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竹叶黄酮的分离提取

竹叶黄酮的分离提取
竹叶黄酮的分离提取

竹叶黄酮的分离提取、检测与成分分析

姓名:周胤潇

班级:微生物121

学号:201201220414

摘要:竹叶黄酮(Bamboo- leaf-flavonoid, BLF)是我们于上世纪90年代末创制的一种新型植物黄酮制剂,具有优良的抗自由基、抗氧化、抗疲劳、耐缺氧、抗病毒、抗菌、抗炎、降脂、扩冠和免疫增强活性等(1-2)。竹叶总黄酮以其巨大的资源优势和良好的药理活性将成为一种非常有前途的天然药物,具有广阔的开发前景.本实验主要对竹叶中黄酮类物质的含量用紫外分光法进行测定以及高效液相色谱法对竹叶提取物的成分分析。

关键词:竹叶黄酮类物质紫外分光法高效液相色谱法

前言竹子为禾本科Poaceae竹亚科Bambusoideae多年生常绿植物,在我国分布很广,资源十分丰富。竹子在建筑、水利、农业等领域都有广泛的应用,然而,竹子加工利用后,竹叶却总是被弃置,造成了极大浪费。近年来的研究发现竹叶中含有多种活性物质,其主要活性物质是黄酮类物质,含量平均在2%,竹叶提取物中的有效成分主要是以荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷为代表的碳苷黄酮和以对香豆酸、绿原酸、咖啡酸和阿魏酸为代表的植物酚酸为主,竹叶黄酮中的功能因子主要是黄酮糖苷和香豆素内酯,黄酮类物质是一类天然植物成分,具有显著的生理及药理活性,黄酮类成分有明显的抗溃疡、解痉、抗菌、抗炎、降血脂、镇痛和雌性激素等生物活性和生理活性作用⑶。

实验目的:

(1)掌握样品的前处理的方法

(2)掌握竹叶黄酮的提取、分离与纯化

(3)用硝酸铝-亚硝酸钠比色法测定竹叶子中总黄酮

(4)采用超高效液相色谱(UPLC)定量分析竹叶中荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、对香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸8 个特征性成分的量。

1 实验材料和仪器

1.1实验材料:

竹叶(摘自浙江农林大学校园内)

标准样品:甲醇(分析纯)、乙醇(分析纯)、亚硝酸钠、硝酸铝、石油醚(分析纯)、氢氧化钠、芦丁标准品(购自中国药品生物制品检定所,纯度均大于98%)、去离子水。

芦丁标准溶液:精确称取经105℃干燥至恒重的芦丁对照品5.600mg,加入甲醇溶液定容至50mL,配成112ug/mL的芦丁标准溶液。

5%亚硝酸钠溶液:称取约5.263g亚硝酸钠溶解在100mL去离子水,置于4℃冰箱中备用。

10%硝酸铝溶液:称取约11.111g硝酸铝溶于100mL去离子水中,置于4℃冰箱中备用

1.0mol/L氢氧化钠溶液:称取4.000g氢氧化钠溶于100mL去离子水中,置于4℃冰箱备用。

1.2实验仪器:

40目筛

高速冷冻离心机、

旋转蒸发仪、

紫外分光光度计、

微波炉、

粉碎机、

回流装置

密封袋

ACQUITY? Ultra Performance LC超高效液相色谱系统,包含二元溶剂管理器,样品管理器,柱温箱和二阵管阵列检测器;

Micromass Q-Tof micro TM串联质谱(美国Waters公司)

2 实验原理及方法

2.1 实验原理:

浸提、洗脱原理:

根据相似相溶原理,对所用溶剂按黄酮类化合物的极性来选择,竹叶中所含的有效活性物质主要为黄酮甙类,具有较大的极性和亲水性,故可以选择热水、甲醇、乙醇、丙酮等溶剂进行浸提。但由于水的极性过大,且易于将蛋白质、糖类的易溶于水的成分浸提出来,且水提法提取物存放易发霉,从而影响黄酮类化合物的提取和分离。故本实验选用甲醇水溶液作为浸提及洗脱溶剂⑷。

2.2工艺流程(5,6,7)

新鲜竹叶→洗净烘干→破碎→过筛(40目)→回流浸提→抽滤→悬蒸→定容→测定吸光度→分析计算

2.3实验步骤

2.3.1 竹叶处理

采集竹叶,,立刻用微波炉进行杀青干燥(微波炉,700W,间隙加热2~3次,每次60S),将烘干的竹样用粉碎机粉碎,过40目筛,将滤过的竹样粉末放入密封袋中密封,放置于-40℃

冰箱中储存备用。

2.3.2 竹叶黄酮的提取与纯化

2.3.2.1 竹叶黄酮的提取

1.精确称取竹样粉末各200.00g。

2.加入150mL60%乙醇-水溶液,浸泡30min。

3.水浴锅水温75℃热回流提取1h。

4.冷却至室温,过滤,收集滤液。

5.在滤渣中加入50mL60%乙醇进行二次回流30min。

6.冷却至室温收集滤液,弃滤渣,密封,标号,置于4℃冰箱,备用。

2..

3.2.2萃取、纯化

在竹样粗提取液中加入100mL石油醚进行萃取脱脂脱叶绿素,弃上清液取下沉液,再次加入100mL石油醚进行萃取,重复2次,将提取液密封保存至4℃冰箱备用。

2.3 .2.3 浓缩干燥

将萃取过的竹叶提取液用旋转蒸发仪将其浓缩干燥,将干燥后的残渣(黄酮初提物)用60%甲醇定容至100mL容量瓶中,保存于4℃冰箱备用。

2.42.

3.4 离心

将竹叶黄酮浓缩液用离心机在转速为4000rpm,温度10℃条件下离心10min,取上清液,保存至4℃冰箱备用。

2.3.3 黄酮总含量测定----硝酸铝-亚硝酸钠比色法

标准曲线制作:精确称取经105℃干燥至恒重的芦丁标准品5.600mg,加入甲醇溶液并定容至50mL,配成112ug/mL的芦丁标准溶液。准确吸取芦丁标准溶液0、0.5、1、2、3、4mL移入10mL具塞试管中,用60%甲醇定容至5mL,各加入5%亚硝酸钠溶液0.3mL,振摇后放置5min,再加入10%硝酸铝溶液0.3mL振摇后放置6min,再加1.0mol/L氢氧化钠溶液2mL,用60%甲醇定容至10mL,静置10min,以零管为空白,摇匀后在510nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标、芦丁的微克数为横坐标绘制标准曲线以及求取线性回归方程。

样品黄酮含量测定:

1.取竹样黄酮提取液400uL,加入600uL去离子水稀释10倍。

2.将稀释的黄酮提取液用60%甲醇定容至5mL。

3.加入5%亚硝酸钠溶液0.3mL,振摇后放置5min。

4.再加入10%硝酸铝溶液0.3mL摇匀后放置6min。

5.加入1.0mol/L氢氧化钠溶液2mL,用60%甲醇定容至10mL,静置10min。

6.以零管为空白,摇匀后在510nm波长处测定吸光度。

7.根据芦丁标准曲线按公式计算黄酮总含量。

3实验结果

3.1紫外分光测定吸光度

以芦丁为标准品绘制标准曲线.芦丁溶液质量浓度X (ug/mL)与吸光度值A的关系曲线的回归方程式: A=0.0103 X + 0.0154。取2 mL提取液于25 mL比色管中,在510 nm处测定吸光度.参比为空白试剂,并代入回归方程计算其质量浓度.

