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各生理指标实验步骤

各生理指标实验步骤
各生理指标实验步骤

1丙二醛(MDA)含量的测定

丙二醛在酸性和高温的条件下,可以和硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川,在532nm处有最大光吸收。植物组织中可溶性糖与TBA的显色反应产物在450nm和532nm处也有吸收。测定时要排除可溶性糖的干扰,因此分别测定532nm和450nm处的吸光值,直接求得植物样品提取液中MDA的浓度;MDA含量采用硫代巴比妥酸法测定。

计算公式如下:

C(μmol.L-1)=6.45OD532-0.56OD450

进一步算出每克样品鲜重中丙二醛的含量(μmolg-1FW)。

试剂:

10%三氯乙酸(TCA):10g三氯乙酸定容于100ml

0.6%硫代巴比妥酸:0.6g用10%三氯乙酸TCA定容于100ml

试验步骤:

(1)取植物材料用液氮迅速研磨成粉,取0.2g左右材料,放入5ml离心管内。

(2)加入5ml 10%的三氯乙酸,提取30min后,10000r/min离心15min。

(3)取上清液2ml,加入2ml 0.6%TBA,混匀,在100℃水浴中煮15min,冷却,冷却后再测量。

(4)分别测定532nm和450nm处的吸光值。以2ml(加TBA,水)水代替提取液作为对照管。

2蛋白质含量测定----考马斯亮蓝G-250法

实验原理:考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,当它与蛋白质结合后变为青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内,蛋白质一色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比,故可用于蛋白质的定量测定。

仪器和试剂:

牛血清白蛋白500微克/毫升:10mg蒸馏水定溶至100ml

考马斯亮蓝G-250:10mg溶于5ml 90%乙醇中,加入10ml85%的磷酸,用蒸馏水定溶于100ml

操作步骤:

1.标准曲线的制作:

取4支试管,按下表配制不同浓度的牛血清白蛋白溶液各1毫升,加入5毫升考马斯亮蓝G-250试剂,摇匀,放置2分钟后用10毫米光径的比色杯在595nm 下比色。做出标准曲线。

管号 1 2 3 4

蛋白质含量(微克) 0 50 100 150

500微克/毫升牛血0 0.1 0.2 0.3

清白蛋白量(毫升)

蒸馏水量(毫升) 1.0 0.9 0.8 0.7

考马斯亮蓝-G250 5 5 5 5

(毫升)

2.样品中可溶性蛋白质的提取测定:

称取植物叶片0.2克,用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后,过滤,取滤液l.0ml(视蛋白质含量适当稀释)于试管中,加入5毫升考马斯亮蓝G-250试剂,摇匀,放置2分钟后用10毫米光径的比色杯在595nm下比色,以空白管调零,测定吸光度。根据吸光度查标准曲线,求出样品中的蛋白质含量。

3.结果计算

样品中的蛋白质含量(mg/g)=(C·Vt)/(1000Vs·WF)

式中:C--查标准曲线值(ug)

Vt一提取液总体积(ml)

WF一样品鲜重(g):

Vs一测定时加样量(ml)。

3脯氨酸(Pro)含量的测定

药品:3%的磺基水杨酸:3g 磺基水杨酸溶在100ml水中。

2.5%酸性茚三酮显色液:冰乙酸和6mol/l磷酸以3:2混合,作为溶剂进行配制:即2.5g茚三酮溶解在 60ml冰乙酸和40ml磷酸中,磷酸是16.4ml和2

3.6ml 水中。

脯氨酸标准溶液:称取25mg脯氨酸,用蒸馏水定溶至250ml。

1.标准曲线制作

(1)取4支具塞刻度试管按下表加入各试剂。

试管号0 2 4 6

脯氨酸标准溶液(ml) 0 0.2 0.6 1.0

水(ml) 1.0 0.8 0.4 0

冰乙酸(ml) 1 1 1 1

茚三酮显色液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5

脯氨酸含量(μg)0 2 6 10

混匀后在沸水中加热20min。

(2)取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡,以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以0号管为对照在520nm波长下比色。

(3)以消光值为纵坐标,脯氨酸含量为横坐标,绘制标准曲线,求线性回归方程。

2.样品提取测定

(l)提取:剪碎叶片0.2g,置于大试管中,加入5m1 3%磺基水杨酸溶液,管口加盖保鲜膜,于沸水浴中浸提l0 min。

(2)取出试管,待冷却至室温后,吸取上清液2ml,加2m1冰乙酸、2m1水和4ml显色液,于沸水浴中加热40min,下步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取和比色。以甲苯为对照

从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度,按下式计算样品中脯氨酸含量

脯氨酸含量(μg?g-1)(鲜重)=(C·V)·(a·W)-1

式中:C一提取液中脯氨酸含量,由标准曲线求得;

V一提取液总体积(ml);

a一测定时所吸取的体积(ml):

W一样品重(g)

4相对电导率的测定

1.取已处理的叶片,用打孔器取小圆叶片20片(或称取0.5克),放入小烧杯中,每个处理三次重复。

2.向烧杯中各加入25ml蒸馏水浸半小时。

3.用电导仪测各个处理松针外渗液的电导率和蒸馏水电导率。

4. 各烧杯用保鲜膜盖上,于水浴锅中沸水浴半小时,冷却补充蒸馏水25ml,测定煮沸电导率。令测蒸馏水电导率

叶绿素含量的测定:丙酮乙醇混合法

1 将丙酮、无水乙醇按照1:1=5ml:5ml比例配成混合浸提液。

2.称取0.2克叶片,剪成细丝于盛有混合液的试管中,加保鲜膜盖于暗处,浸提,隔一定时间观察浸提情况,以材料完全变白为准,用混合液作空白调零,测定663nm、645nm处光密度,一般隔夜测定。

1取叶片剪碎0.2克,用少量80%的丙酮研磨至匀浆,过滤,用 80%丙酮定溶至 25ML,测测定663nm、645nm处光密度。每次测量做3次重复。

4超氧化物岐化酶活性(SOD )的测定

SOD 活

其中:A CK :照光对照管的吸光度 A E :样品管的吸光度V T :提取的酶液总体积 Vt :反应时所用酶液体积 W F :植物材料的鲜重

试剂:

(1) 磷酸缓冲液pH=7.8:内含1%聚乙烯毗咯烷酮PVP 微量

取A:Na 2HPO 4溶液91.5ml, 取B :NaH 2PO 4溶液8.5ml ,稀释至200ml 即为缓冲液。

A:Na 2HPO 4溶液:Na 2HPO 4 12H 2O 71.64g, 用蒸馏水定溶至1000ml. B :NaH 2PO 4溶液:NaH 2PO 4 2H 2O31.2g, 用蒸馏水定溶至1000ml.

(2) 0.013mol/L 甲硫氨酸溶液(Met):称取1.9399gMet,用磷酸缓冲液溶解并定

溶至100ml. 自配

(3) 6.3×10-6氮蓝四唑(NBT ):称取0.06133gNBT ,用磷酸缓冲液溶解并定溶

至100ml,避光保存。 自配

(4) 6.5×10-6mol L -1核黄素:称取0.0075g 核黄素,定溶至100ml,避光保存,

随用随配。 自配

(5) 1×10-4molL -1乙二胺四乙酸钠EDTA-Na 2: 0.003721g 用磷酸缓冲液溶解并

定溶至100ml.

