金银花多糖的制备工艺优化及免疫活性研究

金银花多糖的制备工艺优化及免疫活性研究

殷洪梅1

,吕新勇2

,萧伟

2*

(1.南京中医药大学,江苏南京210000;21江苏康缘药业股份有限公司,江苏连云港222001)

[摘要] 目的:优选金银花多糖提取的最佳工艺,并探讨最佳试验条件下提取的金银花多糖的免疫活性。方法:采用正交试验设计方法优选最佳工艺;Sevag 2酶法除蛋白;将得到的多糖通过迟发型超敏反应,血清溶血素试验和脏器指数试验研究多糖对小鼠免疫调节的影响。结果:金银花多糖提取最佳工艺为:温度90e 时加入15倍量的水,提取2次,每次提取60m i n ;金银花多糖具有明显的免疫增强作用,且药效和剂量相关。结论:影响金银花多糖提取率的主要因素为温度,其次为提取时间;并通过动物试验证明金银花多糖具有增强免疫的活性。

[关键词] 金银花;多糖;制备工艺;免疫活性

[收稿日期] 2009211223

[基金项目] 科技部/重大新药创制0科技重大专项(2009Z X093132032)[通信作者]

*

萧伟,博士,研究员,级高级工程师,研究方向为中药

新剂型的研究与开发,E 2m ai:l wz h z h 2n@j to m 1co m

[作者简介] 殷洪梅,硕士研究生,研究方向为中药制剂的研发,T e:l 150********

金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonic a Thumb 1的干燥花蕾或初开的花。经近代药理实验和临床应用证明,金银花对于多种病菌有较强的抗

菌作用和较好的治疗效果[1]

。但目前国内对金银花多糖方面的研究报道较少,因此对金银花多糖的制备工艺及其免疫活性进行研究,有利于对其药理作用的深入认识和新的药效部位的开发,为金银花中多糖类成分的开发与应用提供理依据。1 材料

电子天平(BS224S 型,北京赛多利斯仪器系统有限公司);电子天平(BP211D 型,梅特勒2托利多仪器(上海)有限公司);旋转蒸发仪(RE 26000型,上海亚荣生化仪器厂);离心机(TDL 252A 型,上海安亭科学仪器厂制造);真空干燥箱(DEF 26050型,上海新苗医疗器械制造有限公司);p H 计(振源厦门工业有限公司);紫外分光光度计(UV 22550型,日本岛津);数显恒温水浴锅(HH 26型,国华电器有限公司)。

2142二硝基氯苯(上海试剂一厂,批号08109116,);用丙酮和橄榄油(1B 1)溶液配置成1%的DNCB 溶液,置于棕色瓶中避光保存备用;香菇多糖(江苏康缘药业股份有限公司,批号0704101);环

磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司,批号07122821);无水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、正丁醇、苯酚、浓硫酸、乙醇、磷酸(均为分析纯);木瓜蛋白酶

(300万U #g -1

,广西杰沃利生物公司);D 2无水葡萄糖(中国药品生物制品检验所,批号1108332200503)。

金银花购自山东平邑流峪镇,经南京中医药大学生药教研室陈建伟教授鉴定(批号Y081202);I CR 小鼠,雌雄各半,均为清洁级[购自扬州大学比较医学中心,合格证书SC XK (苏)200720001,使用许可证S YX K (苏)200520011]。2 方法与结果

211 金银花提取物中总糖含量测定

以葡萄糖为标样,采用改良的苯酚2硫酸法[223]

测定金银花提取物中总糖含量。

总糖提取率=多糖粗品中总糖含量/样品用量@100%

212 金银花多糖的制备

参照文献[425]

和本试验最佳工艺条件制备金银花多糖,即金银花药材加入15倍量的水提取2次,每次60m in ,滤过,滤液浓缩至适当体积,加入95%乙醇使含醇量达到80%,静置过夜,离心,沉淀用有机溶剂洗涤、干燥得粗多糖。将得到的金银花粗多糖溶液中加入一定量的木瓜蛋白酶充分搅拌后置于60e 恒温水浴锅内酶解4h,高温灭活木瓜蛋白酶,加入Sevag 试剂(氯仿2正丁醇,25B 5)萃取,重复操作至两相界面无变性蛋白产生为止。将萃取后的多糖溶液浓缩至适当体积,醇沉、洗涤、干燥得多糖。213 金银花多糖正交设计试验

在单因素考察的基础上,以提取物中总糖提取率为考察指标,确定提取温度、提取时间、提取次数、

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453#

溶剂量为考察因素,每个因素拟定3个水平,选用的因素和水平见表1。

表1金银花多糖制备工艺正交试验设计

水平

A

提取时间/m i n

B

提取温度/e

C

提取次数/次

D

溶剂/倍

14540110

26060215

39090320

214正交试验结果

按照L9(34)正交设计表条件进行试验,直观分析表明,B>A>D>C,即影响金银花多糖提取率的各因素的排列顺序为温度>时间>溶剂>次数。方差分析表明,A,B为主要影响因素,具有显著性(P<0101),C,D对试验结果无显著性影响。最终确定最佳提取工艺为A2B3C2D2,即15倍量的水在温度为90e时回流提取2次,每次60m i n。

表2金银花多糖制备工艺正交试验结果No1总糖提取率/%No1总糖提取率/%

1111269150

2413273130

3618085157

4411898110

56120

表3方差分析

方差来源离均差平方和均方P A919123301400<0101

B41164413881133<0101

C010*******

D01499161633

误差0103

注:f=2。

215工艺验证试验

为进一步考察优选工艺的可靠性及稳定性,取3份药材按上述最佳提取工艺进行验证试验,操作方法同前述,3次实验测得的总糖提取率分别为9161%,9158%,9176%,结合表2可看出,验证试验结果与正交表中最优试验结果相当,说明该优选工艺稳定可靠。

216金银花多糖的免疫调节试验[6]

21611金银花多糖对2142D NCB致迟发型超敏反应的影响2161111诱发模型制作将体重18~22g的40只小鼠随机分为4组,即模型组、香菇多糖对照组、金银花多糖高、低剂量组。均为正常饮食及给水。试验前1日在小鼠腹部去毛,面积约为2c m@2c m,试验第2日于去毛部位涂1%DNCB溶液50L L致敏1次,第6日于各组小鼠右耳两面涂1%DNCB溶液10L L激发。

2161112给药分别按照800,200mg#kg-1剂量换算每只小鼠所需的给药体积,第1~2日于致敏前2h给药,第3~5日均为间隔24h给药,给药方式香菇多糖为腹腔注射,其他组为灌胃。激发24h后以颈椎脱臼法处死各组小鼠,用8mm金属打孔器分别在耳中部打孔,取下相同大小的耳部组织块,用电子天平称得每个组织块的质量,通过公式肿胀度(mg)=右耳质量-左耳质量,计算激发后左右耳组织块的肿胀度。

2161113结果统计计算各组小鼠耳组织块的肿胀度。以肿胀度值作为分析数据,采用t检验比较的各组是否有统计学意义,结果见表4。

表4迟发型超敏反应结果(

x?s,n=10)

组别剂量/m g#kg-1肿胀度/mg 模型组去离子水3103?1104

香茹多糖组11189?11231)

金银花多糖高8001112?11013)

