鸡源致病性沙门菌多重PCR检测方法的建立及应用
沙门氏菌快速检测方法
沙门氏菌快速检测方法 1试剂与仪器 1.1所用器具 三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针 1.2仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅 1.3所用试剂和培养基 1.3.1缓冲蛋白胨水（BPW）培养基 称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15min，冷至常温。 1.3.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液 取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。 将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。 2、操作步骤 2.1配制BPW培养基（第一天） 2.2培养基冷却至室温后，对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟,关灯60min 后使用。（第一天） 2.3预增菌（第一天） 称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶，并及时盖上盖子，150rpm下振荡10min，于36℃±1℃培养18h左右。 2.4配制TTB增菌液（第一天） 2.5增菌（第二天） 2.5.1接种和培养 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于9mLTTB增菌液内，于42℃±1℃培养18h～24h。 2.5.2培养现象 菌名菌号生长状况 TTB培养特征 静置后浑浊CMCC(B)50071 伤寒沙门氏菌良好 静置后浑浊良好鼠伤寒沙门氏菌 CMCC(B)50115 静置后清亮不生长大肠埃希氏菌 ATCC25922
沙门菌检测技术
沙门菌为常见的肠道病原菌之一，在自然界分布广泛，种类繁多，所致疾病统称沙门菌感染，其中由伤寒、副伤寒沙门菌引起的急性全身系统性传染病是我国《传染病防治法》中规定报告的乙类传染病，而由非伤寒沙门菌引起的食物中毒则占我国内陆地区细菌性食物中毒的首位。 及时准确地检验沙门菌，为诊断和控制由该菌引起的疾病提供依据。沙门菌检验程序主要包括：标本采集、标本的处理与接种、菌株分离与鉴定和PCR检测几个步骤。 标本采集 标本采集前，应准备好所需的培养基和器材，主要有：血液需氧培养瓶、血琼脂平板、XLD（木糖赖氨酸脱氧胆盐）琼脂平板、BS（亚硫酸铋）琼脂平板、SC（亚硒酸盐胱氨酸）增菌液、酒精灯、采样瓶、剪刀、镊子等。 沙门菌检验标本主要分为：食品样品、可疑食物中毒标本，沙门菌患者标本。 可疑食物中毒标本主要有：可疑食品、相关环境标本、疑似病人标本。 可疑食品的采集：在采集可疑食物中毒标本时，应重点采集剩余食物以及食品加工有关的炊事用具，操作人员的手、肛试等相关环境标本。采样时，用棉试子涂抹物品表面后，置于少量增菌培养基内，也可根据情况在接种现场接种分离平板。 沙门菌感染患者标本的采集：沙门菌感染患者应采集新鲜粪便标本或肛试子直接接种分离平板和增菌液。对伤寒、副伤寒患者，在病程的第1~2周，可采集静脉血液4~8ml，接种血液需氧培养瓶中。 每个标本需做好标识和记录，采集的食品样品4℃保存，已接种标本的增菌液和培养基，室温下保存，2小时内送达实验室。 标本的处理与接种 沙门菌标本的处理与接种常用培养基有：TTB（四硫磺酸钠）增菌液、SC(亚硒酸盐胱氨酸)增菌液、XLD琼脂平板、BS琼脂平板和麦康凯（MaC）琼脂平板。 可疑中毒食品标本的处理：对采集的标本通常按1:10的比例分别接种于100mlTTB和100ml增菌液中，每瓶增菌液加入标本约10g，同时还可将可疑中毒食品标本直接接种于分离平板。将接种后的TTB增菌液置42℃培养箱中培养18~24小时，将SC增菌液和分离平板置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。取培养后增菌液转种XLD琼脂平板和BS琼脂平板，将接种后的平板置37℃培养箱中培养24~48小时，待观察。 血液（骨髓）标本的处理：将已接种标本的血液培养瓶直接放置37℃培养箱中培养7天，在培养期间分别于培养的第1天、第2天和第7天取培养液一环接种血琼脂平板，将平板置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。培养至第7天时，如培养物仍无菌生长，则可判为阴性。 肛试子及其他环境标本的处理：将现场采集已接种标本的分离平板和增菌液直接放置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。取出18~24小时培养的增菌液转种XLD琼脂平板和麦康凯琼脂平板。将接种完毕的平板置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。 菌株分离与鉴定 主要实验试剂有：氧化酶（试剂）、三糖铁（TSI）、动力—靛基质—尿素半固体（MIU）和赖氨酸铁琼脂斜面、API20E、沙门菌诊断血清。 沙门菌菌株的鉴定主要试验有：菌体形态观察，菌落形态观察，氧化酶实验，初步生化鉴定（系统生化鉴定），血清学分型。 菌落形态观察：在XLD平板上沙门菌菌落呈粉红色、光滑、湿润、边缘整齐、产H2S 的菌株，可形成中心黑色或全部黑色的菌落。在BS琼脂平板上，沙门菌菌落呈黑色有金属光泽、棕色或灰色，培养基周围可呈现黑色或棕色，有些菌株可形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。在麦康凯琼脂平板上，沙门菌菌落为无色、透明或半透明、光滑湿润、边缘整齐、
鸭致病性大肠杆菌的分离及人工感染鸭的组织病理学研究