反应液: 0.3ml ----0.013mol/L 甲硫氨酸,

0.3ml----63×10-6氮蓝四唑,

0.3m l----1×10-4molL -1乙二胺四乙酸钠, 2.4ml ----磷酸缓冲液, 0.5ml ----蒸馏水H 2O , 总计3.8ml 。 试验步骤:

(1)取植物材料0.2g 用磷酸缓冲液迅速研磨成粉,放入5ml 离心管内。

(2)加入5ml 磷酸缓冲液,提取30min 后,在4℃下10000r/min 离心15min 。

(3)取上清液0.1ml 放在试管中,加反应液,加0.3ml 核黄素,于30℃、4级光照培养箱内反应7-8min 。

(4)立即测定560nm 处的吸光值。另准备2个管,一个黑暗作为调零,一个作

为对照照光。加入如下试剂(0.1ml 缓冲液,3.8ml反应液,加0.3ml核黄素)。注意:做之前先做几个,看看酶液浓度,切勿大量做。

过氧化物酶活性(POD)的测定

磷酸缓冲液(100mmol/L PH=6)配制: 12.3ml Na2HPO4和87.7ml NaH2PO4混合,稀释至200ml。Na2HPO4和NaH2PO4配法与SOD一样。

反应混合液: 100mmol/L磷酸缓冲液100ml,加入愈创木酚56微升,于磁力搅拌器上加热搅拌,直至愈创木酚溶解,待冷却后加入30% H2O238微升,混合均匀,保存于冰箱中。

酶活性的测定:

取2只比色杯,一只中加入反应混合液3ml, 磷酸缓冲液 1ml 作为校零对照,另一只加入反应混和液3ml,上述酶液1ml ,立即开动秒表计时,与分光光度计470nm波长下测量值,每隔1min读数一次,以每分钟OD变化值表示酶活性的大小,

POD活性 = OD470·Vt /w·vs·t·0.01

OD470 –反应时间内吸光度的变化

W –叶片鲜重g

t---反应时间min

Vt 提取液总体积

Vs 测定时取用酶液体积

CAT过氧化氢酶的测定

粗酶液 0.2ML 加 PH7.8的缓冲液1.5ML,加蒸馏水1ML ,于25度预热10min,加 0.3ml 0.1mol/l H2O2,立即计时比色,240nm下测定,每隔1min 读数一次,4min.

0.1mol/l H2O2配制:取30%的H2O2溶液5.6ml,用蒸馏水稀释至1000ml.

4抗坏血酸(维生素c)含量的测定--滴定法

维生素c具有很强的还原性,染料2,6-二氯酚靛酚具有较强的氧化性,在酸性溶液中呈红色,在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此当用蓝色的碱性2,6-二氯酚靛酚溶液滴定含有抗坏血酸的草酸溶液时,其中的抗坏血酸可以将2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型。但当溶液中的抗坏血酸完全被氧化之后,则再滴2,6-二氯酚靛酚就会使溶液呈红色。借此可以指示滴定终点,根据滴定用去的标准2,6-二氯酚靛酚溶液的量,可以计算出被测样品中抗坏血酸的含量。

植物材料:

试剂: 2%草酸:

2,6-二氯酚靛酚溶液:50mg2,6-二氯酚靛酚溶解于200ml含有52mg的NaHCO3 的热水中,冷却后,稀释至250ml.

标准抗坏血酸溶液:50mg抗坏血酸溶解于少量的2%的草酸溶液中,然后用2%草酸定溶至500ml.

操作方法:

(1)称取样品10g,放在研钵中加入2%草酸溶液研磨,定容100 ml,过滤,滤液备用。

(2)染料的标定:取10 ml标准抗坏血酸溶液至蒸发皿中,以2,6—二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色,并在30s内不褪色为终点。计算l ml染料相当于抗坏血酸的毫克数(重复2次,取平均值)。

(3)样品滴定:取滤液10 ml于蒸发皿中,用已标定过的2,6—二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色,并且在30s内不褪色为止,记下染料的用量(重复2次,取平均值)。

(4)空白滴定:取2%草酸10 ml于蒸发皿中,用已标定过的2,6—二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色,并且在30s内不褪色为止,记下染料的用量

式中:W为100g样品中含维生素c的毫克数;

Y0为滴定空白所用染料毫升数;

y1为滴定样品所用染料毫升数;

A为与1ml染料溶液相当的抗坏血酸的

毫克数;

B为样品的克数;

X为滴定时吸取样品溶液的体积,ml;

Z为样品溶液定容后的总体积。

植物体内可溶性糖含量的测定(蒽酮法)

(1)200μg/ml蔗糖糖: 100mg,蒸馏水溶解,定容至500ml

(2)蒽酮试剂:0.5g蒽酮,用乙酸乙酯溶解,定容至25ml,棕色瓶避光(3)浓硫酸:实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作:取6支20ml具塞试管,编号,按下表数据配制一系

列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂,再缓慢地加入5ml浓H

2

SO

4

,摇匀后,打开试管塞,置沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却至室温,在630nm波长下比色,测各管溶液的光密度值(OD),以标准葡萄糖含量为横坐标,光密度值为纵坐标,作出标准曲线。

2.样品中可溶性糖的提取:称取0.2克。加入5ML蒸馏水提取置沸水浴中加盖煮沸10分钟,冷却备用。

3.糖含量测定:用移液管吸收0.1ml提取液于20ml具塞刻度试管中,加1.5ml水和0.5m

l蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H

2SO

4

(注意:浓硫酸遇水会产生大量的热!),盖上试管塞

后,轻轻摇匀,(比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合,在波长630nm下比色,记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量(μg)。

五、结果计算

六、附注

(1)加浓H

2SO

4

时应缓慢加入,以免产生大量热量而爆沸,灼伤皮肤,如出现上述情况,

应迅速用自来水冲洗。(2)水浴加热时应打开试管塞。

电生理基本技术

电生理基本技术 一电刺激。 二生物放大器正确选择,植物性神经冲动幅度多为50-100μV。不同组织,应采用不同的参数。如 ECG:振幅0.1-2mV,灵敏度0.5-1mV,时间常数0.1-1.0s,高频滤波1KHz 植物性神经冲动:振幅50-150μV,灵敏度25-100μV,时间常数0.01-0.1s,高频滤波3- 5KHz 中枢神经元单位放电振幅100-300μV, 灵敏度50-100μV,时间常数0.01-0.1s,高频滤波5-10KHz 三玻璃微电极 常用尖端0.5-5μm,向细胞内插入时,需小于0.5μm(细胞直径的1/10~1/100),且尖端的倾斜度应相当缓和,一般微电极可分为金属微电极和玻璃微电极两类。 金属微电极,现多用镀铂钨丝电极(platinum-plated tungsten electrode),在钨丝上镀铂,可极大改善电极的电学特性,噪声可大大降低,加之机械强度大,适合长期体外记录(paré D, Gaudreau H. Projection cells and interneurons of the lateral and basolateral amygdala: distinct firing patterns and differential relation to the thera and delta rhythms in conscious cats. J Neursci, 1996,16(10):3334-3350 现要也常用镀银碳纤维电极。玻璃微电极记录易受机械位移的影响,加之尖端的电解质会漏出或堵塞,不适合半小时以上的长时间记录,玻璃微电极可分单管和多管微电极。 毛坯管在国外多用Pyrex管,国内多用GG-17和95料玻管。细胞外记录多采用外径1.5-2mm 玻璃,细胞内记录则采用外径1mm细玻管,内外径之比约为2:3或5:6,长6-8cm。拉制前必须经过清洁处理。 清洁液:用等量的(250ml)王水(可反复应用)。一般毛坯管捆成把放入清洁液中1-2h,取出自来水冲洗20-30min,再放入无水酒精中洗涤,再放入盛满蒸馏水烧杯中加热煮沸10min,倒去蒸馏水,再换新蒸馏水反复3次,再放入烤箱中烤干,备用,切不可用市售的洗涤剂,以防降低电极充灌液的表面张力而影响冲灌。 充灌液常用3mol/L KCl,为避免Cl-扩散,也可用2mol/L醋酸钾或柠檬酸钾充灌,也有人用0.5-1mol/L NaCl(低浓度)充灌可降低噪音。细胞外记录时,最后再用3-4mol/L NaCl +2%旁胺天蓝溶液定位。在膜片钳中还常加钙螯合剂,如EGTA。 阻抗与不同组织相关。 四电生理实验中噪声和干扰的形成和排除。 (一)来源。 1干扰信号与生物电生理信号的鉴别。准确区分生物电信号与干扰的伪迹是电生理实验的先决条件。 2来源。主要有三个方面 其一。物理性干扰。1)静电和电磁的干扰实验室附近高压电,室内日光灯可产生50Hz的静电干扰,尤其是交流电,尤其是50Hz频率干扰最大(电子设备为50Hz)。其特点是幅度大,波形规则。 2)噪声干扰电子元件本身产生杂乱无章电压和电流称噪声,一般与放大器内部元件的质量与性能有关。 其二。接地不良。1)地线电阻应小。2)仪器故障。产生漏电电流,在地线上形成电位差,产生干扰。3)地线行走过程中打圈,形成线圈,易接受电场和磁场的干扰。4)各仪器设备应采