金银花多糖低2001141?01982)

注:与模型组比较1)P<0105,2)P<0101,3)P<01001。

从试验数据可以看出:香菇多糖组与模型组比较有一定抑制作用且存在显著性差异。金银花多糖对DNCB致迟发型超敏反应有一定抑制作用。21612金银花多糖对环磷酰胺致小鼠免疫低下的影响

2161211分组与给药将体重17~19g的50只小鼠随机分为5组,即模型组、香菇多糖对照组、金银花多糖高、低剂量组和正常组。均为正常饮食及给水,剂量及给药方式同21611,连续给药7d。在无菌条件下,于第2日每鼠ip5%鸡红细胞悬液0125mL致敏。于给药第2,4,6日腹腔注射环磷酰胺每只012mL致免疫低下。末次给药1h后,眼眶取血,2500r#m i n-

1分离血清。

2161212溶血素及脏器指数测定取小鼠全血离

心分离血清,生理盐水稀释100倍,按下表进行试

验。见表5。

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454

#

表5血清溶血素试验设计

试剂样品管/mL对照管/mL 100倍稀释血清1-

生理盐水-1

5%鸡红细胞稀释液015015

10%豚鼠血清稀释液015015

按照上表,样品于37e水浴中保温30m in,孵毕,置4e冰箱终止反应。用2000r#m i n-1离心10 m in,取上清液1mL,放置10m in后,于540n m比色,以对照管作空白调零,分别测定各管吸光度(A)。

给药结束后次日,脱颈椎处死小鼠,称体重,取出小鼠脾脏和胸腺,称重。计算脏器指数=脏器质量(mg)/小鼠体重(10g)。

2161213结果统计各组的吸光度值和脏器指数。以吸光度值和脏器指数作为分析数据,采用t检验比较的各组是否有统计学意义,结果见表6,7。

表6血清溶血素结果(

x?s,n=10)

组别剂量/m g#kg-1A

模型去离子水0124?01183)

香茹多糖10157?01521)

金银花多糖8000156?01232)

2000150?01201)正常-1106?0172

注:与模型组比较:1)P<0105,2)P<0101;与正常组比较3)P< 01001(表7同)。

表7脏器指数结果(

x?s,n=10)

组别

剂量

/mg#kg-1

胸腺指数

/m g/10g

脾脏指数

/m g/10g

正常-35175?1419754153?7195模型去离子水10144?31073)16167?21703)香茹多糖114176?418826188?31302)

80010156?219020100?21791)

20011182?313417117?3143

血清溶血素值是体液免疫指标,表6中的数据可以看出:香菇多糖组与模型组有显著性差异且吸光度值有一定的回升,金银花多糖组各剂量组的吸光度值和香菇多糖组相当且与模型组有极显著性差异,表明金银花多糖具有提高体液免疫的活性。

脏器指数是非特异性免疫指标,表7显示,香菇多糖组和金银花多糖高剂量组对胸腺指标较模型组存在显著性差异。说明金银花多糖高剂量对环磷酰胺致免疫低下的脏器有一定的修复作用。

3讨论

本研究在单因素试验的基础上,以总糖的提取率为指标,通过正交试验优化了金银花多糖制备工艺。方差分析表明,提取时间,提取温度为主要影响因素,具有显著性(P<0101),提取次数,溶剂对试验结果无显著性影响。但金银花药材加水后体积膨胀,溶剂量减小,料液比不宜过小;同时从节约成本与操作的可行性角度综合考虑,最终确定最佳提取工艺为A2B3C2D2,即15倍量的水在温度为90e时回流提取2次,每次60m in。

文献报道多糖脱蛋白的常用方法为Sevag法、TCA法、酶法、酶法2Sevag法。其中Sevag法较温和,是多糖脱蛋白的传统方法;TCA法适用于蛋白质含量较高的多糖,但对多糖的结构破坏较大;酶法专属性强,是目前普遍认为较好的脱蛋白方法;酶法2Sevag法由于具有试剂用量小、样品损耗少、快速等特点,应用也较为普遍。本实验结合上述4种方法的特点及金银花多糖粗提物中蛋白质含量,采用了Sevag2酶法除蛋白,蛋白清除率高,多糖损失小,为除蛋白有效、可行方法。

多糖是金银花成分之一,但其是否有药理活性,目前文献报道较少,本文通过金银花多糖对小鼠迟发型超敏反应,血清溶血素值,以及对免疫器官质量的影响的3个试验,综合考察了金银花多糖免疫调节活性,结果表明金银花多糖具有明显的免疫增强作用,且药效与剂量存在相关性,为进一步研究成分与活性关系奠定了基础。

[参考文献]

[1]刘雄,高建德1金银花质量控制、化学成分及药理学研究进展

[J]1甘肃中医学院学报,2006,23(4):461

[2]张青,张天民1苯酚2硫酸比色法测定多糖含量[J]1山东食品

科技,2004,(7):17

[3]张维杰1复合多糖生化研究技术[M]12版1上海科学技术

出版社,1987:11,911

[4]邓庆华1用正交试验法优化金银花多糖提取工艺[D]1东北

师范大学,2008:19

[5]李尔春1金银花多糖的分离纯化与生物活性研究[D]1西安:

陕西师范大学,2009:16

[6]李仪奎1中药药理实验方法学[M]12版1上海:上海科学技

术出版社,2006:721,725,7331

[责任编辑周驰]

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综述 绿藻多糖的研究进展 海藻是生长于海洋中的低等植物，是海洋生物的重要组成之一。主要由褐藻、红藻、绿藻、蓝藻四大类海藻组成，其中，褐藻和红藻已经被大规模的人工养殖和工业利用,广泛应用于生产和实践中，在食品工业、纺织工业、医药卫生等领域发挥重要作用，而绿藻则未被广泛开发和利用，只有部分产量高的绿藻被用作饲料、饵料、肥料等，绿藻被人类认识和利用的程度远不如褐藻和红藻。然而，绿藻却是种类最多的一类海藻，绿藻是藻类植物中最大的一门，约有350个属，7500～8000种。绿藻的分布很广，在淡水和海水中均有分布，海产种类约占10％，淡水产种类约占90％。海产种多分布在海洋沿岸，往往附着在10公尺以上浅水中的岩石上。绿藻营养价值很高，含有大量糖、蛋白质、脂肪、无机盐和各种维生素，人们通过不断的提取、分离、鉴定，得知藻类中具有较高活性的物质是海藻多糖类。20世纪60年代初，英国的Percival研究组开始对孔石莼所含的碳水化合物进行研究，1961年，日本的三田对石莼的水提多糖水解后进行了纸色谱分析,结果表明含有D-葡萄糖、L-鼠李糖、D-木糖、和D-葡萄糖醛酸等。至此揭开了人类研究绿藻多糖的序幕，此后相继有学者投入到绿藻多糖的研究中来，取得了很多令人鼓舞的成果，迄今为止，日本和法国对绿藻多糖的研究报道较多[1]，而我国对绿藻多糖的研究则较少。大量的研究证明,从绿藻中提取的天多 糖来源广泛、品种多、毒副作用低、安全性高、具有多种生物活性,成为近年来研究开发的热点。 1绿藻多糖的组成与结构 目前，人们只对绿藻门中某些种属的多糖进行了较为详尽的研究，这些种属的多糖表现出了较强的生物活性。总体来看，对多糖研究较多的绿藻种属主要有石莼属（Ulva）、松藻属（Codium）、浒苔属（Enteromorpha）、礁膜属（Monostroma）、小球藻属(Chlorella)、刚毛藻属（Cladophora）等等。绿藻多糖主要位于细胞间质中，多为水溶性硫酸多糖。它也存在于细胞壁之中，细胞壁微纤维主要不是由纤维素组成，而是由木聚糖或甘露聚糖构成，另外，细胞质内尚有少量的多糖存在。水溶性硫酸多糖是绿藻多糖的主要成分，其组分和结构随绿藻种类的不同而不

