植物生理学中各项生理指标的测定方法

一.实验内容

实验1 MDA(丙二醛)含量测定所需试剂：

10%三氯乙酸（TCA）（纯） 0.25%硫代巴妥酸 (纯)

实验2：可溶性蛋白含量测定所需试剂：

考马斯亮蓝G-250 95%乙醇 85%磷酸

实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：

dl-甲硫氨酸（Met） NBT EDTA-Na2 核黄素

实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：

PBS（PH=7.0） 30% H2O2

实验五：Apx(抗坏血酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：

ASA（分子量167.12） (乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O

实验6： ASA(维生素C)含量测定

偏磷酸 95%乙醇磷酸 4% 2,2-二联吡啶 FeCl3（或FeCl3·6H2O）

实验7：GSH(谷胱甘肽, 媚力肽GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽化合物)含量测定所需试剂：

NaH2PO4·2H2O DTNB（二硫代硝基苯甲酸） PBS (PH6.8)

实验8：脯氨酸测定所需试剂：

磺基水杨酸甲苯茚三酮冰乙酸 85%磷酸

试验9：叶绿素含量测定。

80%丙酮

试验9：GR活性测定

试验10：过氧化氢含量测定。

三氯乙酸

试验11：超氧阴离子含量测定

二．酶液和母液提取

1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚乙烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/L EDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后用缓冲液定容）

2. ASA . GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸

1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）：

1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶片加入预冷5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）

↓

4℃冷冻15000g离心20分钟

↓

上清液即为酶液（5℃下保存一两天内备用，中短期用-20℃保存）

2．ASA . GSH母液提取：

0.1g叶片加入3ml预冷5%偏磷酸溶液

↓

4℃冷冻14000g离心10分钟

↓

上清液即为母液（5℃下保存备用）

（偏磷酸可显著沉淀蛋白质和保护ASA）

酶液提取所需试剂：

PVP（聚乙烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于100ml水），1000ml需称取10g，此处用PBS

EDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于1000ml蒸馏水)，此处用PBS

PBS（缓冲液）配制方法：① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O

取① 71.64g，蒸馏水定容至1L，取② 31.21g定容至1L，放置4℃冰箱备用

PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度0.2mol/L)

需要0.05mol/L→将上述溶液烯释至400ml （0.2mol/L*0.1=0.05mol/L*V）

母液提取所需试剂：

5%偏磷酸：称5g纯偏磷酸，定容至100 ml蒸馏水（需加热溶解，温度在50-60℃）偏磷酸有剧毒

（偏磷酸难溶解，先得用研钵提前研碎，后用磁力搅拌器溶解一到两天后再定容）

（现所用为38%HPO3，所以需称65.7895g，定容至500ml）

三．实验步骤

实验1：MDA含量测定

1.1所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯）称10g定容至100ml

0.25%硫代巴妥酸 (纯) 称0.25g用10%TCA定容至100ml

（配制时，可一次完成，先配TCA，不要定容，再加入硫代巴比妥酸，然后定容，若难溶解，可以在磁力搅拌器上微热）

1.2步骤：取0.3g叶片，加4ml磷酸缓冲液研磨，

加入 4ml 0.25%的硫代巴比妥酸（溶于10%的三氯乙酸）溶液

↓摇匀

95℃加热15分钟

↓快速冷却

3000g离心15分钟

↓

取上清测定 OD532，OD600，OD450值

↓

按公式求 MDA浓度=6.45×（OD532-OD600）-0.56OD450 (μmol/L)

可溶性糖浓度=11.71×OD450 (mmol/L)

最后计算 MDA含量（μmol/g FW）= [4×（MDA浓度x）×10-3/0.1]

同时，可测得可溶性糖含量（m mol/g FW）= 4×（可溶性糖浓度χ）×10-3/0.1

（用多波长测定，在测定之前一定要矫正基线，公式中的参数可以直接在分光光度计上输入）

注意：以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空白调零

MDA含量测定的改进

1.可以用做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量，用量可以定为1.0、1.5或

2.0（较好）ml。

2.硫代巴妥酸溶液改为0.5%的硫代巴比妥酸（溶于20%的三氯乙酸）溶液。

实验2：可溶性蛋白含量

（参照Bradford方法测定），以BSA作为标准蛋白（牛血清蛋白）

2.1所需试剂及配制：牛血清蛋白（BSA），考马斯亮蓝G-250 ，95%乙醇，85%磷酸

考马斯亮蓝G-250蛋白染色剂的配制：

称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85%的磷酸，最后蒸馏水定容到1L，混匀，放置过夜，过滤后贮放在棕色瓶中，常温下可放置一个月。

●标准曲线制作：

①标准溶液配制：称取10mg牛血清蛋白标准液，溶于蒸馏水，定容至100ml，制成100μg/ml的标准液，4℃下保存备用。（必须是牛血清蛋白向水中溶解，不能颠倒）

②取6支具塞试管（10ml），按下表配制含0-100μg/ml的牛血清蛋白液各1ml（★调零管）

★ 1 2 3 4 5 6

蛋白标准液（ml）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0

蛋白含量（μg）0 20 40 60 80 100

③ 各试管加入5ml G-250染色剂，翻转混合，放置2分钟，595nm 比色，绘制过原点标准曲线（方程式）。（相关系数要两个9以上）

2.2步骤：

①标准曲线（参考邹琦）（595nm 比色）

注意：制作通过原点的标准曲线，以含0μg 蛋白质液调零

②取0.1g 样品，加5ml 蒸馏水提取，5000g 离心10分钟，取上清1ml 测定

③1ml 样液+5ml G-250液盖塞翻转混合数次，最后595nm 比色，直接从标准曲线读含量。

（此方法反应十分迅速，2分钟即达到平衡，其结合物在室温下1小时内保持稳定）

实验3：SOD 酶活性

3.1步骤：

1. 取50μl 酶液

①加入2ml 39m mol/L 甲硫氨酸（Met ）

②2ml 0.225m mol/L NBT , （氮蓝四唑）

③1ml 0.6m mol/L EDTA-Na 2（① ② ③可以配制在一个试剂瓶里）

④1ml 0.012m mol/L 核黄素，摇匀。（现配现用）

2．（人工培养箱内）4000L χ日光灯下放置30分钟后，温度控制在30℃ ，于暗处终止反应。

（用大烧杯套着小烧杯，将试管放在同心圆内，每隔5min 转过90度，转四次。对照（不加酶液）每次至少对称地放3支，调零的不照光和不加酶液）

3．560nm 处测吸光值，酶活性以抑制NBT 光反应50%为一个酶活单位表示。

（实验中可将除酶液和核黄素外其它试剂按比例混合好后，一次加入5ml ，然后依次加入核黄素和酶液，以不加酶液的照光管为对照。）

3.2所需试剂： dl-甲硫氨酸（Met ） 39mmol/L 1.1638g/200ml NBT 0.225mmol/L (0.01840克)/ 100ml 0.0368g/200ml EDTA-Na 2 0.6mmol/L 0.0223g/100ml

核黄素 0.012mmol/L 0.0045g/L 或 0.0045g/100ml 用时稀释10倍 各试剂溶液均在用前配置，配置好后均应避光保存，尤其是核黄素，必须随用随配，避光保存。 试验进行时一次性加5ml 的反应混合液配置方法：

Met + NBT + EDTA-Na 2

200mll+200ml+100ml

SOD 酶测定时，酶液量50μl 偏少，改为100μl 为佳，另外反应时间30分钟过长，改为20分钟适合。 SOD 活性（酶单位u /gFW ）=(A0-A1)*V / A0*0.5*FW*a