微生物实验操作

油镜的使用和维护 目的:掌握油镜的使用与维护,熟悉油镜的使用原理。材料:显微镜,拭镜纸,液体石蜡油,二甲苯 原理:油镜的透镜极小,工作焦距最短,光线通过玻璃和空气,由于介质密度不同发生折射,射入镜筒的光线极少,视野暗,物象不清晰。如在玻片与镜头(透镜)之间加上折光率和玻片(n=1.52)相近的香柏油(n=1.515)就可减少光线的折射,加强视野的亮度,获得清晰的物象。 步骤:显微镜油镜的使用和维护 1.将显微镜平稳地安放在实验台适宜处。识别油镜头:标有100×、OIL、HI等字样。 2. 打开电源,用低倍镜对光,打开光圈,调节聚光镜的位置,使视野光线充足。 3. 标本上加镜油一滴,转动粗螺旋,使油镜头缓缓下降,用眼从侧面观察,直到油镜头浸入油中接近玻片为止。 4. 从目镜观察,同时徐徐转动粗螺旋提升,见模糊物象后再用细螺旋调节,直到见到清晰物象为止。 5. 观察完毕,粗螺旋提高镜头,取下标本片,油镜头使用后立即用擦镜纸擦净镜头上的油。如油已干,可在擦镜纸上滴少许二甲苯擦拭,并立即用另一擦镜纸

擦去二甲苯,因二甲苯能溶解镜头上的固定胶以致使镜头脱落。 6.将镜头转呈“八”字,调低聚光器,对号送入柜子内存放。 革兰染色 目的:掌握革兰染色的原理及操作。 材料:干净玻片,接种环,葡萄球菌和大肠杆菌18-24h 培养后的混合菌液,酒精灯,一套革兰染液 原理:主要为细胞壁结构的差异。G+三维肽聚糖结构的交联度大,通透性低,脂质少或无,酒精作用使孔径缩小;而G-肽聚糖为二维疏松结构,薄,外膜含大量脂质,易被酒精溶解,使细胞壁通透性增高,结晶紫-碘复合物被酒精溶解而脱色。 步骤: 1. 细菌标本的制作 (1)涂片:无菌操作。取一接种环混合细菌悬液,涂布成直径约1cm的涂片,涂片应薄而均匀。 (2)干燥:涂片最好在室温中自然干燥。必要时可将标本面向上,放在酒精灯上方微火处干燥。 (3)固定:标本面向上,在酒精灯火焰外焰按钟摆的速度来回通过3次,放置待冷后染色。固定的目的是

分子生物学实验室常用仪器及使用方法

实验指导 目录 实验一分子生物学实验室常用仪器及使用方法实验二质粒DNA的提取-碱裂解法 实验三琼脂糖凝胶电泳 实验四限制性内切核酸酶的酶切与鉴定 实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 实验六动物组织细胞基因组 DNA提取 实验七 DNA的定量 实验八 PCR基因扩增 实验九琼脂糖凝胶电泳分离与纯化目的DNA 实验十 DNA重组 实验十一动物组织细胞总RNA的提取 实验一分子生物学实验室常用仪器及使用

事实证明,在科学飞速发展的今天,无论从事哪个领域的研究,要想突破,除了有良好的理论基础外,更重要的是依赖于先进的技术和优良的仪器设备以及良好的研究环境。一个标准的分子生物学实验室除了具有一般生物学实验室的常规仪器设备外,还具有一些特殊用途的仪器,这些仪器一般较精密,价格昂贵。下面介绍这些仪器的使用方法和注意事项。 一、冷冻离心机 低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术,因此低温冷冻离心机成为分子生物学研究中必备的重要仪器。在国内,有多个厂家生产冷冻离心机,本实验室的高速冷冻离心机为GL-20G-Ⅱ型(上海安亭),落地式。配有角式转头:6×50ml、12×10ml和12×1.5ml。极限转速20000rpm。 1. 安装与调试 离心机应放置在水平坚固的地面上,应至少距离10cm以上且具有良好的通风环境中,周围空气应呈中性,且无导电性灰尘、易燃气体和腐蚀性气体,环境温度应在0~30℃之间,相对湿度小于80%。试转前应先打开盖门,用手盘动转轴,轻巧灵活,无异常现象方可上所用的转头。转子准确到位后打开电源开关,然后用手按住门开关,再按运转键,转动后立即停止,并观察转轴的转向,若逆时针旋转即为正确,机器可投入使用。 2. 操作程序 (1)插上电源,待机指示灯亮;打开电源开关,调速与定时系统的数码管显示的闪烁数字为机器工作转速的出厂设定,温控系统的数码管显示此时离心腔的温度。 (2)设定机器的工作参数,如工作温度,运转时间,工作转速等。 (3)将预先平衡好的样品放置于转头样品架上,关闭机盖。 (4)按控制面板的运转键,离心机开始运转。在预先设定的加速时间内,其运速升至预先设定的值。 (5)在预先设定的运转时间内(不包括减速时间),离心机开始减速,其转速在预先设定的减速时间内降至零。 (6)按控制面板上的停止键,数码管显示dedT,数秒钟后即显示闪烁的转速值,这时机器已准备好下一次工作。 3. 注意事项 (1)离心机应始终处于水平位置,外接电源系统的电压要匹配,并要求有良好的接地线,机器不使用,要拔掉电源插头。

eNSP使用和实验教程详解

e N S P使用和实验教程详 解 Company Document number:WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998

