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柱色谱和薄层色谱----预习报告

预习报告

实验项目名称:薄层色谱和柱色谱

一、实验目的

1、学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用

2、掌握薄层色谱和柱色谱分离技术和操作要点。

3、掌握如何正确的配置展开剂

二、实验原理

色谱法的基本原理,是利用混合物各组分在固定相和流动相中分配平衡常数的差异。简单地说就是,当流动相流经固定相时,由于固定相对各组分的吸附或溶解性能的不同,使吸附力较弱或溶解度较小的组分在固定相中移动的速度较快,在多次反复平衡过程中导致各组分在固定相中形成了分离的“色带”,从而得到分离。

三、主要试剂规格及用量

1%偶氮苯的甲苯溶液,1%苏丹Ⅲ的甲苯溶液,1%的羧甲基纤维素

钠(CMC)水溶液,硅胶G,立即比为9:1的甲苯-乙酸乙酯。

名称分子量状态熔点沸点溶解度溶解度溶解度

水醇醚

68293不溶溶溶

偶氮苯182.2橙色片状

晶体

苏丹III 232棕色粉末不溶溶溶

荧光黄332.3黄红色至

320不溶溶不溶

红色粉末

五、实验装置图(见实验记录本)

六、实验步骤

(一)薄层色谱实验步骤:

1、薄层板的制备(此实验中不考虑,有直接的可用)

2、取两块薄层板,分别在距一端1cm处用铅笔轻轻地画一条线,作为起始线。用分别两根毛细管,分别取偶氮苯、苏丹甲苯溶液和其合液放在起始线上,取两个样点,且两样点相距1到1.5厘米,且样点的直径不超过2毫米。如果样点颜色太浅,可以等其变干后在重复几次。

3、用上述的甲苯-乙酸乙酯作为展开剂,待样点干燥后,小心放入已加入展开剂的广口瓶中,点样一端应进入展开剂0.5cm,盖好瓶盖,观察实验现象,观察展开剂前沿上升至离板的上端1cm处取出,尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号,比较两者的Rf值的大小。

(二)柱色谱实验步骤

1、在色谱柱上端放一个干燥的漏斗,将吸附剂倒入其中,并轻轻的敲打色柱柱身使其填充均匀,然后加入洗脱剂湿润。

2、当溶剂下降到吸附剂表面时立即开始使用色谱柱,用滴管把样品溶液转移到上色谱柱中,并用少量溶剂分几次洗涤柱壁上所沾试液,直至无色。样品加完后,打开下旋塞,使样品进入石英砂层后,再加入洗脱剂进行洗脱。

3、在分有色物质是,直接观察到分离后的“色带”,然后用洗脱剂将分离后的“色带”依次自柱中洗脱出来,再用适宜的溶剂将溶质萃取出来。

七、注意事项

(1)薄层色谱

(2)1、吸附剂必须均匀地填在柱内,没有气泡、没有裂缝,否则将影响洗脱和分离。

2、加入沙子的目的是使加料时不致把吸附剂冲起,影响分高效果。若无沙子,也可用滤纸覆盖在吸附剂表面。

3、为了保持柱子的均一性,使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必要的。否则当柱中溶剂或溶液流干时,就会使柱身干裂,影响渗滤和显色的效果。

(2)柱色谱

1、制板时,硅胶用水调成刚好能流动的糊状物为佳,勿太浓或太稀,并即刻铺在层析板上。做好的层析板应均匀一致,否则会影响分离效果。

2、待溶剂前沿离层析板顶端仅1~2mm时方能取出,否则色点分离不完全。但溶剂不能冲顶,否则色点会扩散而影响分离效果。