微生物实验考核内容及汇总

微生物实验考核内容及汇总

考核一

1.1大体观

1.1.1葡萄球菌鉴别（白色金黄色柠檬黄）

1.1.2血琼脂平板

1.1.3SS琼脂平板

1.1.4 生化管试验

（1）糖发酵试验

原理:多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物(或产酸产气)－→pH↓－→指示剂呈酸性变

色(若产气者有气泡出现)

培养基：糖发酵管、半固体发酵管、微量发酵管（我们实验一般只用糖发酵管，不区分产气

与否）

试剂：酚红、溴甲酚紫等

结果：若糖发酵管颜色呈紫色，则为阴性；

呈黄色，则为阳性

应用：观察细菌对糖度的分解情况，常用于肠道杆菌的鉴定

注：钟老师在课上，还提到一种双糖试验。如果现象为培养基为黄色，则为肠道非致病菌，上红下黄色，则为肠道致病菌，其他的记不得。

（2）硫化氢试验：

原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐结合

生成黑色络合物。

培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基

结果：培养基变黑为阳性；

不变黑为阴

应用：常用于肠道杆菌的鉴定

（3）靛基质试验（吲哚试验）：

原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。

培养基：蛋白胨水

试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）

结果：加入试剂后，培养基交界面出现玫瑰红色，为阳性培养基交界面为黄色或浅红色：为阴性（注：如果要鉴别，要自己动手加试剂哦）

应用：用于肠道杆菌的鉴定

（4）尿素酶试验

原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。

培养基：尿素培养基

试剂：酚红指示剂

结果：培养基变红：阳性

培养基不变色阴性

应用：肠杆菌科属间鉴定

总结阳性现象：糖发酵黄色；硫化氢黑色；靛基质加试剂变玫瑰

红；尿素酶红色

1.1.5动力实验

动力阳性穿刺线清晰周围培养基澄清

动力阴性穿刺线模糊细菌向周围扩散生长，培养基浑浊

1.1.6 真菌菌落

真菌能分泌酶使有机物降解成可溶性营养成分，吸收至细胞内进行新陈代谢。大多数真菌营养要求不高，在沙保氏培养基(Sabouraud's smedium 含4%葡萄

糖1.0%蛋白胨 pH4.0～6.0 )，22～28℃生长良好。大多于1～2周出现典型菌落。

真菌菌落一般有三种类型。

1．酵母型菌落，为单细胞真菌的菌落，形态与一般细菌菌落相似，以出芽形式

繁殖，如新型隐珠菌。

2．类酵母型菌落，外观似酵母菌落，但可见伸入培养基中的假菌丝，它是由伸

长的芽生孢子形成，如白色念珠菌。

3．丝状菌落，为多细胞真菌的菌落，由许多菌丝体组成。菌丝多数有隔分成多个细胞称有隔菌丝，有的菌丝无隔，称无隔菌丝。部分菌丝伸入培养基中吸收营养和水分，称营养菌丝；另一部分菌丝向空间生长称气中菌丝，能产生孢子的气中菌丝称生殖菌丝。有些真菌的气中菌丝形状特殊，呈球拍状、螺旋状、鹿角状等是各种皮肤丝状菌鉴别的依据之一。丝状菌落呈棉絮状、绒球状、粉末状或石膏粉样，在下面和背面可显示各称不同色素。

（找不到类酵母型的图，若某看客找到，希望与空间主人联系，先行谢过！！！）

1.1.7亚碲酸钾血琼脂平板

含有0.033%亚碲酸钾血清培养基上，白喉棒状杆菌在生长繁殖能吸收碲盐，并还原为金属碲，使菌落呈黑色，为本属其他棒状杆菌共同特点。且亚碲酸钾能抑制标本中其他细菌的生长，故亚碲酸钾血琼脂平板可作为棒状选择培养基。

1.2镜下观

鞭毛荚膜异染颗粒（不算细菌的特殊结构，但是考试有要求）

Ｇ＋蓝色（下图为葡萄球菌）

Ｇ－红色

考核二：油镜使用

（1）将集光器上升到最高位置，光圈开到最大。

（2）转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上垂直滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而

又不以压破载玻片为宜。

（3）用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。

（4）观察，分辨视野中的为革兰阳性菌（蓝色），还是阴性菌（红色），并填在卷子上（5）油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用

干擦镜纸擦干净。

考核三

3.1接种细菌（详情可见实验指导P63~65，以下内容较繁琐）

（一）平板分区划线分离培养法

【材料】

1．大肠埃希菌和葡萄球菌混合液

2．琼脂平板

【方法】

琼脂平板培养的方法很多，现以分区划线接种法为例。此方法可通过划线分离，充分利用培养基表面，分离出单个生长的菌落。

1.在平板的底部用记号笔写上组别、标本名称或编号、日期等记号。（实验考忽

略本步骤）

2.右手握持接种环(执笔式)通过火焰灭菌，冷却后，取一接种环上述细菌混合

液。

3.再以左手握持平板培养基，使平板略呈垂直方向，并靠近火焰周围，以免空气中杂菌落入。然后将蘸有菌液的接种环，先在培养基一角涂成薄膜，即1区。

4.烧灼接种环，以杀死环上剩余的细菌，冷却后，将接种环再通过①区薄膜处作连续划线（使环面与平板表面成45度角，以腕力在平板表面进行划线，注意勿使培养基划破），划出约占总表面积五分之一的②区，同法，再分别划出③区及④区、⑤区(见图3-1)。注意⑤区勿与①区接触。(考试中可一般划4个区，除非

前4区忘记灼烧，在第4区划好后，进行一次灼烧，划第5区)

5.将划好的平板倒置(于37℃培养箱，培养18~24h后观察菌落的形状、大小、

边缘、颜色、湿润度、透明度等，比较两种菌落的差异)。

（二）纯种细菌接种法

细菌经分离培养出单个菌落后，常需再移种至其他培养基中，以进一步鉴定或保存菌种。根据接种培养基之物理性状，纯种细菌接种法可分为斜面培养基接种、液体培养基接种和半固体培养基穿刺接种法三类。

1、斜面培养基接种法

斜面培养基接种法一般用于纯培养。从平板上挑取单个菌落接种至斜面培养基上，培养后获得大量纯种细菌（有菌苔生长），可进一步对细菌进行鉴定或

作为菌种保存。

【材料】

1．大肠埃希菌斜面菌种

2．琼脂斜面培养基

【方法】

1．左手持菌种管与待接种的培养管，将两管并列，略倾斜，琼脂的斜面部均向

上。

2．右手持接种环，在火焰上烧灼灭菌，待冷。

3．以右手掌与小指、小指与无名指分别拨取并挟持两管盖塞，将两管口迅速通

过火焰灭菌。

4．用无菌冷却了的接种环伸入菌种管，从斜面上刮取菌苔少许，立即移入待接种的培养基管，自斜面底部向上划一直线，然后再由底部向上蜿蜒划线(见图3-2)。取出接种环，管口通过火焰灭菌，塞回盖塞。作好标记后培养。次日观察

