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6100全血DNA提取中文操作手册_BloodPrep

6100全血DNA提取中文操作手册_BloodPrep
6100全血DNA提取中文操作手册_BloodPrep

6100全血DNA提取中文操作手册

BloodPrep Chemistry

1 血样准备

血样处理请在采血后1小时内立即进行。下面三种方法任选其一:(1)裂解全血;(2)分离血细胞然后裂解细胞;(3)裂解、冰冻、储存全血或分离的血细胞。使用CPD,ACD,柠檬酸、EDTA和肝素等常用抗凝剂的抗凝血都可以在6100上使用。150 μL全血可以抽提3-8 μg基因组DNA。

1.1 在2 mL离心管或者deep well plate中加入15 uL蛋白酶K溶液(20 mg/mL);

1.2 加入85 uL蛋白酶K消化缓冲液;

1.3 加入150 uL血样;

1.4 用枪上下吹打3次混匀。

2 全血裂解

2.1 在58 ℃保温10分钟,切勿超过60℃;

2.2 加入500 uL BloodPrep DNA Purification Solution,总体积为750 uL;如果必要,可以温和加热纯

化液到37 ℃ 5-10分钟以溶解盐沉淀;

2.3 用枪上下吹打5次混匀;

2.4 (可选) 4 ℃保存血液裂解物;如果保存后出现沉淀,温和加热裂解物到37 ℃ 5-10分钟并温和震荡

混匀。

3 纯化DNA

安装96-well Optical Rxn Plate、Splash Guard、Total RNA Purification Tray II等消耗品,将血液裂解物吸到纯化板中,选择BloodPrep方案,确认其STEP 1被选中,运行下面步骤1~9。

用粘膜盖住空孔,或者用50 uL BloodPrep DNA Purification Solution预湿所有的空孔以保证真空。

步骤操作体积

(μL) 位置保温

(秒)

时间 (sec) 真空

(%)

- 用DNA纯化液预湿纯化板孔50 废液 - -

1 加样650 废液 300 80

2 加入BloodPrep DNA Purification

Solution

650 废液 400 80 3 加入BloodPrep DNA Wash

Solution

650 废液 60 80 4 加入BloodPrep DNA Wash

Solution

600 废液 60 80 5 加入BloodPrep DNA Wash

Solution

300 废液 60 80

6 预洗脱真空- 废液 120 100

7 废液位置的触离- 触离 - -

100 收集180 120 60

8 加入BloodPrep DNA Elution

Solution 1

9 加入BloodPrep DNA Elution

100 收集0 120 60 Solution 2

10 收集位置的触离- 触离 - -

6100 DNA纯化板每个孔的样品载荷范围是5 - 150 μL全血(相当于20 - 3000 μL裂解物)。每孔每次可以

加入10 –650 μL裂解物。如果裂解物的体积大于650 μL,可以分多次加入,每次500 μL,每孔最多可以加6

次。

4 BloodPrep Chemistry的试剂和消耗品

试剂:

Ethanol, 70%MLS产品,或者自己配

1. BloodPrep DNA Elution Solution 1 4342951

2. BloodPrep DNA Elution Solution 2 4342950

3. BloodPrep DNA Purification Solution 4342775

4. BloodPrep DNA Wash Solution 4342949

5. BloodPrep PK Digestion Buffer 4342777

6. Proteinase K Solution, 20 mg/mL 4333793

消耗品:

1. 96-well Deep-well plate 4308641

2. 96-well Optical Rxn Plate 4306737

4311758

Guard

3.

Splash

4. gDNA Purification Tray II 4330172

5. Archive Tray Covers 4306286

mL 4305936

2

6.

tubes,

(Last Revised: 2004-10-23)

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