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土壤—非晶质氧化硅的测定—光度法

FHZDZTR0155 土壤非晶质氧化硅的测定光度法

F-HZ-DZ-TR-0155

土壤—非晶质氧化硅的测定—光度法

1 范围

本方法适用于土壤非晶质氧化硅的测定。

2 原理

土壤中的非晶质氧化硅以蛋白石为主，也包括氧化硅的水凝胶和干凝胶等，广泛存在于各种土壤中。非晶质氧化硅活性较高，具有一定的羟基化表面，在pH>3.5时，可以吸附阳离子和极性物质，也能接受带氢键的基和带正电荷的溶胶，还能明显影响土壤的物理性质，改善土壤的持水性能，因此非晶质氧化硅分析对了解土壤的理化性状有较大作用。非晶质氧化硅广泛采用热碱溶提取法，以0.5mo1/L氢氧化钠溶液为提取液，加热提取 2.5min，由于非晶质氧化硅具有较大的比表面，在碱溶液中的溶解速率很快，而层状硅酸盐矿物的溶解度是很低的。但加热煮沸时间必须严格控制，否则会引起过多晶体矿物的溶解。提取液以硅钼蓝光度法测定非晶质氧化硅，提取液也可同时测定非晶质氧化铝。

3 试剂

3.1 氢氧化钠溶液：0.5mo1/L称取20g氢氧化钠，溶于水，再加水稀释至1000mL。

3.2 饱和氯化钠溶液：称取40g氯化钠，加入100mL水，充分搅拌后，静置，取上部澄清溶液。

3.3 硅标准溶液：称取0.1068g纯石英（精确至0.0001g）置于铂坩埚中，加入0.75g无水碳酸钠，混匀，再在上面复盖0.25g无水碳酸钠。将铂坩埚置于高温炉中，在1000℃熔融15min。取出冷却，熔块用水提取溶解后，移入1000mL容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀。此溶液1mL含50μg硅，溶液移入塑料瓶中保存。再稀释成1mL含10μg硅标准溶液，溶液同样移入塑料瓶中保存。

3.4 钼酸铵溶液：称取50g钼酸铵溶于800mL水中，用0.5mo1/L氢氧化钠溶液调至pH7.0，再加水稀释至1000mL。

3.5 还原剂溶液：称取25g重亚硫酸钠(NaHSO

)溶于200mL水中。另称取2g无水亚硫酸钠

（Na

2SO

）和0.4g氨基萘酚磺酸溶于25mL水中。然后将两溶液混合，再加水稀释至250mL。低

温保存，有效期约一个月。

3.6 酒石酸溶液：称取20g酒石酸，溶于100mL水中。

3.7 盐酸：1mo1/L，取41.5mL盐酸（ρ1.19g/mL），加水稀释至500mL。

3.8 硫酸：1mo1/L，取27.7mL硫酸（ρ1.84g/mL），缓缓倒入800mL水中，再加水稀释至1000mL。

4 仪器

4.1 离心机，最大转速5000r/min，附100mL离心管

4.2 不锈钢蒸发皿。

4.3 分光光度计。

4.4 容量瓶，250mL、100mL、50mL。

5 操作步骤

5.1 称取2.0000g(精确至0.0001g)通过0.25mm筛孔的风干土样（粘粒称取0.1000g）置于不锈钢蒸发皿中，先加几滴氢氧化钠溶液，用带橡皮头的玻棒搅成糊状，再加入预先在不锈钢蒸发皿中煮沸的100mL氢氧化钠溶液（粘粒土样加50mL），加盖迅速加热煮沸并保持2.5min，总的加热

时间控制在5min 以内。立即取下不锈钢蒸发皿，放在冷水浴中迅速冷却至室温。同时作空白试验。

5.2 将不锈钢蒸发皿中的提取物洗入离心管中离心分离（2000r/min～3000r/min），澄清液倾入250mL 容量瓶中。离心管中的残渣用水（加10滴饱和氯化钠溶液以防止分散）洗涤1次～2次，再离心，将澄清液并入250mL 容量瓶中，再加水稀释至刻度，摇匀。吸取25mL 置于100mL 容量中，加入5mL1mo1/L 盐酸，加水稀释至刻度，摇匀。溶液作非晶质氧化硅测定用，也可同时作非晶质氧化铝测定用。

5.3 吸取一定量提取液置于50mL 容量瓶中（硅量较低的土样，可直接从250mL 容量瓶中吸取提取液），加入10mL1mo1/L 硫酸，再加10mL 钼酸铵溶液，混匀。放置2min 后，加5mL 酒石酸溶液，摇匀。再加1mL 还原剂溶液，摇匀，加水稀释至刻度，摇匀。放置30min 后，在分光光度计上，于650nm 波长处，用1cm 吸收皿测定吸光度，从工作曲线上查得相应的硅量。