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肝癌免疫治疗的研究现状及进展 摘要】肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一。其发生与肿瘤的免疫逃逸密切相关。 随着免疫学和分子生物学的发展，免疫治疗已成为研究热点，并开始应用于临床，显示出广阔的应用前景。本文从主动免疫治疗和过继免疫治疗两个方面综述了肝 癌免疫治疗的现状和进展。 【关键词】肝癌免疫治疗 肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一。目前治疗方法主要有手术切除、化疗栓塞、射频治疗、生物反应调节剂治疗等。放化疗最大的缺点是无特异性杀伤作用，副作用大，易对机体造成继发性损伤，即使是根治性手术也只能解决局部问题， 复发转移率高，预后差。研究表明，肿瘤的发生发展与机体免疫系统密切相关， 免疫逃逸是主要原因之一。如何打破免疫耐受，激活肿瘤的杀伤功能是肿瘤免疫 治疗的主要方向。目前，肝癌的免疫治疗有多种策略。 1 主动免疫 主动免疫是指利用肿瘤细胞的特异性抗原诱导机体产生特异性免疫，从而主 动杀伤肿瘤细胞。目前，肝癌的主动免疫包括树突状细胞疫苗、肿瘤细胞疫苗和 异种重组甲胎蛋白疫苗。 1.1树突状细胞疫苗 树突状细胞（DC）是体内功能最强的抗原提呈细胞。DC最重要的功能是激活静息T细胞。由于许多肿瘤患者缺乏功能性DC，不能刺激抗原特异性T细胞反应，因此在体外诱导功能性DC对于主动免疫治疗具有重要意义。目前，大多数实验 都是利用细胞因子或转录因子激活，或热休克蛋白和肿瘤细胞负载DC制备DC疫苗，然后将这些致敏DC疫苗回流体内，诱导机体产生有效的肿瘤免疫排斥反应。MAGE-1在肝癌中的表达率高达80%，提示MAGE-1可作为肝癌免疫治疗的靶点。吴鸣宇等MAGE-1肽负载DC体外诱导高特异性抗癌免疫应答。肿瘤睾丸抗原（Tumor testis antigen，CT）是20世纪90年代发现的一种肿瘤特异性抗原，除 睾丸外，在正常组织中不表达，但在多种肿瘤组织中高表达。肿瘤睾丸抗原NY-ESO-1是CT抗原中免疫原性最强的抗原。结果表明，NY-ESO-1在肝癌组织中的表达率较高（30%-40%）。张文敏等。用原核表达纯化的NY-ESO-1蛋白肽攻击DC，体外诱导特异性CTL对肝癌细胞的杀伤作用。结果表明，融合蛋白肽刺激DC可 有效刺激T细胞增殖，诱导CTL的产生。 1.2 甲胎蛋白(AFP)多肽疫苗 AFP不仅是肝癌诊断的标志物之一，而且是肝癌免疫治疗的潜在靶点。甲胎 蛋白多肽疫苗是一种刺激肝癌特异性免疫反应的疫苗。巴特菲尔德等人。报道10 例Ⅲ-Ⅳ期肝癌患者用甲胎蛋白肽休克DC疫苗治疗。6例AFP特异性T细胞增多，6例AFP特异性T细胞合成IFN-γ的比例增加。提示AFP靶向疫苗具有免疫活性。 1.3 肝癌肿瘤疫苗 肝癌疫苗是通过物理、化学和生物因素的处理，改变或消除自身或同种肝癌 细胞的致瘤性，保持免疫原性，输入体内，刺激机体产生特异性免疫应答。Yang 等人。结果表明，H22全细胞疫苗可诱导肝癌小鼠产生特异性免疫应答，明显延 长小鼠的存活时间。 2 过继免疫治疗 ATT是一种将具有抗瘤活性的免疫细胞诸如:LAK、TIL、CTL细胞、细 胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞),转移给肿瘤患者的被动免疫治疗方法.

多糖活性研究

多糖活性的研究 摘要多糖是来自高等植物、动物细胞膜、微生物细胞壁中的天然大分子物质，是所有生命 有机体的重要组成部分，并与维持生命所需的多种生理功能有关. 对多糖的研究，最早是在20世纪40年代，但多糖作为广谱免疫促进剂而引起人们的极大重视则是在20世纪60年代多糖是指由10个以上单糖分子缩合而成的多聚物。最初被认为是无任何生理效应的纯粹的结构物质，然而随着进一步的研究，人们惊奇地发现多糖及其缀合物在免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗溃疡、降低胆固醇、降血压以及抗血栓等多方面具有良好的药理活性[1],其中免疫调节和抗肿瘤活性最引人注目。多糖在自然界分布很广，尤其是高等植物多糖和食用真菌多糖具有疾病治疗范围广和相对毒性较低的特点，在医学领域引起广泛的注意[2]，近三十年来，发现多糖具有复杂的多方面的生物活性和功能。对于多糖的研究虽然较蛋白质、核酸、脂类的研究起步为晚，但已引起人们很大的兴趣。多糖己成为天然药物及保健品研发的重要组成部分。据报道，目前全球至少有19个多糖正在分别作抗肿瘤、抗艾滋病及糖尿病治疗等的临床试验。2002年全球糖类药物及保健品的销售量已达到193亿美元。可以这样说，“沉睡至今的糖巨人正在苏醒中”。 目前各国一方面正在努力从中草药及海洋生物中寻找对肿瘤、艾滋病等疾病更有效的多糖，另一方面正在着重进行多糖构效关系和作用机理的研究。至今研究的较为深入的有高等真菌(主要是蘑菇类)产生的D一葡聚糖和某些植物产生的具抗补体作用的果胶类多糖以及海洋生物藻类中产生的硫酸酯多糖。 1.多糖的免疫调节作用 已证实不同的多糖具有不同的免疫促进作用。香菇多糖是理想的免疫促进剂，它作为T 细胞定位的佐剂和辅助T 细胞刺激参与机体免疫反应。银耳多糖能促进淋巴细胞的转化，增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，明显促进肝脏蛋白质核酸的合成以及促进骨髓造血功能，提高体液免疫力。黑木耳多糖可有效地提高小鼠巨噬细胞的吞噬指数和百分率。药理实验证明，茶多糖具有增强免疫功能，促进单核巨噬细胞系统吞噬功能的作用。其他多糖如大蒜、萝t- 等提取的多糖对T 淋巴细胞、B 淋巴细胞及巨噬细胞分别具有不同的增强作用，可增强机体细胞免疫功能[3]。 生物活性多糖还可用作疫苗佐剂，促进抗体的产生。屈洪岩等研究了玉米花粉多糖对鸡新城疫弱毒疫苗免疫应答的影响，发现玉米花粉多糖能显著促进HI抗体(新城疫血凝抑制抗体) 的产生，使抗体提前产生并维持较高滴度。Wagnerova等发现酵母多糖能促进豚鼠血清中抗SRBC抗体的产生。Benda等在猪上试验了啤酒酵母多糖的佐剂活性，发现其可以显著促进小牛血清白蛋白(BSA) 抗体的产生；同时酵母多糖也可促进绵羊血清中人白蛋白(HSA) 抗体水平[4] 。 2.抗炎、抗辐射作用 陈万生等报道知母总多糖具有显著的抗炎作用，能抑制二甲苯所致的大鼠耳廓肿胀、醋酸所致的大鼠腹腔毛细血管通透性升高，其机理是提高大鼠血浆中皮质酮浓度而降低ACTH (促肾上腺皮质激素) 浓度和炎症组织中PGEZ浓度。多糖主要通过强化造血系统和活化吞噬细胞等作用提高机体对辐射的耐受性。 3.多糖的抑菌抗菌作用 多糖抗细菌作用的机制是多方面的，一方面是药物对细菌及其毒性产物的直接抑杀和解毒作用，另一方面更主要的是通过调动机体免疫防御功能从而发挥抑菌、杀菌作用。杨声等同采用固体培养基体外抑菌法，研究了水溶性壳聚糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、白色念珠菌、绿脓杆菌的抑菌作用，结果表明，水溶性壳聚糖对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都具有抑制作用，且对革兰氏阳性菌的抑制作用强于革兰氏阴性菌。在被试菌中抑制作用强弱顺序为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、变形杆菌。

