NaCl对萝卜幼苗逆境指标及蛋白激酶活性的影响
第29卷第4期西南师范大学学报(自然科学版)2004年8月Vol.29No.4Journal of Southw est China Normal University(Natural Science Edition)Aug.2004
文章编号:10005471(2004)04065104
NaCl对萝卜幼苗逆境指标及蛋白激酶活性的影响1
吴能表1,何凤1,杨丽萍2,肖文娟1
11西南师范大学生命科学学院,重庆400715;21甘肃省敦煌市敦煌中学,甘肃敦煌736200
摘要:研究了NaCl对萝卜(Rap hanus sativus)幼苗叶片内SOD,P OD,CAT活性,Vc、脯氨酸、可溶性糖、蛋白质含量和蛋白激酶活性的影响以及激酶活性与部分金属离子的关系.结果表明,015%的NaCl能使萝卜体内SOD, POD,CAT活性,V c、蛋白质含量以及生物量降低.与此同时,提高体内脯氨酸、可溶性糖,促进蛋白激酶活性增加,反应体系的Ca2+,M n2+,M g2+对蛋白激酶活性的发挥有显著影响.
关键词:萝卜;盐胁迫;逆境指标;蛋白激酶
中图分类号:Q946文献标识码:A
研究作物的耐盐机理对盐碱地区农业生产具有深远意义,在对外界刺激的信号传递和应答过程中,蛋白质磷酸化作用起着非常重要的作用[1].大量研究表明,几乎所有的生理和病理过程,如糖代谢、光合作用、细胞的生长发育、基因表达、神经递质的合成与释放,甚至癌变都与蛋白质的磷酸化和去磷酸化有关[2,3],盐胁迫也不例外.同时,蛋白质的磷酸化依赖于激酶活性.本文以萝卜(Raphanus sativus)为材料,研究NaCl对萝卜逆境指标的影响和可溶性蛋白激酶活性与EGTA(ethyleneglycol bis(2-aminoethylether) tetraacetic acid)、M n2+、Mg2+和Ca2+等离子的关系,为揭示逆境生理机理和逆境信号传导途径提供重要资料.
1材料和方法
111材料
供试材料为萝卜品种圣红1号.室温浸种1d,撒播于盛有珍珠岩基质的钵盆中,用含有015%NaCl的Hoagland完全营养液浇灌,每日1次,处理1个月,与不加NaCl的材料对照,取其叶片用于各项指标的测定. 112方法
丙二醛(M DA)含量采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法[4]测定;脯氨酸(Pro)含量采用磺基水杨酸法[5]测定;可溶性糖含量采用蒽酮硫酸水合热法[6]测定;SOD采用NBT法,按Stew artand的测定系统[7]进行; POD采用愈创木酚法[8];CAT采用紫外分光光度法[9];Vc含量采用2,6-二氯酚靛酚滴定法[10];蛋白质的提取与酶液的制备参照文献[11]的方法;蛋白质的含量测定参照文献[12]方法;蛋白激酶(Protein Kinase, PK)活性的测定参照文献[13]的方法.
2结果与分析
211盐胁迫对萝卜体内渗透调节物质的影响
植物对渗透胁迫的适应往往是通过积累胞内的有机或无机溶质来进行渗透调节,脯氨酸和可溶性糖是
1收稿日期:20030901
基金项目:国家自然科学基金资助项目(39970516,30170646).
作者简介:吴能表(1969-),男,四川平昌人,副教授,主要从事植物生理生化、蛋白质组学与植物信号传导等的研究.
普遍存在的渗透调节物质.NaCl处理使萝卜体内脯氨酸或可溶性糖含量升高,分别为对照的112194%, 109109%,而体内蛋白质含量却降低,仅为对照的88195%(表1).可溶性糖和脯氨酸含量的升高有利于细胞水势的降低,提高抗脱水能力.蛋白质含量的降低可能是与盐胁迫下蛋白质合成减少、部分蛋白质对盐胁迫的适应而水解成小分子物质(如脯氨酸)有关.
表1盐胁迫对萝卜脯氨酸、可溶性糖、蛋白质含量和蛋白激酶活性的影响
Table1Effect of NaCl Stress on the Content of Proline,Soluble Sugar and
Protein,and on the Activity of Protein Kinase in Rap hanus sativus
N aCl浓度
/%脯氨酸含量
/L g#g-1F M
可溶性糖含量
/L mol#g-1FM
蛋白质含量
/mg#g-1FM
蛋白激酶活性
/cpm#mg-1protein
035155?610644?142138?011283250?58
01540115?311548?72112?0123115288?74显著性检验(P)01033(显著)01045(显著)01036(显著)01004(极显著)
212盐胁迫对萝卜膜保护系统与膜脂过氧化作用的影响
经015%的NaCl处理后,萝卜体内SOD,POD,CAT活性和Vc含量都有明显降低,其中Vc含量下降幅度最大,达到38189%,其次是CAT降低33135%,POD降低26109%,SOD下降17120%;与之相反,作为膜脂过氧化产物的MDA却有较大幅度的升高,达到对照的2186倍(表2).说明在盐胁迫条件下,萝卜细胞酶保护系统调节能力大大削弱,自由基的消除能力相应减少,膜脂被氧化程度较大,氧化产物MDA 含量升高,膜已受到一定程度的损伤.
表2盐胁迫对SOD,POD,C AT酶活性和Vc,MDA含量的影响
T able2Effect of NaCl Stress on the Activity of SOD,POD,CAT,
and on the Content of Vc,MDA in Raphanus Sativus
NaCl浓度
/%
SO D活性
/U#g-1F M
PO D活性
/$A470nm#min-1#g-1FM
CAT活性
/U#g-1FM
Vc含量
/L g#g-1FM
M DA含量
/L mol#g-1FM
012115?11693106?013266147?715090?14010107?010010 01510106?01782107?013349113?714555?11010307?010033显著性检验(P)01036(显著)01001(极显著)01000(极显著)01002(极显著)01000(极显著)
213不同离子及其浓度对萝卜激酶活性的影响
萝卜经过盐胁迫处理后,激酶活性有较大增加,达到对照的138148%.为探讨不同二价金属离子对萝卜激酶活性的影响,在盐胁迫提取酶液的反应体系中分别加入M n2+,Mg2+、不同浓度Ca2+及钙离子螯合剂)))EGTA进行处理,以1mmol#L-1CaCl2+10m mol#L-1M gCl2的活性为100%,其他测定值与之比较,多个处理之间存在显著差异(表3).
表3不同离子对盐胁迫引起的萝卜PK活性的影响
Table3Effects of Ions on the Activity of Protein Kinase in R ap hanus sativus T reated by NaCl 外加离子及浓度/mmol#L-1平均活性X-i15393X-i60943X-i86388X-i92670X-i95497X-i115288X-i14481711CaCl2+10M gCl2+10M n-
Cl2264503(229143%)249110**203560**178115**171833*169046*149215**119686**
o2CaCl2+10M gCl2144817(125161%)129424**83874**58429*52147*49320*29529**?1CaCl2+10M gCl2115288(100%)99895**54345*28900*22618*19831
?1CaCl2+10M nCl295497(82183%)80104**34554*9109**2827**
?5CaCl2+10M gCl292670(80138%)77277**31727*6282*
?10M gCl286388(74193%)70995**25445*
?10CaCl2+10M gCl260943(52186%)45550*
à1CaCl2+10M gCl2+2EG-TA 15393(13135%)
注:显著性检验(SSR法)活性单位为cpm#mg-1蛋白质;*表示在0105水平有显著性差异,**表示在0101水平有显著差异. 21311Ca2+对激酶活性的影响
在反应体系不变(表3#?)的情况下,外加钙离子螯合剂EGTA对盐胁迫下PK活性有极显著的影响, 652西南师范大学学报(自然科学版)第29卷
其活性只有对照的13135%(表3#à).