A0---对照照光管光吸收值； A1---样品管光吸收值。

V---样液总体积（ml ）5ml FW---鲜重（g ） 1g a---测定用样品的量（ml ） 0.1ml

实验4：CAT 活性（过氧化氢酶）

4.1所需试剂：

①PBS （PH=7.0）50mmol/L （61份50mmol/l Na 2HPO 4, 39份50mmol/l NaH 2PO 4）

②15mmol/L H 2O 2(以30% H 2O 2配 )

（取85.2μL 30% H 2O 2，以50mmol/L PBS((PH 7.0)定容至100ml ）

4.2步骤：

1. 3ml 50mmol/L PBS (PH7.0)加入50μl 酶液

（加比色杯的盖子摇2-3下，让酶液与缓冲液充分分散）

再加入5μl 15 mmol/L H 2O 2 摇匀（加比色杯的盖子摇2-3下，让酶液与缓冲液充分分散）。

2．240nm 处作时间扫描（每0.5分钟测1次，共测3分钟）

3．CAT 活性以每分钟消耗1μmol 的H 2O 2为一个酶活单位。

活性计算改动：（以每分钟OD 值减少0.01为一个酶活单位u ）（2005和2006年均是按OD 值减少0.01算的）（以每分钟OD 值减少0.1为一个酶活单位u ）

均以50mmol/L PBS 配置 PH=7.8

注意：以PBS作空白调零50mmol/L

实验5：APX活性(抗坏血酸过氧化物酶)（即ASA—POD活性）5.1所需试剂：

ASA（分子量167.12） 0.3m mol=0.052836 (g)

(乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 (以PBS配成0.1m mol/L=0.0372 (g)/L)

50m mol/L PBS (pH7.0)

9m mol/L H2O2 (以30%H2O2配制)

(51μl 30%H

2O

2

定容至100ml)

计算为：K1=2.8，K2=3，K3=-1，K4=100

可得到总取样（5ml酶液或1g样）的最终活性。酶活性单位为μmol/g (鲜重)·min 以后APX活性测定可参考沈文飚：抗坏血酸过氧化物酶活性测定的探讨

3 ml反应液中含50 mmol/L PBS, pH7. 0, 0. 1 mmol/L EDTA（或EDTA—Na2），0. 1 mmol/L H2O2，0. 5(或0.3) mmol/L AsA，最后加入适量酶液（20、50、100ul均可）启动反应，连续记录测定室温下290 nm吸收值的变化。以不加H2O2作为对照，H2O2本身对AsA的氧化作用在测定时间内由于吸收值变化太小可忽略不计。室温下每分钟氧化1 umolAsA的酶量作为一个酶活性单位(U)(吸光系数为2. 8 mmol/L cm)

5.2步骤：

1.配反应液（50m mol/L PBS(pH7.0)，内含0.1m mol/L EDTA—Na2，含0.3m mol/L ASA）

2.样品池加入3ml反应液，加入50μl酶液，最后加入5μl 9mmol/L H2O2

(盖上比色杯的盖子摇匀，2—3次)

在290nm处作时间扫描，每10秒测一次，共测30秒。（注意：在测定中消光值应该是不断减小的）

3. 根据OD290值变化，计算单位时间内AsA消耗量，（ASA氧化消耗量按消光系数2.8mmol/L·cm。），酶活性以单位时间每消耗1μmol的ASA为一个酶活单位，最后计算样品的APX活性（单位为：U/g (鲜重)·min）。（活性计算改动）根据OD290值变化，计算单位时间内AsA减少量（ASA氧化量按消光系2.8mmol/L·cm），并计算样品APX终活性。

酶活性单位为μmol/g (鲜重)·min

实验6 ASA含量测定

6.1步骤：

1.取样品母液0.2ml, 1.4ml，75mmol/l NaH2PO4 溶液（pH值7.4） (

2.34g NaH2PO4·2H2O 定容至200ml，用NaOH将pH调至7.4)混合；（75mmol/l NaH2PO4 溶液亦可用150mmol/l NaH2PO4 溶液稀释1倍得到）2.依次加入

（1）10%偏磷酸（26.3158g 38%偏磷酸定容至100ml）0.4ml;

（2）44%磷酸（26ml 85%磷酸 +41ml 蒸馏水）0.4ml;

( 3) 4% 2,2’----二联吡啶（称取4.0 g 2,2-二联吡啶用70%酒精定容至100ml ）0.4ml;

70%酒精配制（95%乙醇70份重量+蒸馏水25份重量）

3% FeCl3 0.2ml( 称取5.0g FeCl3·6H2O 定容至100ml)，摇匀，于37℃保温1.0h（5）测525nm波长下的光吸收值

4.以标准曲线方程计算ASA含量

6.2标准曲线的制作：

（1）称取10mg ASA分析纯，以5%偏磷酸定容至100ml,成100微克/毫升的标准液；

方程。

实验7：GSH含量测定

7.1步骤：

1.取样品母液0.2ml，加入150 mmol/L NaH2PO4溶液（pH7.7）（11.70g NaH2PO4·2H2O定容至500ml 用氢氧化钠调pH至7.7）

2.6ml

2.混匀再加入0.2ml DTNB溶液（=硫代硝基苯甲酸DTNB75.3mg溶于30ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液 pH6.8）摇匀。[实际配置时，称75.3×2=150.6mg ，即0.1506g DTNB溶于60ml PBS中]

3. 在30℃保温5分钟，测定412nm波长下的光吸收值。

【有些文献（如龚吉蕊、於丙军）方法同样用DTNB显色，都是在常温下显色30分钟因此可将反应时间适当延长至10分钟】

7.2根据标准曲线（GSH）方程，计算GSH含量。

标准曲线制作：

1.称取100mg GSH分析纯，以5%偏磷酸定容至100ml，成1mg/ml即1000ug/ml的标准液。

所需试剂：

NaH2PO4 （150m mol/L）→称23.41g NaH2PO4·2H2O定容至1L（或称5.85定容至250ml）

DTNB（二硫代硝基苯甲酸）0.1mol/L PBS (PH6.8)（参照邹琦的书）

实验8：脯氨酸测定

8.1步骤：

1.取0.5g叶片，用5ml 3%磺基水扬酸溶液提取，匀浆液在沸水浴浸提10分钟，冷却后，以3000g离心10分钟，上清液待测。

2.取2ml待测液，加入2ml蒸馏水，再加入2ml冰乙酸和4ml 2.5%茚三酮溶液，置沸水溶显色60min，冷却后，加入4ml甲苯充分振荡提取红色物后，静置后，取甲苯相（将移液枪的量程调至

3.0ml 吸取甲苯相，注意不要将枪伸到水相中。）测定520nm，波长处的吸收值，依据标准曲线计算含量。

8.2标准曲线制作：

1.标准液配制；准确称取25mg脯氨酸，用蒸馏水溶解后定容至250ml，其浓度为100μg/ml，再取10 ml 此液，蒸馏水定容至100ml，即为10μg·ml-1的脯氨酸标准液。（脯氨酸标准液最好现用现配，放在冰箱也易变性）