CAR T细胞在肿瘤免疫治疗的研究进展和展望文献综述

中国药科大学 生物工程文献综述 综述题目CAR-T细胞在肿瘤免疫治疗的研究进展和展望英文题目Current situation and development trend of CAR- T cell for tumor immunotheraphy 专业生物制药（卓越工程师） 院部生命科学与技术学院 学号 姓名龙益如

CAR-T细胞在肿瘤免疫治疗的研究进展和展望 龙益如 摘要：嵌合抗原受体修饰的Ｔ细胞（CAR-T）治疗是一种新型的肿瘤免疫治疗方法。在多种血液肿瘤的临床试验中，CAR-T细胞疗法取得重大突破，在实体瘤的临床试验中也初见成效。但在获得显着疗效的同时, CAR-T也存在持久性、归巢、脱靶效应、神经毒性、细胞因子风暴、插入突变、对实体肿瘤疗效有限等问题。现就CAR-T技术的最新进展及该领域有待解决的问题进行综述，以期初步了解该技术的发展前景及问题分析。 关键词：嵌合抗原受体修饰的T细胞；肿瘤；免疫治疗 Current situation and development trend of CAR-T cell for tumor immunotheraphy Abstract：A lot of remarkable results suggested that the modification of T-cells with CARs could be a powerful approach for developing safe and effective cancer therapeutics .A novel breakthrough has been made in CAR-T treatment of hematologic tumors and therapeutic potential in clinical studies of solid tumors has been achieved , although there are still many problem for CAR-T on the clinical application such as off-target effect, cytokine storm ,insertion mutagenesis, limited effects for solid tumors. Here, we reviewed the recent advances of CAR-T and problems that need to be solved in this flied. Keyword: Chimeric antigen receptor T cells ; Tumor ;Immunotheraphy

活性多糖的作用

活性多糖的作用 安发全称安发国际控股集团（Alpha Group Holdings Ltd.），1998年创立于素有“地球上最后一块净土”美誉的新西兰，是全球一流的以专业研究、开发和推广药用真菌、天然植物、营养果蔬和海洋生物等天然产物为主导的健康产业集团。 安发国际控股集团董事局主席华裔科学家高益槐教授对活性多糖就有着深入的研究，并且在美国权威杂志《Science》杂志上，发表了数篇关于活性多糖方面的论著。 活性多糖和传统意义上的多糖有所不同，日常所见的多糖，是由多个糖原单位组合而成，只有营养作用的多糖，就比如日常吃的馒头、面包、米饭中的多糖，这类多糖叫做淀粉多糖，属于营养多糖，只有营养作用而没有药效作用，化学结构是直线型的，称为“α型多糖”。 具有药理活性的“活性多糖”，称为“β型多糖”，它们的化学结构是三维螺旋状的立体结构，具有丰富的药理活性，而且不能被淀粉酶所分解，因此能在人体内发挥药效作用，主要存在于食用菌、药用菌里面，比如香菇多糖、灵芝多糖、茯苓多糖、虫草多糖等。 那“活性多糖”对人体健康有着哪些重要的作用： 1、免疫调节：活性多糖不仅能使过低的免疫能力提高，而且能压低亢进的免疫系统，还能平衡紊乱的免疫系统功能。 2、修复细胞膜：因为活性多糖的结构和人体细胞膜上多糖的结构非常相似，有很好的修复作用。 3、抗肿瘤：自身免疫功能的低下或失调是肿瘤发生并扩展的重要原因。活性多糖本身不具备抗癌能力，但它是最佳的免疫功能调节剂和激活剂，它可显著提高机体的免疫功能，从而增强患者自身的抗癌能力，成为抗肿瘤、防癌以及癌症生物治疗之优选。特别是真菌多糖，对人体几乎没有任何毒副作用，而这种无毒性的免疫活化剂的优点，恰恰是许多肿瘤化疗药物和其它免疫促进剂都不具有的。因此，对于活性多糖这种无毒性的免疫活化剂，世界权威杂志《科学》、《科学美国人》、《科技速评》提出：“活性多糖是人类健康和战胜肿瘤的最终出路。” 4、抗衰老：活性多糖能促进调节免疫功能；能调节代谢平衡，促进血清、肝脏和骨髓的核酸及蛋白质的生物合成；能显著提高超氧化物岐化酶（SOD）活性，清除自由基，防止脂质过氧化，通过这几方面起延缓衰老作用。 5、对肝的保护作用：科学家们做了这样的实验，给小老鼠注射一种物质叫做四氯化碳，造成它的肝损伤，然后用灵芝多糖、香菇多糖、姬松茸多糖的混合体去治疗，30天后，肝损伤消失，小老鼠恢复正常。这说明，某些多糖对肝脏的损伤有保护作用。它们能修复受损的肝细胞膜；促进干扰素形成，发挥抗病毒功效；对肝硬化有防护作用。 6、对心血管的保护作用： 活性多糖具有平衡血脂、预防动脉粥样硬化板块的形成；可使收缩的血管扩张、促进微循环，以辅助降血压；还改善心肌微循环，增强心肌氧和能量的供给，因此对心血管有一定的保护作用。 7、对胃肠道的保护作用： 活性多糖能够修复强化和重建胃肠道消化系统，重建肠道防御与攻击系统的

