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实验室色谱柱管理规程

实验室色谱柱管理规程

实验室色谱柱管理规程

1目的为了规范实验室内色谱柱的使用。确保操作人员能正确规范地使用色谱柱,以保证色谱柱的使用寿命,制定本规程。

2 范围本规程适用于实验室内所有分析用色谱柱的管理。

3 职责QC人员对本规程的实施负责。

4程序

4.1 色谱柱的采购

4.1.1 分析人员视实验室内的欲检验样品情况及现有的色谱柱使用情况,提出色谱柱的采购申请,报相关负责人审核后交采购人员采购。

4.1.2 分析人员提交申请时应仔细说明欲采购色谱柱的型号、规格和数量及购买期限。

4.2 色谱柱的使用

4.2.1 对新购进的色谱柱,应检查色谱柱的外表面、封口情况,随柱色谱图、柱效、分离度、拖尾因子测定,说明书等,不符合要求的应退货,符合要求的应在SOP-QC020-01-R1“色谱柱登记表”上进行登记,注明领用日期和开始使用日期,并且进行统一的编号。

4.2.2 色谱柱编号规则

实验室色谱柱管理规程

表示色谱柱的流水号

表示购入的月份

表示购入的年份

表示液相色谱柱

表示分析部门

4.2.3 液相色谱柱

4.2.3.1 液相色谱柱的使用前注意事项

色谱柱的储存液若无特殊说明,均为有机溶剂,反相柱常用甲醇、乙腈或者高比例的甲醇/乙腈-水溶液,正相柱常用脱水处理后的纯正己烷。使用前,一定要注意色谱柱的储存液与待分析样品的流动相之间是否互溶。在反相色谱中,如果流动相中缓冲盐的浓度较高(>0.1mmol/L),必须先用低浓度的甲醇/乙腈-水溶液(10~20%)冲洗10~20min,否则缓冲盐在高浓度的有机相中很容易析出,从而使色谱柱堵塞,无法恢复。

4.2.3.2 液相色谱柱使用方向

装色谱柱时应使流动相流路的方向与色谱柱标签上箭头所示方向一致。除另有规定外,不宜反向使用,否则会导致色谱柱柱效明显降低,无法恢复。

4.2.3.3 液相色谱柱的评价(必要时自己做,没其它要求时以出厂报告为准)

流动相:反相柱(C18)一般用甲醇:水=85:15(V/V)或乙腈:水=60:40(V/V).

样品物质:可用预订用途的供试品代替。

除另有规定外,色谱柱的理论板数应不小于1500、分离度应不小于1.5、重复进样间的RSD不超过2.0%。

4.2.3.4 流动相

流动相中所使用的各种有机溶剂应尽可能使用色谱纯,水应为纯化水或注射用水,如果流动相含盐,还应将配制好的流动相经0.45μm或0.22μm 的滤膜过滤。另外,装流动相的容器和色谱系统的在线过滤器等装置应清洁,否则将影响色谱柱寿命。以硅胶为基质的各种键合相对酸和碱都很敏感,一般pH使用范围为2.0~8.0,应参阅色谱柱使用说明书使用。

4.2.4 色谱柱使用后,应填写SOP_QC020-01-R2“色谱柱的使用日志”。使用日志的内容应包括以下方面的内容:

4.2.4.1 色谱柱的名称、型号、规格、编号

4.2.4.2 色谱柱的使用日期、用途

4.2.4.3 色谱柱的清洁/老化过程、系统适用性评价数据

4.2.4.4 封柱的溶液等

4.2.5 色谱柱使用时,必须对分析样品进行系统适用性试验。原则上一个品种专用一支色谱柱。且必须在色谱柱上标注专用于哪个产品的标识。

4.3 色谱柱的维护和保养

4.3.1 液相反相色谱柱用后长时间不使用时的保存

如使用缓冲液或含盐溶液作为流动相,每天实验结束后,应用低浓度的甲醇/乙腈-水溶液(10~20%)冲洗30分钟,使色谱柱内的盐完全溶解洗脱出,再用较高浓度的甲醇/乙腈-水溶液(50%)冲洗10分钟,最后用高浓度的甲醇/乙腈-水溶液(80~90%)冲洗30分钟,使色谱柱中的强吸附物质冲洗出来。

注:常用内径为4.6mm的色谱柱的柱内死体积为1.8mL(150mm长)和2.2mL(250mm 长)

4.3.2 色谱柱的长期保存

反相柱,可以储存于甲醇或乙腈中,并将色谱柱两端的堵头堵上,以免干枯,室温保存。

4.3.3 液相色谱柱的维修

色谱柱使用一段时间后,会发生柱压上升、柱效降低的现象。这主要是柱床上端或过滤片处积累了污染物,可通过再生予以消除。如果色谱柱性能突然变坏,可采取以下方法处理:(1)如果柱压突然增大,可将色谱柱出、入口端颠倒过来,用10~20倍柱体积的流动相低速冲洗。如果柱压仍然很高,可能是柱入口处的过滤片堵塞,需要更换新滤片;(2)如果峰形变坏(如出现肩峰或双峰),表明柱入口柱床可能有塌陷,可用同型号填料和流动相配成匀浆,将塌陷处填平。

注:经维修后的色谱柱使用之前,必须做系统适用性试验,符合规定后方能继续使用。

4.4 色谱柱的再生

4.4.1 液相色谱柱的再生

反相柱首先用蒸馏水冲洗,再分别用20~30倍柱体积的甲醇:水=10:90(V/V),乙腈,异丙醇作为流动相冲洗色谱柱,完成后再以相反顺序冲洗,最后用流动相平衡。

4.4.2 液相色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决方法

4.4.2.1 液相色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染;

将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力,或者卸下色谱柱头,将其放在10%的稀硝酸内超声清洗10分钟,后再用纯水超声10分钟,重新装入色谱柱。

4.4.2.2 液相色谱柱头的填料被样品污染;

解决方法:如确定色谱柱头的填料被污染,将柱头螺丝卸下,挖出柱内前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔细修复后,重新安装上柱头螺丝。

4.4.2.3 色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂,形成结晶析出;解决方法:如确定是盐结晶,用10%的甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解.

4.4.2.4 流动相pH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。解决方法:如果因pH值使用

不当,很难恢复。

4.5 色谱柱的报废

4.5.1 已判定为报废的色谱柱,应在色谱柱上贴上报废的标签,并在“色谱柱登记表”上注明报废原因及报废时间。

4.5.2 已报废的色谱柱应与正常使用的色谱柱分开存放,以防色谱柱的非预期使用。

4.6 任何色谱柱的老化、清洁、维修、再生以及报废的操作,都应在使用日志上予以记录。

5 记录

记录一《色谱柱登记表》SOP-QC020-01-R1

记录二《色谱柱使用日志》SOP-QC020-01-R2

6 历史

版本号01,修订日期2014年10月15日

1.新规程。

色谱柱登记表SOP-QC020-01-R1

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色谱柱使用日志SOP-QC020-01-R2 名称:型号规格编号

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