2.取7支20ml具塞试管按下表加入各试剂

1 2 3 4 5 6 7

标准脯氨酸（ml）0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0

H2O（ml） 2 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0

冰乙酸（ml） 2 2 2 2 2 2 2

显色液（ml） 4 4 4 4 4 4 4

脯含量（ug）0 2 4 8 12 16 20

3%磺基水杨酸（ml） 2 2 2 2 2 2 2

3.置沸水浴中显色60min。冷却后（以后步骤同前）依据测定值绘制造原点标准曲线（以脯含量为0的试管作空白调零）为方程。

8.3所需试剂：

★3%磺基水杨酸水溶液（称3g磺基水杨酸，蒸馏水定容至100ml）

★甲苯★85%磷酸★冰乙酸

★2.5%酸性茚三酮显色液称取2.5g茚三酮，加入60ml冰乙酸和40ml 6.0mol/L磷酸。贮于棕色瓶，4℃下2~3日有效。

实际配置时，需称10g，配制400ml（其中冰乙酸240ml，磷酸160ml 6mol/L磷酸液（40.8ml 85%磷酸定容至100ml）实际配制时81.6ml定容至200ml（68ml 85%磷酸定容至1升，为1mol/L的磷酸液）

实验9过氧化氢（H2O2）含量测定方法：

参考以下文献：张峰,杨颖丽,何文亮等：盐胁迫过程中抗坏血酸对植物的保护功能。西北植物学报2004 龚吉蕊等：干旱胁迫下几种荒漠植物植物抗氧化能力的比较研究。西北植物学报2004

9.1步骤：

取0.5g叶片,加入预冷3%的三氯乙酸(TCA)研磨,12000g 离心20min,取1mL上清加入等体积10mmol/l 磷酸缓冲液,pH7.0,和2mL1mol/L 的KI,摇匀,390nm 测吸光值.

结果以ng·g- 1 ; Fw G表示L 用溶3% 的三氯乙酸的H2O2,50～200 ng/mL,作标准曲线

实验10超氧阴离子测定方法：

最新植物生理指标测定方法

实验一植物叶绿素含量的测定（分光光度法） (张宪政，1992) 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用效率的大小，比值高则大，则反之。 二、材料、仪器设备及试剂 试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮） 三、实验步骤 称取剪碎的新鲜样品0.2～0.3g，加乙醇10ml，提取直至无绿色为止。把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm和645nm下测定吸光度。四、实验结果按计算 丙酮法（Arnon法）【可以用于丙酮乙醇混合法和80%丙酮提取法的计算】 叶绿素a的含量（mg/g）=（12.71?OD663 – 2.59?OD645）V/1000*W 叶绿素b的含量（mg/g）=(22.88OD645 – 4.67OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(8.04?OD663 +20.29?OD645) V/1000*W 按Inskeep公式 叶绿素a的含量（mg/g）=（12.63?OD663 – 2.52?OD645）V/1000*W 叶绿素b的含量（mg/g）=(20.47OD645 – 4.73OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(7.90?OD663 + 17.95?OD645) V/1000*W

植物生理学简答题

简答题 1、简述氧化酶的生物学特性与适应性。 植物体内含有多种呼吸氧化酶，这些酶各有其生物学特性(如对温度的要求和对氧气的反应，所以就能使植物体在一定范围内适应各种外界条件。 以对温度的要求来说，黄酶对温度变化反应不敏感，温度降低时黄酶活性降低不多，故在低温下生长的植物及其器官以这种酶为主，而细胞色素氧化酶对温度变化的反应最敏感。在果实成熟过程中酶系统的更替正好反映了酶系统对温度的适应。例如，柑橘的果实有细胞色素氧化酶、多酚氧化酶和黄酶，在果实末成熟时，气温尚高，呼吸氧化是以细胞色素氧化酶为主；到果实成熟时，气温渐低，则以黄酶为主．这就保证了成熟后期呼吸活动的水平，同时也反映了植物对低温的适应。 以对氧浓度的要求来说，细胞色素氧化酶对氧的亲和力最强，所以在低氧浓度的情况下，仍能发挥良好的作用；而酚氧化酶和黄酶对氧的亲和力弱，只有在较高氧浓度下才能顺利地发挥作用。苹果果肉中酶的分布也正好反映了酶对氧供应的适应，内层以细胞色素氧化酶为主，表层以黄酶和酚氧化酶为主。水稻幼苗之所以能够适应淹水低氧条件，是因为在低氧时细胞色素氧化酶活性加强而黄酶活性降低之故。 2、长期进行无氧呼吸会导致植株死亡的原因是什么？ 长时间的无氧呼吸会使植物受伤死亡的原因：第一，无氧呼吸产生酒精，酒精使细胞质的蛋白质变性；第二，因为无氧呼吸利用每摩尔葡萄糖产生的能量很少，相当于有氧呼吸的百分之几（约8%），植物要维持正常的生理需要，就要消耗更多的有机物，这样，植物体内养料耗损过多；第三，没有丙酮酸氧化过程，许多由这个过程的中间产物形成的物质就无法继续合成。作物受涝死亡，主要原因就在于无氧呼吸时间过久。 3.举出三种测定光合速率的方法，并简述其原理及优缺点。 （1）改良半叶法，选择生长健壮、对称性较好的叶片，在其一半打取小圆片若干，烘干称重，并用三氯醋酸对叶柄进行化学环割，以阻止光合产物外运，到下午用同样方法对另一半叶片的相对称部位取相同数目的小圆片，烘干称重，两者之差，即为这段时间内这些小圆片累积的有机物质量。此法简便易行，不需贵重设备，但精确性较差。 （2）红外线CO2分析法原理是：气体CO2对红外线有吸收作用，不同浓度的CO2对红外线的吸收强度不同，所以当红外线透过一定厚度的含CO2的气层之后，其能量会发生损耗，能量损耗的多少与CO2的浓度紧密相关。红外线透过气体CO2后的能量变化，通过电容器吸收

植物生理生化测定

2.1.8转基因植株在盐胁迫下的超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 将转基因植株与非转基因对照植株继代于含有0.5% NaCl的MS固体培养上进行胁迫培养，培养条件为27±1℃，每天13 h、3000 lux光照。胁迫培养4 w后，取其叶片测定其SOD 活性，每个样品设3次重复，求其平均数，并进行多重比较。 2.1.8.1主要试剂及配方 （1）0.1 mol/l pH 7.8磷酸钠（Na2HPO4-NaH2PO4）缓冲液 A液（0.1 mol/l Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4·12H2O 7.163 g，用少量蒸馏水溶解后定容至200 ml，4℃冰箱中保存备用； B液（0.1 mol/l NaH2PO4溶液）：称取NaH2PO4·2H2O 0.780 g，用少量蒸馏水溶解后定容至50 ml，4℃冰箱中保存备用； 取上述A液183 ml与B液17ml充分混匀后即为0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液，4℃冰箱中保存备用。 （2）0.026 mol/l甲硫氨酸（Met）磷酸钠缓冲液 称取甲硫氨酸（C5H11NO2S）0.388 g，用少量0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液溶解后，再用相同磷酸钠缓冲液定容至100 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用1～2 d。 （3）7.5 × 10-4 mol/l NBT溶液 称取NBT（C40H30Cl2N10O6）0.153 g，用少量蒸馏水溶解后，定容至250 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用2～3 d。 （4）含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液 A液：称取EDTA 0.003 g，用少量蒸馏水溶解； B液：称取核黄素0.075 g，用少量蒸馏水溶解； C液：合并A液和B液，定容至100 ml，此溶液即为含0.1 mmol/l EDTA的2 mmol/l 核黄素溶液，避光保存（可用黑纸将装有该液的棕色瓶包好），4℃冰箱中可保存8～10 d，当测定SOD酶活时，将C液稀释100倍，即为含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液。 （5）含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液 取0.1 mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液50 ml，加入2 g PVP（聚乙烯吡咯烷酮），充分溶解后移入100 ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，充分混匀，4℃冰箱中保存备用。 2.1.8.2提取及测定方法 （1）称取1.0 g样品叶片于预冷的研钵中，加入4 ml预冷的提取介质（含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液），冰浴研磨匀浆，转入10 ml离心管，并用提取介质定容至