CAR_T细胞免疫疗法研究进展

CAR-T细胞免疫疗法的研 究进展 浙江理工大学 任嘉锋自动化（2）班 学号：2013330301070 指导老师：解纯刚

CAR-T细胞免疫疗法的研究进展 任嘉锋2013330301070 浙江理工大学机械与自动控制学院自动化2班,杭州 摘要:嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR-T细胞）技术是近年来发展非常迅速的一种过继性免疫治疗技术。这里的CAR指的就是嵌合抗原受体,由胞外抗原结合域scFv、跨膜结构域和胞内信号传导结构域组成。其通过基因修改技术，将能识别肿瘤相关抗原的抗体融合表达于自体T细胞的表面，被修改过的T细胞因此具有对肿瘤细胞的靶向杀伤力。从该技术被发明以来，CAR的设计已从仅包含单一CD3ζ信号传递结构域的第一代CAR 发展为加入了CD28 和CD137（4-1BB）等共刺激分子信号传递结构域的第二和第三代CAR。其中，针对CD19 的CAR-T 细胞在治疗血液肿瘤中取得的成果尤为引人瞩目，同时CAR-T 细胞在针对实体瘤的治疗方面也取得了一定的成绩,但该技术同时也存在脱靶效应和细胞因子释放综合征等临床应用风险。这里就CAR-T细胞免疫疗法的原理和在肿瘤的临床治疗领域的研究进展作综述性的阐述. 关键词:CAR-T细胞;免疫疗法;基因技术;肿瘤治疗 1.CAR-T细胞疗法的原理 采用嵌合抗原受体(chimeric antigen receptors，CARs)修饰的T细胞CAR-T 细胞治疗肿瘤的方法是近年来发展最快的一种肿瘤免疫新疗法。T细胞对肿瘤细胞具有很强的杀伤作用,在肿瘤免疫应答中起主要作用.但是肿瘤细胞表面的MHC(主要组织相容性复合物)在免疫编辑的过程中会出现表达下降的情况,这样长期形成的免疫逃逸机制, 能使肿瘤细胞成功躲避T细胞攻击, 肿瘤快速增殖。此外, 人体内肿瘤特异性的T细胞数量较少, 并且由于大多数肿瘤细胞不断表达自体抗原, 使得靶向这些抗原的T细胞通过免疫耐受机制被中和或移除, 数量进一步减少。 而CAR的修饰可使T细胞在获得靶向杀伤能力的同时获得更强的增殖及抗凋亡的能力，其肿瘤杀伤作用的发挥也不会受到主要组织相容性复合体(MHC)的

植物多糖及免疫调节作用

植物多糖及免疫调节作用 1 植物多糖免疫活性概述 植物多糖免疫活性研究是植物多糖药理研究的热点,到目前为止已发现200余种植物多糖具有免疫活性。植物多糖对免疫系统的调节作用，主要表现为免疫增强或免疫刺激。它能够激活巨噬细胞、自然杀伤细胞等固有性免疫细胞，促进T淋巴细胞、B淋巴细胞的增殖、抗体的生成，促进细胞因子的分泌。更多研究显示，多糖还对细胞黏附分子等也有一定影响。此外，多糖具有免疫原性，可用来构建新的疫苗，具有广阔的发展前景和社会经济效益。 2 植物多糖对非特异性免疫的影响 非特异性免疫是生物体在长期种系进化过程中形成的一系列防御机制。固有免疫在个体出生时就具备，产生非特异性抗感染免疫作用。主要包括吞噬细胞，自然杀伤细胞（NK），树突状细胞（DC）等。 2.1 植物多糖对巨噬细胞的影响 巨噬细胞分定居的巨噬细胞和游走的巨噬细胞两类。游走巨噬细胞由血液中单核细胞衍生而来。它具有强大的吞噬杀菌和吞噬清除体内凋亡细胞及其他异物的能力，并能分泌多种细胞因子等，参与炎症反应等作用。寇小红等用小鼠巨噬细胞系Raw264.7检测绿茶多糖免疫活性，发现对小鼠巨噬细胞Raw264.7有显著活性，能促进小鼠巨噬细胞生成NO的活性，在浓度达到100 μg/ml左右时的促进活性效果最强[1]。郑尧等观察到口服或注射甘草多糖后,能显著提高小鼠网状内皮系统中的单核巨噬细胞吞噬功能[2]。王学梅等研究芦荟多糖对鸡免疫功能的影响，发现添加芦荟多糖的实验组，吞噬指数均高于对照组，并且随着饲粮芦荟多糖浓度的增加，吞噬指数也增大[3]。 2.2 植物多糖对NK细胞的影响 NK细胞在机体抗肿瘤和早期抗病毒和胞内寄生菌感染的免疫过程中起重要作用。严全能等在观察羊栖菜多糖对小鼠免疫功能的调节作用的实验中，发现羊栖菜多糖提高小鼠NK细胞杀伤活性[4]。王剑等通过体外细胞毒性检测、小鼠脾淋巴细胞增殖实验、NK细胞活性测定等实验，对川牛膝多糖的免疫活性进行了研究，研究结果表明，川牛膝多糖体外在10~300 μg/mL浓度范围内能够增

海藻多糖滴丸制备工艺的研究【开题报告】

开题报告 药学 海藻多糖滴丸制备工艺的研究 一、论文选题的动因（背景或意义） 多糖类化合物在自然界中分布广泛，是生命物质的重要组成成分。它不仅能够调节免疫细胞间信息的传递与感受，还具有控制细胞的分化、分裂，调节细胞的生长和衰老以及维持生命有机体的正常代谢等多种功能。大量的研究证明，从植物、真菌、细菌等提取的天然多糖，具有来源广泛、毒副作用低、安全性高、免疫增强功能广泛等优点，是一种理想的免疫增强剂。 多糖的种类各异, 在生物体中行使着不同的功能。在植物组织中, 多糖类的主要功能是: 能量资源( 贮藏多糖) 、结构强度( 结构多糖) 和在竞争性生态系统的生存和分配( 特殊多糖的更精细结构的一种属性)。从海洋微藻中提取的海藻多糖，品种多、资源丰富，具有抗病毒、抗辐射、抗氧化等多种生物活性，成为近年来研究开发的热点。 海藻多糖是一种天然活性物质, 具有许多药用功能, 可作为生物吸附剂和其它海洋生物的营养物资源, 细胞物质的寒冷保护剂, 可降血脂、抗氧化, 增强免疫调节活性, 制备微胶囊等。 海藻多糖是一类高效的生物吸附剂；藻类能富集多种微量元素, 可广泛用于医疗保健食品的研制, 水质净化及污水处理, 稀有、贵重金属及放射性物质的回收, 痕量、超痕量元素分析等方面。在藻类的生物富集过程中, 由于藻类细胞和细胞壁中都含有多种多糖, 而这些多糖可提供氨基、羧基、羟基、醛基, 以及硫酸根等官能团, 因而与金属离子有较强的络合能力 ,可通过络合与离子交换, 进行生物吸附徽量元素。研究表明, 作为金属离子交换剂, 海藻多糖可与废水Ni2+ ,Co2+ ,Cr2+ , Cd2+ 等离子发生作用, 多糖中的褐藻酸盐和硫酸酯基多糖具有显著的离子交换能力。 海藻作为其它海洋生物的营养物资源；海藻由于其自身营养物成分和特性, 可作为海洋生物的活体饲料, 如浮游生物的整个生长过程的食物, 甲壳类动物幼体的饲料, 它可提供平衡的营养物, 而海藻多糖对于这些生物的免疫功能也