5.4 分别取0、20、40、60、80、100μg 硅标准溶液置于50mL 容量瓶中，按5.3 操作步骤操作，绘制工作曲线。

注1：待测液不宜放置过久，应尽快测定，以免放置过久后形成硅酸铝，使测定结果偏低。

注2：用氢氧化钠溶液加热煮沸提取时间应控制在2.5min，以减少对层状晶体矿物的溶蚀。

6 结果计算

按下式计算土壤非晶质氧化硅含量： m 1×t ×2.1393 W （SiO 2）=—————————×1000 m ×k ×103

式中：W （SiO 2）—非晶质氧化硅含量，mg/kg；

m 1 —在工作曲线上查得硅量，μg；

t —分取倍数（待测液体积1000mL/吸取待测液体积mL）；

m —风干土样质量，g；

k —风干土样换算成烘干土样的水分换算系数；

2.1393 —硅换算成二氧化硅的系数。

7 允许差

样品进行两份平行测定，取其算术平均值，取一位小数（小于1mg/kg，取二位小数）。两份平行测定结果允许差按表1规定。表1 非晶质氧化硅测定允许差

非晶质氧化硅量（mg/kg）允许差（mg/kg）

100～300

10～100

1～10

0.2～1

0.1～0.2

< 0.1 5～15 0.5～5 0.05～0.5 0.02～0.05 0.01～0.02 < 0.01

8 参考文献

[1] 鲁如坤·土壤农业化学分析方法·北京：中国农业科技出版社·2000，69·

紫外分光光度法测定蛋白质含量

上海百贺仪器科技有限公司提供ｗｗｗ．ｓｏｕｔｈｈｋ．ｃｎ紫外分光光度法测定蛋白质含量摘要：考马斯亮兰G250与蛋白质结合，在0－1000ug/ml范围内，于波长595nm 处的吸光度与蛋白质含量成正比，可用于蛋白质含量的测定。考马斯亮兰G250 与蛋白质结合迅速，结合产物在室温下10分钟内较为稳定，是一种较好的蛋白质定量测定方法。 1.实验部分 1.1仪器与试剂： Labtech UV POWER紫外分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝G250；牛血清蛋白；超纯水。 1.2试液的制备：牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml 容量瓶中，加入超纯水溶解并定容。考马斯亮兰G250试剂称取100mg考马斯亮兰G250，溶于50ml95％的乙醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀释至1升。 2.结果与讨论 2.1校正曲线的绘制准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml 分别加入到6只10ml试管中，然后用超纯水补充到0.1ml，各试管分别加入5ml 考马斯亮兰G250试剂，混合均匀后，即可依次在595nm处测定吸光度。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制校正曲线如下图，校正曲线方程为 A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。

上海百贺仪器科技有限公司ｗｗｗ．ｓｏｕｔｈｈｋ．ｃｎ 2.2精密度配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次，得到吸光度的相对标准偏差。表1精密度测定结果次数123456RSD% A0.26260.26220.26200.26280.26290.26260.13 2.3稳定性取1mg/ml牛血清蛋白标准溶液每十分钟测定一次，50分钟内的吸光度变化如下表2。表2稳定度测定结果时间（min）A1A2A3A平均 00.55110.55230.55160.5517 100.52040.51840.51680.5185 200.49100.49010.49030.4905 300.47650.47160.47210.4734 400.45240.44750.44400.4480 500.39820.39350.40310.3983 3.结论该方法测定快速、简便，干扰物少，是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定的紫外分光光度法。

土壤学实验土壤质地的测定步骤

实验二土壤质地的测定/土壤机械组成的测定一、实验时间：二、实验地点：三、小组成员：四、实验目的：土壤质地是土壤的重要特性，是影响土壤肥力高低、耕性好坏、生产性能优劣的基本因素之一。测定质地的方法有简易手测鉴定法、比重计法和吸管法。本实验介绍比重计法，要求掌握比重计法测定土壤质地的原理，技能和根据所测数据计算并确定土壤质地类别的方法。五、试验方法：比重计速测法 1.方法原理：将经化学物理处理而充分分散成单粒状的土粒在悬液中自由沉降，经过不同时间, 用甲种比重计<即鲍氏比重计)测定悬液的比重变化，比重计上的读数直接指示出悬浮在比重计所处深度的悬液中土粒含量（从比重计刻度上直接读出每升悬液中所含土粒的重量）。而这部分土粒的半径(或直径)可以根据司笃克斯定律计算，从已知的读数时间(即沉降时间t)与比重计浮在悬液中所处的有效沉降深度(L)值(土粒实际沉降距离)计算出来，然后绘制颗粒分配曲线，确定土壤质地，而比重计速测法，可按不同温度下土粒沉降时间直接测出所需粒径的土粒含量，方法简便快速，对于一般地了解质地来说，结果还是可靠的。六、试剂与仪器试剂： l. 0.5N氧氧化钠(化学纯)溶液，0.5N草酸钠(化学纯)溶液，0.5N六偏磷酸钠(化学纯)溶液，这三种溶液因土壤pH值不同而选一种。 2．2%碳酸钠(化学纯)溶液。 3. 软水，其制备是将200毫升碳酸钠钠加入1500毫升自来水中，待静置一夜，沉清后，上部清液即为软水，2%碳酸钠的用量随自来水硬化度的加大而增加。仪器： l.甲种比重计(即鲍氏比重计)；刻度范围0-60,最小刻度单位1.0克／升，使用前应进行校正。