鸭致病性大肠杆菌的分离及人工感染鸭的组织病理学研究 摘要:经过菌落形态?染色形态?生化试验,从来自湖北某鸭场的30份病料中,分离到20株鸭大肠杆菌?以3.0×108CFU/mL剂量感染健康昆明鼠和健康樱桃谷鸭,鼠和鸭分别在感染后8 h和12 h出现症状,12 h和18 h后开始出现死亡,而对照组则未出现任何症状,表明该菌株为致病性菌株?药物敏感试验结果显示该鸭场分离菌株对某些药物已经产生很强的耐药性?人工感染鸭的组织病理学结果表明其肝脏?心脏有广泛的纤维素渗出物且发生严重的变性?坏死? 关键词:鸭致病性大肠杆菌;分离;药敏试验 Isolation of Pathogenicity E.coli from Ducks and Histopathological Representation of the Experimentally Infected Ducks Abstract: 20 duck pathogenic Escherichia coli from 30 clinical samples of a duck farm in Hubei province were isolated and confirmed by microscopic morphology and biochemical assay. Subsequently, they were used to infect healthy Kunmin mice and Cherry valley ducks experimentally with 3.0×108 CFU/mL. Typical clinical manifestations were observed after eight hours and twelve hours in the infected mice and ducks, respectively. And after twelve hours and eighteen hours respectively, the mice and ducks got to die. But there was no any symptom in the control group. Drug sensitivity test indicated that some strains isolated were highly resistant to certain antibiotics. The histopathology tests of experimentally infected ducks showed that livers and hearts had lots of fibrinousexudate, and became denaturation and necrosis. Key words: duck pathogenic Escherichia coli; isolation; drug sensitivity tests 鸭大肠杆菌是引起鸭大肠杆菌病的病原,鸭大肠杆菌病是一种急性败血性传染病,又名鸭大肠杆菌败血病[1]?该病在临床剖检上主要表现为纤维素性心包炎?肝周炎?气囊炎?各种年龄的鸭均可感染,雏鸭最易感,2~6周龄多发,发病率和死亡率较高,在商品肉鸭中死亡率可高达50%左右,而且常常与鸭传染性浆膜炎混合感染,给养鸭业造成了严重的经济损失?随着养鸭业的日益发展和集约化程度的提高,鸭大肠杆菌病越来越多,支原体?病毒细菌?环境因素常加重或诱发大肠杆菌病?调查显示[2,3],鸭大肠杆菌病在我国不同类型的养鸭场中均普遍存在,流行广泛,且血清型众多,不同地区差异较大?本次试验对湖北省某鸭场的大肠杆菌进行了分离鉴定与组织病理学研究,并对分离株进行药物敏感性试验,以便指导临床合理用药,也为今后进一步筛选优势血清型菌株制备灭活疫苗预防本地的大肠杆菌病提供科学依据? 1材料和方法
沙门氏菌的检验
沙门氏菌的检验 食品学院14食品质量与安全1班 刘文敏柳基炜卫杰恒温紫君 2 2 2 2 摘要：本实验采用GB/T4789.4-2010的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术，了解沙门氏菌的一些生化特性；本实验先用显色培养基找出可疑菌落，再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌，再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。 关键词：沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定 前言 沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一，其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。沙门氏菌是一个统称，泛指 2000 多种有紧密连系的细菌，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。虽然只有少数人因沙门氏菌而患病，但是，在世界范围内的细菌性食物中毒事件中，由沙门氏菌引起的占大多数。因此，采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌，已经成为了人们最关心的问题之一[1]。国标法(GB4789.4-2010)是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1仪器设备 均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃ 吸管：1 mL（具 0.01 mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度或微量移液器及吸头