细菌菌苔生长情况。

2、液体培养基接种法

液体培养基接种法，主要用于增菌培养或细菌鉴定。若接种于肉汤培养基，经37℃培养18~24h后，可观察细菌的不同生长现象。其他的液体培养基，如葡萄糖蛋白胨水、各种单糖发酵管等，接种后大多供测定细菌生化反应之用。

【材料】

1．大肠埃希菌斜面菌种

2．肉汤培养基

【方法】

1．取接种环火焰烧灼灭菌，冷却。

2．按照上述“双管接种法”一样的操作手法，左手持细菌斜面菌种和肉汤培养基

两支试管，

右手持接种环，按无菌操作取少量细菌，按图3-3所示在倾斜的管壁与液面交界处轻轻地研匀，试管直立时粘附管壁上的细菌浸入液体中，管口火焰灭菌，塞瓶塞，接种后放于37℃温箱中培养18~24h后取出。

3、半固体穿刺接种法

半固体穿刺接种法，主要用于保存菌种或检查细菌有无动力，无动力的细菌在半固体培养基中沿穿刺线生长，有动力的细菌在半固体培养中呈扩散生长，甚至使培养基变得混浊。另外，此法也可用于细菌生化反应的检测，如接种于醋酸铅培

养基，明胶培养基等。

【材料】

半固体培养基，痢疾志贺菌斜面培养物、大肠埃希菌斜面培养物。

【方法】

1.将接种针经火焰烧灼灭菌冷却后，从斜面培养物上沾取细菌。

2.用无菌操作穿刺接种，将接种针刺入半固体培养基的正中央，深度达距管底0.5厘米处为止，然后顺原路退出，穿刺时要直进直出（图3-4）。接种针经火

焰灭菌后放回原处。

3.管口经火焰灭菌后，塞回盖塞，培养于37℃18~24h后观察结果。

注：平板分区划线要记得在划好2区后灼烧一次接种环；除了半固体的动力实验用的是接种针其他时候用的均为接种环；操作要在酒精灯旁；用右手的小指持培养基管的胶塞，不能置于桌面上，且管口要记得过火焰三次左右的灭菌。

3.2染色

3.2.1革兰染色步骤

一、制片

（1）涂片：左手持菌液试管，右手持接种环，用接种环从试管培养液中取一环菌，于载玻片中央涂成薄层（事先在背面做好标记圆圈）即可，或先滴一小滴无菌水于载玻片中央，用接种环从斜面上挑出少许，与载玻片上的水滴混合均匀，涂成一薄层。拔或塞试管塞时，应将试管口通过火焰略加烧灼，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。

（2）干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近

火焰。

（3）固定：常用高温进行固定。即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过

烫为宜，放置待冷后染色。

二、染色

（1）初染：加结晶紫液3~4滴（其实覆盖满细菌圈即可），染1min，细水冲洗，甩去积水。

（2）媒染：滴加卢戈碘液，染1min，细水冲洗，甩去积水。

（3）脱色：滴加95%酒精，轻晃玻片，再冲洗，反复滴加冲洗2次，共30S，甩去积水。

（4）复染：滴加稀释石炭酸复红溶液，染色30s，细水冲洗，甩去积水,滤纸吸干。

三、油镜观察

3.2.2抗酸染色步骤

一、制片：同上

二、染色：

（1）初染：滴加石炭酸复红溶液2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热5分钟，待标本冷却后用水冲洗。

（2）脱色：3%盐酸酒精脱色30秒~1分钟；细水冲洗。

（3）复染：用碱性美兰溶液复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用

三、油镜观察

3.3 倍比稀释

按稀释的倍数，先在纸上计算出所要加的各种溶液体积，再操作。要是不幸抽中本题，切忌慌张~~，要淡定，可参照实验指导P109；

微生物实验室规章管理制度

实验室管理总则 一、实验室管理是所有实验人员共同的责任，每一位实验人员都应对实验室的 正常、高效运转尽自己的义务和责任，自觉遵守实验室的规章制度和管理办法。 二、本章程为实验人员的行为规范，目的使大家在一个有组织、有秩序的环境 下工作，在最大限度地为大家提供一个能充分发挥自己才能的空间的同时，使实验人员养成良好的工作习惯，为良好的完成工作任务打下基础。 三、实验室的管理遵循三条原则 （1）岗位责任制原则 实验室的每一项管理工作都有明确的责任要求，并有专人负责。 （2）规范化原则 管理制度化，从设备、器材、药品等的使用到实验方法、安全卫生都制 定标准化的规范，大家都按照规范执行，以确保管理工作的有效性和连 续性。 （3）记录监督原则 实验室管理的各方面都要求有及时、准确的记录，以保证实验室所有工作的可追溯性。

实验室人员行为规范 一、严格遵守“武汉烁森生物科技有限公司微生物实验室规章管理制度” 二、每位实验室成员都应以主人翁精神参与实验室的建设与管理，积极参 加实验室的各种活动和公益劳动，自觉维护本实验室的声誉。 三、对所有违规人员和行为，本室将进行登记，屡教不改者，从重处理。 四、实验室内严禁吸烟、喝酒。 五、不准在实验室大声喧哗、随地吐痰、打闹、讲粗口； 六、未经许可，不得随意带他人进入本实验室。 七、爱护仪器设备，节约用水、电及实验材料等，注意安全。 八、室内设备仪器不得擅自拆卸、挪动，与本人实验无关的设备不可随意 开启。 九、实验仪器的使用要严格遵守操作规程，并认真填写设备使用记录，设 备存放应做到整洁有序，便于检查使用。 十、必须注意实验安全，加强安全防范意识。 十一、注意公共卫生，不准随意丢弃杂物废纸等，影响实验室环境卫生。十二、高温、高压等易燃易爆实验，需要特别注意安全防范。 十三、最后离室者，做好安全检查，检查仪器电源、空调、水、气瓶、门、窗等是否关好，并在最后离室登记簿上签名。