活性多糖与免疫

活性多糖与免疫 我们人体的免疫系统由三道防线构成，分别是皮肤粘膜的保护作用、吞噬细胞的吞噬作用、特异性的免疫系统。皮肤粘膜的保护作用是人体的第一道防线。皮肤表面是汗毛和汗腺，人体汗液具有杀菌功效。研究发现人体汗腺可生产一种多肽，这种通过汗液分布在皮肤表面的多肽不仅可维持皮肤上正常菌群的稳定，还可像抗生素一样有杀细菌作用。汗腺中的杀菌多肽是人体的第一道天然屏障，保护着人体内部器官和组织不被侵害。 在第一道防线当中还有粘膜的保护作用。人体内的消化、呼吸、排泄、生殖等各器官内壁由黏液保持其表面湿润，故多称为粘膜。黏膜是指口腔、鼻腔、肠管、阴道肠道等与外界相通体腔的湿润衬里。有些粘膜表面还有纤毛，将细菌和有害物质排出体外，比如我们的鼻涕，就是细菌、脏东西、还有粘膜分泌粘液的混合体。粘膜表面也分泌抗菌杀毒物质，除了有保护作用之外，还有抗菌作用。当有害物质入侵支气管的时候，支气管粘膜表面的纤毛会分泌粘液包裹细菌通过咳嗽排出体外。 人体的第二道防线就是吞噬细胞的吞噬作用，吞噬细胞是人体内大个儿的细胞，当细菌和病毒经过皮肤和粘膜进入人体的时候，吞噬细胞就从附近的血管中跑出来，将细菌病毒等有害的物质吞噬消灭掉。 人体的第三道防线就是特异性的免疫系统，包括免疫器官、免疫细胞、免疫因子。当前两道防线因为细菌病毒太多或者人体免疫力低下的时候，不能有效全面的杀死细菌病毒，人体就启动了第三道防线，就是人体的大部队发挥作用了。 无论是特异性的免疫还是非特异性的免疫对我们身体都非常重要，大家看看这张表格，不难看出，没有免疫，生命就会停止。在免疫系统健全的情况下，人禁食（但可以喝水）可以存活49天；人在免疫系统健全的情况下，禁水（但可以进食）可存活7天；但没有免疫系统，尽管可以吃饭喝水，也只能存活1-2天，说明没有免疫生命就会停止。 二十一世纪是活性多糖的时代，它将替代二十世纪轰轰烈烈的蛋白质时代，就是因为多糖就是能激活免疫功能，提升或调节免疫功能最好的物质。 多个糖原单位组成的糖称为多糖；只有营养作用的多糖称为营养多糖，比如我们常吃的馒头、面包、米饭叫做淀粉多糖，属于营养多糖，他们只有营养作用但没有药效作用，化学结构是直线型的，称为α型多糖；还有一种是具有药理活性，在人体内发挥药效作用的多糖，我们称为活性多糖，最主要存在于食药用菌里面，比如说香菇多糖、灵芝多糖、茯苓多糖、虫草多糖等。这种多糖呈现三维螺旋装立体结构，我们称为β型多糖。高益槐教授在美国Science 杂志中有关于活性多糖方面的论著。 活性多糖最重要的作用就是免疫调节作用，而活性多糖不仅能提升过低的免疫系统功能，压低亢进的免疫功能，还能平衡紊乱的免疫系统功能。因为，人体的免疫系统疾病分为三大类：免疫力降低型疾病，比如说别人感冒你很容被传染，在饭店里面吃饭很容易拉肚子等都是免疫力低的表现，严重者还会罹患癌症；免疫力紊乱型疾病，包括系统性红斑狼疮、肾炎、关节炎等疾病，这是一大类疾病主要的原因就是免疫紊乱；免疫力增高型疾病，比如过敏性鼻炎、过敏性哮喘、荨麻疹等，都属于身体内的一种免疫球蛋白产生过多，结果发生了过敏反应。活性多糖能使过低的免疫能力提高，紊乱的免疫系统平衡，过高的免疫系统压低。因此我们说，活性多糖有免疫调节作用。 活性多糖的另外一个非常重要功效是抗肿瘤作用。 活性多糖能修复破损的细胞，延缓了细胞衰老。 活性多糖对肝脏的损伤有保护作用。他们能修复受损的肝细胞膜；促进干扰素形成，发挥抗病毒功效；对肝硬化有防护作用。 活性多糖的通过调节血脂来保护心脑血管，活性多糖可以平衡血脂，抑制血小板凝集、清除

多糖的制备工艺标准研究

多糖的生物活性及制备工艺研究 摘要：多糖是一种自然界中含量丰富的生物大分子，其具有复杂的结构及多方面的生物活性功能。本文综述了多糖的一些主要生物活性，如抗炎、抗病毒、抗肿瘤、降血糖、抗补体等药理作用，以及多糖的提取、分离纯化等制备工艺的研究。其大致流程包括活性成分的确定、对原料药物的预处理、最佳提取分离工艺的选择、对粗品的提纯及纯化、精制多糖成品、多糖组分分析等。虽然近几十年来多糖研究取得了很大进步，由于其结构的复杂性增加了研究的难度，因此多糖的分离纯化方法发展依然缓慢，很多技术环节仍有待发展。 关键词：多糖；生物活性；制备工艺；提取；分离纯化 多糖是一类由酮糖或者醛糖通过糖苷键连接而成的，为一种天然高分子多聚物，其在自然界含量丰富。多糖及其复合物是来自于高等植、动物细胞膜和微生物细胞壁中的自然界含量丰富的天然大分子物质之一，与人类生活紧密相关，对维持生命活动起着至关重要的作用"和蛋白质、核酸、脂类构成了最基本的4类生命物质[1]。本文就国内外多糖的提取工艺方面作一综述，为进一步研究其生物活性奠定基础。 1 多糖的生物活性 1.1抗肿瘤作用 具有抗肿瘤活性的多糖大多是无毒性且具有诸如诱导细胞分化、刺激造血、抗转移[2]、抗新生血管生成[3]和诱导NO产生[4]等生物活性。它们大多不直接作用于肿瘤细胞，而是通过激活机体的免疫系统起作用,即促进淋巴细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞的成熟、分化和繁殖[5]，同时活化网上内皮系统和补体，促进各种细胞因子的生成[6]，最终抑制肿瘤细胞的生长或导致肿瘤细胞的凋亡。 1.2 抗病毒作用 20世纪70年代以后发现有些多糖具有抗疱疹病毒及流感病毒作用，特别是80年代发现多糖具抗艾滋病病毒(HIV)作用。 1.3 降血糖作用 多糖是有10个以上单糖缩合去水，以糖苷键形式结合形成的多聚糖。它与单糖、寡糖的性质不同，不但不会使血糖升高,而且能降低血糖。有望成为一类新的降血糖药物。 1.4 抗补体作用