土壤检测方法

土壤有机质的测定称取通过孔径筛的风干试样，（一般为，精确到），放入硬质试管中，然后从滴定管准确加入 l重铬酸钾-硫酸溶液，摇匀并在每个试管口插入一玻璃漏斗。将试管逐个插入铁丝笼中，沉入加热至185℃-190℃的油浴锅内，试管液面低于油面，要求放入后油浴温度下降至170-180℃，待试管内溶液开始沸腾开始计时，此刻必须控制电炉温度，不使溶液沸腾，其间可轻轻提起铁丝笼在油浴锅中晃动几次，以使液温均匀，并维持在170-180℃，5min±后取出，冷却片刻，擦去试管外壁的油液。把试管内的消煮液及土壤残渣无损的转入250ml三角瓶中，用水冲洗试管及小漏斗，洗液并入三角瓶中，使三角瓶内溶液控制在50-60ml。加3滴邻菲罗啉指示剂，用硫酸亚铁铵标准溶液滴定剩余的K2Cr2O7，变色过程是橙黄-蓝绿-棕红。空白试验：称取石英砂，其他步骤相同。如果试样滴定所用硫酸亚铁铵标准溶液的体积不到空白的1/3,则有氧化不完全的可能，应减少称样量重测。结果计算：有机质（%）=c×(V0-V)××××100/m V0:空白试验消耗硫酸亚铁铵标准溶液体积，ml V：试样测定消耗硫酸亚铁铵标准溶液体积，ml

c: 硫酸亚铁铵标准溶液的浓度，mol/l m：风干试样的质量，g 土壤全氮的测定方法称取通过孔径筛的风干试样（含氮约1mg，精确到）。 1.不包括硝态氮和亚硝态氮的消煮：将试样送入干燥的消化管底部，加入加速剂，加水约2ml湿润试样，再加8ml浓硫酸，摇匀，将消化管置于控温消煮炉上，用小火加热，待管反应缓和时，（约10~15min），加强火力至375℃，待消煮液和土粒全部变为灰白稍带绿色后（白烟消失），再继续消煮1h，冷却，待蒸馏。在消煮试样的同时，做两份空白测定。 2.包括硝态氮和亚硝态氮的消煮：将试样送入干燥的消化管底部，加入1ml高锰酸钾溶液，轻轻摇动消煮管，缓缓加入2ml 1:1硫酸溶液，不断转动消化管，放置5min后，再加入1滴辛醇。通过长颈漏斗加（±）还原铁粉送入消化管底部，瓶口盖上弯颈漏斗，转动消化管，使铁粉与酸接触，待剧烈反应停止时(约5min)，将消化管置于控温消煮炉上缓缓加热45min(管内土液应保持微沸，以不引起大量水分丢失为宜)。停止加热，待消化管冷却后，加加速剂和5ml 浓硫酸，摇匀，待蒸馏。在消煮试样的同时，做两份空白测定。蒸馏前先按仪器使用说明检查定氮仪，并空蒸洗净管道。待消煮

土壤检测标准

土壤检测标准标准化管理部编码-[99968T-6889628-J68568-1689N]

土壤检测标准 NY/T 1121-2006 土壤检测系列标准： NY/T 1121.1-2006 土壤检测第1部分：土壤样品的采集、处理和贮存NY/T 1121.2-2006 土壤检测第2部分：土壤pH的测定 NY/T 1121.3-2006 土壤检测第3部分：土壤机械组成的测定 NY/T 1121.4-2006 土壤检测第4部分：土壤容重的测定 NY/T 1121.5-2006 土壤检测第5部分：石灰性土壤阳离子交换量的测定NY/T 1121.6-2006 土壤检测第6部分：土壤有机质的测定 NY/T1121.7-2006土壤检测第7部分：酸性土壤有效磷的测定 NY/T1121.8-2006土壤检测第8部分：土壤有效硼的测定 NY/T1121.9-2006土壤检测第9部分：土壤有效钼的测定 NY/T 1121.10-2006 土壤检测第10部分：土壤总汞的测定 NY/T 1121.11-2006 土壤检测第11部分：土壤总砷的测定 NY/T 1121.12-2006 土壤检测第12部分：土壤总铬的测定 NY/T 1121.13-2006 土壤检测第13部分：土壤交换性钙和镁的测定 NY/T 1121.14-2006 土壤检测第14部分：土壤有效硫的测定 NY/T 1121.15-2006 土壤检测第15部分：土壤有效硅的测定 NY/T 1121.16-2006 土壤检测第16部分：土壤水溶性盐总量的测定 NY/T 1121.17-2006 土壤检测第17部分：土壤氯离子含量的测定 NY/T 1121.18-2006 土壤检测第18部分：土壤硫酸根离子含量的测定

紫外-可见分光光度法测定有色溶液 (2)

紫外-可见分光光度法测有色溶液最大吸收波波长一、实验目的 1.学习紫外-可见分光光度法的原理； 2.掌握紫外-可见分光光度法测定的实验技术； 3.了解掌握U-3010型紫外-可见分光光度仪的构造及使用方法。二、实验原理 1.紫外-可见吸收光谱法(称紫外-可见分光光度法)以溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析法。根据最大吸收波长可做定性分析；根据朗伯-比尔定律（标准曲线法和标准加入法）可做定量分析。紫外-可见分光光度法定性分析原理：根据吸收曲线中吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状进行定性分析。 2.紫外-可见分光光度法定量分析原理，根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。定量分析常用的方法是标准曲线法即只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。 3.仪器由五个部分组成：即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装置。三、仪器与试剂日立U-3010型紫外-可见分光光度仪；吸量管；乙醇；待测溶液；烧杯等。四、实验步骤 1.接通电源，启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器，预热半小时。 2.在工作接口上选择测量项目为光谱扫描，设置扫描参数（起点：650nm，终点：250nm，速度：中，间隔：1.0nm，单次扫描） 3.将两个均装有无水乙醇的1cm石英比色皿放入测量池中，进行基线扫描。 4.基线做好后，按下面的顺序进行操作：做Baseline→换样（换上待测样品置于Sample池）→进入Analysis Method对相关的参数进行设定→Sample命名→Ready→Measure进行测量，寻找待测溶液的最大吸收波长，再在最大吸收波长处分别测定待测溶液的吸光度。

