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胡萝卜粉中类胡萝卜素含量的快速测定

胡萝卜粉中类胡萝卜素含量的快速测定
胡萝卜粉中类胡萝卜素含量的快速测定

新疆农业科学2004,41(专刊):103~105

Xinjiang Agricultural Sciences

胡萝卜粉中类胡萝卜素含量的快速测定

陈洁1,解晓霞2,庞咏梅2,丁海燕2,王先云3

(1.乌鲁木齐神内生物制品有限公司,新疆乌鲁木齐830001;2.新疆冠农天府果蔬食品有限责任公司,新疆库尔勒841000;3.乌鲁木齐市绿金啤酒花有限公司,新疆乌鲁木齐830001)

摘要:在GB12291-90的基础上,利用萃取剂(氯仿:甲醇(v/v)=2:1)对胡萝卜粉中的类胡萝卜素进行提取,并以萃取剂作为空白,确定其提取液的λmax为458nm。

关键词:胡萝卜粉;类胡萝卜素;快速测定

生产加工胡萝卜制品的企业多以胡萝卜浓缩汁、胡萝卜原浆及胡萝卜系列饮料为主,还有利用生产浓缩汁排出的废料—胡萝卜渣经烘干、磨粉而制得的胡萝卜粉制品。胡萝卜粉中富含了大量的类胡萝卜素、膳食纤维、果胶等物质,具有很高的经济价值。胡萝卜制品中的类胡萝卜素含量的高低成为评价该产品质量高低的重要指标之一。在检测该指标的众多方法中,多以层析法、色谱法居多,简易快速的方法很少,尤其是胡萝卜粉这类干制品,目前还没有完整的试验方法。实践工作中,依据GB/T12291-90的原理并借此基础,总结出一套快速、简易且较准确的方法以适宜生产检验的需要。

1材料与方法

!.!材料

胡萝卜粉(原料胡萝卜经破碎、榨汁后的湿渣再经烘干、磨粉制得,细度为80目过筛率大于60%)。!."仪器

723分光光度计、AE200电子分析天平、50ml具塞量筒(或具塞比色管)、直径为7.5cm的波纹漏斗、直径为12.5cm的快速滤纸、100ml棕色容量瓶、四孔漏斗架。

2检测方法

类胡萝卜素性状不稳定,见光易氧化分解,故操作时应避光。

".!萃取

准确称取试样约0.2g(精确至0.1mg)于50ml具塞量筒中,以少量水浸润样品,待粉样被充分浸透、膨胀后,加入20ml萃取剂振摇数次,在振摇过程中注意旋盖放气,勿将样液溅出,于暗处放置2min 左右,取出再振摇1~2min,静置1min,待过滤。

将直径15cm的快速滤纸置于波纹漏斗中(滤纸应高出漏斗边沿1~2mm),先用少量萃取剂润湿滤纸,使之与漏斗紧密贴切,再用少量萃取剂清洗漏斗,弃去滤液。

将前述待过滤的萃取液转入漏斗(转移时,尽量将试样移入漏斗底部),随即用装有萃取剂的洗瓶快速洗涤具塞量筒3~4次至筒壁完全干净,并自上而下快速以螺旋状洗涤漏斗,致使试样全部集中于漏斗底部,盖上滤纸,待滤液完全滤干后,再用洗瓶洗涤样品,反复洗涤过滤数次(每次滤液完全滤净后再进行下一次的洗涤和过滤),直至被萃取的试样呈白色为止,全部滤液收集于棕色容量瓶中,以萃取剂定容至刻度,摇匀待比色。

"."波长

以萃取剂作空白,用1cm比色皿,在430~490nm波长内测定吸光值。以波长为横坐标,吸光值为纵坐标绘制标准曲线,以选择最大吸收峰。可见λ在456~458nm内吸光值达到最大,记录该波长下的吸光值A。图1

3组6个样品的试验结果及每一个样品所对应的标准曲线。表1

表16个样品试验结果及样品所对应的标准曲线

波长(λ)A1A2A3A4A5A6

4300.6930.6950.7170.7284310.7010.7010.7260.7384320.7080.7120.7300.7454330.7120.7170.7420.7544340.7190.7210.7520.7624350.7240.7280.7520.7674360.7280.7300.7570.7724370.7300.7350.7590.7754380.7350.7400.7670.7804390.7420.7470.7720.7854400.7450.7500.7770.7904410.7540.7590.7850.7990.7010.8274420.7620.7670.7900.8070.7100.8334430.7720.7770.8010.8150.7190.8424440.7830.7880.8120.8270.7260.8514450.7960.7990.8210.8390.7380.8634460.8070.8100.8330.8480.7470.8764470.7150.8180.8450.8600.7590.8864480.8300.8360.8570.8730.7670.8964490.8420.8480.8730.8860.7770.9074500.8540.8570.8830.9000.7900.9174510.8630.8700.8930.9100.8010.9324520.8730.8760.9000.9170.8120.9434530.8830.8860.9140.9280.8210.9514540.8890.8960.9170.9360.8270.9594550.8960.9000.9170.9390.8330.9634560.9000.9030.9210.9390.8360.9674570.9000.9030.9210.9390.8390.9674580.9000.9030.9210.9390.8390.9674590.8960.9030.9140.9360.8360.9634600.8890.8960.9100.9280.8330.9594610.8860.8890.9030.9210.8270.9554620.8760.8830.8960.9140.8210.9474630.8700.8730.8860.9070.8120.9364640.8600.8630.8760.8930.8040.9244650.8510.8540.8660.8830.7930.9174660.8420.8450.8540.8730.7850.9074670.8330.8360.8450.8630.7770.8964680.8210.8270.8360.8540.7670.8834690.8120.8180.8270.8450.7590.8734700.8070.8070.818

0.836

0.752

0.863

4710.7990.8014720.7930.7964730.7880.7934740.7850.7904750.7850.7884760.7850.7904770.7850.788478

0.788

0.790

?401?新疆农业科学

41卷

续表1

波长λA1A2A3A4A5A6 4790.7880.790

4800.7880.796

4810.7900.793

4820.7900.793

4830.7900.790

4840.7850.785

4850.7770.780

4860.7720.775

4870.7640.767

4880.7520.754

4890.7380.740

4900.7210.724

图1430~490nm波长测定吸光值

!."结果表示及计算类胡萝卜素含量

用mg/kg表示,按下式计算:

类胡萝卜素含量(mg/kg)=A?400 m

式中:A:测定的最大吸光度

400:换算系数

m:试样称取量,g

!.#允许差

连续两次测定,其结果相对偏差不得超过5%。

?

