30μL0.2molL的KCl溶液对离体蛙心灌流的影响

30μL0.2mol/L的KCl溶液对离体蛙心灌流的影响

（韶关学院医学院，广东韶关 512026）

摘要：目的：观察K+对离体蛙心灌流的影响。方法：离体蛙心，并用任氏液灌流，待其稳定收缩后滴入30μL0.2mol/L的KCl溶液,观察心脏活动频率和幅度的变化。结果：灌注KCl溶液后，蛙心停留在最大舒张状态。结论：K+对心脏收缩有强烈的抑制作用。

[关键词] 离体蛙心；KCl；收缩频率；

离体蛙心灌流经过加入KCl溶液后，细胞液k+浓度显著升高，膜内负外正的k+浓度梯度减少，Na+通道失活，心肌细胞兴奋性迅速丧失，从而降低心率，使蛙心搏动停止在舒张期。我们通过用KCL溶液进行心脏灌流，观察KCL对蛙心动作电位波幅的影响，为探讨其作用机制提供实验依据。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1 仪器张力换能器（成都仪器厂），生物信号采集与处理系统（成都仪器厂）。

1.1.2 试剂任氏液（实验室提供）。

1.1.3 动物（蛙，28只）（实验室动物房提供），（体重65-75克）。

1.2 实验方法

1.2.1蛙心的制备按照机能实验学1指导的方法暴露蛙心，仔细观察心脏各部分的结构及其舒缩活动的节律性和先后关系。

1.2.2心脏插管，用Straub法2对蛙心进行插管，并用任氏液反复灌洗心脏内的余血，直到无残留液为止以防止血液凝固而影响实验正常进行。

1.2.3装置安装，用试管夹将插管固定在铁支架上，并将蛙心夹的连线绕过滑轮与张力换能器应变簧片相连，连线应与地面垂直，将张力换能器输出线连接在生物信号采集与处理系统输出通道上。

1.2.4 打开RM6240USB2.0S(I)版程序，选择实验→循环→蛙心灌流，使用动态测量法记录正常跳动时的波形及数据。在离体蛙心新鲜任氏液中加入30μL0.2mol/L的KCl溶液，选择静态测量法观察并记录心搏曲线及心肌收缩强度和心率的变化。待心脏停止收缩后换洗任氏液直至离体蛙心恢复正常跳动为止，重复一次实验。

1.2.5 实验数据汇总，分析数据，并记录于表内。

1.3 统计学处理

所有数据均用x±s表示。采用统计软件SPSS 13.0进行统计处理，两组间数据比较采用两独立样本的t检验，多组间数据比较采用单因素方差分析。P<0.05表示差异有显著性。

2 结果

增加了kcl溶液后，离体蛙心动作电位波幅降低，处理组的心率比对照组要低。经过统计学分析，对照组和处理组的收缩末期张力和舒张末期张力有显著差异，收缩末期张力的P=0.004，舒张末期张力的p=0.011.对照组和处理组的心率没有差异，它的p=0.033.

kcl对离体灌流蛙心的影响（x±s）

组别收缩末期张力舒张末期张力心率

对照组处理组1.84

0.78

0.30

0.21

18.13

17.08

3 讨论

关于KCL对离体灌流蛙心影响，通常认为KCL对心肌细胞的兴奋有抑制的作用。实验表明，一定浓度的KCL对心肌细胞的收缩末期张力和舒张末期张力有显影响，对心率没很大差异，这可能与增加k+的浓度，细胞液k+浓度显著升高，膜内-外k+浓度梯度减少，Na+通道失活，心肌细胞兴奋性丧失，从而降低心率了。

参考文献：

[1]张轩萍，牛栓成．蛙心起搏点和期前收缩于代偿间歇的观察[M]∥袁秉祥,闫剑群.机能实验学.第二版.北京:高等教育出版社,，2006:71

[2] 张轩萍，梁月琴．离子及药物对离体灌流蛙心的影响[M]∥袁秉祥,闫剑群.机能实验学.第二版.北京:高等教育出版社,，2006:74

离体蛙心灌流及药物对心脏的影响

离体蛙心灌流及药物对心脏的影响 一、实验目的： 1、学习蛙心灌流方法。 2、了解离体心脏的自律性与环境中各因素变化的关系，观察理化因素 对蛙心活动的影响。 二、实验对象：蟾蜍 三、实验方法： 1、标本制备： 取蟾蜍→破坏CNS→固定→剪皮→打开胸腔（暴露胸骨柄，用镊子把胸骨柄捏起来，用粗剪刀剪断，沿胸骨将锁骨剪断，去除多余的骨头，注意勿将心脏剪破）→用眼科剪小心剪开心包膜→暴露心脏→在主动脉叉下方穿一根丝线备用→用蛙心夹在心舒张期夹住心尖部→在左侧主动脉分叉处2-3mm处剪一剪口→将盛有一定量任氏液的蛙心插管插入到主动脉球→将插入到主动脉球的套管稍向后退，再向左下逆时针旋转90°，插入心室→结扎固定→剪断血管和背面静脉窦以下组织，游离标本 2、连接装置： 蛙心管内保持2ml灌流液，用木夹夹住蛙心套管，蛙心夹的线与张力换能器相连，换能器与电脑的相应通道相连。 3、运行电脑： 打开电脑→Medlab→实验/常用生理实验→离体蛙心灌流 四、实验结果： 分别观察正常心脏活动曲线及加入不同溶液后的心脏活动曲线的变化。 曲线规律：心脏节律； 曲线疏密：心率 曲线基线：心室舒张最大程度 顺序观察项目药量心肌(率、力)变化 正常任氏液灌流正常 1 0.65%NaCl 灌流 1~2d 2 2% CaCl 2 3 1%KCl 1~2d 4 1:10000 NA 1~2d 5 1:100000 ACh 1~2d 6 3% LH 1~2d 2.5% NaHCO3 2~4d 7 1:100000 Isop 1ml +任氏液1ml 8 1:1000 prop 0.2ml+任氏液1.8ml 出现效应后，抽出一半液体后 立即加入Isop1ml

