贝克曼库尔特P ACE MDQ操作手册中文版 Operational Manual for MDQ with 32 Karat Software(part-1)
32 Karat TM Software ver 5.0 P/ACE MDQ操作手册
贝克曼库尔特有限公司
2002年12月15 日
目录
第一章毛细管电泳系统导论
第二章P/ACE MDQ 毛细管电泳系统组成的概述
第三章启动32 Karat 软件
第四章直接控制
第五章方法编辑
第六章系统运行
第七章积分
第八章校准
第九章定性分析
第十章使用迁移率
第十一章建立报告
特别声明和致谢:
1、本操作手册为试用本, 有不清楚的地方一律参照英文版原文，并以英文版原文为准。如发现有误之处，请通知贝克曼库尔特公司市场部，以便及时更正，公司市场部将不胜感激！
2、贝克曼库尔特公司市场部特别感谢浙江省疾病控制中心任一平教授级高级工程师、福州大学中心实验室有关老师等协助我们完成了大量的工作。特此予以致谢！
第一章毛细管电泳仪的导论
概述
本资料说明毛细管电泳仪的一般原理和以P/ACE TM MDQ为主机，带有紫外、二级管阵列和激光诱导荧光检测器的基本操作指导。
一般说明
P/ACE TM MDQ是根据各种电泳的分离机理；在熔融石英玻璃毛细管中进行十七化合物分离的仪器。
在P/ACE TM MDQ中，在压力、真空或电压的作用下样品进入毛细管后，在高电压的作用下，样品中的各种化合物以不同的淌度通过毛细管。
检测这些化合物有两种方法。其一利用化合物对紫外光具有吸收的原理，化合物在毛细管中通过毛细管的窗口，应用紫外或二极管阵列检测器检测起吸收值，将吸收光信号变成电信号传给计算机或积分仪。由计算机制作成电泳图而被分析。
第二个方法是利用化合物对特定发射光具有吸收并产生激发光的原理。这里由激光诱导荧光（LIF）来完成。在毛细管中的物质吸收激光诱导荧光检测器所产生的特定波长的发射光，激光诱导荧光检测器在测定、并记录其产生的激发光。再由计算机完成电泳图。
P/ACE TM MDQ可以分离各种不同的样品，包括：肽类、蛋白、核酸、离子、手性化合物和药物。毛细管电泳比其他分析仪器需要更为少量的样品（5-30微升，进样的量仅仅5-50纳升）。它提供比其他分离技术更为理想的分析手段。
电泳基本模式
Capillary Zone Electrophoresis (CZE)毛细管区带电泳
毛细管区带电泳也称为自有溶液毛细管电泳，是毛细管电泳中最简单的一种形式。其分离机理是各被分离物质的净电荷与质量之间比值的差异，不同离子按照各自表面电荷密度的差异以不同的速度在电解质中移动，而导致分离。毛细管区带电冰要求缓冲液具有均一性，毛细管内各处具有恒定的电场强度。
Micellar ElectroPhoresis Capillary Chromatography（MEKC）
胶束电动力学毛细管色谱
在MECC中，当把离子型表面活性剂加入缓冲液中，并且其浓度足够大时这种表面活性剂的单体就结合在一起，形成一个球体我们称其为胶束。目前，以十二烷基硫酸钠（SDS）使用最为普遍。
在MECC的系统中存在两个相：流动的水相和起到固定相作用的胶束相，被分离物在这两个相之间分配，由于它们在胶束中具有保留能力而产生不同的保留时间。和区带电泳一样，缓冲液在管别壁处形成正电，使其显示强烈的向负极移动的电渗流，而SDS胶束由于其外壳带负电性具有向正极迁移的倾向。一般情况下，电渗流的速度大于胶束的迁移速度。因此，迫使胶束最终以较低的速度向负极移动。我们把这个移动的胶束固定相也称之“准固定相”。
在胶束电动力学色谱中，中性粒子之间的分离是根据其本身的疏水性的不同而达到的，不同疏水性的粒子和胶束的相互作用不同，疏水性强的作用力就大，保留时间就长；反之，保留时间就短。
Capillary Gel Electrophoresis（CGE）毛细管凝胶电泳
凝胶电泳是用凝胶物质作为支撑物进行分离的区带电泳。凝胶是一种固态分散体系，它具有多孔性，具有类似于分子筛的作用。被分离物在通过装入毛细管的凝胶时，按照各自分子的体积大小逐一分离，分子体积大的首先被分离出来，其后是较小的分子。
Capillary Isoelectric Focusing ( cIEF)毛细管等点聚焦
两性电解质在分离介质中的迁移形成pH梯度，各种具有不同等电点的蛋白质按照这一梯度迁移到它们的等电点的那个位置，并在该点停下，由此产生一条非常窄的聚焦区带，并使不同的蛋白质聚焦在不同的位置上。
毛细管等电聚焦的运行过程，可分为三个步骤：
A进样。把样品与两性电解质混合并进样。
B聚焦。加高电压3－4分钟，使整个毛细管长度范围内建立一个pH梯度，以便让样品在毛细管中向各自的等电点聚焦点移动，形成一条由不同组分排列的带子。
C迁移。阴极的缓冲液换成盐类后，再加上电压，使末端引起梯度降低，让已聚焦组分一个一个通过检测器。
Capillary Electrochromatography（CEC）毛细管电色谱
在毛细管中装填了液色谱的各种填料；相当于固定相，应用电泳中的EOF 电渗流作为动力，电解质相当于流动相。各种小分子、极性或中性化合物在两相之迁移而形成分离。毛细管电色谱尤其适应于小分子（药物）的分离。
第二章P/ACE MDQ 毛细管电泳系统组成的概述
P/ACE MDQ毛细管电泳系统的主要组成部分有: 放置样品瓶、缓冲液和其
它溶液的盛盘、系统连接装置、电极和高压电源、检测器和连接光纤、温度控制装置以及自动进样装置等。各个部件的详细配置情况见图1。
图1 P/ACE MDQ 仪器的主要部件图解
图2 样品盘示意图
图3 图示毛细管卡盒
备注：1、内可容纳毛细管的制冷剂管道
2、毛细管
3、UV 和PDA检测窗口
4、LIF 检测窗口
图4 指示灯的位置
备注：1、高压指示灯
2、UV 灯亮指示灯
3、仪器电源指示灯
图 5 图示样品盘和卡盒盖板
备注：1、样品盘盖板
2、卡盒盖板
图6 UV检测器光纤的连接方式示意图
图7 PDA检测器光纤的连接方式示意图
图8 带LIF 检测器的P/ACE MDQ 仪器示意图
图9 LIF 检测器的光学系统图解
图10 488 nm 激光光源大背面观
第三章启动32 Karat 软件
从Windows 工具条上开始菜单按钮选择Programs / 32 Karat / 32 Karat Software 启动32 Karat软件.