5

1

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专刊陈洁等:

胡萝卜粉中类胡萝卜素含量的快速测定

胡萝卜粉中类胡萝卜素含量的快速测定

新疆农业科学2004,41(专刊):103~105 Xinjiang Agricultural Sciences 胡萝卜粉中类胡萝卜素含量的快速测定 陈洁1,解晓霞2,庞咏梅2,丁海燕2,王先云3 (1.乌鲁木齐神内生物制品有限公司,新疆乌鲁木齐830001;2.新疆冠农天府果蔬食品有限责任公司,新疆库尔勒841000;3.乌鲁木齐市绿金啤酒花有限公司,新疆乌鲁木齐830001) 摘要:在GB12291-90的基础上,利用萃取剂(氯仿:甲醇(v/v)=2:1)对胡萝卜粉中的类胡萝卜素进行提取,并以萃取剂作为空白,确定其提取液的λmax为458nm。 关键词:胡萝卜粉;类胡萝卜素;快速测定 生产加工胡萝卜制品的企业多以胡萝卜浓缩汁、胡萝卜原浆及胡萝卜系列饮料为主,还有利用生产浓缩汁排出的废料—胡萝卜渣经烘干、磨粉而制得的胡萝卜粉制品。胡萝卜粉中富含了大量的类胡萝卜素、膳食纤维、果胶等物质,具有很高的经济价值。胡萝卜制品中的类胡萝卜素含量的高低成为评价该产品质量高低的重要指标之一。在检测该指标的众多方法中,多以层析法、色谱法居多,简易快速的方法很少,尤其是胡萝卜粉这类干制品,目前还没有完整的试验方法。实践工作中,依据GB/T12291-90的原理并借此基础,总结出一套快速、简易且较准确的方法以适宜生产检验的需要。 1材料与方法 !.!材料 胡萝卜粉(原料胡萝卜经破碎、榨汁后的湿渣再经烘干、磨粉制得,细度为80目过筛率大于60%)。!."仪器 723分光光度计、AE200电子分析天平、50ml具塞量筒(或具塞比色管)、直径为7.5cm的波纹漏斗、直径为12.5cm的快速滤纸、100ml棕色容量瓶、四孔漏斗架。 2检测方法 类胡萝卜素性状不稳定,见光易氧化分解,故操作时应避光。 ".!萃取 准确称取试样约0.2g(精确至0.1mg)于50ml具塞量筒中,以少量水浸润样品,待粉样被充分浸透、膨胀后,加入20ml萃取剂振摇数次,在振摇过程中注意旋盖放气,勿将样液溅出,于暗处放置2min 左右,取出再振摇1~2min,静置1min,待过滤。 将直径15cm的快速滤纸置于波纹漏斗中(滤纸应高出漏斗边沿1~2mm),先用少量萃取剂润湿滤纸,使之与漏斗紧密贴切,再用少量萃取剂清洗漏斗,弃去滤液。 将前述待过滤的萃取液转入漏斗(转移时,尽量将试样移入漏斗底部),随即用装有萃取剂的洗瓶快速洗涤具塞量筒3~4次至筒壁完全干净,并自上而下快速以螺旋状洗涤漏斗,致使试样全部集中于漏斗底部,盖上滤纸,待滤液完全滤干后,再用洗瓶洗涤样品,反复洗涤过滤数次(每次滤液完全滤净后再进行下一次的洗涤和过滤),直至被萃取的试样呈白色为止,全部滤液收集于棕色容量瓶中,以萃取剂定容至刻度,摇匀待比色。 "."波长 以萃取剂作空白,用1cm比色皿,在430~490nm波长内测定吸光值。以波长为横坐标,吸光值为纵坐标绘制标准曲线,以选择最大吸收峰。可见λ在456~458nm内吸光值达到最大,记录该波长下的吸光值A。图1 3组6个样品的试验结果及每一个样品所对应的标准曲线。表1

胡萝卜含量最高的食物

胡萝卜是α-胡萝卜素含量最高的食物 胡萝卜素可防治智力缺陷。食用富含胡萝卜素的食物可防止记忆衰退及其他神经功能损害。胡萝卜素是抗氧化剂,它还可以防治智力缺陷。富含胡萝卜素的食物有:油菜、荠菜、苋菜、胡萝卜、花椰菜、甘薯、南瓜、黄玉米等。 紫菜、甜瓜、胡萝卜、柑橘、红薯、南瓜、柿子、木瓜、橙子、肝、牛奶、蛋黄、鱼类等。 说到这里,人们肯R*定要问,这个可爱的α-胡萝卜素,它到底来自于哪里呢?我查询了美国农业部食物数据库,发现α-胡萝卜素含量最高的食物,仍然是胡萝卜。 如果比β-胡WP-WbllbZRIxwoxGavsw$IDxKMLZbwsd萝卜素的含量,胡萝卜当然是冠军,但其他深Imu zrj绿色叶菜也相当出色,比如菠菜、苋菜,差距 9%vIZEhZO68e v9u6obfUg并不是太大。但是,若论α-胡萝卜素的含量 4!YBEoXioacTx1t#NUO7bb*pZhu-1e&LY380$Ve@jdXad-h^aYhkr-L,胡萝卜素的数据绝对让其他食物望尘莫及。o&95#up%9clD((C5以下是α-胡萝卜素的主要食物来源: 生胡萝卜:3.48mg/100g;煮胡萝卜(不加盐):3.77mg/100g;脱水胡萝卜:14.25mg/ 100g;胡萝卜汁(灭菌罐装):4.34mg/100g牙不齐 南瓜:0.52;豆角:0.13mg;橘子:0.111;黄玉米:0.063;香菜: 0.044;柿子:0.013;橙子:0.3 芒果:0.009;木瓜:0.002 看了这些数据就能明白,胡萝卜还是一种非常优秀的蔬菜。需要提示的是,α-胡萝卜素并不怕蒸煮温度,把胡I9me-萝卜放在肉汤里煮,只要连汤喝掉,并不会引起α-胡萝卜素的明显损失。相反,熟吃才更有利于各种类胡萝卜素的吸收,只要少量的油脂就能达到充分吸收的效果。牙齿排列不整齐 虽然现在很多蔬菜都明显涨价,胡萝卜的价格仍然处于较为低廉的位置。经常把它请进家门,既经济,又健康,无论炖、煮、炒、蒸都相当美味,实在是当今生活中难得的幸事......唯一需要小心的,就是贪吃太多有可能让皮肤染黄,

植物叶绿素类胡萝卜素测定方法

植物叶绿素类胡萝卜素测定方法 叶绿素、类胡萝卜素含量的测定 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比,即A,αCL式中:α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位,液层厚度为1cm时,α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质,则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量,只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A,并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰,所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 二、材料、仪器设备及试剂 (一)材料:新鲜(或烘干)的植物叶片。 (二)仪器设备:1)分光光度计;2)电子顶载天平(感量0.01g);3)研钵;4)棕色容量瓶; 5)小漏斗;6)定量滤纸;7)吸水纸; 8)擦境纸;9)滴管。 (三)试剂:1)95%乙醇(或80%丙酮)(v丙酮:v乙醇=2:1的95%水溶液);2)石英砂;3)碳酸钙粉。暗中2h,0.5g,25ml 三、实验步骤 1)取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料,擦净组织表面污物,剪碎(去掉中脉),混匀。