测得的A=0.260,求得X=23.7476 ug/mL

最终每克竹叶中黄酮含量:23.7476×10×(100÷0.4)÷200=0.2968 ug

3.2 竹叶提取物的特征性成分分析

高效液相色谱分析:

3.2.1 色谱条件:ACQUITY UPLC BEH C18柱(1.0 mm×100 mm, 1.7 μm),流动相A

为0.5%的甲酸水溶液;流动相B为色谱甲醇,流速为0.2 mL·min-1,分析时间:15 min,柱温:30 oC,进样体积: 2.0μL。

3.2.2洗脱条件:0~15min由5% B变为100%B, 10~15 min由100%B变为5%B。

质谱条件

LC-MS 系统使用 ESI 离子源,在正离子模式与负离子模式下分别采集数据。数据采集范围m/z100~1 000。离子源参数ESI:毛细管电压:3000 V,样品锥电压 30 V,脱溶剂室温度 250 ℃,离子源温度 120 ℃,雾化气(N2)体积流量 50 L·h?1,脱溶剂气(N2)体积流量 400 L·h?1。Lock Mass参照溶液为:亮氨酸脑啡呔,[M+H]+:556.277 1,[M?H]?:554.261 5。

3.2.3样品测定: 各待测液经微孔滤膜(0.45 μm)滤过后,进样测定,按标准曲线计算各成分的量。

结果如图3-1,3-2

负离子模式下发现,样品S2中可能含有对香豆酸(分子量为164.2)

图3-1

负离子模式下发现,样品S2中可能含有荭草苷,异荭草苷(分子量均为448.4)

图3-2

4 竹叶黄酮的其他提取方法

4.1 水溶剂提取法

水提法⑻此法适用于黄酮苷类物质提取。具有成本低,对环境及人类无毒害,设备简单,适合工业化大生产,但提取率低,提取中杂质较多(如无机盐,蛋白质,糖类等),后续分离麻烦,现在很少单一使用此法。

4.2 微波提取法

微波法原理⑼是利用磁控管所产生的每秒亿次超高频率的快速震动,使材料内分子互碰撞、挤压,使得位于细胞内的有效成分从细胞壁周围自由流出,传递转移至萃取介质周围,在较低的温度下背萃取介质获取并溶解其中。此法具有提取率高,准确,快速,操作成本低,减少原料预处理费并于环境无害的优点。微波射线穿透性好,在接近环境温度下抽提竹叶中所需有效成分,对于热敏性成分的萃取非常有效。然而,微波萃取在理论和实践中还存在一些问题,如有机溶剂的残留以及微波穿透物质内部时的衰减问题等,而且目前这种提取方法仍沿袭高温煎煮法,长时间高温煎煮会影响许多有效成分,降低药效。

4.3 破碎提取法(10,11)

通过选用各种性质的药材,与几种传统提取方法所得提取物产率和薄层层析对比试验,结果表明,破碎提取法提取快速、完全,且不需要加热,从而避免了对竹叶中有效成分结构的破坏,有效成分的损失小,提取周期短,可以节省大量时间、溶剂和能源,但是提取物的收率并不是最高,且也局限于实验研究,要应用于大生产,还需进一步研究。

4.4 超临界流体萃取法⑿

超临界流体萃取技术是利用临界或超临界状态的流体及被萃取的物质在不同的蒸汽压力下所具有的不同化学亲和力和溶解能力进行分离纯化的操作。被用作超临界流体的溶剂有CO2、H2O、C2H4、C3H8、CH3OH、NO2等,其中CO2以临界条件易达到(Tc=31. 06e, Pc=7. 39MPa)且无毒、无味、不燃、价廉、易精制等特性应用最为普遍。超临界提取类黄酮和传统的溶剂提取相比具有一系列优点:操作周期短、提取效率高、无溶剂残留以及有效成分和

热不稳定的成分不易被分解,从提取到分离可一步完成,可选择性提取和分离纯化,溶剂溶质分离方便。但是该法生产成本高,提取物中烷基酚含量较高,超临界CO2是非极性溶剂,对非极性和分子量很低的极性物质表现出很好的溶解性,但对极性较强的物质溶解能力不足。在竹叶黄酮的提取应用上效果不显著。

5 参考文献

⑴张英.竹叶黄酮的生理与药理活性[ J].世界竹藤通讯,2004, 2 (2): 1-11

⑵陆柏益,张英,吴晓琴.竹叶黄酮的抗氧化及其心脑血管药理活性研究进展[ J].林产化学与工业, 2005, 23

(3):120-124

⑶国家医药管理局中草药中心情报站.药物有效成份手册[M],北京:人民卫生出版社,1986.

⑷杨洋陈朝勇韦小英李秋庭.竹叶黄酮的提取和纯化工艺研究,(广西大学生物技术与糖业工程学院,南宁.食品科技

⑸王振宇;杨春瑜;金钟跃超声波提取芦荟凝胶定工艺东北林业大学学报,2002,第30卷,(4);19-21

⑹刘振南。用正交法探讨山楂叶中黄酮类化合物的乙醇提取工艺,广西民族学院学报(自然科学版),1999,第5卷(3);27-28

⑺李秀信,刘青利,张院民等.香椿叶总黄酮提取方法研究.西北林学院院报.2002第!0卷(1);68-69

⑻]刘羽中,杨洋.生物类黄酮提取研究进展[J].中外食品,2004, 10: 48-49

⑼曾里,刘世贵.微波技术应用于银杏黄酮浸提的研究四川大学学报(自然科学版), 2004, 41(4): 833-836

⑽Okuda T. Yoshida T. and Hatano T, J. Nat, Prod 1989; 52(1): 1-31

⑾袁珂,简秀梅,孟江.车前草不同提取方法的比较研究[J].中国现代应用药学杂志, 1999, 16(4): 20.