eNSP使用和实验教程详解 一.ENSP软件说明 1.ENSP使用简介 2.ENSP整体介绍 a)基本界面。 b)选择设备,为设备选择所需模块并且选用合适的线型互连设备。 c)配置不同设备。 d)测试设备的连通性。 二.终端设备的使用(PC,Client,server,MCS,STA,Mobile) 1.Client使用方法 2.server使用方法 3.PC使用方法 4.MCS使用方法 5.STA和Mobile使用方法 三.云设备,HUB,帧中继 1.Hub只是实现一个透传作用,这边就不作说明了。肯定会无师自通的 2.帧中继使用方法 3.设备云使用方法 四.交换机 五. AR(以一款AR为例) 六. WLAN(AC,AP) 1.AC使用 2.AP使用方法 一. eNSP软件说明 使用简介 全球领先的信息与通信解决方案供应商华为,近日面向全球ICT从业者,以及有兴趣掌握ICT 相关知识的人士,免费推出其图形化网络仿真工具平台——eNSP。该平台通过对真实网络设备的仿真模拟,帮助广大ICT从业者和客户快速熟悉华为数通系列产品,了解并掌握相关产品的操作和配置、故障定位方法,具备和提升对企业ICT网络的规划、建设、运维能力,从而帮助企业构建更高效,更优质的企业ICT网络。 近些年来,针对越来越多的ICT从业者的对真实网络设备模拟的需求,不同的ICT厂商开发出来了针对自家设备的仿真平台软件。但目前行业中推出的仿真平台软件普遍存在着仿真程度不够高、仿真系统更新不够及时、软件操作不够方便等系列问题,这些问题也困扰着广大ICT从业者,同时也极大的影响了模拟真实设备的操作体验,降低了用户了解相关产品进行操作和配置的兴趣。

电生理学发展简史

电生理学发展简史(一) 生物电活动是机体一种基本的生命现象,它产生的基础是细胞膜上离子通道活动的总和效应。从生物电现象的发现到如今对离子通道功能与结构如此深入的了解,电生理学走过了200 多年的历程。 一、生物电现象的发现 最初的实验研究是从18 世纪后叶开始的。当时没有任何测量电流的仪器,只是发现利用电容器(如雷顿瓶)的放电,或雷电发生时竖起一根长导线,引导大气中的电,都可以刺激蛙的神经肌肉标本,引起肌肉收缩,所以当时就用蛙的神经肌肉标本作为电流存在的标志。1791 年意大利解剖学教授Galvani L 发现,如果将蛙腿的肌肉置于铁板上,再用铜钩钩住蛙的脊髓,当铜钩与铁板接触时肌肉就会发生收缩。他把这个现象的发生归因于机体的“动物电”(animal electricity )。他认为神经与肌肉带有相反的电荷,肌肉带正电,神经带负电,金属导体的作用是把神经与肌肉之间的电路接通。同时代的意大利物理学家Volta A 不同意Galvani 的见解,他认为实验中发现的电现象,不是动物机体产生的动物电,而是由于实验中连接肌肉和神经的金属不同所致,是不同金属接触时产生的电流刺激了肌肉标本,如果用同一种金属作导体,收缩就不会发生。事实上,Volta 和Galvani 的观点都有其正确的一面。Volta 后来因此而发明了伏特电池;Galvani 则继续进行了一个出色的实验。在无金属参与的情况下,他将一个肌肉标本横断,又将另一个神经肌肉标本的神经干搭在横断肌肉上,并使之跨越肌肉的完好面和损伤面,结果该神经支配的肌肉产生收缩,证实了动物电的存在。这成为第一次观察到生物电存在的电生理实验。但是直接测量到生物电的实验是在电流计发明之后。 1825 年意大利物理学家Nobili 发明电流计。 1837 年意大利物理学教授Matteucci C 用电流计在肌肉的横断面与未损伤部位之间,测量到电流流动,电流是从未损伤部位流向横断面的,所以横断面呈负电位。这是第一次直接测量到生物体内存在生物电的实验。 1843 年瑞士生理学家Du Bios-Reymond 用电流计观察到神经的损伤电位,也是损伤部位呈负性。1849 年,他又发现神经在活动期间出现负波动,即使用电流计从细胞外记录到的动作电位。 1850 年von Helmholtz H 测定了神经传导速度,证明蛙神经的传导速度仅20 ~ 30m/s 。此前人们认为既然电的传导速度等于光速,因而神经的传导速度可能也是光速。 二、早期对生物电发生机制的认识 1. Bernstein 的膜学说对于这种生物电现象的解释,当时提出了不同的学说。Du Bios-Reymond 认为,组织内带负电,外表带正电,是正常状态下存在的,即所谓“现存学说”(preexistence theory );而他的学生Hermann (Du Bios-Reymond )则认为,组织内的负电是被切割时组织损伤变质造成的,即所谓“变质学说”(alteration theory )。1890 年,著名的化学家Ostwald W 提出了膜的通透性理论,即如果在电解质弥散的途径上有一层半透膜,它只允许一种离子通过,而带有相反电荷的另一种离子不能通过,就会通过静电作用限制透过膜的离子不能进一步弥散,如此,在膜两侧就会形成电位差,它的大小可按Nernst 公式计算。1902 年Du Bios-Reymond 的另一名学生Bernstein J 接受了Ostwald 通透性理论,在现存学说的基础上提出了“膜学说”(membrane theory )。他根据细胞内液比细胞外液含较多的K +,而细胞损伤处电位较完好处为低的事实,推测静息时细胞内电位低于细胞外,并假定静息时细胞膜只对K +有通透性,由于胞内带正电荷的K +顺浓度差扩散到膜外,相应的负电荷仍留在膜内,使细胞膜呈现外正内负的极化状态,形成静息电位。按照Bernstein 的设想,细胞的静息电位就等于K +的平衡电位。动作电位则是由于膜在一瞬间失去了对K +的选择性通透,变得对所有离子通透性一过性地升高,导致膜两侧电位差瞬间消失。1904 年,他又设计了一个精巧的实验,证实肌肉切断后断面的负电位在0.3 s 后即出现,并持续缓慢地减小而不是

微生物实验操作步骤

微生物试验操作步骤 1.前期准备工作(红色字体需要购买) 10ml离心管(80管)、培养皿(预实验36板,正式试验648板,共计684板)、EP管(预实验36管,正式试验108管,144管)、枪头(5ml、1ml、200ul)、生理盐水现配现用(0.85)2.,灭菌处理 将离心管、枪头、生理盐水、培养基放入高压灭菌锅中灭菌处理后待用。 3.制备不同梯度的样品溶液 预实验 a.梯度稀释试验前一天晚上取置于-80℃盲肠食糜样品于4℃冰箱融化,将需要用到的离心管和EP管分别编号待用。试验期间取盲肠食糜0.5~1g于灭菌后的10ml离心管中,按1:10比例加入生理盐水,制成10-1浓度的样品溶液。然后取0.5ml10-1浓度的样品溶液于下一离心管,按1:10比例加入生理盐水,制成10-2浓度的样品溶液。然后然后取0.1ml10-2浓度的样品溶液于EP管中,按1:1010-3比例加入生理盐水,制成10-3浓度的样品溶液。然后依次如上分别配制10-4、10-5、10-6、10-7、10-8样品溶液。每一次取样前离心管和EP管都要在微型振荡器上震荡混匀。 b.接种和培养:按照平板涂布法进行。分别取各稀释管溶液100μl接种到选择性培养基,大肠杆菌选择性培养基置普通培养箱,37℃培养24h。乳酸菌选择性培养基置5%CO2培养箱,37℃培养48h。双歧杆菌选择性培养基置厌氧发酵罐内,37℃培养48h。沙门氏菌选择性培养基置普通培养箱,37℃培养24h。 c. 微生物计数与鉴定:采用常规微生物平板菌落计数法,选择长有30-300个菌落的平板较为合适,用每克肠道内容物中细菌个数的对数表示( 1gCFU /g) 正式试验 按照预实验操作步骤及适宜梯度进行试验。 4.培养基 总需氧菌营养琼脂(NA)34567 乳酸菌MRS琼脂碱性厌氧234567 双歧杆菌BL琼脂厌氧234567产气袋 大肠杆菌麦康凯需氧234567 沙门氏菌XLD 需氧2345

