测生理指标的方法

实验路线及安排：项目主要在晋西北地区展开区域化试验，供试品种4个，均为当年生扦插苗,每个品种15株，采用完全随机区组设计进行，其中包

括4个处理，3个重复。所测定内容包括12项生理指标在相应部位(根、茎、叶)的年变化规律，并从形态、生理和生物化学方面对其抗寒抗旱性机理进行

研究探讨。

在每个小区分别选健康植株2株，每株取其中上部位叶片1-2片，组成混

合样，编号,带回实验室用一部分样品进行抗旱指标测定,其余样品放入冰箱低

温处理，处理温度为0℃、-10℃，-20℃，然后进行抗寒指标测定,每月采样

一次。根的取样方法为每个小区分别选健康植株10株，挖出其部分根系组成

混合样,处理方法同叶片；茎的取样方法为选健康植株10株，取其上部嫩茎组

成混合样，处理方法同上。2009年10月-2010年3月对所选材料进行人工

低温干旱处理,完成相关实验指标的测定工作。低温处理通过相对电导率及相

关指标评价其抗寒性；干旱处理是通过对所栽品种进行适宜土壤水分、中度干旱、严重干旱条件的人为处理，测定杨树的蒸腾速率和相应指标，评价其抗旱性。

实验方法

一．光合效率、气孔导度、蒸腾速率三项指标用光合仪直接测定；

二．水势（小液流法）

1.取10个干净的试管，分成A组和B组，都贴上0.05mol/L、0.1 mol/L、

0.15 mol/L、0.2 mol/L、0.3 mol/L 6个不同浓度标签，并向这两组试管中分别移

取相应浓度的CaCl

2

溶液4mL。

2.取待测叶子数片，用打孔器在其上均匀打孔，混匀，将其分别装入A组试

管（每支试管装10片），摇匀，滴入一滴相同浓度的甲烯蓝溶液，再摇匀。

3.用干净的毛细移液管，吸取1～2滴蓝色溶液，小心的插入装着相同浓度的

B组试管中部，轻轻的挤出一滴蓝色溶液，观察蓝色液滴流动方向。

按下公式计算植物组织水势：Ψ=-iRTC

式中：Ψ为植物组织水势（MPa）；C为CaCl2溶液的摩尔浓度（mol/L）；R为摩尔气体常数，0.008314MPa·L/mol·K；T为热力学温度（K），即273+t(t为当时摄

氏温度)；I解离常数（CaCl

2

=2.6）

三．叶绿素含量（直接浸提法）

80％的丙酮液的配制：4L丙酮 + 1L蒸馏水。

称0.5g左右的叶片放在50ml的离心管（做三个重复），加入25ml浓度为80％的丙酮液，放在黑暗处浸提大约36小时后取出，稀释4倍后分别在波长663nm、645nm、652nm下测定光密度，以80％的丙酮液为空白。

按下列公式计算样品中叶绿素含量。

C

A =12.72A

663

-2.59A

645

(1)

C

B =22.88A

645

-4.67A

663

(2)

C

T =C

A

+C

B

=A

652

×1000/34.5 (3)在652nm时可一次测出叶绿素总含量

mg/g FW）=(CV

T

/FW×1000)n (4)

以上公式中，C

A 、C

B

、C

A+B

分别为叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b的浓度（mg/L）；

FW为鲜重(g)；C：叶绿体色素的浓度；V

T

为提取液总体积(mL)；n为稀释倍数。

四．丙二醛（MDA）含量测定

试剂：

20%三氯乙酸（TCA）溶液：20g三氯乙酸，加水80ml溶解；

0．1%的TCA溶液：取250ul20%TCA稀释至50ml；

0.5%硫代巴比妥酸溶液：0．25g硫代巴比妥酸溶解于50ml20%的TCA中。

1．取植株上一定叶位的叶片，剪成小段，混匀,称取0.3g；

2．放入冰浴的砚钵中，加少许石英砂和2ml0.05mol/LPH为7.8的磷酸缓冲液，研磨成匀浆。将匀浆转移到试管中，再用2-3 ml0.05mol/L磷酸缓冲液分两次冲洗，合并提取液；

3．在提取液中加入5 ml 0.5%硫代巴比妥酸溶液，摇匀；

4．将试管放入沸水中煮沸10分钟（自试管内溶液中出现小气泡开始计时），到时间后立即将试管取出并放入冷水浴中；

5．带试管内溶液冷却后，3000g离心15min，取上清液并量其体积。以0.5%硫代巴比妥酸溶液为空白测532nm、600nm、450nm处的吸光度；

6.结果计算:MDA（mmol.g-1FW）=〔6.452*（A652-A600）-0.559*A450〕*Vt/Vs*FW

式中，Vt:提取液总体积（ml），Vs：测定用提取液体积（ml），FW：样品鲜重（g）五．SOD酶活性的测定

1、NBT反应液的制备

（a）配置50mmol/l pH=7.8磷酸缓冲液：A：取NaHPO4·12H2O 8.95g定容于500ml；

B：取KH2PO4 3.4g定容于500ml；（A：B=9：1）

（b）13mmol/l甲硫氨酸：在180ml50mmol/l pH=7.8磷酸缓冲液中加入348mg甲硫氨酸，待完全溶解后加入后面的试剂。

（c）63umol/l硝基四唑蓝（NBT）：在180ml溶液（b）中加入8.4mgNBT；

（d）1．3umol/l核黄素：在（c）中加入1.2ml核黄素母液（0．14g/30ml：0．14g 核黄素加入30ml水中）；

（e）0.1mmol/lEDTA：在（d）中加入6.6mgEDTA。

将上述步骤配置的NBT反应液避光保存。

2、活性测定

(1)酶液提取:同过氧化物酶液的提取

(2)超氧化物歧化酶活性的测定:

取6mlNBT反应液，加入50ul酶液混合均匀，将试管放于荧光灯架上，光强3000lx 照光10min，到时间后关灯，在722分光光度计560nm处测吸光度值，以内装NBT反应液的试管进行光照的作为对照，以内装NBT反应液但置于暗处的作为参比。

(3)超氧化物歧化酶酶活计算：

酶活性= ()

Ack A V

Ack W Vt

E

-?

???