离体蛙心灌流实验

实验五离体蛙心灌流实验 一实验目的 1、了解蟾蜍离体心脏的灌流的方法。 2、观察细胞外液钾离子、钙离子浓度变化对心脏活动的影响。 二实验原理 心脏离体后，如用人工灌流的方法，保持其新陈代谢的顺利进行，则心脏仍能有节律的自动收缩和舒张，并可维持较长的时间。离体心脏所需的条件应与动物内环境的理化性质基本相近，因此改变灌流液的理化因素，则可引起心脏活动的变化。 1、任氏液：正常对照 含有NaCl、CaCl2、KCl、NaH2PO4、 Na2HPO4 和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。 2、0.65%NaCl灌流： 3、2%CaCl2灌流 4、 1%KCl灌流

5、1:10000 E 灌流 6、1:10000 Ach灌流 7、心得安 β1受体阻断剂，抑制肾上腺素与β1受体结合，使E不能发挥作用。 8.、阿托品 M受体阻断剂，抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力。 三实验器材 微机生物信号处理系统， physiology系统，学校服务器系统，蟾蜍离体蛙心，任氏液，1%KCl，3%CaCl2，65%NaCl，1/10000 E，心得安+1/10000,1/10000 Ach，阿托品+1/10000 Ach。 四实验步骤 1、标本制备（观看视频） 2、仪器及标本的连接 3、具体软件操作： 1）离子试剂：任氏液→0.65%NaCl溶液→任氏液清洗→1%KCl溶液→任氏液清洗→2%CaCl2溶液→任氏液清洗 2）药物试剂：肾上腺素（E）→任氏液清洗→心得安→任氏液清洗→Ach，任氏液清洗→阿托品→任氏液清洗。 五实验结果

图1 离体蛙心灌流

生理学实验报告-蛙心灌流

实验名称： 蛙类离体心脏灌流 课程名称：生理学实验 指导教师：龙天澄张碧鱼陈笑霞 实验人：叶永锋08344031 学院：海洋学院 实验时间：2009年12月09日

一、【目的要求】 1、学习斯氏离体蛙心灌流法。 2、了解心肌的生理特性。 3、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh)等对离体心脏活动的影响。 二、【原理】 将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。血钾浓度过高时（高于7.9mmol/L），心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低，心肌收缩力减弱。血中钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌收缩力增强，乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。 三、【实验仪器】 青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液。蛙心套管(斯氏套管或八木氏套管)、套管夹、0．65％NaCl、5％NaCI、2％CaCl2、1％KCl、1：5 000肾上腺素、1：10 000乙酰肌碱、300U／mL肝素。 四、【方法与步骤】 1、斯氏蛙心插管法 （1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中， 按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大 血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉 圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。 再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备 用。左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪 在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜 口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量 (套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶 液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血，

钙离子肾上腺素乙酰胆碱对离体蛙心活动有何影响

钙离子、肾上腺素、乙酰胆碱对离体蛙心活动有何影响?为什么? 高钙可见蛙心收缩力增强,但舒张不完全,以致收缩基线上移.在钙离子浓度较高的情况下,心脏会停止在收缩状态,称为“钙僵”. 心肌的舒缩活动与心肌肌浆中的钙离子浓度的高低有关.心肌肌浆网不发达,储钙能力差,易受细胞外钙离子浓度高低影响,当钙离子浓度升高至10-5M水平时,作为钙受体的肌钙蛋白结合了足够的钙离子,这就引起肌钙蛋白分子构型的改变,从而触发肌丝滑行,肌纤维收缩.当肌浆中钙离子浓度降至10-7M时,钙离子与肌钙蛋白解离,心肌随之舒张.用高钙任氏液灌注蛙心,使得肌浆中的钙离子浓度不断升高,钙离子与肌钙蛋白结合数量不断增加,甚至达到只结合不解离的程度,于是,心肌出现钙僵. 滴加肾上腺素后,可见蛙心收缩增强,心脏舒张完全,心博曲线幅度明显增大.因为肾上腺素使心肌收缩能力增强.机理为肾上腺素与心肌细胞膜上的β受体结合,提高心肌细胞和肌浆网膜钙离子通透性,导致肌浆中钙离子浓度增高,使心肌收缩增强.另外,肾上腺素还有降低肌钙蛋白与钙离子亲和力,促使肌钙蛋白对钙离子的释放速率增加；提高肌浆网膜摄取钙离子的速度,刺激钠-钙离子的交换,使复极期向细胞外排出钙离子的作用加速.这样,使心肌舒张速度增快,整个舒张过程明显加强. 滴加乙酰胆碱后,可见蛙心收缩减弱,收缩曲线基线下移,心率减慢.最后,心跳停止于舒张阶段,出现类似高钾时的变化.因为乙酰胆碱使心肌的收缩能力减弱.机理为乙酰胆碱与心肌细胞M受体结合,一方

面提高心肌细胞膜钾离子通道的通透性,促使钾离子外流,将引起（1）窦房结细胞复极时钾离子外流增多,最大复极电位绝对值增大；IK衰减过程减弱,自动除极速度减慢.这两方面因素导致窦房结自律性降低,心率减慢.（2）复极过程中钾离子外流增加,动作电位2、3期缩短,钙离子进入细胞内减少,使心肌收缩力减弱；另一方面乙酰胆碱可直接抑制钙离子通道,减少钙离子内流,使心肌细胞收缩减弱. 综述 钙离子是机体各项生理活动不可缺少的离子。它对于维持细胞膜两侧的 钙离子碱性还原棒生物电位，维持正常的神经传导功能。维持正常的肌肉伸缩与舒张功能以及神经－肌肉传导功能，还有一些激素的作用机制均通过钙离子表现出来。它的主要生理功能均是基于以上的基本细胞功能，主要有以下几点： 1.钙离子是凝血因子，参与凝血过程； 2.参与肌肉（包括骨骼肌、平滑肌）收缩过程； 3.参与神经递质合成与释放、激素合成与分泌； 4.是骨骼构成的重要物质。 其中几个重要作用的产生机制如下： 钙离子传导神经信号 机制：促进神经递质分泌。 当第一个细胞兴奋时，产生了一个电冲动，此时，细胞外的钙离