电子天平PL602-S，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司； 手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B，上海申安医疗器械厂 1.1.2试剂药品 鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI 生化鉴定卡 1.1.3培养基 蛋白胨水（BPW)、四硫磺酸钠煌绿（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D半乳糖苷（ONPG）培养基 1.2 实验方法 1.2.1培养基的制备 1.2.1.1培养基的配制步骤 蛋白胨水（BPW）：称取蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠1.5g、蒸馏水1000ml，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约 10 min，煮沸溶解，调节 pH，高压灭菌 121 ℃，15 min。分装10瓶，每瓶90ml 四硫磺酸钠煌绿（TTB）：高压灭菌 121 ℃，15 min灭菌冷却后至30℃，每100ml 基础培养液加碘液2ml，煌绿液1ml 1.2.1.2配制培养基的注意事项 （1)按照说明书上的用量进行换算，称取准确分量的合成培养基粉末； （2）加热煮沸溶解培养基时，留意锅内水位的变化，水位下降可再添加适量的水，以免水分蒸发过多，导致后面分装不够量； （3）往试管中放小导管时，注意处理气泡。 1.2.2 沙门氏菌群检测 1.2.2.1沙门氏菌检测程序
沙门菌属和志贺菌属检验
清于载玻片一端，再取少许待测菌与之混合，同时在玻片另一端取待测菌与生理盐水混合对照。结果：对照呈均匀混浊，待检菌与志贺菌四种多价血清混合后，数分钟内出现肉眼可见的颗粒状凝集物即为阳性。继之用A、B、C、D群最常见的单价血清凝集定种。 结果判断、解释和报告： ①分离培养未见可疑菌落或经鉴定不符合志贺菌属鉴定依据者可报告“未分离到志贺菌属细菌”。 ②经分离鉴定后符合鉴定依据者，可报告“分离出××志贺菌”，若进一步做多种生化反应及因子血清分型后，可报告：“分离出××志贺菌×型”。 (2)沙门菌属的分型鉴定：如果生化反应及形态学检查疑为沙门菌，可选用沙门菌的多价诊断血清进行玻片凝集。首先选用A～F组多价“O”诊断血清做玻片凝集试验。在试验时应以生理盐水作对照。血清凝集试验在5～10min内不出现凝集者可确定为阴性。但若生化反应比较典型，应考虑选用Vi凝集试验。若凝集，则用无菌生理盐水将菌洗下，制成浓厚的悬液，加热100℃、30min，再与A～F组多价“O”诊断血清做凝集试验。若与A～F组多价“O”血清发生凝集，应再与沙门菌单价因子血清分别做玻片凝集试验，以确定该菌株属于哪一组。一般先选用本地区检出率最高菌型的相应血清做玻片凝集反应。 若已确定哪一沙门菌种后，再分别先用H因子血清检查第I相抗原，然后检查第Ⅱ相抗原，最后确定该菌种属于哪一型沙门菌。 结果判断、解释和报告： ①分离培养未发现可疑菌落或经鉴定不符合沙门菌属细菌鉴定依据者，可报告“未分离出沙门菌”。 ②生化反应符合沙门菌、玻片凝集试验结果阳性，可初步报告为：“分离到××沙门菌”，或“×群沙门菌”。 5．肥达试验 (1)原理：用已知的伤寒沙门菌O、H抗原，甲、乙型副伤寒沙门菌的H抗原(PA、PB)与肠热症患者血清做定量试管凝集试验，以出现“2+”凝集的最高血清稀释度为效价，测定相应抗体含量，用以辅助诊断肠热症。 (2)试验方法：为单管稀释法。准备4排小试管，每排7支并标记，另取中号试管1支，加生理盐水3．8ml及被检血清O．2ml，混匀，即为1：20稀释，总量为4ml。然后取出2ml按每管分别放人各排小试管中的第1支试管中。再于上述中号试管内加生理盐水2ml混匀，此种血清即为1：40稀释，吸取此稀释度血清2ml，按每管分别加到各排小试管中的第2支试管中。以此类推连续稀释到各排小试管第6支试管为止，第7支小试管只加入生理盐水做阴性对照。然后按表2-5操作。 表2-5血清学试验(肥达试验)方法
沙门氏菌检验
沙门氏菌的检验 1．目的 规范沙门氏菌检测方法，使产品检验有据可依。 2．消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 注：本实验采用湿热灭菌法，吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度和压力灭菌，一般是121℃（）下灭菌20min。 3．原理 沙门氏菌的检验分四个连续阶段： 4．操作步骤 准备工作 配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基（无需灭菌）、HE培养基、三糖铁培养基等，并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。 前增菌 在无菌环境下，称取25g待检样品放入盛有225ml灭菌好的缓冲蛋白胨水中，然后放到36±1℃的恒温培养箱内进行前增菌4-6h; 增菌 在无菌环境下，用灭菌好的吸管吸取10ml前增菌液接种与100ml亚硒酸盐胱氨酸培养基中进行二次增菌，恒温培养箱36±1℃，培养18-24h; 分离培养 将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm的接种环挑取一环，划线于表面无凝结水的BS和SS琼脂平板各一个，于36±1℃培养18-24h。观察各个平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。如无典型或可疑菌落，应再继续培养24±2h。然后观察培养的平板（黄色的菌落是大肠杆菌；蓝绿色或蓝色，产硫化氢，菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌）。 沙门氏菌属各亚属在其他选择性琼脂平板的菌落特征 生化实验 用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落，接种到三糖铁培养基上，恒温培养箱36±1℃，培养18-24h; 典型沙门氏菌培养物斜面显红色（碱性），底端显黄色（酸性），有气体产生，形成硫化氢（琼脂变黑）。 三糖铁培养基变化表 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果