反应体系中外加不同浓度的Ca
2+
.结果发现,2mmol #L
-1
为最佳浓度,其活性达到对照的125161%,
不加钙的PK 活性仅为对照的74193%,但此活性高于加入EGTA 者,可能是酶液中本身含有一定浓度的Ca 2+.当Ca 2+浓度超过2m mol #L -1时,随着Ca 2+浓度的升高,PK 活性逐渐降低.说明该激酶对钙离子浓度非常敏感,适当浓度的Ca 2+能够明显地活化PK 活性,高于或低于一定浓度都不利于激酶活性的充分发挥.
21312 M n 2+
,M g 2+
对PK 活性的影响
在对照体系中除去Mg 2+,代之10m mol #L -1M nCl 2(表3#?),其活性为对照的82183%;在对照体系中额外加入10m mol #L -1M nCl 2,PK 活性比对照高出129143%,说明M n 2+和M g 2+对于增强PK 活性皆是必需的.
3 讨 论
植物在盐胁迫条件下往往导致水分供应不足,因此抗脱水是一个重要的生理环节,可溶性糖、游离脯氨酸是植物细胞内重要的渗透调节物质,它们能够增加胞内溶质浓度,降低细胞的冰点,防止细胞过度脱水,从而减少环境胁迫对细胞的伤害[12].胁迫下植物体内可溶性糖含量和游离脯氨酸含量与植物抗性之间存在相关性[13].盐胁迫处理后萝卜幼苗体内脯氨酸和可溶性糖含量明显升高,说明脯氨酸、可溶性糖对盐胁迫下的萝卜幼苗可发挥显著渗透调节作用.
正常情况下,细胞内自由基的产生和清除处于动态平衡,许多逆境可以打破这种平衡[14].一旦这种平衡遭到破坏,自由基就会在体内积累,膜内脂质双分子层中的不饱和脂肪酸就易被氧化分解,使细胞内许多功能分子的结构和功能受到破坏,如膜脂过氧化、膜的通透性增大等
[15]
,从而造成植物体内代谢紊乱,
甚至造成膜整体的破坏和过敏性死亡[16].生物体内广泛存在能清除活性氧代谢的保护酶,它们把活性氧转化成低活性物质,从而保护膜系统.除了酶保护系统之外,植物体内还存在膜保护物质,其中抗坏血酸是一种重要的膜保护物质,作为一种低分子量的抗氧化剂,Vc 能够清除多种活性氧,抑制不饱和脂肪酸氧化,防止降解,对稳定膜结构十分重要.MDA 是植物细胞膜脂过氧化产物之一,能与细胞内的各种物质发生强烈反应,因而引起对酶和膜的严重损伤
[14]
,正常生长的植株体内M DA 含量较低,当植株处于不良环
境时,会因不良环境的恶劣程度引起MDA 含量的相应上升.盐胁迫处理后,SOD,POD,CAT 活性和Vc 含量明显下降,M DA 含量升高,说明NaCl 浓度为015%时,就已经造成了较大程度的膜脂过氧化作用,膜已受到一定程度的破坏,萝卜抗氧化力很弱.
Ca 2+,Mn 2+,Mg 2+,EGTA 都对PK 活性有极显著影响.不同钙水平下PK 活性差异极大,该激酶能被强烈Ca 2+激活,以2mmol #L -1CaCl 2为最佳效果.Mn 2+,Mg 2+都能分别提高激酶活性,但它们的激活效果有差异,在体系内同时加入这两种离子的效果大于单独作用的效果,但小于两者之和,说明这两种离子的作用机制是不同的,它们之间不能相互取代,这与文献[17]的研究结果一致.Mn 2+,M g 2+的作用很可能是作为PK 的活化剂而调节酶的活性,这有待进一步研究证实.参考文献:
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Effect of NaCl on the Stress Indexes and on the
Activity of Protein Kinase in Raphanus sativus
WU N eng-biao1,HE Feng1,YAN G L-i ping2,XIAO Wen-juan1
11School of L ife Science,Southw est China Normal Uni versity,Chongqing400715,China;
21Dunhuang Mi d dle S chool of Gans u Province,Dunhuang Gansu736200,China
Abstract:Effects of NaCl on the activities of SOD,POD,CAT,protein kinase,the contents of Vc,proline, soluble sugar,soluble protein,etc.,and the relationship betw een metal ions and the activ ity of protein kinase in Raphanus sativus w ere studied.It showed that the activities of SOD,POD,CAT and protein kinase,the con-tents of Vc and soluble protein of Rap hanus sativ us treated by015%NaCl reduced.On the other hand,the content of proline,soluble sug ar and the activity of protein kinase enhanced;Ca2+,M n2+,Mg2+had an signif-i cant effect on the activity of protein kinase.
Key words:Rap hanus sativ us;salt stress;stress index;protein kinase
责任编辑胡杨
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溶血对生化检验的影响
溶血对生化检验的影响 溶血是临床生化检验中最常见的一种干扰和影响因素。鉴于红细胞的脆性较大，血液标本采集、分离等过程中稍有不慎，均可引起标本发生不同程度的溶血而影响检验结果。笔者对溶血的原因、发生机制及对检验结果的影响及其对策进行综述。 1溶血的原因及其对策 溶血可分为体内溶血和体外溶血。体内溶血可由物理因素(如人工心脏瓣膜或大血管手术后)、生物因素(恶性疟疾)、药物因素等引起;体外溶血多由物理因素(机械性破坏、冻疮)、化学因素(如血液接触表面激活剂)和代谢因素(如遗传病引起红细胞脆性增加)等引起。常见体外溶血的原因有:1)扎压脉带时间过长、过紧; 2)静脉穿刺处的消毒酒精液未干即开始采血; 3)针头在皮下反复穿刺3次以上，过度损伤组织; 4)针头过细或抽血速度太快，负压太大，红细胞通过针尖时破坏而溶血; 5)抽出的血液注入试管时用力过猛、速度过快，或带针头将血液注入试管，红细胞受挤压破裂; 6)抗凝时用力摇晃试管或剥离血凝块; 7)用破裂的离心管盛放标本，离心速度太快，离心管和套管之间有硬物; 8)标本置于过冷或过热的水箱或在运输过程中动作幅度过大; 9)采血量不足，相对低渗抗凝; 10)抽血器具内含氧化还原性洗涤[1]剂。要规范采血程序，选择合适静脉，要求扎压脉带后1min内采血，避免用力拍打或反复握拳等不良动作，见血即松压脉带，并一针见血，抽血速度要慢，向试管内注血前先取下针头，沿试管壁缓慢将血液注入洁净试管，不得将气泡注入。妥善处理和保存标本，严把注射器和试管质量关。 2 体内溶血和体外溶血的鉴别 [2] 体内溶血多见于血管内溶血性疾病，实验室检查有以下几个方面的改变: 1)血浆游离血红蛋白增 加; 2)血清结合珠蛋白降低; 3)血浆高铁血红素清蛋白阳性; 4)血红蛋白尿，尿潜血试验阳性; 5)尿含铁血红素试验阳性; 6)血清游离胆红素增高，尿胆原阳性; 7)外周血网织红细胞增高; 8)增生性贫血骨髓像，以中、晚幼红细胞增多为主。体外溶血由标本采集和处理不当引起。