微生物学实验知识点总结与实践应用

微生物实验知识总结与实践应用经过这学期学习和实验操作，我对《微生物实验》有了一些初步的认识，也从中学习到了有用的知识。《微生物学实验》是要求我们掌握实验知识的基本操作和技能训练，初步了解和掌握先进的技术和方法，与迅速发展的科学前沿接轨。微生物：包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，却与人类生活关系密切。涵盖了有益有害的众多种类，广泛涉及健康、食品、医药、工农业、环保等诸多领域。我将我这学期学到的微生物学知识，结合生活和工业当中的一些应用，归纳如下：在吾尔恩老师的带领下，我们先从最基本的知识学起。 （1）无菌操作技术：高温对微生物具有致死效应，因此微生物在转接过程中，一般再火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环，已达到灭菌的目的。在做实验时要保持严谨的态度，以后的实验中多数操作都必须再火焰旁进行。 （2）培养基的制备：培养基是人工配置的生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别微生物或积累代谢产物。自然界中培养基的种类很多，但是不同的培养基中，一般含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子等，不同类别的微生物对PH值的要求一般不同。 （3）消毒与灭菌：灭菌是用理化方法杀死一定物质中的微生物的微生物学基本技术。灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或

环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。是指用物理或化学的方法杀灭全部微生 物，使之达到无菌保障水平。经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。 （4）平板分离与活菌计数：平板分离计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上。经培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。平板分离法主要有：1.平板划线分离法。2.稀释涂布平板法。 （5）革兰氏染色法：革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性细菌（G+）和革兰氏阴性细菌（G-）两种类型。这是两种细菌细胞壁结构和组成的差异决定的。大肠杆菌是革兰氏阴性杆状细菌，金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性细菌，经过革兰氏染色后两者呈现不同的颜色，在显微镜下便于进行观察…… 我们学习微生物实验技术，就是要把微生物的实验技能应用于实践生产，培养繁育细菌收集细菌代谢产物，应用于药业、工业，产生经济利益。制备培养基是微生物实验技术操作的重要环节，按照培养基的功能分类培养基的类型有：1.选择培养基。2.鉴别培养基。在工业生产中常常应用于培养微生物的主要是-发酵罐。我将微生物在生产生活中的应用总结如下： 微生物技术的应用在当今社会中已取得了很大的作用，在工业、农业、医药业、畜牧业等各个行业中都取得了长足的进展，但相对于

微生物学实验指导

实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察、 大小的测定和计数 一、实验目的 １、掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养 2、观察细菌、真菌、原生动物的标本装片,学会绘制生物图 3、掌握使用测微尺测量微生物大小的方法 ４、了解血球计数板的结构，掌握使用和计算方法 二、实验器材 １、显微镜 ２、微生物标本装片 ３、目、物镜测微尺 ４、血球计数板 ５、酵母菌液或霉菌孢子液 6、载波片、盖波片、烧杯、滴管、擦镜纸、香柏油、二甲苯等 三、显微镜的构造、原理及使用方法 1、构造 现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜,由机械装置和光学系统两大部分组成。机械装置包括镜筒、转换器、载物台、镜臂、镜座、调节器;光学系统包括目镜、物镜、聚光器、电光源。显微镜的总放大倍数为目镜和物镜的放大倍数的乘积。 ２、操作 在目镜保持不变的情况下,使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放大率都是不同的。一般情况下,特别是初学者，进行显微观察时应遵循从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序,因为低倍数物镜视野相对大,易发现目标及确定检查的位置。 四、微生物大小的测量原理和方法 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和物镜测微尺。 1、目镜测微尺(图1-1）是一块圆形玻片,在玻片中央把5ｍｍ长度刻成5０等分，或把1０mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上（此处正好与物镜放大的中 --

-- 间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用物镜测微尺校正，以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2、物镜测微尺(图１-２）是中央部分刻有精确等分线的载 玻片,一般将lmm 等分为100格,每格长ｌ０μm （即0.0ｌmm), 是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将物镜测微尺放在载 物台上,由于物镜测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经 过物镜和目镜的两次放大成象进入视野,即物镜测微尺随着显 微镜总放大倍数的放大而放大，因此从物镜测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小,所以用物镜测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去物镜测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。 3、目镜测微尺的校正 把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把物镜测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与物镜测微尺的刻度平行，移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“０”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度（图1－３)，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。因为物镜测微尺的刻度每格长l0μｍ，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。 例如目镜测微尺５小格正好与物镜测微尺5小格重叠，已知物镜测微尺每小格为ｌ0μm ，则目镜测微尺上每小格长度为=5×10μm/５=1０μm 用同法分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。 由于不同显微镜及附件的放大倍数不同,因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件(特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用,当更换不同放大倍数的目镜或物镜时,必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。 4、细胞大小的测定 移去物镜测微尺,换上待测菌体的装片，先在低倍镜下找到目的物,然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量菌体的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值,即等于该菌的长和宽。 结果计算： 长μm=平均格数×校正值 宽μｍ＝平均格数×校正值 大小表示: 宽μm ×长μｍ 五、微生物细胞数量的测定原理和方法 1、血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区(图1-4），计数区 图1-1 目镜测微尺 图1-2 物镜测微尺 图1-3 目、物镜测微尺的校正 图1-4 血球计数板