鸭传染性浆膜炎与鸭大肠杆菌病鉴别诊断
鸭传染性浆膜炎与鸭大肠杆菌病鉴别诊断 1、病原：浆膜炎―鸭疫里默氏菌（血液内生长、繁殖，主要经呼吸道传播。）大肠杆菌病―致病性大肠杆菌（肠道内的常在菌，主要经呼吸道传播。） 2、症状：浆膜炎―头颈歪斜、步态不稳和共济失调、瘫鸭（35日龄后较少发病）。大肠杆菌病―无上述特征（不同型号具有不同症状）。 3、病理变化：浆膜炎―最明显的剖检病变为脑膜炎，脾脏肿大、呈班驳样（大理石病变）。体表局部慢性感染病鸭在屠宰去毛后可见局部肿胀，表面粗糙、颜色发暗，切开后见皮下组织出血，有多量渗出液。 大肠杆菌病―无上述特征病变。 鸭传染性浆膜炎 1、流行特点 1-8周龄的鸭对自然感染均易感，但以2-3周龄的雏鸭最易感，1周龄以下或8周龄以上的鸭极少发病。本病主要经呼吸道或经皮肤感染；不良的环境是促使本病发生和流行的诱因，病死率高低不一，有5%-75%不等。 2、临诊特点 鸭突然发病，1、表现精神沉郁，缩颈，嗜睡，不食或少食；2、眼、鼻流出浆液性分泌物，眼圈周围羽毛污染成“黑眼圈”，有的鼻窦肿胀；3、粪便稀薄呈黄绿色、绿色或白色；4、腿软，不愿走动或行动打晃，运动失调，仰卧呈游泳状，有的脚蹼有伤痕、跗关节肿胀；5、濒死前出现神经症状，头颈震颤，角弓反张，不久抽搐死亡，病程一般为1-3天。6、慢性病例多斜颈，转圈或倒退运动，呼吸困难，病愈鸭对本病有抵抗力，但生长缓慢。 3、病理变化 病变遍及全身浆膜面，最明显的眼观病变是纤维素性渗出物；构成纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪性输卵管炎和脑炎等。在渗出物中除纤维素外，尚有少量炎性细胞，主要是单核细胞和异嗜细胞。肝脏肿大、质脆，表面有出血不明显，边缘有坏死灶。脾脏肿大，个别呈红灰色斑驳状。肺充血、出血，有明显坏死灶。 鸭大肠杆菌病 鸭大肠杆菌病是由大肠埃希氏杆菌引起的非肠道传染性疾病的总称。雏鸭以急性败血症型为主。大肠杆菌血清型较多，主要有大肠杆菌败血症、腹膜炎、脐炎、输卵管炎、生殖道感染、气囊炎、蜂窝织炎等。 1、流行特点 本病传播较缓慢，呈散发性的较多，多发生于雏鸭，2-6周龄雏鸭发病率可大25%-40%，死亡率为5%-30%，四季都可发生，尤以冬末春初较多见，蛋鸭和种鸭也可发病，常与其他疫病并发，继发混合感染。 2、临诊特点 最急性型不显临诊症状突然死亡。急性型可见精神萎顿呆立，挤堆，羽毛松乱，食欲废绝，饮欲增加，腹泻，排出黄白色或绿白色稀粪，并粘污肛门周围羽毛。多无神经症状，但多有两腿后伸和呼吸困难症状，病程2-4天。 3、剖检特点 主要病变是出血，心冠脂肪、心内腹出血，肝肿大，质脆、出血，胆囊缩小，脾脏肿大，腺胃粘膜出血，肠壁增厚、出血。部分病例可见心肝、气囊被覆有凝乳状、厚而湿润的纤维素性渗出物。
沙门氏菌检测方法的研究进展
沙门氏菌检测方法的研究进展 摘要：沙门氏菌是一种重要的人畜共患病原菌，而且，沙门氏菌的检验在食品检测中具有重要意义。建立一种快速而准确的检测方法一直是沙门氏菌检验研究的核心问题。本文通过查阅大量文献，详细阐明了沙门氏菌的各种快速检测方法的原理，对近年来沙门氏菌的检测进展进行了综述。认为，传统方法可以对沙门氏菌做出鉴定，但需要4~7 d的时间；以抗体为基础的ELISA方法和免疫荧光标记方法将检测时间缩短了一半，且灵敏性高和特异性强；以核酸为基础的PCR技术由于灵敏、简单、快速和特异已被广泛用于沙门氏菌检测。但是这些方法仍然存在一定的不足，需要进一步加以改进，关于食品中沙门氏菌的检测方法的研究还有待进一步深入。 关键词：沙门氏菌；检测；传统方法；免疫；分子
前言 沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人兽共患病之一，沙门氏菌属于肠杆菌科细菌，由此类细菌引起的各种动物的疾病称为沙门氏菌病。沙门氏菌在自然界有广泛的宿主，少数沙门氏菌对宿主有选择性，属于偏嗜性沙门氏菌，绝大多数对人和动物均适应，可寄居在哺乳类、爬行类、鸟类、昆虫及人的胃肠道中，种类繁多的家养和野生动物的感染率在1%—20%或者更高。故各种家禽、家畜在喂养、屠宰、运输、包装等加工处理过程中均有污染的机会。各种动物源性食物是引起沙门氏菌感染的最常见媒介物。除初生动物，人畜感染后一般呈无症状带菌状态,长期排菌，污染肉蛋产品，同时它们也可表现为有临床症状的致死疾病，可能加重病情或者增加死亡率，或者降低动物生产力等，对养殖业的经济效益影响较大，并严重影响人类健康。近年来，随着免疫学实验技术和分子生物学技术的发展，沙门氏菌检验技术的研究也有了新的研究进展。本文将近年来国内外关于沙门氏菌检验技术研究进展情况作以概述，供参考。 1 传统的检测方法（国标法） 常规检验技术基本特征与步骤:沙门氏菌常规检验技术具有以下3项特征：常规方法是编入国标方法或国际方法中的基本方法，是检验其他检测方法准确性、敏感性的参照；常规方法最终将能分离到细菌纯培养物；常规方法简单、准确、可重复性强、有一定的灵敏性。随着经济和技术的发展以及研究的深入，标准方法也处于不断进步，不断更新中。 常规检验包括以下5个基本步骤：前增菌和增菌；分离纯培养物；属和种的鉴定；血清学分型；菌型的判定和结果报告。在具体实践中用此方法检测畜产品中的沙门氏菌时，应注意根据不同的样品采取不同的检测步骤。 虽然该方法鉴定结果准确可靠，但由于沙门氏菌血清型繁多，生化特性各异，检验程序复杂，耗时长，至少需要4~7d才可得到准确的检测结果[1,2]。 2 免疫学标记检测方法 免疫标记技术就是将已知抗体或者抗原上标记上易显示的物质(标记分子)，通过检测标记物反映有无抗原抗体反应,从而间接检测出微量的抗原或者抗体。 所谓的标记分子是那些即使在超微量时也能通过特殊的方法将其检测出来，高敏感性的标记分子主要有突光素、酶、放射性同位素3种。免疫标记技术不仅大大提高了试验的敏感性，和光镜或电镜技术结合后，能对待检物质做精细定位，为临床研究和诊断提供了极大的方便。由此建立的沙门氏菌免疫学检测方法有多种，包括免疫酶标记技术，使用较多的如酶