体外和体内溶血的主要区别是前者血清或血浆Hb、LDH和钾同时升高，而后者通常是血清或血浆Hb和LDH升高，而钾不升高，还可通过珠蛋白检测、间接胆红素 [3]测定和网织红细胞计数进一步加以鉴定。 3 溶血对生化检验结果的影响 溶血时血清ALT、AST和ALP升高1.1~8.0倍，而CK升高不明显，GGT则明显降低[4]。Fe、AST、CK、LDH、CK-MB、K、ALT、TP、TB、DB、CH、P、Mg、Urea升高，[5]UIBC、HDL-C、GLU、Ua、CO2、Na、ALB、AMY、TBA、Crea、CI、Ca降低。轻度溶血AST、ALT仅轻微升高，中、重度溶血明显升高，因此明显溶血的标本不能用于AST和ALT[6]的测定;轻度溶血LDH活性显著升高，故测定LDH标本应避免溶血。溶血可使CK、CK-[7]MB、LDH、а-HBDH、TP、AST 升高，而GGT降低。溶血对酶类、电解质和胆红素影响最大， CK、CK-MB、LDH、HBDH、AST 5项心肌酶测定随溶血程度加重增高显著，其中LDH[8][9]升高最明显。溶血对肝功能指标有显著影响。 4 溶血对检验结果的影响机制 溶血对不同检验项目结果的影响机制不同，主要表现为以下几个方面: 1)细胞内外成分浓度差的干扰，细胞内含量高的血红蛋白、酶类、离子、有机物等，溶血后细胞内的物质顺浓度差溢出，使测得值明显高于非溶血标本;相反，红细胞内浓度极低的物质，如脂蛋白、胆固醇酯、钠等随溶血，细胞内液对血清的稀释作用，使测定结果明显下降; 2)细胞内、外液成分之间反应的干扰; 3)有色物质对吸收光谱的干扰，造成吸光度和散光度产生较大的误差，当被测溶液的颜色与有色物质的颜色接近时发生正干扰，而与有色物质的颜色相差较远时产生负干扰; 4)溶血标本中血红素中的正铁离子，可被试剂中的氧化剂(如亚硝酸钠)氧化成为黄色的高铁血红素，对两点比色法造成干扰;在血清总胆固醇CHODPAP终点法中，Hb高于2g/L时会引起正干扰;在磷的测定中，溶血标本中红细胞内磷酸酯被水解，使无机磷增加; 5)溶血引起稀释的负干扰和Hb增加吸光度的正干扰相互作用形成综合干扰。 5 溶血标本的处理与评价 为减少误差，提高检验结果的准确性，一旦发现标本溶血，应采取相应的措施: 1)主动与临床联系，结合临床首先排除体内溶血的可能。若不是体内溶血，建议重新采集标本。
实验五逆境对植物组织的伤害
实验五逆境对植物组织的伤害 —电导率法检测植物细胞质膜透性和愈创木酚法测定过氧化物酶活性 一、实验目的：1.了解研究植物抗逆生理的实验方法，学会使用DDS-11A型电导率仪，掌握绝对电导率和相对电导率的概念；2.熟悉植物组织过氧化物酶活性的测定方法，学会分光光度计的“动力学”测量程序 二、实验原理：（P78和P97） 三、实验材料：绿豆幼苗 四、实验步骤： 1.材料处理：10株幼苗为一组分别置于45℃（纯水最好预热至该温度）和室温中（在上课之前请先处理好材料，以课堂小组为单位）。 2.电导率的测定：2h后小心取出幼苗，冷却至室温后测定浸出液和纯水的电导率。（不必测材料煮沸后的电导率） 3.过氧化物酶（POD）活性测定P97 3.1POD的提取：材料1g，加入KH2PO4冰浴研磨成匀浆，低温4000rpm离心15min,收集上清液，定容至25mL,低温保存 3.2POD的测定：先在分光光度计的“动力学”或“时间扫描”程序上设置好参数取比色杯2个，1个将对照液放入参比杯按照程序调零，另一个比色杯拉出加入20μL酶液，再加入1mL KH2PO4 ，最后加入3mL反应混合液，立即测量。 ?723G型分光光度计“动力学”测定 ?【3 按“ 按“
按“ENT”后，出现： 测量出图谱后，按“ESC”返回到界面: 按“3”进入活性测量功能，出现如下界面： 按“SET”进行具体设置，按“ENT”可得出相应值。 按“4”进入图谱处理功能，出现如下界面： 其中按“1”可见原始图谱，按“2”可进行峰谷检测，按“3”通过横纵坐标的缩 放可达到图谱缩放功能，方便观察图谱。按“4”具有具体的实验查询功能。 思考题 1.电导率的测定主要有哪些影响因素? 2.相对电导率和绝对电导率的概念? 3.请说出电导率和电导度的概念区别。 4.温度和CO2会影响电导度的测定结果吗？在操作中应注意什么？ 5.影响酶提取、纯化和活性测定的因素有哪些？ 6.测定时酶活性的测定应当定在什么时间范围内？测定植物组织过氧化物酶活性的意义与用途。 7.请分析比较两种处理下绿豆幼苗的膜透性及过氧化物酶活性。
溶血会影响哪些检验结果
溶血会影响哪些检验结果 检验人都知道，在标本采集、处理过程中，红细胞破坏造成溶血。原因有很多，包括采血不顺、压脉带过紧、抗凝血混匀用力过猛、离心破管等等。溶血会影响部分检验结果。在此，我查阅文献，汇总一下，与大家分享。 一、生化项目 （1）结果偏高的项目 溶血对乳酸脱氢酶（LDH）的影响最大，可使测定值升高达100-180；其次是肌酸激酶（CK），高达约69倍；；再次，是血清磷（P）和钾（K），前者为50倍，后者为20-30倍。还有谷草转氨酶（AST），10-30倍；肌酸激酶同工酶（CK-MB）15倍；谷丙转氨酶（ALT），7倍。其他受到影响但影响程度尚不明确的有钠（Na），镁（Mg），铁（Fe），氯化物（CL），总蛋白（TP），α-羟丁酸脱氢酶（HBDH），低密度脂蛋白（LDH）等。 （2）结果偏低的项目 溶血导至某些项目的测定结果偏高外，还可导至有的项目值偏低。如γ-谷氨酰转肽酶（γ -GT）。 （3）影响不大的项目 多种文献报道显示，白蛋白（Alb）和高密度脂蛋白（HDL）受溶血的影响不大。 二、凝血项目 溶血标本检测的凝血酶原时间（PT），凝血酶时间（TT）要比不溶血的标本测定值分别升高约7.22%和26.26%；血浆纤维蛋白原（Fg）则降低约9.88%。溶血后结果的改变与溶血程度无明显比例关系。促凝血检测结果受溶血因素影响,但不随溶血程度的增加而成简单的线性改变。活化部分凝血活酶时间（APTT）升高约8.48%，但也有人认为溶血对此项目影响不大。 三、免疫项目 在免疫项目检测中，溶血对化学发光法或时间分辨免疫荧光法所检测的项目的影响报道较多。其中，神经元特异性烯醇化酶（NSE）的影响最大，可使结果升高达到20倍。其次，对前列腺特异抗原（PSA）、游离T3（FT3）、游离T4（FT4）、心肌肌钙蛋白I（cTn）、肌红蛋白（MYO）也有一定影响。再者，有研究显示，溶血本身对胰岛素水平影响不大，但由于红细胞内含有胰岛素降解酶，溶血后该酶释放，随着溶血时间的延长，胰岛素不断降解，从而导至浓度降低。对于ELISA方法的影响，有研究认为HIV抗体检测实验中，溶血可造成约3.75%的标本出现假阳性。 溶血对有些项目的影响仍然存在争议，例如血钙（Ca）、尿素氮（BUN）、肌酐（CR）、碱性磷酸酶（ALP）、尿酸（UA）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHO）、葡萄糖（Glu）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）。这可能与检测方法不容有关，也可能与试验标本的溶血程度有关。 总之，作为检验人，我们要明确受溶血影响的检验项目，在实际工作中注意观察标本质量，以避免给临床提供不可靠的的实验室数据。同时，溶血对部分项目的影响尚不明确，我们不妨继续研究，提供数据以供同仁参考。 参考文献 1.谯娟, 冯涛倩, 邓华, 等. 探讨溶血对临床生化检验结果的影响[J]. 求医问药，2012, 10(11):
溶血的影响