测定各生理指标的试验方法

测定各生理指标的试验方法 1.4.1 电导率的测量(浸泡法)[5] 取大小相当的植物叶片（尽量保证叶片的完整性，少含茎节），用自来水洗净后再用蒸馏水冲洗3次，用滤纸吸干表面水分，将叶片剪成适宜长度的长条（避开主脉），快速称取鲜样，每份0.1g,分别置于10ml去离子水的刻度试管中，盖上玻璃塞置于室温下浸泡处理12h,用电导仪测定浸提液电导（R1），然后沸水浴加热30min,冷却至室温后摇匀，再次测定浸提液电导（R2）。根据公式：相对电导率=R1/R2×100% 算出电导率。 1.4.2 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定（氮蓝四唑法）[5] 取各株植物相同部位的叶片（去叶脉）0.5g于预冷的研钵中，加1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使最终体积为5ml。取1.5~2ml于4000r/min 下离心10min，上清液即为SOD粗提取液。取32支试管（30支测定管，2支对照管），分别加入1.5ml0.05mol/l磷酸缓冲液、0.3ml130nmolMet溶液、0.3ml750μmol/l NBT溶液、0.3mol100μmol/l EDTA液、0.3ml20μmol/l核黄素、0.05ml酶液（其中2支对照管以缓冲液代替酶液）、0.25ml蒸馏水，混匀，将一支对照管置于暗处，其他各管于4000lx日光下反应20min（要求各管受光情况一致，温度高时缩短，低时延长）。反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其他各管的吸光度。 计算公式：SOD总活性（U/g)=[(A CK -A E )×V]/(0.5×A CK ×W×Vt) 注：SOD总活性以每克样品鲜质量的酶单位表示（U/g）；A CK 为照光对照管的 吸光度；A E 为样品管的吸光度；V为样品液总体积（ml）；Vt为测定时样品用量（ml）；W为样品鲜质量（g）。 1.4.3 过氧化物酶(POD)活性的测定（愈创木酚法) [5] 酶液提取：取5.0g植物叶片，洗净，剪碎，放入研钵中。加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆。将匀浆液全部转入离心管中，于3000rmp离心10min，上清液转入25ml容量瓶中。沉淀用5ml磷酸缓冲液再提取2次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，低温下保存备用。分别在各试管中加入0.05mol/l磷酸缓冲液 2.9ml,2%H2O21.0ml，0.05mol/l愈创木酚1.0ml和0.1ml酶液来制备酶活性测定

植物生理学简答题问答题

绪论 1．植物生理学的发展大致经历了哪几个阶段？ 2．21世纪植物生理学的发展趋势如何？ 3．近年来，由于生物化学和分子生物学的迅速发展，有人担心植物生理学将被其取代，谈谈你的观点。 参考答案 1．答：植物生理学的发展大致经历了以下三个阶段： 第一阶段：植物生理学的奠基阶段。该阶段是指从植物生理学学尚未形成独立的科学体系之前，到矿质营养学说的建立。 第二阶段：植物生理学诞生与成长阶段。该阶段是从1840年Liebig建立营养学说时起，到19世纪末植物生理学逐渐形成独立体系。 第三阶段：植物生理学的发展阶段。从20世纪初到现在，植物生理学逐渐在植物学科中占中心地位，所有各个植物学的分支都离不开植物生理学。 2．答：．①与其他学科交叉渗透，从研究生物大分子到阐明个体生命活动功能、生产应用，并与环境生态相结合等方面。微观方面，植物生命活动本质方面的研究向分子水平深入并不断综合。在宏观方面，植物生理学与环境科学、生态学等密切结合，由植物个体扩大到群体，即人类地球-生物圈的大范围，大大扩展了植物生理学的研究范畴。 ②对植物信号传递和转导的深入研究，将为揭示植物生命活动本质、调控植物生长发育开辟新的途径。在21世纪，对光信号、植物激素信号、重力信号、电波信号及化学信号等所诱导的信号传递和转导机制的深入研究，将会揭开植物生理学崭新的一页。 ③植物生命活动过程中物质代谢和能量转换的分子机制及其基因表达调控仍将是研究的重点。在新世纪里，对植物生命活动过程中物质代谢和能量代谢转换的深入研究占有特别重要的位置。目前，将光和能量转换机制与生理生态联系起来进行研究正在走向高潮，从而将光和能量转换机制研究与解决人类面临的粮食、能源问题紧密联系起来，以便在生产中发挥更大的指导作用。 第一章植物的水分代谢 问答题 1、土壤里的水从植物的哪部分进入植物，双从哪部分离开植物，其间的通道如何？动力如何？ 2、植物受涝后，叶片为何会萎蔫或变黄？ 3、低温抑制根系吸水的主要原因是什么？ 4、简述植物叶片水势的日变化 5、植物代谢旺盛的部位为什么自由水较多？ 6、简述气孔开闭的主要机理。 7、什么叫质壁分离现象？研究质壁分离有什么意义？ 8、简述蒸腾作用的生理意义。 9、解释“烧苗”现象的原因。 10、在农业生产上对农作物进行合理灌溉的依据有哪些？ 参考答案 1、土壤里的水从植物的哪部分进入植物，双从哪部分离开植物，其间的通道如何？动力如何？ 水分进入植物主要是从根毛——皮层——中柱——根的导管或管胞——茎的导管或管胞——叶的导管或管胞——叶肉细胞——叶细胞间隙——气孔下腔——气孔，然后到大气中去。 在导管、管胞中水分运输的动力是蒸腾拉力和根压，其中蒸腾拉力占主导地位。在活细胞间的水分运输主要靠渗透。 2、植物受涝后，叶片为何会萎蔫或变黄？ 植物受涝后，叶子反而表现出缺水现象，如萎蔫或变黄，是由于土壤中充满着水，短时期内可使细胞呼吸减弱，根压的产生受到影响，因而阻碍吸水；长时间受涝，就会导致根部形成无氧呼吸，产生和累积较多的乙醇，致使根系中毒受害，吸水更少，叶片萎蔫变质，甚至引起植株死亡。 3、低温抑制根系吸水的主要原因是什么？

