细菌生物膜RNA提取方法研究

细菌生物膜RNA提取方法研究

辛运超1综述，张玉妥1，尚小领2△审校

【期刊名称】国际检验医学杂志

【年(卷),期】2015(036)002

【总页数】3

【关键词】细菌；生物膜；总RNA；提取方法

高纯度和完整性好的RNA提取是微生物分子生物学研究的重要前提［1］。RNA提取即将细胞破碎裂解，利用相关试剂去除多糖、酚类、蛋白质及DNA 等的污染，通过一系列的抽提、洗涤和沉淀，最终获得纯净RNA［2］。细菌生物膜可被形容为包裹在细菌表面的一层由糖和蛋白质等构成的厚厚的、黏性屏障［3］，且这些胞外聚合物约占其总生物量的90%［4］，严重影响细菌细胞裂解，干扰核酸提取和纯化，增加了RNA提取的难度［5］。相比动植物的真核细胞，细菌的RNA水平较低，半衰期短，没有5′帽子结构和3′Poly（A）尾巴结构，在提取过程中很容易降解。本文从目前国内外细菌生物膜总RNA的提取方法的种类、产物分析及常见问题等方面对细菌生物膜RNA提取方法研究展开综述。

1 常用的细菌生物膜总RNA提取方法及特点

1.1 强变性剂法强变性剂法常采用胍盐等强蛋白变性剂提取细菌生物膜总RNA。异硫氰酸胍、盐酸胍、饱和酚等都是强烈的蛋白变性剂，能有效地解离核蛋白与核酸的复合体，抑制RNA酶活性。在β－巯基乙醇、N－月桂酰肌氨钠等的协同作用下，高浓度的胍盐能强烈抑制RNA酶的活性，可从胰腺等富含RNA 酶的组织细胞中分离出完整的RNA。强变性剂法可用于大多数细菌生物膜总