初中生物实验考试评分标准

初中生物实验考试评分标准 一、练习使用显微镜的使用 实验准备：显微镜、生物标本、擦镜纸、纱布 1、安放和取镜：左手托住镜座，右手握住镜臂，镜臂朝向自己，将显微镜放在实验桌略偏左的位置。 2、对光：（1）调节转换器使低倍物镜对准通光孔；（注意：在转动转换器时不要直接扳动物镜）（2） 调节遮光器选择最大光圈对准通光孔；（3）调节反光镜直到看到明亮而不刺眼的视野为止。 3、放置玻片标本 把载玻片标本放在载物台上，用压片夹压住，标本正对通光孔中心。 4、调节观察 转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片为止（此时眼睛一定要侧面注视物镜防止物镜压坏玻片标本）。左眼向目镜内看，同时逆时针方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升直到看清物象为止，再略微转动细准焦螺旋使物象看的更加清晰。 5、整理 实验完毕将显微镜的物镜转至两侧将镜筒下降到最低，用纱布将显微镜擦干净，并将其它实验材料放回原处。 二、观察植物细胞（制作洋葱表皮细胞装片并观察，主要考察制作） 实验准备：洋葱、清水、稀碘液、镊子、刀片、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片、显微镜 一、擦（擦盖玻片和载玻片）二、滴（滴在载玻片中央）三、取（取得大小要适中） 四、浸（用镊子夹起洋葱表皮浸泡在水中）五、盖（必须用镊子夹住盖玻片并让其一侧先接触水滴之 后再慢慢放平，防止产生气泡，然后用吸水纸吸去多余的水分） 六、染（用滴管在载玻片的一侧滴加一滴碘液，另一侧用吸水纸吸引，然后用吸水纸擦去多余的染色液）七、观察（与实验一相同）八、整理（与实验一相同） 三、制作口腔上皮细胞并观察（该实验要求与实验二相同） 实验准备：生理盐水（0.9%）、稀碘液、消毒牙签、镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片、显 微镜 实验步骤为：一、擦（擦盖玻片和载玻片） 二、滴（将0.9%的生理盐水滴在载玻片的中央，其生理盐水的作用是防止细胞改变形状）三、刮（先漱口再用消毒牙签在自己的口腔内侧壁上轻轻地刮几下）四、五、六、七、八与实验二相同。 四、观察人体的基本组织 实验准备：人体的基本组织的永久切片、显微镜 实验准备：浸软的菜豆（大豆、花生）种子，浸软的玉米（或小麦等）种子，刀片、放大镜、滴管、 碘液 方法步骤： 1．取一粒浸软的蚕豆种子，观察它的外形以及种皮上的黑色眉状的种脐和种孔。用手挤压这颗种子， 水从哪里冒出来？ 2．剥掉种皮，观察胚。首先看到的是子叶，数一数有几片。 分开子叶，用放大镜辨认胚芽、胚根和胚轴的位置，想一想、它们各有什么作用？ 子叶：贮藏着营养物质。 胚芽：将来发育成茎和叶。 胚根：将来发育成根 胚轴：将来发育成连接根和茎的部位。 二、观察玉米种子的外形和结构 1．取一粒浸泡过的玉米种子，观察它的外形。试一试，能否将果皮和种皮分开？不能。 2．用刀片将玉米种子纵向切开。 3．用放大镜观察辨认胚乳、胚芽、胚根、胚轴、子叶的位置。 4．在种子的剖面上滴一滴稀碘液，观察哪部分被染成了蓝色。想一想，玉米种子胚乳里主要贮存的是哪一种营养物质？ 胚乳被染成蓝色，胚乳里主要贮存的是淀粉。 讨论 1．蚕豆种子和玉米种子的结构里最主要的部分是什么？ 2．蚕豆种子和玉米种子里，营养物质分别贮存在什么地方？ 最后将实验材料进行整理。 六、观察叶片的结构 实验准备：新鲜叶片（菠菜、槐树叶）、显微镜、双面刀片、镊子、载玻片、盖玻片、盛有清水的培

2012基础生物学实验考试--微生物学复习资料

一．名词解释 1．微生物的纯培养物：由一种微生物组成的细胞群体，通常是由一个单细胞生长、繁殖所形成。 2．菌落：单个微生物细胞在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度形成的肉眼可见的、有一定形态的子细胞生长群体。 3. 灭菌：是指物体中包括芽孢在内的所有微生物都被杀死或消除。 4. 消毒：杀死或灭活物质或物体中所有病原微生物的措施，消毒可起到防止感 染或传播的作用。 5.无菌技术：在分离、转接及培养纯种微生物时，防止其被环境中微生物污染或 其自身污染环境的技术。 6. 鉴别培养基：在培养基中加入能与特定微生物的代谢产物发生特征性化学反 应的化学物质，用于鉴别不同类型微生物。 7. 选择培养基：根据不同微生物的营养需求或对某种化学物质敏感性不同，在 培养基中加入相应营养物质或化学物质，抑制不需要微生物的生长， 将所需微生物从复杂的微生物群体中选择分离出来。 8. 基础培养基：含有一般微生物生长所需基本营养物质的培养基。 9. 合成培养基：由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基，也称为化学限 定培养基。 10. 平板划线法：用接种环在培养平板表面划线接种微生物，使微生物细胞数量 随着划线次数的增加而减少，并逐步分开。保温培养后，在固体培养 基表面得到生长分离的微生物菌落。 11. 稀释倒平板法：将待分离的材料稀释后与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培 养基混合，摇匀后制成可能含菌的培养平板，保温培养后分离得到的 微生物菌落生长在固体培养基表面和里面。 12．平板菌落计数法：将适当稀释的样品涂布于琼脂培养基表面，培养后活细胞能形成菌落，通过计算菌落数能知道样品中的活菌数，该方法称为平 板计数或菌落计数。 二．填空题（每空1分，共20分） 1. 用培养平板进行微生物纯培养分离的方法包括：、、。

微生物实验室管理制度

目得：规范微生物室管理规范，以保证微生物实验得顺利进行。 范围：适用于微生物实验室 依据:GB/T 1９4８9-2008《实验室生物安全通用要求》； 执行部门:化验室微生物检验室 职责：1、微生物检验员负责微生物实验室得管理。 2、实验室主管负责对微生物实验室管理情况进行检查。 内容: 本中心微生物实验室管理制度包括微生物实验室人员管理制度、微生物室出入管理制度、微生物室环境管理制度、微生物室得使用管理制度。 ??微生物实验室药品管理制度。 １、微生物实验室得人员管理 １、１微生物实验室由微生物检验员管理及使用,其她人员须经主管人员批准后方可进入与使用。 1、２微生物实验室得人员需经过相关得培训。 2、微生物实验室出入管理 2、１人员出入管理： 2、1、1 人员进入微生物实验室洁净区前,需要洗手消毒;在一级缓冲室换实验服、戴帽子、换鞋后，进入风淋室，风淋后,进入二级缓冲室准备实验。 2、1、2 实验操作前须带上无菌手套与口罩. ２、２物料出入管理: 2、2、1 物料进入微生物实验室以前，脱去外包装或者用酒精棉球擦拭后,放置于传递窗中。

2、2、２物料放置于传递窗后，开启紫外0、5小时，同时将微生物实验室内得净化系统、紫外灯打开. 2、2、3紫外开启0、５小时以后，关闭紫外，并将物品转移于实验操作台上。 2、2、4 实验完毕后,微生物实验室物品经传递窗传出后，经高温灭菌后废液、废物倒入废液桶处理。 ３、微生物实验室得环境管理 3、１微生物实验室得清洁管理 微生物实验室得清洁分为一般清洁及彻底清洁，其具体得清洁部位、方式方法、频率见下表所示: ３、2 微生物实验室常用消毒剂及其配制 4、微生物实验室得使用管理 4、1 微生物实验室使用之前,应先开启微生物实验室自净系统30分钟.每次使用前应用消毒液擦拭超净工作台及其她一切可能引起污染得死角,