溶血对试验指标的影响 项目误差类型原理D-二聚体（D-D）增高↑释放了促凝物质纤维蛋白原（Fg）降低↓释放了促凝物质凝血酶原时间（PT）降低↓释放了促凝物质部分活化凝血酶时间（APTT）降低↓释放了促凝物质抗凝血酶（AT）降低↓干扰分析 增高↑细胞中酶的释放天门冬氨酸氨基转移酶 （AST） 丙氨酸氨基转移酶（ALT）增高↑细胞中酶的释放γ-谷氨酰基转肽酶（GGT）降低↓干扰分析碱性磷酸酶（ALP）降低↓干扰分析总胆红素（TBiL）降低↓干扰分析 降钙素（CT）增高↑蛋白水解 肌酸激酶（CK）增高↑干扰分析乳酸脱氢酶（LDH）增高↑细胞释放脂肪酶（LPS）增高↑干扰分析 肌酐（CREA）增高↑干扰分析 尿素（Urea）增高↑细胞释放 清蛋白（Alb）降低↓稀释作用氯（Cl-）降低↓稀释作用 钾（K+）增高↑细胞释放 钠（Na+）降低↓稀释作用 磷（P）增高↑细胞释放 镁（Mg2+）增高↑细胞释放 血清铁（Fe）增高↑干扰分析雄激素（androgen）降低↓干扰分析胰岛素（Ins）降低↓蛋白水解糖皮质激素（GC）降低↓干扰分析促胃液素（gastrin）降低↓蛋白水解 胰高血糖素（glucagon）降低↓蛋白水解甲状旁腺激素（PTH）降低↓蛋白水解 促肾上腺皮质激素（ACTH）降低↓蛋白水解葡萄糖（Glu）降低↓稀释作用结合珠蛋白（Hp）降低↓干扰分析同型半胱氨酸（Hcy）降低↓干扰分析 叶酸（folic acid）增高↑细胞内叶酸释放维生素B12（VitB12）降低↓干扰分析肌钙蛋白I（cTnI）增高↑干扰分析肌钙蛋白T（cTnT）降低↓干扰分析 前列腺特异抗原（PSA）增高↑干扰分析
溶血对检验结果的影响
溶血对检验结果的影响 发表时间：2016-11-07T11:30:09.843Z 来源：《心理医生》2016年21期作者：薛海霞 [导读] 在现代医学检验技术不断发展进步下，检验结果准确性大大提高，对医学诊断以及治疗提供了准确依据。 （侯马普天通信电缆厂职工医院山西侯马 043015） 【摘要】目的：探究溶血对检验结果的影响。方法：选取本院2016年4月来院体检的60名检验者作为研究对象，取0.6mL血清，应用自动生化分析仪检验，对比谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、血红蛋白（Hb）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、血糖（GLU）、总胆红素（TBIL）、结合胆红素（DBIL）、总胆固醇（TCH）非溶血与溶血值。结果：谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、血红蛋白（Hb）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、血糖（GLU）、总胆红素（TBIL）、结合胆红素（DBIL）值，非溶血与溶血对比差异显著具有统计学意义（P＜0.05）。结论：溶血越多对检验项目造成干扰与影响越大，明确溶血检验临床作用与影响，可将检验误差减少，将检验结果准确性提高。 【关键词】溶血；医学检验；分析仪；结果影响 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）21-0259-02 在现代医学检验技术不断发展进步下，检验结果准确性大大提高，对医学诊断以及治疗提供了准确依据，大部分疾病诊断都依据实验室检验结果，对这类检验结果有着较大依赖性。在检验室各种自动化仪器不断进步下，质量高、检验及时、反应速度更快的仪器、试剂得到了认可，在检验人员素质不断提高下，也使检验结果更加可靠、准确，但是生化检验结果准确性与很多因素相关，风险多，在实验室误差中占60%左右，采集标本成为溶血检验是否合格的重要因素。研究选取本院2016年4月来院体检的60名检验者，比较溶血生化检验结果，溶血多表示存在干扰。现报道如下。 1.资料与方法 1.1 一般资料 选取本院2016年4月来院体检的60名检验者作为研究对象，排除血液疾病、恶性肿瘤、精神障碍、慢性疾病、传染疾病人员，男36例，女24例，年龄24～59岁，平均年龄（41.5±3.2）岁。抽血前保持空腹，抽血6mL，封装至一次性塑料管内，所有血液样本均无肉眼可见的浑浊与溶血[1]。 1.2 方法 应用全自动生化分析仪与试剂对采取的血液标本进行检测，检测时间3h。先将采集的血液标本放置常温下，保持20min，然后 2000r/min离心2min后，取漂浮最上面的血清，取量为0.6mL，未见溶血、乳糜、黄疸、颗粒等[2]，然后取试管上端1/3处折回，用胶布固定紧，震荡塑料管，20～30次。肉眼可见溶血中血清0.6～0.8mL，血红蛋白测定＞1.6g/L，为溶血标本[3]。 1.3 观察指标 观察并对比不同生化检验项目、方法的非溶血值、溶血值以及溶血后值。 1.4 统计学处理 本次研究使用SPSS 15.0软件对计数资料进行统计分析，标准差（x-±s），使用检验计数资料，χ2检测统计结果，以P＜0.05表示有统计学意义。 2.结果 谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、血红蛋白（Hb）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、血糖（GLU）、总胆红素（TBIL）、结合胆红素（DBIL）值，非溶血与溶血对比差异具有统计学意义，P＜0.01，TCH溶血与非溶血差异更为显著，P＜0.05,详见下表1。 3.讨论 本次研究结果显示，血液样本溶血量对生化检验项目有着显著影响，需要在日常检验中加强对溶血问题的研究与重视，才能将检验误差减少。从研究结果上看，谷草转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、血糖（GLU）、总胆红素（TBIL）、结合胆红素（DBIL）值溶血后显著升高。溶血使临床生化检验结果出现变化受多种因素影响。首先，红细胞中的血红蛋白、钾离子以及LDH、AST 是参与细胞代谢的酶，溶血进入到血清中，会使这些物质含量升高。其次，溶血后红细胞中原有成分会在血清中释放，使血清体积增大，原有物质浓度不断降低。还有一方面，红细胞中物质会与血清原有物质发生化学反应，比如，葡萄糖氧化酶活性与试剂产生一系列活性反应等。最后，溶血会对光吸收值结果产生影响。 可以将溶血分为体内与体外溶血两种，体外溶血多由物理因素，比如，机械、冷冻破坏等，化学因素，比如，代谢异常（遗传病、血细胞脆性增大）、表面活性剂接触等造成；体内溶血也与物理、生物因素有关。比如，人工心脏瓣（物理因素）、恶性疟疾（生物因素）、药物毒性反应等；要区分体内与体外溶血就要明确血清与血浆、钾的增强情况，并将其区分开，体外溶血血清、血浆、钾升高，体内溶血是指血清、血浆升高，但钾没有变化，还有一种鉴别方法是对间接胆红素、网织红细胞以及珠蛋白检测，对结果进一步确认。采血检验当中为了减少误差，需要对器具应用酒精充分消毒，彻底清洁，但针头需要特殊处理，不能直接用酒精消毒，以防出现溶血。压脉带
生物分析中溶血对检测的影响及其对策
生物分析中溶血对检测的影响及其对策 ［摘要］液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术灵敏度高，选择性强，是目前体内药物分析的首选方法，但 LC-MS/MS生物分析中仍面临着溶血样品测定失败的难题。溶血导致的样品测定数据不准确，将直接影响药物的药动学研究，如何进行溶血样品的测定已成为各国监管机构和全球生物分析行业探讨的重点。本文从溶血样品产生的原因进行分析，将溶血对检测的影响和作用方式以及溶血效应的考察方法进行了概述，最后对溶血样品的测定方法和策略进行探讨。 ［关键词］溶血；生物分析；串联质谱；色谱法，高压液相液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术是将分离能力强的液相色谱与能够提供结构信息的串联质谱结合在一起，具有灵敏度高、选择性强的特点。LC-MS/MS技术的应用，可获得丰富、有效的化合物结构信息，建立快速、高效的分析研究体系，目前已成为体内药物分析的首选方法。体内药物分析的样品一般为人血浆或血清样品，涉及被测样品少，样品复杂及干扰物质多等问题，在实际测定工作中，采集的血浆或血清样品常出现溶血的现象。一项针对欧洲分析协会的调查显示溶血为方法学验证失败的原因之一，目前也有不少文献报道了溶血样品测定失败的案例，溶血样品测定过程中面临
