必修一
一、用高倍显微镜观察几种细胞
目的要求
1.使用高倍显微镜观察几种细胞,比较不同细胞的异同点.
2.运用制作临时装片的方法.
材料用具
1.可选用的观察材料:真菌(如酵母菌)细胞,低等植物(如水绵等丝状绿藻)细胞,高等植物细胞(如叶的保卫细胞),动物细胞(如鱼的红细胞或蛙的皮肤上皮细胞)等.
2.用具:显微镜,载玻片,盖玻片,镊子,滴管,清水,染色液.
方法步骤
1.取镜.右手握镜臂,左手托镜座,将显微镜放置在距离桌边10cm,实验者身体的偏左侧.
2.对光.转动转换器,用低倍物镜正对通光孔,转动遮光器用最大光圈正对通光孔.左眼注视目镜,双手转动反光镜(强光下用平面镜,弱光下用凹面镜),至看到圆形白亮视野为止.
3.放置装片.将玻片标本中有颜色的部分正对通光孔放正.用压片夹压住.
4.低倍镜观察.双手向外转动粗准焦螺旋使镜筒下降至接近装片为止,此时眼睛从侧面观察物镜的下边缘注意不要砸到装片;左眼注视目镜双手缓慢向内转动粗准焦螺旋,到视野中出现物像,调节细准焦螺旋使物像更加清晰.将要观察的物像移动至视野中央.
5.高倍镜观察.转动转换器用高倍物镜正对通光孔,双手调节细准焦螺旋使物像更清晰.如果光线较暗可以调节光圈或反光镜,使视野变明亮.
6.收镜.取下装片,转动转换器使物镜偏离通光孔,双手转动粗准焦螺旋使镜筒降到最低,
转动遮光器用最小光圈正对通光孔,转动反光镜使镜面向左右两侧.右手握镜臂,左手托镜座,将显微镜放回原处.
注意事项
1.必须先用低倍物镜找到物像在换用高倍物镜.
2.换上高倍物镜后,必须使用细准焦螺旋(防止压坏装片或找不到物像).
3.光线强时,使用平面镜和小光圈;光线弱时,使用凹面镜和大光圈.
4.由于显微镜成倒像,在观察时若物像不在视野中央,视野中物像偏向哪个方向,就向哪个方向移动装片.
相关知识
1.目镜、物镜的长短和放大倍数之间的关系
(1)目镜越长,放大倍数越小,反之则越大
(2)物镜越长,放大倍数越大,反之则越小
2.显微镜的放大倍数
(1)一行(列)细胞数量变化可根数放大倍数n与视野范围m成反比来计算(m/n).如目镜为5×,物镜为4×,视野中中央有一排细胞共12个,若把物镜换成10×,则细胞数目变为6个. (2)圆形视野范围内,细胞数量变化可根据视野范围放大倍数的平方成反比计算
(m/n^2). 目镜为5×,物镜为4×,视野中共有细胞64个, 若把物镜换成10×,则细胞数目变为16个.
3.污物位置的判断(目镜,物镜,或装片上)
污物移动→在装片上
移动装片污物移动→在目镜上
污物不动→转动目镜
污物不动→在物镜上
4.低倍物镜与高倍物镜观察的比较
二、检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质
目的要求及原理
1.目的:检测生物组织中的糖类,脂肪,蛋白质的存在.
2.原理:糖类,脂肪,蛋白质遇特定溶液变色:糖类中的还原糖(如葡萄糖,果糖,麦芽糖等)与斐林试剂发生反应,产生砖红色沉淀;脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色(或被苏丹Ⅳ染液染成红色);淀粉遇碘变蓝色;蛋白质与双缩脲反应变紫色。
材料用具
1.实验材料:苹果或梨匀浆(白色或接近白色的组织),马铃薯匀浆,花生种子,花生种子匀浆,豆浆,鲜肝研磨液
2.用具:双面刀片,试管,试管架,试管夹,大小烧杯,小量筒,滴管,酒精灯,三脚架,
石棉网,火柴,载玻片,盖玻片,显微镜,毛笔,吸水纸
3.试剂;斐林试剂(甲液:质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液,乙液:质量浓度为0.05g/mL
的CuSO4溶液),苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液,双缩脲试剂(A液:质量浓度为0.1g/mL的NaOH 溶液,B液:质量浓度为0.01g/mL的CuSO4溶液),体积分数为50%的酒精溶液,碘液,蒸馏水
方法步骤
?实验一还原糖的检测和观察
(1)向试管内注入2mL待测组织样液.(取匀浆)
(2)向试管内注入1mL斐林试剂(甲乙液等量混合均匀后再注入)
(3)将试管放在盛有50-65℃温水的大烧杯中加热约2min
(4)待一段时间后观察其现象(试管中溶液形成砖红色沉淀)
?实验二脂肪的检测与观察
方法一
(1)向试管内注入2mL待测组织样液.