H-实验手册:组播PIM-DM

组播PIM-DM实验 一、实验拓扑 二、步骤: 1、配置组播地址: CLIENT1配置: IP地址:172.16.1.1 255.255.255.0(网关可以不配置) 组播源:224.1.1.1 CLIENT2配置: IP地址:192.168.1.1 255.255.255.0 192.168.1.254 组播目的:224.1.1.1 2、配置基本IP地址: R1配置: [R1-GigabitEthernet0/0/0]ip address 172.16.1.254 24 [R1-GigabitEthernet0/0/1]ip address 12.1.1.1 24 R1配置:: [R2-GigabitEthernet0/0/0]ip address 12.1.1.2 24 [R2-GigabitEthernet0/0/1]ip address 23.1.1.2 24 R3配置: [R3-GigabitEthernet0/0/0]ip address 23.1.1.3 24 [R3-GigabitEthernet0/0/1]ip address 192.168.1.3 24 3、配置路由(OSPF)全通 R1配置: [R1]ospf 1 router-id 1.1.1.1 [R1-ospf-1]area 0 [R1-ospf-1-area-0.0.0.0]network 172.16.1.0 0.0.0.255 [R1-ospf-1-area-0.0.0.0]network 12.1.1.0 0.0.0.255 R2配置: [R2]ospf 1 router-id 2.2.2.2 [R2-ospf-1-area-0.0.0.0]network 12.1.1.0 0.0.0.255 [R2-ospf-1-area-0.0.0.0]network 23.1.1.0 0.0.0.255 R3配置:

微生物检验操作步骤

微生物检验操作步骤 Company Document number:WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998

样品制备: 取样品 10 g/ml加入至 90 ml灭菌生理盐水中,混匀,制成 1 ︰ 10 的稀释液; 菌落总数:(结果报告:XXX cfu /g(ml)) 取上述 1 ︰ 10 的稀释液 1 ml加入至 9 ml灭菌生理盐水中,充分混匀, 制成 1 ︰100 的稀释液; 取上述两个稀释级的稀释液分别加入2块平皿中,每块平皿中加 20 ml,然后往平皿中倒入约45℃的卵磷脂吐温80琼脂培养基,待培养基凝固,倒置放于36+/-1 ℃培养箱中培养 48 h,点计菌落数。 霉菌和酵母菌: 操作同菌落总数,加入的培养基为虎红培养基,待培养基凝固,倒置放于℃培养箱中培养 72 h,分别点计霉菌和酵母菌数。 粪大肠菌群:(结果报告(未)检出/ ) 取上述 1 ︰ 10 的稀释液 10 ml加入至 10 ml 双倍乳糖胆盐培养基中,摇匀,置 44 ℃培养箱中培养 48 h; 如果培养物产酸产气(现象为培养基呈黄色,小倒管内有气泡),则应取培养物分别接种至伊红美蓝琼脂平板于 37 ℃培养 18-24 h和蛋白胨水培养基中于 44 ℃培养 24 h。 在上述平板上,粪大肠菌群呈深紫黑色、圆形突起的菌落,并有金属 光泽。 挑取分离的单个菌落,进行革兰氏染色和镜检,在显微镜下应观察到 红色短杆状的菌。挑取菌落时,应使灭菌的接种环冷却后再行操作。

上述蛋白胨水培养基的培养物还需做靛基质试验,阳性现象为培养物表层出现玫瑰红色。 铜绿假单胞菌:(结果报告(未)检出/ ) 取上述 1 ︰ 10 的稀释液 10 ml加入至 90 ml SCDLP 培养基中,摇匀,置 37 ℃培养箱中培养 18-24 h; 挑取上述培养物,接种至十六烷基三甲基溴化铵琼脂平板于 37 ℃培养 18-24 h;在该平板上,铜绿假单胞菌应为灰白色色、圆形湿润的菌落,周围培养基溶有水溶性色的色素; 挑取分离的单个菌落,染色镜检,在显微镜下应观察到红色杆状的菌。 如果平板上只分离到1个可疑菌落,不够做生化试验,则应挑取该菌落于SCDLP增菌培养。 取分离的菌落分别做氧化酶试验、绿脓菌素试验、硝酸盐还原产气试验、明胶液化试验和 42℃生长试验。 金黄色葡萄球菌: 增菌培养同铜绿假单胞菌项下, 挑取上述增菌液的培养物,接种至 B-P 平板于 37 ℃培养 24-48 h;在该平板上,金黄色葡萄球菌应为灰黑色、圆形的菌落,菌落周围有混浊带和透明环 挑取分离的单个菌落,染色镜检,在显微镜下应观察到紫色球状的菌。 取分离的菌落分别接种至甘露醇发酵培养基和肉汤培养基中,于 37 ℃培养24 h;取上述肉汤培养物,做血浆凝固酶试验。

生物实验操作步骤

生物实验操作步骤 一、安装显微镜和对光: A 、操作步骤: 1.一手握住镜臂,一手托住镜座,把显微镜轻轻地放在实验台上,镜臂靠近身体略偏左,镜座距实验台边缘约5厘米。安装好目镜和物镜。 2.转动转换器,使低倍物镜对准通光孔。转动遮光器,使最大的光圈对准通光孔。 3、左眼注视目镜内,同时双手转动反光镜(光强用使用平面镜、光弱使用凹面镜),使光线反射到镜筒里,直到整个视野呈雪白色为止。 4.整理复位:把显微镜的外表擦拭干净。取下镜头放入镜盒内,并将镜筒缓缓下降到最低处。最后把显微镜放进镜箱里,放回原处。 B 、去年考卷: C 、评分标准: (1)安装好物镜和目镜(1分) (2)能将显微镜对好光观察(2分) 记录:雪白色或亮白色(1分) (3)整理器材(1分) 二、制作并观察洋葱鳞片叶临时玻片标本: A 、操作步骤: 1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦干净。 2、用滴管在载玻片中央滴一滴清水。 3、用刀片在洋葱内表面划一个“井”字,用镊子撕下表皮,然后把它放在载玻片中央的水滴中,用解剖针轻轻地将其展平; 4、用镊子夹起盖玻片,使其一边接触载玻片上面的液滴,然后缓缓地盖在液滴上,盖片时要防止装片上出现气泡; 5、在载玻片的一侧滴一滴碘液,在另一侧用吸水纸吸引,重复几次,使染液浸润到整个标本; 6、安装显微镜和对光; 7、将制作的装片安放在显微镜的载物台上,然后将镜筒缓缓下降直到物镜接近玻片; 8、用左眼注视目镜,调节粗准焦螺旋使镜筒缓缓上升,直到在视野中看到细胞图像,然后旋转细准焦螺旋,使物像更清晰; 9、移动装片,在视野中找到一个完整的细胞进行仔细观察; 10、整理复位:取下玻片标本,平移方式(防止折断盖玻片)取下盖玻片并连同载玻片一起放回原处。取下镜头放入镜盒内,将镜筒下降到最低处,然后把显微镜放进镜箱里。把其他废弃物放入垃圾桶并把实验桌抹干净。 B 、去年考卷: C 、评分标准: (1)用纱布将载玻片、盖玻片擦拭干净(1分) (2)在载玻片中央滴一滴清水(1分) (3)用刀片切取一块洋葱鳞片叶,用镊子撕取鳞片叶的内表皮置于载玻片上清水中并用解剖针将表皮展平,盖上盖玻片(1分) (4)将一滴碘液滴在盖玻片的一侧,用吸水纸从对侧引流使碘液扩散到整个标本(1分) (5)将制作好的临时装片放在显微镜下观察(1分) 记录:气泡(1分) 细胞核(1分) 细准焦螺旋(1分) 左上方(1分) (6)整理器材(1分) 三、制作并观察口腔上皮细胞临时玻片标本: A 、操作步骤: 1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦干净; 2、用滴管在载玻片中央滴一滴生理盐水; 3、用清水漱口,清除口腔中食物碎屑,用消毒牙签粗的一端在口腔侧壁上轻轻刮几下; 4、将牙签上附着的碎屑放在载玻片的生理盐水中涂抹几下; 用镊子夹起盖玻片让一侧先接触生理盐水在轻轻放平,避免出现 。 你观察到的细胞内染色最深的结构是 如果想让物像更清晰,应转动 。如果物像在视野的左上方,应将玻片标本向 移动,才能使物像移到视野中间。