土壤质地

土壤质地土壤质地是土壤物理性质之一。指土壤中不同大小直径的矿物颗粒的组合状况。土壤质地与土壤通气、保肥、保水状况及耕作的难易有密切关系；土壤质地状况是拟定土壤利用、管理和改良措施的重要依据。肥沃的土壤不仅要求耕层的质地良好，还要求有良好的质地剖面。虽然土壤质地主要决定于成土母质类型，有相对的稳定性，但耕作层的质地仍可通过耕作、施肥等活动进行调节。 1基本概念土壤质地是根据土壤的颗粒组成划分的土壤类型。土壤质地一般分为砂土、壤土和粘土三类，其类别和特点，主要是继承了成土母质的类型和特点，又受到耕作、施肥、排灌、平整土地等人为因素的影响，是土壤的一种十分稳定的自然属性，对土壤肥力有很大影响。其中，砂土抗土壤质地旱能力弱，易漏水漏肥，因此土壤养分少，加之缺少粘粒和有机质，故保肥性能弱，速效肥料易随雨水和灌溉水流失，而且施用速效肥料效猛而不稳长，因此，砂土上要强调增施有机肥，适时追肥，并掌握勤浇薄施的原则；粘土含土壤养分丰富，而且有机质含量较高，因此，大多土壤养分不易被雨水和灌溉水淋失，故保肥性能好，但由于遇雨或灌溉时，往往水分在土体中难以下渗而导致排水困难，影响农作物根系的生长，阻碍了根系对土壤养分的吸收。对此类土壤，在生产上要注意开沟排水，降低地下水位，以避免或减轻涝害，并选择在适宜的土壤含水条件下精耕细作，以改善土壤结构性和耕性，以促进土壤养分的释放；壤土兼有砂土和粘土的优点，是较理想的土壤，其耕性优良，适种的农作物种类多。 1、单粒：相对稳定的土壤矿物质的基本颗粒，不包括有机质单粒； 2、复粒（团聚体）：由若干单粒团聚而成的次生颗粒为复粒或团聚体。 3、粒级：按一定的直径范围，将土划分为若干组土壤中单粒的直径是一个连续的变量，只是为了测定和划分的方便，进行了人为分组。土壤中颗粒的大小不同，成分和性质各异；根据土粒的特性并按其粒径大小划分为若干组，使同一组土粒的成分和性质基本一致，组间则的差异较明显。土粒的成分和性质的变化是渐变的。 4、土壤的机械组成：又叫土壤的颗粒组成，土壤中各种粒级所占的重量百分比。 5、土壤质地：将土壤的颗粒组成区分为几种不同的组合，并给每个组合一定的名称，这种分类命名称为土壤质地。如：砂土、砂壤土、轻壤土、中壤土、重壤土、粘土等。 2划分标准土壤矿物质是由风化与成土过程中形成的不同大小的矿物颗粒组成。土粒大小不同（直径从10米到10米不等），其化学组成和理化性质有很大差异。可按照土粒粒径的大小及其性质分成若干粒级。世界各国通常有不同的土壤粒级的划分标准。下图展示了各土壤粒级划分的具体标准。

土壤有效硼的测定方法及注意事项

土壤有效硼的测定方法及注意事项摘要从方法原理、试剂配制、操作步骤、结果计算等方面介绍了土壤有效硼的检测方法，并指出检测中的注意事项。关键词土壤有效硼；测定方法；注意事项硼是植物正常生长发育不可缺少的微量元素，能够促进植物生长茂盛和生殖器官的正常发育，有利于开花结实，促进作物早熟，提高产量和品质；土壤缺硼，易使作物根尖分生组织的细胞分化和伸长受到抑制，发生木栓化而坏死，并形成“蕾而不花”、“花而不实”、“有壳无仁”及“不穗症”等，严重影响农作物的产量和品质。但供硼过多会使作物形成硼中毒，因此根据土壤有效硼含量，合理供给硼元素是提高作物产量和品质的关键措施之一，土壤有效硼的检测准确度是制定施硼数量的重要依据。笔者根据近年来对土壤有效硼的检测经验，现就土壤有效硼检测方法和注意事项介绍如下。 1测定方法 1.1方法原理土壤中有效硼采用沸水提取，提取液用EDTA消除铁、铝离子的干扰，用高锰酸钾消褪有机质的颜色后，以甲亚胺-H比色法测定提取液中的硼量。在弱酸介质中硼与甲亚胺生成黄色络合物，测定浓度范围为0~1mg/mL符合朗伯-比尔定律，显色稳定时间可达3h，一般在显色1h后比色。 1.2试剂配制高锰酸钾溶液：称取高锰酸钾31.62g溶于水中，稀释至1L。硫酸溶液：量取浓硫酸（优级纯）168mL缓缓加入到盛有约800mL的大烧杯中，不断搅拌，冷却后，稀释至1L。酸性高锰酸钾溶液：上述配制的高锰酸钾溶液与硫酸等体积混合，当天现配。抗坏血酸溶液：称取抗坏血酸5.00g溶于水中，稀释至5 0mL，当天现配。甲亚胺溶液：称取甲亚胺0.90g和抗坏血酸2.00g溶液于微热的60mL 水中，稀释至100mL，必要时过滤，用时现配。pH值5.6～5.8缓冲液：称取乙酸铵250g和EDTA二钠盐10.0g溶于250mL水中，冷却后稀释至500mL，再加入80mL 1∶4硫酸（优级纯）溶液，摇匀（用酸度计检查PH）。混合显色剂：量取3份体积上述甲亚胺溶液和2份体积上述缓冲液混合，当天现配。硫酸镁溶液：称取硫酸镁10.0g溶于水中，稀释至100mL。硼标准系列溶液：称取预先在