着溶血样品响应低、样品稳定性差以及基质效应等问题，导致阿托伐他汀、去氧肾上腺素、氟伏沙明等药物的检测失败。可见，溶血对测定的影响成为体内药物分析领域中亟待解决的难题，同时也受到了各国监管机构的广泛关注。中国药典2015版《生物样品定量分析指导原则》指出“除正常基质外，还应关注其他样品的基质效应，例如溶血或高血脂的血浆样品等”。欧洲药品管理局（EMA）同样要求考察溶血样品的基质效应。而巴西国家卫生监督局（ANVISA）的要求则更加明确，基质效应需分析八个不同来源的样品，包括4个正常血浆样品、2个脂血样品以及2个溶血样品。与此同时，美国政府在近年的白皮书中也多次讨论溶血样品的测定问题。然而各国监管机构的要求都相对模糊，缺乏明确的做法和标准，因此溶血样品的检测仍面临着严峻的挑战，广大研究者应引起重视。本文结合溶血样品测定现状，对溶血样品测定失败问题进行全面分析和总结，并探讨了溶血测定失败的解决方案，从而保证生物分析结果的准确性。 溶血样品的产生溶血是指红细胞破裂，血红蛋白逸出释放到血浆或血清中。一项针对18项临床生物等效性（bioequivalency，BE）试验的10640个样品的调查显示，溶血样品为211个，占样品总量的1.98%。溶血会造成血浆或血清颜色和密度的改变，溶血血浆根据溶血程度不同颜色呈粉红色或红色；溶血的血浆中血红蛋白、胆红素、磷脂等生
逆境对植物细胞膜透性的影响
逆境对植物细胞膜透性的影响 实验六 逆境对植物细胞膜透性的影响 (电导法) 一、实验原理： 植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。 在正常情况下，细胞膜对物质具有选择透性能力。 用电导仪测定可以比较植物组织中的外渗电解质的含量，从而间接了解细胞透性的大小。电导仪的原理： 电导率是物质传送电流的能力，是电阻率的倒数。在液体中常以电阻的倒数――电导来衡量其导电能力的大小。电导率--电阻率的倒数即称之为电导率L。电导L的计算式如下式所示： L=l/R=S/l 电导的单位用姆欧又称西门子。用S表示， 由于S单位太大。常采用毫西门子，微西门子单位1S=103mS=106μS。一般用当量电导来表示电导率。电导率L的单位是(μS/cm) 二、实验材料与设备： 植物叶片：女贞叶片 实验器具：电导仪；温箱；恒温水浴锅；小烧杯，量筒 三、实验步骤： 1.选取低温(高温）处理的女贞叶片5片，先用纱布拭净，再用打孔器打取20片小圆叶，放入小烧杯中，加入20ml 蒸馏水作为处理组。再用相同的方法打取20片未经处理的小叶放入小烧杯中，加入20ml 蒸馏水作为对照组。 2.将小烧杯放入35℃水浴锅中静置20min，期间用玻棒轻轻搅动叶片，到时间后用，电导仪测定溶液电导率。 3. 测过电导率之后，再放入100℃沸水浴中10min，以杀死植物组织，取出放入自来水冷却，测其煮沸电导率。 [ 注意事项 ] 1. 整个过程中，叶片接触的用具必须绝对洁净（全部器皿要洗净），也不要用手直接接触叶片，以免污染。 2. 测定后电极要清洗干净。
四、实验结果 按下式计算相对电导度： 相对电导度（L）=（S1-空白电导率）/（S2-空白电导率） S1:煮前的电导率 S2:煮后的电导率 空白电导率:蒸馏水的电导率 相对电导度的大小表示细胞膜受伤害的程度 由于室温对照也有少量电解质外渗，故可按下式计算由于低温或高温胁迫而产生的外渗，称为伤害度（或伤害性外渗）。伤害度（%）= 式中 Lt—处理叶片的相对电导度； Lck—对照叶片的相对电导度 Lt LCK 100 1LCK 四．实验结果 五、实验反思 1.比较不同处理的叶片细胞透性的变化情况，并加解释。 答：经过低温处理的叶片细胞膜的透性增大，未经处理的叶片细胞膜透性不变。在正常情况下，细胞膜对物质具有选择透性能力。而经过低温处理后，细胞膜遭到了破环，选择性能力变差，导致透性增大。 2.植物在逆境情况下细胞膜的透性会怎样变化？答：在逆境下细胞膜的透性会增大 3.植物抗逆性与细胞膜透性有何关系 ? 答：植物的抗逆性越强，细胞膜透性越差
逆境对植物细胞膜透性的影响
逆境对植物细胞膜透性的影响(电导法) 实验目的：能比较不同处理的叶片细胞透性的变化情况，并加解释。 了解植物在逆境情况下细胞膜的透性变化 掌握植物抗逆性与细胞膜透性的关系 实验原理： 植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。在正常情况下，细胞膜对物质具有选择透性能力。如高温或低温，干旱、盐渍、病原菌侵染后，细胞膜遭到破坏，膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，以致植物细胞浸提液的电导率增大。膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，也与植物抗逆性的强弱有关。比较不同植物或同一植物不同品种在相同胁迫温度下膜透性的增大程度，即可比较植物间或品种间的抗逆性强弱。用电导仪测定可以比较植物组织中的外渗电解质的含量，从而间接了解细胞透性的大小。 实验材料：女贞叶片（20片左右）； 实验器具：电导仪，打孔器，恒温水浴锅，2个小烧杯，量筒，玻璃棒，蒸馏水 实验步骤： 1.选取低温(高温）处理的女贞叶片8片，先用纱布拭净，再用打孔器打取20 片小圆叶（避开叶脉），放入小烧杯中，加入20ml 蒸馏水作为处理组。再用相同的方法打取20片未经处理的小叶放入小烧杯中，加入20ml 蒸馏水作为对照组。 2.将小烧杯放入35℃水浴锅中静置25min，期间用玻棒轻轻搅动叶片，到时间 后用，电导仪测定溶液电导率。 3.测过电导率之后，再放入100℃沸水浴中10min，以杀死植物组织，取出放入 自来水冷却，测其煮沸电导率。 4.计算： 按下式计算相对电导度： 相对电导度（L）=（S1-空白电导率）/（S2-空白电导率） S1:煮前的电导率 S2:煮后的电导率 空白电导率:蒸馏水的电导率 相对电导度的大小表示细胞膜受伤害的程度 由于室温对照也有少量电解质外渗，故可按下式计算由于低温或高温胁迫而产生的外渗，称为伤害度（或伤害性外渗）。 伤害度（%）= 100 1 ? - - CK CK t L L L 式中 L t —处理叶片的相对电导度； L ck —对照叶片的相对电导度。 注意事项 1. 整个过程中，叶片接触的用具必须绝对洁净（全部器皿要洗净），也不要 用手直接接触叶片，以免污染。
DNA依赖性蛋白激酶在妇科肿瘤中的研究进展