组播实验(完整版)

组播实验 一实验目的 1)理解Multicast的一些基本概念。 2)掌握pim dense-mode的基本配置。 3)理解pim dense-mode的flood和prune过程。 4)理解 pim dense-mode 的assert机制 5)掌握cgmp的配置,及其优点。 6)掌握pim sparse-mode的基本配置。 二、实验拓扑和器材 Server 192.168.5.x 拓扑如上所示,需要路由器四台、交换机一台,主机三台(一台能作组播的服务器,需要Server级的windows操作系统)。 三、实验原理 1.组播基本原理 Multicast应用在一点对多点、多点对多点的网络传输中,可以大大的减少网络的负载。因此,Multicast广泛地应用在流媒体的传输、远程教学、视频/音频会议等网络应用方面。 Multicast采用D类IP地址,即224.0.0.0~239.255.255.255。其中224.0.0.0~224.0.0.255是保留地址,239.0.0.0~239.255.255.255是私有地址,类似于unicast的私有地址。 Multicast的IP地址与MAC地址的映射:MAC地址有48位,前面24位规定为01-00-5E,接着一位为0,后面23位是IP地址的后23位。 路由器间要通过组播协议(如DVMRP、MOSPF、PIM)来建立组播树和转发组播数据包。组播树有两类:源树和共享树。 多播时,路由器采用组管理协议IGMP来管理和维护主机参与组播。IGMP协议v1中,主机发送report包来加入组;路由器发送query包来查询主机(地址是224.0.0.1),同一个组的同一个子网的主机只有一台主机成员响应,其它主机成员抑制响应。一般路由器要发送3次query包,如果3次都没响应,才认为组超时(约3分钟)。IGMPv2中,主机可以发送

电生理实验常见问题解答

电生理实验常见问题解答(1)『』 2010-10-09 14:53 请问目前分析细胞外放电的信号处理软件较好的是什么? 价格昂贵的有国外的PCLAMP系列软件和POWERLAB;价格便宜的较好用的有国产的PCLAB 和MEDLAB。如果感兴趣输入GOOGLE,一搜即知。axon guide是很经典的哦,大家可以到公司主页上下载本书主要针对PATCH,是AXON公司的产品配套广告说明书,但是也包含了不少基本电生理知识,集中阅读一下第1、2章节有帮助。可以下载看看,如下,.axon.请教:干扰的大小如何检测? 检测干扰大小和你记录电信号一样,可以从相关软件读出来,也可以从示波器上读出。建议丁香妹妹找一些基础电生理书籍熟悉一下,不要着急,先入门为重。 请问微电极的电阻如何测量?怎样才能保证电极尖端已被电极液完全充满? 给予电极一个电流/电压,可以从示波器上读出来,也可以从相应的放大器上显示出来。建议购买带有芯的玻璃电极,这样可以简单地从尾部灌入液后,轻轻用手指敲打电极即可;如果是无芯电极,就需要先用注射器将电极尖端充满,而后在从尾部灌入液。 问题是有时尖端太细,从尾部注入液后,很难保证尖端全被充满. 注射器接皮管——皮管接电极尾部——电极尖端深入电极液中——抽吸注射器——电极尖端充满液体——再从电极尾部管电极液——解决问题了。 我在记录细胞外放电时,干扰太大,诸如50hz的交流电干扰,请问如何尽可能地排除这些干扰信号? 交流电干扰应该不难处理,只需要中间接一个直流电转换器即可。 我想用Patch做平滑肌的BK通道,请教Pleace前辈,在酶解法分离细胞时,使用DMEM会因为含钙高而影响结果吗?文献多数都用无钙液,如果使用前我用PBS洗三次是否可以? 你最好用无钙液,即使后来用PBS洗三次也不可以。因为之前的无钙液操作不仅可以保护细胞,而且可以使之处于低兴奋状态。 屏蔽和接地是电生理基本要求。如果你记录的信号足够大的话,可以不用屏蔽。但生物电信号一般都很弱,这就是为什么要屏蔽和接地。也是为什么很多时候晚上做实验干涉小——因为晚上用大功率电器的人相对少些,空间的电磁干扰相对小些,地线相对也干净一些。屏蔽笼即法拉第笼,一般是一层铜网,一层铁网。铜网屏蔽电,铁网屏蔽磁。屏蔽笼和系统的信号共地。关于地线,根据你的系统所记录的信号的强弱要求可以不同,信号越弱,要求越高。一般细胞外记录甚至更粗的记录要求相对不高。要是做到单通道水平,就不是凑合能解决问题的。就是这样,电生理的地线也应该和公共地线区分开来。一般比较正规的电生理实验室的地线应该单独埋设。地线埋设的要求其实很简单,尽量减小对地电阻。但实施起来就有很多方法了。我听说的一个方法是:从实验室下到地的主线用大概10cm 的铜缆。地上要挖个深1.5—1.8m、1.5*1.5m宽的坑。铜缆用铜铆钉(尽量减少材质造成的电阻差异)焊在一块1.5m*1.5m*4cm的铜板上。铜板放入坑中。板上埋2.5kg食盐、2.5kg 木炭。再将坑添上。主线到各个信号地分支点用铜棒焊接。铜棒上钻孔接地线。仪器电源不直接接到公共电源上,而是通过稳压隔离电源后接到另设的电源上。仪器电源的地线和系统的信号地分开接地。信号地接到单独埋设的地线上。仪器电源的地线也就是三相插头的顶端那个插头很多时候不接。 震动太大:可能原因有防震台防震效果不好,充气不足,或是实验室附近有什么强振动源;记录槽设计是否合理;液体流速是否太快? 记录系统是否稳定:微电极放大器电容补偿是否调好,是否需要校正?记录系统干扰和噪声情况如何?