1

2

Ack：照光对照管在560nm处的吸光度值Ae：样品管的吸光度值

V：酶提取液总体积

Vt：测定时所用的酶液体积

W：提取酶液的材料鲜重

六．PPO酶活性测定

用尔茶酚法。酶液提取过程同POD的方法。反应体系：于10毫升试管中加入3.9毫升磷酸缓冲液（PH=6）和0.1ml酶待测液混合均匀，在30℃条件下放 1min，立即加1ml 0.1mol/L儿茶酚反应介质摇匀，用721分光光度计在λ=420 处测吸光度值变化。放好后立即读数并记录，60s读一次，共读5次。

多酚氧化酶的活性按下式计算：

活性（u/g）=ΔA*D/(0.01W*t)以每分钟吸光值改变0.01为一个多酚氧化酶单位。ΔA---反应时间内吸光值的变化；W----鲜样品的质量（g）

t----反应时间(min)；D----总酶液为反应系统内酶液的倍数

七．POD酶活性的测定（用愈创木酚法）

0.05mol/l愈创木酚：用烧杯称取6.207g愈创木酚，用少许酒精溶解，然后定容

至1000ml。（按需求不同照比例增缩）； 2%H

2O

2

：取30% H

2

O

2

67ml，加水至1000ml；

(1)酶液提取

分别称取各待测样品0.500克，加聚乙烯吡咯烷酮（PVP）0.25克及少量石英沙和5ml磷酸缓冲液（pH=6）冰浴下充分研磨成匀浆，放入离心管，在10000r/min条件下冷冻离心10min，取上清液为酶提取液。

(2)过氧化物酶活性的测定

取10ml试管，一只加入：2.9ml0.05M pH=6的磷酸缓冲液 + 1ml 0.05M的愈创

木酚 + 1ml酶液，立即在37℃水浴条件下保温3min，然后加入1ml2%的H

2O

2

继续保

温1min，取出立即用721型分光光度计于波长470nm 处测定吸光度值变化，每隔60s 读一次数，共读五次。以每克鲜重材料每分钟吸光度变化值表示酶活性大小(其计算

公式同PPO)。空白对照不加H

2O 2

八、脯氨酸含量测定

1、原理:当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。植株体内脯氨酸含量在—定程度上反映了植株体内的水分情况，因而可以作为植物缺水情况的参考性生理指标。

用人造沸石在 pH 1～7 范围内振荡溶液，可除去干扰的氨基酸或使不与茚三酮反应（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等），脯氨酸与茚三酮试剂呈显色反应，其含量与颜色深浅成正相关，可用分光光度计测定。此法有专一性。

2、试剂与仪器设备

·茚三酮试剂：将 2.50 g 茚三酮于 60 mL 冰醋酸和 40 mL 6 mol/L 磷酸中，加热（ 70 ℃）溶解。试剂至少在 24 小时内稳定。

．脯氨酸标准液：准确称取 25 mg 脯氨酸溶于少量 80 % 乙醇中，再用蒸馏水定容至 250 mL ，其浓度为 100 μg/mL 。再取此液 10 mL ，用蒸馏水稀释至 100 mL ，即成 10 μg/mL 的脯氨酸标准液。

分光光度计，水浴锅，移液管，容量瓶，冰醋酸，仪器药品，离心机，烧杯，研钵，试管，恒温水浴

3.实验步骤

1、绘制标准曲线分别吸取脯氨酸标准母液 0 、 0.2 、 0.4 、 0.8 、 1.2 、1.6 、 2.0 mL放入 7 支具塞刻度试管，分别加入蒸馏水至 2.0 mL, 其脯氨酸含量分别为 0 、 2.0 、 4.0 、 8.0 、 12.0 、 16.0 、 20.0 μg 。分别吸取上述标准溶液 2 mL ，加冰醋酸 2 mL, 茚三酮试剂 2 mL 加入试管中，混匀后加玻璃球塞，在沸水浴中加热 15 min 。用分光光度计于波长 515 nm 下进行比色测定，以零浓度为空白对照。将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标作标准曲线。

2. 植株样品液的提取选取植株功能叶片 2 g ，用 3 mL 80 % 乙醇研磨（放少许石英砂）成浆状。用 80 % 乙醇洗研钵，将提取物和洗液置于试管中。 80 % 乙醇总量为 10 mL 。加盖置于黑暗中室温下提取 24 h ，或 80 ℃恒温水浴中提取 20 min 。

将提取液在放有活性炭的滤纸上进行过滤，重复过滤一次，除去色素和残渣。将滤液置于试管中，加其重量 1/5 的人造沸石强烈振荡 5 min 。将上层液在离心机上离心 10 min ，上清液备用。

3. 样品溶液的测定取 2 mL 上清液置于试管中，再加入 2 mL 冰醋酸和 2 mL 茚三酮试剂，加盖密封，在沸水浴上加热 15 min 。用 3 mL 80% 乙醇代替样品液作为对照。在分光光度计上测 515 nm 处各样品的吸光度，从标准曲线上求出样品溶液中脯氨酸含量。

4、结果计算

样品中脯氨酸含量的计算：

脯氨酸含量（μg/g ） = C* V T*100%/ W* V 1*106

式中：C ——由标准曲线上查得的脯氨酸的质量，μg。

V T ——提取液总体积， mL 。

V 1 ——测定液体积， mL 。

W ——样品质量， g 。

0.5ml酶液（对照用0.5ml 80％乙醇代替）（做三个重复） + 1ml冰乙酸 + 1.5ml 显色液―――混匀，沸水浴15min，冷却后测OD520。

九、电导率

称取0.5个鲜样，以去离子水洗净，擦干、剪碎后放入具塞平底试管中，并加入蒸馏水（去离子水）10ml，振荡30min后在室温下静置30min，然后用电导仪（0.96电极）测定溶液的电导率E1，然后置于水浴煮沸10分钟，冷却后测定溶液总电导率E2并记录。

质膜相对透性（P）=[（E1—E0）/（E2—E0）]×100%

式中：E1—煮前电导率；

E2—煮后电导率；

E0—去离子水电导率；

十、ABA测定

试验材料为2年生的红叶石楠优良品种鲁宾斯(Photinia glabra Vat．

Rubens)扦插苗。2006年4月lO日将供试苗木定植子上阴直径38 Clll、

下西壹径24Clll、高30cm的泥质花盆中，每盆3株，装入沙壤土25蛀，

开沟置于大田中，埋深25 cm，正常豳问管理。予6月上旬苗木生长稳定

以后，将盆栽材料取出，置于防雨棚内，地面铺设塑膜隔绝水分交换。连

续在土壤饱和水分条件下平衡数日，使材料达到稳定生长状态。采用随机

区缰试验设计，单盆小区，重复3次。

人工低温抗冻性试验设计

2006年5月3日，早上9：00予田间自5年生红叶石楠冠层外围，自

基部第4芽囱土，剪取发育正常的一年生中部枝条，枝条在植株豹朝向和

部位力求一致，剪成20--30 cm长的枝段，石蜡封剪口用聚乙烯袋包裹，

按试验设计的胁迫温度置于冰箱中进行人工冷冻处理。其中冷冻胁迫温度

分别调整为To(O℃，对照)、k(-5℃)、T．10(一10℃)和T．1s(．15℃)，

低温胁迫时间分别为to(O hr，对照)、t24(24 hr)、t4s(48 hr)和tr2(72

橱)。重复3次，每个处理组合枝条5个。

2．3．2叶片水分生态生理特性的测定

选晴朗的自天，应用PPS．1光合测定系统(英国)，从8：00～16：00每

隔2 h测定一次，采用活体测定的方法，选树冠中层正常生长的叶片夹入

叶室，每次重复测定3次，取3次的平均值。测定数据具体包括蒸腾速率

(Tr)、光合速率(Pn)、气孔导度(＆)、C02浓度等指标

’土壤水势和叶片水势鑫8：00至16：00，间隔2 h测定～次，与蒸腾耗

水各因子圃步测定。

（#）抗旱性

由于新疆气候属干旱半干旱地区，树木能否抗大气干旱，也是其抗逆性研究内容，选择& - ) 月停止浇水，测定土壤#. /0 处的含水量，观察树木表现情况。

2．3．2抗旱性试验设计

采用盆栽试验研究供试地被竹抗旱性，试验在山东农业大学新校区林学实验站进行。2007年5月12号将菲白竹、菲黄竹、铺地竹、鹅毛竹、黄条金刚竹定植规格为28x19cm塑料花盆中，装入盆土lOkg左右，共栽植300盆，摆放到大田中，进行正常田间管理。于8月上旬苗木生长稳定以后，选择长势均匀盆栽材料移入防雨棚内，地面铺设塑膜隔绝水分交换。连续在土壤饱和水分条件下平衡数日，使材料达到稳定生长状态。采用随机区组试验设计，单盆小区，重复3次，以时间为梯度进行测定引种地被竹的抗旱性，测定与抗旱性相关的生理生化指标与生长发育指标。