1、蛙心灌流实验报告

蛙心灌流实验 实验目的 1、学习斯氏或八木氏离体蛙心灌流法。 2、了解心肌的生理特性。 3、观察Na+、K+、Ca2+及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（Ach）等对离体心脏活动的影响。实验原理 动物的离体心脏，用理化特性类似于其血浆的代体液灌流时，在一定的时间内，仍然保持有节律的舒张活动。改变灌流液的理化特性，这种节律的舒缩活动也随之发生改变，说明内环境理化因素的相对恒定是维持心脏正常节律活动的必要条件。 实验材料与用品 1、材料：蟾蜍、斯氏蛙心套管、套管夹、支架、双凹夹、蛙心夹、蛙板（蜡盘）、常用手术器械、滴管、废液缸、棉线 2、药品：任氏液、0.65%NaCl、2%CaCl2 、1%KCl、0.01% 肾上腺素、0.01%乙酰胆碱 3、仪器：计算机采集系统、张力传感器 实验步骤 1、取一只蟾蜍，用探针破坏其脑脊髓后仰卧固定于蛙板上，剪开胸前区皮肤，剪去胸骨，暴露心脏。用眼科镊提起心包膜，再用眼科剪在心脏收缩时将其剪破，使心脏完全暴露出来。 2、识别心脏的各个部分，包括心房、心室、静脉窦等，并观察心跳。 3、插蛙心插管，制备离体蛙心。在左主动脉下穿一线结扎，靠近动脉窦，接着在左右主动脉下方穿一线，并打一松结留作固定插管用。 4、用手提起结扎线，用眼科剪在左侧主动脉距分叉3mm处向心脏剪一斜口，右手将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入，先进入动脉圆锥，然后在心室收缩时，向前略向左推动蛙心插管，使之经主动脉瓣插入心室腔内（注意：为了使蛙心插管顺利插入心室，应使心室与动脉圆锥成一条直线）。进入心室的标志是随着心室搏动，均有血液喷入插管，插管的液面随着心搏而升降。结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上，以防止标本滑脱。在蛙心插管插入心室后，用吸管及时吸出管内的血液，更换新鲜任氏液。提起插管，剪断主动脉左、右侧分支，轻轻提起插管和心脏，在静脉窦下方绕一线，将左右肺静脉及前后腔静脉一起结扎（切勿损伤静脉窦），在结扎线下方剪去所有牵连的组织，将心脏摘出。用任氏液反复冲洗（10~25滴/min的速度缓慢点滴）任氏液。至插管内任氏液完全澄清无色为止。以后做实验注意每次换液时，插管内液面应保持相同的高度。

离子及药物对离体蛙心的影响

西安交通大学医学院教案 课程名称机能实验学授课方式_________ 任课教研室_________ 任课教师_________ 授课年级_________ 授课时间_________

离子和药物对离体蛙心的影响 【实验目的】 1.掌握离体蛙心灌流的实验方法。 2.掌握各种理化因素对心脏活动的影响机制。 3.进一步熟悉和掌握生物信号采集和处理系统。 【实验原理】 心脏正常的节律性活动必须在适宜的理化环境中进行，一旦适宜的环境被破坏，例如离子浓度或酸碱度的急剧改变等，心脏的活动就会受到影响。在整体内，心脏的活动受自主神经的双重支配，交感神经兴奋时，其末梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力量增强，心率加快；而迷走神经兴奋时，其末梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力量减弱，心率减慢。 蟾蜍心脏离体后，用理化特性近似于血浆的任氏液灌流，在一定时间内，可保持其比较稳定的节律性收缩和舒张。改变任氏液的组成成分，如改变Na+﹑K+﹑Ca2+ 的浓度及酸碱度等，心脏跳动的频率和幅度就会发生相应的改变。 1.K+对心脏活动的影响 总体看来心脏对细胞外K+浓度变化比较敏感；但不同部位心肌的敏感性不同，心房肌最敏感，房室束-浦肯野纤维系统次之，窦房结敏感性较低。 ①K+对心肌细胞兴奋性的影响 细胞外[K+]↑时，对兴奋性的影响与其浓度升高的程度有关。当[K+]轻度或中度升高时，细胞内外K+浓度梯度减小，K+外流力量减小，静息电位（RP）的绝对值减小，与阈电位（TP）的差值减小，细胞的兴奋性因而升高；当细胞外K+浓度显著增高时，RP的绝对值减小到－55mV左右时，Na+通道失活，开放效率降低，细胞的兴奋性降低或丧失，严重时，可导致心肌停搏于舒张状态。 【K+】↑-------RP↓-----兴奋性↑ 【K+】↑↑-------RP↓↓-----RP

蛙心灌流实验报告

实验二离体蛙心灌流实验 专业：学号：姓名： 一、实验目的 1.学习离体器官（蛙心）灌流的方法。 2.观察理化因素对蛙心活动的影响。 二、实验原理 蛙心的灌流:蛙心无营养性血管，离体之后采用人工灌流的方法，仍可保持其新陈代谢，心脏仍能有节律的自动收缩、舒张，并维持较长时间，心肌的营养是通过心脏内膜液体的直接渗透而得。 心肌： 1. 含有NaCl、CaCl2、KCl、NaH2PO4、Na2HPO4 和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。 2.0.65%NaCl灌流： 3.2%CaCl2灌流：

4.1%KCl灌流：

5.1:10000 E灌流 6.1:10000 Ach灌流 7.心得安 β 1受体阻断剂，抑制肾上腺素与β 1 受体结合，使E不能发挥作用。 8.阿托品 M受体阻断剂，抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力。

三、 实验器材 离体蛙心 任氏液、l ％KCl 溶液、2％CaC12溶液、0.65%NaCl 溶液、1:10000 肾上腺素、1:10000乙酰胆碱、心得安、阿托品 四、 实验步骤 五、 结果与分析 心率：34次/min 最大收缩力：2.5g 最小收缩力：1.1g 图1 正常脉搏曲线 心率：35次/min 最大收缩力：1.6g 最小收缩力：1.1g 图2 0.65%NaCl 灌流脉搏曲线 任氏剂 0.65%NaCl 任氏液清洗 2%CaCl 2 任氏液清洗 1%KCl 任氏液 2.药物试剂 E 任氏液清洗 心得安+E 任氏液清洗 Ach 任氏液清洗 阿托品+Ach 任氏液 1.离子试剂