(2)向试管内滴加3滴苏丹Ⅲ溶液.
(3)待一段时间后观察其现象.(试管中溶液被染成橘黄色)
方法二(制作临时切片)
(1)取材取一粒浸泡过的花生种子,去掉种皮
(2)切片用刀片在花生横断面上平行切下若干薄片,放入盛有清水的培养皿中待用
(3)制片从培养皿中选取最薄的切片,用毛笔蘸取放在载玻片中央;在花生子叶薄片上滴2-3滴苏丹Ⅲ染液,染色3min(苏丹Ⅳ染色1min);用吸水纸吸去染液,再滴加体积分
数为50%的酒精溶液,洗去浮色;用吸水纸吸去花生子叶周围的酒精,滴一滴蒸馏水,盖上盖玻片,制成临时装片
(4)观察可观察到橘黄色的脂肪颗粒
?实验三蛋白质的检测和观察
(1)向试管内注入2mL待测组织样液.
(2)向试管内注入双缩脲试剂A液1mL,摇匀.(提供碱性环境)
(3)向试管内注入双缩脲试剂B液4滴,摇匀.(显色)
(4)待一段时间后观察其现象(试管中产生紫色反应——肽键显色)
?实验四淀粉的检测和观察
(1)向试管中注入2mL待测组织样液
(2)向试管中滴加2滴碘液
(3)待一段时间后观察现象(溶液变蓝)
三、观察DNA和RNA在细胞中的分布
目的要求
初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法。
原理:甲基绿使DNA呈现绿色;吡罗红使RNA呈现红色
材料用具
人的口腔上皮细胞[也可以用其他动物或植物细胞(植物细胞不宜选用绿色植物的叶肉细胞)代替]。
大烧杯,小烧杯,温度计,滴管,消毒牙签,载玻片,盖玻片,铁架台,石棉网,火柴,酒
精灯,吸水纸,显微镜。
质量分数为0.9%的NaCl溶液,质量分数为8%的盐酸,吡罗红甲基绿染色剂(现用现配),蒸馏水。
方法步骤
一、取口腔上皮细胞制片
1.在洁净的载玻片上,滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液(生理盐水)。
2.用消毒牙签在自己漱净的口腔内壁上侧轻轻刮几下,把牙签上附有碎屑的一段,放在上述载玻片上的液滴中涂抹几下。
3.点燃酒精灯,将涂有口腔上皮细胞的载玻片烘干。
二、水解
1.在小烧杯中加入30mL质量分数为8%的盐酸,将烘干的载玻片放入小烧杯中。
2.在大烧杯中加入30℃温水。
3.将盛有盐酸和载玻片的小烧杯放在大烧杯中保温5min。
三、冲洗涂片
用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10s。
四、染色
1.用吸水纸吸去载玻片的水分。
2.将吡罗红甲基绿染色剂各滴2滴在载玻片上,染色5min。
3.吸去多余染色剂,盖上盖玻片。
五、观察
1.用低倍显微镜观察:选择染色均匀、色泽浅的区域移至视野中央,将物象调节清晰。
2.换用高倍显微镜观察:细胞核染为绿色(DNA),细胞质染为红色(RNA)
注意事项
1.滴生理盐水:保持细胞渗透压(生理活性)
2.烘干载玻片:固定标本
3.质量分数为8%的盐酸:改变细胞通透性,加速染色剂进入细胞内部,使染色体的DNA 与蛋白质分离(破坏细胞结构)
4.保温5min:使受热均匀,便于观察
5.水解:固定并杀死细胞,以防止细胞死亡时溶酶体对核酸的破坏
6.冲洗涂片:冲稀盐酸
四、体验制备细胞膜的方法
目的要求
体验哺乳动物红细胞制备的方法和过程
材料用具
哺乳动物的新鲜红细胞稀释液(血液加生理盐水)。
蒸馏水,滴管,吸水纸,载玻片,盖玻片,显微镜。