2．3．3抗寒性试验设计

2．3．3．1大田低温抗寒性试验设计

本试验于2007年11月至2008年3月完成，每个品种3个重复，完全随机区组设计，分别于2007年11月28日、2007年12月28、2008年1月28、2008年2月28日及2008年3月28日分别于田间测定，并同时用冰壶取叶片及根颈样品带回实验室以供分析。

2．3．3．2人工低温抗寒性试验设计

试验于2007年12月初开始，取发育正常的叶片，用超低温冷冻循环仪()进行人工冷冻胁迫试验T．5(-5℃)、T．10(-10℃)、T．15(-15℃)、T．18(．18℃)、T-20(．20℃)5个胁迫温度。冷冻降温速度为4"C／h，当达到所要求的冰冻温度后继续维持24h，取出后在室温条件下恢复lh 后进行各指标的测定，重复3次。

最新植物生理指标测定方法

实验一植物叶绿素含量的测定（分光光度法） (张宪政，1992) 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用效率的大小，比值高则大，则反之。 二、材料、仪器设备及试剂 试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮） 三、实验步骤 称取剪碎的新鲜样品0.2～0.3g，加乙醇10ml，提取直至无绿色为止。把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm和645nm下测定吸光度。四、实验结果按计算 丙酮法（Arnon法）【可以用于丙酮乙醇混合法和80%丙酮提取法的计算】 叶绿素a的含量（mg/g）=（12.71?OD663 – 2.59?OD645）V/1000*W 叶绿素b的含量（mg/g）=(22.88OD645 – 4.67OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(8.04?OD663 +20.29?OD645) V/1000*W 按Inskeep公式 叶绿素a的含量（mg/g）=（12.63?OD663 – 2.52?OD645）V/1000*W 叶绿素b的含量（mg/g）=(20.47OD645 – 4.73OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(7.90?OD663 + 17.95?OD645) V/1000*W

常规指标测试方法

常规指标测试方法 COD：重铬酸钾法；波长λ=435；5ml比色皿 测量范围：1～1500mg/L 测试步骤： 于5ml比色皿中加入少量Hg2SO4（作为屏蔽剂），再加硝解液3ml（也可以分开加：先加 2.25ml Ag2SO4+ H2SO4，再加0.75mlK2CrO7）最后加入2ml水样，盖紧瓶塞，摇匀于150℃硝解2h，完全冷却后测量COD值 试剂： ①10g Ag2SO4用于1L浓H2SO4（98%），Ag2SO4：H2SO4=1：100 ②49.032g K2CrO7溶于1L的水中 ※硝解液即将①和②按3：1的比例混合配制而成 注意： 1.水样若浓度过高，则须先稀释，一般测量在600～800mg/L内较精 确 2.一般可先将硝解液加于试管中别用，减少润洗造成的浪费 3.空白可用一星期 4.若水样浓度高，进行稀释时一般取5ml水样，取太少误差相对较大

测试方法： 方法①：以0.45μm滤膜过滤后测试COD 方法②：离心机（转速为4500rpm）离心40min后取上清液测COD

5 1.取水样160ml 2.称取0.4gLiOH于黑色胶漏 3.瓶口涂加润滑剂后，将胶漏置于其中 4.于35°条件下硝解5天

NH4+–N 纳氏试剂光度法；420nm；50ml比色管 步骤： 1.取1ml水样 2.加水至50ml刻度线 3.加入1ml酒石酸钾钠 4.加入1.5ml纳氏试剂 5.摇匀静置10min 试剂： 1.酒石酸钾钠： 称取50g酒石酸钾钠（KNaC4H6·4H2O）溶于100ml水中，加热煮沸以去除氨氮，冷却，定容至100ml 2.钠氏试剂： 称取16gNaOH，溶于50ml水中，充分冷却至室温 称取7g碘化钾（KI）+10g碘化汞（HgI2）溶于水，然后将此溶液在搅拌条件下缓缓注入NaOH溶液中，定容至100ml，贮于聚乙烯瓶中

植物生理生化测定

2.1.8转基因植株在盐胁迫下的超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 将转基因植株与非转基因对照植株继代于含有0.5% NaCl的MS固体培养上进行胁迫培养，培养条件为27±1℃，每天13 h、3000 lux光照。胁迫培养4 w后，取其叶片测定其SOD 活性，每个样品设3次重复，求其平均数，并进行多重比较。 2.1.8.1主要试剂及配方 （1）0.1 mol/l pH 7.8磷酸钠（Na2HPO4-NaH2PO4）缓冲液 A液（0.1 mol/l Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4·12H2O 7.163 g，用少量蒸馏水溶解后定容至200 ml，4℃冰箱中保存备用； B液（0.1 mol/l NaH2PO4溶液）：称取NaH2PO4·2H2O 0.780 g，用少量蒸馏水溶解后定容至50 ml，4℃冰箱中保存备用； 取上述A液183 ml与B液17ml充分混匀后即为0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液，4℃冰箱中保存备用。 （2）0.026 mol/l甲硫氨酸（Met）磷酸钠缓冲液 称取甲硫氨酸（C5H11NO2S）0.388 g，用少量0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液溶解后，再用相同磷酸钠缓冲液定容至100 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用1～2 d。 （3）7.5 × 10-4 mol/l NBT溶液 称取NBT（C40H30Cl2N10O6）0.153 g，用少量蒸馏水溶解后，定容至250 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用2～3 d。 （4）含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液 A液：称取EDTA 0.003 g，用少量蒸馏水溶解； B液：称取核黄素0.075 g，用少量蒸馏水溶解； C液：合并A液和B液，定容至100 ml，此溶液即为含0.1 mmol/l EDTA的2 mmol/l 核黄素溶液，避光保存（可用黑纸将装有该液的棕色瓶包好），4℃冰箱中可保存8～10 d，当测定SOD酶活时，将C液稀释100倍，即为含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液。 （5）含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液 取0.1 mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液50 ml，加入2 g PVP（聚乙烯吡咯烷酮），充分溶解后移入100 ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，充分混匀，4℃冰箱中保存备用。 2.1.8.2提取及测定方法 （1）称取1.0 g样品叶片于预冷的研钵中，加入4 ml预冷的提取介质（含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液），冰浴研磨匀浆，转入10 ml离心管，并用提取介质定容至

