色谱柱的分类及特点

3-1 柱的结构

1、堵棒（或导管）

2、接头

3、接头

4、密封圈

5、螺帽

6、柱密封圈

7、柱管

8、柱填料9 10、过滤片

3-2 柱的分类：

根据所有的担体材料分为三种：

a.硅胶型：机械强度高，易制成小颗粒，理论塔板数高。

b.聚全物型：在广泛的PH值范围内稳定

c.羟基磷灰石型：对蛋白质等生物高分子样品有特殊的选择性。

根据分离方式分类：

a.硅胶型

1）正相：SIL－－磷脂、NH －－糖、维生素E，CN－－甾类激素。

2）反相：ODS（C18）、（C8 CN TMS Pheny1）低分子量化全物。

3）离子交换：

WAX（弱碱阴离子交换）－－核苷酸、蛋白质

WCX（弱酸阳离子交换）－－蛋白质

SAX（强碱阴离子交换）－－核苷酸

SCX（强酸阳离子交换）－－儿茶酚胶

4）凝胶过滤：

Diol－－蛋白质GF－－

蛋白质

b.聚合物型：

1）反相：ODP－－50－－肽，蛋白质，低分化合物。

2）离子交换：ISC－－氨基酸，胍类化合物，ISA－－糖，IC－－无机离子，PA－－蛋白质，ES－－蛋白质。

3）配位交换：SCR（磺化聚苯乙烯）－－糖。

4）离子排阻：SCR-101H 102H －－有机酸

5）凝胶过滤：ION－－多糖GS －－水溶性分子

6）凝胶渗透色谱（GPC）：GPD －－合成分子、橡胶。

7）羟基磷灰石型：HPC－－蛋白质、核苷酸

按尺寸分类：

1.制备：30mm 50mm 内径，半制备：20mm内径。

2.分析：标准型柱：4_8mm内径。

快速色谱柱：3mm内径、5cm长、4.6mm内径。

小孔径柱：2.5mm内径，微孔径柱1mm内径。

3-3柱的技术指标

*耐压：不小于40Mpa。

*渗透性：反相－－流动相甲醇1ml/min，压力3Mpa。

正相－－正乙烷

1ml/min,压力3Mpa.

*柱效：理论塔板极数>3x103。

*对称柱：葸峰不对称因子AS在0.8~2.0范围内。

*外观：光洁、标牌、尺寸、填充剂、流动相方向、日期等。

ODS柱

ODS（C18）色谱柱是将十八烷基键合在担体的表面，然后填充的柱，在HPLC中应用广。在HPLC中反相色谱的引用占70%，其中极大部分使用的是ODS（C18）。本公司所附的柱也是ODS（C18）柱，内径4.6mm,长度150mm。

一般反相色谱系统，流动相为极性溶

剂，如水、甲醇、乙腈，非极性固定相，如十八烷基。反相系统简单，重复性好，柱子能长期稳定工作，能完成分离、分析任务的60-80%，所以分析工作者使用得最多的是反相柱。柱的使用和维护

由于柱的质量直接影响到样品组分得分离情况，组分的定性，定量分析，所以在操作时必须十分注意。

通常柱子损坏表现为：柱压升高，柱效下降，保留值改变，峰形崎变等。

以反相为列，它要求填料处于甲醇或乙腈中，不使柱子干枯，并注意下列事项：

* 勿使柱子受较强振动

* 较长时间不用时，应在柱中充满甲醇，并把两头封死，尽量不使干枯。

* 当用水和甲醇（或乙腈）混合液体溶剂时，工作结束后必须用纯甲醇冲洗30分钟至1个小时，使柱子处于甲醇中，因水易繁殖微生物，使柱子堵塞，并降低柱效。

* 当使用KH2PO4等缓冲液时，盐的浓度宜低，否则盐容易析出，柱效降低，柱压升高，使用后必须用水冲洗（绝不能用甲醇冲洗）使缓冲液全部溶于水排出，然后再用甲醇冲洗。

* 硅基固定相不宜在PH>8时使用，此时容易产生絮状物析出，堵塞柱子。

* 当流动相呈酸性时，使用后必须用水冲洗，因酸使柱效降低，后再用甲醇冲洗。

* 流动相最好经过过滤处理。

* 样品最好也经过过滤处理。

* 样品有时能复盖填料得活性点，使柱压升高，保留时间下降，防止方法是样品经过过滤。

* 样品组分的不可逆吸附，使柱压升高，柱效降低（通常易被吸附的有蛋白质、糖）防止方法是加保护柱和溶剂反冲，最常用的是四氢