1.用滴管吸取少量红细胞稀释液,滴一小滴在载玻片上,盖上盖玻片,制成临时装片。
2.在高倍显微镜下观察,待观察清晰时,在盖玻片的一侧滴一滴蒸馏水,同时在另一侧用吸水纸小心吸引(不要吸走细胞)。
3.观察现象:红细胞凹陷消失,细胞体积增大,细胞破裂,内容物流出。
注意事项
1.哺乳动物红细胞:无细胞核及其他细胞器(卵生动物红细胞有细胞核),可以得到纯净的细胞膜;数量大且材料易得。
2.稀释液中加生理盐水:使红细胞分开,不易凝结成块;使红细胞暂时维持原始形态。
五、用高倍显微镜观察叶绿体及线粒体
目的要求
使用高倍显微镜观察叶绿体、线粒体的形态和分布。
叶绿体形态:呈绿色,扁平的椭球形或球形
线粒体形态;短棒状、圆球状、线形、哑铃形
材料用具
新鲜的藓类的叶(或菠菜叶、黑藻叶等)(单层细胞)
新配制的质量分数为1%的健那绿染液(染线粒体)
显微镜,载玻片,盖玻片,滴管,镊子,消毒牙签
一、观察叶绿体
1.制作藓类叶片临时装片在洁净的载玻片中央滴一滴清水。用镊子取一片藓类的小叶,或者取菠菜叶少带些叶肉的下表皮(叶绿体形态大),放入水滴中,盖上盖玻片。(要随时保持有水的状态)
2.观察叶绿体
二、观察线粒体
1.制作人的口腔上皮细胞临时装片在洁净的载玻片中央滴一滴健那绿染液。用消毒牙签在自己漱净的口腔内壁上侧轻轻刮几下,把牙签上附有碎屑的一段,放在上述载玻片上的液滴中涂抹几下,盖上盖玻片。
2.观察线粒体(线粒体被染成蓝绿色,细胞质接近无色)
注意事项
1.选取藻类叶片:叶片薄,叶绿体少而大;选取菠菜叶片下表皮:易撕取,易观察。
2.保持藓类叶片临时装片的水分:防止叶绿体失水而导致叶绿体缩成一团,无法观察其形态
分布。
3.观察线粒体应选用无色的细胞。
六、过氧化氢在不同条件下的分解
目的要求
比较过氧化氢不同条件下分解的快慢,了解过氧化氢酶的作用和意义,验证酶的高效性。
材料用具
新鲜的质量分数为20%的肝脏研磨液
量筒,试管,试管架,卫生香,火柴,酒精灯,试管夹,大烧杯,三脚架,石棉网,温度计新配制的体积番数为3%的过氧化氢溶液,质量分数为3.5%的FeCl3溶液
方法步骤
1.取4支洁净的试管,分别编上序号1、2、3、4,向各试管分别加入2mL 3%的过氧化氢溶液,按序号依次放置在试管架上。
2.将2号试管放在90℃左右的水域中加热,观察气泡冒出情况,并与1号试管比较。
3.向3号试管内滴入2滴3.5%的FeCl3溶液,向4号试管内滴入2滴20%的肝脏研磨液,仔细观察两支试管冒出气泡的情况。
4.2-3min后,将点燃的卫生香分别放入3号和4号试管内页面的上方,观察比较两支试管中卫生香的燃烧情况。
实验结果:2.2号试管中气泡冒的快
3.4号试管中气泡更多
4.4号试管中卫生香燃烧更剧烈
实验结论:与无机催化剂相比,酶的催化效率要高得多。
注意事项
1.要使用新鲜的肝脏:新鲜的肝脏中过氧化氢酶的含量多,且活性较高。(原理同使用新制的H2O2溶液)
2.将肝脏研磨成液:增大接粗面积。
3.试管中插入带火星的卫生香时,不能与气泡直接接触,以免卫生香因潮湿而熄灭。
七、绿叶中色素的提取和分离
目的要求
1.进行绿叶中色素的提取和分离。
2.探究绿叶中含有几种色素。
原理:绿叶中不止一种色素,且这些色素能溶解在有机溶剂无水乙醇中。但它们在层析液中
的溶解度不同,溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的更快;反之则慢。