微生物学实验复习提纲教案资料

微生物学实验复习提纲 1.研究微生物学的基本技术有哪些（显微镜技术、无菌技术、纯种分离技术和纯种培养技术） 2.细菌培养基的配制过程？ 答：配制培养液→调节PH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面 3.制造接种环、接种针的金属常用铂或镍,原因是软硬适度，能经受火焰反复灼烧，又易冷却. 4.灭菌吸管的包装的注意事项：（1）吸管必须干燥;(2)在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段约1.5cm 长的棉花（不能用脱脂棉）。作用是避免外界及口中杂菌吸入管内，并防止菌液等吸入口中。 5.空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若用湿热灭菌。则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。 6.接种环在用前必须烧灼灭菌，用后也应立即烧灼。 7.酵母的死细胞和活细胞可通过哪些方式鉴别？ 答：1.、用美蓝液对酵母菌染色后，活细胞为无色，死细胞为蓝色2、平板菌落计数法 8.细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类微生物的菌落各有何特点？ 答：细菌：湿润、光滑、透明、粘稠、易挑起、质地均匀、菌落各部位的颜色一致等。 放线菌：质地致密、丝绒状或有皱折、干燥，不透明，上覆盖有不同颜色的干粉（孢子），菌落正反面的颜色常不一致，基内菌丝与培养基结合较紧，难以挑起。 酵母菌：菌落与细菌的相仿，比细菌菌落大而且厚，菌落表面湿润、粘稠、易被挑起，其颜色多为乳白色，少数为红色。同时会散发出悦人的酒香味。 霉菌：菌落形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取，菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致等。 9.培养基按化学成分、物理状态、用途划分可分为哪几种类型？ 答：化学成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基物理状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基用途：基础培养基、鉴别培养基、选择培养基 10.实验常用的凝固剂是哪一种？固体培养基、半固体培养基及液体培养基加凝固剂琼脂的量为多少？琼脂在什么温度下溶化？什么温度下凝固？ 答：常用凝固剂是琼脂，分别为1—2%，0.5% 96°C下融化，40°C凝固 11.配制培养基时应遵循哪些原则？配制培养基的一般方法和步骤是什么？配制培养基时不可用铜锅或铁锅，原因是什么？调pH一般用什么试剂调？配制pH低的琼脂培养基时，应怎样配制？ 答：原则：目的明确、营养协调、理化适宜、经济节约方法：生态模拟、参阅文献、精心设计、试验比较 用磷酸缓冲液和碳酸钙做调节剂 12.培养基分装时，液体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？固体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？半固体分装高度以试管的多少为宜？ 答：液体：试管高度的1\4,三角瓶的试管高度的1\2,固体：试管高度的1\5，三角瓶的1\2，半固体：试管高度的1\3 13.培养基灭菌时外用牛皮纸包扎的目的是什么？ 答：防止灭菌时冷凝水润湿棉塞 14.摆斜面的正确方法是什么？ 答：试管口搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 15.棉塞的作用是什么？正确的棉塞要求是什么？棉塞的长度多少在管口外，多少在管内为

初中生物实验操作考试试题

试题一练习使用显微镜 1、取镜和安放 右手握镜臂，左手托镜座，放在实验台上，略偏左；安装好物镜和目镜。 2、对光 转动转换器使低倍物镜对准通光孔，选择较大的光圈对准通光孔，左眼注视目镜，转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内，直至在目镜内看到白亮的圆形视野。 3、观察 将玻片放在载物台上，用压片夹压住，移动载玻片，是汉字或英文字母位于通光孔的中央。转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（此时眼睛一定要看着物镜）。左眼向目镜内看，同时逆时针方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升直到看清物像为止。再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 4、收镜 实验完毕后取下载玻片，把显微镜的外表擦拭干净，取下目镜和物镜，放回镜盒内（或转动转换器，把两个物镜偏到两旁）；下降镜筒，将显微镜放进镜箱内，送回原处。 实验现象与结论： 1、视野中看到的汉字或英文字母与纸片上的有何不同？显微镜成像有什么特点？ 上--- e------ 显微镜成的是倒像，上下颠倒，左右颠倒。 2、物象的放大倍数如何确定？目镜放大倍数ⅹ物镜放大倍数 试题二观察人的口腔上皮细胞 （一）制作人的口腔上皮细胞的临时装片： 1、漱口 2、擦片：用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦试干净。 3、在载玻片的中央滴一滴生理盐水。 4、用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻轻地刮几下，牙签上会附着一些口腔上皮细胞。 5、把牙签上的口腔上皮细胞放在载玻片上的生理盐水中涂抹几下，盖上盖玻片。（用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，然后缓缓地盖在水滴上。注意避免盖玻片下面出现气泡。） 6、在盖玻片的一侧滴加稀碘液，用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润标本的全部。（二）观察 先用低倍物镜观察，看到扁平细胞后再换上高倍物镜，移动玻片标本寻找一个清晰、完整的细胞，从外到内辨认细胞的结构。 画图：画出人体口腔上皮细胞结构图。 试题三观察种子的结构 1、观察菜豆种子的结构 （1）取一粒浸软的菜豆种子，剥去种子最外面的一层薄皮---种皮，分开合拢的两片子叶，观察它的外形。 （2）用放大镜观察子叶、胚根、胚芽和胚轴，看看它们各有什么特点。 2、观察玉米的结构 （1）取一粒浸软的玉米种子，观察它的外形。 （2）用刀片将这粒玉米种子从中央纵向剖开，在剖面上滴一滴碘液，再用放大镜仔细观察

检验科上墙制度_微生物实验室管理规章制度

微生物实验室质量与安全管理制度 1、实验室内物品要摆放整齐，试剂要有明晰的标签。 2、禁止在实验室内吸烟、饮食和会客。 3、做好检样的登记、编号、明确检验目的，不符合要求的样品必要时应重新采样。 4、无菌室操作前用消毒液擦试，桌面及工作台面，开紫外灯消毒30~60分钟，开启超净台 紫外线灯。 5、进无菌室操作前洗手。 6、操作过程严格执行无菌操作。 7、操作时关紫外线灯，开日光灯﹑风门及点燃酒精灯或煤气，并用75%酒精棉球拭手。 8、工作结束，关风门、电源、酒精灯、处理污物、台面，将超净台内物品摆放整齐。 9、定期检查温箱、水浴箱、冰箱及低温冰箱等的性能。 10、各种玻璃容器量杯、烧杯、量筒、刻度吸管等应校正后使用，细菌接种环直径3~5mm， 长6~8cm，接种针6~8cm。 11、试剂的质控应要求按照实验要求分别选用（AR）、（GR）等级，所用溶液应用去离子水 或蒸馏水。 12、定期对实验进行彻底的消毒清洗。 微生物实验室卫生与安全管理制度 1、实验室所有工作场所均需指定专人负责环境的卫生与安全工作。 2、实验室人员每天工作前后要做好实验室清洁工作。定期对超净工作台和无菌室用适宜的 消毒液清洗，以保证其洁净度符合要求。 3、实验室人员在日常工作中要维护工作场所环境整洁。测试人员在测试过程中要保持工作 场所环境卫生整洁。 4、实验室人员在每天工作结束后要检查工作场所的水、电、门、窗的安全情况。 5、实验室应配备必要的防火用具，如灭火器等。