测定各生理指标的试验方法

测定各生理指标的试验方法 1.4.1 电导率的测量(浸泡法)[5] 取大小相当的植物叶片（尽量保证叶片的完整性，少含茎节），用自来水洗净后再用蒸馏水冲洗3次，用滤纸吸干表面水分，将叶片剪成适宜长度的长条（避开主脉），快速称取鲜样，每份0.1g,分别置于10ml去离子水的刻度试管中，盖上玻璃塞置于室温下浸泡处理12h,用电导仪测定浸提液电导（R1），然后沸水浴加热30min,冷却至室温后摇匀，再次测定浸提液电导（R2）。根据公式：相对电导率=R1/R2×100% 算出电导率。 1.4.2 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定（氮蓝四唑法）[5] 取各株植物相同部位的叶片（去叶脉）0.5g于预冷的研钵中，加1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使最终体积为5ml。取1.5~2ml于4000r/min 下离心10min，上清液即为SOD粗提取液。取32支试管（30支测定管，2支对照管），分别加入1.5ml0.05mol/l磷酸缓冲液、0.3ml130nmolMet溶液、0.3ml750μmol/l NBT溶液、0.3mol100μmol/l EDTA液、0.3ml20μmol/l核黄素、0.05ml酶液（其中2支对照管以缓冲液代替酶液）、0.25ml蒸馏水，混匀，将一支对照管置于暗处，其他各管于4000lx日光下反应20min（要求各管受光情况一致，温度高时缩短，低时延长）。反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其他各管的吸光度。 计算公式：SOD总活性（U/g)=[(A CK -A E )×V]/(0.5×A CK ×W×Vt) 注：SOD总活性以每克样品鲜质量的酶单位表示（U/g）；A CK 为照光对照管的 吸光度；A E 为样品管的吸光度；V为样品液总体积（ml）；Vt为测定时样品用量（ml）；W为样品鲜质量（g）。 1.4.3 过氧化物酶(POD)活性的测定（愈创木酚法) [5] 酶液提取：取5.0g植物叶片，洗净，剪碎，放入研钵中。加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆。将匀浆液全部转入离心管中，于3000rmp离心10min，上清液转入25ml容量瓶中。沉淀用5ml磷酸缓冲液再提取2次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，低温下保存备用。分别在各试管中加入0.05mol/l磷酸缓冲液 2.9ml,2%H2O21.0ml，0.05mol/l愈创木酚1.0ml和0.1ml酶液来制备酶活性测定

【测试】频响指标以及测试方法

【关键字】测试 频响 频率响应 简称频响，英文名称是Frequency Response，在电子学上用来描述一台仪器对于不同频率的信号的处理能力的差异。同失真一样，这也是一个非常重要的参数指标。一个“完美”的 交流缩小器，应该在频响指标上具有如下的素质：对于任何频率的信号都能够保持稳定的缩小 率，并且对于相应的负载具有同等的驱动能力。显然这在目前技术水平下是完全不可能的，那么 针对不同的缩小器就有了不同的“前缀”，对于音频信号缩小器（功率缩小器或者小信号缩小 器）来说，我们还应该加上如此的“前缀”：在人耳可闻频率范围内以及“可能”影响到该范围 内的频率的信号。这个范围显然缩小了很多，我们知道，人耳的可闻频率范围大约在20～20KHz， 也就是说只要缩小器对这个频率范围内的信号能够达到“标准”即可。实际上，根据研究表明， 高于这个频段以及部分低于这个频段的一些信号虽然“不可闻”，但是仍然会对人的听感产生影 响，因此，这个范围还要再扩大，在现代音频领域中，这个范围通常是5～50KHz,某些高要求的放 大器甚至会达到0.1~数百KHz。 但是，上述要求表面上好像是比“完美”低了很多，却仍然是“不可能完成的任务”，目前我们 连这样的要求也不可能达到。于是，就有了“频响”这个指标。（附言：指标本身就代表着“不 完美”，如果一切都“完美”了，指标也就没有存在的理由了。） 缩小器有两种失真：线性失真和非线性失真。我们通常把后者叫做“失真”，而把前者用其它方 式表达出来。非线性失真我们已经知道了是一种什么情况了。而线性失真就是指频率和相位方面 的“误差”，即频率失真和相位失真。 频率失真及其产生原因 频率失真是一种“线性失真”，意思是说，发生这种失真时缩小器的输出信号波形和输入波形仍 然是“相似形”，它不会使缩小器对要处理的信号产生“形变”。一个单纯的频率失真可以看成 缩小器对于不同频率的信号缩小倍数不同，例如，1个十倍缩小器，对1KHz的信号的缩小倍数是10 倍，而对于10KHz的交流信号可能缩小倍数就变成了9.99倍，于是，我们就可以说这台缩小器有频 率失真了。在电声学上，我们把这种现象称为“频响曲线的不平直”，这里面的“曲线”我们稍

植物生理生化指标测定

小黑豆相关生理指标测定 1.表型变化：鲜重、株高、主根长和叶面积 鲜重：取处理好的植株，擦干根和叶表面水分，测量整株植物的重量，每个测6个重复。 株高：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度，记录，每个测6个重复。 主根长：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到主根最远点长度，记录，每个测6个重复。 叶面积：取处理好的植株，选择第二节段的叶片，测量叶面积，叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长，测叶片最窄处长度作为叶的宽，叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测6个重复。 2.总蛋白、可溶性糖、丙二醛（MDA）和H2O2含量测定 样品处理：取0.5g样品（叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净），速在液氮中冻存，在遇冷的研钵中加液氮研磨，然后加入1.5ml的Tris-HCl（pH7.4）抽提，将抽提液转移到2ml的EP管中，于4℃，12000rpm离心15min，取上清，保存在-20℃下，上清液可用于总蛋白、丙二醛（MDA）、可溶性糖和H2O2含量测定。 总蛋白测定（Bradford法）：样品反应体系（800ul H2O+200ul Bradford+5ul 样品），空白对照为（800ul H2O+200ul Bradford）。测定后带入标准曲线Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量，X代表OD595)，计算得出蛋白含量。 可溶性糖测定：样品反应体系（1ml蒽酮+180ul ddH2O+20ul样品提取液）；空白对照（1ml蒽酮+180ul ddH2O），测定OD625后带入标准曲线：Y=0.0345X+0.0204(Y代表OD625，X代表可溶性糖含量（ug）) 蒽酮配方：称取100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸+30mlH2O）.注意：浓硫酸加入水中时，一点一点递加，小心溅出受伤。 丙二醛（MDA）测定：在酸性和高温条件下，丙二醛可与硫代巴比妥（TBA）反应生成红棕色的3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮，在532nm处有最大吸收波长，但该反应受可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收，但其最大吸收波长在450nm处。采用双组分分光光度法，可计算出MDA含量。MDA的计算公式为：MDA（umol/L）=6.45OD532-0.56OD450. 反应体系为：400ul 0.6%TBA+350ul H2O+50ul样品，80℃水浴10min后，测OD532和OD450。对照用Tris-HCl. 0.6%TBA配方：称取硫代巴比妥0.6g，溶于少量1M NaOH中，待其完全溶解后用10%TCA（称取10gTCA三氯乙酸，溶于100ml蒸馏水中，待其溶解即可）定容至100ml。 H2O2测定（二甲酚橙法）：样品反应体系（82ul溶液A+820ul溶液B （A:B=1:10）+150ul样品提取液），30℃水浴30min，测OD560。标准曲线为:Y=0.01734X-0.0555(Y代表OD560，X代表H2O2含量)

饲料六大指标检测.