金银花的有效成分及其提取工艺研究

金银花的有效成分及其提取工艺研究 赵奇 （山东华鲁制药有限公司，山东茌平252100） 摘要：本文通过对大量文献的总结，对金银花的分布、药用价值及化学成分作了详细的阐述；对金银花的有效成分绿原酸作了介绍，并对绿原酸的提取、分离、纯化方法作了描述和对比，为工业上绿原酸的制备提供了参考。 关键词：金银花提取工艺绿原酸药用价值 金银花为忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb)、红腺忍冬(Lonicera Lypoglauca Miq)、山银花(Lonicera confusa DC)或毛花柱忍冬(Lonicera dasystyla Rehd) 的干燥花蕾或带初开的花。全世界忍冬植物大约200种，我国有98种，分布于全国各地，其中供药用的达47种。金银花为中医常用药，其味甘、寒，归肺、心、胃经，具有清热解毒、凉散风热之功效，主治痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等症，应用历史悠久。 1 理化成分 1.1 挥发油：挥发油是金银花的有效成分之一。目前在金银花挥发油中鉴定出的化学成分多达近70种。主要含芳樟醇、棕榈酸，其他化学成分为醇、醛、酯、酮、烷、烯、炔等有机化合物。 1.2 有机酸类：绿原酸类化合物也是金银花有效成分之一。包括绿原酸(Chlorogenic acid) 和异绿原酸(isochlorogenicacid)，其他有机酸还有咖啡酸(coffeic acid)和棕榈酸(Palmiticacid)。 1.3 黄酮类化合物：1949年冲七太郎首先从金银花中分离出木犀草素(luteolin)，后又得忍冬苷(lonicerin)，1995年高玉敏等首次从金银花中分离出四个黄酮类化合物；1996年黄丽瑛 等首次分离出corymbosin和5- 羟- 3’- 4’- 7- 三甲基黄酮(5-hydroxy- 3’- 4’- 7- t rimethoxyflavone)。 1.4 三萜类：娄红祥等从金银花水溶性部分中分离得到3种具有保肝活性的三萜皂苷；陈昌祥从金银花花蕾中分离得到了6个化合物，其中有一新化合物，命名为新长春皂苷F。 1.5 无机元素：金银花含微量元素共有15种：Fe，Mn，Cu，Zn，Sr，Ti，Mo，Ba，Ni，Cr，Pb，V，Co，Li，Ca。 1.6 醇类：金银花中鉴定出的醇类主要包括：β- 谷甾醇，肌醇，二十九烷醇等。 2 金银花的有效成分———绿原酸 金银花的主要有效成分之一为绿原酸。绿原酸是咖啡酸与奎宁酸（1- 羟基六氢没食子酸）的酯，分子中具有羧基、酯键以及多元醇和多酚结构，是一种苯丙素类化合物，化学名为3-O- 咖啡酰奎宁酸，结构式如图1所示。

肿瘤细胞免疫治疗临床研究进展迅猛

中国医药报/2008年/11月/25日/第B03版 临床诊疗 肿瘤细胞免疫治疗临床研究进展迅猛 解放军总医院肿瘤中心肿瘤免疫治疗实验室焦顺昌林星石王歈 肿瘤免疫治疗技术在近20年内得到了广泛深入的研究和临床实践。近年来，肿瘤细胞免疫治疗的实践在国际上取得了重大进展，其中标志性的成果来源于肿瘤细胞免疫治疗临床实践的成功病例。本文所展示的，就是肿瘤细胞免疫治疗的一些标志性成果。 标志性成果一 特异性细胞免疫治疗或可治愈肿瘤 在2008年第358期《新英格兰医学杂志》上，刊载了一则引起轰动的报道，这篇报道是关于自体肿瘤特异性CD4+T细胞克隆治疗晚期恶性黑色素瘤病人的。 在这篇报道中，52岁男性恶性黑色素瘤患者在进行免疫治疗前，其肿瘤复发并伴随肺、左侧髂骨和腹股沟转移。患者的肿瘤对高剂量α-干扰素、4周期的高剂量白介素-2（IL-2）及局部切除的治疗方式不敏感。Hunder等人在体外刺激患者外周血中的CD4+T淋巴细胞，获得了特异性CD4+T细胞克隆，并在患者体外扩增并回输给患者，回输前后未给予患者IL-2的治疗。两个月后，患者所有的病灶消失，并在两年内没有肿瘤的复发。 这篇报道获广泛关注的原因是多方面的。首先，这是肿瘤免疫治疗中首次使用肿瘤抗原特异性CD4+T细胞克隆进行成功治疗的病例，而不再需要从肿瘤浸润淋巴细胞中获得肿瘤特异性淋巴细胞，这在技术上为广泛利用特异性肿瘤细胞进行治疗提供了可行性。其次，以往的治疗认为，体外诱导的克隆难以显现肿瘤杀伤能力，在临床上无法获得明显的治疗效果，但在这则报道中证明，选择由不同HLA分子所提呈的不同抗原表位多肽，可能是治疗是否能够成功的要素之一。再次，报道中所采用的抗原为肿瘤特异性共享抗原，其优势在于，这些抗原广泛地高表达于多种实体瘤组织中，而在除睾丸和胚胎外的正常组织细胞中没有表达，因此，这类抗原可作为多种实体瘤的免疫治疗靶点，而对正常组织细胞没有影响（睾丸属于免疫豁免器官）。还有，肿瘤细胞具有高度异质性，一般认为，单独使用一种抗原成分的治疗方法可能会使该抗原分子丢失或HLA 丢失的肿瘤细胞变异体逃脱，而在这篇报道中，在患者体内检测出针对多种肿瘤抗原的特异性免疫应答，这说明，单一特异性的细胞免疫治疗在体内发挥肿瘤杀伤作用的同时，还可能导致了其他肿瘤抗原特异性免疫应答的发生，从而从多抗原的角度控制肿瘤细胞的生长、杀伤肿瘤细胞。 标志性成果二 非特异性细胞免疫治疗可以有效控制实体肿瘤复发 2000年，Yamazaki T等人在《柳叶刀》杂志报道了体外扩增活化自体淋巴细胞预防肝癌术后肿瘤复发的随机对照临床试验研究。受试的150名患者分为两组，均接受了治愈性肝癌切除术，随后一组接受过继性免疫治疗（76例），一组不采用任何辅助治疗（74例）。患者自体淋巴细胞在体外经重组人IL-2和抗CD3抗体刺激培养扩增，并在术后的6个月内分五次回输患者。经术后随访（随访时间为0.2~6.7年，中位数4.4年），接受细胞免疫治疗组与对照组相比较，肿瘤复发率下降18%，复发风险率下降41%。且肿瘤复发时间较对照组大大延后。免疫治疗组3年无复发率为48%（对照组为33%），5年无复发率为38%（对照组为22%）。临床研究结果表明这种非特异性免疫治疗极大延长了肝癌患者术后无复发生存时间。 这个后来被命名为“扩增活化的自体淋巴细胞”疗法的细胞免疫治疗在未知肿瘤抗原特异性（非特异性）的情况下，大剂量、多次输注混合型自体T淋巴细胞治疗首次经临床试验证实，是一种安全的治疗手段。且非特异性免疫治疗在机制未知的情况下，可以有效降低实体瘤手术后复