6、要在实验室安放废液、废弃物的回收装置，测试人员要把废液、废弃物放入回收装置， 污染的废液和废弃物，必须经过高压灭菌后方可处置。按《废弃物品处理规定》处理废液和废弃物。 7、实验室人员要定期检查实验室卫生安全落实情况，发现问题及时处理。 8、实验室人员要对环境条件进行定期的监测、控制，并做好记录。 9、与检验无关人员不得进入实验室，因特殊情况需要进入实验室时，必须穿工作服、带鞋 套，离开时将工作服放在指定的位置，鞋套放在指定的存放容器内。 10、无菌室使用前必须打开紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开风机进行吹风。操 作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。 11、工作人员进入无菌室必须更换工作服、鞋、帽子、口罩。 12、无菌室应备有工作浓度的消毒液，如70%的酒精，0.1%的新洁尔灭，5%的来苏儿溶液 等等。 微生物实验室仪器配备、管理使用制度 1、实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。 2、实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，由经理同意填报修理申请、送仪器维修部门。 3、各种仪器（冰箱、温箱除外），使用完毕后要立即切断电源，旋钮复原归位，待仔细检查后，方可离去。 4．一切仪器设备未经设备管理人员同意，不得外借，使用后按登记本的内容进行登记。 5、仪器设备应保持清洁，一般应有仪器套罩。 6、使用仪器时，应严格按操作规程进行，对违反操作规程的因管理不善致使仪器械损坏， 要追究当事者责任。 微生物室菌种保存与使用管理制度

九年级下册初中生物实验操作考试试题及评分标准

下册初中生物实验操作考试试题及评分标准 姓名准考证号_ ___ 生物试题一认识和练习使用显微镜 显微镜是生物学实验中常用的仪器，能帮助人们观察到肉眼看不到的微观世界，那么如何操作显微镜呢？下面就提供的实验材料和用具，请你认知微观领域精彩内容。 （一）实验要求：认识显微镜主要结构，能正确使用显微镜。 （二）实验材料用具：显微镜（目镜安装指针），纱布，双子叶植物茎永久横切片。 主考教师：监考教师：总分： 生物试题二探究骨的成分 隆冬时节，下雪路滑。如果青少年摔倒后，爬起来就走，而老年人摔倒后却容易造成骨折。为什么不同的年龄的人摔倒后有两种不同的结果呢？这与骨的成分有关吗？先请你利用

所提供的有关材料探究骨的成分。 （一）实验要求：知道骨的成分和物理特性。 （二）实验材料用具：大鱼的肋骨或小动物的一段骨，镊子，酒精灯，火柴，32开白纸，污物桶。 主考教师： 监考教师： 总分： 生物试题三 制作并观察人口腔上皮细胞装片 人的细胞和动物细胞的基本形态和结构是一样的吗？下面根据提供的材料。观察自己的口 腔上皮细胞，来认识人和动物细胞的结构。 （一）实验要求：制作临时装片，用显微镜观察细胞结构。 （二）实验材料用具：显微镜（高倍目镜安装指针），载玻片，盖玻片，镊子，消毒牙签 （一头钝），0.9%的生理盐水（盛在滴瓶中），稀碘液（盛在滴瓶中），吸水纸，纱布，抹布，污物桶。

主考教师：监考教师：总分： 生物试题四观察种子的结构 在大地回春的季节，农民和花工常常把一些植物的种子播在土壤中，不久，绿油油的幼苗就破土而出。种子为什么能长成幼苗呢？这与种子的内部结构有什么关系，现就提供的材料和工具请你探秘。 （一）实验要求：解剖和观察种子，识别种子的基本结构。 （二）实验材料用具：浸软的菜豆种子，盛有菜豆种子的烧杯， 解剖针，培养皿，抹布一块，污物桶。 主考教师：监考教师：总分： 生物试题五用显微镜观察人血涂片 血液是“生命之源”。血液中有三种血细胞，它们的形态、大小、结构是怎么样的？数目一样吗？现请你借助于显微镜，识别人血涂片的血细胞。 （一）实验要求：通过显微镜，认识人的红细胞及其结构特点。 （二）实验材料用具：人血涂片，显微镜，纱布。

微生物实验室要求

微生物检验实验室操作技术要求 第一节实验室管理制度 一、实验室管理制度 1．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理，使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。 2．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。 3．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、检修, 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。 4．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告；药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。 5．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。 6．科、室负责人督促本制度严格执行，根据情况给于奖惩，出现问题立即报告，造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。 二、仪器配备、管理使用制度 1．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、

普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位pH计、高速离心机。 2．实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。 3．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。 4．各种仪器（冰箱、温箱除外），使用完毕后要立即切断电源，旋钮复原归位，待仔细检查后，方可离去。 5．一切仪器设备未经设备管理人员同意，不得外借，使用后按登记本的内容进行登记。 6．仪器设备应保持清洁，一般应有仪器套罩。 7．使用仪器时，应严格按操作规程进行，对违反操作规程的因管理不善致使仪器械损坏，要追究当事者责任。 三、药品管理、使用制度 1．依据本室检测任务，制定各种药品试剂采购计划，写清品名、单位、数量、纯度、包装规格，出厂日期等，领回后建立帐目，专人管理，每半年做出消耗表，并清点剩余药品。 2．药品试剂陈列整齐，放置有序、避光、防潮、通风干燥，瓶签完整，剧毒药品加锁存放、易燃、挥发、腐蚀品种单独贮存。