2)将取好的样品放入25ml容量瓶中,加混合浸提液(无水乙醇:丙酮 =5:5)20ml,放在黑暗条件下,浸泡至叶片发白,用浸提试剂定容至25ml,摇匀备用。 3)把叶绿体色素提取液倒入1cm光径的比色皿内,以浸提试剂为空白测定吸光度。选择波长663 646 和470nm。 四、实验结果计算 叶绿素a的浓度 = 12.21 , OD– 2.81 , OD 633 646 叶绿素b的浓度 = 20.13 , OD– 5.03, OD646663 类胡萝卜素浓度=(1000A-3.27C-104C)?229 单位 mg/L 470ab C(mg/L)*提取液总量(ml) 叶绿体色素含量(mg/g)= ____________________________ 烟叶重量(g)*1000 注意事项:操作避光研磨时间短些

水果蔬菜汁类胡萝卜素含量的测定

水果、蔬菜汁类胡萝卜素含量的测定 1 主题内容与适用范围 本标准规定了水果、蔬菜汁中类胡萝卜素的分离提取方法及提取物中类胡萝卜素总量的测定方法。 本标准适用于水果、蔬菜汁中类胡萝卜素总量的测定。 2 原理 果蔬滤液通过溶剂萃取,分离提取类胡萝卜素,在特定波长下用分光光度法测其吸光度。该吸光度与类胡萝卜素含量成线性关系,通过换算即可得知类胡萝卜素之含量。 3 试剂和溶液 本标准所用试剂除特殊规定外,均使用符合国家标准的分析纯试剂,均采用蒸馏水。 3.1 石英砂(Q/HG 22--467); 3.2 萃取剂,2/1(v/v)氯仿(GB 682)-甲醇(GB 683)混合。 4 仪器设备 4.1 抽滤器; 4.2 无灰分滤纸; 4.3 分液漏斗:250mL; 4.4 容量瓶,100mL; 4.5 移液管,20mL; 4.6 烧杯,50mL; 4.7 分光光度计,使用的测量波长为440±10nm。 5 分析步骤 注:由于类胡萝卜素本身性状的不稳定性,即见光易氧化分解,建议所有操作应避光进行。 5.1 试样的制备 5.1.1 液体样品:混合均匀后取样。 5.1.2 固体样品:捣碎机捣碎后,纱布挤汁。 5.2 用移液管吸取20mL样液置50mL烧杯中。 5.3 过滤:在烧杯(5.2)中加入3g石英砂,摇动后用布氏漏斗过滤(布氏漏斗预先铺有无灰滤纸,纸上铺有2g石英砂),然后再用5mL水冲洗滤渣3次。 5.4 萃取:在250mL的分液漏斗中倒入滤液(5.3),再加入20mL萃取剂(3.2),振摇后静置,收集下部分有机相,再用20mL萃取剂提取两次,将三次萃取所得有机相合并,用萃取剂定容为100mL。 注:对果胶含量大的果蔬,萃取时,将三次合并的有机相重新倒回原分液漏斗,继续用20mL萃取洗涤一次,然后用萃取剂定容至100mL。 5.5 测定:在440±10nm波长下测定提取液的最大吸光度A。 6 结果的计算和表示 类胡萝卜素总量用mg/L表示,按下式计算: 类胡萝卜素(mg/L)=A×20 式中:A——测定的最大吸光度; 20——换算系数。 此计算公式是以公认的胡萝卜素分子平均吸收系数250为依据的。

类胡萝卜素的测定方法

类胡萝卜素的测定方法(高效液相色谱法) 本方法适用于各类食品中以羟基类胡萝卜素为主的多种类胡萝卜素的测定。 本方法最低检出量为:α-胡萝卜素为5ng/mL,β-胡萝卜素为 4.3ng/mL,γ-胡萝卜素为3.5ng/mL,番茄红素为2.7ng/mL,斑蝥黄素为1.0ng/mL。 1. 方法提要 样品以丙酮-石油醚(1+1体积比)混合溶剂反复萃取使类胡萝卜素与其他成分分离,在450nm 波长条件下进行HPLC分析检测,通过外标法计算各种类胡萝卜素的含量。 2. 仪器 (1)高效液相色谱仪。 (2)冷凝回流皂化装置。 (3)旋转蒸发仪。 (4)离心机(5000r/min)。 3. 试剂 本方法所使用试剂除特殊注明外,均为分析纯;所用水为重蒸馏水。 (1)丙酮-石油醚(1+1体积比)混合溶剂:取相同体积的丙酮、石油醚混匀。 (2)50% KOH甲醇-水溶液:称取250g氢氧化钾,用50mL适量水溶解后,用甲醇定容至500mL容量瓶,备用。 (3)无水硫酸钠(Na-2SO4)。 (4)二丁基羟基甲苯(BHT)。 (5)无水乙醇(C2H5OH)。 (6)流动相使用液:按乙腈+二氯甲烷+甲醇(85+10+5)比例准确量取各溶剂,并充分混匀,经.45μm微孔膜过滤后使用。 (7)类胡萝卜素标样:α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素。(8)标准溶液:准确称取α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素一定量,先分别用少量的乙酸乙酯溶解,再用甲醇配制成60~80ng/L的标准储备液(于-30℃冻箱保存),使用时再配成3.5~16.5mg/L的标准使用液。 4. 测定步骤 (1)样品处理: a. 皂化提取法(如牛奶等脂肪含量较高的样品):取250L鲜牛奶于2℃、5000r/min冷冻离心30min,取上层油脂于250mL皂化瓶中,加入50mL乙醇、40mL 50% KOH甲醇溶液、0.1g BHT,65~75℃回流皂化30min,用石油醚反复提取皂化液,多次水洗至中性后用无水硫酸钠脱水,定容至25mL容量瓶中,备用。 b. 直接提取法(如番茄等脂肪含量较低的样品):适量新鲜成熟番茄匀浆后称取5~10mg于小烧杯中,加入0.1g BHT,用丙酮-石油醚(1+1体积比)混合溶剂提取3次,合并、收集

对β-胡萝卜素测定方法的认识

对 Β - 胡 萝 ` 卜 素 测 定 方 ^ 法 的 认 识 , 姓名:邹俊楠 班级:应用化学122班 ( 学院:化学工程学院

学校:新疆农业大学。 # ! >

{ 对β-胡萝卜素测定方法的认识 摘要:食品中的β-胡萝卜素可以用纸上层析法、薄层色谱法、分光光度法及高效液相色谱法等方法测定。本文简述了这些方法的原理条件及优缺点,并谈了谈自己的认识。 Β-胡萝卜素作为维生素A的前体,是人体重要营养素,也能够影响蛋白质的合成和利用,促进体内软组织的生长发育。同时,β-胡萝卜素还有一定的防癌作用。因此,对β-胡萝卜素的研究倍受广注。 β-胡萝卜素分子中存在多个共轭双键结构,对许多物理、化学、生物等因素都不稳定,例如光辐射、高温、酸、碱、游离卤素、水分等,但氧是影响胡萝卜素稳定的主要因素。它不溶于水、丙二醇、甘油、酸和碱,溶于二硫化碳、苯、氯仿、己烷及植物油等,几乎不溶于甲醇和乙醇。 、 1 测定方法 1·1 天然β-胡萝卜素的提取 取切碎混匀的菜样30g,加入适量水(一般约l:—2),于捣碎机中捣碎,使匀浆呈稠糊状。 因β-胡萝卜素对弱碱比较稳定,所以选用氨水:乙醇(5:35)作