电解质及药物对离体蛙心活动的影响

电解质及药物对离体蛙心活动的影响 【教学对象与学时】 一、教学对象：五年制本科 二、学时：4学时 【目的要求】 1、掌握Straud离体蛙心的灌流方法 2、观察钠、钾、钙三种离子与肾上腺素、异丙肾上腺素、去甲肾上腺素、乙酰胆碱、强心甙、氨茶碱等对离体心脏的作用 【课堂提问及解答】 一、离体蛙心如何制备？ 蟾蜍双毁髓，将双毁髓的蟾蜍仰卧固定在蛙板上，夹起胸骨后端的腹部皮肤剪一小口，再将手术剪由切口处伸人皮下向左右两恻锁骨外恻方向剪开皮肤，并向头端掀开。用镊子提起胸骨后端的腹肌并剪一小口，将手术剪由切口处伸人腹腔内，紧贴胸壁（以免损坏心脏和血管）沿皮肤切口剪开肌肉，剪断左右鸟骨和锁骨，使创口呈倒三角形。用眼科镊提起心包膜并用眼科剪剪开即可暴露心脏。 在暴露心脏的主动脉干下方引两根线，一条在主动脉上端结扎作插管时牵引用，另一根则在动脉圆锥上方，系一松结用于结扎固定蛙心插管。左手持左主动脉远心端的结扎线，用眼科剪在松结上方左主动脉根部剪一小斜口，右手将盛有少许任氏液，大小适宜的蛙心插管由此剪口处插入动脉圆锥，当插管头到达动脉圆锥时，再将插管稍向后退，并转向心室中央方向，在心室收缩期插入心室，判断蛙心插管是否进入心室可根据插管内的任氏液液面能否随心室的舒缩而上下波动。如蛙心插管已进入心室，则将预先准备好的松结扎紧，并固定在蛙心插管的侧钩上以免蛙心插管滑出心室。剪断主动脉左右分支。轻轻提起蛙心插管以抬高心脏，用一线在静脉窦与腔静脉交界处作一结扎，结扎线应尽量下压，以免伤及静脉窦，在结扎线外侧剪断所有组织，将蛙心游离出来即可。

二、肾上腺素、乙酰胆碱、强心甙、氨茶碱这几种药物中能增强心脏收缩张 力的是哪几个？ 肾上腺素、强心甙、氨茶碱 【实验原理介绍】 蟾蜍心脏离体后，用理化特性近似其血浆的任氏液，在一定时间内可以保持心脏节律性收缩舒张，改变灌流液成分，心脏收缩舒张幅度与频率会随之变化。 【重点和难点】 一、重点 1、Straud离体蛙心的制备与灌流方法； 2、BL-420生物信息记录系统检测记录心肌收缩张力曲线。 二、难点 1、0.65%NaCl对心肌收缩张力曲线影响的机制 2、乙酰胆碱对心肌收缩张力曲线影响的机制 【观察指标】 心功能：心跳频率、幅度，心肌收缩张力曲线和舒缩程度 【实验方法与步骤】 一、实验动物：蟾蜍 二、实验分组：共6组 三、药品、器材：生物信息记录仪、张力传感器、蛙类手术器械一套、玻璃分针、滤纸、棉球、浇杯2个、缝线、滴管2支、蛙心夹、铁支架、双凹夹2个、试管夹、蛙心插管、任氏液、0.65%NaCl、3%ＣaCl2、1%KCl、1:10 000肾上腺素、1:100 000乙酰胆碱、1:100 00异丙肾上腺素、25:1000氨茶碱(2.5%)、25:100 000毒K(0.025%) 四、观察指标：心功能：心跳频率、幅度，心肌收缩张力曲线和舒缩程度 五、实验步骤： 1、Straud离体蛙心制备 （一）蟾蜍双毁髓术 （1）枕骨大孔的定位： 左手握住躯干及肢体，右手母指与食指握住蟾蜍的唇尖部前后摇动，在其头部背面可见一明显的凹陷点即为枕骨大孔处或左手握住蟾蜍躯干及肢体，食

实验5离体蛙心灌注

实验五离体蛙心灌注 目的 学习离体蛙心灌流的方法；观察内环境理化因素的相对恒定对维持心脏正常节律性活动的重要作用；了解肾上腺素、乙酰胆碱等激素、神经递质对心脏活动的调节意义。 原理 动物的离体心脏，用理化特性类似于其血浆的代体液灌流时，在一定的时间内，仍然保持有节律的舒张活动。改变灌流液的理化特性，这种节律的舒缩活动也随之发生改变，说明内环境理化因素的相对恒定是维持心脏正常节律活动的必要条件。 器材与药品 蛙心陶罐、蛙心夹、常用蛙手术器械、铁架台、双凹夹、滴管、小烧杯、氯化钠溶液（1%NaCl）、氯化钙溶液（2%Ca Cl）、氯化钾溶液（1%KCl）、肾上腺素（1/10000Ad）、乙酰胆碱（1/100000Ach）、任氏液（Ri/lger’s solution新鲜配制）等。 步骤 （1）取一只蟾蜍或蛙，用探针破坏其脑脊髓后仰卧固定于蛙板上，剪开胸前区皮肤，剪去胸骨，暴露心脏。用眼科镊提起心包膜，再用眼科剪在心脏收缩时将其剪破，使心脏完全暴露出来。 （2）识别心脏的各个部分，包括心房、心室、静脉窦等，并观察心跳。 （3）插蛙心插管，制备离体蛙心。先在左右主动脉下方穿一线，并打一松结留作固定插管用。再在左主动脉下穿一线结扎。用手提起结扎线，用眼科剪在左侧主动脉距分叉3mm处向心脏剪一斜口，右手将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入，先进入动脉圆锥，然后在心室收缩时，向前略向左推动蛙心插管，使之经主动脉瓣插入心室腔内（注意：为了使蛙心插管顺利插入心室，应使心室与动脉圆锥成一条直线）。进入心室的标志是随着心室搏动，均有血液喷入插管，插管的液面随着心搏而升降。结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上，以防止标本滑脱。注意在蛙心插管插入心室后，用吸管及时吸出管内的血液，更换新鲜任氏液。