图11 32 Karat软件在开始菜单的位置
32 Karat软件启动后打开列出已设置的仪器的主窗口. 图12 32 Karat软件的主窗口
工具条
工具条在顶部出现并且,在一些情况下位于当前的窗口底部。在工具条上的活跃按钮允许以鼠标单击的方式达打开许多普通的命令。以上这些按钮可在打开的窗口中看到。
菜单条
菜单条包含32 Karat软件可得到的所有命令。菜单条能通过鼠标单击或按住Alt 键和带下划线的字母打开。
新建并且设置一台仪器
在这练习中你将：
新建一台真实连接的仪器
新建一个能被用于离线数据处理的虚拟仪器
注意
这章假设所有的硬件和接口板都已安装，如果没有安装，请先参考安装和维护手册进行安装。
新建一台仪器
从一台单个的计算机用32 Karat 软件最多能控制4台P/ACE MDQ能创建无数的虚拟仪器用于离线编辑方法或数据分析。使用下列练习设置一台新机器。选择和你的硬件配置相对应的检测器类型。
1、在右边的空白处单击鼠标右键，从下落菜单选择New / Instrument。
2、一台新仪器将建成，它的图标位于右边的空白处。在加亮的名称域输入仪器的名称（在这个例子我们将它命名为Instrument 1），这个名字将在整个32 Karat 软件中使用，在仪器窗口，数据报告，和仪器记录。
图13 32 Karat软件打开窗口
设置新仪器
设置仪器是软件准备控制硬件和采集数据的过程，包括：
1、识别P/ACE MDQ 为唯一的仪器。
2、识别当前的硬件部件。每台物理的仪器至少由2个图标代表其中之一将被用于控制和数据采集；在第一个正在用于采集数据时另一个被用于数据的离线处理。下面将以UV检测器为例。
1、在Instrument 1图标上单击鼠标右键，从下落菜单选择Configure。
2、在Instrument type下拉选框中选择Beckman P/ACE MDQ；输入名称Instrument1 标识仪器。
3、单击Configure按钮，在Beckman P/ACE MDQ设置窗口可用的模块出现在窗口的左面。
自动设置
32 Karat软件可自动设置所有的P/ACE MDQ模块。注意要将仪器电源打开并连接到电脑上。
1、单击窗口底部的Auto Configuration按钮，可听到MDQ的托盘移动的声音，这表明软件正和仪器通讯。在这一过程中会出现以下窗口。
2、检测器将在已设置的模块窗口中出现。
3、在新图标上单击鼠标右键并选择Open。核对仪器被正确的检测和设置。
图14 P/ACE MDQ UV检测器配置窗口
4、和计算机相联的每一台P／ACE MDQ必须有唯一的设备ID、设定的缺省植是l。如果安装有多台的MDQ，为每一台MDQ选择唯一的ID（l，2，3或4）在选择好ID后点击SET BUS ADDRESS将该信息传送给仪器。
5、缓冲液托盘和样品托盘的类型在开始时被检测。托盘盖子被打开并且关上后每次都会检测托盘的类型。仪器能自动检测3种类型的托盘：36位缓冲液托盘，大容量缓冲液托盘和48位置样品托盘。96孔样品极不能被自动检测，必须从该窗口手动设置。托盘类型可以手工地在任何时间被改变。
6、当选择96孔样品板时，允许定义样品板的复选框可用，如果这个复选框被选择，用户可以定义样品板的高度和深度，因此可以使用其他的非标准样品板。如果这个复选框没被选择，仅能使用标准的Beckman Coulter96孔样品板。
7、如果安装了LIF检测器，LIF校准向导可用。这个功能在安装和维护手册中有详细的描述。
8、滤光片对话框用来定义UV检测器安装的特定滤光片。数据必须手工输入并且和仪器实际安装的滤光片—一对应。如果安装了PDA检测器，位置8不能安装滤光片，显示值为“0”。
9、压力单位可定义为psi（磅每平方英寸）或mbar（毫巴）。选择的单位将仅仅在这台仪器被使用。
10、温度控制显示样品冷却装置的安装。如果安装，可从下拉框选择“可用”。
11、单击OK回到仪器配置窗口。
图15 Beckman P/ACE MDQ仪器配置窗口
配置选项
图16 P/ACE MDQ 配置选项对话框（分析选项）