饲料、粪便常规指标检测 1.水分 原理:样品在103度烘箱内,在大气压下烘干,直至恒重。遗失的质量为水分。在该温度下干燥,不仅饲料中的吸附水被蒸发,同时一部分胶体水分也被蒸发,另外还有少量其他易挥发物质挥发。 步骤:1.洁净的称样皿(103±2度烘箱中烘30min, 干燥器中冷却30分钟后称重,准确至0.001g.(重复操作,直至2次质量之差小于0.0005g为恒重。 2.分析天平称取5g左右式样到称样皿中(每个样品2个平行,还要2个对照盖子无需盖严,留缝在103度烘箱中烘4h,取出盖好盖子,冷却30分钟称重。标准:GBT 6435-2006 饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定 2.粗灰分 原理:试样在550度灼烧后,所得残渣,用质量分数表示。残渣中主要是氧化物,盐类等矿物质,也包括混入饲料中的沙石,土等,故称粗灰分。 步骤:1.将坩埚于马弗炉中灼烧(550℃,30min,干燥器中冷却至室温后称重,准确至0.001g。 2.称取5克试样放入坩埚(每个样品2个平行,还要2个对照,在电炉上低温炭化至无烟为止。 3.炭化后,将坩埚移入马弗炉中,与550℃下灼烧3h。 4.观察是否有炭粒,如无炭粒,继续于马弗炉中灼烧1h,如果有炭粒或怀疑有炭粒,将坩埚冷却,用蒸馏水润湿,在103℃的干燥箱中仔细蒸发至干,再将坩埚至于马弗炉中灼烧1h,至于干燥器中冷却称重,准确至0.001g。

注意事项:1.样品自然放在坩埚中,勿压,避免样品氧化不足。2.样品开始炭化时,应有坩埚盖,防止损失,并打开部分坩埚盖,便于气流流通。3.炭化时,温度应逐渐上升,防止火力过大而使部分样品颗粒被逸出的气体带走。4.灼烧温度不宜超过600度,否则会引起磷硫等盐的挥发。 标准:GBT6438-2007 饲料中粗灰分的测定 3.粗脂肪 原理:油重法:用乙醚等有机溶剂反复浸提饲料样品,使其中脂肪溶于乙醚,并收集于盛醚瓶中,然后将所有的浸提溶剂加以蒸发回收,直接称量盛醚瓶中的脂肪重,即可计算出饲料样品中的脂肪含量。 步骤:1.索氏提取器干燥处理。抽提瓶(内有数粒沸石——(103±2度烘箱,烘干30分钟——干燥器冷却30分钟——称重——重复操作至两次之差小于0.0008g为恒重。2.试样的称取与烘干。分析天平称试样1.3g——滤纸包——铅笔注明标号——103度烘箱烘干2h——干燥器冷却——称重。(此步骤中,要带手套称重,且保证滤纸包长度可全部浸于石油醚中为准。3.试样的反复抽提。滤纸包——抽提管——抽提瓶加石油醚60~100毫升——60~75度水浴加热——石油醚回流——控制回流速度和时间。(抽提前,先将滤纸包浸泡在石油醚较长时间,可减少抽提时间;一般控制回流10次/h,共回流约50次,本实验中,滤纸包已在石油醚浸泡20h以上,回流(3~4次/h,共回流2h;检查抽提管流出的石油醚挥发后不留下油迹为抽提终点。4.抽提后的烘干称重。取出滤纸包——干净表面皿——晾干——装入称样皿——103度烘箱烘至恒重——称重。 注意事项:1.全部称重操作,样品包装时要带乳胶或尼龙手套。2.测定样品在浸提前必须粉碎烘干,以免在浸提过程中样品水分随乙醚溶解样品中糖类而引起误差。3.除样品需干燥外,索氏提取器也应干燥。4.实验所用提取试剂为石油醚,需要无水,无醇,无过氧化物,否则会使测定结果偏高,或者过氧化物会导致脂肪氧化,在烘干时有引起爆炸的危险。5.加热乙醚或石油醚严禁用明火直接加热。

植物生理生化指标测定(精)

小黑豆相关生理指标测定 1. 表型变化:鲜重、株高、主根长和叶面积 鲜重 :取处理好的植株,擦干根和叶表面水分,测量整株植物的重量,每个测 6个重复。 株高 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度,记录,每个测6个重复。 主根长 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到主根最远点长度,记录,每个测6个重复。 叶面积 :取处理好的植株,选择第二节段的叶片,测量叶面积,叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长, 测叶片最窄处长度作为叶的宽, 叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测 6个重复。 2. 总蛋白、可溶性糖、丙二醛(MDA 和 H2O2含量测定 样品处理:取 0.5g 样品(叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净 ,速在液氮中冻存,在遇冷的研钵中加液氮研磨,然后加入 1.5ml 的 Tris-HCl (pH7.4 抽提, 将抽提液转移到 2ml 的 EP 管中, 于 4℃, 12000rpm 离心 15min , 取上清, 保存在 -20℃下,上清液可用于总蛋白、丙二醛(MDA 、可溶性糖和 H2O2含量测定。 总蛋白测定(Bradford 法 :样品反应体系(800ul H2O+200ul Bradford+5ul样品 , 空白对照为(800ul H2O+200ul Bradford 。测定后带入标准曲线 Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量, X 代表 OD595 ,计算得出蛋白含量。 可溶性糖测定:样品反应体系(1ml 蒽酮 +180ul ddH2O+20ul样品提取液 ; 空白对照 (1ml 蒽酮 +180ul ddH2O , 测定 OD625后带入标准曲线 : Y=0.0345X+0.0204(Y代表 OD625, X 代表可溶性糖含量(ug

植物生理指标检测方法

植物组织中可溶性糖含量的测定 在作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖 一、原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。 二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 任何植物鲜样或干样。 （二）试剂 1. 80 ％乙醇。 2. 葡萄糖标准溶液（100 μg/mL ）：准确称取100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）。 3 ．蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL 中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周。 （三）仪器设备 分光光度计，分析天平，离心管，离心机，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管（ 5 、 1 、0.5 mL ），剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸。 三、实验步骤 1. 样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ～ 1.0 g （或干样粉末 5 ～100 mg ），放入大试管中，加入15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min ，取出冷却，过滤入100 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2. 标准曲线制作取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按表 24-1 加入各试剂。 表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量 将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10 min ，取出冷却，在620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（ μg ）为横坐标绘制标准曲线。 3 ．样品测定取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ，同以上操作显色测定光密度。重复 3 次。