土壤检测标准

常用紫外分光光度法测定蛋白质含量

6种方法测定蛋白质含量一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1) 2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2) (nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。二、双缩脲法（biuret法）（一）实验原理双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。（二）试剂与器材 1. 试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正

土壤质地的测定

土壤质地的测定一、目的意义土壤质地是各粒级组反映出来的特征，它对土壤的理化性状有着直接的影响，在林业生产上常以土壤质地作为苗圃地、造林树种选择、排灌量估计、土壤肥力判断以及耕作，施肥措施等的重要参考资料。二、方法选择土壤是由不同粒径的颗粒组成的，各粒级的百分组成可通过一定的分析方法来确定。常用的有筛分法、流水冲洗法、吸管法、比重计法等。吸管法精确度高，但较烦琐，多用于科研。比重计法有两种：一是常用比重计法，适用于精度要求不太高，但对粒级分组要求较细的测定；另一种是比重计速测法，虽然精度不高，但省时且已能满足一般生产工作对土壤资料的需要，适用于大批土样的测定。本实验着重介绍比重计速测法。三、测定原理经分散处理的土粒在悬液中自由沉降，粒径不同沉降速度不同，粒径愈大，沉降愈快。根据司笃克斯（stakes）定律（即在悬液中沉降的土粒，沉降速度与其粒径平方成正比，而与悬液的粘滞系数成反比），算出不同直径的土粒在水中沉降一定距离所需时间，并用特制比重计测出土壤悬液中所含土粒（指<某一级的土粒）的数量，就可确定土壤质地。四、测定方法称取过1mm孔筛相当于烘干土20g的风干土样置于小烧杯中，然后加入分散剂，使土粒分散成单粒状态以利制备悬浮液（约15ml），（酸性土壤加0.5N NaOH，石灰性土壤加0.5N六偏磷酸钠，中性土壤加0.5N草酸钠）使之湿润。静置30分钟后，用橡皮头玻棒研磨土样15～20分钟，同时在1000ml量筒中加入5ml分散剂。把烧杯中的土样用蒸馏水通过放在量筒上0.1mm孔径的洗筛洗入其中，至过筛的水透明为止，加水至刻度（筛上残留的土壤，仔细洗入小烧杯中。在电热砂浴上蒸干，再经烘干过0.5mm及0.25mm孔筛，分别称重，计算>0.5mm，>0.25mm 及>0.1mm的粒组重量）。测其溶液温度，参照表5-1，查出不同温度下不同粒径沉降所需时间，用沉降棒上下搅拌1分钟（下至筒底，上至液面，起落约30次），取出沉降棒，立即记时。在规定时间前20分钟将比重计轻轻放入沉降筒中心，到达规定时间，立即准确读取比重计数值（比重计与水平面相交处弯月面上缘）。由于分散剂引起悬液比重增加，因此需做空白校正（除不加土样外，均按样品分散处理和制备悬液时使用的分散剂和水质加入沉降筒中，保持在与样本相同的条件下，读取的比重计数值）。另外由于比重计刻度是以20℃为标准的，低于或高于此温度均会引起县液粘滞度的改变，而影响土粒的沉降，因此需进行温度校正，其校正值可从表5-2查得。五、结果计算根据计算得到的数值查表5-3即可确定土壤质地名称。六、试剂与仪器

土壤酶活性测定方法

土壤酸性磷酸酶活性的测定 1．试剂配制 (1)0.115M p-硝基苯磷酸钠溶液取10.67g p-硝基苯磷酸二钠（6H O,分子量为371.1），溶于pH4.5通用缓冲液中并稀释至 2 250ml.4摄氏度冰箱保存。 (2)通用缓冲液（pH4.5）（缓冲液久置会有沉淀）原液由以下成分组成: 三羟甲基氨基甲烷12.1g 顺丁烯二酸11.6g 柠檬酸14g 硼酸6.3g 溶于500ml 1N NaOH（40g定容1L）中，加蒸馏水至1L。取原液200 ml，再加入0.1N HCL 或浓HCL来调pH为4.5。最后稀释至1L，即得。 (3)甲苯 (4)0.5 mol/L Cacl2.2H2O溶液： 36.75g Cacl2.2H2O定容500ml. (无水CaCl2: 11.1g定容200ml) (5)0.5 mol/L NaOH溶液：20g NaOH定容1L. 2．测定步骤置于50ml三角瓶中，加4ml通用缓冲液（pH4.5）、0.25ml甲苯和1ml 0.115M p-硝基苯磷酸钠溶液,摇匀后，置于37℃恒温箱中1h。培养结束后，加入1ml 0.5 mol/L氯化钙溶液和4ml 0.5 mol/L NaOH溶液，通过致密滤纸过滤到50ml容量瓶，用蒸馏水定容后在410nm处比色. 3．计算方法土壤酸性磷酸酶的活性用单位时间内每克土中的对硝基苯酚的毫克数表示， W（mg·g-1·h-1）=M1/（m×t）式中：M1—标准曲线上查得样品中对硝基苯酚的质量（mg）； t —反应时间（h）；=1h m—样品土壤的重量（g）无土壤CK: 用1ml蒸馏水代替1g土壤；每批土样做2个；无基质CK: 用1ml蒸馏水代替1ml PNPP。每个处理做1个。标准曲线的制作： 1）对硝基苯酚标液：1g对硝基苯酚定容1L，低温保存。 2）取标液0、1、2、3、4、5ml于0-6号硬质试管中，分别加pH6.5通用缓冲液4ml，Cacl2.2H2O 溶液1ml，NaOH溶液4ml， ②混匀后，定量滤纸过滤到50ml容量瓶，定容后，再取各浓度标液1ml定容至50ml，以0号试管作为对照，在A410nm波长下测光吸收值，并记录光吸收值A410。 ③以吸光值为横坐标、对硝基苯酚的含量为纵坐标计算直线回归方程y=a+bx及相关系数R，即对硝基苯酚含量n（mg）=a+b×A410.