微生物学复习资料整理汇总

一、解释下列名词 1．伴胞晶体：少数芽孢杆菌在其形成芽孢的同时，会在芽孢旁边形成一颗菱形或双锥形的碱溶性蛋白晶体——δ内毒素,称为伴胞晶体（59） 2．菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，成为菌落。 3．选择培养基：用来将某种或某种微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基。根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，一直不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。（91） 4．革兰氏阳性菌：在革兰氏染色法里，通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞膜内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物。革兰氏阳性菌由于其细胞壁厚度大和肽聚糖网层次多和交联致密，故遇乙醇或丙酮酸脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，在加上它不含类脂，故乙醇处理不会溶出缝隙，因此能吧结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色。（49）革兰氏阳性菌细胞壁特点是厚度大、化学组分简单，一般只含90%肽聚糖和10%磷壁酸，从而与层次多、厚度地、成分复杂的革兰氏阴性菌的细胞壁有明显的差别。革兰氏阴性菌因含有LPS外膜，故比革兰氏阳性菌更能抵抗毒物和抗生素对其毒害。（40） 5．LPS:脂多糖，位于革兰氏阴性菌细胞壁最外层的一层较厚的类脂多糖类物质，由类脂、可信多糖和O-特异侧脸三部分组成。（43） 6．营养缺陷型：某些菌株发生突变（自然突变或人工诱变）后，失去合成某种（或某些）对该菌株生长必不可少的物质（通常是生长因子如氨基酸、维生素）的能力，必须从外界环境获得该物质才能生长繁殖，这种突变型菌株成为营养缺陷性（85）(218) 7．氨基酸异养型生物：不能合成某些必须的氨基酸，必须从外源提供这些氨基酸才能成长，动物和部分异养微生物为氨基酸异养型生物。如乳酸细菌需要谷氨酸、天门冬氨酸、半胱氨酸、组氨酸、亮氨酸和脯氨酸等外源氨基酸才能生长。（baidu) （氨基酸自养型：能以无机氮为唯一氮源，合成氨基酸，进而转化为蛋白质及其他含氮有机物。 8．芽孢：某些细菌在其生长发育后期，在细胞内形成一个圆形或团圆性、厚壁、含水量极低、抗逆性极强的休眠体（55） 9．鉴别培养基：用于鉴别微生物。在培养基中加入某种特殊化学物质，某种微生物在培养基中生长后能产生某种带些产物，而这种带些产物可以与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征性变化，根据这种特征性变化，可讲该种微生物与其他微生物区分开来（91） 10．PHB：聚-B-羟丁酸，直径为0.2~0.7um的小颗粒，是存在于许多细菌细胞质内属于类脂兴致的碳源类贮藏无。不溶于水，可溶于氯仿，可用尼罗蓝或苏丹黑染色。具有贮藏能量、碳源和降低细胞内渗透压的作用。（53） 11．糖被：包被于某些细菌细胞壁外的一层厚度不定的胶状物质。（60）

初中生物实验技能考试实验步骤

实验：制作叶的横切面临时切片并验证绿叶中含有淀粉 一、检查实验材料用具是否xx 二、制作叶的横切面临时切片： 1、用纱布把载玻片和盖玻片擦干净 2、把叶片放在小木板上 3、捏紧两个双面刀片，沿与主脉垂直的方向迅速切割。 4、每切一次蘸一下水，要多切几次 5、在载玻片的中央滴一滴清水。 6、用毛笔蘸取最薄的一片放在水滴中 7、用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触水滴，然后轻轻放下 三、验证绿叶中含有淀粉 1、在一小烧杯中放入适量的酒精，把叶片放在酒精中 2、在一大烧杯中放入适量的水，把小烧杯放在大烧杯的水中 3、把大烧杯放在铁架台（或三脚架）的石棉网上 4、点燃酒精灯加热 5、看到叶片变成黄白色时，熄灭酒精灯 6、用清水洗清叶片 7、把叶片放在培养皿中，滴加碘液 8、用清水冲洗叶片 9、观察现象回答问题 四、整理：清洗实验用具并放回原位。

实验：观察玉米种子的结构 一、检查实验材料、用具是否xx 二、观察玉米种子的结构 1、取一粒浸软的玉米种子，指认胚的位置。 2、用刀片从中央纵切开玉米种子。 3、用放大镜或肉眼观察，指认胚根、胚芽、胚轴、子叶和胚乳。 4、在种子切面上xx碘液。 5、回答问题 三、整理：把实验用具放回原处，清洁操作台。 实验：制作洋葱鳞片叶表皮细胞的临时装片并观察 一、检查实验仪器药品是否完好、xx 二、制作洋葱鳞片xx表皮细胞的临时装片 1、用纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净 2、把载玻片放在实验台上，用吸管在载玻片中央滴一滴清水 3、用镊子撕取一小块洋葱鳞片叶的内表皮 4、把撕取的洋葱鳞片叶的内表皮展放在载玻片的水滴中 5、用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，然后轻轻的盖上 6、染色：在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液，用吸水纸在另一侧吸引 三、用xx观察临时装片 1、取镜：右手握住镜臂，左手托住镜座 2、安放：将显微镜放在实验台略偏左，距离桌沿7厘米处

微生物实验室安全管理制度

微生物实验室安全管理制度 一、生物安全管理 1、实验室主任（对实验室直接负责的人员）负责制订和采用生物安全管理计划以及安全或操作手册。 2、实验室安全主管（向实验室主任汇报）提供常规的实验室安全培训。 3、将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，要求他们阅读生物安全或操作手册，并遵循标准的操作和规程。实验室主管应当确保所有实验室人员都了解这些要求。实验室内应备有可供取阅的安全或操作手册。 二、实验室生物安全规程 （一）进入规定 1、在处理危险度2级或更高危险度级别的微生物的实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志。 2、只有经批准的人员方可进入实验室工作区域。 3、实验室的门应保持关闭。 4、儿童不应被批准或允许进入实验室工作区域。 （二）操作规范 1、严禁用口吸移液管。 2、严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。 3、所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。 4、出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室安全主管报告。 5、必须制订关于如何处理溢出物的书面操作程序，并予以遵守执行。 （三）人员防护 1、在实验室工作时，任何时候都必须穿着工作服。 2、在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。手套用完摘除后必须洗手。 3、在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。 4、有喷溅的可能时，为了防止眼睛或面部受到泼溅物的伤害，应戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。 5、不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。 6、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。

微生物学实验复习汇总

微生物学实验复习汇总 1.细菌培养基的配制过程？ 答：配制培养液→调节PH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面（搁置斜面的长度不超过试管总长的1/2） 2.空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若用湿热灭菌。则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。 3.接种环在用前必须烧灼灭菌，用后也应立即烧灼。 4、培养基的种类及用途： 5、培养基中的营养物质：

答：①、用美蓝液对酵母菌染色后，活细胞为无色，死细胞为蓝色②、平板菌落计数法 8、实验常用的凝固剂是哪一种？固体培养基、半固体培养基及液体培养基加凝固剂琼脂的量为多少？琼脂在什么温度下溶化？什么温度下凝固？ 答：常用凝固剂是琼脂，分别为1—2%，0.5% 96°C下融化，40°C凝固 9.配制培养基时应遵循哪些原则？配制培养基的一般方法和步骤是什么？配制培养基时不可用铜锅或铁锅，原因是什么？答：原则：目的明确、营养协调、理化适宜、经济节约。铜或铁锅成份会对培养基成份造成干扰。 10、培养基分装时，液体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？固体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？半固体分装高度以试管的多少为宜？ 答：液体：试管高度的1\4,三角瓶的试管高度的1\2,固体：试管高度的1\5，三角瓶的1\2，半固体：试管高度的1\3。高度不适宜易造成搁置斜面时污染棉塞及瓶口。 11.培养基灭菌时外用牛皮纸包扎的目的是什么？ 答：防止灭菌时冷凝水润湿棉塞