离子与药物对离体蛙心活动的影响

离子与药物对离体蛙心活动的影响 Effects of Several Drugs and Extracellular Ions on Isolated Toad Heart [摘要]目的学习Straub氏法灌流蟾蜍离体心脏方法，研究离子和药物对离体蛙心活动的影响以及作用机制。方法制备离体蛙心标本，采用Straub氏法完成蛙心插管，分别灌流低钙、高钙、高钾溶液，肾上腺素以及普萘洛尔、乙酰胆碱以及阿托品，用张力换能器和RM6240生物信号采集处理系统描记心搏曲线并测量记录数据。结果：无钙任氏液灌流，心脏舒张末期张力增大，而收缩末期张力明显减小，心率无显著改变；高钙任氏夜灌流，心脏舒张末期张力减小，而收缩期张力明显增大，心率无明显改变；高钾任氏夜灌流，心脏舒张末期张力增大，而收缩期张力明显减小，心率无明显改变；灌流液中加Ach，心脏舒张末期张力增大，收缩末期张力减小，心率减慢；加入Ach后滴加atp，心脏舒张末期张力变小，收缩期张力变大，心率无显著改变；灌流液中加入Adr，心脏舒张期张力减小，收缩期张力增大，心率无明显改变；Pro处理后加入Adr，心脏收缩末期张力减小，舒张末期张力和心率无显著改变。结论细胞外Ca2+浓度增大，心肌的收缩性明显增强；细胞外K+浓度升高，心肌收缩力明显减弱；乙酰胆碱使心脏收缩性减弱，阿托品可拮抗乙酰胆碱减弱心肌收缩性的作用；肾上腺素使心脏收缩增强，普萘洛尔可拮抗肾上腺素加强心脏收缩性的作用。 [关键词] 蟾蜍离体心脏灌流K+Ca2+ 肾上腺素乙酰胆碱 作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动产生兴奋，因此，只要将离体的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间内仍能产生节律性兴奋和收缩活动。心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性和收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。血钾浓度过高时(高于7.9mmol/L)，心肌兴奋性、自律性、传导性、收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。血钙浓度升高时，心肌收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低，心肌收缩力减弱。血中钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可使心率加快、传导加快和心肌收缩力增强，乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。【1】心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境，内环境的变化直接影响着心脏的正常活动。本实验在蛙心

生理学实验报告蛙心灌流

生理学实验报告-蛙心灌流

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蛙类离体心脏灌流 一、【目的要求】 1、学习离体蛙心灌流法。 2、观察Nａ＋,K+,Ｃa2+及肾上腺素(Adｒ),乙酰胆碱（ＡCｈ)，乳酸对离体心脏活动的影响。 二、【原理】 将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩,心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分,观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。 三、【实验仪器】 青蛙、常用手术器械、蛙板（或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。套管夹、0．６5％ＮaＣl、２％ＣａＣl2、1%KCl、１：1０000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。 四、【方法与步骤】 １、斯氏蛙心插管法 (１)一只青蛙,双毁髓后背位置于蜡盘中,按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时,结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线,右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时,应将套管稍稍后退,使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进,经主动脉瓣插入心室腔内（于心室收缩时插入,但不可插得过深,以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入）。用滴管吸去套管中的血液,更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液）,再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏,看清静脉窦的位置,于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血,使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致（１．５~２ｃm）,即可进行实验。 (2）将插好离体心脏的套管固定在支架上,用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不可夹得过多，以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连(如右图）。注意:勿使灌流液滴到传感器上。调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。 2、实验观察 (1）记录正常心搏曲线 (2）改用0．65%ＮaCＩ溶液灌流,并作好加药标记,观察心搏变化。待曲线氏插管装置出现明显变化时,立即吸去套管中的灌流液,同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清洗2—3次,待心搏恢复正常。注意:换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线的基线,同时保持灌流液面一致(以下同）。