植物生理生化指标测定

小黑豆相关生理指标测定 1.表型变化：鲜重、株高、主根长和叶面积 鲜重：取处理好的植株，擦干根和叶表面水分，测量整株植物的重量，每个测6个重复。 株高：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度，记录，每个测6个重复。 主根长：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到主根最远点长度，记录，每个测6个重复。 叶面积：取处理好的植株，选择第二节段的叶片，测量叶面积，叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长，测叶片最窄处长度作为叶的宽，叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测6个重复。 2.总蛋白、可溶性糖、丙二醛（MDA）和H2O2含量测定 样品处理：取0.5g样品（叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净），速在液氮中冻存，在遇冷的研钵中加液氮研磨，然后加入1.5ml的Tris-HCl（pH7.4）抽提，将抽提液转移到2ml的EP管中，于4℃，12000rpm离心15min，取上清，保存在-20℃下，上清液可用于总蛋白、丙二醛（MDA）、可溶性糖和H2O2含量测定。 总蛋白测定（Bradford法）：样品反应体系（800ul H2O+200ul Bradford+5ul 样品），空白对照为（800ul H2O+200ul Bradford）。测定后带入标准曲线Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量，X代表OD595)，计算得出蛋白含量。 可溶性糖测定：样品反应体系（1ml蒽酮+180ul ddH2O+20ul样品提取液）；空白对照（1ml蒽酮+180ul ddH2O），测定OD625后带入标准曲线：Y=0.0345X+0.0204(Y代表OD625，X代表可溶性糖含量（ug）) 蒽酮配方：称取100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸+30mlH2O）.注意：浓硫酸加入水中时，一点一点递加，小心溅出受伤。 丙二醛（MDA）测定：在酸性和高温条件下，丙二醛可与硫代巴比妥（TBA）反应生成红棕色的3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮，在532nm处有最大吸收波长，但该反应受可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收，但其最大吸收波长在450nm处。采用双组分分光光度法，可计算出MDA含量。MDA的计算公式为：MDA（umol/L）=6.45OD532-0.56OD450. 反应体系为：400ul 0.6%TBA+350ul H2O+50ul样品，80℃水浴10min后，测OD532和OD450。对照用Tris-HCl. 0.6%TBA配方：称取硫代巴比妥0.6g，溶于少量1M NaOH中，待其完全溶解后用10%TCA（称取10gTCA三氯乙酸，溶于100ml蒸馏水中，待其溶解即可）定容至100ml。 H2O2测定（二甲酚橙法）：样品反应体系（82ul溶液A+820ul溶液B （A:B=1:10）+150ul样品提取液），30℃水浴30min，测OD560。标准曲线为:Y=0.01734X-0.0555(Y代表OD560，X代表H2O2含量)

植物生理生化指标测定(精)

小黑豆相关生理指标测定 1. 表型变化:鲜重、株高、主根长和叶面积 鲜重 :取处理好的植株,擦干根和叶表面水分,测量整株植物的重量,每个测 6个重复。 株高 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度,记录,每个测6个重复。 主根长 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到主根最远点长度,记录,每个测6个重复。 叶面积 :取处理好的植株,选择第二节段的叶片,测量叶面积,叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长, 测叶片最窄处长度作为叶的宽, 叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测 6个重复。 2. 总蛋白、可溶性糖、丙二醛(MDA 和 H2O2含量测定 样品处理:取 0.5g 样品(叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净 ,速在液氮中冻存,在遇冷的研钵中加液氮研磨,然后加入 1.5ml 的 Tris-HCl (pH7.4 抽提, 将抽提液转移到 2ml 的 EP 管中, 于 4℃, 12000rpm 离心 15min , 取上清, 保存在 -20℃下,上清液可用于总蛋白、丙二醛(MDA 、可溶性糖和 H2O2含量测定。 总蛋白测定(Bradford 法 :样品反应体系(800ul H2O+200ul Bradford+5ul样品 , 空白对照为(800ul H2O+200ul Bradford 。测定后带入标准曲线 Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量, X 代表 OD595 ,计算得出蛋白含量。 可溶性糖测定:样品反应体系(1ml 蒽酮 +180ul ddH2O+20ul样品提取液 ; 空白对照 (1ml 蒽酮 +180ul ddH2O , 测定 OD625后带入标准曲线 : Y=0.0345X+0.0204(Y代表 OD625, X 代表可溶性糖含量(ug

植物生理学问答题

《植物生理学》问答题 1、试述植物光呼吸和暗呼吸的区别。 答： 比较项目暗呼吸光呼吸 底物葡萄糖乙醇酸 代谢途径糖酵解、三羧酸循环等途径乙醇酸代谢途径 发生部位胞质溶胶、线粒体叶绿体、过氧化物酶体、线粒体 发生条件光、暗处都可以进行光照下进行 对O2、CO2浓度的反应无反应高O2促进，高CO2抑制 2、光呼吸有什么生理意义 答：（1）光呼吸使叶片在强光、CO2不足的条件下，维持叶片内部一定的CO2水平，避免光合机构在无CO2时被光氧化破坏。 （2）光呼吸过程消耗大量O2，降低了叶绿体周围O2浓度和CO2浓度之间的比值，有利于提高RuBP氧化酶对CO2的亲和力，防止O2对光合碳同化的抑制作用。 综上，可以认为光呼吸是伴随光合作用进行的保护性反应。 3、试述植物细胞吸收溶质的方式和机制。 答：（1）扩散： ①简单扩散：简单扩散是指溶质从高浓度区域跨膜移向临近低浓度区域的过程。不 需要细胞提供能量。 ②易化扩散：又名协助扩散，是指在转运蛋白的协助下溶质顺浓度梯度或电化学梯 度的跨膜转运过程。不需要细胞提供能量。 （2）离子通道：离子通道是指在细胞膜上由通道蛋白构成的孔道，作用是控制离子通过细胞膜。 （3）载体：载体是跨膜转运的内在蛋白，在夸膜区域不形成明显的孔道结构。 ①单向运输载体：单向运输载体能催化分子或离子顺电化学梯度单向跨膜转运。 ②反向运输器：反向运输器与膜外的H+结合时，又与膜内的分子或离子结合，两 者朝相反的方向运输。 ③同向运输器：同向运输器与膜外的H+结合时，又与膜外的分子或离子结合，两 两者朝相同的方向运输。 （4）离子泵：离子泵是膜上的ATP酶，作用是通过活化ATP推动离子逆化学势梯度进行跨膜转运。 （5）胞饮作用：胞饮作用是指细胞通过膜的内陷从外界直接摄取物质进入细胞的过程。 4、试述压力流动学说的基本内容。 答：1930年明希提出了用于解释韧皮部光合同化物运输机制的“压力流动学说”，其基本观点是： （1）光合同化物在筛管内随液流流动，液流的流动是由输导系统两端的膨压差引起的。 （2）膨压差的形成机制： ①源端：光合同化物进入源端筛管分子→源端筛管内水势降低→源端筛管分 子从临近的木质部吸收水分→源端筛管内膨压增加。

植物生理指标检测方法

植物组织中可溶性糖含量的测定 在作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖 一、原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。 二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 任何植物鲜样或干样。 （二）试剂 1. 80 ％乙醇。 2. 葡萄糖标准溶液（100 μg/mL ）：准确称取100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）。 3 ．蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL 中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周。 （三）仪器设备 分光光度计，分析天平，离心管，离心机，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管（ 5 、 1 、0.5 mL ），剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸。 三、实验步骤 1. 样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ～ 1.0 g （或干样粉末 5 ～100 mg ），放入大试管中，加入15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min ，取出冷却，过滤入100 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2. 标准曲线制作取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按表 24-1 加入各试剂。 表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量 将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10 min ，取出冷却，在620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（ μg ）为横坐标绘制标准曲线。 3 ．样品测定取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ，同以上操作显色测定光密度。重复 3 次。