植物多糖生物活性的研究进展

植物多糖生物活性的研究进展 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【关键词】多糖类; 植物，药用; 生物类 多糖广泛分布于自然界的多种生物体中，尤其是动物细胞膜、植物细胞壁和微生物细胞壁中，是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物，是构成生命体的分子基础之一。多糖在自然界中储量丰富，主要分为植物多糖、动物多糖以及微生物多糖3类[1]。自1960年以来，人们陆续发现多糖具有多种药理活性，它不仅可以作为广谱免疫促进剂调节机体免疫功能，还可以在抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血糖、抗辐射等方面发挥广泛的药理作用[27]。迄今为止，已有300多种多糖类化合物从天然产物中分离出来，其中从植物中提取的水溶性多糖最为重要[8]。因为它药理活性强，来源广泛，细胞毒性低，安全性强，毒副作用较小，已引起医药界的广泛关注，并成为当今生命科学研究的热点之一。 1 植物多糖的生物学功能 1.1 免疫调节作用 Yang等研究发现，在针对小鼠腹腔巨噬细胞的体内和体外试验中，当归多糖均可显著提高一氧化氮(NO)生成量，提高细胞溶酶体酶活性[9]。另外，他们还发现L硝基精氨酸甲

酯(NG nitro L arginine methyl ester，L NAME)，即一种诱导型NO合酶(iNOS)抑制剂，可有效抑制巨噬细胞中当归多糖诱导的NO 的增殖，说明当归多糖是在iNOS基因表达的诱导下刺激巨噬细胞产生NO的。Cheung等从冬虫夏草中提取得到虫草多糖(UST2000)并对产物进行了成分分析和体外药理活性研究[10]。虫草多糖主要由葡萄糖、甘露糖和半乳糖组成，比例为 2.4∶2∶1;体外试验中，虫草多糖可显著促进细胞增殖和白细胞介素的分泌;另外，虫草多糖可短暂诱导胞外信号调控酶的磷酸化而使其激活、提高巨噬细胞的吞噬活性并提高酸性磷酸酯酶的活性。结果表明，虫草多糖在触发免疫应答方面具有极其重要的作用。 1.2 抗肿瘤活性自从1950年发现酵母多糖具有抗肿瘤活性以来，研究人员已分离出许多具有抗肿瘤活性的植物多糖。Lins等经过血液实验、生物化学实验和组织病理学分析得知，在体外实验中，红藻硫酸多糖无显著细胞毒性，但体内实验显示出明显的抗肿瘤活性，并且可以增强5氟尿嘧啶诱发的免疫应答，说明红藻硫酸多糖由于它的免疫学性质而具有抗肿瘤活性[11]。Yamasaki等通过体外实验研究发现，云芝多糖可增强肿瘤细胞的生长抑制和细胞凋亡，降低肿瘤细胞的扩散能力，从而发挥抗肿瘤功效[12]。 1.3 抗菌抗病毒活性 Wang等研究发现，匍扇藻粗多糖具有显著抗Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒的活性，可抑制不同的单纯疱疹病毒株，包括标准株、阿昔洛韦抗性株和临床病毒株;其细胞毒性很低，具有较大的选择性系数。这种粗多糖还有一定的抗呼吸道合胞病毒活性，

肿瘤免疫细胞治疗研究进展

第33卷 第1期 2018年2月 天津科技大学学报 Journal of Tianjin University of Science & Technology V ol. 33 No. 1 Feb. 2018 收稿日期：2017-06-28；修回日期：2017-11-10 基金项目：国家自然科学基金资助项目(31471335) 作者简介：刁爱坡（1971—），男，吉林人，教授；通信作者：赵 青，讲师，zhao_qing@https://www.docsj.com/doc/4818959306.html, 肿瘤免疫细胞治疗研究进展 刁爱坡，赵 青 (天津科技大学生物工程学院，天津 300457) 摘 要：肿瘤免疫细胞治疗是一种新型的肿瘤治疗模式，属于肿瘤免疫治疗范畴，旨在通过调节机体的免疫细胞激活状态达到治疗肿瘤的目的．随着肿瘤免疫学理论和技术的发展，肿瘤免疫细胞治疗在血液系统肿瘤和实体瘤的临床治疗上均取得了显著的疗效，有望成为继手术、化疗、放疗和靶向治疗后恶性肿瘤治疗领域的又一场革新．本文仅就肿瘤免疫细胞治疗中以嵌合抗原受体T 细胞、自然杀伤细胞以及巨噬细胞为核心的免疫细胞治疗技术的国内外研究情况进行综述． 关键词：肿瘤免疫细胞治疗；嵌合抗原受体T 细胞；自然杀伤细胞；巨噬细胞 中图分类号：R730.51 文献标志码：A 文章编号：1672-6510(2018)01-0001-08 Research Progress in Immune Cell -mediated Cancer Therapy DIAO Aipo ，ZHAO Qing (College of Biotechnology ，Tianjin University of Science & Technology ，Tianjin 300457，China ) Abstract ：Immune cell-mediated cancer therapy is an innovative treatment for cancers ，which belongs to tumor immuno-therapy and aims to treat tumor through regulating the immune response ．Immune cell-mediated cancer therapy has achieved remarkable clinical effects on both hematological malignancies and solid tumors with the development of tumor immu-nological theory and technology ．It might make great advancements in cancer treatment after surgery ，chemotherapy ，radiotherapy and targeted therapy ．Here we summarized the research progress in immune cell-mediated cancer therapy using chimeric antigen receptor (CAR )T cells ，natural killer (NK )cells or macrophage. Key words ：immune cell-mediated cancer therapy ；chimeric antigen receptor T cell ；natural killer cells ；macrophage 恶性肿瘤是危害人类健康最严重的疾病之一. 近年来，随着生物技术的迅速发展，以调动机体的免疫功能来清除肿瘤微小残留病灶或明显抑制肿瘤细胞增殖为基础的肿瘤免疫治疗，已被广泛研究和应用于临床并取得了一定疗效，成为继手术、放疗和化疗之后的又一重要的肿瘤治疗手段． 肿瘤免疫治疗按照治疗的原理可分为非特异性免疫调节剂治疗、肿瘤疫苗治疗、免疫检查点阻断治疗和免疫细胞治疗．非特异性免疫调节剂治疗是通过使用干扰素、白细胞介素–2(IL-2)、胸腺肽、胸腺肽α、香菇多糖、猪苓多糖、酵母多糖等增强机体免疫功能，激活机体的抗肿瘤免疫应答[1–4]．肿瘤疫苗治疗是利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质诱导机体的特异性 免疫和体液免疫，增强机体抗肿瘤能力，预防术后扩散和复发．治疗肿瘤常用的肿瘤疫苗包括多肽疫苗、核酸疫苗、重组病毒疫苗、细菌疫苗、树突细胞(dendritic cell ，DC )疫苗等[5]．免疫检查点阻断治疗是通过阻断肿瘤微环境中的免疫抑制信号，即免疫检查点，解除免疫细胞活性抑制，增强抗肿瘤活性．目前研究最为深入的免疫检查点为细胞程序性死亡受体1(programmed death 1，PD-1)/程序性死亡配体1(programmed death ligand 1，PD-L1)，以及细胞毒性淋巴T 细胞抗原4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4，CTLA-4)[6–7]．免疫细胞治疗(cell-mediated immunotherapy )则是通过采集人体自身免疫细胞，经过体外修饰和培养，使其数量扩增成千倍增多，靶向 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510.20170183 数字出版日期：2017-12-15；数字出版网址：https://www.docsj.com/doc/4818959306.html,/kcms/detail/12.1355.N.20171215.1511.004.html