各生理指标的测定方法

各生理指标的测定方法 一、脯氨酸含量的测定 1.茚三酮法 1.1原理 在正常环境条件下，植物体内游离脯氨酸含量较低，但在逆境（干旱、低温、高温、盐渍等）及植物衰老时，植物体内游离脯氨酸含量可增加10-100倍，并且游离脯氨酸积累量与逆境程度、植物的抗逆性有关。 用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。 1.2步骤 试剂：（1）25%茚三酮：茚三酮------------0.625g 冰乙酸------------15ml 6mol/L磷酸--------10ml 70°C水浴助溶； （2）6mol/L磷酸：85%磷酸稀释至原体积的2.3倍； （3）3%磺基水杨酸：磺基水杨酸------3g 加蒸馏水至------100ml 实验步骤： （1）称取0.1g样品放入研钵，加5ml 3%磺基水杨酸研磨成匀浆，100°C沸水浴15min； （2）冰上冷却，4000rpm离心10min； （3）提取液2ml+冰醋酸2ml+25%茚三酮2ml混合均匀，100°C沸水浴30min，冰上冷却； （4）加4ml甲苯混合均匀，震荡30s，静置30min； （5）以甲苯为空白对照，再520nm下测定吸光值。 1.3计算方法 脯氨酸含量（μg/gFW）＝ X * 提取液总量（ml）/ 样品鲜重（g）*测定时提取液用量（ml）*10^6 公式中：X-----从标准曲线中查得的脯氨酸含量（μg） 提取液总量---------------------------5ml 测定时提取液用量---------------------2ml 问题及质疑： 1.酸性体系下，脯氨酸与茚三酮加热反应后的最终产物为红色，再实验过程中，仅有少数时候能发现红色产物。原因有待确定。 2.经查看文献资料，反应步骤已经是优化的，没有问题。甲苯萃取脯氨酸与茚三酮的反应产物，消除了多余未反应的茚三酮，磺基水杨酸，提取液中其他杂质（如色素）以及PH变化

金属常规力学指标测试

实验一金属常规力学指标测定 一、实验目的 1、掌握金属材料常规力学指标的测试方法。 2、掌握各个常规力学指标的作用及意义。 3、了解各个指标的相互关系。 4、熟悉所用测试仪器及设备的原理和操作使用。 二、实验方法及采用标准 1、金属拉伸试验标准GB/T 2、金属冲击试验标准GB/T 229-2007 3、金属扭转试验标准GB/T 10128-2007 三、实验数据处理 1、依据国家标准，分别计算各个力学参数指标。 （一）金属拉伸实验标准GB/T 材料的弹性、强度、塑形、应变硬化和韧性等许多重要的力学性能指标统称为拉伸性能，它是材料的基本力学性能。拉伸实验是标准拉伸试样在静态轴向拉伸力不断作用下以规定的拉伸速度拉至断裂，并在拉伸过程中连接记录力与伸长量，从而求出其强度判据和塑性判据的力学性能试验。 （1）试验要求 1)原始标距的标记 对于比例试样，应将原始标距的计算值修约至最接近5mm的倍数，中间数值向较大一方修约。标距的标记应精确到取值数值的 1%。 2)原始横截面积的测定 圆形截面试样应在试样工作段的两断及中间处两个相互垂直的方向上各测一次直径，取其算术平均值，选用三处测得横截面积中的最小值。 （2）拉伸性能的测定 利用试验机的绘图装置得到力-位移关系曲线，如下： 图1 拉伸试验力-位移曲线

1)断后伸长率测定 为了测定断后伸长率，应将试样断裂的部分仔细地对接在一起使其轴线处于同一直线上，并采取特别措施确保试样断裂部分适当接触后测量试样断后标距。按下式计算断后伸长率A： 式中：L o—原始标距；L u—断后标距。 应使用分辨力足够的量具或测量装置测定断后伸长量L u- L o，并精确到±。 0.25mm 2)断面收缩率的测定 将试样断裂部分仔细地配接在一起，使其轴线处于同一直线上。断裂后最小横截面积的测定应准确到2% ±。原始横截面积与断后最小横截面积之差除以原始横截面积的百分率得到断面收缩率，按下式计算： 式中：S o—平行长度部分的原始横截面积；S u—断后最小横截面积 3)抗拉强度的测定 对于呈现明显屈服现象的金属材料，从记录的力-位移图，读取屈服阶段之后的最大力。最大力除以原始横截面积得到抗拉强度。 4)屈服强度的测定 对有明显屈服现象的材料，应测定其上、下屈服强度。上、下屈服强度的判定采用以下基本原则： i.屈服前的第一个峰值应力为上屈服强度，不管其后的峰值应力比它大 或者比它小。 ii.屈服阶段中如果呈现两个或两个以上的谷值应力，舍去第一个谷值应力不计，取谷值应力中最小者判为下屈服强度。 iii.屈服阶段中呈现屈服平台，平台应力判为下屈服强度；如呈现多个而且后者高于前者的屈服平台，判第一个平台应力为下屈服强度。 iv.正确的判定结果应该是下屈服强度低于上屈服强度。 试验时记录力-位移曲线，从曲线图读取力首次下降前的最大力和不计初始瞬时效应时屈服阶段中的最小力或屈服平台的恒定力，将它们分别除以试样原始横截面积得到上屈服强度和下屈服强度。 上屈服强度： 下屈服强度： （3）试验结果数值的修约 1)强度性能值修约至1MPa。 2)屈服点延伸率修约至%，其他延伸率和断后伸长率修约至%。 3)断面收缩率修约至1%。

测生理指标的方法

实验路线及安排：项目主要在晋西北地区展开区域化试验，供试品种4个，均为当年生扦插苗,每个品种15株，采用完全随机区组设计进行，其中包 括4个处理，3个重复。所测定内容包括12项生理指标在相应部位(根、茎、叶)的年变化规律，并从形态、生理和生物化学方面对其抗寒抗旱性机理进行 研究探讨。 在每个小区分别选健康植株2株，每株取其中上部位叶片1-2片，组成混 合样，编号,带回实验室用一部分样品进行抗旱指标测定,其余样品放入冰箱低 温处理，处理温度为0℃、-10℃，-20℃，然后进行抗寒指标测定,每月采样 一次。根的取样方法为每个小区分别选健康植株10株，挖出其部分根系组成 混合样,处理方法同叶片；茎的取样方法为选健康植株10株，取其上部嫩茎组 成混合样，处理方法同上。2009年10月-2010年3月对所选材料进行人工 低温干旱处理,完成相关实验指标的测定工作。低温处理通过相对电导率及相 关指标评价其抗寒性；干旱处理是通过对所栽品种进行适宜土壤水分、中度干旱、严重干旱条件的人为处理，测定杨树的蒸腾速率和相应指标，评价其抗旱性。 实验方法 一．光合效率、气孔导度、蒸腾速率三项指标用光合仪直接测定； 二．水势（小液流法） 1.取10个干净的试管，分成A组和B组，都贴上0.05mol/L、0.1 mol/L、 0.15 mol/L、0.2 mol/L、0.3 mol/L 6个不同浓度标签，并向这两组试管中分别移 取相应浓度的CaCl 2 溶液4mL。 2.取待测叶子数片，用打孔器在其上均匀打孔，混匀，将其分别装入A组试 管（每支试管装10片），摇匀，滴入一滴相同浓度的甲烯蓝溶液，再摇匀。 3.用干净的毛细移液管，吸取1～2滴蓝色溶液，小心的插入装着相同浓度的 B组试管中部，轻轻的挤出一滴蓝色溶液，观察蓝色液滴流动方向。 按下公式计算植物组织水势：Ψ=-iRTC 式中：Ψ为植物组织水势（MPa）；C为CaCl2溶液的摩尔浓度（mol/L）；R为摩尔气体常数，0.008314MPa·L/mol·K；T为热力学温度（K），即273+t(t为当时摄 氏温度)；I解离常数（CaCl 2 =2.6） 三．叶绿素含量（直接浸提法） 80％的丙酮液的配制：4L丙酮 + 1L蒸馏水。 称0.5g左右的叶片放在50ml的离心管（做三个重复），加入25ml浓度为80％的丙酮液，放在黑暗处浸提大约36小时后取出，稀释4倍后分别在波长663nm、645nm、652nm下测定光密度，以80％的丙酮液为空白。 按下列公式计算样品中叶绿素含量。 C A =12.72A 663 -2.59A 645 (1) C B =22.88A 645 -4.67A 663 (2) C T =C A +C B =A 652 ×1000/34.5 (3)在652nm时可一次测出叶绿素总含量 mg/g FW）=(CV T /FW×1000)n (4) 以上公式中，C A 、C B 、C A+B 分别为叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b的浓度（mg/L）； FW为鲜重(g)；C：叶绿体色素的浓度；V T 为提取液总体积(mL)；n为稀释倍数。

生长发育生理功能指标的测量讲义.