沙门菌属的检测方法及鉴别
沙门菌属的检测方法及鉴别 【摘要】沙门菌属是一群通常寄居在人或动物肠道中，形态、培养、生化反应和抗原结构相似的革兰阴性杆菌。广泛分布于自然界，可从人和世界各地所有动物中分离得到。沙门菌属 是肠杆菌科中最复杂的菌属。 【关键词】沙门菌属；检验 1生物学特性 1.1形态染色 革兰阴性直杆菌，较细长，大小为宽0．6～2．0μm，长l．0～4．0μm。多具有周身鞭毛， 能运动，有时也会出现无鞭毛的突变型。无芽孢，无荚膜，有菌毛。 1.2培养和生化反应 兼性厌氧，最适生长温度35～37℃，最适生长pH为6．8～7．8。对营养要求不高，在普通营养琼脂上生长的菌落为圆形、光滑、湿润、半透明、边缘整齐的S型菌落。在肠道选择性 培养基上菌落为小至中等，透明或半透明，乳糖不发酵，与志贺菌的菌落相似，有些能产生 硫化氢的菌株，在ss琼脂上形成中心黑色的菌落。对葡萄糖、麦芽糖和甘露醇发酵，不发酵 乳糖和蔗糖。 2细菌学检验 2.1标本采集与注意事项 根据疾病的类型、病情和病程的不同分别采集不同的标本。分离培养原则上于发病第1周采血，第2周取粪便或尿液，全程均可做骨髓培养。副伤寒病程短，采样时间可相对提前。血 清学诊断应在病程的不同时期分别采集2—3份标本。①血液和骨髓液：肠热症患者，在病 程第1周内采取静脉血液；第1～3周内亦可采集骨髓液。②粪便或直肠拭子：伤寒患者， 在病程2周后；胃肠炎患者在急性期、早期采集新鲜粪便，并且最好在药物治疗前，取粪便 黏液、脓血或可疑部分。带菌者用直肠拭予采集直肠表面黏膜。③尿液和其他体液：应无菌 导尿或采集中段尿、胆汁、脑脊液、胸腔积液、腹水等，3 000转／分钟离心30分钟，取沉 淀做培养用。④呕吐物或食物：固体的呕吐物或食物，先用无菌剪刀剪碎，放人加细砂的乳 钵中进一步磨碎，再加入l0倍量的无菌生理盐水混匀，备接种用。液体标本可直接用于培养。 2.2检验方法 2.2.1直接检测 ①显微镜检查：为革兰阴性杆菌。同时排除肠球菌。②检测抗原：采用SPA协同凝集试验、胶乳凝集试验、对流免疫电泳和ELISA等方法，来快速早期诊断粪便、血液或尿液中的沙门 菌等可溶性抗原。③检测核酸：采用分子生物学技术，基因探针可检出标本中的伤寒沙门菌 量为l 000个，而PCR法对标本中含10个伤寒沙门菌就可检出。 2.2.2分离培养 分离培养可根据具体条件选用合适的培养基。 ①血液和骨髓液：静脉血5 ml或骨髓液0．5 ml分别注入50 ml的胆汁葡萄糖肉汤或胰化酪蛋白大豆肉汤中，35～37％培养，每日观察，阳性者多在2～4天内出现。②粪便或肛拭： 最好做床边接种，如不能立即培养，则用卡一布运送培养基或甘油盐水保存液送检。一部分
鸭大肠杆菌病
鸭大肠杆菌病 鸭大肠杆菌病是由一种致病性血清型大肠杆菌引起的鸭的一种急性或慢性环境性的传染病。由于感染鸭的日龄、抵抗力、大肠杆菌致病力和感染途径的不同而有许多症状和病变不同的病型。常见的有急性败血症、气囊炎、肠炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、大肠杆菌脑炎和全眼球炎等病型。世界各地都有本病的发生和流行，尤其近十多年来，大肠杆菌病已成为危害养鸭业重要传染病之一。致病性大肠杆菌是本病的病原菌。据报道，致雏鸭本病的大肠杆菌主要有O78、O8、O7、O73、O19、和O45等，在雏鸭主要有O1、O2和O6等血清型。大肠杆菌对外界环境的抵抗力一般，常用消毒剂常用浓度可在数分钟内将它杀死。 流行特点 1、大肠杆菌是外表健康的鸭群肠道中的常在菌，其浓度约为106个/克，其中约有10%-15%是致病性血清型。随粪排出，污染鸭舍内外环境、垫料、饲料、饮水、水槽、种蛋和孵化器等。当鸭群由于气候、疾病或应激因素影响而抵抗力下降时，致病大肠杆菌增强毒力、增殖数量引发疾病，所以大肠杆菌也是一种条件病原菌，此时发病称为内源性发病，或者为其他疫病（如鸭疫里氏杆菌病等）的继发或并发病。 2、各种日龄的鸭都有易感性，但雏鸭易感性更大，尤以2-6周龄为多见，其次是蛋鸭和种鸭。主要以生殖道感染、浆膜炎较为多见。产蛋率下降，有零星死亡。致病性大肠杆菌病一般为泛传性，可以感染多种禽类，但某些病型只为少几个血清型的大肠杆菌所引发。 本病可以通过呼吸道、消化道和眼结膜（污染的空气、灰尘、飞沫）、伤口、污染和带毒的种蛋以及交配(种蛋和种鹅)传染，其中呼吸道传染是条重要的传染途径。在中小型养鸭场（户）鸭群中的本病还可经鸭贩子污染的手、鞋、衣服和鸭篓传播。他们骑着摩托车、带着鸭篓走东场、串西户，进鸭舍看鸭议价。抓鸭的手和装鸭的篓子从来不消毒，也不换鞋和衣服，把病原菌带进（传播）健康鸭场（户）。 3、本病一年四季都可以发生和流行，但以秋、冬季和初春寒冷，天气变化剧烈，鸭舍地面潮湿和育雏舍温度过低都可促进本病的发生和增高发病率。南方地区7-9月份气温过高，热应激大，本病容易发生，比较多发。 主要症状和剖检病变 1、鸭大肠杆菌病常见的有大肠杆菌性脐炎、大肠杆菌性肝炎、脑炎、急性败血症、气囊炎、输卵管炎及卵黄性腹膜炎等病型。 （1）、大肠杆菌性脐性先天性或后天性卵黄囊感染，或者在孵化中死胚，或者出壳雏鸭大肚脐、体表潮湿、脐环发炎，水肿、皮下胶液浸润。病雏衰弱、行动迟缓、呆滞、腹泻、稀粪污染肛周绒毛（建议甩死后，无害处理!）剖检卵黄未吸收。卵黄囊形状不规则，内容物半液状，黄绿或灰绿色。 （2）、大肠杆菌性肝炎和脑炎多见于1-7周龄的各品种的家雏鸭和家养野雏鸭。本型病传播快，数天功夫可传染全群。发病率80%以上，病死率50%以上。 病雏鸭委顿、沉郁、减食或废食，有的有咳嗽和呼吸困难，拉黄绿色水样稀粪，消瘦，出现神经症状后迅速死亡。 剖检见肝稍肿大，呈黄斑驳状，上有充血和出血斑块。胆囊肿大，充满胆汁。脾有的稍肿大、充血；有的有坏死灶。胰腺充血、出血和坏死灶；有的呈液化状。肾条纹状出血。心的近尖部有坏死灶，色灰白。脑壳严重出血、脑膜充血、脑组织充、出血以及灰白色坏死灶。肠道粘膜大多无异常。肺、气囊、气管、喉头粘膜亦多正常。 （3）、大肠杆菌性败血症和呼吸道型大肠杆菌病多见于育雏或育成期间，其临床症状与鸭疫里氏杆菌病（浆膜炎）基本相似，但是缺乏神经症状和眼圈。主要是委顿、沉郁、减食或拒食、腹泻、稀粪灰黄色或黄绿色，呼吸困难。