为稳定剂。稳定剂可以加快沉淀且使沉淀完全,从而减少β-胡萝卜素损失,提高提取率。 加入2%的CaCl2·2H2O其沉淀量最大,且β-胡萝卜素的含量最高。 % 因β-胡萝卜素是脂溶性物质,可以溶解在有机试剂中,根据相似相溶规律和β-胡萝卜素的理化性质,我们选用亲脂性较强的有机溶剂。 为避免β-胡萝卜素的不必要损失,在除去溶剂时应避免高温,故应优先选择低沸点的溶剂。 同时,根据β-胡萝卜素在不同溶剂中的溶解度;可以得出石油醚可以作为很好的β-胡萝卜素的溶剂。 因为蔬菜糊中含有大量的水分,直接选用石油醚很难从其中萃取β-胡萝卜素,选用水溶性的丙酮和石油醚的混合液萃取,这样丙酮会有效地使渣干燥因而在随后的萃取中,色素可以高效地进入萃取液,提高了萃取率。 故在萃取过程中,为了提高萃取率,应加入氨水:乙醇(5:35)作为稳定剂,2%的CaCl2·2H2O作为沉淀剂;用石油醚和丙酮混合物作为提取剂。 < 1·2 测定 1·2·1 纸层析法 食品中的胡萝卜素可用生物学鉴定、溶剂分配和层析技术测定。

植物叶绿素类胡萝卜素测定方法

植物叶绿素类胡萝卜素 测定方法 The manuscript was revised on the evening of 2021

叶绿素、类胡萝卜素含量的测定 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比,即A=αCL式中:α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位,液层厚度为1cm时,α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质,则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量,只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A,并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰,所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 二、材料、仪器设备及试剂 (一)材料:新鲜(或烘干)的植物叶片。 (二)仪器设备:1)分光光度计;2)电子顶载天平(感量);3)研钵;4)棕色容量瓶; 5)小漏斗;6)定量滤纸;7)吸水纸;8)擦境纸;9)滴管。 (三)试剂:1)95%乙醇(或80%丙酮)(v丙酮:v乙醇=2:1的95%水溶液);2)石英砂;3)碳酸钙粉。暗中2h,,25ml 三、实验步骤 1)取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料,擦净组织表面污物,剪碎(去掉中脉),混匀。 2)将取好的样品放入25ml容量瓶中,加混合浸提液(无水乙醇:丙酮=5:5)20ml,放在黑暗条件下,浸泡至叶片发白,用浸提试剂定容至25ml,摇匀备用。 3)把叶绿体色素提取液倒入1cm光径的比色皿内,以浸提试剂为空白测定吸光度。选择波长663 646 和470nm。

植物类胡萝卜素生物合成及功能

中国生物工程杂志!"#$%&'$()*+#%(,(-. /011 21 11 103 112 收稿日期 /01041/4/0!!修回日期 /0114054/6 国家转基因生物新品种培育科技重大专项资助项目 /00678050029016' /0057805002900: /005780500;9001 /00678050109012' 通讯作者 电子信箱 < $%-<$)<=>,$?*@+(A 植物类胡萝卜素生物合成及功能 霍!培!季!静 !王!罡!关春峰 天津大学农业与生物工程学院!天津!20003/ 摘要!详述了植物类胡萝卜素生物合成途径 并从突破类胡萝卜素合成途径中上游瓶颈限制 类胡萝卜素代谢各分支途径的改造 提高植物细胞对类胡萝卜素物质积累能力三个方面探讨了类胡萝卜素生物合成酶基因在植物基因工程中的研究现状 最后对植物类胡萝卜素代谢的研究前景进行了展望 关键词!类胡萝卜素!生物合成!基因工程 中图分类号!B 51 !!类胡萝卜素是一类天然色素的总称 普遍存在于动物 高等植物 真菌 藻类和细菌中 不同的类胡萝卜素具有不同的生物学功能 在植物中 类胡萝卜素主要存在于植物叶绿体以及许多花和果实的有色体中 其在植物光合作用中发挥两个重要功能 即参与光吸收和防止前体细胞发生光氧化 1 同时 类胡萝卜素也是植物对外界刺激响应的信号分子前体物质 因此 在植物中类胡萝卜素具有促进光形态发生 参与非光化学抑制反应 脂质过氧 化反应及吸引传粉昆虫等作用 /42 近期研究还发现 类胡萝卜素可以参与传统植物激素 如脱落酸 和新型植物激素 如独角金内酯 的生物合成 ;4: 在动物细胞中 类胡萝卜素物质也起着尤为重要的作用 但其自身不能合成类胡萝卜素 只能从日常饮食中摄取 C 类胡萝卜素物质具有抗氧化活性 可以保护人类远离一系列的慢性病 是健康饮食中必须的 重要成分 3 其中 4胡萝卜素广泛的存在于各种橘黄 色水果及深绿色和黄色蔬菜中 如花椰菜 菠菜 甘蓝 胡萝卜 南瓜 番薯和西葫芦等 是人体合成维生素D 的重要前体物质 而维生素D 在人体正常生长和组织修复过程中起着重要作用 对维持人体视觉系统和免 疫系统的正常生理功能尤为重要 5 番茄红素是一种红色素 存在于许多水果和蔬菜中 如番石榴 西瓜 葡萄柚和番茄 可以作为单线态氧的有效猝灭剂 能消除羟自由基 在细胞中和脂类结合而有效抑制脂质的氧化 是非常好的食用抗氧化剂 对降低恶性肿瘤和冠心病发病率起着重要作用 6 叶黄质和玉米黄质存在于绿色 某些黄色和橙色的水果和蔬菜中 如玉米 油桃 橘子 木瓜和南瓜等 是人体视网膜黄斑的主要构成成分 10 可以预防老年人群中由黄斑病变所引起的失明 11 正是由于类胡萝卜素与人类健康的关系密切 以及其他方面的应用价值 有关类胡萝卜素生物合成途径及其相关基因的遗传操作调控得到了广泛的研究 本文主要对类胡萝卜素生物合成途径及类胡萝卜素生物合成酶基因在植物基因工程方面应用的国内外最新研究进展进行了综述 !"类胡萝卜素生物合成途径 类胡萝卜素是含;0个碳的类异戊烯聚合物 即四萜化合物 是含有5个异戊二烯单位的四萜化合物 由两个二萜缩合而成 植物中的萜类化合物有两条合成途径 即甲羟戊酸途径 A *?&,(%&)* E F D 和/4"4甲基4G 4赤藻糖醇4;4磷酸 /4"4A *)#.,4G 4*H .)#H $)(,4;4I#(J I#&)* E K L 途径 7#&%等 1/ 综述了植物帖类化合物的生物合成途径并以图表形式清晰的给出了类胡萝卜素生物合成的前体物质异戊烯二磷酸 $J (I*%)*%.