组播综合实验

组播源发现协议(MSDP:MulticastSourceDiscoveryProtocol)描述了一种连接多PIM-SM(PIM-SM: PIMSparseMode)域的机制。每种PIM-SM域都使用自己独立的RP,它并不依赖于其它域内的RP。该优点 在于: 1. 不存在第三方(Third-party)资源依赖域内RP。 2. PIM-SM域只依靠本身的RP。 3. 接收端域:只带接受端的域可以获取数据而不用全局通告组成员。MSDP可以和其它非PIM-SM 协议一起使用。 PIM-SM域内的MSDP发话路由器与其它域内的MSDP对等设备之间存在一种MSDP 对等关系,这种关系 通过TCP连接形成,在其中控制信息进行交换。每个域都有一个或多个连接到这个虚拟拓扑结构。这种 拓朴结构使得域能从其它域发现组播源。如果组播源想知道含有接收端的域,那么PIM-SM中的标准源 树建立机制就会被用于在域内分配树上传送组播数据。 MSDP使用TCP639端口建立对等连接(高ip侦听,低ip连接),和BGP一样,对等间连接必须明确配 置,当PIMDR在RP注册源时,RP向所有的MSDP对等体发送源激活消息,然后其他MSDP路由器将SA泛洪, 为防止环回,现检查MBGP,再检查BGP Message-Type 23.16.2 实现域间组播策略 对于一个多ISP的域间组播设计,需要考虑很多问题,如下图是一个常见的多ISP域,每个自治系 统间BGP路由器使用了RR。

建立域间的组播策略分为如下3个步骤 1.建立整体的域内组播策略 2.建立整体的域间组播策略 3.建立将客户连接到网络基础设施的实施策略 23.16.2 建立整体的域内组播策略 在4个ISP相互之间部署组播服务之前,必须在各自的网络中实现域内组播。域内组播实现一般 采用PIM-SM协议。 常规的配置流程如下: 1.首先在全局启用组播 在全局配置 Ip multicast-routing [distributed] 后面的distributed参数是用在Cisco 7500 12000等支持分布式交换的路由器上面的, 同时需要启用 Ip multicast multipath 该命令用于:如果存在针对某个单播路由前缀的代价相等的路径,对于匹配 该单播前缀的各个组播数据包,路由器可以使用不同的逆向路径转发接口进 行数据转发,负载均衡基于(S,G)而不是基于包。

电生理实验室电极植入手术基本流程

动物头部电极植入手术操作流程 一、大鼠麻醉选择与使用: 1、麻醉剂选择:戊巴比妥钠 40~60mg/kg,体重小于300g时,可考虑55mg/kg或酌 情减少用量(2-3%浓度);或乌拉坦1~1.5g/kg(20-25%浓度) 2、根据体重换算出麻药用量,注意所配药品浓度,根据需要的mg数,决定注射的ml. 3、给药途径:腹腔注射 4、操作流程:右手轻轻捉住大鼠尾巴,将大鼠放置在鼠笼上方或操作台上,待其安静后,可用左手的姆指和食指捏住耳后枕颈部皮肤即可提起,掌心向上将鼠体置于掌心中,用无名指和小指将鼠尾压住。腹腔注射位置:两大腿根部水平线,中线旁1-2cm.腹腔平面向上倾斜45°,插入时有落空感,回抽无血,匀速注入。 5、电极植入中麻醉维持:如手术时间过长,动物麻醉效果减轻时,可用乙醚适当吸入麻醉。 二、电极制作 实验中所用电极应预先准备,根据实验目的和要求,选择不同电极。 1、皮层电极,可选用小不锈钢螺钉(眼镜/手表用螺钉) 2、深部电极,采用绝缘金属丝制作 三、手术流程 1、术前准备: (1)手术器件准备: 大、小手术剪各1把,弯头止血钳4-6把(用于暴露手术视野),手术刀柄及刀片,直止血钳1-2把(用于手术中夹持止血),持针器1把(用于皮肤缝合),手术针(弯针),缝线若干,小螺丝刀1把(用于固定螺钉电极),有齿镊1把,小手术镊1-2把,钻头1-2个(大小根据实验需要确定),手术盘(手术中放置手术器件)1个,器件盒1个(用于手术器件消毒保存) 上述手术器件需要进行消毒灭菌处理(高温高压消毒或75%酒精浸泡30分钟。(2)其它实验所需物品 玻璃器皿(盛水,用于丢弃毛发),消毒棉棒,明胶海绵(止血用,需要事先剪成小

微生物实验室技术操作规范

实验室技术操作规范 一、无菌操作要求 食品微生物实验室工作人员,必须有严格的无菌观念,许多试验要求在无菌条件下进行,主要原因:一是防止试验操作中人为污染样品,二是保证工作人员安全,防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2. 进行接种食品样品时,必须穿专用的工作服、帽及拖鞋,应放在无菌室缓冲间,工作前经紫外线消毒后使用。 3. 接种食品样品时,应在进无菌室前用肥皂洗手,然后用75%酒精棉球将手擦干净。 4. 进行接种所用的吸管,平皿及培养基等必须经消毒灭菌,打开包装未使用完的器皿,不能放置后再使用,金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5. 从包装中取出吸管时,吸管尖部不能触及外露部位,使用吸管接种于试管或平皿时,吸管尖不得触及试管或平皿边。 6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作,接种细菌或样品时,吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝,必要时还要烧到环和针与杆的连接处,接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min,再经火焰烧灼。 8. 吸管吸取菌液或样品时,应用相应的橡皮头吸取,不得直接用口吸。 二、无菌间使用要求 1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃,并要密封,不得随意打开,并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门,另设有0.5-0.7m2的小窗,以备进入无菌间后传递物品。 2. 无菌间内应保持清洁,工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒,擦拭工作台面,不得存放与实验无关的物品。 3. 无菌间使用前后应将门关紧,打开紫外灯,如采用室内悬吊紫外灯消毒时,需30W紫外灯,距离在1.0m处,照射时间不少于30min,使用紫外灯,应注意不得直接在紫外线下操作,以免引起损伤,灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭,除去上面灰尘和油垢,以减少紫外线穿透的影响。 4. 处理和接种食品标本时,进入无菌间操作,不得随意出入,如需要传递物品,可通过小窗传递。 5. 在无菌间内如需要安装空调时,则应有过滤装置。 三、消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等,必须经灭菌后方能使用。 1.灭菌前准备 (1)所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干,玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密,如用金属筒应将上面通气孔打开。 (2)装培养基的三角瓶塞,用纸包好,试管盖好盖,注射器须将管芯抽出,用纱布包好。