鸭源致病性大肠杆菌的分离鉴定及致病性观察
鸭源致病性大肠杆菌的分离鉴定及致病性观察 摘要:自湖北省荆州市某鸭场送检病料中分离到一株疑似鸭大肠杆菌,经选择性培养基培养?生化试验?PCR鉴定?动物回归试验?药物敏感性试验,确认为鸭大肠杆菌,该菌对多种抗生素具有耐药性,用已分离鉴定的大肠杆菌经腹腔注射途径感染15日龄雏鸭,致病性试验结果显示,经腹腔注射途径感染雏鸭死亡率达100%,引起纤维素性心包炎?肝被膜炎和气囊炎,说明此株大肠杆菌具有强致病性? 关键词:鸭;大肠杆菌;分离鉴定;致病性 The Identification and Pathogenicity of Escherishia coli Isolated from Ducklings Abstract:A suspected E. coli from ducklings was isolated in Jingzhou of Hubei province. After selective culturing, biochemical test, PCR identification, regression test and medicine-resistance test, it was identified to be Escherishia coli from ducklings with high resistance to several antibiotics. Subsequently, some 15 day-old ducklings were infected with the E. coli isolates by lumbar injection for pathogenicity test. The results showed that the mortality of infected ducklings was 100%. In the dead ducks fibrinous pericarditis, glissonities and air sacculitis were also observed. It proved that this E. coli isolate was in high pathogenicity. Key words:Duckling; Escherichia coli; Isolation and Identification; Pathogenicity 鸭大肠杆菌病是影响养鸭场生产效益的主要疾病之一?据文献资料显示[1,2],鸭 大肠杆菌病在我国不同类型的养鸭场中普遍存在,流行广泛,而使用抗生素防治该病,又易产生抗药性,并且从这些报道看,我国分离到的鸭源性大肠杆菌的血清型众多,不同地区差异较大?伴随着规模化养鸭的发展和区域集约化养殖的扩大,加上环境与水源的污染加重,该病的危害日益严重,往往一个场发病,能导致集养区成片流行,而且鸭大肠杆菌病与传染性浆膜炎混合感染较多,症状与病变较相似而不易区分,还具有垂直传播的特点,这都会给养殖户造成重大的经济损失,因此对鸭大肠杆菌病的防治是非常重要的[3,4]? 本研究从湖北荆州五三农场病变特征为纤维素性心包炎和肝周炎的患病的雏鸭脑内分离到1株细菌,进行生化特性试验?药敏试验?细菌16S rRNA序列测定和动物回归试验,鉴定为致病性大肠杆菌,并用已分离鉴定的大肠杆菌经腹腔注射途径感染15日龄雏鸭,观察雏鸭感染后的临床症状?病理变化,进一步了解此分离菌株的病理变化?致病特点,阐明雏鸭感染大肠杆菌后发病特点,为进一步探讨其发病机理和临床防治提供资料? 1材料和方法
沙门氏菌快速检测方法
沙门氏菌快速检测方法文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-
沙门氏菌快速检测方法 1 试剂与仪器 1.1所用器具 三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针 1.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅 1.3 所用试剂和培养基 1.3.1 缓冲蛋白胨水（BPW）培养基 称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15 min，冷至常温。1.3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液 取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。 将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。 2、操作步骤 2.1 配制BPW培养基（第一天） 2.2 培养基冷却至室温后，对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟, 关灯60 min后使用。（第一天） 2.3 预增菌（第一天） 称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶，并及时盖上盖子，150rpm 下振荡10min，于36℃±1℃培养18h左右。 2.4 配制TTB增菌液（第一天） 2.5 增菌（第二天） 2.5.1 接种和培养 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1mL，转种于9mL TTB增菌液内，于42℃±1℃培养18h～24h。