⑿张镜澄.超临界流体技术-原理和应用[M].北京:化学工业出版社, 2000

⒀陶文亮,吴钰娟.竹叶黄酮提取分析方法的研究及其新进展.(贵州大学化学与化工学院,贵州贵阳550003).贵州化工.2009.1008-9411

大学生创业计划书---赣南脐橙的种植和推广

大学生创业计划书——赣南脐橙种植及推广 一、项目名称:赣南脐橙种植和推广 二、产品特点以及功能 1.地理分布 无自然生长,全国有赣南大地上有分布。 2.生态环境 生于山坡和农田及村庄和实验基地,海拔最高达 800米。也常栽培。湖南也有分布。在北美洲也有脐橙分布。在我国,,南到广东、海南,湖南均有分布,故农谚讲:“寻乌蜜桔甲 天下,赣南脐橙传四方”。 3.脐橙特性 生脐橙的一生,从种子生根发芽或嫁接苗接穗初次发芽开始,生长发育,开花结果,盛果丰产,最后衰老死亡的整个生命活动中,由于树龄的变化及生长发育特点各异,通常可将脐橙果树的一生分为四个生物学年龄时期,即营养生长期、生长结果期、盛果期、衰老更新期。充分了解各期的特点及其差异,有利于采取正确的栽培管理措施,达到提早结果,延长盛果期,推迟衰老,从而获得更高的经济效益。 一、营养生长期 从种子萌发或接穗初次发芽开始,树冠骨架初步形成,到首次开花结果,为营养生长期。这个时期的主要特征:树体离心生长旺盛,根系和树冠迅速扩大,逐步形成骨架;枝条向上生长,分枝角度较小,树体的纵向生长较横向生长快;萌芽早,停止生长迟,生长势强;新梢生长量大,枝长节稀,一般年抽梢3~4次。营养生长期的长短,即幵始结果的早迟,与品系、砧木类型有关,特别是与栽培管理技术关系极大。 这一时期的主要栽培措施:要在选用良种和适宜砧木的基础上,十分注意精选接穗,培育壮苗;高标准建园;加强土壤深耕熟化和肥水管理,加速营养生长;采用绑、拉、扶、撑

等手段,开张分枝角度,培养健壮的树冠骨架;合理修剪,多留枝叶,为早结丰产和持续高产打下基础。 二、生长结果期 脐橙从幵始结果到大量结果以前的这段时期,称为生长结果期。这是从营养生长占优势发展为营养生长与生殖生长逐渐趋于平衡的过渡时期。其主要特点:骨干枝逐渐形成,树体离心生长由强逐渐减弱,后期骨千枝生长缓慢;结果枝逐渐增多,结果部位由最初的中下部开始,逐步进入全面结果;树冠和根系都迅速扩大,枝条开张角度增大,抽枝数量增多,长度变短,充实而粗壮;初结果时果实较大,果皮较厚,果味较酸,汁多味淡,耐贮性较差,随着结果量的增加,果实品质逐步提高,表现出固有的特征。 这一时期栽培上的主要任务是:在保证树体健壮生长的基础上,大量增加侧枝,扩大绿叶层。同时迅速提高产量、品质,夺取早期丰收。这一时期,营养生长和生殖生长之间的矛盾较为尖锐,若栽培管理不善,易造成平衡失调。或营养生长过旺,导致严重落花落果,影响花芽形成;或生殖生长过度,大量开花结果,削弱了营养生长,造成树势早衰、低产。因此需要充实养分和水分,保持健壮的生长势,同时采取必要的促花、保果措拖,通过疏果调节着果量,维持平衡。 生长结果期的长短,受生态环境和栽培措施的影响而异。采用密植栽培管理的,3 ~ 5年生长结果期后即进入盛果期;稀植园可长达5~10年。 三、盛果期 盛果期是脐橙大量结果时期。这一时期以结果为主,树冠和根系的离心生长趋向停止。树冠扩大到最大,骨干枝生氏缓慢,小侧枝大量抽生,大量开花结果,产量达到最高峰。小侧枝不断交替发生,早先抽生的出现枯死,树冠叶幕逐渐向外推移,树冠内部的大骨干枝则逐渐光禿裸露。树冠上下内外各部之间或各枝序之间,常产生交替结果现象。 盛果期是营养生长和生殖生长相对平衡的时期。这一相对平衡维持时期越长,盛果期就越长,这是栽培者所希望的。但由于大量结果,树体营养的积累和消耗的矛盾很大,容易造成“大小年”结果现象,倘形成恶性循环,对脐橙生产损失极大。所以,加强管理,注意调节营养生长与开花结果的矛盾,防止“大小年” 结果,防止早衰,延长盛果期年限,夺取高产稳产,是这一时期的主要任务。 栽培措施方面,宜适时施重肥,保证足够的营养供应,促使连年结果;注意病虫害和自然灾害的防治,保护叶片,提高同化器官功能;适当疏剪和更新侧枝,防止树冠郁蔽和早衰。密植园宜适时疏移和间伐,保持足够的光照,继续丰产稳产。 四、衰老更新期 盛果期后,当产量明显下降,骨干枝先端开始干枯,即已进入衰老更新期,经过几次更新直至死亡。这个时期的主要特征: 产量下降,果实变小;生长势越来越弱,骨干枝先端的小侧枝大量干枯死亡,树冠绿叶层逐渐缩小;枝梢发生次数少,极易大量落花落果,出现隔年结果;树冠内瞠发生-定数量的徒长枝,向心生长明显。

中草药叶下花总黄酮提取方法

中草药叶下花总黄酮提取方法 作者:杨发忠,杨斌,杨德强,陈厚琴,代红娟,张丽,李东海 【摘要】目的对叶下花总黄酮的种类与提取方法进行初步研究。方法采用定性检测、光谱分析、单因素测定、正交实验等,研究黄酮种类,考察乙醇体积分数、温度、固液比、时间对提取率的影响。结果叶下花含黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇等多种黄酮类化合物;所考察的影响因素中,对总黄酮提取率影响程度大小顺序为乙醇体积分数>温度>时间>固液比。结论最佳提取条件为A1B2C3D3 (乙醇体积分数30%、温度65℃,提取时间180 min,固液比1∶80),在此提取条件下,提取量高达5.233%。 【关键词】叶下花总黄酮提取方法正交实验 Abstract:ObjectiveTo optimize the extraction conditions for the total flavonoids from Ainsliaea pertyoides Franch and to study the categories of the total flavonoids. MethodsThe methods of the chemical qualitative detection, the spectral analysis, single factor determination, orthogonal test were adopted to study the categories of the total flavonoids, and the effect of four factors, i.e. the volume fraction of ethanol, the temperature, the ratio of solid to liquid, the