?１０２８? ＤＮＡ依赖性蛋白激酶在妇科肿瘤中的研究进展 刘双胡Ａ（综述），卢玉波※，祝英杰（审校） （昆明医学院第三附属医院妇瘤科，昆明６５０１１８） 中围分类号：１１．７３７．３文献标识码：Ａ文章编号：１００６－２０８４（２０１０）０７－１０２８－０３ 摘要：ＤＮＡ依赖蛋白激酶（ＤＮＡ－ＰＫ）是哺乳动物细胞ＤＮＡ损伤修复的关键酶。研究表明， 妇科肿瘤，如宫颈癌、卵巢癌中普遍存在ＤＮＡ－ＰＫ表达的变化，提示该酶在妇科肿瘤的发生、发 展过程中发挥着重要的作用，并与肿瘤的临床分期、放射敏感性和预后有重要关系。近年来， 关于ＤＮＡ－ＰＫ的结构与功能、在肿瘤细胞株中的活性、在肿瘤组织中表达的研究日益深入，以 ＤＮＡ—ＰＫ为靶点的ＤＮＡ修复抑制剂作为肿瘤放化疗增敏药已陆续研发并进入临床前试验，有 望成为肿瘤诊断和治疗的新靶点。 关键词：ＤＮＡ依赖蛋白激酶；ＤＮＡ双链断裂；宫颈癌；卵巢癌 ＴｈｅＬａｔｅｓｔＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＤｉｍ－ＰＫｉｎＧｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃＯｎｃｏｌｏｇｙＨＵＳｈｖａ．ｇ－ｙ．ｅ，ＬＵ沌一ｂｏ，朋Ｕ ｎ增ｌ】！ｅ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｇ＇ｎｅｃｏｌｏｇｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＴｈｉｒｄＨｏ印ｔｍｌＡｆｆｄｉａｔｅｄｔｏｌ６，ｎｍｉｎａＭｅｄｗａｌＣｏｌ— ｌｅｇｅ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０１１８，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＤＮＡｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ（ＤＮＡ—ＰＫ）ｉｓａｋｅｙＤＮＡｄａｍａｇｅｒｅｐａｉｒｅｎｚｙｍｅｓｏｆ ＭａｍｍａｌｉａｎｅｅＵｓ．Ｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃｏｎｃｏｌｏｇｙ．ｓｕｃｈａｓｃｅｒｖｉｃａｌａｎｄｏｖａｒｉ∞ｃａｎｃｅｒ． ｅｘｐｒｅｓｓｅｄＤＮＡｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓｌｙ．Ｅｎｚｙｍｅｉｎｔｈｅｓｅｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｔｕｍｏｒｓｐｌａｙｅｄ∞ ｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓａｎｄ ｔｕｍｏｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｕｍｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｓｔａｇｅ，ｒａｄｉａ－ ｔｉｏｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ｉｎｔｍ，ｅｎｔｙｅａｒｓ，ｃｏｎｃｅｒｎｉｎｇｗｉｔｈｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｔｕｍｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＤＮＡ．ＰＫｈａｓｂｅｅｎｒｅｓｅａｃｈｅｄｄｅｅｐ．ＷｉｔｈＤＮＡ．ＰＫ∞ｔｈｅｔａｒｇｅｔｏｆｔｈｅＤＮＡｒｅｐａｉｒｉｎｈｉｂｉ．１０ｔｓａｎｄｃａｎｃｅｒｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ—ｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇｄｒｕｇｓｈａｖｅｂｅｅｎｇｒａｄｕａｌｌｙｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｎｄｅｎｔｅｒｅｄｔｈｅｐｒｅ－ｅｌｉｎ??ｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．Ｉｔｉｓｅｘｐｅｃｔｅｄｔｏｂｅａｎｅｗｔａｒｇｅｔｏｆｃａｎｃｅｒｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＤＮＡｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ；ＤＮＡｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋ；Ｕｔｅｒｉｎｅ ｃｅ盹ｅｍｌｅｅｒ； Ｏｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒ 多种因素如电离辐射、ＤＮＡ代谢以及活性氧损 伤等都可以引起细胞ＤＮＡ双链断裂（ＤＮＡｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋ，ＤＳＢ），这是基因突变、染色体断裂的主 要原因之一，ＤＮＡ依赖性蛋白激酶（ＤＮＡｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｋｉ—ｎａｓｅ，ＤＮＡ—ＰＫ）是ＤＮＡ损伤修复的关键 酶，决定着受损肿瘤细胞的转归。辐射损伤可被体 内的化学反应迅速修饰，而细胞内残存的ＤＮＡ损伤 则通过损伤监视系统纠正，此监视系统包括ＤＮＡ损 伤的识别、损伤信号传递、基因转录以及细胞反应。 研究发现ＤＮＡ－ＰＫ参与了ＤＮＡ损伤的直接识别，并 且对于ＤＳＢ修复、基因重组、基因转录以及基因调控 等具有重要作用。近年来其在肿瘤的发生、发展、诊 断和治疗等研究中引起人们越来越多的重视。现就 ＤＮＡ－ＰＫ的生物学作用及其在妇科肿瘤组织内的异 常表达、与放射敏感性的关系、肿瘤放射增敏作用等 有关方面的研究进展予以综述。 ｌＤＮＡ?ＰＫ的分子生物学特征 １．１ＤＮＡ－ＰＫ的结构ＤＮＡ－ＰＫ是由双链ＤＮＡ激 活的１个丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，ＤＮＡ．ＰＫ由一个 催化亚基（ＤＮＡ－ＰＫｃｓ）和２个调节亚基Ｋｕ７０／Ｋｕ８０ 异二聚体组成（Ｋｕ蛋白最初是作为一种自身抗原在 一名患有多发性肌炎－硬皮病重叠综合征自身免疫性 疾病的Ｅｌ本患者血清内被发现的，其命名是源于第１个患者姓名的前２个字母Ｋｕ）。哺乳动物细胞中，Ｋｕ蛋白由２条相对分子质量分别为７０和８６的多肽链组成异源二聚体，分别称为Ｋｕ７０和Ｋｕ８６（也称Ｋｕ８０），人Ｋｕ７０基因位于２２ｑ１３，编码６０９个氨基酸，Ｋｕ８０基因位于２ｑ３３～３４，编码７２３个氨基酸，ＤＮＡ－ＰＫｃｓ基因位于８ｑ１１，ＤＮ－ＰＫｃｓ蛋白由４１２７个氨基酸组成，相对分子质量约４７０１１Ｉ。 １．２ＤＮＡ－ＰＫ的功能ＤＳＢ是一种最严重的ＤＮＡ损伤，根据ＤＮＡ末端连接是否需要同源性， 将ＤＮＡ双链断裂修复可分为同源重组和非同源重 组（ＤＮＡｎｏｎｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｅｎｄ－ｊｏｉｎｉｎｇ，ＮＨＥＪ），在２条 修复途径当中，ＮＨＥＪ修复是人类最主要的修复途 径旧＇３Ｊ。ＤＮＡ－ＰＫ是ＮＨＥＪ修复系统中最重要的组成 部分，也是这一过程的关键酶，它参与细胞ＤＳＢ的修 复，并且可以通过磷酸化多种蛋白底物而广泛参与 转录和细胞凋亡过程，在维持细胞的遗传稳定性方 面具有重要意义。ＤＳＢ修复过程如下：ＤＳＢ发生后， 首先ＫｕＳ０和Ｋｕ７０识别并结合于每一条ＤＮＡ链末 端，Ｋｕ蛋白本身具有的解螺旋酶活性使２个断端局 部解链，其次Ｋｕ－ＤＮＡ复合物吸引ＤＮＡ．ＰＫｃｓ到损伤 部位与之结合并被激活，完成修复后ＤＮＡ－ＰＫ即发生 自身磷酸化ＤＮＡ—ＰＫ复合体从ＤＮＡ链上解离【３，４】。 ＤＮＡ双链发生断裂后，ＤＮＡ－ＰＫ缺陷的细胞可 能因染色体断裂不能修复而死亡，也可能发生不合 理的重组导致染色体异常，甚至不修复而导致遗传 信息丧失，这些细胞携带异常的遗传信息继续存活， 可能成为癌变发生的根本原因【５Ｊ。ＤＮＡ—ＰＫ功能的 丧失必然导致细胞损伤修复能力的降低，ＤＮＡ损伤 在细胞内累积造成基因组的不稳定性及突变率增 加。有研究证实，ＤＮＡ．ＰＫ具有防止肿瘤发生和发展 的作用，损伤修复功能缺陷者易患各种恶性肿瘤，几 乎所有癌症患者的损伤修复能力均低于正常人旧。。万方数据