类胡萝卜素的检验方法(中国螺旋藻联盟)

类胡萝卜素(以β-胡萝卜素计)的测定 A.1.1 原理 根据在碱性条件下,样品中其它色素及酯类可被皂化,可用水除去。不被皂化的总类胡萝卜素,可溶于乙醚中,通过测定其特征吸光度计算含量。 A.1.2 试剂 所用试剂均为分析纯试剂。 a)混合溶剂:正己烷、丙酮、乙醇、甲苯体积比为10:7:6:7。 b)乙醚 c) 40%KOH甲醇溶液:20克KOH溶于少量水中,用甲醇定容于50ml。 d)无水硫酸钠 A.1.3 仪器 分光光度计、恒温水浴锅。

A.1.4 操作方法 A.1.4.1 样品处理 称取0.03g至0.05g(精确至0.0001g)样品于50ml的比色管中,加35ml混合溶剂(a)和1ml40%KOH溶液(c),35℃恒温水浴并避光超声2小时,将浸泡提取液倒入250ml的分液漏斗中;在浸泡过的样品中加入25ml蒸馏水,轻轻摇荡、静置,合并以上提取液,加入乙醚(b)50ml萃取,并于萃取液中加入100ml蒸馏水,轻轻摇荡、静置,弃去下层溶液,重复洗涤至少两次,萃取液经过10g的无水硫酸钠(d),收集于100ml容量瓶中,用乙醚(b)定容至刻度线。 A.1.4.2 测定 以乙醚(b)作空白,用带塞的1cm玻璃比色皿在453.0nm处测定吸光度。 A.1.5 计算 类胡萝卜素含量(g/kg)=A453.0×V×10 G×E 式中:A:波长为453.0nm处的吸光度; V:定容萃取溶液的体积,ml; G:样品重量(g); E:总类胡萝卜素的吸光系数(2500)。 A.1.6 检验结果报告 保留两位有效数字。 本方法来源于《中国螺旋藻战略联盟食用螺旋藻行业标准》。

胡萝卜素的提取

β-胡萝卜素的提取分离研究

β-胡萝卜素的提取 摘要:β-胡萝卜素是安全的、无毒的天然色素,在生物食品等领域均有展应 用。β-胡萝卜素的提取工艺众多,工艺各有特点。简要介绍了溶剂提取法提取胡萝卜素,柱色谱分离β-胡萝卜素,薄层色谱法检验分离效果的方法。学习柱色谱法、薄层色谱法的原理及其方法。掌握从胡萝卜中分离提纯β-胡萝卜素的原理和方法。学会用色谱法从胡萝卜中提取胡萝卜素并鉴定之。 关键词:β-胡萝卜素提取分离 引言: 胡萝卜是传统蔬菜和食用天然胡萝卜素的重要来源。β-胡萝卜素是500多种类胡萝卜素的一种。是橘黄色脂溶性化合物,它是一种重要的食用天然色素和营养强化剂,易溶于许多有机溶剂,如:乙酸乙酯、氯仿。几乎不溶于丙二醇、甘油、酸和碱‘不溶于水。β-胡萝卜素是一种非常安全的、无任何毒副作用的营养元素,具有解毒作用。是维护人体健康不可缺少的营养素。在抗癌、预防心血管疾病、白内障及抗氧化方面有显著的功能,可预防因老化引起的多种退化性疾病。另外,β-胡萝卜素在食品工业中的应用也日益广泛。 胡萝卜中含有丰富的胡萝卜素,是β-胡萝卜素含量最高的蔬菜之一。本文以胡萝卜为原料,采用色谱分离的方法研究了胡萝卜素的提取。 正文 1.1胡萝卜中的成分每100克胡萝卜中,约含蛋白质0.6克,脂肪0.3克,糖7.6~8.3克,铁0.6毫克,维生素A(胡萝卜素)1.35~17.25毫克,维生素B1 0.02~0.04毫克,维生素B2 0.04~0.05毫克,维生素C12毫克,热量150.7千焦,另含果胶、淀粉、无机盐和多种氨基酸。各类品种中尤以深橘红色胡萝卜素含量最高,各种胡萝卜所含能量在79.5千焦~1339.8千焦之间。胡萝卜是一种质脆味美、营养丰富的家常蔬菜,素有“小人参”之称。胡萝卜富含糖类、脂肪、挥发油、胡萝卜素、维生素A、维生素B1、维生素B2、花青素、钙、铁等人体所需的营养成分。

胡萝卜素含量测定

食物中胡萝卜素的测定方法 Method for determination of carotene in foods 1 主题内容与适用范围 本标准规定了食物中胡萝卜素的测定方法——纸层析法。 本标准适用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡萝卜素的测定,其最小检出限为0.11μg。 2 原理 以丙酮和石油醚提取食物中的胡萝卜素及其他植物色素,以石油醚为展开剂进行纸层析,胡萝卜素极性最小,移动速度最快,从而与其他色纱分离;剪下含胡萝卜素的区带,洗脱后于450nm波长下定量测定。 3 试剂 3.1 石油醚(沸程30~60℃):同时是展开剂。 3.2 丙酮:分析纯。 3.3 丙酮-石油醚混合液:3:7(V/V)。 3.4 无水硫酸钠:分析纯。 3.5 5%硫酸钠溶液。 3.6 1:1氢氧化钾溶液:取50g氢氧化钾溶于50mL水。 3.7 无水乙醇:需经脱醛处理。 3.8 β-胡萝卜素标准溶液:取5mgβ-胡萝卜素标准品,溶于10mL三氯甲烷中,浓度约为500μg/mL,准确测其浓度。 取标准溶液10.0μL,加正己烷3.00mL,混匀,测吸光值,比色杯厚度1cm,以正己烷为空白,入射光波长450nm,平行测定三份,取均值。