离体蛙心灌流实验方法的比较研究

万方数据

?１４５６? 间上比双管法短（Ｐ＜０．０５）；双管法的心脏离体后存活时间明显长于单管法（Ｐ＜０．０５）；单管法对动脉瓣的损伤率、心律失常的发生率明显较双管法高（Ｐ＜０．０５）。实验结果见表１。 Ｆｉｇ１Ｄｉａｇｒａｍｏｆｏｎｅ—ｅａｎｕｌａｐｅｒｆｕｓｉｏｎｄｅｖｉｃｅ 图１单管灌流装置模式图 Ｆｉｇ２Ｄｉａｇｒａｍｏｆｔｗｏ—ｅａｎｕｌａｐｅｒｆｕｓｉｏｎｄｅｖｉｃｅ． 图２双管灌流装置模式图 表１两种方法优缺点比较 Ｆｉｇ１Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆａｄｖａｎｔａｇｅ矗ｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｗｉｔｈｔｗｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ（互±Ｓ．ｎ＝１２） Ｏｎｅ——ｅａｎｕｌａＴｗｏ——ｃａｎｌｌｌａ Ｔｉｍｅｏｆｅａｎｎｕｌａｔｉｏｎ（ｍｉｎ）４８．３５±７．２８５９．９５±２１．２３。 Ｔｉｍｅｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｈｅａｒｔ（ｍｉｎ）６４．３０±２１．１８６０．１０±１８．４８ Ｈｅａｒｔｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅ（ｈ）１．７１±１．４０２．５７±０．５９＋ Ｄａｍａｇｅｏｆａｏｒｔｉｃｖａｌｖｅ（％）５８．３０。 Ａｒｒｈｙｔｈｍｉａ（％）６６．７２５．０。 ＲｅｃｏｒｄｉｎｇａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｓｙｓｔｅｍＳａｍｅＳａｍｅ ＣｏｓｔｏｆｄｅｖｉｃｅＬｏｗｅｒＨｉｇｈｅｒ。Ｐ＜０．０５ｍｏｎｅ—ｅａｎｕｌａｍｅｔｈｏｄ． 讨论 离体心脏灌流是研究心脏功能的重要手段之一，广泛应用于医学、生物学、药学等教学和科研工作中。采用离体心脏灌流系统可以直观地观察心脏的活动，研究心脏舒缩功能，心率和节律变化，前后负荷及各种体液因素等对心脏功能的影响【５Ｊ。采用蛙心脏进行离体心脏灌流是较为常用的一种模型，因其稳定，经济，一直被人们广泛采用。进行离体心脏灌流实验，首先需要保证心脏在体外较长时间存活，然后根据实验目的进行灌流和施加实验因素。无论是心脏离体前的插管、血流冲洗等操作，还是心脏离体后用人工溶液代替血液进行灌流，均使心脏脱离了生理性神经体液环境。因此，使离体心脏较长时问存活，并维持良好的状态对于完成实验和取得可靠实验数据极为重要。本研究比较了当前应用较为普遍的两种方法，并探讨了它们各自的优缺点。 本研究结果表明，单管法插管数量少，操作相对简单，缩短离体前等血管分离和插管等所需时间，可为完成各实验项目赢得足够在体外存活时间。其缺点是需将套管从主动脉经过动脉瓣插入心室，血液在心室收缩时射入动脉和插管内，而舒张时返流回心室，这样不仅打破了心脏单方向泵血的生理特征，而且，由于易发生心脏瓣膜及心肌损伤，使心律失常发生率增高，导致实验失败。常常影响实验结果的客观性及实验的顺利进行。离体心脏在体外的存活时间也较双管法短。双管法虽然需要对腔静脉和主动脉进行分别插管（双管），插管所需时问较管法要长，但因其不通过主动脉瓣，对主动脉瓣及心室肌的损伤机会大大减小，灌流液从静脉插管进入心脏，从动脉插管流出，使心脏血液单方向流动，符合心脏工作的生理特征。因此，心脏在体外存活时间反而较单管法长，而且一旦插管成功，各实验项目应能够得以顺利进行。采用双管法主要缺点除插管操作时间比单管法长外，因其灌流装置略复杂，需要特殊定制，费用较单管法实验装置高。从用途方面分析，双管灌流法还可用于研究心输出量，以及前、后负荷对心脏功能的影响等。如在双管法中改变Ｂ管中的液体量即容量负荷，改变Ａ管的口径（即后负荷）；而单管法的输入和输出均在同一管中，不适用于此项研究。 作者认为在离体蟾蜍心脏灌流实验中，采用双管法能使心脏瓣膜完好无损，保证血液单一方向流动，心脏存活时间长，能观察和记录心肌收缩力和心输出量，且记录的实验结果准确，便于整理分析，得出正确结论。而且由于实验成功机率高，减少了实验动物及试剂的消耗，值得在教学及科学研究工作推广应用。 ［参考文献］ ［１］ＭｃＫｅａｎＴ，ＳｅｈｅｒｚｅｒＡ，ＰａｒｋＨ．Ｈｙｐｏｘｉａａｎｄｉｓｅｈａｅｍｉａｉｎｂｕｆｆｅｒ—ｐｅ删ｔｏａｄｈｅａｎｓ［Ｊ］．Ｊ脚Ｂｉｄ，１９９７，２００ （１９）：２５７５—２５８１． ［２］ＨｕｓｓｅｉｎＡＡ，ＮａｂｉｌＺＩ，ＺａｌａｔＳＭ，ｅｔａ１．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｖｅｎｏｍｓｆｒｏｍｔｈｒｅｅｓｐｅｃｉｅｓｏｆｂｅｅｓ：ｅｆｆｅｃｔｓｏｎｈｅａｒｔａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄｂｌｏｏｄ［Ｊ］．ＪＮａｔＴｏｘｉｎｓ，２００１，１０（４）：３４３—３５７．［３］任京力，赵树进，杨太成，等．肾上腺素能ｐ。受体亚型特异性抗体的制备及鉴定［Ｊ］．中山医科大学学报，２００２， ２３（１）：３７—３９，４３． ［４］高兴亚，汪晖，戚晓红，等主编．机能实验学［Ｍ］．北京：科学出版社，２００２．７２—７４． ［５］黄敏，冬冬主编．医学机能实验学［Ｍ］．北京：科学出版社，２（１０２．４８—５０． ［６］胡还忠主编．医学机能学实验教程［Ｍ］．北京：科学出版社，２００２．１３３—１３６． ［７］朱建平主编．生理科学实验教程［Ｍ］．北京：科学出版社，２００３．８２—８５． ［８］徐怡，汤剑清，刘少金，等．蛙心灌流实验中值得注意的几个问题［Ｊ］．数理医药学杂志，２００２，１５（５）：４０３— ４０４． ［９］季淑梅，王庆山，范振中，等．介绍一种简单、新型的主要用于蛙心灌注实验的计滴装置［Ｊ］．中国应用生理 学杂志，２００４，２０（１）：９５—９７．　万方数据