电生理实验常见问题解答

电生理实验常见问题解答(1)『转载』 2010-10-09 14:53 请问目前分析细胞外放电的信号处理软件较好的是什么? 价格昂贵的有国外的PCLAMP系列软件和POWERLAB;价格便宜的较好用的有国产的PCLAB 和MEDLAB。如果感兴趣输入GOOGLE,一搜即知。axon guide是很经典的哦,大家可以到公司主页上下载本书主要针对PATCH,是AXON公司的产品配套广告说明书,但是也包含了不少基本电生理知识,集中阅读一下第1、2章节有帮助。可以下载看看,网站如下,https://www.docsj.com/doc/a84950242.html, 请教:干扰的大小如何检测? 检测干扰大小和你记录电信号一样,可以从相关软件读出来,也可以从示波器上读出。建议丁香妹妹找一些基础电生理书籍熟悉一下,不要着急,先入门为重。 请问微电极的电阻如何测量?怎样才能保证电极尖端已被电极内液完全充满? 给予电极一个电流/电压,可以从示波器上读出来,也可以从相应的放大器上显示出来。建议购买带有芯的玻璃电极,这样可以简单地从尾部灌入内液后,轻轻用手指敲打电极即可;如果是无芯电极,就需要先用注射器将电极尖端充满,而后在从尾部灌入内液。 问题是有时尖端太细,从尾部注入内液后,很难保证尖端全被充满. 注射器接皮管——皮管接电极尾部——电极尖端深入电极液中——抽吸注射器——电极尖端充满液体——再从电极尾部管电极内液——解决问题了。 我在记录细胞外放电时,干扰太大,诸如50hz的交流电干扰,请问如何尽可能地排除这些干扰信号? 交流电干扰应该不难处理,只需要中间接一个直流电转换器即可。 我想用Patch做平滑肌的BK通道,请教Pleace前辈,在酶解法分离细胞时,使用DMEM会因为含钙高而影响结果吗?文献多数都用无钙液,如果使用前我用PBS洗三次是否可以? 你最好用无钙液,即使后来用PBS洗三次也不可以。因为之前的无钙液操作不仅可以保护细胞,而且可以使之处于低兴奋状态。 屏蔽和接地是电生理基本要求。如果你记录的信号足够大的话,可以不用屏蔽。但生物电信号一般都很弱,这就是为什么要屏蔽和接地。也是为什么很多时候晚上做实验干涉小——因为晚上用大功率电器的人相对少些,空间的电磁干扰相对小些,地线相对也干净一些。屏蔽笼即法拉第笼,一般是一层铜网,一层铁网。铜网屏蔽电,铁网屏蔽磁。屏蔽笼和系统的信号共地。关于地线,根据你的系统所记录的信号的强弱要求可以不同,信号越弱,要求越高。一般细胞外记录甚至更粗的记录要求相对不高。要是做到单通道水平,就不是凑合能解决问题的。就是这样,电生理的地线也应该和公共地线区分开来。一般比较正规的电生理实验室的地线应该单独埋设。地线埋设的要求其实很简单,尽量减小对地电阻。但实施起来就有很多方法了。我听说的一个方法是:从实验室下到地的主线用大概10cm 的铜缆。地上要挖个深1.5—1.8m、1.5*1.5m宽的坑。铜缆用铜铆钉(尽量减少材质造成的电阻差异)焊在一块1.5m*1.5m*4cm的铜板上。铜板放入坑中。板上埋2.5kg食盐、2.5kg 木炭。再将坑添上。主线到各个信号地分支点用铜棒焊接。铜棒上钻孔接地线。仪器电源不直接接到公共电源上,而是通过稳压隔离电源后接到另设的电源上。仪器电源的地线和系统的信号地分开接地。信号地接到单独埋设的地线上。仪器电源的地线也就是三相插头的顶端那个插头很多时候不接。 震动太大:可能原因有防震台防震效果不好,充气不足,或是实验室附近有什么强振动源;记录槽设计是否合理;液体流速是否太快? 记录系统是否稳定:微电极放大器电容补偿是否调好,是否需要校正?记录系统干扰和噪

微生物学实验试题集

微生物学实验试题 一、选择题 1.革兰氏染色的关键操作步骤是: A.结晶紫染色 B.碘液固定 C.酒精脱色 D.复染 答:(C) 2.放线菌印片染色的关键操作是: A.印片时不能移动 B.染色 C.染色后不能吸干 D.A和C 答:(D) 3.高氏培养基用来培养: A.细菌 B.真菌 C.放线菌 答:(C) 111821.肉汤培养基用来培养: A.酵母菌 B.霉菌 C.细菌 答:(C) 111822.无氮培养基用来培养: A.自生固氮菌。 B.硅酸盐细菌 C.根瘤菌 D.A、B均可培养 E.A、B、C均可培养 答:(D) 111823.在使用显微镜油镜时,为了提高分辨力,通常在镜头和盖玻片之间滴加: A.二甲苯 B.水 C.香柏油 答:(C) 111824.常用的消毒酒精浓度为: A.75% B.50% C.90% 答:(A) 111825.用甲醛进行空气熏蒸消毒的用量是: A.20ml/M3 B.6ml/M3

111826.实验室培养基高压蒸汽灭菌的工艺条件是: A.121℃/30min B.115℃/30min C.130℃/30min 答:(A) 111827.巴氏消毒的工艺条件是: A.62-63℃/30min B.71-72℃/15min C.A.B.均可 答:(C) 111828.半固体培养基的主要用途是: A.检查细菌的运动性 B.检查细菌的好氧性 C.A.B.两项 答:(C) 111829.半固体培养基的琼脂加入量通常是: A.1% B.0.5% C.0.1% 答:(B)。 111830.使用手提式灭菌锅灭菌的关键操作是: A.排冷气彻底 B.保温时间适当 C.灭菌完后排气不能太快 D.A-C 答:(A)。 111831.目镜头上的“K”字母表示: A.广视野目镜 B.惠更斯目镜 C.补偿目镜 答:() 111832.目镜头上的“P”字母表示: A.平场目镜 B.广视野目镜 C.平场补偿目镜 答:() 111833.物镜头上的“PL”字母表示: A.正低相差物镜 B.正高相差物镜 C.负高相差物镜 答:() 111834.物镜头上的“UVFL”字母表示。 A.无荧光物镜 B.照相物镜

组播VLAN配置实验

基于子VLAN的组播VLAN配置举例 1. 组网需求 Router A通过端口GigabitEthernet1/0/1 连接组播源(Source),通过端口GigabitEthernet1/0/2 连接Switch A;Router A上运行IGMPv2,Switch A~Switch C上都运行版本2 的IGMP Snooping,并由Router A充当IGMP查询器。组播源向组播组224.1.1.1 发送组播数据,Host A~Host D 都是该组播组的接收者(Receiver),分别属于VLAN 2~VLAN 5。通过在Switch A 上配置基于子VLAN 的组播VLAN,使Router A 通过组播VLAN 向Switch A下分属不同用户VLAN 的主机分发组播数据。 2. 组网图 3. 配置步骤 (1) 配置IP 地址 请按照图配置各接口的IP地址和子网掩码,具体配置过程略。 (2) 配置Router A

# 使能IP 组播路由,在各接口上使能PIM-DM,并在主机侧端口GigabitEthernet1/0/2 上使能IGMP。 system-view [RouterA] multicast routing-enable [RouterA] interface gigabitethernet 1/0/1 [RouterA-GigabitEthernet1/0/1] pim dm 1-7 [RouterA-GigabitEthernet1/0/1] quit [RouterA] interface gigabitethernet 1/0/2 [RouterA-GigabitEthernet1/0/2] pim dm [RouterA-GigabitEthernet1/0/2] igmp enable (3) 配置Switch A # 全局使能IGMP Snooping。 system-view [SwitchA] igmp-snooping [SwitchA-igmp-snooping] quit # 创建VLAN 2~VLAN 5。 [SwitchA] vlan 2 to 5 # 配置端口GigabitEthernet1/0/2 为Trunk 端口,并允许VLAN 2 和VLAN 3 通过。[SwitchA] interface gigabitethernet 1/0/2 [SwitchA-GigabitEthernet1/0/2] port link-type trunk [SwitchA-GigabitEthernet1/0/2] port trunk permit vlan 2 3 [SwitchA-GigabitEthernet1/0/2] quit # 配置端口GigabitEthernet1/0/3 为Trunk 端口,并允许VLAN 4 和VLAN 5 通过。[SwitchA] interface gigabitethernet 1/0/3 [SwitchA-GigabitEthernet1/0/3] port link-type trunk [SwitchA-GigabitEthernet1/0/3] port trunk permit vlan 4 5 [SwitchA-GigabitEthernet1/0/3] quit # 创建VLAN 10,把端口GigabitEthernet1/0/1 添加到该VLAN 中,并在该VLAN 内使能IGMP Snooping。 [SwitchA] vlan 10 [SwitchA-vlan10] port gigabitethernet 1/0/1 [SwitchA-vlan10] igmp-snooping enable [SwitchA-vlan10] quit # 配置VLAN 10 为组播VLAN,并把VLAN 2~VLAN 5 都配置为该组播VLAN 的子VLAN。[SwitchA] multicast-vlan 10 [SwitchA-mvlan-10] subvlan 2 to 5 [SwitchA-mvlan-10] quit

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