竹叶黄酮的抗氧化活性研究

食 品 科 技 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2011年 第36卷 第7期 提取物与应用 · 201 · 罗宇倩1,郭 辉1,胡林福2,施林巍2,钱俊青1* (1.浙江工业大学药学院,杭州 310014; 2.浙江竹类资源生物技术研究开发中心,安吉 313300) 摘要:为了有效利用竹叶中黄酮类物质,研究采用不同的方法(DPPH法、邻苯三酚自氧化法(325 nm)和 Fenton法)评价了竹叶黄酮的抗氧化活性,以Vc和茶多酚为阳性对照品。结果表明:竹叶黄酮清除超氧负离子自由基和DPPH自由基的能力比茶多酚强,其EC 50相应为11.7 μg/mL和18.3 μg/mL,分别是Vc的约1.2倍和3.4倍;竹叶黄酮在清除羟自由基效果与茶多酚相当,EC 50 为0.58 mg/mL,比Vc效果好。因此竹叶黄酮具有很强的抗氧化能力,值得深入研究其生理功能及开发利用价值。 关键词:竹叶;黄酮;抗氧化性 中图分类号:TS 202.3 文献标志码:A 文章编号:1005-9989(2011)07-0201-03 Antioxidant activity of ? avonoids from bamboo leaves LUO Yu-qian 1, GUO Hui 1, HU Lin-fu 2, SHI Lin-wei 2, QIAN Jun-qin 1* (1.College of Pharmacognosy of Zhejiang University of Technology Hangzhou 310014; 2.Biological Technology R&D Center of Bamboo Resources, Anji 313300) Abstract: The antioxidant activity of total flavonoids from bamboo leaves was determined by various assays, including DPPH radical-scavenging, self-oxidation of 1, 2, 3-phentriolassay method(325 nm) and Fenton reactions. The results showed that ? avonoids from bamboo leaves have very strong scavenging capabilities for superoxide anion and DPPH free radical, their EC 50 values are 11.7 μg/mL and 18.3 μg/mL respectively, and are approximately 1.2 times and 3.4 times as much as that of vitamin C respectively. The scavenging capability of bamboo leaves ? avonoids for hydroxyl radical is stronger than that of vitamin C, weaker than tea polyphenol, and its EC 50 is 0.58 mg/mL.Key words: bamboo leaves; ? avonoids; antioxidation 收稿日期:2010-11-07 ﹡通讯作者基金项目:浙江省制药工程重中之重开发基金项目。 作者简介:罗宇倩(1986—),女,湖南株洲人,硕士研究生,研究方向为天然药物的提取与纯化以及药理研究。 淡竹叶和淡竹沥是中医一味传统的清热解毒药,早已为我国人们所认识。竹叶中黄酮类物质是主要活性物质,含量平均在2%,主要为黄酮糖苷[1],分别是荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷,以及木犀草素苷、洋芹苷和黄酮苷类。竹叶黄酮具有明显的抗脂质过氧化[2-3]、清除羟自 由基和调节血脂功能及抗过敏、抗炎、抗菌、抗突变、抗肿瘤、抗溃疡、抗病毒、保护心血管疾病[4-5]及保肝等生理活性,是一类极具开发前景的天然有机抗氧化剂[1,6-8]。 我国竹叶资源丰富,因此充分开发利用竹叶中的黄酮类成分具有十分重要的现实经济意义。 竹叶黄酮的抗氧化活性研究

黄酮的提取实施方案

黄酮提取实验方案 1材料与仪器 1.1材料 1.2试剂 芦丁,无水乙醇,氢氧化钠,石油醚,硝酸铝,三氯化铁,三氯化铝,浓氨水,浓盐酸,镁粉,亚硝酸钠(以上均为国产分析纯),实验所用水均为蒸馏水。 1.3实验仪器 电热恒温水浴锅 电子天平(感量0.0001g) 722型光栅分光光度计 索氏提取器 量筒(100ml,10ml)25ml比色管移液管小试管白瓷板圆底烧瓶100m 容量瓶 锥形瓶 2实验原理 2.1提取原理 溶剂提取原理游离黄酮黄酮昔备注 乙辱溶解范围广+ + (甲醇)著■甘元均可溶(90-95%) (6M)甲醇毒性大 沸水多糖昔易于水+ 成本低、安全, 水溶性杂质多 臓性水或稀氢氧化钠溶出能力强 碱性乙醇酚强基的酸性 + +石灰水除杂质效果好

分离依据 之间的极性(分配系数K )差异 分离工艺 回收 回收 单糖瞽 多糖昔 誓元 爸游离黄酮的乙瞇液 2 黄酮与杂质 昔与昔元 昔元与昔元 )溶剂萃取法 2.2分离方法及原理 (二)pH 梯度萃取法 分离依据: 游离黄酮类化合物的酸性差异(见黄酮酸性规律) 分离工艺: 依次以 5%NiiH0h . 5%Na2C0 0. 2%N SL OH. 4%NaOH^取 5%NaHCO3< 5%Na2CO3液 0. 2KNaOH 液 4%NaOH 液 母液 (脂溶性杂石油駆液 乙豔液 乙酸乙酯 (脂溶性杂质)| | 丄酸化 水饱和正丁醇 母液 (水溶性杂质) 减压回收 原料的提取苹缩液(水溶液) 依次以石油耿、乙馳、 乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取

3 实验部分 3.1 原料的预处理 金星科厥类叶T除杂T水洗T晾干T粉碎 3.2 芦丁—标准溶液的配制 将芦丁在干燥箱里用120C条件下恒重1.5h,然后精确称取芦丁标准品O.OIg用85%勺乙醇溶液配制成100.00mL 的溶液,备用。 3.3 测定波长勺选择 精确移取芦丁标准溶液0.50mL, 置于25.00mL 勺比色管中,用质量分数为85%勺乙醇稀释到10.00mL 处,加人5%勺亚硝酸钠溶液0.80mL, 混匀,放置10min; 加入10%硝酸铝溶液0.80mL , 混匀,放置10min, 再加入4%勺氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀,放置10min, 加入85%勺乙醇溶液至刻度,摇匀,10min后在460?560nm处测定吸光度,⑷(以试剂样品做空白)选择最大吸收波长。 3.4 芦丁标准曲线勺绘制 精确吸取芦丁标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL于6支25.00mL的比色管中,用质量分数为85%勺乙醇稀释到10.00mL 处,加人5%勺亚硝酸钠溶液0.80mL, 混匀,放置10min; 加入1 0%硝酸铝溶液0.80mL , 混匀,放置10min, 再加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀,放置10min,加入85%的乙醇溶液至刻度,摇匀,10min后于波长500nm处测定吸光度,(以第一瓶为空白溶液)然后以吸光度和芦丁溶液浓度做图,绘制标准曲线。 3.5 黄酮类化合物的特征性实验[5]-[6] 在一定条件下对提取的黄酮类化合物进行特征性实验,具体内容如 下: (1)盐酸一镁粉反应:取 1.00mL提取液于试管中加适量镁粉摇匀,再加入浓盐酸数滴(1次加入),观察其泡沫颜色。(2)三氯化铝反应:取提取液点在滤纸上,滴加1%三氯化铝乙醇溶液, 吹干,观察颜色变化。(3)三氯化铁反应:取几滴提取液于白瓷板上,滴加1%三氯化铁乙醇溶液, 观察其颜色。(4)浓氨水反应:取乙醇提取液点在滤纸上,将滤纸在浓氨水上方熏0.5min ,观察 其颜色变化。 3.6 单因素实验 2.6.1 较佳提取剂质量分数的确定 准确称取3g 处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中,分别用无水乙醇、95%、85% 80%、 75%的乙醇60mL对3g金星厥科叶样品在水浴温度为80C下回流提取3h.提取完毕,用与提取剂的 质量分数相同的乙醇反复洗涤圆底烧瓶、滤纸包,将其定容于100:00mL 容量瓶中,然后精确吸取 0.50mL提取液置于25.00mL的比色管中,用与提取剂质量分数相同的乙醇稀释到10.00mL处,加人5%的亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀,放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL ,混匀,放置10min,再加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀,放置10min, 加入85%的乙醇溶液至刻度,摇匀,10min 后 于波长500nm处测定其吸光度,同时做三组平行实验。