各生理指标的测定方法

各生理指标的测定方法 一、脯氨酸含量的测定 1.茚三酮法 1.1原理 在正常环境条件下，植物体内游离脯氨酸含量较低，但在逆境（干旱、低温、高温、盐渍等）及植物衰老时，植物体内游离脯氨酸含量可增加10-100倍，并且游离脯氨酸积累量与逆境程度、植物的抗逆性有关。 用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。 1.2步骤 试剂：（1）25%茚三酮：茚三酮------------0.625g 冰乙酸------------15ml 6mol/L磷酸--------10ml 70°C水浴助溶； （2）6mol/L磷酸：85%磷酸稀释至原体积的2.3倍； （3）3%磺基水杨酸：磺基水杨酸------3g 加蒸馏水至------100ml 实验步骤： （1）称取0.1g样品放入研钵，加5ml 3%磺基水杨酸研磨成匀浆，100°C沸水浴15min； （2）冰上冷却，4000rpm离心10min； （3）提取液2ml+冰醋酸2ml+25%茚三酮2ml混合均匀，100°C沸水浴30min，冰上冷却； （4）加4ml甲苯混合均匀，震荡30s，静置30min； （5）以甲苯为空白对照，再520nm下测定吸光值。 1.3计算方法 脯氨酸含量（μg/gFW）＝ X * 提取液总量（ml）/ 样品鲜重（g）*测定时提取液用量（ml）*10^6 公式中：X-----从标准曲线中查得的脯氨酸含量（μg） 提取液总量---------------------------5ml 测定时提取液用量---------------------2ml 问题及质疑： 1.酸性体系下，脯氨酸与茚三酮加热反应后的最终产物为红色，再实验过程中，仅有少数时候能发现红色产物。原因有待确定。 2.经查看文献资料，反应步骤已经是优化的，没有问题。甲苯萃取脯氨酸与茚三酮的反应产物，消除了多余未反应的茚三酮，磺基水杨酸，提取液中其他杂质（如色素）以及PH变化

植物生理学试题及答案完整

植物生理学试题及答案1 一、名词解释（每题2分，20分） 1. 渗透势：由于溶质作用使细胞水势降低的值。 2 呼吸商：植物在一定时间放出的CO2与吸收O2的比值。 3 荧光现象：叶绿素吸收的光能从第一单线态以红光的形式散失，回到基态的现象。 4 光补偿点：光饱和点以下，使光合作用吸收的CO2与呼吸作用放出的CO2相等的光强。 5 代库：是能够消耗或贮藏同化物的组织、器官或部位。 6 生长调节剂：人工合成的，与激素功能类似，可调节植物生长发育的活性物质。 7 生长：由于细胞分裂和扩大引起的植物体积和重量的不可逆增加。 8 光周期现象：植物通过感受昼夜长短的变化而控制开花的现象。 9 逆境：对植物生长发育有利的各种环境因素的总称。 10自由水：在植物体不被吸附，可以自由移动的水。 二、填空（每空0.5分，20分） 1、缺水时，根冠比（上升）；N肥施用过多，根冠比（下降）；温度降低，根冠比（上升）。 2、肉质果实成熟时，甜味增加是因为（淀粉）水解为（糖）。 3、种子萌发可分为（吸胀）、（萌动）和（发芽）三个阶段。 4、光敏色素由（生色团）和（蛋白团或脱辅基蛋白）两部分组成，其两种存在形式是（ Pr ）和（ Pfr ）。 5、根部吸收的矿质元素主要通过（导管）向上运输。 6、植物细胞吸水有两种方式，即（渗透吸水）和（吸胀吸水）。 7、光电子传递的最初电子供体是（ H2O ），最终电子受体是（ NADP+ ）。 8、呼吸作用可分为（有氧呼吸）和（无氧呼吸）两大类。 9、种子成熟时，累积磷的化合物主要是（植酸或非丁）。 三．选择（每题1分，10分）

１、植物生病时，PPP途径在呼吸代途径中所占的比例（ A ）。 A、上升； B、下降； C、维持一定水平 ２、对短日植物大豆来说，北种南引，要引 ( B )。 A、早熟品种； B、晚熟品种； C、中熟品种 ３、一般植物光合作用最适温度是（C）。 A、10℃； B、35℃； C．25℃ ４、属于代源的器官是（C）。 A、幼叶； B．果实； C、成熟叶 ５、产于的哈密瓜比种植于的甜，主要是由于（B）。 A、光周期差异； B、温周期差异； C、土质差异 6、交替氧化酶途径的P/O比值为（ A）。 A、1； B、2； C、3 7、IAA在植物体运输方式是( C )。 A、只有极性运输； B、只有非极性运输； C、既有极性运输又有非极性运输 8、（ B ）实验表明，韧皮部部具有正压力，为压力流动学说提供了证据。 A、环割； B、蚜虫吻针； C、伤流 9、树木的冬季休眠是由（ C ）引起的。 A、低温； B、缺水； C、短日照 10、用红光间断暗期，对短日植物的影响是( B )。 A、促进开花； B、抑制开花； C、无影响 四、判断正误（每题1分，10分） 1. 对同一植株而言，叶片总是代源，花、果实总是代库。（×） 2. 乙烯生物合成的直接前体物质是ACC。（√） 3. 对大多数植物来说，短日照是休眠诱导因子，而休眠的解除需要经历冬季的低温。（√） 4. 长日植物的临界日长一定比短日植物的临界日长长。（×） 5. 对植物开花来说，临界暗期比临界日长更为重要。（√） 6. 当细胞质壁刚刚分离时，细胞的水势等于压力势。(× ) 7. 缺氮时，植物幼叶首先变黄；缺硫时，植物老叶叶脉失绿。(×)

测生理指标的方法

实验路线及安排：项目主要在晋西北地区展开区域化试验，供试品种4个，均为当年生扦插苗,每个品种15株，采用完全随机区组设计进行，其中包 括4个处理，3个重复。所测定内容包括12项生理指标在相应部位(根、茎、叶)的年变化规律，并从形态、生理和生物化学方面对其抗寒抗旱性机理进行 研究探讨。 在每个小区分别选健康植株2株，每株取其中上部位叶片1-2片，组成混 合样，编号,带回实验室用一部分样品进行抗旱指标测定,其余样品放入冰箱低 温处理，处理温度为0℃、-10℃，-20℃，然后进行抗寒指标测定,每月采样 一次。根的取样方法为每个小区分别选健康植株10株，挖出其部分根系组成 混合样,处理方法同叶片；茎的取样方法为选健康植株10株，取其上部嫩茎组 成混合样，处理方法同上。2009年10月-2010年3月对所选材料进行人工 低温干旱处理,完成相关实验指标的测定工作。低温处理通过相对电导率及相 关指标评价其抗寒性；干旱处理是通过对所栽品种进行适宜土壤水分、中度干旱、严重干旱条件的人为处理，测定杨树的蒸腾速率和相应指标，评价其抗旱性。 实验方法 一．光合效率、气孔导度、蒸腾速率三项指标用光合仪直接测定； 二．水势（小液流法） 1.取10个干净的试管，分成A组和B组，都贴上0.05mol/L、0.1 mol/L、 0.15 mol/L、0.2 mol/L、0.3 mol/L 6个不同浓度标签，并向这两组试管中分别移 取相应浓度的CaCl 2 溶液4mL。 2.取待测叶子数片，用打孔器在其上均匀打孔，混匀，将其分别装入A组试 管（每支试管装10片），摇匀，滴入一滴相同浓度的甲烯蓝溶液，再摇匀。 3.用干净的毛细移液管，吸取1～2滴蓝色溶液，小心的插入装着相同浓度的 B组试管中部，轻轻的挤出一滴蓝色溶液，观察蓝色液滴流动方向。 按下公式计算植物组织水势：Ψ=-iRTC 式中：Ψ为植物组织水势（MPa）；C为CaCl2溶液的摩尔浓度（mol/L）；R为摩尔气体常数，0.008314MPa·L/mol·K；T为热力学温度（K），即273+t(t为当时摄 氏温度)；I解离常数（CaCl 2 =2.6） 三．叶绿素含量（直接浸提法） 80％的丙酮液的配制：4L丙酮 + 1L蒸馏水。 称0.5g左右的叶片放在50ml的离心管（做三个重复），加入25ml浓度为80％的丙酮液，放在黑暗处浸提大约36小时后取出，稀释4倍后分别在波长663nm、645nm、652nm下测定光密度，以80％的丙酮液为空白。 按下列公式计算样品中叶绿素含量。 C A =12.72A 663 -2.59A 645 (1) C B =22.88A 645 -4.67A 663 (2) C T =C A +C B =A 652 ×1000/34.5 (3)在652nm时可一次测出叶绿素总含量 mg/g FW）=(CV T /FW×1000)n (4) 以上公式中，C A 、C B 、C A+B 分别为叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b的浓度（mg/L）； FW为鲜重(g)；C：叶绿体色素的浓度；V T 为提取液总体积(mL)；n为稀释倍数。