材料用具
新鲜的绿叶(如菠菜的绿叶)
干燥的定性滤纸,试管,棉塞,试管架,研钵,玻璃漏斗,尼龙布,毛细吸管,剪刀,药勺,量筒(10mL),天平
无水乙醇,层析液,二氧化硅,碳酸钙
方法步骤
1.提取绿叶中的色素
(1)称取5g绿叶,剪碎,放入研钵中。
(2)向研钵中放入少许二氧化硅和碳酸钙,再加入10mL无水乙醇,进行迅速、充分的研磨。
(3)将研磨液迅速倒入玻璃漏斗(漏斗基部放一块单层尼龙布)中进行过滤。将滤液收集到试管中,及使用棉塞将试管口塞严[1]。
2.制备滤纸条
将干燥定性滤纸剪成略小于试管长和直径的滤纸条将滤纸条的一端剪去两角,并在距这一段1cm处用铅笔划一条细的横线。
3.画滤液细线
用毛细吸管取少量滤液,沿铅笔线均匀的画出一条细线。待滤液干后,再画一两次。
4.分离绿叶中的色素
将适量层析液倒入试管中,将滤纸条(有细线的一端朝下)轻轻插入层析液中,随后用棉塞
塞紧试管口[2]。
5.观察与记录
几种材料的作用:
1.二氧化硅:有助于
研磨充分。
碳酸钙:防止研磨中色素被破坏。
2.单层尼龙布:吸附色素。
3.层析液:分离色素
4.用棉塞塞紧试管口:[1]防止乙醇挥发
[2]防止吸入有毒气体
5.剪去两角:减少边缘效应,使色素在滤纸上扩散得更均匀
注意事项
1.要选用新鲜、颜色深绿的叶片,保证色素含量。
2.研磨要充分、迅速,减少无水乙醇的挥发。
3.滤液细线要细、直、均匀,并含有较多色素。
4.向层析液中插入滤纸条时,不能让滤液细线触及层析液,否则色素会溶解到层析液中,从
而得不到清晰的色素带。
5.若提取到的色素溶液为淡绿色:(1)研磨不充分,色素未能提取出来(2)无水乙醇的加入量太多,稀释了色素提取液(3)未加入碳酸钙,叶绿素分子被破坏
八、观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
目的要求
1.制作洋葱根尖细胞有丝分裂装片。
2.观察植物细胞有丝分裂的过程,识别有丝分裂的不同时期,比较细胞周期不同时期的时间长短。
3.绘制植物细胞有丝分裂简图。
材料用具
洋葱(可用葱,蒜代替)
显微镜,载玻片,盖玻片,玻璃皿,剪子,镊子,滴管
质量分数为15%的盐酸溶液,体积分数为95%的酒精溶液,质量浓度为0.01g/mL或0.02g/mL的龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液,洋葱根尖细胞有丝分裂固定装片
方法步骤
一、洋葱根尖的培养
实验前3-4d,取洋葱一个,放在广口瓶上。瓶内装满清水,让洋葱的底部接触到瓶内的水面。把这个装置放在问你安的地方培养。待根长约5cm时,取生长健壮的根尖制成临时装片观察。
二、装片的制作
流程:解离→漂洗→染色→制片
三、洋葱根尖细胞有丝分裂的观察
四、绘图
记录表
注意事项
1. 一般在上午10时至下午2时,此时洋葱根尖细胞有丝分裂旺盛,剪取洋葱根尖或在剪去根尖之前用35℃的温水浸泡1h左右
2.解离时间要严格控制。若解离时间太短,根尖细胞未充分解离,压片时细胞不易分散;若解离时间过长则细胞解离过度,细胞过于酥软,且染色体结构易破坏
3.漂洗要彻底,否则会解离过度,同时影响染色体着色
4.染色时掌握好染色液的浓度和染色时间。染色时间太短,染色体不能完全着色;染色时间过长则显微镜视野下一片紫色,无法观察
5.压片时用力必须恰当,过重则会将组织压烂,过轻则细胞未分散