逆境胁迫对植物生理生化代谢的影响
逆境胁迫对植物生理生化代谢的影响 20093391 魏晓明农学0901 摘要：对植物产生伤害的环境称为逆境，又称胁迫。常见的逆境有寒冷、干旱、高温、盐渍等。逆境会伤害植物，严重时会导致植物死亡。逆境对植物的伤害主要表现在细胞脱水、膜系统受破坏，酶活性受影响，从而导致细胞代谢紊乱。有些植物在长期的适应过程中形成了各种各样抵抗或适应逆境的本领，在生理上，以形成胁迫蛋白、增加渗透调节物质（如脯氨酸含量）、提高保护酶活性等方式提高细胞对各种逆境的抵抗能力。 关键词：逆境胁迫,抗逆性，相对电导率，脯氨酸，丙二醛，样品，细胞膜透性，过氧化物酶活性，叶绿素，可溶性糖。 前言：植物细胞膜起调节控制细胞内外物质交换的作用，它的选择透性是其最重要的功能之一。当植物遭受逆境伤害时，细胞膜受到不同程度的破坏，膜的透性增加，选择透性丧失，细胞内部分电解质外渗。膜结构破坏的程度与逆境的强度、持续的时间、作物品种的抗性等因素有关。因此，质膜透性的测定常可作为逆境伤害的一个生理指标，广泛应用在植物抗性生理研究中。 当质膜的选择透性被破坏时细胞内电解质外渗，其中包括盐类、有机酸等，这些物质进入环境介质中，如果环境介质是蒸馏水，那么这些物质的外渗会使蒸馏水的导电性增加，表现在电导
率的增加上。植物受伤害愈严重，外渗的物质越多，介质导电性也就越强，测得的电导率就越高（不同抗性品种就会显示出抗性上的差异）。 在植物胁迫处理过程中，叶绿素含量会下降，可以把叶绿素含量下降看作是胁迫发展中由功能性影响到器质性伤害的一个中间过程。 过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，他与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，他的活性不断变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。 植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以糖含量作为重要指标。植物为了适应逆境条件，如干旱、低温，也会主动积累一些可溶性糖，降低渗透势和冰点，以适应外界环境条件的变化。 植物器官衰老时，或在逆境条件下，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛（MDA）是其产物之一，通常利用它作为脂质过氧化指标，表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强弱。 植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要作用。在正常情况下，细胞膜对物质具有选择透性能力。当植物受到逆境影响时，如高温、干旱、盐渍、病原菌侵染后，细胞膜遭到破坏，膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，以至于植物细胞侵提液的电导率增大。膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有
探讨溶血对临床生化检验结果的影响 周英
探讨溶血对临床生化检验结果的影响周英 发表时间：2018-02-07T12:22:16.703Z 来源：《健康世界》2017年25期作者：周英 [导读] 溶血对血清的AST、ALT、LDH、CHOL、K+、ALP等检测值产生影响，所以不利于临床生化检验结果的确定。 上海市嘉定区中医医院检验科 201800 摘要：目的总结并分析溶血对于临床生化检验结果的影响。方法本研究选择采用回顾性分析的方法进行研究，所有研究资料标本均来自我院在2016年3月到2017年6月在我院例行体检的70例体检者，本研究选择的70例体检者的血液标本均为5ml，分别将其放置在两支试管当中，每支试管均为2.5ml，选择采用人工方法将其中一支试管的标本溶血，检测并且对于溶血标本和正常标本的血清当中的各项指标[AST （谷草转氨酶）、ALT（谷丙转氨酶）、LDH（乳酸脱氢酶）、CHOL（总胆固醇）、ALP（碱性磷酸酶）、TG（甘油三酯）、Cr（肌酐）、BUN（尿素氮）、GLU（葡萄糖）、K+（钾离子）、UA（血尿酸）]进行比较。结果在血清当中，溶血血清的AST、ALT、LDH、CHOL、K+检测的结果和正常血清进行比较明显更高，两者之间存在差异性，P＜0.05，具有统计学意义；溶血血清的ALP活性要比正常血清更低，P＜0.05，具有统计学意义；溶血血清的BUN、Cr、TG、GLU、UA的检测结果与正常血清进行比较没有明显的差异性，P＞0.05，不具有统计学意义。结论溶血对血清的AST、ALT、LDH、CHOL、K+、ALP等检测值产生影响，所以不利于临床生化检验结果的确定，需要在检验过程中选择采取一定的措施来降低溶血的发生，确保临床生化检验的可行性。 关键词：溶血；生化检验结果；影响 溶血现象主要是血液标本的红细胞出现破裂导致血红蛋白从红细胞当中溢出。在临床标本的检验和采集过程中因为多种原因都可能导致溶血情况发生，比如说在血液采集的时候，水浴箱的温度比平时的温度更高或者是在血清分离的过程中因为旋转速度过快[1]。通过临床的不断研究，溶血的情况可能会导致血液标本的相关检验数据与正常标本数据之间存在有较大的偏差，所以在使得医生对患者病情诊断的时候产生误导，这样很难对患者对症下药，会造成延误治疗的情况发生，这样也会对患者的治疗产生一定的影响[2]。基于此本研究主要分析溶血对临床生化检验结果的影响，并将主要研究情况作出如下报道。 1.资料与方法 1.1一般资料 本研究所有研究对象选自我院在2016年3月到2017年6月收治的体检者，共选择70例体检者作为研究对象，对所有研究对象的临床资料进行回顾性分析和总结，其中男性38例，女性32例，体检者的年龄为26岁到78岁，平均年龄为（45.5±12.1）岁。所选择的血液标本均选5ml，分别放置在两支试管当中，每一支试管均为2.5ml，同时选择人工方法将其中一支试管当中的标本进行溶血。 1.2方法 选择采用雅培的生化分析仪对于血清当中的AST（谷草转氨酶）、ALT（谷丙转氨酶）、LDH（乳酸脱氢酶）、CHOL（总胆固醇）、ALP（碱性磷酸酶）、TG（甘油三酯）、Cr（肌酐）、BUN（尿素氮）、GLU（葡萄糖）、K+（钾离子）、UA（血尿酸）指标进行分析，并且根据试剂盒的说明和相关操作方法以及操作步骤来分批次进行。选择采用电解质分析仪和相配套的试剂，对于K+进行检测，对于每一份的溶血血清和正常的血清都需要测定10次，然后取平均值。 1.3统计学分析 本研究选择统计学软件版本选自IBM 公司的SPSS23.0，对于所有计量资料选择采用t值检验，P＜0.05表示差异明显，为具有统计学意义。 2.结果 在血清当中，溶血血清的AST、ALT、LDH、CHOL、K+检测的结果和正常血清进行比较，明显更高，两者之间存在差异性，P＜0.05，具有统计学意义；溶血血清的ALP活性要比正常血清更低，P＜0.05，具有统计学意义；溶血血清的BUN、Cr、TG、GLU、UA的检测结果与正常血清进行比较，没有明显的差异性，P＞0.05，不具有统计学意义。具体的情况请详见表1所示。 3.讨论 本研究主要探究溶血对临床生化检验结果的影响，从本研究结果当中可以看出溶血标本和正常标本相比，在某些指标当中检测具有一定的差异性。临床实践认为可靠的生化检验结果能够为医生正确的诊断疾病提供保证，现如今临床医学发展较好，生化检验在临床的常规血液检验当中是十分重要的一个环节，检验的内容也主要包括对患者的肾脏功能进行检验，对患者的血脂血液以及患者的血糖等进行检验[3]。在众多生化检验中最为常见的干扰因素就是溶血因素，人体溶血主要包括有人体内的溶血和人体外溶血这两种，导致人体溶血出现的原因和物理因素化学因素都具有关联。而通过本研究的研究结果能够证明：溶血对血清的AST、ALT、LDH、CHOL、K+、ALP等检测值产生影响，所以不利于临床生化检验结果的确定，需要在检验过程中选择采取一定的措施来降低溶血的发生，确保临床生化检验的可行性。