植物生理学简答题

植物生理学简答题1．简述水分在植物生命活动中的作用。 (1)水是植物细胞的主要组成成分； (2)水分是植物体内代谢过程的反应物质,参与呼吸作用，光合作用等过程。 (3)细胞分裂和伸长都需要水分。 (4)水分是植物对物质吸收和运输及生化反应的溶剂。 (5)水分能使植物保持固有姿态。 (6)可以通过水的理化特性以调节植物周围的大气温度、湿度等。对维持植物体温稳定和降低体温也有重要作用。 2、简述影响根系吸水的土壤条件 (1)土壤中可用水量：当土壤中可用水分含量降低时，土壤溶液与根部细胞间的水势差减小，根系吸水缓慢 (2)土壤通气状况：土壤通气状况不好，土壤缺氧和二氧化碳浓度过高，使根系细胞呼吸速率下降，引起根系吸水困难。 (3)土壤温度：低温不利于根系吸水，因为低温下细胞原生质黏度增加，水分扩散阻力加大；同时根呼吸速率下降，影响根压产生，主动吸水减弱。高温也不利于根系吸水，土温过高加速根的老化进程，根细胞中的各种酶蛋白高温变形失活。

(4)土壤溶液浓度：土壤溶液浓度过高引起水势降低，当土壤溶液水势与根部细胞的水势时，还会造成根系失水。 3、导管中水分的运输何以能连续不断？ 由于植物体叶片的蒸腾失水产生很大的负净水压，将导管中的水柱向上拉动，形成水分的向上运输；水分子间有相互吸引的内聚力，该力很大，可达20 MPa以上；同时，水柱本身有重量，受向下的重力影响，这样，上拉的力量与下拖的力量共同作用于导管水柱，水柱上就会产生张力，但水分子内聚力远大于水柱张力。此外，水分子与导管或管胞细胞壁纤维素分子间还具有很大的附着力，因而维持了导管中水柱的连续性，使得导管水柱连续不断，这就是内聚力-张力学说。 4．试述蒸腾作用的生理意义。 (1)是植物对水分吸收和运输的主要动力。 (2)促进植物对矿物质和有机物的吸收及其在植物体内的转运。 (3)能够降低叶片的温度，以免灼伤。 5、根系吸水有哪些途径并简述其概念。 答：有3条途径： 质外体途径：指水分通过细胞壁，细胞间隙等部分的移动方式。 跨膜途径：指水分从一个细胞移动到另一个细胞，要两次经过质膜的方式。

生长发育生理功能指标的测量讲义.

生长发育生理功能指标的测量 一、测量脉博 测量工具：秒表、带秒针的手表或钟表。 测量方法： 由于脉搏受体力活动和情绪变化的影响较大，因此，应在安静状态下进行测量。 1. 受测者取坐位，右前臂平放在桌面，手心向上。 2. 测量者坐在对面或右侧，用食指、中指和无名指的指端触压受测者手腕部的桡动脉。 3. 测量前要先确定受测者为安静状态。即以10秒钟为单位，连续测量三个10秒钟的脉搏，若其中两次测量值相同并与另一次相差不超过一次时，即可认为受测者处于相对安静状态；否则应适当休息，直至符合要求。 4. 测1分钟的脉搏数。记录以次/分为单位。 注意事项： 1. 测量前1～2小时内，受测者不要进行剧烈的身体活动。 2. 测量前，受测者要静坐10分钟以上，互相不要打闹，保持情绪安定。 3. 触诊时，应特别注意脉搏的频率和节律与心跳的一致性。 二、测量血压 测量工具：台式水银血压计、听诊器，电子血压计（分臂式和腕式两种）。 测量方法： 由于血压受活动、体位变动、情绪等因素的影响较大，因此，在进行测量时应在安静状态下进行，通常用台式水银血压计测量右臂血压。 1. 校验 （1）打开血压计之后，扳开水银阀门，看看水银柱是否处于“0”刻度，如果不是，则应当进行校准，否则会影响测出的数值。还要观察水银柱有无气泡，如有气泡应予以排除。 （2）将球囊的开关关闭，一手压住袖带，另一手捏球囊向袖带内充气，看看水银柱是否会随

之升高，或者是否有水银中断的现象。如果不能上升或是有裂隙，就说明该血压计有漏气的情况，或者是水银量有所减少，这样的血压计就不能再用来测量了。 2. 测量 （1）受测者取坐位，右臂自然前伸，平放在桌面，掌心向上，使上臂与血压计、心脏基本处于同一水平。 （2）测量者将袖带内的空气排尽后，平整地缠在受测者的上臂，袖带下缘距肘窝2～3厘米，松紧适度，以能伸进两个手指为宜。 （3）在肘窝内侧摸到肱动脉跳动后，将听诊器的探头放在肱动脉上，使其与皮肤密切接触。切不可贪图方便省事而将其塞到袖带里面，这样会使测出的血压值比实际要高。 （4）戴好听诊器，关闭球囊开关，打气入带，使水银柱上升至肱动脉的搏动音消失，接着再往里充气，使水银柱继续上升20～30毫米汞柱。双眼保持与水银柱刻度平视。 （5）打开球囊开关，使水银柱缓缓下降，同时仔细听诊，当听到第一次脉跳声时，水银柱所指刻度便是收缩压；继续边放气边听，当声音突然变弱或消失时，水银柱所指刻度就是舒张压。 （6）放松球囊阀门，使水银柱回到零位。2分钟后，进行重测，取2次测量的平均值。记录以毫米汞柱（mmHg）为单位。如果2次测量的收缩压或舒张压读数相差>5mmHg，则相隔2分钟后再次测量，然后取3次读数的平均值。 3. 整理 测量结束后，取下袖带，挤压排尽空气，关闭球囊的开关，折叠好之后放入盒子里。一定不要忘记将血压计的盒盖向右倾斜45度，使水银完全回流槽内，再关闭水银槽的开关，阖上盒盖。如果不将水银回流，就会导致下一次使用时水银柱出现断裂，水银的挥发也会变得很快。 注意事项： 1. 测前1～2小时内，受测者不要进行剧烈的活动。 2. 测前让受测者静坐10～15分钟，稳定情绪，接受测试。 3. 测试前应检查和校正血压计的水银柱。 4. 必须选择宽度合适的袖带，以覆盖受测者上臂长的1/2～2/3为宜。袖带过宽测出血压偏低，过窄则偏高。7岁以下儿童常用8cm宽的袖带。 5. 测量时受测者需裸露手臂或只穿贴身薄衣。袖口太紧或衣服太多会导致血压值偏高。 三、测量肺活量 测量工具：浮筒式（湿式）肺活量计，电子肺活量仪。