喷施竹叶黄酮对小白菜产量-品质及矿质元素含量的影响

喷施竹叶黄酮对小白菜产量\品质及矿质元素含量的影响 摘要:采用土培法,研究喷施25~200 mg/L竹叶黄酮对小白菜产量?品质及矿质元素含量的影响?结果表明,竹叶黄酮喷施浓度为50 mg/L时,对小白菜促生长效果最佳,并显著改善其品质,其中产量?株高?最大叶面积和SPAD值分别较未喷施处理增加33.3%?12.3%?41.4%?5.1%;叶片中可溶性糖?可溶性蛋白质?全N?全P?全K 含量也分别增加54.8%?22.8%?14.7%?17.9%?21.5%?此外,当喷施浓度为25 mg/L 时,小白菜的VC含量和全P?全K含量均较其他浓度处理高,分别比未喷施处理增加31.0%?19.2%?22.8%?竹叶黄酮喷施浓度高于100 mg/L时,对小白菜产量?品质和矿质元素含量的促进效果不明显?综合来看,当竹叶黄酮的喷施浓度为50 mg/L 时,对小白菜产量与品质的改善效果最佳? 关键词:竹叶黄酮;小白菜;产量;品质;全氮;全磷;全钾 Effect of Spraying Bamboo Leaves Flavone on the Yield, Quality and Mineral Element Contents of Chinese cabbage Abstract: Soil culture was used to study the effects of spraying 25~200 mg/L bamboo leaves flavone on the yield, the quality and the mineral element contents of Chinese cabbage. The results showed that 50 mg/L bamboo leaves flavone had the best growth-promoting effect on Chinese cabbage, and could improve the quality significantly. There were increases in yield, plant height, maximum leaf area and SPAD value of Chinese cabbage by 33.3%, 12.3%, 41.4% and 5.1% respectively, and the contents of soluble sugar, protein, total N, total P and total K were also increased by 58.8%,22.8%,14.7%,17.9% and 21.5% respectively. In addition, the contents of vitamin C, total P and total K of Chinese cabbage were the highest in 25 mg/L of bamboo leaves flavone treatment, the rate of increase was 31.0%, 19.2% and 22.8% respectively. However, 100 mg/L or more of bamboo leaves flavone had no obvious promotion effects on the yield, the quality and the mineral element contents of Chinese cabbage. In summary, 50 mg/L of bamboo leaves flavone had the best promoting effects on the yield and the quality of Chinese cabbage. Key words: bamboo leaves flavone; Chinese cabbage; yield; quality; total N; total P; total K 竹叶黄酮是20世纪90年代新开发的以高山野生淡竹叶为原料的一种植物类黄酮制剂,其功能因子为黄酮甙,并以黄酮碳甙为主[1],具有优良的抗自由基?抗氧化?抗衰老?抗菌?抗病毒及保护心脑血管?防治老年退行性疾病等生物学功效?近年来在天然功能性食品添加剂和医药保健品领域崭露头角[2]?目前,对黄酮类化合物的研究逐步延伸到植物科学方面?据报道类黄酮化合物能显著提高植物的抗

总黄酮的提取方法

总黄酮的提取方法 1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法 2、微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异,使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热,从而使被提取物质从基体或体系中分离,进入介电常数较小,微波吸收能力相对差的提取剂[1]。这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单 3、超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质,是目前比较新的方法。原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取,另外,还利用其次效应,如机械振动、扩散、击碎等,使其加速被提取成分的扩散、释放。超声波提取法具有设备简单,操作方便,提取时间短,产率高,无需加热,同时有利于保护热不稳定成分,省时,节能,提取率高的优点。 4、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上,兼有气体和液体的双重特点,对物质具有良好的溶解能力,从而作溶剂进行萃取分离。可做超临界流体的物质很多,一般为低分子量的化合物,如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。目前多采用CO2 做萃取剂,因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力,对大多数极性较强的组分则不起作用,因此,在其中加入夹带剂,通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点:过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。但它所需要的设备规模较大,技术要求高,投资大,安全操作要求高,难以用于较大规模的生产。 5、酶法提取酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质,利用酶反应的高度专一性,破坏细胞壁,使其中的黄酮类化合物释放出来。黄剑波等[22]采用纤维素酶辅助法从甜茶中提取黄酮类化合物,黄酮类物质的提取率为91%,提取纯度为54%。王悦等[23]对桔皮细胞进行游离酶、固定化酶和常规法提取,黄酮得率分别是%,% 和%,和传统的方法相比,游离酶法的总黄酮得率提高了81%。

竹叶中黄酮提取分离及抗氧化活性研究

竹叶中黄酮提取分离及抗氧化活性研究 摘要:采用体积分数95%的乙醇浸提与超声波相结合的方法提取竹叶黄酮,并通过邻苯三酚自氧化法和Fenton反应测定其抗氧化性能。结果表明,竹叶黄酮的提取率为5.30%,粗提物中黄酮的含量为13.90%。0.2 mL 1 mg/mL竹叶黄酮对超氧阴离子自由基(O2-·)的清除率为17.39%;0.7 mL 1 mg/mL竹叶黄酮对羟基自由基(·OH)的清除率为58.20%,表明竹叶黄酮有优良的抗氧化活性。 关键词:竹叶;总黄酮;提取;抗氧化 Extraction of Flavonoids from Bamboo Leaves and Their Antioxidant Activity Abstract:Total flavonoids were extracted from bamboo leaves by 95% ethanol as solvent and ultrasonic. The oxidation activity of flavonoids in bamboo leaf was determined by the methods of pyrogallol autoxidation and Fenton reaction. The results showed that the extraction yield of flavonoids from bamboo leaf was 5.30%,and the content of flavonoids in the crude extract was 13.90%. The clearance rate of O2-· by 0.2 mL 1 mg/mL bamboo leaf flavonoids was 17.39%;while the clearance rate of ·OH by 0.7 mL 1 mg/mL bamboo beaf flavonoids was 58.20%,it showed that flavonoids in bamboo leaf had good antioxidant activity. Key words:bamboo leaf;total flavonoids;extraction;antioxidant activity 竹叶在中国有着悠久的食用和药用历史,其性淡、寒、味甘、微涩,具有清热利尿、明目解毒、止血、免疫调节、抗氧化、抗艾滋病和抑制肿瘤等功效,且无毒无害,可作为绿色食品进行开发。竹叶中含有丰富的黄酮类物质,总黄酮含量平均在10 mg/g左右。竹叶黄酮具有优良的抗溃疡、解痉、抗菌、消炎、降血脂、镇痛、利尿、降血清胆固醇和雌性激素、抗氧化等功效[1-7]。郑德勇等[8]报道从竹叶中提取的总黄酮对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)具有显著的清除能力;张英等[9]和章荣华等[10]研究发现竹叶黄酮能显著提高衰老小鼠体内SOD和GSH-Px的活力,说明竹叶黄酮有优良和稳定的抗氧化活性。闽北是中国竹子之乡,但目前对竹叶的利用十分有限,大部分被废弃,未能得到充分的利用。本研究采用乙醇浸提和超声波提取相结合的方法从竹叶中提取总黄酮,并采用邻苯三酚自氧化法测定其清除超氧阴离子自由基(O2-·)的作用,用Fenton反应产生羟基自由基(·OH)使溴甲酚紫退色的方法测定竹叶黄酮清除羟基自由基的作用,为竹叶黄酮的开发利用提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 实验用竹叶采自福建省武夷山市,用蒸馏水洗净后80 ℃烘干,粉碎、过40目筛,烘干备用。