计算公式: (1) 式中:X1——胡萝卜素标准溶液浓度,mg/mL; A——吸光值; E——β-胡萝卜素在正己烷溶液中,入射光波长450nm,比色杯厚度为1cm,溶液浓度为1ppm的吸光系数,为0.2638; ——将ppm,换算成mg/mL; ——测定过程中稀释倍数的换算。 3.9 β-胡萝卜素标准使用液:将已标定的标准液用石油醚准确稀释后,每毫升溶液相当50μg,避光保存于冰箱中。 4 仪器和设备 4.1 实验室常用设备。 4.2 玻璃层析缸。 4.3 分光光度计。 4.4旋转蒸发器:具150mL球形瓶。 4.5 恒温水浴锅。 4.6 皂化回馏装置。 4.7 点样器或微量注射器。 4.8 新华滤纸:定性,快速或中速,101号。 5 样品的采集和处理 5.1 粮食:样品用水洗三次,置60℃烤箱中烤干,磨粉,储于塑料瓶内,放一小包樟脑精,盖紧瓶塞保存,备用。

类胡萝卜素的作用与功效

类胡萝卜素的作用与功效 【类胡萝卜素】 不溶于水而溶于有机溶剂。叶绿体中的类胡萝卜素含有两种色素,即胡萝卜素和叶黄素,前者呈橙黄色,后者呈黄色。功能为吸收和传递光能,保护叶绿素。 辅助色素:在植物和光合细菌,像类胡萝卜素叶黄素和藻胆素中,吸收可见光的色素,这类色素是对叶绿素捕获光能的补充。 非皂化脂质。是广泛地分布于动植物中的黄、橙、红或紫色的一组色素。构成发色原因的共轭二重键具有长链聚烯烃结构。通常是几种混在一起生成。具有C40的萜结构的较多,不含氮。已知天然类胡萝卜素约有300种,其中不含氧的碳化氢类有胡萝卜素、菌脂素等;含氧的非常多,有醇、酮、醚、醛、环氧化物、羰酸和酯等。它们之中大量存在的有岩藻黄质、叶黄素(、堇菜黄质、新黄质等,均属于胡萝卜醇。类胡萝卜素多数不溶于水,溶于脂溶剂,不稳定,易氧化。其生物合成过程如下: 乙酰,异甲基焦磷酸→牻牛儿基焦磷酸,无色类胡萝卜素等。 β-胡萝卜素、α-胡萝卜素等在动物体内变为视黄醇(维生素A)和视黄醛(维生素A醛),与视觉有关。在光合作用时,类胡萝卜素所吸收的光能传递给叶绿素,用于推动光化学过程。对细菌,则与其向光性有关.类胡萝卜素是O2的一种重要的激活状态的有效灭活剂,可防止生物的光灭活和光破坏。细菌的类胡萝卜素,有菌酯色素、β-

胡萝卜素、γ-胡萝卜素和玉米黄素等,此外特别值得重视的是从具有光合成的红色硫黄细菌和红色无硫黄细菌中所取得的螺菌黄素、球形(红极毛杆菌)酮,以及绿色硫黄细菌中含有的绿菌烯等。 类胡萝卜素是高度不饱和化合物(多烯),含有一系列共轭双键和甲基支链。色素的颜色随着共轭双键的数目而变动。共轭双键的数目越多,颜色移向红色越远。 有些类胡萝卜素在工业上利用作为食物和脂肪的着色剂,如β-胡萝卜素、番茄红素、玉米黄质、叶黄素、辣椒红、藏花素、藏花酸、胭脂树橙、红酵母红素等。 类胡萝卜素的生物合成也是按照类萜的合成模式,两个单位“头对头”缩合成为衍生物即类胡萝卜素──八氢番茄红素。高等植物、藻类和真菌都能将八氢番茄红素逐步脱氢,按次序生成六氢番茄红素,δ-胡萝卜素,链孢红素,最后产生番茄红素。类胡萝卜素分子两端的环化过程尚未完全阐明,但已有证据说明链孢红素或番茄红素是环化类胡萝卜素的前体。含氧的类胡萝卜素──叶黄素是通过直接引入分子氧而合成的。 维生素 A是无色的脂溶性类异戊二烯醇。在动物体内,β-胡萝卜素加两分子的水,断裂成为两分子的视黄醇(即维生素A,A存在于动物肝脏,血液和眼球的视网膜中;A只发现于淡水鱼中)。在暗中全反式视黄醛转变成为11顺视黄醛才能与视蛋白结合形成视紫红质,后者与暗视觉有关,故缺维生素A导致夜盲症。 希望对你能有所帮助,祝你天天快乐!

植物类胡萝卜素含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法

植物类胡萝卜素含量检测试剂盒说明书可见分光光度法 注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号:BC4330 规格:50T/48S 产品简介: 类胡萝卜素(carotenoid)是一类重要的天然色素的总称,普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类的黄色、橙红色或红色的色素之中。类胡萝卜素是体内维生素A的前体,同时还具有抗氧化、免疫调节、抗癌、减轻心血管疾病及着色剂等作用。 植物的类胡萝卜素存在于各种黄色质体或有色质体内;如黄叶,黄色花卉,黄色和红色的果实和黄色块根等组织,样本通过溶剂萃取,分离提取类胡萝卜素,在440±10nm处有特殊吸收峰。 大部分高等植物和藻类微生物的叶绿体内也含有类胡萝卜素,类胡萝卜素主要吸收蓝紫光,而叶绿素a 和叶绿素b既吸收红光又可吸收蓝紫光。所以针对含叶绿体的组织,为排除叶绿素a和叶绿素b对类胡萝卜素的干扰,根据经验公式先计算出叶绿素a和叶绿素b的含量,再进一步得出类胡萝卜素的含量;针对不含叶绿素的组织可以直接根据类胡萝卜素的经验消光系数进行计算 试验中所需的仪器和试剂: 可见分光光度计、台式离心机、1mL玻璃比色皿、天平、可调式移液枪、研钵/匀浆器、10mL离心管/试管、蒸馏水和丙酮。 产品内容: 提取液:自备,80%丙酮,即将丙酮:蒸馏水(V:V)=4:1混合待用。 试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。 操作步骤: 一、样本制备: 1、新鲜植物叶片(去掉中脉)或其他组织用蒸馏水洗干净,然后吸干表面水分,称取约0.1g,剪碎放入研钵或匀浆器中。 2、加入1mL蒸馏水,少量试剂一(约10mg),在黑暗或弱光条件下充分研磨,转入10mL离心管或