植物生理学实验指导

植物生理学实验指导主编胡君艳陈国娟张汝民 浙江农林大学植物学科 2013年8月

实验一植物组织水势的测定 水势与渗透势的测定方法可分为3大类：⑴液相平衡法，包括小液流法、重量法测水势，质壁分离法测渗透势；⑵压力平衡法（压力室法测水势）；⑶气相平衡法，包括热电偶湿度计法、露点法等。 Ⅰ小液流法 【实验目的】 了解采用小液流法测定植物组织水势的方法。 【实验原理】 水势表示水分的化学势，像电流由高电位处流向低电位处一样，水从水势高处流向低处。植物体细胞之间，组织之间以及植物体和环境间的水分移动方向都由水势差决定。 当植物细胞或组织放在外界溶液中时，如果植物的水势小于溶液的渗透势（溶质势），则组织吸水而使溶液浓度变大；反之，则植物细胞内水分外流而使溶液浓度变小；若植物组织的水势与溶液的渗透势相等，则二者水分保持动态平衡，所以外部溶液浓度不变，而溶液的渗透势即等于所测植物的水势。可以利用溶液的浓度不同其比重也不同的原理来测定试验前后溶液的浓度变化，然后根据公式计算渗透势。 【实验器材与试剂】 1.实验材料：八角金盘、大叶黄杨等。 2.实验试剂：0.05、0.10、0.15、0.20、0.30mol·L-1蔗糖溶液、甲烯蓝溶液。 3.实验仪器：试管10支、微量注射器、镊子、打孔器、垫板。 【实验步骤】 1.取干燥洁净的试管5支为甲组，标记1~5，各支中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液5mL。另取5支干燥洁净的试管为乙组，标记1'~5'，各试管中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液2ml。 2.取待测样品的功能叶数片，用打孔器打取小圆片约50片（避开叶脉），混合均匀。用镊子分别夹入10个小圆片到乙组试管中。并使叶圆片全部浸没于溶液中。放置约30~60min，为加速水分平衡，应经常摇动试管。 3.到时间后，在乙组试管中加入甲烯蓝溶液1~2滴，并用微量注射器取各试管糖液少许，将注射器插入对应浓度甲组试管溶液中部，小心地放出一滴蓝色溶液，并观察蓝色小液流的

生理指标测定

生理指标测定_16种 1、冻害指数——3~5株观察形态 【４种常绿水生鸢尾抗寒性的初步研究】张京，2012 李刚，姜卫兵，翁忙玲，等．木兰科６种常绿树幼苗抗寒性的初步研究［Ｊ］．园艺学报，２００７，３４（３）：７８３－７８６． 描述叶色变化： 在最冷月( 2月中旬) , 所有供试树种均有不同程度的冻害表现, 乐东拟单性木兰受冻害最轻,只有部分植株的少量叶片有些许水渍状, 大部分植株完好无损, 冻害指数为041, 基本不受冻害;阔瓣含笑也长势良好, 有少部分叶片出现褐色水渍状, 冻害指数为14, 受轻度冻害; 金叶含笑受到了中度水平的冻害, 部分植株的叶片整个叶面呈现红褐色水渍状, 冻害指数为25; 红花木莲、醉香含笑和观光木受到了重度冻害, 大多数植株的部分叶片呈焦黄、褐色脱落, 有的整个植株呈萎蔫状,长势非常差, 冻害指数分别为3.2、3.9、4.3. 2、相对含水量 叶片相对含水量采用饱和称重法［21］测定。选取各处理部位一致、成熟完好的叶片迅速称其鲜重，再用蒸馏水浸泡8~24 h，使组织吸水达到饱和状态，取出后吸去表面水后立即称其饱和重，然后在105 ℃下杀青30min，在80 ℃下烘干至恒重（1h~24h），放在干燥器中冷却，称其烘干重。根据公式计算:LRWC( %) = [ (鲜重－干重) /(饱和重－干重) ] × 100%

3、光合参数（光合仪测定） 光合速率、CO2浓度、光合有效辐射、叶绿素 或用95%乙醇浸泡法，浸泡4~5d，测定叶绿素。《植物生理生化实验原理和技术》 4、膜质过氧化：相对电导率（略）、MDA MDA（丙二醛）的测定 试剂：三氯乙酸10% （TCA 溶液）：称取100g溶于1L 蒸馏水中； 0.6％硫代巴比妥酸溶液（6%TBA）：1.8g溶于300ml TCA 溶液中（加热溶解） 称取植物叶片0.3克, 先加入2ml TCA和少量石英砂研磨至匀浆，再加入4ml 10%三氯乙酸(TCA)进一步研磨（总体积为6ml），然后以4000g离心10min, 取上清液待测。吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水)，加入2ml 0.6% TBA，混匀物于沸水浴上反应15分钟，迅速冷却后再离心(在冰箱中冷却较快)。取上清液测定在532，600和450nm波长下比色。 公式C MDA (nmol L-1)＝[(A532－A600)-0.0571×(A450-A600)]/0.155计算MDA量（排除多糖干扰），用每克干（鲜）重中MDA的量表示MDA的含量，单位μmol g-1干（鲜）重或nmol g-1干（鲜）重。 1、含量计算 双组分光光度计法：已知蔗糖与TBA反应产物在450nm和532nm波长下的比吸系数分别为 85.40,7.40；MDA与 TBA显色反应产物在450nm波长下无吸收，其吸收系数为0，532nm下比吸 收系数为155，根据双组分光光度计法建立方程组，计算公式如下： C 1（mmol/L）=11.71 D 450 C 2 =[6.45(D 532 —D 600 ) — 0.56 D 450 ]X提取液总体积/测定时用的提 取液体积*样品鲜重 C 1:可溶性糖的浓度, C 2 为MDA的浓度, D 450 D 532 D 600 分别代表450,532,600nm下的消光度值. 参：Brege J G.Microsomal lipid peroxiodation. Methods in Ezymmology.1978,52:302-306 J.G. Buege and S.D. Aust, Microsomal lipid peroxidation. Methods Enzymol.52(1978), pp. 302–306. 注: 沸水浴时,可使用小试管,然后上部用保鲜膜包扎.(如橡皮筋) 附4.1 MDA、可溶糖含量—硫代巴比妥酸加热显色法 【原理】植物遭遇逆境胁迫或衰老过程中，由于自由基、活性氧的积累引起膜脂过氧化，产生脂质自由基，进一步诱发膜脂连续过氧化并导致蛋白质交联变性，而引起细胞损伤或死亡。MDA 是膜脂过氧化的最终产物，通过其含量的测定可了解膜脂氧化伤害的程度，比较不同植物抗逆性的差异。 在酸性和高温条件下，MDA可与硫代巴比妥酸（TBA）反应，生成红棕色的产物三甲川（3，5，5-三甲基恶唑2，4-二酮）。该产物在532nm处有最大吸收峰，测定反应产物在532nm处的光密度值，可计算出MDA含量。但植物组织中的可溶性糖亦与TBA产生颜色反应，其产物对532nm 光的吸收干扰测定。采用双组分光光度法及其计算式，可排除干扰，计算出MDA的含量。 【器材】分光光度计离心机水浴锅研钵剪刀试管