紫外可见分光光度法含量测定

【含量测定】照紫外-可见分光光度法(附录V A)测定。 1.仪器与测定条件：室温：____℃相对湿度：____% 分析天平编号：；水浴锅编号：；紫外可见分光光度计编号：； 2.对照品溶液的制备：取西贝母碱对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含_______mg的溶液，即得。 3. 供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约______g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液3ml，浸润1小时。加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液40ml，置80℃水浴加热回流2小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用适量三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液洗涤药渣2～3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液至刻度，摇匀,即得。 4.标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml，置25ml具塞试管中，分别补加三氯甲烷至10.0ml，精密加水5ml、再精密加0.05％溴甲酚绿缓冲液(取溴甲酚绿0.05g，用0.2mol／L氢氧化钠溶液6ml使溶解，加磷酸二氢钾1g，加水使溶解并稀释至100ml，即得)2ml，密塞，剧烈振摇，转移至分液漏斗中，放置30分钟。取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以相应的试剂为空白。 5.测定法：照紫外-可见分光光度法(附录ⅤA），在nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含西贝母碱的重量，计算，即得。 6.结果与计算 6.1 标准曲线制备：

对照品批号纯度 S 对照品来源干燥条件对照品称重W 对(mg) 各浓度点稀释倍数f 对溶液浓度C 对(ug/ml) 吸光度A 对线性回归方程 A=( )C ＋/-（） r ＝（）计算公式： W S C f ?= 对对对 C 对= 6.2 样品测定：水分Q 取样量W 样（g ）样品稀释倍数f 样样品吸光度A 样样品平均吸光度A 样浓度C(ug/ml) 含量X （%）平均含量X （%）计算公式：() %100Q 110W f C X 6 ?-???= 样样样 X 1= X 2= 7.本品按干燥品计算，含总生物碱以西贝母碱(C 27H 43NO 3)计，不得少于0.050％。结果: 规定检验人：检验日期：复核人：复核日期:

土壤质地分类

国际制土壤质地分级标准质地名称 1、壤质砂土 2、砂质壤土 3、壤土 4、粉砂质壤土 5、砂质粘壤土 6、粘壤土 7、粉砂质粘壤土 8、砂质粘土 9、壤质粘土 10、粉砂质粘土 11、粘土粘粒(<0.002mm,%)粉砂(0.02~0.002mm,%)砂粒(2~0.02mm,%)0~15 0~15 0~15 0~15 15~25 1/ 3

15~25 15~25 25~45 25~45 25~45 45~650~15 0~45 30~45 45~100 0~30 20~45 45~85 0~20 0~45 45~75 0~5585~100 55~8540~55 0~5555~8530~55 0~4055~7510~55 0~300~55土壤颗粒组成中，>2mm的石砾超过1%的土壤，根据石砾含量分别定为砾质土或砾石土。 2/ 3

砾质土在描述土壤质地时，在质地名称前冠以某确立质土字样，如砾质砂土、少砾质砂土等。少砾质土砾石含量1~5%；中砾质土砾石含量5~10%；多砾质土砾石含量10~30%。砾石土。当土壤中砾石含量超过30%以上者，按规定，不再记载细粒部分的名称，只注明是某砾石土。其分级标准为：砾石含量30~50%者为轻砾石土；50~70%者为中砾石土；70%以上者为重砾石土。考试到砾石中所夹细粒部分物质情况各异，在生产上反应亦大不一样，因此，在室内测试时，仍将细粒部分的颗粒组成分别进行了测定，在总的质地命名时仍命名为某砾石土，但在括号内则注明细粒部分的质地名称。如某土壤>2mm的砾石含量为65%，细粒部分的质地为壤质粘土，最后命名时，则定为中砾石土（壤质粘土）等。 3/ 3

土壤酶活性测定的实验步骤

土壤酶的测定 1．三角瓶用稀HNO 3（3-5%）或用洗衣粉浸泡24h，后刷洗，然后再用蒸馏水润洗，晾干。 2．土样研磨精细后分袋装好。土量需2g+2.5g+5g+5g=14.5g，重复一次，14.5×2=29g。一、过氧化氢酶（容量法）（关松荫P323） 1．试剂配制： (1)0.3%过氧化氢溶液： ①（1：100 30%的H 2O 2和水） ②（0.5molH 2O 2+49.5ml蒸馏水） ③（1ml30% H 2O 2+99ml蒸馏水） (2)3N硫酸：（10ml硫酸+50ml水） (3)0.1N高锰酸钾溶液：（1.58gKMnO