黄酮类化合物提取和分离方法研究进展

收稿日期:2007205225 作者简介:梁 丹(19852),女,河南鹿邑人,贵州大学农药学硕士研究生,研究方向为植物源农药. 第24卷第5期周口师范学院学报 2007年9月Vol.24No.5Jo urnal of Zhoukou Normal U niversity Sept.2007 黄酮类化合物提取和分离方法研究进展 梁 丹1,张保东2 (1.贵州大学农学院,贵州贵阳550025;2.周口师范学院继续教育学院,河南周口466001) 摘 要:黄酮类化合物具有多种生理活性,从天然产物中提取和分离黄酮类化合物,引起了人们的广泛关注,其提取和分离方法也不断地改进和发展.文章主要综述了近几年来不同的提取和分离方法在黄酮类化合物中的应用进展.随着科技的进步,黄酮类化合物的提取和分离方法将更加快速、高效、完善.关键词:黄酮;提取;分离;进展 中图分类号:O652 文献标识码:A 文章编号:167129476(2007)0520087203 黄酮类化合物是植物界分布广泛的天然酚类化 合物,植物中的黄酮大体上可分为“黄酮类”与“黄烷酮类”两大类物质,已知化学结构的黄酮类物质至少有4000余种.黄酮类化合物具有广泛的生理功能, 是许多中草药的有效成分,具有很高的药用价值,如有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[1,2].黄酮类化合物还在食品、化妆品等行业中广泛应用.随着市场需求量的增加,经济效益的提高,黄酮类化合物提取和分离方法也在不断地改进和提高. 1 黄酮类化合物提取方法的研究进展 1.1 按所用溶剂不同分类 (1)热水提取法(以水作溶剂).热水一般仅限 于提取苷类.在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素.此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产.郭京波等[3]以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍),可以明显提高芦丁的产率.(2)有机溶剂萃取法.乙醇和甲醇是提取黄酮类化合物的最常用溶剂.高浓度的醇(90%~95%)适合提取苷元,60%左右的醇适合提取苷类,提取的次数一般为2~4次[4].胡福良等[5]提取蜂胶液中黄 酮类化合物,以80%乙醇提取的总黄酮的含量最高.其他有机溶剂法是根据相似相溶原理,对不同性质的黄酮选择最佳的有机溶剂进行提取. (3)碱提取酸沉淀法.黄酮类成分大多具有酚羟 基,易溶于碱水(如碳酸钠、 氢氧化钠、氢氧化钙水溶液)和碱性稀醇.因此,可先用碱性水提取,碱性提取液加酸后黄酮苷类即可沉淀析出.提取时应控制酸碱的浓度,以免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物的母核.当有邻二酚羟基时可加硼酸保护.此方法简 便易行,橙皮苷、 黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.1.2  按提取条件不同分类(1)回流提取法.本法是加热回流提取黄酮类化合物的一种方法.所用回流剂一般有水、 醇及混合溶剂.此法操作简便,但效率不够高,一般很难一次性完全提出黄酮化合物,需要反复回流提取[6,7]. (2)索式提取法.该法是用索式提取器,多次提取黄酮,其溶剂可反复利用,操作方便,价格低廉且提取效率高,但此法所需时间较长.索式提取黄酮类 化合物的方法已广泛为人们所利用[8].(3)微波辅助提取法.该法是利用微波加热的特性对成分进行选择性提取的方法.此法具有快速、高效、高选择性、对环境无危害等特点.刘峙嵘等采用微波萃取银杏叶中黄酮类化合物及唐课文等采用微 波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物,与传统溶剂萃取方法相比,微波萃取法更简单,而且具有萃取时间短、成本低、萃取效率高等优点[9,10].(4)超声提取法.该法是利用超声波浸提黄酮类 化合物的一种方法.其基本原理是利用超声波的空化作用,破坏植物的细胞,使溶剂易于渗入细胞内,同时超声波的强烈振动能给植物和溶剂传递巨大的

举例说明黄酮的提取分离方法

举例说明黄酮的提取分离方法 组长:崔宁 组员:翟雪王璐璐冯子涵赵子惠罗春雨刘红成 1.提取方法 1.1热水提取法 热水提取法一般仅限于提取苷类. 在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素. 此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产。以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍) ,可以明显提高芦丁的产率。 实例 桑叶:采用热水提取法测定桑叶中各有效成分含量,发现黄酮类化合物含量为1%以上,其中霜后桑叶黄酮类化合物含量最高为1.54% ,其次是晚秋桑叶,春季桑芽和后期桑叶含量最低。 甘草:过去甘草黄酮的提取主要为水提法,其主要原理通过甘草粉与水按一定配比,加热混合至80~95 ℃浸提甘草粉,利用甘草黄酮的水溶性进而提取甘草黄酮。此法虽然要求设备简单,但因提取杂质多、提取时间长、提取液存放易腐败变质、后续过滤操作困难、收率较低等缺点,现已不常使用。 1.2有机溶剂萃取法 其原理是利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同的溶剂萃取。常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,一般采取乙醇为提取溶剂。高浓度的乙醇(如90 %~95 %) 适于提取苷元,浓度60 %左右的乙醇适于提取苷类。提取次数一般为2~4 次,提取方法有热 回流提取和冷浸提取两种方式。 实例 桑叶:使用乙醇提取桑叶中总黄酮的最佳工艺条件为:乙醇的浓度为70%,料液比为1:15,在80℃的条件下浸泡3h。使用多种有机溶剂提取发现桑叶中黄酮类化合物的最佳提取溶剂是60%丙酮。 西芹:使用无水乙醇为提取剂,按西芹鲜重与提取剂的比例(W/ V) 1∶2 ,在80 ℃下回流提取2~4h ,制备西芹总黄酮。 银杏叶:从银杏叶中提取总黄酮时, 随乙醇浓度的增加总黄酮提取率逐渐上升, 当乙醇浓度增至70% 时提取率最高, 之后反而下降, 故选用70% 的乙醇作浸提剂最佳。 生姜:生姜黄酮提取用40倍原料的90%甲醇溶液, 在60 ~ 65℃条件下提取4 h 为其优化组合, 而其试验组合中以用40倍原料的75%甲醇溶液,在60~ 65 ℃条件下提取2 h的提取效果最好。 1.3碱性水或碱性稀醇提取法 黄酮类化合物大多具有酚羟基, 易溶于碱水, 酸化后又可沉淀析出。其原因一是由于黄酮酚羟基的酸性, 二是由于黄酮母核在碱性条件下开环, 形成2′-羟基查耳酮, 极性增大而溶解。因此可用碱性水( 碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液) 或碱性稀醇( 50 %乙醇) 浸出, 浸出液经酸化后析出黄酮类化合物。 实例 菊花:各取5g干菊花4份, ,在80℃恒温水浴分别以pH为8,9,10,11的NaOH溶液分两次温浸1h和0.5h。pH降低时.由于提取不完全.含量较低;pH为11时,虽然黄酮

