentration of quercetin between 9.60 to 76.80 μg/ml，kaempferol between 7.33 to 58.62 μ g / ml, isorhamnetin between 1.76 to 14.08 μ g / ml had a good linear relationship. ConclusionAccording to the results of three blocks ,the content of total flavonoid glycosides is not less than 6 mg per tablets.
Key words：Yinqu capsule; The total flavonoid glycosides ; HPLC
银曲胶囊是由红曲和银杏叶两味药材经加工提取后制成的复方制剂。功能：活血化淤，健脾消食。用于高脂血症，也可用于由高脂血症及动脉粥样硬化引起的心脑血管疾病的治疗。银杏叶中的主要功效成分是黄酮醇类化合物和萜内酯类化合物，具有扩张血管，改善脑循环,抑制血小板凝聚酶等作用，对脑血栓、心绞痛、心肌梗塞有良好的治疗作用。本研究通过HPLC方法测定银曲胶囊中银杏总黄酮醇苷的含量。总黄酮醇苷含量是总苷元的2.51倍，而黄酮醇苷元主要是槲皮素，山柰素和异鼠李素，本研究选择以槲皮素、山柰素、异鼠李素为对照的测定方法，总黄酮醇苷的含量可通过换算校正求出。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent1100高效液相色谱仪，DAD紫外检测器。
1.2 试药银曲胶囊，南京海陵中药制药工艺技术研究有限公司自制；槲皮素、山柰素、异鼠李素（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）。
1.3 试剂甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯。
2 方法与结果［1,2］
2.1 色谱条件的选择色谱条件与系统适用性实验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－0.4%的磷酸水溶液（50∶50）为流动相；检测波长360 nm。流速1 ml/min，柱温35℃。理论塔板数按槲皮素计算应不低于2 500。槲皮素、山柰素、异鼠李素之间及其与之相邻的峰之间的分离度应大于1.5。
2.2 对照品溶液、供试品溶液及阴性溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的配制
分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品，加甲醇制成每毫升分别含30 μg，30 μg，10 μg 的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液制备
取银曲胶囊10粒，取内容物，研细，称取0.2 g，精密称定，加甲醇-25％HCl溶液（4∶1）的混和液25 ml，置水浴中加热回流30 min，迅速冷却至室温，转移至50 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.2.3 测定法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮醇苷含量。
总黄酮醇苷含量＝（槲皮素＋山柰素＋异鼠李素）×2.51
对照品、供试品、阴性对照的色谱图分别见图1～3。
2.3 专属性实验取对照品溶液及阴性溶液注入高效液相色谱仪测定，结果表明在槲皮素、山柰素、异鼠李素处无干扰。
2.4 线性关系的考察对照品储备液的制备：精密称取山柰素对照品11.45 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，配制成山柰素对照品溶液；异鼠李素对照品11.00 mg置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，配制成异鼠李素对照品溶液；槲皮素对照品12.00 mg，置 100 ml容量瓶中，加入山柰素对照品溶液20 ml，异鼠
李素对照溶液2 ml，加甲醇稀释至刻度制成混合溶液，即得。
分别精密移取对照品储备液2，4，6，8，10 ，12，14，16 ml 至25 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为样品液，精密吸取各10μl注入高效液相色谱仪。
结果槲皮素在9.60～76.80 μg /ml，山柰素在7.33～58.62 μg /ml，异鼠李素在1.76～14.08 μg /ml之间浓度与峰面积呈良好的线性关系。线性方程和相关系数分别为Y=38.07X - 15.09，1；Y = 37.16X - 15.10，r=0.999 9；Y = 36.49X - 5.844，r=0.999 9。
2.5 精密度实验取同一对照品溶液10 μl，重复进样测定6次，计算峰面积的RSD，结果槲皮素、山柰素、异鼠李素的RSD分别为0.14%，0.22%，0.34%。结果表明，本方法精密度良好。
2.6 稳定性实验取供试品溶液在第0，2，4，6，8，10，12 h 进样10 μl，用液相色谱仪测定，计算12 h内溶液的稳定性。结果12 h内槲皮素、山柰素、异鼠李素峰面积的RSD分别为1.38%，1.24%，
1.27%。表明样品12 h之内稳定。
2.7 重现性实验取同一供试品溶液样品配制六份样品，分别进行测定，6次结果中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量RSD分别为0.77%，0.80%，1.16%。结果表明本方法的重现性良好。
2.8 回收率实验取槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品适量，加甲醇配制成溶液；另取已知总黄酮醇苷的银曲胶囊（其中槲皮素0.651%、山柰素0.542%、异鼠李素0.131%）10粒，除去囊壳，研细，取粉末0.1 g，精密称定，平行6份，分别精密移入相当于含量80%，
100%，120%的对照品溶液，按含量测定项下供试品制备方法制备，按测定方法进行检测，计算槲皮素、山柰素、异鼠李素的回收率，结果槲皮素、山柰素、异鼠李素的回收率分别为97.14%，97.02%，98.33%。结果表明，该含量测定方法的回收率较好。
2.9 耐用性实验取供试品，按“测定法”项下操作，依次变动流动相比例、流速和柱温。当流动相比例为甲醇-0.4%磷酸（47∶53）时，可基线分离；当甲醇-0.4%磷酸（52∶48）时，槲皮素后有小峰，但不影响计算；当流速为0.9 ml/min时基线分离；当柱温设为30℃或37℃时，基线均可分离。结果表明，检测条件发生微小变化不影响分离效果。
2.10 样品测定取另两批银曲胶囊样品，按含量测定方法进行检测。结果见表1。表1 成品中总黄酮醇苷的含量测定结果（略）根据3批样品的检测结果以及药典中银杏叶中总黄酮的苷含量，结合银曲胶囊的工艺过程，初定总黄酮醇苷的含量不低于 6 mg/粒。
3 讨论
本文参照《中国药典》2005版Ⅰ部银杏叶片项下的总黄酮醇苷含量测定方法，采用HPLC测定银曲胶囊中黄酮醇苷的总含量，此法简便、准确，灵敏度高，分离效果好。
根据3批样品的检测结果，总黄酮醇苷的含量不低于6 mg/粒。
【参考文献】
［1］赵杰，马永新. HPLC法测定维力胶囊中银杏总黄酮醇苷的含量［J］.药物分析杂志，2003，23(2)：151.
［2］国家药典委员会，中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：220.