6100全血DNA提取中文操作手册
BloodPrep Chemistry
1 血样准备
血样处理请在采血后1小时内立即进行。下面三种方法任选其一:(1)裂解全血;(2)分离血细胞然后裂解细胞;(3)裂解、冰冻、储存全血或分离的血细胞。使用CPD,ACD,柠檬酸、EDTA和肝素等常用抗凝剂的抗凝血都可以在6100上使用。150 μL全血可以抽提3-8 μg基因组DNA。
1.1 在2 mL离心管或者deep well plate中加入15 uL蛋白酶K溶液(20 mg/mL);
1.2 加入85 uL蛋白酶K消化缓冲液;
1.3 加入150 uL血样;
1.4 用枪上下吹打3次混匀。
2 全血裂解
2.1 在58 ℃保温10分钟,切勿超过60℃;
2.2 加入500 uL BloodPrep DNA Purification Solution,总体积为750 uL;如果必要,可以温和加热纯
化液到37 ℃ 5-10分钟以溶解盐沉淀;
2.3 用枪上下吹打5次混匀;
2.4 (可选) 4 ℃保存血液裂解物;如果保存后出现沉淀,温和加热裂解物到37 ℃ 5-10分钟并温和震荡
混匀。
3 纯化DNA
安装96-well Optical Rxn Plate、Splash Guard、Total RNA Purification Tray II等消耗品,将血液裂解物吸到纯化板中,选择BloodPrep方案,确认其STEP 1被选中,运行下面步骤1~9。
用粘膜盖住空孔,或者用50 uL BloodPrep DNA Purification Solution预湿所有的空孔以保证真空。
步骤操作体积
(μL) 位置保温
(秒)
时间 (sec) 真空
(%)
- 用DNA纯化液预湿纯化板孔50 废液 - -
1 加样650 废液 300 80
2 加入BloodPrep DNA Purification
Solution
650 废液 400 80 3 加入BloodPrep DNA Wash
Solution
650 废液 60 80 4 加入BloodPrep DNA Wash
Solution
600 废液 60 80 5 加入BloodPrep DNA Wash
Solution
300 废液 60 80
6 预洗脱真空- 废液 120 100
7 废液位置的触离- 触离 - -
100 收集180 120 60
8 加入BloodPrep DNA Elution
Solution 1
9 加入BloodPrep DNA Elution
100 收集0 120 60 Solution 2
10 收集位置的触离- 触离 - -
6100 DNA纯化板每个孔的样品载荷范围是5 - 150 μL全血(相当于20 - 3000 μL裂解物)。每孔每次可以
加入10 –650 μL裂解物。如果裂解物的体积大于650 μL,可以分多次加入,每次500 μL,每孔最多可以加6
次。
4 BloodPrep Chemistry的试剂和消耗品
试剂:
Ethanol, 70%MLS产品,或者自己配
1. BloodPrep DNA Elution Solution 1 4342951
2. BloodPrep DNA Elution Solution 2 4342950
3. BloodPrep DNA Purification Solution 4342775
4. BloodPrep DNA Wash Solution 4342949
5. BloodPrep PK Digestion Buffer 4342777
6. Proteinase K Solution, 20 mg/mL 4333793
消耗品:
1. 96-well Deep-well plate 4308641
2. 96-well Optical Rxn Plate 4306737
4311758
Guard
3.
Splash
4. gDNA Purification Tray II 4330172
5. Archive Tray Covers 4306286
mL 4305936
2
6.
tubes,
(Last Revised: 2004-10-23)