黄酮类化合物的提取纯化方法

黄酮类化合物的提取、药用价值和产品开发应用前景 任红丽2009090141 摘要:对黄酮类化合物的药用价值、提取工艺、分离方法等方面进行综述。在 药用价值方面,讨论了其抗抑郁作用、抗氧化与自由基消除活性作用、对化学性肝损伤的保护作用、抗肿瘤作用、抗骨质疏松作用、抗心肌缺血作用;在提取工艺方面,讨论了溶剂提取法、超声提取法、酶法、微波法等;及其开发应用,为今后黄酮类化合物的深入研究提供理论基础。 关键词:黄酮类化合物提取工艺药用价值 黄酮类物质是一类低分子天然植物成分,是自然界中存在的酚类物质[14],又称生物黄酮或植物黄酮,属植物次级代谢产物,广泛存在于各种植物的各个部位,尤其是花、叶,主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科与菊科中。迄今,已有数百种不同类型的黄酮类化合物在植物中被发现,人工合成的黄酮类化合物也不断问世。最初这类物质仅用于染料方面,自20世纪20年代,槲皮素、芦丁等黄酮类物质用于临床后,才开始引起人们的关注,研究发现其中相当一部分具有显著的生理及药理活性,例如抗氧化、抗病毒、抗炎、调节血管渗透性,改善记忆,抗抑郁、抗焦虑、中枢抑制、神经保护等功能[2,12]诸多生理和药理特性使其广泛应用于食品、医药等领域。 1.提取纯化方法 1.1 传统提取方法 1.1.1 热水提取法 水是最廉价的提取溶剂,是地球最丰富的物质,无色无味无毒,对人体和环境无害,挥发性不大,具有真正的绿色环保意义。但用水作为提取溶剂时,从中药材中提取的黄酮类化合物中杂质含量较多,往往因泡沫或粘液很多,给进一步分离带来许多麻烦,而且浓缩也会很困难。此外,水提取物容易发霉发酵[22]。1.1.2 碱性水、碱性稀醇浸提法 中草药中黄酮类成分多为多酚类化合物,因其结构中具有酚羟基[7],故可用碱性水或碱性稀醇液来提取中草药中的黄酮类化合物。黄酮母核的多样性主要是由黄酮本身骨架、环系的变化、氧化程度和数量而定,当碱的浓度过高,加热时便破坏黄酮类化合物的母核。 1.1.3 有机溶剂热回流及冷浸提取法 根据杂质极性不同,可选用不同的有机溶剂(如石油醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇、甲醇、丙酮等),一般采取乙醇为提取溶剂[15]。

竹叶黄酮开题报告

1、本课题国内外研究动态,选题的依据和意义。 1.1 竹叶黄酮的提取工艺 黄酮类化合物的糖苷是多酚化合物,具有酚性化合物的特征,呈弱酸性,可溶于碱性溶液,但很多黄酮类化合物在溶于碱性溶液的同时有氧存在,其黄酮苷会发生降解反应。根据相似相溶原理,按黄酮类化合物的极性来选择所用溶剂,竹叶所含的有效活性物质主要为黄酮苷类,具有较大的极性和亲水性,故可选择热水、甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇等溶剂进行提取。竹叶黄酮的提取方法传统上多用浸提和蒸馏,目前已采用一些高新技术提取和精制竹叶提取物,如CO,超临界提取、超声波提取等。提取原料选新鲜竹叶,最好是现用现取。 1.1.1溶剂提取法 水提法此法适用于黄酮苷类物质提取。具有成本低,对环境及人类无毒害,设备简单,适合工业化大生产,但提取率低,提取中杂质较多(如无机盐,蛋白质,糖类等),后续分离麻烦,现在很少单一使用此法。 有机溶剂提取法根据黄酮类化合物与杂质极性不同来选择适合的有机溶剂,常用有乙酸乙酯,丙酮,乙醇,甲醇,水或某些极性较大的混合溶剂。如甲醇一水(1:1)进行提取。竹叶中黄酮苷类易溶于水,甲醇,乙醇等强极性的溶剂中,故一般用浓度为60%左右的乙醇提取黄酮苷类。 陈彦等以水和乙醇水溶液为提取剂,对影响提取率的因素进行了优化,得出乙醇最佳提取浓度为75%。 1.1.2微波提取法 微波法原理是利用磁控管所产生的每秒亿次超高频率的快速震动,使材料内分子互碰撞、挤压,使得位于细胞内的有效成分从细胞壁周围自由流出,传递转移至萃取介质周围,在较低的温度下背萃取介质获取并溶解其中。此法具有提取率高,准确,快速,操作成本低,减少原料预处理费并于环境无害。微波射线穿透性好,在接近环境温度下抽提竹叶中所需的有效成分,对于热敏性成分的萃取非常有效。微波萃取作为一种新的顺应潮流的高新技术必将得到迅

竹叶黄酮的应用及市场概况

竹叶黄酮的应用及市场概况 一、竹子概述 竹子是禾本科( Gram ineae ) 竹亚科(Bambusoideae)多年生常绿植物,有着复杂的次生代谢。世界竹类植物约有70-80 属1 300多种,其中我国约有39属500余种。我国江南竹资源丰富,竹林面积约为720万公顷,主要分布在广东、广西、福建、浙江、湖南、江西、四川、江苏、贵州和云南等省份。 竹叶在我国有悠久的利用历史,是一味传统的清热解毒药。近年来对竹子的研究发现,竹叶中含有大量对人体有益的活性物质,包括黄酮酚酸类、生物活性多糖、氨基酸肽类、蒽醌类、萜类内酯等,其中酚酸类化合物、蒽醌类化合物、萜类内酯和生物碱等都有着较强的抑菌杀菌作用。竹叶中主要有效成份的含量为:总黄酮含量1. 18% ~ 2. 02%,总酚含量2. 21%~2. 86%,总糖含量14. 35%~24. 61%,水溶性糖含量7. 86%~11. 45%, 多糖6. 49%~14. 55%,蛋白质含量10. 24%~16. 68%,含氮量2. 13%~2. 65%。 淡竹叶2002年被卫生部列入“既是食品又是药品的物品名单”。 二、竹叶黄酮概述 又名竹叶抗氧化剂,英文名称antioxidant of bamboo leaves, 简称AOB,是从竹叶中提取出来的具有生理活性的生物黄酮,它是一种高效的生物抗氧化剂。AOB为黄色粉末或晶体,总黄酮糖苷含量在≥24%,总香豆素类内酯≥12%,包括黄酮类、内酯类和酚酸类化合物,是一组复杂的、而又具有相互协同增效作用的混合物。其中,黄酮类化合物主要是碳苷黄酮,四种代表化合物为:荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷,内酯类化合物主要是羟基香豆素及其糖苷,酚酸类化合物主要是肉桂酸的衍生物,包括绿原酸、咖啡酸和阿魏酸等。 竹叶抗氧化物是一种具有本土资源特色和自主知识产权的、安全高效经济的天然食品抗氧化剂,于2003年底通过国家评审,2004年4月被批准列入《中华人民共和国食品添加剂使用卫生标准》(GB2760—1996),允许的使用范围是:食用油脂、肉制品、水产品和膨化食品,最大使用量0.5g/kg。 竹叶黄酮于2014年12月20号公告被国家卫计委列入新食品原料。