生长发育生理功能指标的测量 一、测量脉博 测量工具：秒表、带秒针的手表或钟表。 测量方法： 由于脉搏受体力活动和情绪变化的影响较大，因此，应在安静状态下进行测量。 1. 受测者取坐位，右前臂平放在桌面，手心向上。 2. 测量者坐在对面或右侧，用食指、中指和无名指的指端触压受测者手腕部的桡动脉。 3. 测量前要先确定受测者为安静状态。即以10秒钟为单位，连续测量三个10秒钟的脉搏，若其中两次测量值相同并与另一次相差不超过一次时，即可认为受测者处于相对安静状态；否则应适当休息，直至符合要求。 4. 测1分钟的脉搏数。记录以次/分为单位。 注意事项： 1. 测量前1～2小时内，受测者不要进行剧烈的身体活动。 2. 测量前，受测者要静坐10分钟以上，互相不要打闹，保持情绪安定。 3. 触诊时，应特别注意脉搏的频率和节律与心跳的一致性。 二、测量血压 测量工具：台式水银血压计、听诊器，电子血压计（分臂式和腕式两种）。 测量方法： 由于血压受活动、体位变动、情绪等因素的影响较大，因此，在进行测量时应在安静状态下进行，通常用台式水银血压计测量右臂血压。 1. 校验 （1）打开血压计之后，扳开水银阀门，看看水银柱是否处于“0”刻度，如果不是，则应当进行校准，否则会影响测出的数值。还要观察水银柱有无气泡，如有气泡应予以排除。 （2）将球囊的开关关闭，一手压住袖带，另一手捏球囊向袖带内充气，看看水银柱是否会随

之升高，或者是否有水银中断的现象。如果不能上升或是有裂隙，就说明该血压计有漏气的情况，或者是水银量有所减少，这样的血压计就不能再用来测量了。 2. 测量 （1）受测者取坐位，右臂自然前伸，平放在桌面，掌心向上，使上臂与血压计、心脏基本处于同一水平。 （2）测量者将袖带内的空气排尽后，平整地缠在受测者的上臂，袖带下缘距肘窝2～3厘米，松紧适度，以能伸进两个手指为宜。 （3）在肘窝内侧摸到肱动脉跳动后，将听诊器的探头放在肱动脉上，使其与皮肤密切接触。切不可贪图方便省事而将其塞到袖带里面，这样会使测出的血压值比实际要高。 （4）戴好听诊器，关闭球囊开关，打气入带，使水银柱上升至肱动脉的搏动音消失，接着再往里充气，使水银柱继续上升20～30毫米汞柱。双眼保持与水银柱刻度平视。 （5）打开球囊开关，使水银柱缓缓下降，同时仔细听诊，当听到第一次脉跳声时，水银柱所指刻度便是收缩压；继续边放气边听，当声音突然变弱或消失时，水银柱所指刻度就是舒张压。 （6）放松球囊阀门，使水银柱回到零位。2分钟后，进行重测，取2次测量的平均值。记录以毫米汞柱（mmHg）为单位。如果2次测量的收缩压或舒张压读数相差>5mmHg，则相隔2分钟后再次测量，然后取3次读数的平均值。 3. 整理 测量结束后，取下袖带，挤压排尽空气，关闭球囊的开关，折叠好之后放入盒子里。一定不要忘记将血压计的盒盖向右倾斜45度，使水银完全回流槽内，再关闭水银槽的开关，阖上盒盖。如果不将水银回流，就会导致下一次使用时水银柱出现断裂，水银的挥发也会变得很快。 注意事项： 1. 测前1～2小时内，受测者不要进行剧烈的活动。 2. 测前让受测者静坐10～15分钟，稳定情绪，接受测试。 3. 测试前应检查和校正血压计的水银柱。 4. 必须选择宽度合适的袖带，以覆盖受测者上臂长的1/2～2/3为宜。袖带过宽测出血压偏低，过窄则偏高。7岁以下儿童常用8cm宽的袖带。 5. 测量时受测者需裸露手臂或只穿贴身薄衣。袖口太紧或衣服太多会导致血压值偏高。 三、测量肺活量 测量工具：浮筒式（湿式）肺活量计，电子肺活量仪。

植物生理学实验指导

植物生理学实验指导主编胡君艳陈国娟张汝民 浙江农林大学植物学科 2013年8月

实验一植物组织水势的测定 水势与渗透势的测定方法可分为3大类：⑴液相平衡法，包括小液流法、重量法测水势，质壁分离法测渗透势；⑵压力平衡法（压力室法测水势）；⑶气相平衡法，包括热电偶湿度计法、露点法等。 Ⅰ小液流法 【实验目的】 了解采用小液流法测定植物组织水势的方法。 【实验原理】 水势表示水分的化学势，像电流由高电位处流向低电位处一样，水从水势高处流向低处。植物体细胞之间，组织之间以及植物体和环境间的水分移动方向都由水势差决定。 当植物细胞或组织放在外界溶液中时，如果植物的水势小于溶液的渗透势（溶质势），则组织吸水而使溶液浓度变大；反之，则植物细胞内水分外流而使溶液浓度变小；若植物组织的水势与溶液的渗透势相等，则二者水分保持动态平衡，所以外部溶液浓度不变，而溶液的渗透势即等于所测植物的水势。可以利用溶液的浓度不同其比重也不同的原理来测定试验前后溶液的浓度变化，然后根据公式计算渗透势。 【实验器材与试剂】 1.实验材料：八角金盘、大叶黄杨等。 2.实验试剂：0.05、0.10、0.15、0.20、0.30mol·L-1蔗糖溶液、甲烯蓝溶液。 3.实验仪器：试管10支、微量注射器、镊子、打孔器、垫板。 【实验步骤】 1.取干燥洁净的试管5支为甲组，标记1~5，各支中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液5mL。另取5支干燥洁净的试管为乙组，标记1'~5'，各试管中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液2ml。 2.取待测样品的功能叶数片，用打孔器打取小圆片约50片（避开叶脉），混合均匀。用镊子分别夹入10个小圆片到乙组试管中。并使叶圆片全部浸没于溶液中。放置约30~60min，为加速水分平衡，应经常摇动试管。 3.到时间后，在乙组试管中加入甲烯蓝溶液1~2滴，并用微量注射器取各试管糖液少许，将注射器插入对应浓度甲组试管溶液中部，小心地放出一滴蓝色溶液，并观察蓝色小液流的