激酶检测：PKC蛋白激酶活性检测实验服务案例
激酶检测：PKC蛋白激酶活性检测实验服务案例 实验试剂：琼脂糖（Promega公司，V3125）；其他常备试剂购自sigma公司；PKC活性检测试剂盒（Promega公司， V5330） 实验仪器：电泳仪（北京六一厂，112-0640）；水平电泳槽（北京六一厂，122-3146）；电热恒温培养箱（碧云天生物，EBI025）；电热恒温水浴锅（江苏省金坛市环宇科学仪器厂，HH-8） 基本原理：分离PKC蛋白（磷酸化蛋白及非磷酸化蛋白），利用试剂盒组分将2种蛋白分离并加以区分，利用电泳琼脂糖凝胶技术显示2种不同的蛋白，利用分析软件将显示的不同蛋白定量并加以比较，以磷酸化PKC非磷酸化PKC灰度值IOD的比值显示PKC活性（PKC 活化度）。 操作步骤： 1．用预冷的匀浆器把细胞匀浆。 2．在4℃，用14000 × g 离心裂解液5 分钟，保存上清。 3．用PKC 抽提液预平衡1ml 的DEAE 纤维素柱，再把第2 步中得到的上清过柱。用5ml的PKC 抽提液洗柱子，然后用5ml 含有200mM NaCl 的PKC 抽提液洗脱含有PKC 的组分。4．用PKC 稀释液（PKC dilution buffer）将少量蛋白激酶C（Promtein Kinase C）稀释到 2.5ug/ml。随试剂盒所附的产品信息中标有这个酶的初始浓度。 5．用探头超声波破碎仪超声处理PKC Activator Solution 20-30 秒，或直到溶液变温暖。6．对每一个样品，按照下面所列顺序在0.5ml 小离心管中混合PepTag? PKC 5×BufferPepTag? C1 Peptide，超声过的PKC Activator 5X Solution，和水。在样品加入之前，小离心管一直要放在冰上。阴性对照将用于对反应进行定量时确定其摩尔吸收值（说明书第IV.部分）。 标准PKC检测 PepTag? PKC Reaction 5X Buffer，5ul PepTag? C1 Peptide (0.4ug/ul)，5ul PKC Activator 5X Solution 超声处理的，5ul 短肽保护液（非必须），1ul 样品， 9ul 去离子水使终体积为，25ul PKC阳性对照检测 PepTag? PKC Reaction 5X Buffer，5ul PepTag? C1 Peptide (0.4ug/ul) ，5ul PKC Activator 5XSolution 超声处理的，5ul 短肽保护液（非必须），1ul
细胞周期蛋白依赖性激酶
细胞周期蛋白依赖性激酶 周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)在调控纺锤体聚合检查点中起重要作用,其功能是启动、促进和完成细胞周期事件 细胞周期蛋白Β1与CDK1形成复合物并磷酸化有丝分裂过程所必需的酶,引发有丝分裂的开始。细胞一旦进入有丝分裂期,促分裂后期复合物(an2aphase-promoting complex,APC)对细胞周期蛋白Β1进行酶解,阻止细胞周期蛋白Β1与CDK1形成复合物,灭活已形成的CDK1-细胞周期蛋白Β1复合物,促使有丝分裂结束诱导细胞进入分裂后期。纺锤体聚合检查点激活后使APC的活性受到抑制,致使细胞周期蛋白Β1不间断地表达,阻滞细胞在分裂中期。在紫杉醇处理的细胞中,因细胞周期蛋白Β1连续表达引起的CDK1-细胞周期蛋白Β1活性增强与紫杉醇诱导的有丝分裂阻滞和细胞凋亡同时存在,而且CDK1显性负突变导致对紫杉醇诱导凋亡的抗性[8]。Zhao JS, Kim JE, Reed E, et al·Molecular mechanism of antitumor activity of taxanes in lung cancer (Review)·International Journal of Oncology, 2005, 27:247~256·细胞分裂周期的调控由内在和外在的2类途径通过细胞周期关卡进行控制。通过关卡实现时相的过渡受到细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-depend-entkinases, CDKs)的激活、CDKs 的失活、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(cyclin-dependent kinase inhibitors, CKIs)的激活以及泛蛋白介导的蛋白水解等因素的影响。肿瘤细胞生长表现为细胞增殖失控、细胞周期和关卡调控失控。因此, CDK可作为抗肿瘤药物的靶点。 Bcl-2Bcl-2、Bax均为Βcl-2家族的成员,前者是从小鼠B细胞淋巴瘤中分离出来的一种由239个氨基酸组成的细胞凋亡抑制因子,可抑制射线、药物、癌基因等多种原因诱导的细胞凋亡;后者是细胞凋亡促进因子。Bcl-2蛋白通常与Bax蛋白形成异二聚体,阻止具有促凋亡活性的Bax蛋白同二聚体的形成,从而达到抑制细胞凋亡的作用 JNK/SAPK有丝分裂原激活蛋白激酶(mitogen-acti2vated protein kinases,MAPKs)超家族亚科的JNK/SAPK(c-Jun N- terminal kinases/stress - activated protein ki2nase),是与细胞凋亡密切相关的细胞内信号转导酶,通过一系列磷酸化级联放大反应将细胞外各种刺激性信号传入细胞内,调节着细胞分裂周期及细胞凋亡。JNK活性提高不是微管蛋白抑制剂引起肿瘤细胞凋亡所必需的,但JNK的激活有利于细胞的凋亡[6]。Sudo T, Nitta M, Saya H, et al·Dependence of paclitaxel sensitivity on a functional spindle assembly checkpoint·Cancer Res, 2004, 64(7):2502~2508· caspase caspase家族涉及凋亡启动,是哺乳动物中的一类半胱氨酸蛋白酶家族。caspase 家族现有caspase-1~11个成员,某一个成员的激活将引起家族中其他成员一系列酶的级联反应[6]。紫杉醇通过激活caspase-3诱导U-2OS细胞死亡,进而引起细胞周期阻滞[13] p53p53是研究最为广泛的抑癌基因,被认为是基因组的守护者,有野生型和突变型。野生型p53的过表达往往能够激活一系列基因的表达从而产生两个结果:细胞分裂周期阻滞和细胞凋亡。p53是遗传毒性压力的紧急制动器,阻止基因组中过多突变的蓄积。Yang等发现微管相关蛋白as2trin的沉默可以诱导p53依赖的细胞凋亡,同时伴随着促凋亡bax蛋白表达的提高和caspase-3活性的增加[15][15]Yang YC, Hsu YT, Wu CC, et al·Silencing of astrin induces the p53-dependent apoptosis by suppression of HPV18 E6 expression and sensitizes cells to paclitaxel treatment in HeLa cells·Biochem Biophys Res Commun,2006, 343(2):428~434· 微管由α和β两种微管蛋白的异二聚体组成,其聚合和解聚的动力学特性,在细胞有丝分裂过程中发挥着重要作用。药物结合到微管或者微管蛋白的特定位点,干扰微管的聚合和解