离子及药物对离体蛙心脏活动得影响

一实验目得 １、学习制备离体蛙心脏及离体心脏灌流得方法。 2、观察钠离子、钾离子、钙离子3种离子，去甲肾上腺素、乙酰胆碱、温度、酸碱度等 因素对心脏活动得影响。 3、通过实验使学生初步对递质、受体、受体兴奋剂及受体阻断剂得概念有所感知． 二实验原理 心脏正常得节律性活动必须在适宜得理化环境中进行，一旦适宜得环境被破坏，例如酸碱度及离子浓度得急剧改变等,心脏得活动就会受到影响。在整体内,心脏得活动受自主神经得双重支配,交感神经兴奋时，其末梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力量增强,心率加快;而迷走神经兴奋时,其末梢释放乙酰胆碱,使心肌收缩力量减弱,心率减慢。强心甙类药物能够增强心肌收缩能力,减慢心率。 青蛙心脏离体后,用理化特性近似于血浆得任氏液灌流,在一定时间内,可保持其比较稳定得节律性收缩与舒张。改变任氏液得组成成分，如改变Na+﹑K+﹑Ｃa2＋得浓度及酸﹑碱度等,心脏跳动得频率与幅度就会发生相应得改变。当血钾离子过高时，心肌兴奋性、自律性、传导性与收缩性均降低,表现为收缩力减弱、心动过缓与传导阻滞,严重时心脏可停搏于舒张期。而血钙离子升高时,心肌收缩力增强，但过高时可使心室停搏于收缩期。而血钙离子降低时,心肌收缩力减弱。血钠离子轻微变化对心肌影响不明显,只有发生明显变化时才会影响心肌得生理特性,钠离子剧烈升高时心脏得兴奋性与自律性虽升高，但兴奋得传导性与收缩性却下降，严重时可使心脏停搏于舒张期。 三使用仪器、材料 1、实验仪器：生物信号采集处理系统，张力换能器,小动物手术器械，蛙板,细线,滴管， 烧杯,蛙心夹,蛙心插管,滴管，万能支架等 ２、实验材料：0、４%肝素—任氏液插管用，任氏液,0、65％氯化钠，２%氯化钙,1％氯化钾,1％乳酸,2、5%碳酸氢钠,１:１００00肾上腺素,1：1000０乙酰胆碱,１:500０阿托品等溶液 四、实验步骤 1、双毁髓法处死青蛙 2、蛙类离体心脏制备 3、实验装置连接 4、记录不同离子及药物对心脏收缩得影响 先描记正常得蛙心搏动曲线作为对照,注意观察心搏频率、心室得收缩与舒张程度。然后依次把NaCl溶液、ＣaCl2溶液、KCl溶液、肾上腺素、乙酰胆碱、NaHCO3溶液、乳酸,阿托品（最后)灌到离体蛙心中,观察心搏曲线变化。 五.实验结果及分析 (１)Ｎａ+对蛙类离体心脏活动得影响 如下图所示，曲线得疏密:反映心跳得频率(心率caｄiac rhytｈmicity,CＲ);曲线得规律性:反映心跳得节律;曲线得幅度：反映心肌收缩得强弱（心肌收缩能力ｃaｒdiac ｃｏntｒａctilｉty,CT)。 (g)

药物对离体心脏活动的影响

实验三药物对离体心脏活动的影响 [实验目的] 学习斯氏离体蛙心灌注法，观察强心苷对离体蛙心收缩强度、频率和节律的影响。 [实验材料] 蛙或蟾蜍、蛙板、蛙心夹、手术器械、探针、斯氏蛙心套管、张力换能器、电脑、双凹夹、长柄木夹、任氏液、低钙任氏液、0.2％去乙酰毛花苷丙（西地兰）等。 [实验方法] 1、取蛙或蟾蜍一只，左手握蛙，用食指下压头端，拇指按压背部，使头前俯。用探针破坏脑及脊髓，背位固定于蛙板上，剪开胸部皮肤、肌肉及胸骨，打开胸腔，剪破心包膜，暴露心脏。 2、在主动脉分支处下穿一根线，以备结扎套管用。在左主动脉上剪一V型切口，插入盛有任氏液的蛙心套管，见到套管内的液面随心搏上下波动后，将线扎紧并固定在套管的小钩上。 在插管过程中要及时用滴管吸去套管内血液，以免血块堵塞。3、结扎右主动脉，剪断两根动脉，持套管提起心脏，用线自静脉窦以下把其余血管一起结扎（勿伤及或结扎静脉窦），分离周围组织，在结扎处下剪断血管使心脏离体。 4、用任氏液连续换洗，直至无血色，使套管内保留1.5ml左右的任氏液。将蛙心套管固定在铁支架上，用带有长线的蛙心夹在心舒期夹住心尖，将长线与张力换能器连接。

5、打开电脑，点击桌面中的BL-410图标，由输入信号，选择做张力的有关内容和相关标记内容。 [实验结果及讨论]: 该曲线为正常情况下离体蛙心脏的收缩曲线。

该曲线为低钙任氏液环境下的离体蛙心脏的收缩曲线。 分析：低钙任氏液为蛙心提供了一个低钙的环境，由于钙离子的减少，不能够通过钠离子钙离子交换机制使钙离子内流，进而不能使细胞内的钙离子增多，不能激活钙离子通道，使钙离子进入心肌细胞内达到以钙释钙的作用，不能够增加心肌的收缩力和减慢心率，所以在低钙任氏液的作用下，与任氏液灌注的蛙心收缩相比心率会增加而心肌收缩力会减弱。

实验二 离体蛙心灌流

实验二蛙心灌流观察体液因素对心脏活动的影响 [原理] 心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境（如Na＋，K＋，Ca2＋等的浓度及比例、pH值和温度），而内环境的变化则直接影响到心脏的正常节律性活动。在体心脏还受交感神经和迷走神经的双重支配，交感神经末梢释放递质去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导速度加快，心率加快；迷走神经末梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心肌传导速度减慢，心率减慢。将失去神经支配的离体心脏保持于适宜的理化环境中（如任氏液），在一定时间内仍能产生自动节律性兴奋和收缩。而改变任氏液的组成成分，离体心脏的活动就会受到影响。用受体阻断剂阻断受体，则相应的受体不能发挥作用。 本实验通过观察内环境理化因素对维持心脏正常节律性活动的重要作用，了解Na+，K+，Ca2＋离子以及肾上腺素（β受体激动剂）、乙酰胆碱（M受体激动剂）等激素对心脏活动的调节意义。各种体液因素都是通过影响细胞质内钙离子浓度来起作用。钙离子浓度升高，心肌收缩力量增强，反之减弱。 [目的] 学习离体蛙心灌流的方法； 观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响； 观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。 [材料及设备] BL-420型生物机能试验系统，蛙，蛙心套管，蛙心夹，任氏液（与蛙心内环境相似的溶液），0.65%氯化钠，2%氯化钙，1%氯化钾，0.01%肾上腺素，0.0 1%乙酰胆碱，滴管，万能支架，张力换能器。 [方法及步骤] （一）制备离体蛙心