12.摆斜面的正确方法是什么？ 答：试管口搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 13.棉塞的作用是什么？正确的棉塞要求是什么？棉塞的长度多少在管口外，多少在管内为宜？作棉塞的棉花要求是什么？能否用脱脂棉？为什么？ 答：作用：阻止外界微生物进入培养基内造成污染和能通气。 14.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如果来不及灭菌应如何处理？ 答：很明显，培养基里含有丰富的氮源，碳源，微量元素等等。如果不立即灭菌，那么，就会长菌。 15.采用什么方法能分离到能分解并利用苯作为碳源和能源物质的细菌纯培养？（以苯作为唯一碳源的选择培养基） 答：①从苯含量较高的环境中采集土样或水样；②配制培养基，倒平板，一般仅以苯作为唯一碳源（A），另一种不含任何碳源作为对照（B）；③将样品适当稀释（十倍稀释法），涂布A平板；④将平板置于温度适当的条件下（37℃）培养，观察是否有菌落产生；⑤将A平板上的菌落编号并分别转接至B平板，置于相同温度条件下培养（在B平板上生长的菌落可利用空气中的CO2的自养型微生物）；⑥挑取在A平板上生长而不在B平板上生长的菌落，在一个新的A平板上划线、培养，获得单菌落，初步确定为可利用苯作为碳源和能源的微生物纯培养物；⑦将初步确定的目标菌株转接至以苯作为唯一碳源的液体培养基中进行摇瓶发酵实验，利用相应的化学分析方法定量分析该菌株分解苯的情况。 16.为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温度高，时间长？ 答：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死，所以温度高、时间长。 17.在干热灭菌过程中应注意哪些问题,为什么？ 答：1 干热过程中，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。电热干燥箱具有可以观察的窗口，灭菌过程中玻璃温度较高，注意避免烫伤。 2 电热干燥箱内温度未降到70°C以前，切勿自行打开箱门，以免骤然降温导致玻璃器皿炸裂。 3 物品不要摆的太挤，以免妨碍空气流通，灭菌物品不要接触电热干燥箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。 18.高压蒸汽灭菌的关键技术是什么？（使用高压蒸汽灭菌锅时，加压之前一定要把原先的空气排尽，注意恒温灭菌，同时要注意高压蒸汽灭菌锅的压力(100 kPa)、温度(121 ℃)和灭菌时间(20 min)。 19.高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内的冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降低“0”时才能打开排气阀，开盖取物？ 答：①灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀。②否则就会因为锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至烫伤操作者。 20.对含糖（如葡萄糖或乳糖等）培养基进行高压蒸汽灭菌时，应采用大多压力、多长时间灭菌为宜？

微生物学实验指导(10.10)

实验一显微镜的使用及细菌的革兰氏染色 一、实验目的和内容 （一）实验目的 1. 复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术，了解油浸系物镜的基本原理，掌握油镜的使用方法。 2. 初步掌握细菌涂片方法及革兰氏染色的步骤 （二）实验内容 1．学习油浸系物镜的使用方法。 2．制作细菌染色装片。 3．进行革兰氏染色法操作。 4．用油镜观察大肠杆菌和苏云金杆菌染色装片。 二、实验原理 （一）油镜的基本原理 普通光学显微镜包括低倍物镜、高倍物镜和油镜3种物镜。油镜是一种高倍放大的物镜，一般都刻有放大倍数，如95×、100×等。油镜头上常刻有OI（Oil，Immersion）或HI（Homogeneous immersion）字样，有的还刻有一圈红线或黑线标记，而且油镜的镜身较高倍镜和低倍镜为长。在低倍物镜、高倍物镜和油镜3种物镜中，油镜的放大倍数和数值孔径（numberal aperture）最大，而工作距离最短（图3-1）。 图1-1 显微镜物镜参数图 显微镜的分辨率是指显微镜能分辨出物体两点间最小距离（D）的能力。D值愈小表明分辨率愈高。D值与光线的波长（λ）成正比，与物镜的数值孔径（NA）成反比.

从上式可看出，缩短光波长和增大数值孔径都可提高分辨率。数值孔径指光线投射到物镜上的最大角度（称镜口角，α）的一半正弦与介质折射率（n）的乘积。影响数值孔径大小的因数，一是镜口角，二是介质的折射率。 当镜与装片之间的介质为空气时，由于空气（n＝1.0）与玻璃（n＝1.52）的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。当以香柏油（n＝1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不仅增加了视野的照明废，更重要的是通过增加数值孔径提高分辨率，因而可以使物像明亮清晰。 （二）革兰氏染色 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家Christain Gram创立的，是细菌学中最重要的鉴别染色法，其原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。

病原微生物实验室消毒管理制度

病原微生物实验室消毒管理制度 1. 工作人员要求 (1)工作人员应穿戴整洁,工作服一般每周更换2次; (2) 实验室接触标本均为可疑污染物,操作前均做好相应防护,手套破损要及时更换, 工作后脱手套用手消毒液消毒双手, 用流动水洗净; (3) 离开实验室的工作人员必须脱掉手套;不能穿工作服到实验室外活动。 2.. 重复使用检验器材处理 (1) 重复使用的器材用后应浸入含有效氯2000mg/l消毒液4小时, 再清洗干净; (2) 浸入重络酸钾(50克溶于100毫升水)浓硫酸(1000毫升) 溶液, 24小时; (3) 取出,蒸馏水冲洗10遍以上; (4) 烘干,备用。 3. 各种物面及地面消毒 (1)台面每日用300-500mg/l含氯消毒剂擦拭;用紫外线消毒时, 灯管离台面不宜超过1米,消毒有效区域为灯管周围1.5-2.0米,每次时间不少于30分钟; (2)地面用浸有500-1000mg/l有效氯消毒液或0.1-0.2%过氧乙酸的拖把拖地; (3)生物安全柜每次使用后用75%酒精擦拭表面,作用20分钟以上;然后紫外线作用20分钟以上。 4. 空气消毒 (1)用紫外线灯照射,每次时间均应大于30分钟,每天不少于1小时; (2)当发生较严重污染时,可用低温蒸气甲醛熏蒸,作用时间6小时以上。 5.及时消毒与日常消毒 当实验室发生小型感染性材料泄露时,应及时消毒,可用2000mg/L 次氯酸钠, 由外向内进行消毒, 作用20分钟以上 . 每次试验后应对生物安全柜、工作台面、室内空气、仪器表面、地面等进行常规消毒。 6.彻底消毒 根据实验室的使用情况,每两周至少对实验室进行一次彻底消毒,包括台面、地面、室内空气、仪器表面、生物安全柜、检毕废弃物等。 7.每月对消毒器材、物品的状态进行核查。