2.5.2 2.6 配制沙门氏菌显色培养基平板（第二天） 2.6.1 取瓶内干粉4.75g，用100mL蒸馏水溶解，可按比例扩大或者缩小。 2.6.2 混合加热至100℃，搅拌加热至完全溶解，冷却至50℃倒平板。 2.6.3 样品用画线或者涂布法接种，37℃培养24小时。 2.6.3 观察菌落颜色：（第三天）
沙门氏菌基本知识及检测方法
沙门氏菌基本知识及检测方法 沙门氏菌属(Salmonella)是肠杆菌科的一个大属，有2000多个血清型，我国发现的约有100个。沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中。1880年Eberth首先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较大，遂定名为沙门氏菌属Salmonella 。本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性，能引起人和动物的败血症与胃肠炎，甚至流产，并能引起人类食物中毒，是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一。 根据沙门氏菌的致病范围，可将其分为三大类群。第一类群：专门对人致病。如伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌(甲型、乙型、丙型)。第二类群：能引起人类食物中毒——食物中毒沙门氏菌群，如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等。第三类群：专门对动物致病，很少感染人，如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌。致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerae)，其次是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)。 一、沙门氏菌属的生物学特征： 1.形态染色特性：G-无芽孢杆菌。大小通常为 0.7～1.5μm × 2.0～5.0μm，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。需氧或兼性厌氧菌，生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃，适宜pH为6.8～7.8，对营养要求不高，在普通培养基中生长旺盛，胆盐可促进其生长。 2.培养特性：需氧或兼性厌氧菌；生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃；适宜pH为6.8～7.8；对营养要求不高，在普通培养基中生长旺盛；胆盐可促进其生长。 §普通琼脂：圆形、光滑、无色半透明、边缘整齐或不太整齐的中等大小(2 ～ 4mm)菌落。鸡白痢、鸡伤寒、猪副伤寒、甲型副伤寒沙门氏菌等只能长成细小菌落。§麦康凯琼脂和伊红美兰琼脂(EMB)：菌落无色半透明
沙门氏菌的特征及检测方法研究进展
中国饲料 2019年第17 期[摘要]沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌,蛋、家禽和肉类产品是沙门氏菌的主要传播媒介,食用带沙门氏菌 的食物可使人中毒。因此,及时准确的检测对于预防沙门氏菌极其重要。本文综述了沙门氏菌的特征、快速检测方法和各种方法的优点与局限性,为沙门氏菌的快速检测提供理论依据,以期找到当下最适合检测沙门氏菌的方法。 [关键词]沙门氏菌;特征;检测方法 [中图分类号]S816.17 [文献标识码]A [文章编号]1004-3314(2019)17-0093-05 沙门氏菌的特征及检测方法研究进展 杨凌君,叶玲,赵奕敏,梁秀婷,骆文俊,王琤韦华* (江西科技师范大学生命科学学院,江西南昌330013) 基金项目:江西科技师范大学第12届大学生科研创新项目*通讯作者 沙门氏菌(Salmonella )是一种常见的人畜共患病原菌,对人和动物的危害极大(吴荔琴等,2017)。感染沙门氏菌后会加剧发病率或死亡率,降低动物的繁殖生产力。沙门氏菌容易污染食物,对食品安全构成威胁(Vivek 等,2015;何晓芳,2013),因此有必要创建一种快速准确的沙门氏菌 检测方法。本文综述了沙门氏菌的特征以及迅速检测沙门氏菌的方法,以期为沙门氏菌的迅速检测提供理论依据。 1 沙门氏菌概述 沙门氏菌属作为肠杆菌科的一个大属,是一 种重要的革兰氏阴性食源性致病菌,在自然界分布广泛,种类繁多(朱奇等,2015)。食用被沙门氏菌污染的水和食物后,在宿主体内可以引起肠道系统疾病(Wan 等,2017;Gong 等,2017)。沙门氏菌属根据细菌抗原分为四十二个群和两千多种血清型,主要致病菌是A ~E 群的某些菌株(黄敏,2017)。通常情况下沙门氏菌使用量超过105cfu 即可造成人类感染,而对于高度易感染人群15~ 20cfu 即可引起沙门氏菌感染(Kokkinos 等, 2014)。蛋和肉类是沙门氏菌的主要载体。通过对 沙门氏菌多方面的研究,可以提高禽蛋和肉类产品的食用安全指数。 2沙门氏菌的特征2.1 理化特征 沙门氏菌具有复杂的抗原结构, 一般沙门氏菌具有菌体(O )抗原、鞭毛(H )抗原和 表面抗原(荚膜或包膜抗原)三种抗原。窦雪如(2016)通过对沙门氏菌的质量控制考核得出,沙 门氏菌的三种抗原中,H 抗原是蛋白质,不耐热,存在于鞭毛中,由鞭毛素组成,而鞭毛素中氨基酸不同的排列组合,决定着H 抗原的特异性。胡丽君(2017)通过对147株肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和海德尔堡沙门氏菌进行全基因组测序,对比分析三种菌株携带的耐药基因发现,不同血清型及不同来源的耐药菌株携带的耐药基因不同。