4+100ml蒸馏水） 2．操作步骤： 2g风干土置100三角烧瓶→注入40ml蒸馏水和5ml 0.3%过氧化氢（现配）→在往复式振荡机上振荡20min→加入5ml3N硫酸（以稳定未分解的H 2O 2）→用慢速型滤纸过滤，→吸取25ml滤液，用0.1N高锰酸钾的滴定至淡粉红色 3．结果计算过氧化氢酶的活性（M），以20min后1g土壤的0.1N KMnO 4的毫升数表示： M=（A－B）×T 式中： A：空白消耗的0.1N KMnO 4毫升数 B：滤液消耗的0.1 N KMnO 4毫升数 T： KMnO 4滴定度的校正值

以容量法测H2O2的酶活： Kappen （1913）首先介绍硫酸存在下用高锰酸钾滴定剩余的过氧化氢测定酶活。此法根据H 2O 2与土壤相互作用时，未分解的H 2O 2的数量用容量法（常用高锰酸钾滴定未分解的H 2O 2）测定H 2O 2的酶活 2 KMnO 4＋5H 2O 2＋3H 2SO 4→2MnSO 4＋K 2SO

紫外分光光度法测定未知物

紫外分光光度法测定未知物 1.仪器 1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个 1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个 1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支 1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支 2.试剂 2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。 2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。（其必为给出的五种物质之一） 3.实验操作 3.1比色皿配套性检查石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。 3.2未知物的定性分析将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。。。。 3.3未知物定量分析根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。推荐方法 3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于

如何观测辨别土壤质地

附件：如何观测辨别土壤质地？

如何辨别水是否受污染当肮脏、有害的物质进入洁净的水中，水污染就发生了。水的污染源主要有：·未经处理而排放的工业废水；·未经处理而排放的生活污水；·大量使用化肥、农药、除草剂的农田污水；·堆放在河边的工业废弃物和生活垃圾；·水土流失；·矿山污水。水体受污染后，如通过饮水或食物链进入人体会损害健康。那么，如何正确辨别水质好坏呢？中国疾病预防控制中心农村改水技术指导中心付彦芬研究员介绍，查水温、观颜色、嗅味、看浑浊度是辨别水质好坏最简便的方法。付彦芬介绍，地下水温度一般情况下较稳定，如果水温变化异常，有可能是受到工业废水、生活污水的污染，大量的地面水渗入地下时水温也会发生变化。清洁的水是无色的，一旦水出现颜色则说明水质受到污染。比如，水出现红色，有可能是由于铁锈或藻类造成的；水体出现黑色多由于金属的污染造成；而出现黄色或棕黄色有可能是由于加入的净水剂过量或由于铬或腐殖质的污染所致。清洁的水是无味的。若水出现芳香臭或类似黄瓜腐烂的臭味，有可能是由于藻硅类等浮游生物大量繁殖造成的，发生的场所主要是湖泊和水库；若水出现金属臭多由于铜锌管道老化或因铁管生锈造成，这种水主要出现在自来水管道中；若水中出现腐臭，有可能是由于下水道污水污染造成的，它主要发生在有下水道破损污水流入的地方。但有的高层水箱的溢水口直接同下水道相连，一旦下水道阻塞也有可能造成污水上溯而污染整个水箱水质。另外，如果水中出现异味说明有污染。如，水中氯化物污染每升超过300毫克，水会有咸

味；水中的硫酸盐过多时，呈苦涩味；铁盐过多时也有涩味。受生活污染、工业废水污染后，水可呈现各种异味。水体浑浊度超过10 度时，肉眼可明显看到水质浑浊，这一般是由于水体中泥土、有机物、浮游生物和微生物增加而引起的。以上辨别水质好坏知识由中国净水器十大品牌水宜家净水器诚意提供。水宜家净水器以创新、品质、服务闻名的水宜家拥有6年过滤行业经验，是以打造“中国健康直饮水机第一品牌”为使命立志发展成为专业化、国际化的净水器产品制造商。其净水器产品已逐步普遍在国内各地区域建立加盟代理经销，并被国内家庭、学校、公司机构广泛采用。

土壤酶活性测定方法

土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。二、试剂 1）甲苯 2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。 3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。 4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。 5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。 6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg 氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（0.01mg/ml）。三、操作步骤称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。培养结束后过滤，过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计与578nm波长处比色。（靛酚的蓝色在1h 内保持稳定）。标准曲线制作：在测定样品吸光值之前，分别取0、1、3、5、7、9、11、13ml氮工作液，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。再加入4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计上于578nm波长处比色。然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。注意事项: 1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸馏水代替基质，其他操作与样品实验相同，以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。 2、整个实验设置一个无土对照，不加土样，其他操作与样品实验相同，以检验试剂纯