生理指标测定

生理指标测定_16种 1、冻害指数——3~5株观察形态 【４种常绿水生鸢尾抗寒性的初步研究】张京，2012 李刚，姜卫兵，翁忙玲，等．木兰科６种常绿树幼苗抗寒性的初步研究［Ｊ］．园艺学报，２００７，３４（３）：７８３－７８６． 描述叶色变化： 在最冷月( 2月中旬) , 所有供试树种均有不同程度的冻害表现, 乐东拟单性木兰受冻害最轻,只有部分植株的少量叶片有些许水渍状, 大部分植株完好无损, 冻害指数为041, 基本不受冻害;阔瓣含笑也长势良好, 有少部分叶片出现褐色水渍状, 冻害指数为14, 受轻度冻害; 金叶含笑受到了中度水平的冻害, 部分植株的叶片整个叶面呈现红褐色水渍状, 冻害指数为25; 红花木莲、醉香含笑和观光木受到了重度冻害, 大多数植株的部分叶片呈焦黄、褐色脱落, 有的整个植株呈萎蔫状,长势非常差, 冻害指数分别为3.2、3.9、4.3. 2、相对含水量 叶片相对含水量采用饱和称重法［21］测定。选取各处理部位一致、成熟完好的叶片迅速称其鲜重，再用蒸馏水浸泡8~24 h，使组织吸水达到饱和状态，取出后吸去表面水后立即称其饱和重，然后在105 ℃下杀青30min，在80 ℃下烘干至恒重（1h~24h），放在干燥器中冷却，称其烘干重。根据公式计算:LRWC( %) = [ (鲜重－干重) /(饱和重－干重) ] × 100%

3、光合参数（光合仪测定） 光合速率、CO2浓度、光合有效辐射、叶绿素 或用95%乙醇浸泡法，浸泡4~5d，测定叶绿素。《植物生理生化实验原理和技术》 4、膜质过氧化：相对电导率（略）、MDA MDA（丙二醛）的测定 试剂：三氯乙酸10% （TCA 溶液）：称取100g溶于1L 蒸馏水中； 0.6％硫代巴比妥酸溶液（6%TBA）：1.8g溶于300ml TCA 溶液中（加热溶解） 称取植物叶片0.3克, 先加入2ml TCA和少量石英砂研磨至匀浆，再加入4ml 10%三氯乙酸(TCA)进一步研磨（总体积为6ml），然后以4000g离心10min, 取上清液待测。吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水)，加入2ml 0.6% TBA，混匀物于沸水浴上反应15分钟，迅速冷却后再离心(在冰箱中冷却较快)。取上清液测定在532，600和450nm波长下比色。 公式C MDA (nmol L-1)＝[(A532－A600)-0.0571×(A450-A600)]/0.155计算MDA量（排除多糖干扰），用每克干（鲜）重中MDA的量表示MDA的含量，单位μmol g-1干（鲜）重或nmol g-1干（鲜）重。 1、含量计算 双组分光光度计法：已知蔗糖与TBA反应产物在450nm和532nm波长下的比吸系数分别为 85.40,7.40；MDA与 TBA显色反应产物在450nm波长下无吸收，其吸收系数为0，532nm下比吸 收系数为155，根据双组分光光度计法建立方程组，计算公式如下： C 1（mmol/L）=11.71 D 450 C 2 =[6.45(D 532 —D 600 ) — 0.56 D 450 ]X提取液总体积/测定时用的提 取液体积*样品鲜重 C 1:可溶性糖的浓度, C 2 为MDA的浓度, D 450 D 532 D 600 分别代表450,532,600nm下的消光度值. 参：Brege J G.Microsomal lipid peroxiodation. Methods in Ezymmology.1978,52:302-306 J.G. Buege and S.D. Aust, Microsomal lipid peroxidation. Methods Enzymol.52(1978), pp. 302–306. 注: 沸水浴时,可使用小试管,然后上部用保鲜膜包扎.(如橡皮筋) 附4.1 MDA、可溶糖含量—硫代巴比妥酸加热显色法 【原理】植物遭遇逆境胁迫或衰老过程中，由于自由基、活性氧的积累引起膜脂过氧化，产生脂质自由基，进一步诱发膜脂连续过氧化并导致蛋白质交联变性，而引起细胞损伤或死亡。MDA 是膜脂过氧化的最终产物，通过其含量的测定可了解膜脂氧化伤害的程度，比较不同植物抗逆性的差异。 在酸性和高温条件下，MDA可与硫代巴比妥酸（TBA）反应，生成红棕色的产物三甲川（3，5，5-三甲基恶唑2，4-二酮）。该产物在532nm处有最大吸收峰，测定反应产物在532nm处的光密度值，可计算出MDA含量。但植物组织中的可溶性糖亦与TBA产生颜色反应，其产物对532nm 光的吸收干扰测定。采用双组分光光度法及其计算式，可排除干扰，计算出MDA的含量。 【器材】分光光度计离心机水浴锅研钵剪刀试管

水处理常规指标测定方法

三、项目指标测定方法 1、COD含量 （1）测定步骤 a)估算水样中COD的含量，决定取样的体积，一般取5ml； b)取适量样品（含两个空白样品）于COD消解罐中，加入约0.3g掩蔽剂（HgSO4）、 3.0 mL消解液、5.0 mL催化剂； c)将消解罐摇晃均匀，放入COD消解仪中消解相应时间； d)自然冷却后用蒸馏水润洗消解罐，将罐中液体移入250ml锥形瓶中，保证液体 体积约20mL-30ml左右。加入三滴指示剂； e)用硫酸亚铁铵标准溶液滴定至锥型瓶颜色转为暗红色即可； f)记录、存档、分析； （2）试剂配置： a)重铬酸钾标准溶液（1/6K2CrO7）：称取经120℃烘干2h的基准或者优纯级 K2Cr2O7 4.903g，用少量水溶解，移入1000mL的容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀； b)硫酸亚铁铵标准溶液：称取39.2g分析纯级溶解于水中，加入浓硫酸，冷却后移 入1000mL容量瓶中，用水稀释至标线，临用前用1.000mL的K2Cr2O7的标准溶液标定； c)消解液：称取19.6g重铬酸钾，50.0g硫酸铝钾，10.0g钼酸铵，溶解于500mL 水中，加入200mL浓硫酸，冷却后转移至1000mL的容量瓶中，用水稀释至标线。该溶液重铬酸钾浓度约为0.4moL/L； COD值不同水样应选择不同浓度K2Cr2O7消解液 COD（mg/L）<50 50~1000 1000~2500 消解液中K2Cr2O7 0.05 0.2 0.4 浓度（mol/L） K2Cr2O7质量 2.45 9.8 19.6 d)催化剂：称取8.8g 分析纯Ag2SO4，溶解于1000mL浓硫酸中； e)指示剂：称取0.695g分析纯FeSO4·7H2O和1.4850g邻菲罗啉溶解于水中稀释至 100mL，贮存于棕色瓶中待用； f)掩蔽剂：称取10.0g分析纯HgSO4，溶解于100 mL10%硫酸中；