β—胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定

β—胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定 一、实验目的 1、学习从天然产物中提取有机化合物的方法。 2、学习用薄层层析法检验有机化合物的基本原理,点样,展开和计算Rf值的方法。 二.仪器和试剂 仪器三角瓶(50ml)、分液漏斗(150ml)、蒸馏瓶(50ml)、普通蒸馏装置(或减压蒸馏装置)、漏斗、色谱柱、硅胶薄层板、量筒、烧杯、层析缸。试剂胡萝卜、丙酮、石油醚(bp30~60℃)、硅胶(层析用,200~300 目)、无水硫酸钠、石油醚(bp60~90℃)、丙酮:石油醚(1:9)(V/V)。 三.实验方案 1、含类胡萝卜素石油醚溶液的制备 将新鲜胡萝卜洗净、擦干,切去尾部,切碎。称取碎鲜胡萝卜【1】10g 于小研钵中,研碎。碎胡萝卜移至50mL 三角烧瓶中,每次用丙酮10mL 萃取2 次,再用石油醚(bp30~60℃)萃取固体两次,每次10mL。把石油醚溶液加到丙酮液中。在分液漏斗中将混合液与50mL饱和氯化钠溶液【2】振荡,分去下层,用蒸馏水洗涤上层液两次,每次50mL,分去水,用无水硫酸钠干燥石油醚液(约1h),把混合液倒入50mL 圆底烧瓶中,热水浴加热蒸馏,除去溶剂,得固体。在制得的固体物加入3mL 石油醚(bp60~90℃)拌硅胶1g,在通风橱内抽干,得黄色硅胶颗粒,待上柱。 2、装柱和分离 取20cm*1cm 色谱柱一根,垂直装置,以50ml 三角烧瓶作洗脱液的接受器。用镊子取少许脱脂棉【3】放于干净的色谱柱底部,轻轻塞紧,再在脱脂绵上盖一层厚0.5cm 的海石砂(或用一张比柱内径略小的滤纸代替),关闭活塞,向柱内倒入石油醚(bp60-90℃)至约为柱高的3/4 处,打开活塞,控制流出速度为1 滴/s。通过一干燥的玻璃漏斗慢慢加入层析硅胶。用洗耳球轻轻敲打柱身,使填装紧密。当装填到3/4 时,再在上面加一层0.5cm 厚的海石砂,操作时一直保持上述流速,注意不能使液面低于砂子的上层。当液面流至离海石砂面1cm 时,立即从玻璃漏斗加入已制备好的含胡萝卜素的黄色硅胶,随后用0.5ml 石油醚洗下管壁的硅胶,如此连续2—3 次,直至洗净为止,然后在色谱柱上装上滴液漏斗,用石油醚(bp60-90℃)作洗脱剂进行洗脱,洗1 滴/s。当有一黄色的谱带分出,待黄色组分绝大部分洗出时,把洗脱剂换成1:9 丙酮一石油醚(bp60-90℃)混液作洗脱剂进行洗脱,控制流出速度如前(这混液洗脱剂有助于混合物中极性较大的组分移动),又可分出两个黄色组分。在45—90min 内,柱中物料将全部洗脱出来。观察这些物料通过柱子的移动情况。在三角烧瓶中收集3 份洗出液。用纸色谱、薄层色谱对各段洗出液进行色谱分析。 3.薄层色谱法

植物叶绿素类胡萝卜素测定方法

叶绿素、类胡萝卜素含量的测定 ??? 一、原理 ??? 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A 与其中溶质浓度C 和液层厚度L 成正比,即A =αCL 式中:α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位,液层厚度为1cm 时,α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质,则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a 、b 和类胡萝卜素的含量,只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A ,并根据叶绿素a 、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a 、b 时为了排除类胡萝卜素的干扰,所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 ???? 二、材料、仪器设备及试剂 ??? (一)材料:新鲜(或烘干)的植物叶片。 ??? (二)仪器设备:1)分光光度计;2)电子顶载天平(感量0.01g );3)研钵;4)棕色容量瓶;? 5)小漏斗;6)定量滤纸;7)吸水纸; 8)擦境纸;9)滴管。 ??? (三)试剂:1)95%乙醇(或80%丙酮)(v 丙酮:v 乙醇=2:1的95%水溶液);2)石英砂;3)碳酸钙粉。 暗中2h ,0.5g ,25ml ??? 三、实验步骤 ??1)取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料,擦净组织表面污物,剪碎(去掉中脉),混匀。 ??2)将取好的样品放入25ml 容量瓶中,加混合浸提液(无水乙醇:丙酮=5:5)20ml ,放在黑暗条件下,浸泡至叶片发白,用浸提试剂定容至25ml ,摇匀备用。 3)把叶绿体色素提取液倒入1cm 光径的比色皿内,以浸提试剂为空白测定吸光度。选择波长663 646 和470nm 。 ??? 四、实验结果计算 叶绿素a 的浓度 = 12.21 ? OD 633 – 2.81 ? OD 646

VA与类胡萝卜素

L/O/G/O
维生素A与类胡萝卜素 维生素 与类胡萝卜素

主要内容
1 维生素A及其衍生物 维生素 及其衍生物
2 3
类胡萝卜素及其功能 视黄醇及类胡萝卜素与抗氧化
维生素A与类胡萝卜素
2

1
维生素A及其衍生物 维生素 及其衍生物
A. 维生素 (retinol)及其衍生物的种类 维生素A( )及其衍生物的种类
a. 种类
a) 全反视黄醇是最基本形式 b) 多以棕榈酸酯形式存在 c) 视黄酸是维生素 的代谢产物,具有很高的活性和 视黄酸是维生素A的代谢产物, 的代谢产物 功能 d) 自然界中最重要的异构体是 顺-视黄醛 自然界中最重要的异构体是11-顺 视黄醛
维生素A与类胡萝卜素
3

维生素A与类胡萝卜素
4

b. 性质
a) 在氧的作用下视黄醇及其同系物极不稳定 b) 无氧时
– 视黄醛对碱比较稳定 – 酸性条件下,脱氢或重组双键 酸性条件下,
c) 强光下发生键异构化,形成聚合体 强光下发生键异构化,
维生素A与类胡萝卜素
5

1
维生素A及其衍生物 维生素 及其衍生物
B. 维生素 的代谢 维生素A的代谢
a. 维生素 (原)的吸收 维生素A(
a) 维生素 维生素A
– 在小肠内与其他脂类一起经胆汁和胰脂酶作用水解为视 黄醇和脂肪酸 – 视黄醇在小肠以主动吸收方式吸收,生理剂量下吸收率 视黄醇在小肠以主动吸收方式吸收, 为70%-90% – 视黄醇在小肠粘膜细胞内重新酯化后,与视黄醇结合蛋 视黄醇在小肠粘膜细胞内重新酯化后, 白(RBP)结合 )
维生素A与类胡萝卜素
6

食品中β-胡萝卜素的测定 标准文本(食品安全国家标准)