银杏叶中黄酮提取方法

银杏叶黄酮的提取 一、溶剂提取法:国内外使用最广泛的方法,步骤多、周期长、产率低、产品中有机溶剂易残留。溶剂系统主要有乙醇,水溶液、丙酮-水溶液、NaOH-水溶液、NaOH-乙醇等。精提物常在粗提物制备基础上精制,常用液-液提取法、沉淀法和吸附.洗脱法。 以60%丙酮为起始溶剂粗提取,再脱脂、去银杏酚酸等15道工艺制成提取物。NaOH-水溶液提取效果最好,NaOH-乙醇溶液次之,正丁醇萃取水溶液中银杏黄酮苷,获得最佳萃取条件为萃取5 min温度60℃4次,萃取物中黄酮苷含量为57%。V水:V正丙醇=1:25最佳。银杏叶精提物树脂吸附纯化法以石油醚回流提取,再以80%乙醇回流提取,减压浓缩,新型澄清剂沉降,树脂分级吸附,pH值为3—4酸水和酸性25%乙醇洗涤,75%乙醇洗脱,喷雾干燥 将银杏叶洗净,于60℃烘干至恒重,粉碎,过50目筛。称取粉末25 g,置于索氏提取器中恒重,粉碎,过50目筛。称取粉末25 g,置于索氏提取器中加入60%乙醇至250.0 ml,80℃下回流提取3.0 h,蒸馏回收乙醇,并用活性炭脱色,得银杏叶黄酮提取物。乙醇浓度为50%一70%时,提取率随浓度增加提高,当浓度70%时提取率达最大。随水浴温度升高总黄酮提取率快速增加。当温度80℃时提取率达最大。提取时间为三小时为佳。 二、超临界流体萃取法(SFE法):利用临界或超临界状态的流体及被萃取的物质在不同蒸汽压力下所具有的不同化学亲和力和溶解能力进行分离纯化的操作。最佳萃取实验工艺条件为萃取压力15 MPa、乙醇浓度90%、萃取温度55℃,此时,黄酮类化合物萃取得率较理想. 三、高速逆流色谱技术提取法:是一种不用任何固定载体的液一液分配色谱技术W=70%的乙醇连续循环喷淋逆流6级萃取,m乙醇:m银杏叶=5:1,总萃取时间240min,萃取温度50~55度,萃取率99%以上。 四、微波提取法:微波提取法能对萃取体系中的不同组分进行选择性加热,受溶剂亲和力的限制较小,可供选择的溶剂较多及热效率较高,升温快速均匀,大大缩短了提取时间,提高了萃取效率。以水为介质的条件下,对银杏叶进行微波处理。 工艺流程银杏叶一干燥一粉碎一加入适量氢氧化钙溶液一微波预处理一加入适量碱水一调节pH和硼砂含量→恒温水浴浸提—过滤一定容 通过对提取温度、提取时间、液料比、微波功率、微波时间、解析剂比6个因素进行正交实验,优选得到最佳的萃取工艺条件为:提取温度80℃,提取时间60min,液料比.50:1,微波功率700W,微波时问180s,解析剂比7:l。 五、超声提取法:超声技术应用于天然活性产物的提取,具有速度快、提取率高、节省溶剂、节约能耗、不破坏有效成分的特点。最佳操作条件为超声波频率40kHz处理时间10min、静置时间12 h。以水为介质,在较低温度下 六、酶提取法: 加入淀粉部分水解产物及对葡糖基有转移作用的葡糖苷酶或转糖苷酶,使油溶性或难溶于水或不溶于水的有效成分转移到水溶性苷糖中,既提高了有效成分的提取率,又促进难溶于水或不溶于水的有效成分在体内的吸收. 在常规的醇一水浸提之前用纤维素酶对原料进行酶预处理(酶解时间为2h) 七、分子烙印技术:在极性溶剂中,以丙烯酞胺作功能单体,以强极性化合物槲皮素为模板,

竹叶黄酮的分离提取

竹叶黄酮的分离提取、检测与成分分析 姓名:周胤潇 班级:微生物121 学号:201201220414 摘要:竹叶黄酮(Bamboo- leaf-flavonoid, BLF)是我们于上世纪90年代末创制的一种新型植物黄酮制剂,具有优良的抗自由基、抗氧化、抗疲劳、耐缺氧、抗病毒、抗菌、抗炎、降脂、扩冠和免疫增强活性等(1-2)。竹叶总黄酮以其巨大的资源优势和良好的药理活性将成为一种非常有前途的天然药物,具有广阔的开发前景.本实验主要对竹叶中黄酮类物质的含量用紫外分光法进行测定以及高效液相色谱法对竹叶提取物的成分分析。 关键词:竹叶黄酮类物质紫外分光法高效液相色谱法 前言竹子为禾本科Poaceae竹亚科Bambusoideae多年生常绿植物,在我国分布很广,资源十分丰富。竹子在建筑、水利、农业等领域都有广泛的应用,然而,竹子加工利用后,竹叶却总是被弃置,造成了极大浪费。近年来的研究发现竹叶中含有多种活性物质,其主要活性物质是黄酮类物质,含量平均在2%,竹叶提取物中的有效成分主要是以荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷为代表的碳苷黄酮和以对香豆酸、绿原酸、咖啡酸和阿魏酸为代表的植物酚酸为主,竹叶黄酮中的功能因子主要是黄酮糖苷和香豆素内酯,黄酮类物质是一类天然植物成分,具有显著的生理及药理活性,黄酮类成分有明显的抗溃疡、解痉、抗菌、抗炎、降血脂、镇痛和雌性激素等生物活性和生理活性作用⑶。 实验目的: (1)掌握样品的前处理的方法 (2)掌握竹叶黄酮的提取、分离与纯化 (3)用硝酸铝-亚硝酸钠比色法测定竹叶子中总黄酮 (4)采用超高效液相色谱(UPLC)定量分析竹叶中荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、对香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸8 个特征性成分的量。 1 实验材料和仪器 1.1实验材料: 竹叶(摘自浙江农林大学校园内)

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