1．用探针破坏蟾蜍的脑和脊髓。 2.蟾蜍固定。将蟾蜍仰卧位固定于蛙板上。 3．打开蟾蜍胸腔。用剪刀剪开胸骨表面皮肤并游离、去掉胸骨，再用眼科剪剪开心包以暴露心脏。 4.蟾蜍心脏插管。用小剪刀在主动脉的根部朝心室的方向剪一小口，以灌有任氏液的蛙心滴管的尖端，由此口插入动脉球。然后将插管稍向后退，再转向心室中央的方向，插入心腔内。如确实插入心室，即以另一线将动脉球与套管的尖端一起结扎固定，然后将结扎剩下的线头结扎在套管侧壁的小玻璃钩上，并固定之，以免心脏滑脱。注意：插套管时要特别小心，应逐渐试探插入，以免损伤心肌，然后滴入少量任氏液。套管插好后的斜口应向心室腔，以免心室收缩时堵塞斜口。如果其深度和位置合适，则套管中的液面随心脏的跳动而上升和下降。于是可将与心脏相连的血管和其他组织剪断，摘出心脏，但切勿损伤静脉窦。然后用任氏液洗涤心脏内外，并经常保持其湿润。 （二）仪器连接 将两个双凹夹固定于万能支架上，将连有分离好的离体蛙心的蛙心滴管固定在上方的双凹夹上，将张力换能器置于下方双凹夹，用连有丝线的蛙心夹于心舒期夹住心尖；再将丝线连结在张力感受器上（张力感受器事先接在计算机的3 通道上）。即可在显示屏上显示出心博曲线，根据屏幕显示信号适当调整扫描速度和灵敏度等，等得到满意的图形就开始试验。 [实验项目] ?正常心脏收缩的曲线：用滴管向蛙心套管中注入1—3毫升任氏液（以后的溶液量均应与第一次相同）。注意观察心跳频率和收缩强度。 ?钠离子的影响：向套管中加入2%氯化钠数滴，观察心脏活动有何变化？ 待心脏活动发生明显改变时，添加新鲜的任氏液进行洗涤，反复数次， 直至心脏恢复正常活动后，再加入其它溶液（以下实验皆同此）。

离体蛙心灌流(精)

离体蛙心灌流 实验目的 学习离体蛙心灌流的方法； 观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响。 观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。 实验器材 动物：蟾蜍 器材：斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、0.65%NaCl 溶液、5%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1:5000肾上腺素溶液、1:10000乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液 实验方法与步骤 1、离体蛙心的制备：双毁髓→左主动脉结扎→左右两主动脉下方活结备用→剪口，插 管（管内盛任氏液与肝素）→结扎备用线（套管＋左右主动脉）→剪断动脉→结扎并剪断静脉。 2、固定套管并用任氏液换洗血液；进入RM6240系统。 3、观察并记录正常心搏曲线； 4、向套管内分别加入以下溶液（0.65%NaCl溶液2d 、5%NaCl溶液2d 、1%KCl溶 液1-2d 、2%CaCl2溶液1d 、1:5000肾上腺素溶液1-2d 、1:10000乙酰胆碱溶液1-2d ），观察并记录曲线变化。 实验结果 此图为蛙心正常心搏曲线

由波形图可知，Nacl可使心肌收缩能力减弱，心率减慢，导致心率曲线幅度减小。 有波形图可知，向任氏液中加入5%Nacl之后心搏曲线的幅度大大降低。

KCl导致心脏肌细胞收缩能力减弱，心率减慢。 此图为加入Cacl2溶液后蛙心收缩曲线的变化 可使心肌收缩能力增强，心率加快，导致心率曲线幅度由上图可知，CaCl 2 增加。

由波形图可知，肾上腺素可使心肌收缩力增强，心率加快。 此图为加入乙酰胆碱后蛙心收缩曲线的变化 由上图可知，乙酰胆碱可使心肌收缩能力减弱，心率减慢，导致心率曲线幅度降低。 实验结果分析 离体蛙心仍可具有揭露性收缩，是因为作为蛙心正常起搏点的经脉都（其功能相当于人体心脏的窦房结）能产生自动节律，通过传导系统维持心脏的波动，心脏正常德节律性兴奋和收缩活动必须在适宜的礼花环境才能维持，一旦适宜 的环境被干扰或破坏，心脏后东就会受到影响。

药物对离体心脏的影响

药物对离体心脏的影响 实验报告 1.课程名称: 动物机能学实验 2.实验名称: 药物对离体心脏的影响 3.实验目的、要求 1．学习离体蛙心制备的方法及灌注方法。 2．观察药物和某些神经体液因素对心脏节律的影响。 4.实验原理 蛙心离体后，用任氏液灌注时，在一定时间内，仍然保持有节律的舒缩活动，当各种药物作用于心脏，心脏的节律性舒缩活动亦随之改变。此外，心脏受植物性神经的支配及某些体液因素的调节和影响。 5.实验材料 ⑴.实验动物: 蟾蜍 ⑵.实验器械: BL－420E+生物信号分析系统、张力换能器、蛙类手术器械、蛙心夹、蛙心插管、试管夹、铁支 架、滴管、小烧杯 ⑶.实验药品: 任氏液、2％CaCl2、1∶100,000乙酰胆碱、0.5％阿托品、0.5％毒毛旋花子苷K注射液 6.实验步骤及原始数据记录 实验步骤 ㈠离体蛙心制备：暴露蛙心→插蛙心插管→游离心脏。 ㈡连接实验装置：用试管夹将蛙心插管固定在铁支架上，并将蛙心夹上的棉线联接至张力换能器的受力片上，换能器连接BL－420E+生物信号分析系统。 ㈢软件操作：依次选择“实验项目”，“循环实验”，“蛙心灌流”，编辑标记条，做好每一步标记。 ㈣观察项目 ①：观察正常时的心搏曲线，上升表现心室收缩，下降支表示心室舒张，注意频率与幅度 ②：于灌注液中加入1～2滴0.5％毒毛旋花子苷K注射液，观察心搏曲线变化，并记录结果，用38℃ 任氏液冲洗3次，待心脏搏动频率与幅度接近正常时，再进行下一步。 ③：于灌注液中加入1～2滴2％CaCl2溶液，观察心搏曲线变化，并记录结果，用38℃任氏液冲洗3 次，待心脏搏动频率与幅度接近正常时，再进行下一步。 ④：于灌注液中加入1～2滴1∶100,000乙酰胆碱溶液，观察心搏曲线变化，并记录结果，用38℃任 氏液冲洗3次，待心脏搏动频率与幅度接近正常时，再进行下一步。 ⑤：于灌注液中加入1～2滴0.5％阿托品溶液，观察心搏曲线变化，并记录结果，用38℃任氏液冲洗 3次，待心脏搏动频率与幅度接近正常时，再进行下一步。