申永秀等(2018)对来源于人和动物的261株沙门氏菌进行血清分型,对15种抗生素进行药敏试验发现,多重耐药性菌株较多,且人源与动物源菌株间耐药特征存在明显的相关性。2.2 致病性 沙门氏菌属有的对人类致病,有的 只对动物致病,也有的对人和动物都致病。关红等 (2014)发现,从内蒙古地区奶牛乳房炎和子宫内 膜炎病料中分离到的沙门氏菌能够引起小鼠发病,且致病力较强。蔡双双等(2014)将分离鉴定得到的鸭源鼠伤寒沙门氏菌分为HP-2和HP-3株,用HP-2感染的小鼠全部死亡,有60%经皮下注射途径所感染的13日龄雏鸭死亡。隋明等 (2018)通过从都江堰地区的53份冷鲜肉食品样 DOI :10.15906/https://www.docsj.com/doc/b48019186.html,11-2975/s.20191721 93
鸭大肠杆菌病
一、鸭大肠杆菌病 鸭大肠杆菌病是由一定血清型的致病性大肠杆菌及其毒素引起的一种肠道传染病。一年四季均可发生，每年在多雨、闷热、潮湿季节多发。尤以冬末春初较多见，蛋鸭和种鸭也可发病，常与其他疫病并发，继发混合感染。 鸭子大肠杆菌病发病原因 1.在日常生产中，饲养方式、饮水等会直接影响到家禽的营养状况，喂养饲料和家禽饮水的的不卫生，会导致家禽发病，为大肠杆菌入侵提供条件。 提供条件，同时恶劣的环境容易使大肠杆菌交叉感染。2.有害的环境因素也是引起大肠杆菌感染的主要原因之一。如不及时清理养殖舍，造成空气中氨的含量超过一定浓度，长期接触即会破坏呼吸道黏膜上的纤毛。相对湿度低于25%，既会导致呼吸道黏膜变干，为大肠杆菌进入体内
鸭大肠杆菌病症状 雏鸭发病后，质较弱，闭眼缩颈，腹围较大，常有下痢，因败血症死亡。较大的雏鸭发病后，精神委靡，食欲减退，隅立一旁，缩颈嗜眠，两眼和鼻孔处常附黏性分泌物，有的病鸭排出灰绿色稀便，呼吸困难，常因败血症或体质衰竭、脱水死亡。成年病鸭表现喜卧，不愿走动，站立时，可见腹围膨大下垂，呈企鹅状，触诊腹部有液体波动感，穿刺有腹水流出，对养鸭业危害严重。
鸭大肠杆菌病用什么药? 用于治疗该病的药物有很多，而效果比较好的主要有庆大霉素，阿普霉素，新霉素，黏杆菌素，磷霉素，氧氟沙星，氟哌酸、头孢类药物。 鸭大肠杆菌病的用药方案推荐 方案1： 肌注庆大霉素，2~3mg/公斤，卡那霉素10~15mg/公斤，3次/天，连用3天~5天。 方案2： 氟哌酸按0.01%拌料混饲，连用3天~5天 方案3： 除了以上介绍几种药，恩诺沙星、环丙沙星也有较好的治疗效果。使用方法如下： ①拌料饲喂。可选用以上两种药物中的其中一种，按照70mg/公斤的量，将药放入饲料中，拌料喂患鸭。
沙门菌检验
沙门菌检验 沙门菌是一种比较常见的细菌，寄居在人类动物肠道内，属于革兰阴性杆菌，会在人体以及 动物的肠道内发生生化反应，对人体造成危害。沙门菌感染通常是由于食物不卫生引起的， 感染沙门菌严重的患者还会出现腹泻，而且沙门菌是导致人类食物中毒的主要病原之一。所以，当人出现腹泻、食物中毒等症状的时候，需要进行相应的检测，看是否感染沙门菌。检 测沙门菌的时候必须要按照一定的步骤和方法，首先采集样本，然后在实验室中进行检验， 并且分析实验现象，得出结果。 一、沙门菌感染概述 沙门菌是一种十分常见的肠道感染细菌，由沙门菌引起的疾病主要有两种，一种是伤寒，另 一种是急性肠胃炎，其中以急性肠胃炎最常见。鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙 门氏菌等是造成人体中毒以及出现相应症状的主要病菌。沙门菌主要来源于患病的人、动物 以及其他的带菌体，传播途径为粪便、尿液、乳汁、羊水排出的污染物、土壤、饲料等。其 中饲料和水源污染最常见，人们如果接触了不卫生的水源，就很容易感染，同时，一些畜禽 产品如果食用了含有沙门菌的饲料，也会感染沙门菌病，人食用了带菌的畜禽产品就会导致 感染。畜禽感染沙门菌之后可能会引起相应的传染病，比如猪霍乱、鸡白痢等。通常情况下 畜禽肠道的带菌率比较高。养殖场的动物因为患病、营养不良的原因，可能会导致抵抗力下降，从而容易感染沙门菌。对人体来讲，沙门菌主要存活于肠道中，肠道中的沙门氏菌会经 过肠系膜淋巴结以及组织进入血液，导致全身感染，严重的时候甚至引起死亡。 二、沙门菌检测 （一）采集标本 采集标本是进行沙门菌检测的第一步，采集标本的时候会根据不同的病种、病程等采集不同 的标本。比如患有肠热症的人，一般是在患病的第1、2周取血，第2、3周取粪便和尿液， 全程都可以取骨髓作为样本。如果是患有胃肠炎，则可以取粪便、患者的呕吐物以及可疑食 物进行检验。如果是败血症的症状，则需要取血液进行检测与化验。 （二）细菌培养 将从患者身上取来的样本进行培养，可以直接将标本或者肉汤培养物用商品胶乳凝集试剂进 行凝集试验，这种方法比较简单快速，可以十分迅速地检测出沙门菌。为了得到更加准确的 结果，一般要在实验室分离培养。 分离培养所选择的培养基为麦康凯、伊红亚甲蓝、亚硫酸铋琼脂等，不同类型的沙门菌种类 适合不同的培养基，比如伤寒沙门菌的培养，选择亚硫酸铋琼脂的效果最好，其他类别的沙 门菌则可以选择孔雀绿琼脂，效果较好。对于细菌含量较少的标本，可以使用亚硒酸盐或四 硫磺酸盐肉汤增菌。 另外，根据选取标本的差异，也需要选择不同的培养基。比如粪便及肛拭子标本，需要接种 于麦康凯上，可以提高检测准确性。血液以及骨髓的标本，首先要进行增菌培养，等到细菌 的数量达标之后，再将其移种到血琼脂或麦康凯平板上继续孵育18～24小时，然后取可疑 的菌落进行涂片和革兰染色，镜检可以得到结果。同时还可以进行系统鉴定。如果进行了增 菌培养，但是7天之后培养基上依旧没有细菌生长，则报告结果为阴性。对于尿液和体液标本，可以经过离心处理，沉淀之后将其接种于培养基上，离心机的速度保持每分钟3000 转，可以达到离心要求，有助于提高标本的准确性。对于可疑食物标本而言，首先将可以食物研 磨细碎，然后加入10倍量的无菌生理盐水进行混合，摇匀之后将其接种于培养基上。 （三）鉴定