食品安全国家标准 食品中β-胡萝卜素的测定 1范围 本标准规定了食品中β-胡萝卜素的测定方法。 本标准适用于食品中β-胡萝卜素的测定。 2原理 试样经皂化后,使β-胡萝卜素完全变为游离态。用石油醚萃取后,反相色谱法分离,外标法定量。 3试剂和材料 注:除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682 规定的一级水。 3.1试剂 3.1.1α-淀粉酶:酶活力≥1.5 U/mg。 3.1.2氢氧化钾(KOH)。 3.1.3无水硫酸钠(Na2SO4)。 3.1.4抗坏血酸(C6H8O6)。 3.1.5石油醚:沸程30 ℃~60 ℃。 3.1.6甲醇(CH4O):色谱纯。 3.1.7乙腈(C2H3N):色谱纯。 3.1.8三氯甲烷(CHCl3):色谱纯。 3.1.9正己烷(C6H14):色谱纯。 3.1.10甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3]:色谱纯。 3.1.11乙醇:体积分数为95 %。 3.2试剂配制 3.2.1氢氧化钾溶液:称固体氢氧化钾250 g,加入200 mL 水溶解。临用前配制。 3.3标准品 3.3.1β-胡萝卜素标准品,CAS:7235-40-7。 3.3.2α-胡萝卜素标准品,CAS:7488-99-5。 3.4标准溶液的配制 3.4.1β-胡萝卜素标准储备液(500 g/mL):准确称取β-胡萝卜素标准品50 mg(精确到0.1mg),用正己烷定容至100 mL 棕色容量瓶中。 注:β-胡萝卜素标准储备液需要-10 ℃以下避光储存,使用期限不超过3个月。标准储备液用前需校正,具

体操作见附录A。 3.4.2β-胡萝卜素标准中间液(100 μg/mL):从β-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0 mL 溶液于50 mL 棕色容量瓶中,用正己烷定容至刻度。 3.4.3β-胡萝卜素标准工作液:从β-胡萝卜素标准中间液中分别准确移取0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL 溶液至5 个100 mL 棕色容量瓶。,用正己烷定容至刻度,得到浓度为0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL 、3.0 μg/mL 、4.0 μg/mL 的系列标准工作液。 3.4.4α-胡萝卜素标准储备液(500 μg/mL):准确称取β-胡萝卜素标准品50 mg(精确到0.1mg),用正己烷定容至100 mL 棕色容量瓶中。 注:α-胡萝卜素标准储备液需要-10 ℃以下避光储存,使用期限不超过3个月。标准储备液用前需校正,具体操作见附录A。 3.4.5α-胡萝卜素标准中间液(100 μg/mL):从α-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0 mL 溶液于50 mL 棕色容量瓶中,用正己烷定容至刻度。 3.4.6α-胡萝卜素和β-胡萝卜素混合标准工作液:分别从α-胡萝卜素标准中间液和β-胡萝卜素标准中间液中准确移取0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL 溶液至5 个100 mL 棕色容量瓶,得到浓度为α-胡萝卜素和β-胡萝卜素浓度均为0.5μg/mL、1.0μg/mL、 2.0μg/mL 、 3.0μg/mL、 4.0 μg/mL的系列混合标准工作液。 4仪器与设备 4.1高效液相色谱仪,带紫外检测器。 4.2旋转蒸发器。 4.3恒温磁力搅拌器:20 ℃~80 ℃。 4.4离心机:转速≥5000rpm。 4.5分析天平:感量为0.1 mg 。 4.6氮吹仪。 4.7恒温水浴箱:控温精度±1℃。 5分析步骤 5.1试样制备 谷物、豆类、坚果等试样需粉碎、研磨、过筛(筛板孔径0.3 mm~0.5 mm);蔬菜、水果、蛋、藻类等试样用匀质器混匀;谷粉、乳粉等试样用前振摇混合。4℃冰箱可保存1周。 5.2试样处理 5.2.1 无添加β-胡萝卜素的试样 称取粉碎或匀浆混匀的试样(约含β-胡萝卜素20 μg,精确至0.001 g)于250 mL 锥形瓶中,加入1g 抗坏血酸,加入75 mL 乙醇,60 ℃±1 ℃水浴回流加热30 min。 5.2.2 添加β-胡萝卜素的试样 5.2.2.1 高淀粉试样:称取混合均匀的试样(约含β-胡萝卜素20 μg,精确至0.001 g)于250 mL 三角瓶中,加入1.0 g 抗坏血酸,固体试样需用50 mL45 ℃~50 ℃的水溶解并混合均匀。加入l g α-淀粉酶,向三角瓶中充氮后盖上瓶塞,置60 ℃±2 ℃培养箱内酶解30 min。 5.2.2.2 非淀粉类试样:称取混合均匀的试样(约含β-胡萝卜素20 μg,精确至0.001 g ),置

高效液相色谱法同时测定叶绿素和类胡萝卜素

高效液相色谱法同时测定叶绿素和类胡萝卜素 一、实验目的 1、了解高效液相色谱在叶绿体色素全分析的应用。 2、掌握生物样品的高效液相色谱实验技术。 3、初步掌握梯度洗脱实验技术。 二、测定意义 植物光合色素的分析方法有许多种,经典的方法有纸层析和薄层层析,薄层层析又根据吸附剂不同而分成几种类型。吸附剂的类型有:硅胶、硅藻土、糖类、纤维素和聚酰胺等。层析后的各个色素斑点剪下并用相应的溶剂溶解后测定其吸收光谱,对照文献资料再确定色素的种类。上述方法较简便,但准确性不高。近几年随着高效液相色谱技术的发展,有人已将它应用于植物色素的分析中。从植物提取液分离出来的叶绿素和胡萝卜素已发现有多种异构体,而且常常是同时存在的。因此对叶绿素和胡萝卜素的深入研究较为困难。高效液相色谱既能对单一组分进行定量,又能对混合物中的多组分在分离的基础上进行定量。既能用于主要成分的含量测定,又能用于微量和痕量组分的测定。高效液相色谱是一种准确度好和精密度高的分析技术。因此,尽管难以得到所有的植物色素标准品,但高效液相色谱技术仍被认为是研究叶绿素和胡萝卜素的一种最有效手段。 三、基本原理 叶绿体色素提取液可以采用正相或反相高效液相色谱法分析,实验表明,反相高效液相色谱法更加方便。但由于色素提取液各组分的极性差别较大,等度洗脱可能使某些组分的分离不够完全。因此,对植物色素提取液的全分析应采用梯度洗脱方式以改善分离和缩短分析时间。 本实验采用高效液相色谱法可对绿色植物叶片提取液中的色素进行较全面的分离,并直接测定叶绿素a、叶绿素b和β-胡萝卜素的含量。 四、仪器与试剂 1. 岛津LC-20 高效液相色谱仪,色谱工作站,微量进样器(100 μl),Hypersil BDS C18( 4.0mm×200 mm,5μm)。 2. 叶绿素a、叶绿素b和β-胡萝卜素纯品为Sigma公司产品,甲醇、二氯甲烷和乙腈为 液相色谱淋洗剂,实验用水为二次去离子水(娃哈哈纯净水),经玻璃系统重蒸馏。 五、实验内容 1. 色素的提取:取0.5 g左右干净的新鲜的去脉菜叶,准确称重。剪碎,置于研钵中,加0.1 g MgCO3和 5 mL 90% 丙酮,研磨至浆状,分次加入5 mL 丙酮,沥出提取液。高速离心后,移出上清液。重复提取直至植物组织无色。合并上清液,转入50 mL容量瓶中,以90% 丙酮定容。试液经过0.2 μm 针筒式微孔滤膜过滤器直接注入色谱仪分析。

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