土壤有效硼的测定姜黄素光度法1范围

FHZDZTR0103 土壤有效硼的测定姜黄素光度法 F-HZ-DZ-TR-0103 土壤—有效硼的测定—姜黄素光度法 1 范围本方法适用于土壤中有效硼的测定。测定范围：适用于0.0025μg/mL~0.05μg/mL硼的测定。 2 原理土壤用热水浸提出的硼，与作物对硼的反映有较高的相关性。浸提液中硼在草酸存在下与姜黄素作用，经脱水生成玫瑰红色的络合物。用乙醇溶解后，于550nm波长处测量其吸光度。硼含量在0.0025μg/mL~0.05μg/mL范围，符合朗伯-比尔定律。 3 试剂配制试剂及浸提用的水均须用经石英蒸馏器蒸馏过的蒸馏水。 3.1 市售95%乙醇。 3.2 硫酸镁溶液ρ (MgSO4·7H2O)=100g/L：10.0g MgSO4·7H2O溶于100mL水中。 3.3 姜黄素-草酸溶液：称取0.040g姜黄素和5.0g草酸(优级纯)溶于100mL 95%乙醇中。贮于石英容量瓶或塑料瓶中，黑纸包容量瓶。此溶液在使用前一天配制好，密闭好存放在冰箱中可使用一周。 3.4 硼标准溶液 3.4.1 硼标准贮备溶液：100.0μg/mL硼，称取0.5720g经40℃~50℃烘2h的硼酸(H3BO3，光谱纯)溶于水中，温热溶解后，移入1000mL石英容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。此溶液1mL 含100μg硼。 3.4.2 标准溶液：10.0μg/mL硼，将硼标准贮备溶液稀释10倍，配制成1mL含10.0μg硼标准溶液。 4 仪器与设备实验中所用玻璃器皿使用前应用盐酸(1+3)浸泡2h~4h，然后用水和蒸馏水冲洗干净并晾干后使用。玻璃器皿中含硼，测硼应用石英器皿或聚四氟乙烯、聚乙烯制的器皿。分光光度计。 5 试样制备风干粉末土样，粒度应小于2.0mm。在称样测定时，另称取一份试样测定吸附水，最后换算成烘干样计算结果。 6 操作步骤 6.1 空白试验：随同试样的分析步骤做空白试验。 6.2 试样的测定 6.2.1 待测液的制备：称取10.0g风干土样，精确至0.001g。置于250mL石英锥形瓶中，按1∶2土水比加20.0mL水，连接冷凝管，文火煮沸5min，立即移开热源，继续回流冷凝5min(准确计时)，取下锥形瓶，加入2滴硫酸镁溶液，摇匀后立即过滤，将瓶内悬浮液一次倾入慢速滤纸上，滤液承接于聚乙烯瓶内。同一试样做两个平行测定。 6.2.2 测量吸光度：移取1.00mL滤液于50mL蒸发皿中(石英或聚乙烯制品)，加4.0mL姜黄素-草酸溶液，在恒温水浴上55℃±3℃蒸发至干，自呈现玫瑰红色时开始计时继续烘焙15min，取下蒸发皿冷却到室温，加入20.0mL 95%乙醇，用橡胶淀帚擦洗皿壁，使内容物完全溶解，用慢速滤纸干过滤到具塞比色管(石英或塑料)中(此溶液放置时间不要超过3h)，以95%乙醇为参比溶液，在分光光度计上于550nm波长处，用1cm吸收皿，测量吸光度。

紫外分光光度法测定蛋白质含量实验报告.docx

紫外分光光度法测定蛋白质含量一、实验目的 1.学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理； 2.掌握紫外分光光度法测蛋白质含量的实验技术。二、实验原理 1.测蛋白质含量的方法主要有：①测参数法：折射率、相对密度、紫外吸收等；②基于化学反应:定氮法、双缩脲法、Folin―酚试剂法等。本实验采用紫外分光光度法。 2.蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环中含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近（不同蛋白质略有不同）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯―比尔定律。利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：①对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；②样品中含有的嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。三、仪器与试剂 TU―1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液3.00mg·mL-1、0.9%NaCl 溶液、试样蛋白质溶液。 10mL比色管、1cm石英比色皿、吸量管。四、实验步骤 1.绘制吸收曲线用吸量管吸取2mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在190~400nm间每隔5nm测一次吸光度Abs，记录数据并作图。 2.绘制标准曲线用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在波长280nm处分别测其吸光度，记录数据并作图。 3.样品测定取适量浓度试样蛋白质溶液，在波长280nm处测其吸光度，重复三次。在已经得到标准曲线的情况下，为了使测量结果准确度高，待测溶液的浓度需在标准曲线的线性范围内，所以，先测定试样蛋白质原液的吸光度（1.363），估算浓度为2.0960 mg·mL-1，再将原试液稀释至5倍（即取2mL试液，用0.9%NaCl 溶液稀释至刻度，摇匀），估算浓度为0.4192 mg·mL-1，测吸光度，重复三次五、数据处理与结果分析

土壤酶活性测定方法综合

土壤酶活性测定方法 1、土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。二、试剂 1）甲苯 2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。 3）柠檬酸盐缓冲液（）：184g柠檬酸和氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至，用水稀释定容至1000ml。 4）苯酚钠溶液（L）：苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和丙酮，用乙醇稀释至100ml （A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。

5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为%，溶液稳定。 6）氮的标准溶液：精确称取硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（ml）。三、操作步骤称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10% 尿素溶液和20ml PH 柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。培养结束后过滤，过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计与578nm波长处比色。（靛酚的蓝色在1h内保持稳定）。标准曲线制作：在测定样品吸光值之前，分别取0、1、3、5、7、9、11、13ml 氮工作液，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。再加入4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计上于578nm波长处比色。然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。注意事项: 1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸馏水代替基质，其他操作与样品实验相同，以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。 2、整个实验设置一个无土对照，不加土样，其他操作与样品实验相同，以检验试剂纯度和基质自身分解。